[Effect of polyphenols from the Mediterranean diet on proliferation and mediators of in vitro invasiveness of the MB-49 murine bladder cancer cell line]. / Efecto de polifenoles de la dieta mediterránea sobre la proliferación y mediadores de la invasividad "in vitro" de la linea de cancer vesical murino MB-49.

OBJECTIVE: To evaluate the effect of different polyphenols on the proliferation and invasive capacity of MB-49 murine bladder tumor cell lines and to identify the mediators involved in this process. MATERIALS AND METHODS: MB-49 murine bladder cancer cells were cultured in media supplemented with resveratrol, rutin, morin, quercetin, gallic acid and tannic acid (all of them are polyphenols usually present in Mediterranean diet) for periods of 24, 48 and 72 hours to quantify the expression of urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor (uPAR) in the culture medium, as well as of metalloproteinase-9 (MMP-9) and cell proliferation. RESULTS: All the polyphenols studied significantly inhibited proliferation of MB-49 cells, varying according to the time periods and doses used. The cells in the media supplemented with the nutrients to study did not show inhibition of mRNA expression of urokinase-type plasminogen activator (uPA) or its high affinity receptor (uPAR). It was even slightly increased in certain cases. However, mRNA expression of metalloproteinase-9 was strongly inhibited. CONCLUSIONS: The polyphenols present in our usual diet exert an effect on the proliferation and mediators of bladder tumor invasiveness in MB-49 cells.

[Diet and prostate cancer]. / Dieta y cáncer de próstata.

Prostate cancer is the first neoplasia in the United States accounting the second in cancer deaths. With all the treatments strategies in debate because of their side effects, is very important try to elucidate prevention mechanisms that may be implicate in the development of this disease, between these, nutrients have been of mayor importance. In the present review we tried to study the most important nutritional factors implicated in the development and prevention of prostate carcinoma. We focus our attention over the polyphenols of the red wine, which influence over cellular proliferation and apoptosis in LNCaP cells have been studied in our Department.

[Conditions for the development of a program of reverse transcriptase-polymerase chain reaction for molecular staging of prostatic cancer]. / Condiciones de desarrollo de un programa de reacción en cadena de la polimerasa-transcriptasa reversa para el estadiaje molecular del cáncer de próstata.

OBJECTIVE: To determine accurately the conditions for the development of tests using RT-PCR for PSA in patients with prostate cancer. METHOD: Gen amplification of PSA in cultures of the human prostate tumoral cell line LNCaP with RT-PCR under hot-start conditions, and verification through enzyme restriction digestion of the PCR product. Also, calculation of the PCR test limit of detection through serial dilutions of LNCaP cells in peripheral blood mononucleate cells. RESULTS: A highly specific, easy to perform, reproducible RT-PCR protocol has been developed. The lowest limit of detection reached was 1 PSA synthesising cell per 10(6) peripheral blood mononucleate cells. CONCLUSIONS: RT-PCR is a highly sensitive technique that allows detection of small numbers of PSA producing cells in peripheral blood. This experience allows to establish with precision the conditions for the development of RT-PCR tests for PSA.

El suero de pacientes con enfermedad arterial periférica activa el sistema inmunitario innato a través de los receptores Toll-Like 4 de las células endoteliales / The serum of patients with peripheral arterial disease activates the inate immune system through Toll-Like 4 receptors of the endothelial cells

Introducción: La activación de los receptores de la inmunidad innata induce un viraje fenotípico proinflamatorio de la célula endotelial provocando la síntesis de moléculas de adhesión y la liberación de citocinas por el endotelio. Objetivos: Nuestro objetivo es determinar la activación del sistema inmunitario innato a través de los receptores Toll-Like 4 (TLR4) tras la exposición de células endoteliales humanas previamente sanas a suero humano de pacientes con enfermedad arterial periférica. Pacientes y métodos: Estudio experimental traslacional. Se obtuvo suero de 30 pacientes y de 15 sujetos sanos pareados por edad y sexo. Se determinaron los niveles de proteína C reactiva (hsPCR). Las muestras de suero se incubaron en cultivo celular de endotelio de aorta humana. Se analizó la expresión génica de los receptores TLR4 en el cultivo tras su estimulación con suero. Resultados: Los niveles de hsPCR fueron mayores en pacientes que en sujetos sanos (0,92 ± 0,4 vs. 0,46 ± 0,04 log10-mg/dl, p < 0,0001) y en pacientes con isquemia crítica frente a pacientes claudicantes (1,27 ± 0,4 vs. 0,74 ± 0,2 log10-mg/dl, p = 0,01). La expresión de TLR4 fue mayor tras la exposición del cultivo al suero de pacientes que tras la exposición al suero de sujetos sanos (X10-log10-QR: 1,59 ± 0,4 vs. 1,09 ± 0,3, p < 0,0001) sin diferencias en función de la situación clínica (X10-log10-QR: 1,81 ± 0,5 [isquemia crítica] vs. 1,50 ± 0,4 [claudicación intermitente], p = 0,16). Conclusiones: El suero de pacientes con enfermedad arterial periférica induce una transformación genotípica proaterosclerótica de la célula endotelial a través de los receptores de membrana TLR4 de la inmunidad innata (AU)

Introduction: The activation of the innate immunity induces a pro-inflammatory phenotypic shift of endothelial cells triggering the synthesis of adhesion molecules and the release of cytokine factors by the endothelium. Objectives: The aim of the study is to determine the activation of the innate immune system through the «Toll-Like 4» receptor (TLR4) after the exposure of previously healthy human endothelial cells to serum of peripheral arterial disease patients. Patients and methods: Experimental translational study. Serum was obtained from 30 patients and 15 healthy subjects age and sex matched. The serum levels of C-reactive protein (hsCRP) were measured. All samples were incubated in cell culture of human aortic endothelial cells. The genomic expression of TLR4 receptor by cell culture after serum stimulation was analysed. Results: Levels of hsCRP were higher in patients than in healthy subjects (0.92 ± 0.4 vs. 0.46 ± 0.04 log10-mg/dl P < 0.0001), and in critical limb ischemia patients than in claudication patients (1.27 ± 0.4 vs. 0.74 ± 0.2 log10-mg/dl, P = 0.01). The expression of TLR4 was higher after the exposure of cell culture to patient's serum than after the exposure to healthy subjects serum (X10-log10-RQ: 1.59 ± 0,4 vs. 1.09 ± 0.3, P < .0001). There were no differences of TLR4 expression according to clinical severity (X10-log10-RQ: 1.81 ± 0,5 [critical limb ischemia] vs. 1.50 ± 0,4 [intermittent claudication], P = 0.16). Conclusions: The serum of peripheral arterial disease patients induces a genotypic pro-atherosclerotic shift of endothelial cells through TLR4 membrane receptors of the innate immunity (AU)

Efecto de polifenoles de la dieta mediterránea sobre la proliferación y mediadores de la invasividad “in vitro” de la línea de cáncer vesical murino MB-49 / Effect of polyphenols in the mediterranean diet on proliferation and mediators of in vitro invasiveness of the MB-49 murine bladder cancer cell line

Objetivo: Evaluar el efecto de diferentes polifenoles sobre la proliferación y algunos mediadores implicados en el proceso de invasividad en la línea celular MB-49.Material y Métodos: Cultivos de células de cáncer vesical murino MB-49 se suplementaron con resveratrol, rutina, morina, quercetina y ácidos tánico y gálico, a diferentes concentraciones y se determinó la proliferación celular a las 24, 48 y 72 horas. Por otra parte, se cuantificó la expresión del activador del plasminógeno tipo Urokinasa (u-PA) y de su receptor (u-PAR), así como de la metaloproteinasas 9 (MMP-9) mediante PCR en tiempo real tras 24h de tratamiento con cada nutriente. Además, se valoró en el medio de cultivo, también tras 24 horas de incubación con los diferentes nutrientes, los niveles de MMP-9. Resultados: Todos los polifenoles estudiados consiguieron inhibir la proliferación de las células MB-49 de manera significativa, variando en los tiempos y dosis empleados. La expresión de del activador del plasminógenotipo Urokinasa (u-PA) y de su receptor de alta afinidad (u-PAR) no se vieron modificados tras el tratamiento, siendo en algún caso ligeramente aumentada su expresión. Sin embargo, si se inhibió de manera significativa tanto la expresión como los niveles en el medio de cultivo de la MMP-9.Conclusiones: Los polifenoles de nuestra dieta habitual ejercen un efecto inhibidor sobre la proliferación y los mediadores de la invasividad tumoral vesical en células MB-49 (AU)

Objective: To evaluate the effect of different polyphenols on the proliferation and invasive capacity of MB-49 murine bladder tumor cell lines and to identify the mediators involved in this process. Materials and Methods: MB-49 murine bladder cancer cells were cultured in media supplemented with resveratrol, rutin, morin, quercetin, gallic acid and tannic acid (all of them are polyphenols usually present in Mediterranean diet) for periods of 24, 48 and 72 hours to quantify the expression of urokinase-type plasminogen activator (uPA) and its receptor (uPAR) in the culture medium, as well as of metalloproteinase-9 (MMP-9) and cell proliferation. Results: All the polyphenols studied significantly inhibited proliferation of MB-49 cells, varying according to the time periods and doses used. The cells in the media supplemented with the nutrients to study did not show inhibition of mRNA expression of urokinase-type plasminogen activator (uPA) or its high affinity receptor (uPAR). It was even slightly increased in certain cases. However, mRNA expression of metalloproteinase-9 was strongly inhibited. Conclusions: The polyphenols present in our usual diet exert an effect on the proliferation and mediators of bladder tumor invasiveness in MB-49 cells (AU)

Dieta y cáncer de próstata / Diet and prostate cancer

El cáncer de próstata es la neoplasia con mayor incidencia en Estados Unidos y la segunda causa de muerte por cáncer en dicho país. Con unos tratamientos sometidos a debate por su importante tasa de efectos secundarios, sería muy deseable poder establecer mecanismos de prevención que actúen sobre dicha enfermedad, entre estos podrían encontrarse los factores nutricionales. En el presente trabajo de revisión se abordan los principales factores dietéticos implicados tanto en el desarrollo como en la prevención del cáncer de próstata. Hacemos especial hincapié en los polifenoles del vino tinto, cuyo influjo sobre la proliferación de células tumorales LNCaP así como sobre la apoptosis ha sido estudiado en nuestro Servicio (AU)

Prostate cancer is the first neoplasia in the United States accounting the second in cancer deaths. With all the treatments strategies in debate because of their side effects, is very important try to elucidate prevention mechanisms that may be implicate in the development of this disease, between these, nutrients have been of mayor importance. In the present review we tried to study the most important nutritional factors implicated in the development and prevention of prostate carcinoma. We focus our attention over the polyphenols of the red wine, which influence over cellular proliferation and apoptosis in LNCaP cells have been studied in our Department (AU)

Condiciones de desarrollo de un programa de reacción en cadena de la polimerasa-transcriptasa reversa para el estadiaje molecular del cáncer de próstata / Conditions for the development of a reverse transcriptase-polymerase chain reaction for molecular staging of prostate cancer

OBJETIVO: Determinar con precisión las condiciones de desarrollo de los ensayos con RT-PCR para PSA en pacientes con cáncer de próstata. MÉTODO: Amplificación del gen del PSA en cultivos celulares de la línea tumoral prostática humana LNCaP con RT-PCR en condiciones hot-start, y verificación mediante digestión con enzimas de restricción del producto de la PCR. Además se calculó el límite de detección del ensayo de PCR, mediante diluciones seriadas de células LNCaP en células mononucleares de sangre periférica. RESULTADOS: Hemos desarrollado un protocolo de RT-PCR de alta especificidad, fácilmente realizable y reproducible. El límite de detección más bajo alcanzado fue de 1 célula sintetizadora de PSA por 10 6 células mononucleares de sangre periférica. CONCLUSIONES: La RT-PCR es una técnica de un alto grado de sensibilidad, que permite la detección de un pequeño número de células productoras de PSA en sangre periférica. Esta experiencia permitió establecer con precisión las condiciones de desarrollo de los ensayos de RT-PCR para PSA (AU)