Extract of Amburana cearensis maintains the survival of ovine preantral follicles during long-term ovarian tissue transport and promotes primordial follicle activation after in vitro culture / Extrato de Amburana cearensis mantém a sobrevivência de folículos pré-antrais ovinos durante longo período de transporte de tecido ovariano e promove a ativação de folículos primordiais após cultivo in vitro

ABSTRACT

This study evaluated the effect of Amburana cearensis extract as a preservation or culture medium for ovine ovarian tissue. Ovarian fragments were fixed in 4% buffered formaldehyde for 18 h (fresh control), stored in Minimal Essential Medium (MEM) or in A. cearensis extract (0.1; 0.2 or 0.4 mg/mL) at a temperature of 4ºC for 6, 12 or 24 h (preservation - experiment 1) or cultured for 7 days in a-MEM+ or in A. cearensis extract without (0.1; 0.2 or 0.4 mg/mL) or with supplements (0.1+ ; 0.2+ or 0.4+ mg/ mL; experiment 2). The percentages of morphologically normal follicles and follicular activation were submitted to analysis of variance (ANOVA) and Tukey's test. The values of TUNEL-positive cells were submitted to Chi-square test (P < 0.05). The storage of fragments for 6 h in MEM showed higher percentages of normal follicles (62%) and a lower rate of TUNEL positive cells (36.17%) compared to other treatments (normal follicles 46%; 43% and 52%; TUNEL positive cells 58.57%; 55.30% and 55.63% for Amb 0.1; Amb 0.2 and Amb 0.4 mg/mL, respectively). However, after 12 or 24 h, MEM (12 h 48%; 24 h 45%) and Amb 0.2 mg/mL (12 h 37%; 24 h 39%) showed similar percentages of normal follicles and TUNEL positive cells (MEM - 12 h 43.26%; 24 h 58%; Amb 0.2 mg/mL - 12 h 50%; 24 h 61%). After culture, a-MEM+ recorded a higher percentage of normal follicles (58.25%) than A. cearensis treatments (32.8%; 25.4% and 34.2% for Amb 0.1; Amb 0.2 and Amb 0.4 mg/mL, and 22.25%; 20.0% and 36.6% for Amb 0.1+; Amb 0.2+ and Amb 0.4+ mg/mL, respectively) (P < 0.05). Follicular activation increased in all treatments (52.5%; 36.73%; 54.05%; 47.5% and 58.19% for a-MEM+; Amb 0.1; Amb 0.1+; Amb 0.2+ and Amb 0.4+ mg/mL, respectively) compared to the fresh control (11.65%), except for Amb 0.2 mg/mL (23.69%) and Amb 0.4 mg/mL (28.85%) (P > 0.05). Moreover, after in vitro culture, A. cearensis at a concentration of 0.1 mg/mL maintained the percentage of TUNEL positive cells (30.0%) in a...(AU)

RESUMO

Este estudo avaliou o efeito do extrato de Amburana cearensis como meio de preservação ou de cultivo de tecido ovariano ovino. Fragmentos ovarianos foram fixados em formaldeído tamponado a 4% por 18 h (controle fresco), armazenados em Meio Essencial Mínimo (MEM) ou extrato de A. cearensis (0,1; 0,2 ou 0,4 mg/ mL) a temperatura de 4 ºC durante 6, 12 ou 24 h (conservação - experimento 1) ou cultivados durante 7 dias em α-MEM+ ou em extrato de A. cearensis sem (0,1; 0,2 ou 0,4 mg/mL) ou com suplementos (0,1+ ; 0,2+ ou 0,4+ mg/mL - experimento 2). As porcentagens de folículos normais e de ativação folicular foram submetidas às análises de variância (ANOVA) e teste de Tukey. Os valores das células TUNEL-positivas foram submetidos ao teste do qui-quadrado (P<0.05). A conservação de fragmentos por 6 h em MEM apresentou maiores percentagens de folículos normais (62%) e menor taxa de células TUNEL positivas (36,17%) comparado aos outros tratamentos (folículos normais - 46%; 43%; 52%; células TUNEL positivas - 58,57%; 55,30%; 55,63% em Amb 0,1 ;0,2 ou Amb 0,4 mg/mL, respectively). Entretanto, após 12 ou 24 h, MEM (12 h - 48%; 24 h - 45%) e Amb 0,2 (12 h - 37%; 24 h - 39%) apresentaram percentagens semelhantes de folículos normais e células TUNEL positivas (MEM 12 h - 43,26%; 24 h -58%; Amb 0,2 12 h - 50; 24 h - 61%). Após o cultivo, α-MEM+ (58,25%) apresentou maior percentual de folículos normais do que os tratamentos com A. cearensis (32,8%; 25,4%; 34,2% em Amb 0,1; Amb 0,2; Amb 0,4 mg/mL e 22,25%; 20,0%; 36,6% em Amb 0,1+; Amb 0,2+ e Amb 0,4+ mg/mL, respectivamente) (P < 0.05). A ativação folicular aumentou significativamente em todos os tratamentos (52,5%; 36,73%; 54.05%; 47,5% e 58,19% em α-MEM+; Amb 0,1; Amb 0,1+; Amb 0,2+ e Amb 0,4+ mg/mL, respectivamente) comparado ao controle fresco (11,65%), exceto em Amb 0,2 mg/mL (23,69%) e Amb 0,4 mg/mL (28,85%) (P > 0,05). Após o cultivo in vitro, a concentração de 0,1 mg/mL manteve a percentagem de...(AU)