Increased immature hematopoietic progenitor cells CD34+/CD38dim in myelodysplasia.

BACKGROUND: Myelodysplastic syndromes (MDS) are clonal disorders affecting hematopoietic progenitor cells (HPC). Despite the relevance of clonal CD34+ cells in developing MDS, only few studies analyze the phenotype of this cell population. The aim of this study was to evaluate phenotypic changes on HPC in MDS that could reflect abnormalities in the differentiation process of stem cells. METHODS: We analyzed the expression of CD38 and HLA-DR on CD34+ cells by flow cytometry in 36 patients with MDS, as well as in healthy donors (n = 12) and patients with other hematological disorders: non-Hodgkin lymphomas and multiple myeloma, both in complete remission (CR) (n = 32); acute lymphoblastic leukemia in CR (n = 17); de novo acute myeloblastic leukemia (AML) at diagnosis (n = 22) and in CR (n = 37); and AML secondary to MDS at diagnosis (n = 19). Cases with available karyotype were grouped according to the International Prognostic Scoring System (IPSS). RESULTS: Compared to normal BM, the fraction of immature HPC, characterized as CD34+bright, intermediate FSC/SSC, and CD38dim, was significantly increased in high risk MDS and secondary AML, but not in low risk MDS, (P < or = 0.001, P = 0.03, and P = 0.7). De novo AML showed decreased immature HPC. High numbers of immature HPC correlated with higher IPSS risk groups (P = 0.05) and showed significant impact on disease progression (P = 0.03). CONCLUSION: Our study confirms that evaluation of CD38 expression pattern on HPC is an easy and reproducible test that allows evaluating the immature subset of progenitor cells. Increased immature HPC in high risk MDS and secondary AML may reflect blocked differentiation of CD34+ cells in these diseases.

Caffeic Acid Phenylethyl Ester and MG-132 Have Apoptotic and Antiproliferative Effects on Leukemic Cells But Not on Normal Mononuclear Cells.

Chemotherapy aims to limit proliferation and induce apoptotic cell death in tumor cells. Owing to blockade of signaling pathways involved in cell survival and proliferation, nuclear factor kappaB (NF-kappaB) inhibitors can induce apoptosis in a number of hematological malignancies. The efficacy of conventional chemotherapeutic drugs, such as vincristine (VCR) and doxorubicine (DOX), may be enhanced with combined therapy based on NF-kappaB modulation. In this study, we evaluated the effect of caffeic acid phenylethyl ester (CAPE) and MG-132, two nonspecific NF-kappaB inhibitors, and conventional chemotherapeutics drugs DOX and VCR on cell proliferation and apoptosis induction on a lymphoblastoid B-cell line, PL104, established and characterized in our laboratory. CAPE and MG-132 treatment showed a strong antiproliferative effect accompanied by clear cell cycle deregulation and apoptosis induction. Doxorubicine and VCR showed antiproliferative effects similar to those of CAPE and MG-132, although the latter drugs showed an apoptotic rate two-fold higher than DOX and VCR. None of the four compounds showed cytotoxic effect on peripheral mononuclear cells from healthy volunteers. CAPE- and MG-132-treated bone marrow cells from patients with myeloid and lymphoid leukemias showed 69% (P < .001) and 25% decrease (P < .01) in cell proliferation and 42% and 34% (P < .01) apoptosis induction, respectively. Overall, our results indicate that CAPE and MG-132 had a strong and selective apoptotic effect on tumor cells that may be useful in future treatment of hematological neoplasias.

Correlación del inmunofenotipo por citometría de flujo multiparamétrica, citogenética y biología molecular (FISH y PCR) en pacientes con leucemia promielocítica aguda: importancia en el diagnóstico y seguimiento / Correlation of immunophenotype by multiparametric flow cytometry, cytogenetic and molecular biology (FISH and PCR) in patients with acute promyelocytic leukemia: importance in the diagnosis and follow-up

La leucemia mieloide aguda, t(15;17)+ y compromiso de los genes PML/RARA, representa una entidad definida con respuesta a una terapia específica que combina el ácido all-trans retinoico (ATRA) con quimioterapia. En función de sus características clínicas y de la urgencia en iniciar el tratamiento, resulta de suma importancia la disponibilidad de metodologías diagnósticas rápidas que permitan objetivar el actual "screening" morfológico, para luego efectuar las evaluaciones moleculares correspondientes. Con este objetivo, en el presente trabajo, se estudio el inmunofenotipo por citometría de flujo (CMF) multiparamétrica de un total de 62 pacientes con leucemia mieloblástica aguda; 14 de ellos clasificados como FAB M3/M3v (9 M3 hipergranular; 5 M3v hipogranular), 12 con confirmación molecular de t(15;17)+ y 2 con t(15;17)- y 48 pacientes con FAB no M3. El perfil inmunofenotípico definido por la presencia simultánea de 6 características: autofluorescencia; patrón CD15/CD34 definido: CD15-/+ débil, nunca positivo intenso y CD34-/+ débil; CD33+ homogéneo; CD13+ heterogéneo; HLA DR- y población única de blastos, fue consistente en la totalidad de los 12 casos de LMA FAB M3 t(15;17)+. Los 2 casos LMA M3 t(15;17)-, presentaron un perfil inmunofenotípico que difiere en sólo una de las características. De los 47 casos LMA no M3, sólo 2 mostraron 5 características de este patrón, mientras que 41 (87 por ciento) presentaron no más de 3. Por análisis de univarianza, cada una de las 6 características resultó discriminatoria entre el grupo LMA M3 t(15;17)+ y los demás pacientes con diagnóstico de LMA: HLA-DR(-), autofluorescencia y patrón CD15/CD34 definido (p=0.000); población única de blastos (p=0.009); CD33+ homogéneo (p=0.034) y CD13+ heterogéneo (p=0.059). El análisis de multivarianza, demostró que la mejor combinación de variables para discriminar entre ambos grupos fue la de autofluorescencia (p=0.000) con el patrón CD15/CD34 (p=0.003). En función del hallazgo de un inmunofenotipo específico para LPA t(15;17)+, se investigó enfermedad mínima residual (EMR) en 19 médulas óseas (MO) de 5 pacientes con LMA M3/M3v t(15;17)+ en remisión completa (RC), por citometría de flujo multiparamétrica (CMF), citogenética, estudios citomoleculares (FISH) y determinación del reordenamiento PML/RARA por biología molecular (RT-PCR), en al menos 4 momentos del tratamiento: fin de inducción, primera y segunda consolidación y mantenimiento...(TRUNCADO)(AU)

Correlación del inmunofenotipo por citometría de flujo multiparamétrica, citogenética y biología molecular (FISH y PCR) en pacientes con leucemia promielocítica aguda: importancia en el diagnóstico y seguimiento / Correlation of immunophenotype by multiparametric flow cytometry, cytogenetic and molecular biology (FISH and PCR) in patients with acute promyelocytic leukemia: importance in the diagnosis and follow-up

La leucemia mieloide aguda, t(15;17)+ y compromiso de los genes PML/RARA, representa una entidad definida con respuesta a una terapia específica que combina el ácido all-trans retinoico (ATRA) con quimioterapia. En función de sus características clínicas y de la urgencia en iniciar el tratamiento, resulta de suma importancia la disponibilidad de metodologías diagnósticas rápidas que permitan objetivar el actual "screening" morfológico, para luego efectuar las evaluaciones moleculares correspondientes. Con este objetivo, en el presente trabajo, se estudio el inmunofenotipo por citometría de flujo (CMF) multiparamétrica de un total de 62 pacientes con leucemia mieloblástica aguda; 14 de ellos clasificados como FAB M3/M3v (9 M3 hipergranular; 5 M3v hipogranular), 12 con confirmación molecular de t(15;17)+ y 2 con t(15;17)- y 48 pacientes con FAB no M3. El perfil inmunofenotípico definido por la presencia simultánea de 6 características: autofluorescencia; patrón CD15/CD34 definido: CD15-/+ débil, nunca positivo intenso y CD34-/+ débil; CD33+ homogéneo; CD13+ heterogéneo; HLA DR- y población única de blastos, fue consistente en la totalidad de los 12 casos de LMA FAB M3 t(15;17)+. Los 2 casos LMA M3 t(15;17)-, presentaron un perfil inmunofenotípico que difiere en sólo una de las características. De los 47 casos LMA no M3, sólo 2 mostraron 5 características de este patrón, mientras que 41 (87 por ciento) presentaron no más de 3. Por análisis de univarianza, cada una de las 6 características resultó discriminatoria entre el grupo LMA M3 t(15;17)+ y los demás pacientes con diagnóstico de LMA: HLA-DR(-), autofluorescencia y patrón CD15/CD34 definido (p=0.000); población única de blastos (p=0.009); CD33+ homogéneo (p=0.034) y CD13+ heterogéneo (p=0.059). El análisis de multivarianza, demostró que la mejor combinación de variables para discriminar entre ambos grupos fue la de autofluorescencia (p=0.000) con el patrón CD15/CD34 (p=0.003). En función del hallazgo de un inmunofenotipo específico para LPA t(15;17)+, se investigó enfermedad mínima residual (EMR) en 19 médulas óseas (MO) de 5 pacientes con LMA M3/M3v t(15;17)+ en remisión completa (RC), por citometría de flujo multiparamétrica (CMF), citogenética, estudios citomoleculares (FISH) y determinación del reordenamiento PML/RARA por biología molecular (RT-PCR), en al menos 4 momentos del tratamiento: fin de inducción, primera y segunda consolidación y mantenimiento...(TRUNCADO)