Ultrastructural study on the morphological changes to male worms of Schistosoma mansoni after in vitro exposure to allicin.

INTRODUCTION: Garlic has a wide range of actions, including antibacterial, antiviral, antifungal, antiprotozoal and anthelmintic actions. This antiparasitic activity has been attributed to allicin, which is the main constituent of garlic. The present study aimed to investigate the in vitro activity of allicin on the tegument of adult Schistosoma mansoni worms using scanning electron microscopy. METHODS: Swiss Webster mice were infected with S. mansoni cercariae (100 per mouse) and sacrificed 50 days later to acquire the adult worms. These worms were collected by perfusion and placed in RPMI medium 1,640 at 37°C before transferring to RPMI media containing 0 (control), 5, 10, 15 and 20mg/mL of allicin, where they were incubated for 2h. The worms were fixed in 2.5% glutaraldehyde solution, washed twice, post-fixed in osmium tetroxide, washed twice and then dehydrated with ascending grades of ethanol. The samples were air-dried, mounted on stubs, gold coated in an ion sputtering unit and viewed using a scanning electron microscope. RESULTS: A concentration of 5mg/mL caused wrinkling in the tegument; a concentration of 10mg/mL resulted in changes to tubercles and loss or modification of spines. With 15 and 20mg/mL increasing damage to the tegument could be seen, such as vesicle formation and the presence of ulcers. CONCLUSIONS: These findings demonstrate the effect of allicin on adult S. mansoni worms and indicate that most of the changes occur at concentrations greater than that normally indicated for treatment.

Ultrastructural study on the morphological changes to male worms of Schistosoma mansoni after in vitro exposure to allicin / Estudo ultraestrutural das alterações morfológicas de vermes machos de Schistosoma mansoni após exposição in vitro à alicina

INTRODUÇÃO: O alho apresenta uma ampla gama de ações, incluindo antibacteriana, antiviral, antifúngico, antiprotozoário e anti-helmíntico. Esta atividade antiparasitária tem sido atribuída à alicina, que é o principal constituinte do alho. O presente estudo teve como objetivo investigar a ação in vitro da alicina no tegumento de vermes adultos de Schistosoma mansoni utilizando a microscopia eletrônica de varredura. MÉTODOS: Camundongos Swiss Webster foram infectados com cercárias de S. mansoni (100 por camundongo) e sacrificados 50 dias depois para aquisição de vermes adultos. Estes vermes foram coletados por perfusão e colocados em meio RPMI 1.640 a 37°C antes de transferir para o meio RPMI contendo 0 (controle), 5, 10, 15 e 20mg/mL de alicina, onde eles foram incubados por 2h. Os vermes foram fixados em uma solução de glutaraldeído a 2,5%, lavados duas vezes, pós-fixados em tetróxido de ósmio, lavados duas vezes e então desidratados em séries crescentes de etanol. As amostras foram secadas, montadas em stubs, metalizadas em ouro e visualizadas utilizando o microscópio eletrônico de varredura. RESULTADOS: A concentração de 5mg/mL causou o enrugamento do tegumento; a concentração de 10mg/mL resultou em alterações nos tubérculos e perda ou modificações nos espinhos. Com 15 e 20mg/mL crescentes danos no tegumento pode ser visto, tais como formação de vesículas e presença de úlceras. CONCLUSÕES: Esses resultados demonstram os efeitos da alicina nos vermes adultos de S. mansoni e indicam que a maioria das alterações ocorrem numa concentração maior do que a normalmente indicada para o tratamento.

Ultrastructural study on the morphological changes to male worms of Schistosoma mansoni after in vitro exposure to allicin / Estudo ultraestrutural das alterações morfológicas de vermes machos de Schistosoma mansoni após exposição in vitro à alicina

INTRODUCTION: Garlic has a wide range of actions, including antibacterial, antiviral, antifungal, antiprotozoal and anthelmintic actions. This antiparasitic activity has been attributed to allicin, which is the main constituent of garlic. The present study aimed to investigate the in vitro activity of allicin on the tegument of adult Schistosoma mansoni worms using scanning electron microscopy. METHODS: Swiss Webster mice were infected with S. mansoni cercariae (100 per mouse) and sacrificed 50 days later to acquire the adult worms. These worms were collected by perfusion and placed in RPMI medium 1,640 at 37°C before transferring to RPMI media containing 0 (control), 5, 10, 15 and 20mg/mL of allicin, where they were incubated for 2h. The worms were fixed in 2.5 percent glutaraldehyde solution, washed twice, post-fixed in osmium tetroxide, washed twice and then dehydrated with ascending grades of ethanol. The samples were air-dried, mounted on stubs, gold coated in an ion sputtering unit and viewed using a scanning electron microscope. RESULTS: A concentration of 5mg/mL caused wrinkling in the tegument; a concentration of 10mg/mL resulted in changes to tubercles and loss or modification of spines. With 15 and 20mg/mL increasing damage to the tegument could be seen, such as vesicle formation and the presence of ulcers. CONCLUSIONS: These findings demonstrate the effect of allicin on adult S. mansoni worms and indicate that most of the changes occur at concentrations greater than that normally indicated for treatment.

INTRODUÇÃO: O alho apresenta uma ampla gama de ações, incluindo antibacteriana, antiviral, antifúngico, antiprotozoário e anti-helmíntico. Esta atividade antiparasitária tem sido atribuída à alicina, que é o principal constituinte do alho. O presente estudo teve como objetivo investigar a ação in vitro da alicina no tegumento de vermes adultos de Schistosoma mansoni utilizando a microscopia eletrônica de varredura. MÉTODOS: Camundongos Swiss Webster foram infectados com cercárias de S. mansoni (100 por camundongo) e sacrificados 50 dias depois para aquisição de vermes adultos. Estes vermes foram coletados por perfusão e colocados em meio RPMI 1.640 a 37°C antes de transferir para o meio RPMI contendo 0 (controle), 5, 10, 15 e 20mg/mL de alicina, onde eles foram incubados por 2h. Os vermes foram fixados em uma solução de glutaraldeído a 2,5 por cento, lavados duas vezes, pós-fixados em tetróxido de ósmio, lavados duas vezes e então desidratados em séries crescentes de etanol. As amostras foram secadas, montadas em stubs, metalizadas em ouro e visualizadas utilizando o microscópio eletrônico de varredura. RESULTADOS: A concentração de 5mg/mL causou o enrugamento do tegumento; a concentração de 10mg/mL resultou em alterações nos tubérculos e perda ou modificações nos espinhos. Com 15 e 20mg/mL crescentes danos no tegumento pode ser visto, tais como formação de vesículas e presença de úlceras. CONCLUSÕES: Esses resultados demonstram os efeitos da alicina nos vermes adultos de S. mansoni e indicam que a maioria das alterações ocorrem numa concentração maior do que a normalmente indicada para o tratamento.

Caracterização citoquímica e imunocitoquímica da larva infectante (L3) de Wuchereria bancrofti (Nematoda: Filarioidea) / Cytochemical and immunocytochemical characterization of the third-stage larvae of Wuchereria bancrofti (Nematoda: Filarioidea)

Entre as doenças infecciosas, a filariose constitui um sério problema de saúde pública. Estima-se que aproximadamente 129 milhões de pessoas no mundo encontrem-se infectadas e que mais de 90 por cento destas infecções sejam causadas pela Wuchereria bancrofti. O parasita filarial W. bancrofti é extremamente hospedeiro-específico, e, devido a ausência de um modelo experimental e dificuldades com cultivo in vitro, existem poucos estudos a respeito da larva infectante de terceiro estádio. Neste trabalho várias técnicas citoquímicas foram utilizadas para analisar a larva infectante (L3) de Wuchereria bancrofti. Uma solução de tetróxido de ósmio com tampão imidazol foi empregada para a visualização de ácidos graxos insaturados. Um material altamente contrastado formando uma estrutura contínua foi observada na superfície da larva e sobre a epicutícula. Forte reação foi observada no esôfago e no material encontrado em seu interior. Carboidratos contendo grupos do tipo vic-glicol não foram observados na cutícula da larva L3 de W. bancrofti submetidas à técnica do Thiéry. Utilizando um painel de oito lectinas conjugadas a ouro, foi demonstrado que a cutícula exibe uma discreta marcação com todas as lectinas, indicando a presença de resíduos de N-acetil-D-glicosamina, N-acetil-galactosamina, D-galactose, D-manose e L-fucose. Sítios aniônicos de superfície foram visualizadas através da utilização de partículas de ferritina cationizada. O tratamento com tripsina inibiu parcialmente a reação, enquanto o tratamento com condroitinase ABC, uma enzima específica para gligosaminoglicanas, aboliu completamente a marcação com partículas catiônicas. Os resultados dos tratamentos com as enzimas indicam que condroitina-4, condroitina-6, sulfato de dermatano e ácido hialurônico assim como as cadeias laterais de proteoglicanas, provavelmente são os principais componentes carregados negativamente presentes na superfície da L3. Em uma segunda abordagem, técnicas imunocitoquímicas e bioquímicas foram empregadas para a detecção de uma proteína semelhante à albumina humana em larvas L3 de W. bancrofti, fêmeas adultas do parasita filarial Litomosoides chagasfilhoi e no nematóide de vida livre Caenorhabditis elegans... (AU)

Caracterização citoquímica e imunocitoquímica da larva infectante (L3) de Wuchereria bancrofti (Nematoda: Filarioidea) / Cytochemical and immunocytochemical characterization of the third-stage larvae of Wuchereria bancrofti (Nematoda: Filarioidea)

Entre as doenças infecciosas, a filariose constitui um sério problema de saúde pública. Estima-se que aproximadamente 129 milhões de pessoas no mundo encontrem-se infectadas e que mais de 90 por cento destas infecções sejam causadas pela Wuchereria bancrofti. O parasita filarial W. bancrofti é extremamente hospedeiro-específico, e, devido a ausência de um modelo experimental e dificuldades com cultivo in vitro, existem poucos estudos a respeito da larva infectante de terceiro estádio. Neste trabalho várias técnicas citoquímicas foram utilizadas para analisar a larva infectante (L3) de Wuchereria bancrofti. Uma solução de tetróxido de ósmio com tampão imidazol foi empregada para a visualização de ácidos graxos insaturados. Um material altamente contrastado formando uma estrutura contínua foi observada na superfície da larva e sobre a epicutícula. Forte reação foi observada no esôfago e no material encontrado em seu interior. Carboidratos contendo grupos do tipo vic-glicol não foram observados na cutícula da larva L3 de W. bancrofti submetidas à técnica do Thiéry. Utilizando um painel de oito lectinas conjugadas a ouro, foi demonstrado que a cutícula exibe uma discreta marcação com todas as lectinas, indicando a presença de resíduos de N-acetil-D-glicosamina, N-acetil-galactosamina, D-galactose, D-manose e L-fucose. Sítios aniônicos de superfície foram visualizadas através da utilização de partículas de ferritina cationizada. O tratamento com tripsina inibiu parcialmente a reação, enquanto o tratamento com condroitinase ABC, uma enzima específica para gligosaminoglicanas, aboliu completamente a marcação com partículas catiônicas. Os resultados dos tratamentos com as enzimas indicam que condroitina-4, condroitina-6, sulfato de dermatano e ácido hialurônico assim como as cadeias laterais de proteoglicanas, provavelmente são os principais componentes carregados negativamente presentes na superfície da L3. Em uma segunda abordagem, técnicas imunocitoquímicas e bioquímicas foram empregadas para a detecção de uma proteína semelhante à albumina humana em larvas L3 de W. bancrofti, fêmeas adultas do parasita filarial Litomosoides chagasfilhoi e no nematóide de vida livre Caenorhabditis elegans...