Evaluación de la capacidad neutralizante de extractos de plantas de uso popular en Guatemala como antídotos para el envenenamiento por la mordedura de Bothrops asper / Neutralizing activities of ethanolic extracts of six plants traditionally used in Guatemala as antidotes for the envenomation caused by the snake Bothrops asper

Se determinó la capacidad de los extractos de seis plantas de uso etnomédico (Acacia hindsii, Aristolochia maxima, Cissampelos pareira, Hamelia patens, Piper peltatum y Sansevieria hyacinthoides) para neutralizar los efectos proteolítico y fosfolipasa A2 (PLA2) del veneno de Bothrops asper, la principal especie causante de envenenamiento en el país. Estos efectos, indicadores de la capacidad miotóxica, hemorrágica e inflamatoria del veneno, se evaluaron en ensayos controlados in vitro. Las plantas fueroncolectadas, secadas y extraídas por percolación con etanol. Los resultados demuestran que ninguno de los extractos posee actividad PLA2 o proteo-lítica intrínseca a las dosis estudiadas. Se determinó que tres de los extractos neutralizaron pobremente (< 50%) los efectos estudiados: S. hyacinthoides neutralizó 13.90 ± 6.41% del efecto PLA2 y P. peltatum y C. pareira el 32.98 ± 5.51% y 24.52 ± 7.45%, respectivamente, del efecto proteolítico. Por ello, ningún extracto se evaluó en pruebas de neutralización de la letalidad en ratones. Se concluye que no es recomendable el uso aislado de estas plantas en el tratamiento del envenenamiento por mordedura de B. asper, aunque posiblemente las que demostraron alguna actividad puedan resultar potenciadas al usarse en combinación con otras plantas, como se hace en las recetas tradicionales. Dada la complejidad de los componentes del veneno y sus efectos fisiopatológicos, falta investigar la capacidad de las plantas estudiadas para neutralizar las coagulopatías, edema y miotoxicidad producidas durante el envenenamiento.

Many plants are reported to be used in Guatemalan traditional medicine as antidotes against various effects of the snakebite; however, very few attempts have been made to evaluate their neutralizing capacity in controlled experiments. Six plants (Acacia hindsii, Cissampelos pareira; Hamelia patens, Piper peltatum, Sansevieria hyacinthoides and Aristolochia maxima) were evaluated in vitro for their ability to neutralize phospholipase A2 (PLA2) and proteolytic effects of the venom of Bothrops asper, the snake responsible for approximately half of the snakebite envenomations in Central America. These effects are indicatives of the ability of B. asper venom to produce myotoxicity, hemorrhage and inflammation. Plants were collected, dried and extracted by maceration with ethanol. After pre-incubation of several amounts of each extract with a challenge dose of venom, S. hyacinthoides demonstrated a low neutralizing capacity (< DE 50) of the PLA2 effect (13.90 ± 6.41%); C. pareira (32.98 ± 5.51%) and P. peltatum (24.52 ± 7.45%) neutralized less than 50% of the proteolytic effect. The results suggest that neither of the tested plants should be used individually to treat the main effects of B. asperenvenomation. However, the three low-active extracts might be potentiated when used in mixtures composed of several plants, as prepared by traditional healers. Given the complexity of the venom components and the multiple pathologic effects produced by B. asper envenomation, more tests are required to fully investigate the ability of this plants to neutralize the coagulant, fibrin(ogen)olytic, edematizing and myotoxic effects of the venom.

A preven‡Æo prim ria e a detec‡Æo do cƒncer de est“mago / Primary prevention and detection of gastric cancer

O cƒncer de est“mago, a neoplasia maligna mais comum no mundo em 1980, vemapresentando uma diminui‡Æo da incidˆncia e mortalidade em v rios pa¡ses. Este decl¡nio temsido atribu¡do a fatores ligados ao ambiente.  improv vel, por‚m, que ele tenha resultado demudan‡as no sistema de atendimento ou nas t‚cnicas de diagn¢stico. No Brasil, o cƒncer de est“magoconstitui-se num dos maiores desafios, pois as suas incidˆncia e mortalidade sÆo ascendentes,e o nosso sistema de sa£de encontra-se desestruturado para assumir e desenvolver umprograma de detec‡Æo, de alt¡ssimo custo. Este tipo de cƒncer surge a partir de danos causados …mucosa g strica por uma dieta rica em sal, nitratos, nitritos e, talvez, carboidratos. Suas inicia‡Æoe progressÆo podem ser neutralizadas por uma adequada ingestÆo de frutas e verduras frescas.A refrigera‡Æo, difundida a partir do in¡cio deste s‚culo, levou as pessoas a consumirem alimentosmais bem conservados e frescos, o que certamente causou um grande impacto sobre o decl¡nioda incidˆncia do cƒncer g strico. No Brasil de hoje, uma pol¡tica nacional voltada para ocontrole do cƒncer de est“mago tem de ser baseada na reestrutura‡Æo do sistema de sa£de e doacesso das pessoas a ele, na difusÆo de informa‡äes relativas … mudan‡a de h bitos alimentarese na melhoria das condi‡äes s¢cio-econ“micas.(AU)

Stomach cancer, the worldïs most common malignant neoplasia in 1980, has shown adecrease in death and incidence rates in several countries. Still not totally elucidated, the declinein incidence and death rates has been attributed to environmental factors. It is unlikely that thedecline has stemmed primarily from changes in either the treatment system or diagnostic techniques.In Brazil, stomach cancer has been a major challenge, since the country faces high incidenceand death rates. In addition, the Brazilian health system lacks the means to assume, fund,and develop a stomach cancer diagnostic program. According to current knowledge, stomachcancer develops from damage to the gastric mucosa by a diet rich in salt, nitrates/nitrites, andpossibly carbohydrates. Initiation and development can be offset by a sufficient intake of fruitand fresh vegetables. Household refrigeration, widespread since the early 20th century, hashelped people consume fresher, well-preserved food, no doubt generating a major downward impacton stomach cancer rates. In present-day Brazil, a national policy aimed at stomach cancercontrol must be based on rebuilding the health system and expanding patients’ access to it, disseminatinginformation on diet changes, and improving socioeconomic conditions.(AU)

Enxofre elementar no manejo do pH de substrato orgânico alcalino / Elemental sulfur for pH management of alkaline organic substrates

Embora existam recomendações agronômicas consolidadas para a elevação do pH de substratos orgânicos, poucas são as informações disponíveis para a redução. Porém, a crescente utilização de matérias-primas alternativas às tradicionais torna necessário o emprego de métodos para diminuição do pH, já que alguns materiais com boas características físicas e biológicas são alcalinos e incompatíveis com o cultivo da maioria das espécies. Os objetivos do presente trabalho foram verificar a eficiência do enxofre elementar (S0) na diminuição do pH de um substrato orgânico alcalino e avaliar um critério para determinação da dose a ser adicionada. Para tanto, testou-se a mistura de cinco doses de S0 a um substrato comercial composto por casca de eucalipto compostada (0, 4, 8, 12 e 16g S0 dm-3 de substrato), com base no valor do seu poder de neutralização (PN). Avaliou-se o pH e a condutividade elétrica (CE) dos substratos. Observou-se que o S0 é eficiente na redução do pH de substratos orgânicos, mas acarreta aumento da CE. O PN do substrato é um critério confiável para balizar a determinação da dose de S0 a ser utilizada.(AU)

Although agronomic recommendations for raising the pH of organic substrates are consolidated, little information is available for its reduction. The increasing use of alternative raw materials, however, makes it necessary to develop methods for decreasing pH, since some materials with good physical and biological properties are alkaline and are not recommended for the majority of species. The objective of this research was to determine the efficiency of elemental sulfur (S0) in decreasing the pH of an alkaline substrate, and evaluate a method to calculate the dose to be added. It was evaluated the mixture of five doses of S0 to a commercial substrate compound of composted eucalyptus bark (0, 4, 8, 12 and 16g S0 dm-3 substrate), based on its neutralizing value (NV). The pH and electrical conductivity (EC) of the substrates were assessed. The S0 is effective in reducing the pH of organic substrates, but it causes increases in EC. The NV of the substrate is a reliable criterion for guiding the determination of the S0 dose to be added.(u)

Atividade antimicrobiana in vitro de produtos antissépticos por meio de técnica time kill / Analysis of in vitro antimicrobial activity of antiseptics products by means of time kill assay

Inúmeros agentes químicos (álcoois, iodóforos, clorexidina, etc.) são utilizados em laboratórios e indústrias.Ao contrário dos desinfetantes, não há padrões e critérios específicos para avaliar a atividade de antissépticos.Neste trabalho foi estudada a atividade antimicrobiana de antissépticos, utilizando-se o ensaio Time Kill (Hobson & Bolsen), que avalia a população de micro-organismos aeróbios em período de tempo específico,diante de agentes antimicrobianos. Foram avaliadas duas metodologias de recuperação dos microorganismos: filtração por membrana e semeadura em profundidade. A filtração por membrana foi menos sensível. A semeadura em profundidade demonstrou maior sensibilidade com maior contagem de colônias.De 25 amostras de produtos, os antissépticos à base de digluconato de clorexidina foram insatisfatórios e ineficazes para todas as cepas de micro-organismos de referência, correspondendo a 20 % das amostras analisadas. Estes produtos apresentaram-se satisfatórios frente às cepas de origem clínica. Portanto, estes produtos devem ser utilizados com cautela e estudos adicionais são necessários, pois são escassas as informações sobre sua eficácia. Os dados deste estudo poderão auxiliar as ações de vigilância sanitária e de saúde pública na elaboração de futuras legislações, pois estes produtos são encontrados no comércio, massem seguir nenhuma legislação específica.

Many chemicals (alcohol, iodophor, chlorhexidine, etc) are used in laboratories and industries. Unlikedisinfectants, no specific norms and criteria have been standardized for evaluating the antiseptics activity.This study analyzed the antimicrobial activity of antiseptics using Time Kill Test (Hobson & Bolsen).This assay assessed the evolution of a population of aerobic microorganisms in a specific period oftime when tested against antimicrobial agents. Two different recovery methodologies were evaluated:membrane filtration and pour plate technique The membrane filtration assay was less sensitive. Pour platetechnique showed high sensitivity with high colonies counts. Of 25 samples of products analyzed, onlythe chlorhexidine digluconate-based antiseptics were unsatisfactory, showing no efficacy on all referencemicro-organisms strains, and corresponded to 20 % of analyzed samples. However, they were efficaciousagainst clinical strains. Therefore, these products should be used with caution and further studies areneeded, as data on its efficacy have still been scarce. These findings might give support to the healthsurveillance and public health in establishing the future legislation, as these products have been availableon the market, but without following any specific legislation.

Production of intravenous human dengue immunoglobulin from Brazilian-blood donors

Dengue represents an important health problem in Brazil and therefore there is a great need to develop a vaccine or treatment. The neutralization of the dengue virus by a specific antibody can potentially be applied to therapy. The present paper describes, for the first time, the preparation of Immunoglobulin specific for the dengue virus (anti-DENV IgG), collected from screened Brazilian blood-donations. Production was performed using the classic Cohn-Oncley process with minor modifications. The anti-DENV IgG was biochemically and biophysically characterized and fulfilled the requirements defined by the European Pharmacopoeia. The finished product was able to neutralize different virus serotypes (DENV-1, DENV-2, and DENV-3), while a commercial IgG collected from American blood donations was found to have low anti-dengue antibody titers. Overall, this anti-DENV IgG represents an important step in the study of the therapeutic potential and safety of a specific antibody that neutralizes the dengue virus in humans.

A dengue representa um importante problema de saúde no Brasil, portanto, a identificação de vacina ou tratamento eficaz é uma necessidade urgente. A neutralização do vírus da dengue, por anticorpo específico, tem potencial aplicação terapêutica. Descrevemos aqui, pela primeira vez, a preparação de imunoglobulina específica para o vírus da dengue (IgG anti-DENV), produzida a partir do plasma selecionado de doadores brasileiros. A produção foi realizada utilizando o método clássico de Cohn-Oncley com pequenas modificações. A IgG anti-DENV foi bioquimicamente e biofisicamente caracterizada e cumpriu os requisitos definidos pela Farmacopeia Europeia. O produto final foi capaz de neutralizar diferentes sorotipos do vírus (DENV-1, DENV-2 e DENV-3), enquanto que a IgG comercial, produzida a partir do plasma de doadores americanos, apresentou baixos títulos de anticorpos anti-dengue. No geral, esta IgG anti-DENV representa uma importante etapa para o estudo do potencial terapêutico e segurança da neutralização, por anticorpos específicos, do vírus da dengue em humanos.

Atividade antimicrobiana in vitro de produtos antissépticos por meio de técnica time kill / Analysis of in vitro antimicrobial activity of antiseptics products by means of time kill assay

Inúmeros agentes químicos (álcoois, iodóforos, clorexidina, etc.) são utilizados em laboratórios e indústrias. Ao contrário dos desinfetantes, não há padrões e critérios específicos para avaliar a atividade de antissépticos. Neste trabalho foi estudada a atividade antimicrobiana de antissépticos, utilizando-se o ensaio Time Kill (Hobson & Bolsen), que avalia a população de micro-organismos aeróbios em período de tempo específico, diante de agentes antimicrobianos. Foram avaliadas duas metodologias de recuperação dos micro-organismos: filtração por membrana e semeadura em profundidade. A filtração por membrana foi menos sensível. A semeadura em profundidade demonstrou maior sensibilidade com maior contagem de colônias. De 25 amostras de produtos, os antissépticos à base de digluconato de clorexidina foram insatisfatórios e ineficazes para todas as cepas de micro-organismos de referência, correspondendo a 20 % das amostras analisadas. Estes produtos apresentaram-se satisfatórios frente às cepas de origem clínica. Portanto, estes produtos devem ser utilizados com cautela e estudos adicionais são necessários, pois são escassas as informações sobre sua eficácia. Os dados deste estudo poderão auxiliar as ações de vigilância sanitária e de saúde pública na elaboração de futuras legislações, pois estes produtos são encontrados no comércio, mas sem seguir nenhuma legislação específica.

Aspectos biomédicos del accidente ofídico / Biomedical aspects of the snakebite

En Colombia el accidente ofídico constituye un problema de salud pública que tiene su mayor incidencia en la zona rural, donde se ha observado un déficit de conocimientosen los médicos en cuanto al diagnóstico y tratamiento del ofidismo, así como en el adecuado manejo de los sueros antiofídicos. Debido a esto se decidió hacer una revisión sistemática de artículos en Pubmed y bibliotecas especializadas, con el objetivo de revisar la información disponible a nivelnacional sobre el ofidismo, que dio como resultado el presente artículo, que abarca de manera general las bases diagnósticas del envenenamiento ofídico y el tratamiento médico basado en los antídotos disponibles en el país.Como conclusión, cabe resaltar la importancia de tener en cuenta lo que no se debe hacer en casos de accidente ofídico, ya que representa la principal medida preventiva de complicaciones...

Ophidian accidents in Colombia is a public health problem that has its greatest impact on rural areas, where it has been observed that there is a deficit of knowledge in physicians regarding the diagnosis and treatmentof snakebites, as well as appropriate management of the antivenoms. A systematic review of articles in Pubmed and special libraries has been done in order to review the information available nationally onsnakebites, which generally includes diagnostic bases for ophidian poisoning and the medical treatments based on available antivenoms in thecountry. It should be noted the importance of taking into account the actions or treatments that should notbe carried out in snakebites since they are the main measures to prevent complications...

Seroprevalencia del virus de la diarrea viral en bovinos de crianza extensiva de la provincia de San Pablo, Cajamarca / Seroprevalence of bovine viral diarrhea virus in grazing cattle in Cajamarca, Peru

El objetivo del presente estudio fue determinar la seroprevalencia del virus de la Diarrea Viral Bovina (VDVB) en bovinos criollos de crianza extensiva, sin historia de vacunación, en la provincia de San Pablo, Cajamarca. Se emplearon 385 muestras del banco de sueros, colectadas en el 2004. Las muestras se estratificaron en cuatro grupos etarios (2 a 24 meses) y por sexo. La detección de anticuerpos contra el VDVB se hizo mediante la prueba de neutralización viral. El 27.1 ± 4.4% (104/385) de los bovinos presentó anticuerpos contra el VDVB indistintamente del grupo etario o sexo; sin embargo, el 71.2 ± 8.7% (47/66) de los animales entre 12 y 24 meses de edad presentaron títulos de anticuerpos entre 128 a >256. Se concluye que el VDVB está presente con una prevalencia baja en la población de bovinos de la provincia de SanPablo.

The aim of this study was to determine the seroprevalence of Bovine Viral Diarrhea virus (BVDV) in grazing cattle without history of vaccination, in the province of San Pablo, Cajamarca, Peru. It was used 385 samples from the serum bank, collected in 2004. Samples were stratified in four age groups (2 to 24 months) and by sex. The detection of antibodies against BVDV was done by the viral neutralization test. The 27.0 ± 4.4% (104/385) of samples had antibodies against BVDV, and without statistical difference due to age or sex; however, 71.2 ± 8.7% (47/66) of animals between 12 and 24 months of age showed antibody titres between 128 and >256. It was concluded that the BVDV is present with a low seroprevalence in the cattle population of San Pablo province, Cajamarca.

Padronização e validação do teste de neutralização por redução de placas de Lise em placa de 96 poços para avaliar a imunogenicidade do componente caxumba da vacina MMR / Standardization and validation neutralization test by reduction of lysis plaques on a 96 well plate to evaluate the immunogenicity of the mumps component of MMR

A caxumba é uma doença infecto-contagiosa imunoprevinível por vacinação. A imunogenicidade vacinal é avaliada através de testes sorológicos que detectam anticorpos neutralizantes, que são considerados correlatos de proteção. O Teste de Neutralização (PRNT) apresenta vantagens frente a outros testes por ser mais específico na detecção desses anticorpos neutralizantes. O presente estudo visou padronizar e validar a técnica. Durante a padronização foram definidos o M.O.I de 0,001 e o melhor dia de pico de vírus infeciosos (3 dias), para definir um protocolo de produção viral. A partir do vírus produzido foram avaliados qualitativamente o fenótipo da placa de lise e a diluição viral em diferentes condições analíticas. Os seguintes parâmetros foram definidos: diluição viral de 1:1600 para obter 30 placas de lise/poço, bicarbonato de sódio como tampão no meio de cultura, meio semi-sólido com carboximetilcelulose (CMC) 1,5%, tempo de adsorção de 3 horas e tempo de incubação final de 4 dias. Para avaliar o impacto do tempo de neutralização na potência viral e no de título de anticorpos neutralizantes, dois intervalos de tempo (1 e 2 horas) foram testados e a neutralização por 2 horas se demonstrou mais adequada ao ensaio. Posteriormente, foi definido um ponto de corte de 23, utilizando um painel sorológico contendo 126 soros pré e pós-vacinais de crianças imunizadas com a vacina tríplice viral. O ponto de corte foi determinado como a área sob a curva ROC usando os resultados de ELISA previamente avaliados em comparados com os resultados de PRNT. Dentre os resultados analisados, 35% foram concordantes na positividade dos resultados em ambos os testes. Valores preditivos positivos de 95,373 e valores negativos 97,680 determinam a real presença ou não da doença. Critérios de aceitação para o teste foram estabelecidos como: faixas de variação do end point do vírus (13 a 22) e faixas de variação dos controles (baixo, médio e alto). Também foi estabelecido como as amostras indeterminadas devem ser tratadas. Posteriormente, o PRNT foi submetido ao processo de validação, avaliando os parâmetros de linearidade, especificidade, exatidão e precisão, conforme preconizado pela RDC 27 da ANVISA. Nas análises de precisão foram obtidos coeficientes de variação a 15% para o limite inferior de quantificação do método (LIQ) e 20% para as demais concentrações. O mesmo ocorreu nas análises de exatidão. Quanto a seletividade, não foi detectada reação cruzada nas amostras quando desafiadas com o vírus de sarampo

Evaluación serológica de los virus respiratorio sincitial y parainfluenza 3 en bovinos de Cusco / Serological evaluation of respiratory syncytial (RS) and parainfluenza 3 (P13) viruses in cattle from Cusco

El objetivo del presente estudio fue determinar la seroprevalencia de los virus Respiratorio Sincitial (RS) y Parainfluenza 3 (PI3) en bovinos de tres comunidades de la provincia de Espinar, Cusco. Se colectaron 406 muestras de sangre de bovinos mayores de 6 meses de edad, de ambos sexos, para la detección de anticuerpos contra los virus RC y PI3 mediante la prueba de neutralización viral. El 85.0 y 87.4% de los animales presentaron anticuerpos contra los virus RS y PI3, respectivamente, siendo mayor la frecuencia de animales positivos en los grupos etarios de 13 a 24 y >24 meses de edad. Los títulos de anticuerpos contra ambos virus tuvieron un rango de 2 a >256, donde títulos de anticuerpos de 16 a 64 contra el virus RS y PI3 se detectaron en el 61.4 y 58.3% de los animales. El 76.4% de los animales tuvieron anticuerpos contra ambos virus. Los resultados indican que los virus RS y PI3 están ampliamente distribuidos en los bovinos de las tres comunidades.

The objective of the present study was to determine the seroprevalence of respiratory syncytial (RS) and parainfluenza 3 (PI3) viruses in cattle from three communities of the province of Espinar, Cusco, Perú. Blood samples were collected from 406 cattle older than 6 months of age of both sexes for the detection of antibodies against the RC and PI3 viruses by viral neutralization test. The 85.0 and 87.4 of animals presented antibodies against the RS and PI3 viruses, respectively, where animals with 13-24 and >24 months old were the most affected age groups. Antibody titres against both viruses had a range of 2 to >256, where antibody titres of 16-64 against RS and PI3 viruses were detected in 61.4 and 58.3% of the animals. Antibodies against both viruses were detected in 76.4% of the animals. The results revealed that the RS and PI3 viruses are widely distributed in the cattle population of the three communities.

Propriedades físicas de filmes de quitosana dopados como condutores iônicos / Physical properties of dopped chitosan films as ionic conductors

O desenvolvimento de novos materiais a partir de elementos biodegradáveis com durabilidade considerável, versatilidade apreciável e baixo custo tem grande interesse na aplicação da bio-eletrônica. O presente trabalho objetiva a caracterização das propriedades físicas e químicas das membranas de quitosana obtidas a partir da neutralização da solução policatiônica de quitosana. O trabalho foi dividido em duas etapas: solubilização e neutralização. Na primeira etapa a quitosana foi solubilizada em três concentrações diferentes de ácido acético (1%, 0.8% e 0.5%) para avaliar se a concentração de ácido exerce diferença significativa nas propriedades físico-químicas das membranas de quitosana. Na segunda etapa o policátion de quitosana foi neutralizado com duas bases fortes (NaOH e KOH) em três concentrações molares diferentes (0.5, 1 e 5 molar) pelo método de gotejamento lento da base até atingir o pH de 6.0 no policátion e obter membranas com pH perto da neutralidade. A caracterização das membranas obtidas a partir do policátion de quitosana neutralizado mostrou que as concentrações de ácido acético não mudam de forma significativa as propriedades físico-químicas das membranas. Em contraste, o processo de neutralização afetou as propriedades físico-químicas das membranas, e em particular, diferentes comportamentos foram observados dependendo da base utilizada. Membranas mais dúcteis foram obtidas após neutralização com KOH, exibindo capacidade plastificante pela base usada, enquanto que as membranas neutralizadas com NaOH apresentam um comportamento frágil. Além disso, as membranas neutralizadas com KOH exibem uma maior condução iônica em relação às propriedades elétricas das membranas, o qual pode ser interessante no desenvolvimento de biossensores ou célula combustível.(AU)

The development of new materials from biodegradable elements with considerable durability, versatility and low cost is of great interest for applications in bioelectronics. The present work aims the characterization of the chemical and physical properties of chitosan membranes after neutralization of the polycation solution of chitosan. This work was divided into two steps: solubilization and neutralization. In the first step, the chitosan was solubilized with three different concentrations of acetic acid (1%, 0.8% and 0.5%) in order to evaluate whether the acid affects the physical-chemical properties of the chitosan films. In the second step, the polycation of chitosan was neutralized with two different strong bases (NaOH and KOH) using three different molar concentrations (0.5, 1 and 5), by the slow drip method of base until reaching a pH of 6.0 for the polycation and obtaining films with pH close to neutrality. The characterization of the membranes obtained from neutralized chitosan showed that the different concentrations of acetic acid did not affect the physical-chemical properties of the films significantly. In contrast, the neutralization process did affect the physical-chemical properties, and particularly, different behaviors were observed depending on the type of base used for neutralization. More ductile films were obtained after neutralization with KOH, exhibiting plastificant capacity by the used base, whereas the films neutralized with NaOH exhibited a more fragile behavior. Beyond this, regarding the electrical properties, the films with KOH presented a higher ionic conductivity, which could be interesting for developing biosensors or fuel cells.(AU)

Padronização e validação do teste de neutralização por redução de placas de Lise em placa de 96 poços para avaliar a imunogenicidade do componente caxumba da vacina MMR / Standardization and validation neutralization test by reduction of lysis plaques on a 96 well plate to evaluate the immunogenicity of the mumps component of MMR

A caxumba é uma doença infecto-contagiosa imunoprevinível por vacinação. A imunogenicidade vacinal é avaliada através de testes sorológicos que detectam anticorpos neutralizantes, que são considerados correlatos de proteção. O Teste de Neutralização (PRNT) apresenta vantagens frente a outros testes por ser mais específico na detecção desses anticorpos neutralizantes. O presente estudo visou padronizar e validar a técnica. Durante a padronização foram definidos o M.O.I de 0,001 e o melhor dia de pico de vírus infeciosos (3 dias), para definir um protocolo de produção viral. A partir do vírus produzido foram avaliados qualitativamente o fenótipo da placa de lise e a diluição viral em diferentes condições analíticas. Os seguintes parâmetros foram definidos: diluição viral de 1:1600 para obter 30 placas de lise/poço, bicarbonato de sódio como tampão no meio de cultura, meio semi-sólido com carboximetilcelulose (CMC) 1,5%, tempo de adsorção de 3 horas e tempo de incubação final de 4 dias. Para avaliar o impacto do tempo de neutralização na potência viral e no de título de anticorpos neutralizantes, dois intervalos de tempo (1 e 2 horas) foram testados e a neutralização por 2 horas se demonstrou mais adequada ao ensaio. Posteriormente, foi definido um ponto de corte de 23, utilizando um painel sorológico contendo 126 soros pré e pós-vacinais de crianças imunizadas com a vacina tríplice viral. O ponto de corte foi determinado como a área sob a curva ROC usando os resultados de ELISA previamente avaliados em comparados com os resultados de PRNT. Dentre os resultados analisados, 35% foram concordantes na positividade dos resultados em ambos os testes. Valores preditivos positivos de 95,373 e valores negativos 97,680 determinam a real presença ou não da doença. Critérios de aceitação para o teste foram estabelecidos como: faixas de variação do end point do vírus (13 a 22) e faixas de variação dos controles (baixo, médio e alto). Também foi estabelecido como as amostras indeterminadas devem ser tratadas. Posteriormente, o PRNT foi submetido ao processo de validação, avaliando os parâmetros de linearidade, especificidade, exatidão e precisão, conforme preconizado pela RDC 27 da ANVISA. Nas análises de precisão foram obtidos coeficientes de variação a 15% para o limite inferior de quantificação do método (LIQ) e 20% para as demais concentrações. O mesmo ocorreu nas análises de exatidão. Quanto a seletividade, não foi detectada reação cruzada nas amostras quando desafiadas com o vírus de sarampo.

Propriedades físicas de filmes de quitosana dopados como condutores iônicos / Physical properties of dopped chitosan films as ionic conductors

O desenvolvimento de novos materiais a partir de elementos biodegradáveis com durabilidade considerável, versatilidade apreciável e baixo custo tem grande interesse na aplicação da bio-eletrônica. O presente trabalho objetiva a caracterização das propriedades físicas e químicas das membranas de quitosana obtidas a partir da neutralização da solução policatiônica de quitosana. O trabalho foi dividido em duas etapas: solubilização e neutralização. Na primeira etapa a quitosana foi solubilizada em três concentrações diferentes de ácido acético (1%, 0.8% e 0.5%) para avaliar se a concentração de ácido exerce diferença significativa nas propriedades físico-químicas das membranas de quitosana. Na segunda etapa o policátion de quitosana foi neutralizado com duas bases fortes (NaOH e KOH) em três concentrações molares diferentes (0.5, 1 e 5 molar) pelo método de gotejamento lento da base até atingir o pH de 6.0 no policátion e obter membranas com pH perto da neutralidade. A caracterização das membranas obtidas a partir do policátion de quitosana neutralizado mostrou que as concentrações de ácido acético não mudam de forma significativa as propriedades físico-químicas das membranas. Em contraste, o processo de neutralização afetou as propriedades físico-químicas das membranas, e em particular, diferentes comportamentos foram observados dependendo da base utilizada. Membranas mais dúcteis foram obtidas após neutralização com KOH, exibindo capacidade plastificante pela base usada, enquanto que as membranas neutralizadas com NaOH apresentam um comportamento frágil. Além disso, as membranas neutralizadas com KOH exibem uma maior condução iônica em relação às propriedades elétricas das membranas, o qual pode ser interessante no desenvolvimento de biossensores ou célula combustível.

The development of new materials from biodegradable elements with considerable durability, versatility and low cost is of great interest for applications in bioelectronics. The present work aims the characterization of the chemical and physical properties of chitosan membranes after neutralization of the polycation solution of chitosan. This work was divided into two steps: solubilization and neutralization. In the first step, the chitosan was solubilized with three different concentrations of acetic acid (1%, 0.8% and 0.5%) in order to evaluate whether the acid affects the physical-chemical properties of the chitosan films. In the second step, the polycation of chitosan was neutralized with two different strong bases (NaOH and KOH) using three different molar concentrations (0.5, 1 and 5), by the slow drip method of base until reaching a pH of 6.0 for the polycation and obtaining films with pH close to neutrality. The characterization of the membranes obtained from neutralized chitosan showed that the different concentrations of acetic acid did not affect the physical-chemical properties of the films significantly. In contrast, the neutralization process did affect the physical-chemical properties, and particularly, different behaviors were observed depending on the type of base used for neutralization. More ductile films were obtained after neutralization with KOH, exhibiting plastificant capacity by the used base, whereas the films neutralized with NaOH exhibited a more fragile behavior. Beyond this, regarding the electrical properties, the films with KOH presented a higher ionic conductivity, which could be interesting for developing biosensors or fuel cells.

Efecto de la neutralización y adición de edulcorante en las propiedades fisicoquímicas, microbiológicas y sensoriales del arequipe de leche de búfala / Neutralization and addition of sweetening effect in physicochemical, microbiological and sensory properties of buffalo milk arequipe

La leche de búfala, debido a su composición, especialmente en carbohidratos, presenta una aptitud favorable para la elaboración de arequipe. Su rendimiento en productos lácteos es 40% superior al de la leche bovina. Esta investigación evalúa la variación de dos niveles de neutralización (0.09 y 0.10 % ácido láctico) y tres porcentajes de edulcorantes (25% sacarosa; 22% sacarosa y 30% azúcar invertido; 20% sacarosa y 30% azúcar invertido), en la elaboración del arequipe de leche de búfala. Al tratamiento seleccionado por los jueces mediante la prueba de medición de grado de satisfacción se le determina: contenidos de sólidos totales, humedad, cenizas, proteína, grasa, viscosidad, color, mesófilos, coliformes totales, coliformes fecales,mohos y levaduras y Staphylococcus coagulasa positivo. Se almacena a temperatura ambiente y se le practica análisis microbiológico (mohos y levaduras), organoléptico (arenosidad) y fisicoquímico (sólidos totales y humedad) en intervalos de diez días durante sesenta días. El tratamiento seleccionado, con un nivel de confianza del 95%, es el de 0.10% acido láctico, 20% sacarosa y 30% azúcar invertido. El arequipe presenta contenidos de sólidos totales, humedad, cenizas, proteína y grasa de 77.90 ± 0.04%; 22.10 ± 0.04%; 1.76 ± 0.09%; 9.85 ± 0.37% y 7.95 ± 0.41% respectivamente; un comportamiento seudoplástico y tixotrópico. El arequipe elaborado, de acuerdo con los análisis microbiológicos, cumple la Norma Técnica ColombianaNTC 3757 de 1996 y conserva sus características microbiológicas, organolépticas y fisicoquímicas hasta eldía cincuenta.

El virus de la diarrea viral en bovinos criollos de la provincia de Melgar, Puno / Bovine viral diarrea virus in criollo cattle of the province of Melgar, Puno

El estudio tuvo por objetivo determinar la seroprevalencia del virus de la diarrea viral (VDVB) en bovinos criollos de la provincia de Melgar, Puno. Se obtuvieron muestras de sangre de bovinos (n= 347) machos y hembras mayores a seis meses de edad para la detección de anticuerpos neutralizantes mediante la prueba de neutralización viral. El 48.7 ± 0.1% (166/347) de los animales presentó anticuerpos contra el VDVB. No se detectaron animales portadores del virus. Anticuerpos fueron detectados en animales de todos los distritos con prevalencias entre 15.7 a 94.1%. Los títulos de anticuerpos estuvieron en un rango de 2 a >256, indicando que el VDVB está ampliamente difundido en bovinos de la zona. Las altas prevalencias de anticuerpos evidencian intensa actividad viral; así mismo, los títulos altos indican infecciones recientes y sugieren la existencia de factores que promueven la difusión viral como las ferias ganaderas y la falta de control en el tránsito interno de animales en la zona.

The prevalence of bovine viral diarrhea virus (BVDV) infection was evaluated in 347 criollo cattle of both sexes and older than 6 months of age in small herds of the province of Melgar, Puno. Serum samples were tested for antibodies against BVDV using the viral neutralization test. The 48.7 ± 0.1% (166/347) of the samples had antibodies against BVDV. Animals carrying on the virus virus were not detected. Antibodies were detected in all sampled herds and the prevalence varied from 15.7 to 94.1%. Antibodies titers varied from 2 to >256, showing that BVDV infection is widespread in the local cattle population, suggesting the presence of factors promoting the viral distribution such livestock fairs and lack of control for animal movements within the region.

Comparison of agglutinating and neutralizing antibodies to serovar hardjo in sows immunized with two commercial whole culture polivalent anti-leptospira bacterins / Comparação de anticorpos aglutinantes e neutralizantes do sorovar hardjo em fêmeas suínas imunizadas com duas bacterinas anti- leptospira comerciais

It was performed the comparison of the intensity and duration of agglutinating and neutralizing antibodies to serovar Hardjo in swines vaccinated with two commercial anti-leptospira bacterins. Sows no reactive to 24 Leptospira sp serovars in the microscopic agglutination test (MAT) were divided in three groups: Group A (n=08): received two vaccine A doses with 30 days interval, Group B (n=08) two vaccine B doses with 30 days interval and Group C (n=08): control no vaccinated against leptospirosis.Blood samples were collected each 30 days during six months following the first vaccination. The sera were tested by MAT and growth inhibition test (GIT) to serovar Hardjo in order to evaluate respectively agglutinating and neutralizing antibodies. It was found that neutralizing antibodies persisted for a longer time than the agglutinating ones and that the absence of agglutinating antibodies does not means in the absence of the neutralizing. The peaks of agglutinating antibodies was obtained at least 30 days earlier than that produced by neutralizing. The duration of both kinds of antibodies measured differed between the two bacterines tested. The period for inducing neutralizing antibodies against serovar Hardjo indicated that gilts must be immunized with two doses of whole culture anti-leptospira bacterines applied 30 days each other at least 90 days before the first mating. For the maintenance of hight levels of neutralizing antibodies the revaccinations must be performed every six months after the first vaccination.

Foi efetuada a comparação entre a intensidade e duração dos níveis de anticorpos neutralizantes e aglutinantes para o sorovar Hardjo em fêmeas suínas vacinadas com duas bacterinas comerciais anti-leptospirose. Animais caracterizados como não reatores para 24 sorovares de Leptospira sp pelo teste de soroaglutinação microscópica (SAM) e que nunca haviam sido vacinados contra a leptospirose foram divididos em três grupos: grupo A (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias, de bacterina comercial anti-leptospirose A; grupo B (n=08): recebeu duas doses, em intervalo de 30 dias de bacterina comercial anti-leptospirose B e grupo C (n=08): controle, não vacinado contra a leptospirose. As colheitas de sangue foram efetuadas a cada 30 dias durante seis meses a partir da primeira vacinação. Os soros foram submetidos aos testes da SAM e de inibição do crescimento de leptospiras in vitro (ICL) para avaliar, respectivamente, os níveis de anticorpos aglutinantes e neutralizantes. Foi constatado que os anticorpos neutralizantes persistem por mais tempo que os aglutinantes e que a ausência de anticorpos neutralizantes não corresponde a ausência dos aglutinantes. Os picos de anticorpos aglutinantes foram obtidos pelo menos 30 dias antes dos produzidos pelos neutralizantes. Houve diferença nos níveis de anticorpos neutralizantes induzidos pelas duas bacterinas testadas. O período de indução de anticorpos neutralizantes contra o sorovar Hardjo indica que marrãs devem ser imunizadas com duas doses de bacterina anti-leptospirose aplicadas com 30 dias de intervalo e pelo menos 90 dias antes da primeira cobertura. A manutenção de níveis elevados de anticorpos neutralizantes exige revacinações semestrais.

Atividade antimicrobiana in vitro de produtos antissépticos - através da técnica time kill / In vitro antimicrobial activity of antiseptics products through time kill

A antissepsia consiste na utilização de produtos (microbicidas ou microbiostáticos) sobre a pele ou mucosa com o objetivo de reduzir os micro-organismos existentes nas camadas superficiais (microbiota transitória) e profundas (microbiota residente) da pele e de mucosas, pela aplicação de agentes biocidas, classificados como antissépticos. Um número considerável de agentes químicos é utilizado tanto em laboratórios quanto nos estabelecimentos de saúde e nas indústrias, incluindo álcoois, iodóforos, fenóis sintéticos e compostos quaternários de amônio, clorexidina entre outros. Entretanto, não existe um antisséptico que atenda a todas as situações e necessidades encontradas, sendo preciso conhecer as características de cada um para que se tenham subsídios suficientes que permitam a escolha correta do produto, evitando custos excessivos e uso inadequado. Ao contrário dos desinfetantes que apresentam padrões e critérios específicos e bem definidos, nos antissépticos não são realizados testes, para as diversas preparações dermatológicas antimicrobianas existentes. Por isso, este trabalho se propôs estudar a atividade antimicrobiana desses produtos utilizando ensaio Time Kill descrito por Hobson e Bolsen, 1991 no qual é avaliada a destruição de uma população de micro-organismos aeróbios dentro de um período de tempo especificado, quando testado contra os agentes antimicrobianos. Foram analisadas 25 preparações à base de: PVP-I sol. degermante, digluconato de clorhexidrina, nordexidina, cloreto de benzalcônico, triclosano e álcool etílico. Foram utilizadas cepas microbianas de referência e cepas clínicas. Todas as amostras foram processadas utilizando produtos antissépticos na concentração diluída e não diluída. (AU)

Atividade antimicrobiana in vitro de produtos antissépticos - através da técnica time kill / In vitro antimicrobial activity of antiseptics products through time kill

A antissepsia consiste na utilização de produtos (microbicidas ou microbiostáticos) sobre a pele ou mucosa com o objetivo de reduzir os micro-organismos existentes nas camadas superficiais (microbiota transitória) e profundas (microbiota residente) da pele e de mucosas, pela aplicação de agentes biocidas, classificados como antissépticos. Um número considerável de agentes químicos é utilizado tanto em laboratórios quanto nos estabelecimentos de saúde e nas indústrias, incluindo álcoois, iodóforos, fenóis sintéticos e compostos quaternários de amônio, clorexidina entre outros. Entretanto, não existe um antisséptico que atenda a todas as situações e necessidades encontradas, sendo preciso conhecer as características de cada um para que se tenham subsídios suficientes que permitam a escolha correta do produto, evitando custos excessivos e uso inadequado. Ao contrário dos desinfetantes que apresentam padrões e critérios específicos e bem definidos, nos antissépticos não são realizados testes, para as diversas preparações dermatológicas antimicrobianas existentes. Por isso, este trabalho se propôs estudar a atividade antimicrobiana desses produtos utilizando ensaio Time Kill descrito por Hobson e Bolsen, 1991 no qual é avaliada a destruição de uma população de micro-organismos aeróbios dentro de um período de tempo especificado, quando testado contra os agentes antimicrobianos. Foram analisadas 25 preparações à base de: PVP-I sol. degermante, digluconato de clorhexidrina, nordexidina, cloreto de benzalcônico, triclosano e álcool etílico. Foram utilizadas cepas microbianas de referência e cepas clínicas. Todas as amostras foram processadas utilizando produtos antissépticos na concentração diluída e não diluída.

Estudo sobre a circulação de arbovírus na população humana nas áreas de influência da Floresta Nacional de Caxiuanã, Melgaço, estado do Pará, Brasil

As arboviroses são importantes problemas de saúde pública em especial para as comunidades amazônicas devido ao intimo contato com ambiente silvestre. Nesse contexto, destacam-se as comunidades residentes nas áreas de influência da Floresta Nacional (FLONA) de Caxiuanã, onde foi realizada a pesquisa de arbovírus em 632 indivíduos residentes em 16 comunidades, onde 100 % residiam na zona rural entre novembro de 2014 e março de 2016. Dos 632, 319 (50,4 %) eram do sexo feminino, 359 (56,8%) tinham até 19 anos e 12 (1,8%) indivíduos relataram pelo menos um sinal/sintoma sugestivo de arboviroses. Foram coletadas 1120 amostras biológicas, dessas, 12 (1,07%) eram sangue e 1108 (98,93%) soros. Das amostras de soro, 156 (14,1%) eram amostras únicas e 952 (85,9%) pareadas. As amostras de sangue foram utilizadas para tentativa de isolamento viral, onde não foi observado o isolamento de arbovírus. As amostras de soro foram submetidas a triagem sorológica pelo teste de inibição da hemaglutinação (IH) contra um painel de dezenove antígenos virais dos gêneros Alphavirus, Flavivirus e Orthobunyavirus. No IH em 360 (56,96%) dos indivíduos investigados foram detectados presença de anticorpos para os arbovírus testados, sendo 302 (83,89%) para o gênero Flavivirus, 147 (40,83%) para Alphavirus, 88 (24,44%) para Orthobunyavirus. Soroconversão foi observada em 15 (1,57%) amostras, sendo 7 (46,6%) para Alphavirus e 8 (53,4 %) para Flavivirus. Para avaliar as possíveis relações estatísticas, entre características como idade, sexo e histórico de deslocamento e os resultados de IH, foi utilizado o teste do Qui-quadrado (X2), onde foi observada significância estatística entre a detecção de anticorpos para o gênero Alphavirus e o sexo masculino (x2=15,364; p <0,001), foi observada a significância estatística para o histórico de deslocamento e a detecção de anticorpos para os gêneros Flavivirus e Orthobunyavirus (x2=5,089; p=0,024), (x2= 10,804; p= 0,001) respectivamente. O MAC-ELISA para Flavivirus foi realizado para todos os indivíduos com anticorpos para esse gênero no IH, e em 25 (8,3%) houve detecção de anticorpos para pelo menos um dos antígenos testados, sendo 15 (60%) apresentaram reações cruzadas para mais de um antígeno testado, 6 (24%) tiveram detecção de IgM para o ROCV e 4 (16%) para ILHV. Nos indivíduos com presença de anticorpos para gênero Alphavirus no IH, 89 (60,5%) apresentaram anticorpos para o MUCV, que foram submetidos a teste de neutralização em camundongos recém-nascidos para MUCV. Em 51 (57,3%) investigados observou- se a presença de anticorpos neutralizantes para esse vírus. Para verificar a presença de autocorrelação espacial entre a presença de anticorpos neutralizantes para MUCV e a comunidade, utilizou-se o diagrama de dispersão de Moran, cujo valor do índice de 0,478463, indica autocorrelação espacial fortemente positiva com as comunidades: Santo Antônio, Base ICMBio e Família Prof. Nazirene Silva. Os resultados aqui apresentados evidenciam a circulação de diversos arbovírus de interesse em saúde pública nessa população.

Avaliação da ação neutralizante e da reatividade de anticorpos IgA e IgG anti-rotavírus SA-11 em soro de adultos saudáveis / Evaluation of neutralizing ability and reactivity of anti-rotavirus SA-11 IgA and IgG antibodies in serum samples from healthy adults

O rotavírus é a principal causa de diarréia em crianças em todo o mundo. Infecta também adultos, mas não há dados completos sobre a sua incidência nesse grupo nem sobre o papel de anticorpos preexistentes na proteção contra o vírus. O objetivo do trabalho foi avaliar a presença de anticorpos IgA e IgG anti-rotavírus SA-11, por ELISA, em amostras de soro de adultos saudáveis e sua ação neutralizante frente ao vírus, em ensaios de neutralização. Por Immunoblotting foi avaliado o reconhecimento de proteínas virais pelos anticorpos séricos. Observou-se que os títulos das amostras foram muito variáveis, sendo os de IgG superiores aos de IgA. Todas as amostras mostraram-se capazes de neutralizar o vírus em diferentes níveis, porém não foi possível estabelecer uma correlação com os títulos de anticorpos. Foi observado que anticorpos da classe IgG reconhecem mais proteínas virais que os da classe IgA. Este trabalho pode ser considerado mais um passo na elucidação do papel dos anticorpos séricos IgA e IgG anti-rotavírus na infecção em adultos.

Rotavirus has been considered the leading cause of diarrhea in children worldwide. The virus also infects adults but there is no conclusive data neither on the incidence of infection on this group nor on the role of pre-existing antibodies. The aim of the work was to evaluate the presence of anti-rotavirus SA-11 IgA and IgG by ELISA in serum samples of healthy adults and the serum neutralizing ability against the virus by neutralization assays. Immunoblotting was used to evaluate viral proteins recognition by serum antibodies. The antibody titers were extremely variable where IgG titers are greater than IgA ones. All samples were able to neutralize the virus in different levels but it was not possible to establish a correlation between antibody titers and neutralization ones. Immunoblotting assays revealed that IgG antibodies recognize more viral proteins than IgA did. This work can be considered a valuable step for elucidating the role of serum anti-rotavirus IgG and IgA antibodies in adults infection.