Involvement of pmrAB and phoPQ in polymyxin B adaptation and inducible resistance in non-cystic fibrosis clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa.

During investigation of susceptibility testing methods for polymyxins, 24 multidrug-resistant clinical isolates of Pseudomonas aeruginosa were observed to have a distinct, reproducible phenotype in which skipped wells were observed during broth microdilution testing for polymyxin B. Possible mechanisms underlying this phenotype were investigated. The effects of various concentrations of polymyxin B on growth, the expression of resistance genes, and outer-membrane permeability were observed. Real-time PCR was performed to compare the expression, in response to selected concentrations of polymyxin B, of genes related to the PhoP-PhoQ and PmrA-PmrB two-component regulatory systems in polymyxin B-susceptible isolate PAO1, polymyxin B-resistant isolate 9BR, and two isolates (19BR and 213BR) exhibiting the skipped-well phenotype. 19BR and 213BR appeared to have similar basal levels of expression compared to that of PAO1 for phoQ, arnB, and PA4773 (from the pmrAB operon), and in contrast, 9BR had 52- and 280-fold higher expression of arnB and PA4773, respectively. The expression of arnB and PA4773 increased in response to polymyxin B in a concentration-dependent manner for 9BR but not for 19BR and 213BR. For these isolates, expression was significantly increased for arnB and PA4773, as well as phoQ, only upon exposure to 2 mug/ml polymyxin B but not at a lower concentration of 0.125 microg/ml. The sequencing of the pmrAB and phoPQ operons for all three isolates revealed a number of unique mutations compared to that for PAO1. 1-N-phenylnaphthylamine (NPN) was used to study the effect of preincubation with polymyxin B on the self-promoted uptake of polymyxin B across the outer membrane. The preincubation of cells with 2 microg/ml polymyxin B affected baseline membrane permeability in 19BR and 213BR and also resulted in a reduced rate of NPN uptake in these isolates and in PAO1 but not in 9BR. The results presented here suggest that the skipped-well isolates have the ability to adapt to specific concentrations of polymyxin B, inducing known polymyxin B resistance genes involved in generating alterations in the outer membrane.

In vitro synergy test of meropenem and sulbactam against clinical isolates of Acinetobacter baumannii.

Meropenem and imipenem are often the drugs of choice for the treatment of infections due to multidrug-resistant Acinetobacter baumannii. The present study aimed at evaluating the interaction between meropenem and sulbactam through microdilution and checkerboard methods against 48 clinical isolates of A. baumannii collected from Brazilian hospitals. All the isolates presented elevated minimum inhibitory concentration (>or=2 microg/mL) to either meropenem or sulbactam. The checkerboard method with the combination of meropenem and sulbactam demonstrated 29.2% (14/48) synergism, 47.9% (23/48) partial synergism, 10.5% (5/48) additive, 6.2% (3/48) indifference, and 6.2% (3/48) antagonism (SigmaFIC(min)=0.09 and SigmaFIC(max)=8). Thus, combinations of meropenem and sulbactam may show synergism or partial synergism for most A. baumannii isolates. Further studies may help identify treatment options for patients with infections caused by these organisms, particularly with this combination, where both drugs have time-dependent activities and might be suitable for therapy optimization studies.

Pseudomonas aeruginosa clonal dissemination in Brazilian intensive care units.

OBJECTIVE: Investigate clonal dissemination of nosocomial multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates within and between Brazilian intensive care units, which participated in the MYSTIC Program Brazil 2002. METHODS: Thirty-six P. aeruginosa isolates resistant to meropenem or imipenem plus at least two of the following drugs: ciprofloxacin, cefepime, ceftazidime or piperacillin/tazobactam were isolated during 2002 at 4 centres in São Paulo and 1 centre in Brasília. Chromosomal restriction fragments obtained with SpeI were separated by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Electrophoretic patterns were analyzed with GelCompar II v. 2.5. RESULTS: Five major clones were identified (A, B, C, D, G). Clone A was constituted by 8 isolates with indistinguishable PFGE pattern present in 2 centres. Clone B was constituted by 4 indistinguishable isolates predominant in centre 6. Clone C had 3 indistinguishable isolates, with closely related clones (C1-3). Also, Clone D had 3 indistinguishable isolates, with closely related (D1) and possibly related (D2/D3) clones. Clones C and D were present in centre 1. Clone G was constituted by 2 indistinguishable isolates and was present in centre 7. Finally, 8 isolates were unique. Isolates from Centre 4 were unique. CONCLUSIONS: Clonal dissemination was detected within (clones A, B, C, D, and G) and between centres (clone A). These findings are important when analyzing surveillance data, since susceptibility rates may be significantly affected by the dissemination of a resistant clone.

Evaluation of the use and re-use of cotton fabrics as medical and hospital wraps

The objective of this study was to verify the efficacy of cotton fabric, made of serge bonding 2 x 1, as microbial barrier, when new and after multiple laundering and steam sterilization procedures. The power of the microbial barrier was correlated with physical characteristics of the fabric, using standard test methods for evaluation of weight, traction, stretching tearing resistance and microbiological characteristics. The microbiological results evidenced that the microbial barrier was effective when the wrapping material was new or went through a maximum of new 65 reprocessing procedures. As for the alterations in the physical characteristics of the reprocessed material, the decrease in weight seemed to be the event responsible for microbial barrier breaking. The timing of detected alterations in bursting, traction and stretching in the wrap and the reprocessed fabrics did not coincide with the moment of bacterial barrier breaking. The present investigation corroborates that the use double cotton fabric, for wrapping medical and hospital items for steam sterilization, is safe. Re-use number must be controlled, not exceeding 65 times.

O objetivo deste estudo foi verificar a efetividade do tecido de ligamento sarja 2 x 1, usado na confecção de campos duplos de algodão para a embalagem de artigos médico-hospitalares como barreira microbiana eficaz, enquanto novos e após múltiplas lavagens e autoclavações e correlacionar a quebra do poder de barreira microbiana com as alterações das características físicas do tecido. Foram utilizados métodos de testes padronizados tanto para a avaliação das características físicas para a determinação da gramatura, resistência a ruptura, resistência a tração e alongamento quanto para as microbiológicas. Os resultados microbiológicos demonstraram a efetividade da barreira microbiana da embalagem em estudo enquanto novos e, na determinação do número máximo de reprocessamentos, indicaram o número limite de 65. Quanto às alterações das características físicas do tecido reprocessado, a diminuição da gramatura foi o acontecimento que sustentou a quebra da barreira microbiana. O momento da alteração constatada nas medidas físicas de estouro, tração e alongamento no urdume e na trama dos tecidos reprocessados não coincidiu com o da quebra de barreira microbiana. A presente investigação sustenta a segurança do uso do tecido de algodão como embalagem de artigos médico hospitalares na esterilização por calor úmido. O número de reusos deverá ser controlado, não excedendo o de 65 vezes.

Evaluation of the use and re-use of cotton fabrics as medical and hospital wraps

O objetivo deste estudo foi verificar a efetividade do tecido de ligamento sarja 2 x 1, usado na confecção de campos duplos de algodão para a embalagem de artigos médico-hospitalares como barreira microbiana eficaz, enquanto novos e após múltiplas lavagens e autoclavações e correlacionar a quebra do poder de barreira microbiana com as alterações das características físicas do tecido. Foram utilizados métodos de testes padronizados tanto para a avaliação das características físicas para a determinação da gramatura, resistência a ruptura, resistência a tração e alongamento quanto para as microbiológicas. Os resultados microbiológicos demonstraram a efetividade da barreira microbiana da embalagem em estudo enquanto novos e, na determinação do número máximo de reprocessamentos, indicaram o número limite de 65. Quanto às alterações das características físicas do tecido reprocessado, a diminuição da gramatura foi o acontecimento que sustentou a quebra da barreira microbiana. O momento da alteração constatada nas medidas físicas de estouro, tração e alongamento no urdume e na trama dos tecidos reprocessados não coincidiu com o da quebra de barreira microbiana. A presente investigação sustenta a segurança do uso do tecido de algodão como embalagem de artigos médico hospitalares na esterilização por calor úmido. O número de reusos deverá ser controlado, não excedendo o de 65 vezes.

In vitro susceptibility of gram-positive cocci isolated from skin and respiratory tract to azithromycin and twelve other antimicrobial agents

This study was conducted to evaluate the activity of azithromycin in comparison to 112 other antibacterial agents against recent isolates obtained consecutively from patients with respiratory tract or skin infections, from january to july, 2000. A total of 717 gram-positive cocci were analyzed in this study and the following species were studied: staphylococcus aureus (n=576), ß-hemolytic streptococci (n=115), and streptococcus pneumoniae (n=26). Susceptibility testing was carried out by the disk diffusion method and interpreted according to NCCLS breakpoints. The activity of azithromycin was compared to erythromycin, clindamycin, chloramphenicol, ciprofloxacin, ofloxacin, oxacillin, penicillin, ceftriaxone, tetracycline, trimethoprim/sulfamethoxazole, teicoplanin, and vancomycin. Of the 26 S. pneumoniae isolates recovered from the respiratory tract, 5 (19.2 percent) were imediate resistant to penicillin. All of these strains were susceptible to chloramphenicol, ofloxacin, and vancomycin, and 24 (92 percent) were also susceptible to azithromycin, clindamycin, and erythromycin. Among the 67 ß-hemolytic streptococci strains isolated from the respiratory tract, 66 (99 percent) were susceptible to azithromycin, erythromycin, clindamycin, and ofloxacin. All 48 ß-hemolytic streptococci strains isolated from skin were susceptible to azithromycin and clindamycin, 47 (98 percent) were susceptible to erythromycin, and 46 (96 percent) were susceptible to ofloxacin. Of the 576 strains of S. aureus, 253 (43.9 percent) were isolated from the respiratory tract and 323 (56.1 percent) from skin. Among S. aureus isolates from the respiratory tract and skin, 46 (18 percent) and 78 (24 percent), respectively were resistant to oxacillin. Isolates from the respiratory tract and skin showed the same percentage of resistance (36 percent) to azithromycin. These in vitro results suggest that azithromycin can be a therapeutic option for treatment of infections caused by these bacteria since the never macrolides have several distinct advantages over erytromycin including improved oral bioavailability, longer half-life allowing once or twice daily administration, higher tissue concentrations and less gastrointestinal adverse effects.

Proteases (caseinase and elastase), hemolysins, adhesion and susceptibility to antimicrobials of Stenotrophomonas maltophilia isolates obtained from clinical specimens

Forty-six S. maltophilia isolates obtained from hospital clinical specimens were studied for protease (caseinase and elastase) production, hemolytic activity, adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. Susceptibility to antimicrobial agents was also evaluated. The majority of isolates were obtained from respiratory tract secretions of patients using medical devices. All the isolates grown overnight were able to hydrolyze casein at 30ºC and 37ºC. After 72h, all the isolates hydrolyzed elastase at 30ºC and 40 isolates (87%) at 37ºC. Most of the isolates presented hemolytic activity after 96h of incubation at both temperatures. Rabbit blood showed the hightest hemolytic activity, after 96h 61% and 98% of tested isolates presented beta-hemolysis at 30ºC and 37ºC, respectively. All isolates were susceptible to trimethoprim-sulfametoxazole and were resistant to most beta-lactams tested. By the dilution method, S. maltophilia showed a high susceptibility to ticarcillin-clavulanate and a lower susceptibility to ciprofloxacin than the agar diffusion. The isolates showed adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. The proteolytic activities and adhesion to inanimate surfaces detected in S. maltophilia can be related to the pathogenesis of this bacterium and/or medical device colonization which favors the development of nosocomial infections.

Quarenta e seis amostras de S. maltophilia obtidas de amostras clínicas foram estudadas quanto à produção de protease (caseinase e elastase), atividade hemolítica, adesão a células HEp-2, ao plástico e ao vidro. A sensibilidade aos agentes antimicrobianos também foi avaliada. A maioria das amostras foi obtida de secreções do trato respiratório de pacientes em uso de "dispositivos" médicos. Todas as amostras foram capazes de hidrolisar a caseína após o crescimento a 30ºC e 37ºC por 16-18hs. Após 72 hs, todas as amostras apresentaram atividade hemolítica após 96hs de incubação em ambas as temperaturas. A maior atividade hemolítica foi verificada com o sangue de coelho; após 96hs, 61% e 98% das amostras apresentaram b-hemólise a 30ºC e 37ºC, respectivamente. Todas as amostras foram sensíveis ao sulfametoxazol-trimetoprim e resistentes à maioria dos antimicrobianos b-lactâmicos testados. Através do método de diluição em ágar, S. maltophilia mostrou uma alta sensibilidade à ticarcilina-ácido clavulânico e uma menor sensibilidade à ciprofloxacina do que pelo método de difusão em ágar. As amostras mostraram adesão às células HEp-2, ao plástico e ao vidro. A atividade proteolítica e adesão a superfícies inanimadas detectadas em S. maltophilia podem estar relacionadas à patogênese desta bactéria. A colonização de "dispositivos" médicos favorece o desenvolvimento de infecções hospitalares.

Proteases (caseinase and elastase), hemolysins, adhesion and susceptibility to antimicrobials of Stenotrophomonas maltophilia isolates obtained from clinical specimens

Forty-six S. maltophilia isolates obtained from hospital clinical specimens were studied for protease (caseinase and elastase) production, hemolytic activity, adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. Susceptibility to antimicrobial agents was also evaluated. The majority of isolates were obtained from respiratory tract secretions of patients using medical devices. All the isolates grown overnight were able to hydrolyze casein at 30ºC and 37ºC. After 72h, all the isolates hydrolyzed elastase at 30ºC and 40 isolates (87 per cent) at 37ºC. Most of the isolates presented hemolytic activity after 96h of incubation at both temperatures. Rabbit blood showed the hightest hemolytic activity, after 96h 61(per cent) and 98(per cent) of tested isolates presented b-hemolysis at 30ºC and 37ºC, respectively. All isolates were susceptible to trimethoprim-sulfametoxazole and were resistant to most b-lactams tested. By the dilution method, S. maltophilia showed a high susceptibility to ticarcillin-clavulanate and a lower susceptibility to ciprofloxacin than the agar diffusion. The isolates showed adhesion to HEp-2 cells, plastic and glass. The proteolytic activities and adhesion to inanimate surfaces detected in S. maltophilia can be related to the pathogenesis of this bacterium and/or medical device colonization which favors the development of nosocomial infections.

Atividade antimicrobiana in vitro de quinupristina/dalfopristina para cocos gram-positivos isolados de cinco centros brasileiros: resultado do estudo de vigilância L-SMART / Antimicrobial in vitro activity of quinupristin/dalfopristin against gram-positive cocci isolated from 5 Brazilian centers: results from the local smart (L-SMART) surveillance study

Há alguns anos tem-se verificado um aumento progressivo da resistência de alguns cocos gram-positivos a determinados antimicrobianos. Este aumento da resistência tem sido observado principalmente no ambiente hospitalar, e as bactérias mais comumente envolvidas são os Staphylococcus spp. e os Enterococcus spp. Devido a este fato, novos antimicrobianos são avaliados para o tratamento de infecções causadas por estas cepas multirresistentes. A associação quinupristina/dalfopristina (Q/D), também conhecida como Synercid©, é um antibacteriano da classe das estreptograminas, de uso endovenoso, composto por dois derivados semi-sintéticos da pristanamicina. A combinação das estreptograminas B e A na razão de 30:70 tem atividade antimicrobiana voltada para cocos gram-positivos, como Staphylococcus spp., Streptococcus spp., incluindo S. pneumoniae e Enterococcus faecium, sendo o E. faecalis habitualmente resistente. Neste estudo foi avaliada atividade in vitro de Q/D e outros oito antimicrobianos frente a 631 amostras de cocos gram-positivos isoladas de cinco centros brasileiros, complementadas com outras 20 cepas de E. faecium resistentes à vancomicina, provenientes dos Estados Unidos. Para a avaliação da sensibilidade aos antimicrobianos foi determinada a concentração inibitória mínima (MIC) pelo método do Etest (AB Biodisk, Solna, Suécia) e as cepas testadas foram: Staphylococcus aureus (n=267), Staphylococcus coagulase negativo (n=131), Streptoccus pneumoniae (n=130), Streptococcus beta-hemolíticos (n=28), Enteroccus faecalis (n=44) e E. faecium (n=51). A Q/D demonstrou excelente atividade contra Staphylococcus spp., independente de serem sensíveis ou resistentes à oxacilina. Para S. pneumoniae, a Q/D apresentou igualmente uma ótima atividade, inclusive para as cepas com resistência intermediária ou total para penicilina. Entre as cepas de E. faecium sensíveis à vancomicina, o MIC 90 de Q/D obtido foi de 3µg/ml, sendo que 45 por cento das cepas testadas foram sensíveis e 55 por cento apresentaram sensibilidade intermediária à associação. Desta forma, pode-se afirmar que a associação. Desta forma, pode-se afirmar que a associação Q/D representa uma nova opção para o tratamento endovenoso de infecções causadas por cocos gram-positivos, principalmente para as cepas multiresistentes, sendo também uma alternativa ao uso de glicopeptídeos

Detection of Mycobacteria in the bloodstream of patients with Acquired Immunodeficiency Syndrome in a University Hospital in Brazil

This study was done to determine the occurrence of mycobacteria in the bloodstreams of patients with fever and advanced AIDS in a Brazilian hospital. We also verified the capability of an automated method for recovering these bacteria. During a period of 19 months, 254 patients with AIDS were evaluated. Blood cultures were generally submitted in pairs and drawn separately. Blood cultures were processed by the BACTEC 460TB System (Becton Dickinson Microbiology Systems, Sparks, MD). Of the 530 vials submitted, 77 (14.5 percent) from 41 (16 percent) patients were positive. Mycobacterium avium complex was recovered from 45 (58.4 percent) of the 77 positive vials, corresponding to 22 (53.6 percent) patients with positive blood cultures. The average time to detect Mycobacterium avium complex was 15 days. Mycobacterium tuberculosis was recovered from 26 (33.8 percent) of the 77 positive vials, corresponding to 15 (36.6 percent) patients with positive blood cultures, with an average detection time of 24 days. Other species of mycobacteria were recovered from 6 (7.8 percent) of the 77 vials, corresponding to 4 (9.8 percent) patients. M. avium complex was fairly prevalent (8.7 percent) in severely ill patients with AIDS in our hospital. M. tuberculosis was also an important (6.0 percent) agent of systemic bacterial infections in these patients. The rapid diagnosis of mycobacteremia was possible with the implementation of this automated technology.

Diseminación clonal de Pseudomonas aeruginosa en unidades de cuidados intensivos brasileñas / Pseudomonas aeruginosa clonal dissemination in Brazilian intensive care units

Objetivo. Investigar la diseminación clonal de cepas nosocomiales multirresistentes de Pseudomonas aeruginosa en y entre unidades de cuidados intensivos brasileñas participantes en el MYSTIC Program Brazil 2002.Métodos. Durante 2002, se aislaron en cuatro hospitales de São Paulo y en un hospital de Brasilia 36 cepas de P. aeruginosa resistentes a meropenem o imipenem y a al menos dos de los siguientes: ciprofloxacino, cefepima, ceftazidima o piperacilina/tazobactam. Los fragmentos de restricción cromosómica obtenidos mediante Spel se separaron con electroforesis en campo pulsado (PFGE) y se analizaron mediante GelCompar II v.2.5. Resultados. Se identificaron cinco clones principales (A, B, C, D y G). El clon A constaba de ocho cepas con un patrón PFGE indistinguible, aisladas en dos centros. El clon B estaba formado por cuatro cepas indistinguibles, predominantes en el centro 6. El clon C estaba formado por tres cepas indistinguibles con clones estrechamente relacionados (C1-3). Además, el clon D estaba formado por tres cepas indistinguibles con clones estrechamente (D1) o posiblemente relacionados (D2/D3). Los clones C y D se detectaron en el centro 1. El clon G estaba formado por dos cepas indistinguibles y se observó en el centro 7. Finalmente, ocho cepas fueron específicas. Las cepas del centro 4 fueron específicas. Conclusiones. Se detectó diseminación clonal en los propios centros (clones A, B, C, D y G) y entre centros (clon A). Estos hallazgos son importantes para evaluar los datos de vigilancia epidemiológica pues la diseminación de un clon resistente puede influir de manera significativa en las tasas de sensibilidad (AU)

Objective. Investigate clonal dissemination of nosocomial multidrug-resistant Pseudomonas aeruginosa isolates within and between Brazilian intensive care units, which participated in the MYSTIC Program Brazil 2002. Methods. Thirty-six P. aeruginosa isolates resistant to meropenem or imipenem plus at least two of the following drugs: ciprofloxacin, cefepime, ceftazidime or piperacillin/tazobactam were isolated during 2002 at 4 centres in São Paulo and 1 centre in Brasília. Chromosomal restriction fragments obtained with SpeI were separated by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Electrophoretic patterns were analyzed with GelCompar II v. 2.5.Results. Five major clones were identified (A, B, C, D, G). Clone A was constituted by 8 isolates with indistinguishable PFGE pattern present in 2 centres. Clone B was constituted by 4 indistinguishable isolates predominant in centre 6. Clone C had 3 indistinguishable isolates, with closely related clones (C1-3). Also, Clone D had 3 indistinguishable isolates, with closely related (D1) and possibly related (D2/D3) clones. Clones C and D were present in centre 1. Clone G was constituted by 2 indistinguishable isolates and was present in centre 7. Finally, 8 isolates were unique. Isolates from Centre 4 were unique. Conclusions. Clonal dissemination was detected within (clones A, B, C, D, and G) and between centres (clone A). These findings are important when analyzing surveillance data, since susceptibility rates may be significantly affected by the dissemination of a resistant clone (AU)

Sensibilidade aos antimicrobianos de amostras Pseudomonas aeruginosa e acinetobacter spp: dados do programa de vigilância RESISTNET Brasil / Antimicrobial susceptibility of pseudomonas aeruginosa e acinetobacter spp: RESISTNET Brasil surveillance program

O programa RESISTNET é um estudo de vigilância de resistência bacteriana a diversos antimicrobianos. Trata-se de um projeto latino-americano iniciado em abril de 1998. No final de 1999, este programa no Brasil passou a denominar-se RESISTNET Brasil. Um dos principais objetivos deste estudo é gerar dados pontuais, atualizados e confiáveis da atual situaçäo da resistência bacteriana a diversos antimicrobianos. Neste trabalho, apresentamos os resultados obtidos durante 12 meses (janeiro a dezembro de 1999), num total de 705 amostras bacterianas, respectivamente 524 amostras de Pseudomonas aeruginosa e 181 amostras de Acinobacter spp, isoladas de diversos materiais clínicos provenientes de pacientes da comunidade (167 amostras) e hospitalizados (538 amostras) de 13 centros em seis cidades brasileiras (Säo Paulo, Porto Alegre, Curitiba, Brasília, Salvador e Fortaleza). Os isolados foram testados pelo método da difuçäo do disco, de acordo com as normas estipuladas pelo NCCLS (11), aos seguintes antimicrobianos: aztreonam, amicacina, cefepima, ceftazidima, cefoperazona, colistina, ciprofloxacina, gentamicina, imipenem, piperacilina,ticarcilina/ácido clavulânico, amplicilina/sulbactam e tobramicina, Em relaçäo a Pseudonomas aeruginosa, os antimicrobianos mais ativos foram, respectivamente: colistina, imipenem, ceftazidima, cefepima e ciprofloxacina (taxas de sensibilidade de 100 por cento, 78,6 por cento, 77 por cento, 67,6 por cento e 66 por cento). Para Acinobacter spp, os antimicrobianos mais ativos foram: colistina, imipenem, amplicilina/sulbactram e trobamicina (taxas de sensibilidade de 100 por cento, 98,9 por cento, 82,8 por cento e 55,6 por cento respectivamente). As amostras de origem hospitalar apresentaram índices maiores de resistência quando comparadas com as amostras provenientes da comunidade. Os resultados deste levantamento mostram a importância de estudos de resistência aos microbianos, pois estes bacilos Gram negativos näo fermentadores, além de serem responsáveis por diversas infecçöes humanas, mostram significativas taxas de resistência a diversos antimicrobianos

Detecçäo e prevalência de ß-lactamases de espectro ampliado (ESBL) em amostras bacterianas isoladas em hospitais brasileiros / Detection and prevalence of extended-spectrum ß-lactamases (ESBL) in bacteria isolated from Brazilian hospitals

A resitência aos antibióticos ß-lactâmicos, principalmente em membros da família Enterobacteriaceae, tem aumentado significativamente nos últimos anos, particularmente em algumas espécies, como Klebsiella pneumoniae e Escherichia coli. No ambiente hospitalar, destacam-se as infecçöes causadas por enterobactérias produtoras de ß-lactamases de espectro ampliado (ESBL). As bactérias produtoras destas enzimas apresentam um grande desafio tanto para sua detecçäo laboratorial, quanto para o tratamento adequado das infecçöes por elas causadas. Neste estudo, avalianos a produçäo de ESBL em 480 cepas bacterianas (269 E. coli e 211 K. pneumoniae), isoladas em 12 hospitais e laboratórios brasileiros, utilizando normas preconizadas pelo NCCLS, complementadas pela metodologia Etest (AB Biodisk). Obtivemos uma percentagem alarmante de cepas produtoras de ESBL, principalmente para K. pneumoniae, onde 44,1 por cento (93/211) das mesmas eram positivas, enquanto que somente 5,6 por cento (15/269) das amostras de E. coli eram produtoras de ESBL. O objetivo deste estudo foi documentar a prevalência, em hospitais brasileiros, de amostras de K. pneumoniae e E. coli produtoras de ESBL, enfatizando a importância da correta realizaçäo, leitura e interpretaçäo do antibiograma, além da realizaçäo de testes confirmatórios para sua detecçäo

Evaluation of the in vitro activity of 9 antimicrobials agains bacterial strains isolated from patients in intensive care units in Brazil: MYSTIC antimicrobial surveillance program

Multi-resistant bacterial strains are increasingly prevalent in hospital environments. Bacterial resistance is an important problem, especially for practitioners in intensive care units (ICUs) because of the selective pressure on the prevalente bacteria in these environments. The MYSTIC (Meropenen Yearly Susceptibility Test Information Collection) study has been monitoring the performance of carbapenems and otherantibiotics in different hospitals for at least 3 years. The in vitro activities of meropenem, imipenem, ceftazidime, cefepime, cefotaxime, ciprofloxacin, piperacilin/tazobactam, gentamicin, and tobramycin were compared against 452 recent clinical aerobic isolates. The isolates consisted of 19 species of Gram-negative bacteria (n=290) including K. pneumoniae (n=49), E. coli (n=48), A. baumannii (n=47), Enterobacter spp. (n=41), and P. aeruginosa (n=33) and 9 species of Gram-positive bacteria (n=162) including Staphylococcus aureus (n=63), Enterococcus faecalis (n=22), Streptococcus pneumoniae (n=22) and coagulase negative Staphylococci (n=21). All isolates were collected from ICU patients. Minimal inhhibitory concentrations (MICs) were determined by Etest methodology, using standardized and controlled procedures. Meropenem and imipenem showed the lowest MIC for all species tested. Gram-negative isolates showed the following overall resistance percentages to the other 7 drugs: tobramycin (43.1 por cento), cefotaxime (38.6 por cento), gentamicin (34.1 por cento), ceftazidime (31.7 por cento), ciprofloxacin (25.5 por cento), piperacillin/tazobactam (26.9 por cento), and cefepime (18.6 por cento). Carbapenems were the most active drugs overall and only P. aeruginosa presented some degree of resistance(18.2 por cento). We also evaluated the production of extended spectrum B-lactamase (ESBL) among all Enterobacteriaceae members (n=176) by Etest/ESBL, strip. ESBL production was detected in 51 strains (29.0 por cento). Among them, Klebsiella pneumoniae was the most prevalent at 59.2 porcento, followed by Enterobacter spp (19.5 porcento) and E. coli (14.6 por cento). The high level of resistance against several antimicrobialsand the alarming rate of ESBL production may restrict therapeutic choice to the carbapenems in this selected group of patients.

Avaliaçao de um novo sistema para detecçao de micobactérias: "mycobacterium growth indicator tube" (MIGIT) / Evaluation of a new system for the detection of mycobacteria: mycobacterium grouth indicator tube (MGIT)

Com o objetivo de avaliar uma nova metodologia para detectar o crescimento de micobactérias, analisamos 159 materiais clínicos previamente selecionados pelo método de Ziehl-Neelsen (149 positivos e 10 negativos), provenientes de diversos pacientes do Hospital das Clínicas da FMUSP. As amostras foram descontaminadas e concentradas pelo método do NALC (N-acetil-L-cisteína), examinadas pela coloraçao de Ziehl-Neelsen e 0,5ml de cada amostra tratada foi inoculada diretamente no MGIT ("Mycobacterium Growth Indicator Tube", Becton Dickinson Microbiology Systems, EUA) e o mesmo volume foi inoculado no meio e Lowenstein-Jensen (LJ). Os tubos de MIGT e de LJ foram incubados a 37 graus e observados diariamnte quanto ao crescimento e emissao de fluorescência. Para as leituras do MGIT foi utilizada uma luz UV de 365 nm e as culturas no meio de LJ foram observadas visualmete quanto ao crescimento. O MGIT contém 4,5 ml de meio Middelbrook 7H9 enriquecido e um sensor de fluorecência na base do tubo, sensíve ao oxigênio. Havendo crescimento de micobactérias, o seu metabolismo resulta em um consumo de oxigênio, ocasionando um aumento de fluorescência. Das 149 amostras com pesquisa positiva pelo método de ZIehl-Neelsen, 144 amostras foram positivas no MGIT, sendo 53 positivas na primeira semana e 78 na segunda semana de incubaçao. Das 131 amostras positivas no meio de LJ, a maioria apresentou crecimento após 15 dias de incubaçao. O MIGIT provou ser um sistema simples, rápido e sensível para detectar o crecimento de micobactérias diretamente de espécimes clínicos

Epidemilogia molecular de infecçöes hospitalares sequenciais em uma unidade de terapia intensiva causada por cepas multiresistentes de Klebsiella pneumoniae / Molecular epidemiology of sequencial hospital infections in an intensive care unit by multiresistant Klebsiella pneumoniae

Foram estudadas, durante o período de um ano, 17 amostras de Klebsiella pneumoniae isoladas de pacientes internados em uma unidade de terapia intensiva e com infecçöes hospitalares diversas, com o objetivo de se averiguar a identidade das cepas envolvidas. A investigaçäo laboratorial envolveu a caracterizaçäo bioquímica, a determinaçäo do padräo de sensibilidade aos antimicrobianos e análise do conteúdo de DNA plasmidial dos microrganismos isolados. Os resultados mostraram que a análise do conteúdo plasmidial é uma metodologia bastante útil para diferenciar amostras bacterianas multirresistentes pertencentes a uma única espécie, bem como é mais sensível que a biotipagem e o antibiograma. Constatou-se também que a metodologia da Biologia Molecular permitiu o rastreamento das cepas envolvidas pelo estudo da disseminaçäo de plasmídios "R". Concluiu-se que a implantaçäo da metodologia da genética molecular vem proporcionar sistema preciso e confiável de vigilância epidemiológica facilitando a execuçäo de medidas de ordem técnico-administrativas no controle e prevençäo das infecçöes hospitalares

Perfil plasmidial como marcador epidemiológico na investigaçäo de infecçöes hospitalares / Plasmid profiles as epidemiologic markers in the research of nosocomial infections

A análise do perfil plasmidial vem se tornando um método muito útil na tipagem de microrganismo para o estudo epidemioológico das infecçöes hospitalares. Tanto bacilos Gram-negativos como estafilococos têm sido estudados utilizando-se esta técnica. A importância dos plasmídios bacterianos nas infecçöes hospitalares deve-se principalmente à capacidade de transferência dos gens de resistência aos antimicrobianos (plasmídios R) entre os microrganismos. Na investigaçäo de surtos de infecçäo, a análise do perfil plasmidial é um método rápido e eficiente para o rastreamento da cepa epidêmica e tem apresentado vantagens sobre outros sistemas de tipagem. As análises com endonucleases de restriçäo têm possibilitado a compreensäo de como a transferência de plasmídios R várias espécies bacterianas pode contribuir para a resistência endêmica aos antibióticos em determinada instituiçäo. A relevância da análise do perfil plasmidial para o controle das infecçöes hospitalares, bem como para o rastreamento da resistência aos antimicrobianos, e a investigaçäo de surtos continuará a crescer na medida da evoluçäo do estudo da biologia molecular, ecologia e epidemiologia dos plasmídios bacterianos

Avaliaçäo de dois métodos moleculares para tipagemepidemiológica de cepas de Acinetobacter baumanniii responsáveis por surto de infecçäo hospitar / Evaluation of two molecular methods for epidemiological typing of acinetobacter baumannii strains resposible for an outbreak of hospital infection

No período de dezembro de 1993 a dezembro de 1996, foram isoladas 549 cepas de A. baumannii de pacientes internados no Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da Universidade de Säo Paulo (HC-FMUSP, Brasil). Trinta e cinco cepas, das quais 21 epidemiologicamente relacionadas, foram utilizadas para avaliaçäo de duas metodologias moleculares de tipagem, respectivamente, eletroforese em campo elétrico variável (PFGE) e reaçäo em cadeia da polimerase com iniciadores arbitrários (AP-PCR). O objetivo deste estudo foi avaliar estes dois métodos moleculares e seu poder discriminatório para a caracterizaçäo de amostras de A. baumannii. Entre as 35 cepas analisadas, a metodologia de PFGE discriminou 12 padröes principais (A-L). Por outro lado, a metodologia de AP-PCR discriminou somente nove padröes (I-IX). A concordância entre as duas metodologias foi observada em 27 (77 por cento) das 35 amostras. As duas metodologias mostram-se muito eficientes na tipagem das cepas de A. baumannii. A metodologia de AP-PCR, como é rápida e de fácil execuçäo, pode ser usada como método inicial de tipagem, enquanto a metodologia de PFGE, por seu maior poder discriminatórios, pode ser usada nas cepas que näo puderam ser discriminadas por AP-PCR, mas requer mais trabalho e apresenta maior custo

Avaliaçäo de um novo sistema para identificaçäo de bacilos gram-negativos / Evaluation of a new system for identification of gram-negative bacilli

Uma nova metodologia para a identificaçäo de bacilos Gram-negativos de importância médica, denominada Crystal Enteric/Nonfermenter Identification System (Becton & Dickinson Microbiology Systems, EUA), foi avalida comparativamente com o sistema automatizado Vitek (bioMérieux Vitek, EUA). Duzentas e quarenta e nove amostras bacterianas isoladas a partir de diversos materiais clínicos e pertencentes a diversas espécies bacterianas da família Enterobacteriaceae (189 amostras) e também ao grupo dos bacilos Gram-negativos näo-fermentadores da glicose (60 amostras), previamente identificadas por provas bioquímicas tradicionais, foram aalisadas no intuito de se avaliar a especificidade destas duas metodologias. Duzentas e vinte e cinco amostras bacterianas (90,4 por cento) foram corretamente identificadas pelo sistema Crystal e 230 amostras (92,4 por cento) foram corretamente identificadas pelo sistema Vitek. Em relaçäo aos bacilos Gram-negativos näo-fermentadores da glicose, dentre as 60 amostras bacterianas estudadas, 51 (85 por cento) foram corretamente identificadas pelo sistema Crystal e 50 (83,3 por cento) foram corretamente identifcadas pelo sistema Vitek. Do total de amostras estudadas, 14 (5,6 por cento) näo foram identificadas e cinco (2 por cento) foram incorretamente identificadas pelo sistema Crystal, enquanto que o sistema Vitek näo identificou cinco amostras (2 por cento) e identidicou incorretamente nove amostras (3,6 por cento). Os resultados obtidos demonstraram que o sistema Crystal é uma metodlogia confiável, simples de usar, näo necessitando equipamentos automatizados ou reagentes especiais, podendo ser adequadamente utilizada por laboratórios de Microbiologia para a identificaçäo de diversas espécies de bacilos Gram-negativos de importância clínica

Avaliaçäo in vitro de macrolídeos e antibióticos B-lactâmicos orais ante a microrganismos isolados no tato respiratório / In vitro evaluation of oral macrolides and B-lactam antibiotics against isolated Pathogens from the respiratory tract

No período de setembro de 1999 a julho de 2000, analisamos a atividade in vitro de seis antimicrobianos, respectivamente, azitromicina, claritromicina, amoxicilina, amoxicilina/ácido clavulânico, cefprozil e cefaclor ante a um total de 597 amostras bacterianas isoladas do trato respiratório superior e inferior de pacientes da comunidade, sem restriçäo de faixa etária, assim distribuídas: 247 cepas de H. influenzae, 147 S. aureus, 114 S. pneumoniae, 51 S. pyogenes e 38 M catarrhalis. A determinaçäo da Concentraçäo Inibitória Mínima (MIC) foi realizada pelo método do Etest e interpretadas de acordo com critérios padronizados pelo NCCLS. Entre as 247 cepas de H. influenzae, 9,7 porcento eram produtoras de B-lactamase, sendo que 100 porcento destas cepas foram sensíveis à amoxicilina/ác. clavulânico e cefaclor, 98 porcento à cefprozil, 96 porcento à azitromicina e 90 porcento à claritromicina. Das 147 cepas de S. aureus, 100 porcento eram sensíveis à oxacilina, amoxilina/ác. clavulânico, cefprozil e cefaclor, 71 porcento à claritromicina e 68 porcento à azitromicina. Entre as 114 cepas de S. peneumoniae, nenhuma cepa apresentou resistência total à penicilina, 14 cepas apresentaram resistência intermediária para penicilina, sendo que 100 porcento das cepas foram sensíveis à amoxicilina e amoxicilina/àc. clavulânico, 99 porcento à cefprozil e cefaclor, 88 porcento à azitromicina e 86 porcento à claritromicina. Entre as 14 cepas de pneumococos com resistência intermediária para penicilina, 3 cepas eram resistentes à azitromicina e 4 cepas à claritromicina. Entrre as 51 amostras de S. pyogenes, 4 cepas apresentaram resistência à azitromicina e claritromicina. Para M. catarrhalis, 100 porcento das cepas eram produtoras de B-lactamase e o MIC para azitromicina, claritromicina, amoxicilina, amoxicilina/ác. clavulânico, cefprozil e cefaclor foram 0,25; 0,25; 3; 0,25; 4 e 1,5 ug/ml, respectivamente.(au)