Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

ABSTRACT: Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

RESUMO: Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.

Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.

Selection and characterization of peptides mimetic to Campylobacter fetus subsp. venerealis using phage display / Seleção e caracterização de peptídeos miméticos a Campylobacter fetus subsp. venerealis usando phage display

Bovine genital campylobacteriosis (BGC) is a venereal and subclinical disease that affects the fertility of cattle herds, and it is caused by Campylobacter fetus subsp. venerealis . This study selected peptides mimetic to the BGC-causing agent from a phage library. Phage display is a technique that applies bacteriophage libraries that reveal peptides fused to the viral capsid in biological selections against target proteins. Biopannings were performed for biological selection in the phage library using rabbit hyperimmune serum and C. fetus subsp. venerealis protein extract. Five selected heptapeptides were considered mimetic to Cfv-NCTC 10354 based on the results of bioinformatics analysis and assays with hyperimmune serum and cervicovaginal mucus obtained from heifers. ALASLPL and LSYLFPP were the most reactive peptides and considered promising as possible mimetic immunogens for C. fetus subsp. venerealis.(AU)

Campilobacteriose Genital Bovina (CGB) é uma doença venérea e subclínica que causa problemas reprodutivos em rebanhos, causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis. Este trabalho teve como objetivo selecionar peptídeos miméticos ao agente da CGB de uma biblioteca de fagos. Phage display é uma técnica que aplica bibliotecas de bacteriófagos que expõem peptídeos fusionados ao capsídeo viral em seleções biológicas contra proteínas alvo. Biopannings foram realizados para seleção biológica na biblioteca de fagos por meio de soro hiperimune de coelho e extrato proteico de C. fetus subsp. venerealis. Cinco heptapeptídeos selecionados foram considerados miméticos para Cfv-NCTC 10354 a partir de análises de bioinformática e ensaios com soro hiperimune e muco cérvico-vaginal de novilhas. ALASLPL e LSYLFPP foram os peptídeos mais reativos e considerados promissores como possíveis imunógenos miméticos para C. fetus subsp. venerealis.(AU)

Perfil hematológico de bovinos experimentalmente inoculados com veneno de Bothrops alternatus / mentally inoculatede experimentally inoculated / with Bothrops alternatus venom

Apesar de ser alto o número de acidentes ofídicos em bovinos, as alterações hematológicas e bioquímicas séricas sãopouco estudadas, especialmente nas três primeiras semanas após o envenenamento. Diante deste contexto, objetivou-senesta pesquisa caracterizar o perfil hematológico e bioquímico sérico de bovinos após a inoculação experimental do venenode Bothrops alternatus. Cinco novilhas mestiças de peso corporal entre 188 e 278kg e idade de 12 a 18 meses receberamna altura média da face cranial do membro anterior direito, entre as articulações umerorradioulnar e do carpo, por viaintramuscular superficial, 0,15mg/kg de veneno de Bothrops alternatus diluído em salina. Coletou-se sangue de todos osanimais antes (tempo zero) e as 3, 8, 24, 48, 72, 96, 168, 240, 405 e 576 horas após inoculação do veneno para avaliaçãodo hemograma, coagulograma e dosagem de proteína total, albumina, globulinas, ureia, creatinina, creatina fosfotransferase,aspartato aminotransferase e gama glutamiltransferase. O veneno de B. alternatus causou intoxicação grave nos bovinos,e foi letal para dois animais às 53 horas e 78 horas. As alterações hematológicas observadas foram: anemia normocíticanormocrômica, leucocitose com neutrofilia com desvio para esquerda regenerativo, linfocitose, aumentos dos tempos decoagulação, de protrombina e de tromboplastina parcial ativada, trombocitopenia e elevação da ureia e das enzimas CPT eAST.

Despite the high number of Bothrops envenomation in cattle, the hematological and biochemical changes are poorly known mainly in the first few weeks after the poisoning. In this context, the aim of this study was to evaluate the bovine blood profile after B. alternatus envenomation. Five crossbred heifers were inoculated with B. alternatus venom (0.15mg/kg) diluted in saline solution, by intramuscular injection, in the mean height of the cranial side of right forelimb, between the joints umerradio-ulnar and carpus. The blood was collected before the beginning of the experiment (zero time) and at 3, 8, 24, 48, 72, 96, 168, 240, 405 e 576 hours after inoculation, in order to evaluate the hemogram, coagulogram, total protein, albumine, globulins, urea, creatinine, creatinine phosphokinase (CPT) and aspartate aminotransferase. The B. alternatus venon caused a serious envenomation in catlle and was lethal for two animals at 53 and 78 hours. The blood profile alteratons were normocitic and normocromic anaemia, leucocitosis with neutrophilia, linfocitosis, coagulation time increased, trombocytopenia and elevation in the urea, CPT and AST enzymes.

Perfil hematológico de bovinos experimentalmente inoculados com veneno de Bothrops alternatus / mentally inoculatede experimentally inoculated / with Bothrops alternatus venom

Apesar de ser alto o número de acidentes ofídicos em bovinos, as alterações hematológicas e bioquímicas séricas sãopouco estudadas, especialmente nas três primeiras semanas após o envenenamento. Diante deste contexto, objetivou-senesta pesquisa caracterizar o perfil hematológico e bioquímico sérico de bovinos após a inoculação experimental do venenode Bothrops alternatus. Cinco novilhas mestiças de peso corporal entre 188 e 278kg e idade de 12 a 18 meses receberamna altura média da face cranial do membro anterior direito, entre as articulações umerorradioulnar e do carpo, por viaintramuscular superficial, 0,15mg/kg de veneno de Bothrops alternatus diluído em salina. Coletou-se sangue de todos osanimais antes (tempo zero) e as 3, 8, 24, 48, 72, 96, 168, 240, 405 e 576 horas após inoculação do veneno para avaliaçãodo hemograma, coagulograma e dosagem de proteína total, albumina, globulinas, ureia, creatinina, creatina fosfotransferase,aspartato aminotransferase e gama glutamiltransferase. O veneno de B. alternatus causou intoxicação grave nos bovinos,e foi letal para dois animais às 53 horas e 78 horas. As alterações hematológicas observadas foram: anemia normocíticanormocrômica, leucocitose com neutrofilia com desvio para esquerda regenerativo, linfocitose, aumentos dos tempos decoagulação, de protrombina e de tromboplastina parcial ativada, trombocitopenia e elevação da ureia e das enzimas CPT eAST.(AU)

Despite the high number of Bothrops envenomation in cattle, the hematological and biochemical changes are poorly known mainly in the first few weeks after the poisoning. In this context, the aim of this study was to evaluate the bovine blood profile after B. alternatus envenomation. Five crossbred heifers were inoculated with B. alternatus venom (0.15mg/kg) diluted in saline solution, by intramuscular injection, in the mean height of the cranial side of right forelimb, between the joints umerradio-ulnar and carpus. The blood was collected before the beginning of the experiment (zero time) and at 3, 8, 24, 48, 72, 96, 168, 240, 405 e 576 hours after inoculation, in order to evaluate the hemogram, coagulogram, total protein, albumine, globulins, urea, creatinine, creatinine phosphokinase (CPT) and aspartate aminotransferase. The B. alternatus venon caused a serious envenomation in catlle and was lethal for two animals at 53 and 78 hours. The blood profile alteratons were normocitic and normocromic anaemia, leucocitosis with neutrophilia, linfocitosis, coagulation time increased, trombocytopenia and elevation in the urea, CPT and AST enzymes.(AU)

Avaliação clínica e cardiovascular de cães inoculados experimentalmente com veneno de Tytus serrulatus / Cardiovascular and clinical evaluation of dogs after Tytus serrulatus venom experimentally inoculation

Objetivou-se avaliar os sinais clínicos e cardiovascularesde cães após inoculação experimentaldo veneno do escorpião-amarelo, Tityus serrulatus. Doze cães adultos foram distribuídos em doisgrupos: controle (GI), animais inoculados com 0,5mL de placebo (PBS) por via subcutânea na facemedial da coxa esquerda; e envenenado (GII), animais inoculados com veneno liofi lizado de Tityusserrulatus(250μg/kg) diluído em PBS. Os animais foram examinados até 72h após o envenenamento,sendo aferidos parâmetros clínicos gerais e cardiovasculares por meio de eletrocardiogramas (ECG),ecocardiogramas (ECO), mensurações de pressão arterial sistólica (PAS) e radiografi as torácicas. Oscães envenenados(GII) manifestaram intensa dor no local de aplicação, sem lesões, até 11h após, comlambidas no local da administração do veneno, claudicação, suspensão do membro, difi culdade aodeitar, vocalização, letargia além das reações sistêmicas como, dor abdominal, vômitos, espirros, rinorréiae sialorréia. Não houve alterações de temperatura retal, das freqüências respiratória e cardíaca,nem à auscultação das áreas cardíaca e pulmonar.Um cão apresentou reação alérgica com edemana face e congestão de mucosas. A PAS média dos cães elevou-se entre 30 min e 12 horas após a inoculaçãodo veneno, comparando-se aos cães do GI. Não foram encontradas alterações deECG, ECO enas radiografi as torácicas. O efeito neurotóxico do veneno de T. serrulatus, promotor de liberação deneurotransmissores, foi elucidado pela reação adrenérgica de vasoconstrição, levando à hipertensão.A alta dose de veneno escorpiônico administrada aos animais maximizou o efeito doloroso local erevelou a resistência do cão frente à ausência de alterações cardiopulmonares

In order to observe the clinical effects of scorpion sting, 12 healthy mongrel male dogs were distributedin two groups, with six animals each: group I (control group) and group II (venom group).The lyophilized yellow scorpion (Tityus serrulatus) venom (250μg/kg) diluted in 0,5ml phosphatebuffered saline (PBS) was given to group II by subcutaneous injection, in the left forearm, medial face. Group I received only 0,5ml of PBS, by subcutaneous injection, in the left forearm, medial face. Both groupsunderwent clinical examination, with systemic cardiovascular parameters (including electrocardiogram, echocardiogramevaluation of arterial blood pressure and chest X-rays). After envenomation, until 11h, dogs from groupII showed several behavioral changes, such as the manifestation of intense local pain, sneezing, intense salivation,vomiting and abdominal pain.It was no observed alterations in the rectal temperature, cardiac and respiratory frequencyneither alterations after cardiac and pulmonary auscultation. One dog presented allergic reaction with faceedema and mucosa congest.In all animals from group II, the systolic blood pressure increased between 30min and12h when compared with group I (control). In both groups, no major change was observed in echocardiographyand in electrocardiography, except for slight sinus arrhythmia. The neurotoxic effect of T. serrulatusvenom, whichliberatesneurotransmissores, was elicited byadrenergic reaction of vasoconstrictioncausing hypertension. Thehigh dose of scorpion venom administrated to dogs maximized local pain and showed the dog resistance from theabsence of cardiopulmonary alterations

Avaliação clínica e cardiovascular de cães inoculados experimentalmente com veneno de Tytus serrulatus / Cardiovascular and clinical evaluation of dogs after Tytus serrulatus venom experimentally inoculation

Objetivou-se avaliar os sinais clínicos e cardiovascularesde cães após inoculação experimentaldo veneno do escorpião-amarelo, Tityus serrulatus. Doze cães adultos foram distribuídos em doisgrupos: controle (GI), animais inoculados com 0,5mL de placebo (PBS) por via subcutânea na facemedial da coxa esquerda; e envenenado (GII), animais inoculados com veneno liofi lizado de Tityusserrulatus(250μg/kg) diluído em PBS. Os animais foram examinados até 72h após o envenenamento,sendo aferidos parâmetros clínicos gerais e cardiovasculares por meio de eletrocardiogramas (ECG),ecocardiogramas (ECO), mensurações de pressão arterial sistólica (PAS) e radiografi as torácicas. Oscães envenenados(GII) manifestaram intensa dor no local de aplicação, sem lesões, até 11h após, comlambidas no local da administração do veneno, claudicação, suspensão do membro, difi culdade aodeitar, vocalização, letargia além das reações sistêmicas como, dor abdominal, vômitos, espirros, rinorréiae sialorréia. Não houve alterações de temperatura retal, das freqüências respiratória e cardíaca,nem à auscultação das áreas cardíaca e pulmonar.Um cão apresentou reação alérgica com edemana face e congestão de mucosas. A PAS média dos cães elevou-se entre 30 min e 12 horas após a inoculaçãodo veneno, comparando-se aos cães do GI. Não foram encontradas alterações deECG, ECO enas radiografi as torácicas. O efeito neurotóxico do veneno de T. serrulatus, promotor de liberação deneurotransmissores, foi elucidado pela reação adrenérgica de vasoconstrição, levando à hipertensão.A alta dose de veneno escorpiônico administrada aos animais maximizou o efeito doloroso local erevelou a resistência do cão frente à ausência de alterações cardiopulmonares(AU)

In order to observe the clinical effects of scorpion sting, 12 healthy mongrel male dogs were distributedin two groups, with six animals each: group I (control group) and group II (venom group).The lyophilized yellow scorpion (Tityus serrulatus) venom (250μg/kg) diluted in 0,5ml phosphatebuffered saline (PBS) was given to group II by subcutaneous injection, in the left forearm, medial face. Group I received only 0,5ml of PBS, by subcutaneous injection, in the left forearm, medial face. Both groupsunderwent clinical examination, with systemic cardiovascular parameters (including electrocardiogram, echocardiogramevaluation of arterial blood pressure and chest X-rays). After envenomation, until 11h, dogs from groupII showed several behavioral changes, such as the manifestation of intense local pain, sneezing, intense salivation,vomiting and abdominal pain.It was no observed alterations in the rectal temperature, cardiac and respiratory frequencyneither alterations after cardiac and pulmonary auscultation. One dog presented allergic reaction with faceedema and mucosa congest.In all animals from group II, the systolic blood pressure increased between 30min and12h when compared with group I (control). In both groups, no major change was observed in echocardiographyand in electrocardiography, except for slight sinus arrhythmia. The neurotoxic effect of T. serrulatusvenom, whichliberatesneurotransmissores, was elicited byadrenergic reaction of vasoconstrictioncausing hypertension. Thehigh dose of scorpion venom administrated to dogs maximized local pain and showed the dog resistance from theabsence of cardiopulmonary alterations(AU)