RESUMO
p53 is a cell cycle checkpoint control protein that assesses DNA damage and acts as a transcription factorregulating genes, which control cell growth, DNA repair, and apoptosis. p53 mutations have been foundin a wide variety of different cancers including flow cytometric assessment of p53 protein expression usinganti-p53 monoclonal antibodies. We studied p53 protein expression by flow cytometry (FC) assay in 223blood and/or bone marrow samples from 72 patients with chronic myeloid leukemia (CML): 54 in chronicphase (CML-CP), 7 in accelerated phase (CML-AP), and 11 in blastic phase (CML-BP); 64 patients withchronic lymphoid leukemia (CLL): (34 at diagnosis, 21 in previously treated, and 9 with Richters syndrome);44 patients with acute lymphoid leukemia (ALL): 36 at diagnosis and 8 in relapse; and 43 acutemyeloid leukemia (AML): 27 de novo, 7 in relapse, and 9 secondary. p53 protein expression was observedin 64 of 223 patients samples: 14/64 (21.9%) CLL, 13/44 (29.5%) ALL, 19/43 (44.2%) AML, and 17/72(23.6%) CML. Highest levels were detected in the advanced phases of CLL, ALL, and CML. In addition, inpatients with AML, high levels of p53 expression were detected in secondary and relapse disease and also in de novo AML cases. Our results demonstrated that p53 expression levels are strongly associated withadvanced disease. On the basis of these results, we concluded that FC can be a reliable approach to studyp53 protein expression in leukemic patients. (AU)
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Citometria de Fluxo/métodos , Leucemia/diagnóstico , Prognóstico , Proteína Supressora de Tumor p53RESUMO
The ABCB1/MDR-1 gene, which encodes P-glycoprotein, is highly polymorphic. We analyzed 278 healthy Brazilian individuals through PCR-RFLP to identify ABCB1 variants and determine the genotypic and allelic frequencies. Genotypic frequencies for C1236T (rs1128503) were 0.31 for CC, 0.60 for CT and 0.09 for TT and allelic frequencies were 0.61 and 0.39 for C and T, respectively. Genotypic frequencies for C3435T (rs1045642) were 0.24 for CC, 0.61 for CT and 0.15 for TT, and allelic frequencies were 0.55 and 0.45 for C and T, respectively. Both variants showed significant differences in genotypic frequencies for both studied regions. Gender comparisons did not show significant differences between genotypes at both sites. Significant differences were observed between C1236C and C3435T and also C1236C and C3435C. Comparisons between ABCB1 polymorphisms in Brazilians and other populations show significant differences. The understanding of the effects of several drugs associated to these variants may help an individualized treatment in clinical practice.
Assuntos
Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/genética , Polimorfismo de Nucleotídeo Único/genética , Subfamília B de Transportador de Cassetes de Ligação de ATP , Adolescente , Adulto , Sequência de Bases , Brasil , Análise Mutacional de DNA , Etnicidade/genética , Feminino , Frequência do Gene/genética , Genótipo , Humanos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Dados de Sequência Molecular , Caracteres Sexuais , Adulto JovemRESUMO
Alterations involving the short arm of chromosome 17 (17p) during the progression of chronic myeloid leukemia(CML) have been described. This chromosomal region contains the tumor suppressor gene TP53 that may be animportant factor in the evolution of this disease. In this study, we used flow cytometry and western blotting to assessp53 protein expression and single stranded conformational polymorphism to examine TP53 gene alterations in three patients with CML who showed alterations in 17p. Only the case with del(17)(p11) had p53 expression positive by flow cytometry and an abnormal migration pattern by SSCP analysis. The importance of the correlation between the results obtained with these techniques, as well as the clinical course of the patients, are discussed (AU)
Assuntos
Humanos , Leucemia Mieloide Crônica Atípica BCR-ABL Negativa , Cromossomos Humanos Par 17 , Genes p53 , Proteína Supressora de Tumor p53RESUMO
Background: One of the best characterized resistance mechanisms of leukemias is multidrug resistance(MDR) mediated by P-glycoprotein (Pgp) and multidrug-resistant related protein (MRP). In addition to Pgpand MRP, p53 mutation or inactivation might play a relevant role in therapeutic failure. Some studies havedemonstrated that Pgp and MRP may be activated in association with overexpression of mutant or inactivatedp53 protein. The aim of this study was to investigate the association between p53 expression and MDRfunctional phenotype analyzed by flow cytometry (FCM).Methods: Rhodamine-123 assay analyzed by FCM was used to detect the MDR phenotype that was positivein 18 out of 41 (43.9%) cases of chronic myeloid leukemia (CML), 16 out of 28 (57.1%) chronic lymphoidleukemia (CLL) cases, 11 out of 28 (39.3%) acute myeloid leukemia (AML) cases, and four out of 22(18.2%) acute lymphoid leukemia (ALL) cases.Results: Variable levels of p53 expression were observed in leukemic cells: 12 out of 41 (29.2%) in CML,nine out of 28 (32.1%) in CLL, 15 out of 28 (53.6%) in AML, and eight out of 22 (36.4%) in ALL samples.Conclusions: In our study, no significant association between p53 expression and MDR functionalphenotype was observed in ALL, CLL, and AML. On the other hand, a significant association (P 0.0003)of the coexpression was observed in CML. The p53 overexpression was more frequently seen in theaccelerated phase and the blastic phase of this disease. Our results suggest that an MDR functionalphenotype could be associated with p53 mutation in the advanced stage of leukemias.(AU)
Assuntos
Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva , Rodamina 123 , Citometria de FluxoRESUMO
BACKGROUND: One of the best characterized resistance mechanisms of leukemias is multidrug resistance (MDR) mediated by P-glycoprotein (Pgp) and multidrug-resistant related protein (MRP). In addition to Pgp and MRP, p53 mutation or inactivation might play a relevant role in therapeutic failure. Some studies have demonstrated that Pgp and MRP may be activated in association with overexpression of mutant or inactivated p53 protein. The aim of this study was to investigate the association between p53 expression and MDR functional phenotype analyzed by flow cytometry (FCM). METHODS: Rhodamine-123 assay analyzed by FCM was used to detect the MDR phenotype that was positive in 18 out of 41 (43.9%) cases of chronic myeloid leukemia (CML), 16 out of 28 (57.1%) chronic lymphoid leukemia (CLL) cases, 11 out of 28 (39.3%) acute myeloid leukemia (AML) cases, and four out of 22 (18.2%) acute lymphoid leukemia (ALL) cases. RESULTS: Variable levels of p53 expression were observed in leukemic cells: 12 out of 41 (29.2%) in CML, nine out of 28 (32.1%) in CLL, 15 out of 28 (53.6%) in AML, and eight out of 22 (36.4%) in ALL samples. CONCLUSIONS: In our study, no significant association between p53 expression and MDR functional phenotype was observed in ALL, CLL, and AML. On the other hand, a significant association (P = 0.0003) of the coexpression was observed in CML. The p53 overexpression was more frequently seen in the accelerated phase and the blastic phase of this disease. Our results suggest that an MDR functional phenotype could be associated with p53 mutation in the advanced stage of leukemias.
Assuntos
Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/biossíntese , Genes MDR , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/metabolismo , Proteína Supressora de Tumor p53/biossíntese , Crise Blástica , Células da Medula Óssea , Resistência a Múltiplos Medicamentos , Citometria de Fluxo , Corantes Fluorescentes/farmacologia , Humanos , Células K562 , Leucemia Linfocítica Crônica de Células B/metabolismo , Mutação , Fenótipo , Leucemia-Linfoma Linfoblástico de Células Precursoras/metabolismo , Recidiva , Rodamina 123/farmacologia , Síndrome , Fatores de Tempo , Proteína Supressora de Tumor p53/metabolismoRESUMO
OBJECTIVES: To analyze the expression pattern of apoptotic related proteins Bax and Bcl-2 and HPV virus infection in samples of penile carcinomas and adjacent tissues. MATERIAL AND METHODS: Bax and Bcl-2 were assayed by Western Blot and HPV virus presence by PCR in 16 tumor samples, 11 adjacent skin and 10 adjacent corpus cavernosum samples. Normal penile tissues were used as controls. RESULTS: Comparative to control samples, tumors showed an imbalance in Bax and Bcl-2 expression. These alterations were also observed in tumor adjacent tissues. We found that 37.5% (6/16) of our samples were infected by HPV. CONCLUSIONS: Bax and Bcl-2 imbalance is probably associated with the neoplastic process. No correlation between Bax/Bcl-2 balance and patient age and tumor differentiation was found. HPV infection should not be the major cause for penis cancer development.
Assuntos
Carcinoma de Células Escamosas/metabolismo , Carcinoma de Células Escamosas/virologia , Papillomaviridae , Infecções por Papillomavirus/complicações , Neoplasias Penianas/metabolismo , Neoplasias Penianas/virologia , Proteínas Proto-Oncogênicas c-bcl-2/biossíntese , Adulto , Idoso , Carcinoma de Células Escamosas/patologia , Humanos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Papillomaviridae/isolamento & purificação , Neoplasias Penianas/patologia , Proteína X Associada a bcl-2Assuntos
Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/metabolismo , Antineoplásicos/uso terapêutico , Linfócitos B/efeitos dos fármacos , Mesilato de Imatinib/uso terapêutico , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/tratamento farmacológico , Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/genética , Adulto , Fatores Etários , Antineoplásicos/metabolismo , Linfócitos B/metabolismo , Linfócitos B/patologia , Transporte Biológico , Biomarcadores Tumorais/genética , Biomarcadores Tumorais/metabolismo , Feminino , Humanos , Mesilato de Imatinib/metabolismo , Células K562 , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/genética , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/metabolismo , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/patologia , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Cultura Primária de Células , Progesterona/farmacologia , Proteínas Proto-Oncogênicas c-abl/genética , Proteínas Proto-Oncogênicas c-abl/metabolismo , Fatores Sexuais , Resultado do TratamentoRESUMO
PURPOSE: Polymorphisms in the ABCB1 gene may influence P-glycoprotein (Pgp) expression and/or activity. Because the population in Brazil is markedly heterogeneous, we analyzed the relationship between ABCB1 polymorphisms and Pgp expression/activity in Brazilian acute myeloid leukemia (AML) patients. METHODS: Acute myeloid leukemia samples from 109 patients were studied. ABCB1 gene variants rs1128503 (C1236T) and rs1045643 (C3435T) were analyzed by PCR-RFLP assay. Pgp expression and Pgp activity were analyzed by flow cytometry. RESULTS: There was a similar distribution of Pgp expression and activity on polymorphisms C1236T, C1236C, and T1236T for exon 12, and C3435T, C3435C, and T3435T for exon 26. An exception was observed in the lowest ratio of mean fluorescence intensity (MFI) median for Pgp expression in the TT genotype for both studied exons, and its correspondence to a low MFI median for Pgp activity. Pgp expression did not show impact on the response to remission induction therapy, but the MFI median of Pgp expression in the remission failure group was higher than that of the complete remission (CR) group of patients (p = 0.04). Overall survival (OS) was significantly influenced by CR (p = 0.0001). Better 5-year OS and 5-year event-free survival rates (p = 0.04 and p = 0.007, respectively) were achieved in patients presenting the genetic variant CC in exon 12 followed by those presenting the variant CT in exon 26 (p = 0.001). CONCLUSIONS: Polymorphisms in the ABCB1 gene and the levels of Pgp expression could be useful to identify prognostic in AML patients.
Assuntos
Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/genética , Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/metabolismo , Leucemia Mieloide Aguda/genética , Leucemia Mieloide Aguda/metabolismo , Subfamília B de Transportador de Cassetes de Ligação de ATP , Membro 1 da Subfamília B de Cassetes de Ligação de ATP/biossíntese , Adolescente , Adulto , Idoso , Protocolos de Quimioterapia Combinada Antineoplásica/uso terapêutico , Brasil , Estudos de Coortes , Intervalo Livre de Doença , Éxons , Feminino , Haplótipos , Humanos , Leucemia Mieloide Aguda/sangue , Leucemia Mieloide Aguda/tratamento farmacológico , Contagem de Leucócitos/métodos , Masculino , Pessoa de Meia-Idade , Polimorfismo Genético , Indução de Remissão , Resultado do Tratamento , Adulto JovemRESUMO
p53 is a cell cycle checkpoint control protein that assesses DNA damage and acts as a transcription factor regulating genes, which control cell growth, DNA repair, and apoptosis. p53 mutations have been found in a wide variety of different cancers including flow cytometric assessment of p53 protein expression using anti-p53 monoclonal antibodies. We studied p53 protein expression by flow cytometry (FC) assay in 223 blood and/or bone marrow samples from 72 patients with chronic myeloid leukemia (CML): 54 in chronic phase (CML-CP), 7 in accelerated phase (CML-AP), and 11 in blastic phase (CML-BP); 64 patients with chronic lymphoid leukemia (CLL): (34 at diagnosis, 21 in previously treated, and 9 with Richter's syndrome); 44 patients with acute lymphoid leukemia (ALL): 36 at diagnosis and 8 in relapse; and 43 acute myeloid leukemia (AML): 27 de novo, 7 in relapse, and 9 secondary. p53 protein expression was observed in 64 of 223 patient's samples: 14/64 (21.9%) CLL, 13/44 (29.5%) ALL, 19/43 (44.2%) AML, and 17/72 (23.6%) CML. Highest levels were detected in the advanced phases of CLL, ALL, and CML. In addition, in patients with AML, high levels of p53 expression were detected in secondary and relapse disease and also in de novo AML cases. Our results demonstrated that p53 expression levels are strongly associated with advanced disease. On the basis of these results, we concluded that FC can be a reliable approach to study p53 protein expression in leukemic patients.
Assuntos
Citometria de Fluxo/métodos , Leucemia/metabolismo , Leucemia/terapia , Proteína Supressora de Tumor p53/metabolismo , Linhagem Celular Tumoral , Saúde , Humanos , Leucemia/classificação , Leucemia/diagnóstico , Leucócitos Mononucleares/metabolismo , Prognóstico , Resultado do TratamentoRESUMO
IntroduÆo: A prote¡na p53 desempenha uma funÆo crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e nainduÆo de apoptose em clulas geneticamente inst veis. O Western blot (WB) o mtodo preconizado paradetecÆo dessa prote¡na, no entanto tcnica demorada e trabalhosa. Atualmente, a citometria de fluxo (CF)tambm tem sido empregada na detecÆo da prote¡na p53 tendo a vantagem da praticidade. Objetivos e Metodologia:Comparar os resultados obtidos pela CF e WB na detecÆo da prote¡na p53 em clulas leucmicas. Empregamosamostras de 3 pacientes com leucemia linf¢ide aguda (LLA), 5 com leucemia miel¢ide aguda (LMA), 6 comleucemia miel¢ide crnica (LMC) e 8 com leucemia linf¢ide crnica (LLC). Os controles positivos (5) e negativos(4), para os dois mtodos, foram linhagens de clulas leucmicas. Juntamente com o controle de marcaÆo negativa,na tcnica de CF, utilizamos linf¢citos de 40 doadores de sangue. A an lise pela CF foi realizada ap¢s a marcaÆocom anticorpo monoclonal anti-p53 e o WB por tcnica convencional. Resultados e Conclusäes: Observamosconcordncia nos resultados em 82 por cento das amostras leucmicas e em 100 por cento nas linhagens celulares. CF+/WB+foram observados em pacientes com evoluÆo desfavor vel tais como na LLC / S¡ndrome de Richter, LMC emcrise bl stica e na maioria das LMA. Apesar do WB ser considerado um mtodo padrÆo para a detecÆo da p53,nossos resultados indicam que a CF pode ser empregada satisfatoriamente na detecÆo dessa prote¡na em amostrasleucmicas.(AU)
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Western Blotting , Imuno-Histoquímica/métodos , Leucemia , Anticorpos MonoclonaisRESUMO
A proteína p53 desempenha um importante papel no controle do ciclo de celular e reparo no DNA danificado. Em pacientes com leucemia de mielóide crônica (LMC) as mutações neste gene são encontradas em até 30% dos casos, especialmente na crise blástica (LMC-CB), sendo a detecção de alterações nesse gene ou proteína importantes na avaliação da evolução clínica da LMC. O sequenciamento de DNA é descrito como o método capaz de identificar as mutações do gene TP53, sendo, no entanto uma técnica complexa e dispendiosa, o que dificulta seu emprego em larga escala, sendo, atualmente, proposto a pesquisa da proteína p53 por métodos imunológicos e a técnica da reação em cadeia da polimerase seguida pelo estudo do polimorfismo conformacional de fita simples (PCR/SSCP). Métodos: Analisaram-se amostras de 72 pacientes com LMC: 54 de LMC em fase crônica (33 fase inicial ou LMC-FCi e 21 em fase crônica tardia ou LMC-FCtd), 7 em fase acelerada ou LMC-Ac e 11 em crise de blástica (LMC-CB). Foram realizados PCR para os exons 5-9 para posterior estudo pelo SSCP e a expressão de proteína de p53 foi feita por citometria de fluxo. Resultados: Na análise do PCR-SSCP, alterações de mobilidade eletroforética indicativa de mutação do gene de TP53 foi observado em 11/72 pacientes e a expressão da proteína p53 em 17/72 pacientes. O SSCP anormal foi visto em dois casos de LMC-FCi (exon 7), quatro LMC-FCt (um exon 7, um exon 8 e dois exons 8-9), um na LMC-FAc (exon 8) e quatro na LMC-CB (dois no exon 5, um no exon 6 e um no exon 8-9). Neste grupo, a proteína de p53 estava expressa sete casos (todas LMC-CB e AC e 2 LMC-FCtd), havendo correlação estatisticamente significativa entre os resultados dos dois métodos. Conclusões: Estes resultados sugerem que os dois métodos conjuntamente empregados podem aumentar a sensibilidade na detecção de anormalidades do gene e proteína p53 nos pacientes com LMC. A presença de SSCP anormal associado à expressão da proteína de p53 nas fases avançadas desta doença na maioria de casos, sugere que estes exames possam se empregados como indicadores de progressão para a LMC.
The p53 protein play an important role in the control of the cell cycle and DNA repair. In patients with chronic myeloid leukemia (CML) mutation in this gene were found in up to 30%, especially among those in blast crisis. At present, the only widely available technology that reliable detects and defines all mutations is DNA sequencing. However, the routine sequencing of the entire TP53 gene in all cases suggestive of mutation in the laboratorial routine is prohibitively costly, complex, and time consuming. To screen for TP53 abnormalities in CML patients, both p53 protein expression bay immunologic methods and single strand conformation polymorphism of polymerase chain reaction products (SSCP-PCR) is proposed. Methods: We report the results of an analysis of 72 samples from CML patients:54 in chronic phase :33 in initial phase (ICP-CML) and 21 in late phase (LCP-CML), 7 in accelerated phase (AP-CML) and 11in blast crisis (BC-CML). DNA structure for 5-9 exons of the TP53 gene were analyzed by PCR-SSCP and p53 protein expression by flow cytometry (CF). Results: By PCR-SSCP analysis, shifts in eletrophoretic mobility of the TP53 gene were detected in 11 out of CML patients and p53 protein expression in 17 out of 72 CML patients. The abnormal SSCP pattern were showed in two cases of ICP-CML (exon 7), four LCP-CML (one exon 7 and exon 8 and two exons 8-9), one in AP-CML (exon 8) and four in BC-CML (two in exon 5, one in exon 6 and one in exon 8-9). In this group, the p53 protein were express in 17 cases (all CB and AC of CML patients and 2 out of 5 LCP samples of CML patients) and the statistical analysis by qui-square test showed correlation between this two tests. Conclusions: These results suggest that the two methods together can increase the sensibility of screening for p53 abnormalities in CML patients. The presence of abnormal SSCP associated to the p53 protein expression in advanced phases of this disease in the most of cases, suggesting that these tests can be used as an indicator of progression of CML.
Assuntos
Humanos , Citometria de Fluxo , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva , Mutação , Reação em Cadeia da Polimerase , Polimorfismo Genético , Polimorfismo Conformacional de Fita SimplesRESUMO
Introdução: A proteína p53 desempenha uma função crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e na indução de apoptose em células geneticamente instáveis. A imunocitoquímica (ICQ) é um dos métodos preconizados para detecção e visualização dessa proteína no núcleo das células, sendo, no entanto um método demorado e trabalhoso o que dificulta a sua aplicação na rotina laboratorial. Atualmente, a citometria de fluxo (CF) também tem sido empregada na detecção da proteína p53 mutada ou estabilizada tendo a vantagem da praticidade e rapidez de execução. Objetivos e Metodologia: Comparar os resultados obtidos pela CF e ICQ na detecção da proteína p53 em células leucêmicas. Empregamos amostras de 10 pacientes com leucemia linfóide aguda (LLA) 10 com leucemia linfóide crônica (LLC), tendo sido também empregadas, células de linhagens leucêmicas humanas que serviram como controle de expressão positiva e negativa para ambos os métodos além de linfócitos de 40 doadores de sangue. A CF e ICQ foram realizadas após a marcação com anticorpo monoclonal anti-p53 por técnicas convencionais. Resultados: Observamos concordância nos resultados da maioria das amostras dos pacientes e em todas as amostras das linhagens elulares tendo sido, no entanto constatados níveis de expressão mais elevados nas análises obtidos pela CF quando comparados com a ICQ, refletindo em uma maior sensibilidade desse método. Conclusão: Apesar da ICQ ser considerada uma técnica adequada para a detecção da p53, nossos resultados indicam que a CF pode ser empregada satisfatoriamente na detecção dessa proteína em amostras de células leucêmicas.
Introduction: The p53 protein plays a crucial role in the cell cycle control, DNA damage repair and induction of apoptosis in genetically unstable cells. The immunocytochemistry (ICQ) is one of the most common methodology for detection and visualization of this protein in the nucleus of the cells, but this technique is time-consuming and difficult to apply in the clinical setting. Nowadays the assessment of p53 protein expression by flow cytometry (FC) assays are easier to perform and provide reliable estimates of the prolonged half-life of mutant or inactivated wild-type p53 protein. Objectives and Methodology: Compare the results of p53 detection by FC and ICQ in leukemic cells. We used samples from 10 patients with acute lymphoid leukemia (ALL), 10 with chronic lymphoid leukemia (CLL). To positive and negative controls of p53 expression in both methods we also employed leukemic cells from human leukemic cell lines an lymphocytes from 40 healthy donors were also used as control for negative labeling in FC. The FC and ICQ were performed after labeling with p53 monoclonal antibody by the usual protocol. Results: We verified an agreement in the results in the majority of the leukemic cells from patients and in all human leukemic cell line samples. Conclusion: Despite of ICQ is considered a good methodology for p53 detection in leukemic cells; our results show that FC can be satisfactorily used for detection of this protein in leukemic cells.
Assuntos
Humanos , Anticorpos Monoclonais , Citometria de Fluxo , Imuno-Histoquímica , Leucemia , /imunologiaRESUMO
Alterations involving the short arm of chromosome 17 (17p) during the progression of chronic myeloid leukemia (CML) have been described. This chromosomal region contains the tumor suppressor gene TP53 that may be an important factor in the evolution of this disease. In this study, we used flow cytometry and western blotting to assess p53 protein expression and single stranded conformational polymorphism to examine TP53 gene alterations in three patients with CML who showed alterations in 17p. Only the case with del(17)(p11) had p53 expression positive by flow cytometry and an abnormal migration pattern by SSCP analysis. The importance of the correlation between the results obtained with these techniques, as well as the clinical course of the patients, are discussed.
Assuntos
Humanos , Aberrações Cromossômicas , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva , Citometria de Fluxo , Leucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL Positiva/etiologia , Mutação , Polimorfismo Conformacional de Fita SimplesRESUMO
Introdução: A proteína p53 desempenha uma função crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e naindução de apoptose em células geneticamente instáveis. O Western blot (WB) é o método preconizado paradetecção dessa proteína, no entanto é técnica demorada e trabalhosa. Atualmente, a citometria de fluxo (CF)também tem sido empregada na detecção da proteína p53 tendo a vantagem da praticidade. Objetivos e Metodologia:Comparar os resultados obtidos pela CF e WB na detecção da proteína p53 em células leucêmicas. Empregamosamostras de 3 pacientes com leucemia linfóide aguda (LLA), 5 com leucemia mielóide aguda (LMA), 6 comleucemia mielóide crônica (LMC) e 8 com leucemia linfóide crônica (LLC). Os controles positivos (5) e negativos(4), para os dois métodos, foram linhagens de células leucêmicas. Juntamente com o controle de marcação negativa,na técnica de CF, utilizamos linfócitos de 40 doadores de sangue. A análise pela CF foi realizada após a marcaçãocom anticorpo monoclonal anti-p53 e o WB por técnica convencional. Resultados e Conclusões: Observamosconcordância nos resultados em 82 por cento das amostras leucêmicas e em 100 por cento nas linhagens celulares. CF+/WB+foram observados em pacientes com evolução desfavorável tais como na LLC / Síndrome de Richter, LMC emcrise blástica e na maioria das LMA. Apesar do WB ser considerado um método padrão para a detecção da p53,nossos resultados indicam que a CF pode ser empregada satisfatoriamente na detecção dessa proteína em amostrasleucêmicas.
Assuntos
Humanos , Masculino , Feminino , Anticorpos Monoclonais , Western Blotting , Imuno-Histoquímica , LeucemiaRESUMO
Introdução e objetivos: p53 é a proteína cuja função é crucial no controle do ciclo celular, reparo do DNA e indução de apoptose de células geneticamente instáveis. O Western Blot (WB) e a imunocitoquímica (ICQ) são atualmente os métodos de detecção mais empregados da proteína p53, se tratando, porém de técnicas de execução demorada e trabalhosa. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma metodologia rápida para detecção e quantificação da proteína p53 em células tumorais através da citometria de fluxo (CF). Material e métodos:Empregou-se 14 linhagens de células tumorais humanas: Namalva, Raji e Daudi (linfoma de Burkitt), C91 e MT-2 (leucemia de células T do adulto), Jurkat (leucemia linfoblástica de células T), HL-60 (leucemia promielocítica), HT-29 (adenocarcinoma de colon), GLC-4 (carcinoma de pulmão), MCF-7 (carcinoma de mama), H460 e H460/bcl-2 (carcinoma de células não pequenas de pulmão), k562 e lucena (leucemia mielóide crônica em crise blástica) e C6 (astrocitoma originária de rato). Paralelamente, linfócitos provenientes de 36 indivíduos sadios serviram como controle da reação negativa. A iCQ foi realizada pelo método da imunoperoxidase indireta, a CF por marcação direta com anticorpo monoclonal anti-p53 diretamente conjugado ao isotiocianato de fluoresceína após permeabilização celular e o WB através do método padrão. A quantificação antigênica foi realizada através da média de intensidade de fluorescência na CF e densitometria no WB. Resultados: Observou-se uma correlação direta entre os resultados da CF, WB e ICQ, com expressão positiva nas linhagens Namalva, Raji, HT-29, GLC-4, MT-2, C91pl, MCF-7, H460 e H460/bcl-2 e negativa nas demais linhagens e em todas as células do grupo controle. A ICQ foi eficaz na demonstração da presença da p53 no núcleo da célula e a CF e WB permitiram também a quantificação antigênica, evidenciando células com variados níveis de expressão antigênica. A CF quando comparada ao WB apresentou maior sensibilidade. Conclusões: Nossos resultados mostraram que a proteína p53 pode ser detectada em células tumorais através da CF. Esta metodologia é eficaz, sensível e prática, podendo ser empregada rotineiramente em estudos de expressão da proteína p53 em células tumorais.