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1.
Mol Biochem Parasitol ; 244: 111384, 2021 07.
Artigo em Inglês | MEDLINE | ID: mdl-34051228

RESUMO

A tetracycline-responsive transcription system (Tet-Off) adapted for use in Toxoplasma gondii (nicknamed TATi) is useful for molecular biological studies of this organism. Previous studies using TATi incorporated minimal promoters derived from the gene promoters for TgSAG1 or TgSAG4. The present study achieves improved activation and suppression of an integrated reporter gene in the absence and presence of anhydrotetracycline, respectively (p < 0.0001), by use of a newly derived minimal promoter based on the core promoter of TgGRA2. In comparison with the SAG1 minimal promoter, use of the GRA2 minimal promoter in stable transfectants has a 23-fold higher Signal to Noise Ratio for EYFP fluorescence in the absence or presence of anhydrotetracycline. We conclude that the performance of TATi for both activation and suppression of transcription can be markedly enhanced by incorporating a GRA2 minimal promoter.


Assuntos
Antígenos de Protozoários/genética , Proteínas de Bactérias/genética , Regulação da Expressão Gênica/efeitos dos fármacos , Proteínas Luminescentes/genética , Regiões Promotoras Genéticas , Proteínas de Protozoários/genética , Tetraciclinas/farmacologia , Toxoplasma/efeitos dos fármacos , Antígenos de Protozoários/metabolismo , Proteínas de Bactérias/metabolismo , Células Cultivadas , Clonagem Molecular/métodos , Fibroblastos/parasitologia , Expressão Gênica , Genes Reporter , Humanos , Proteínas Luminescentes/metabolismo , Glicoproteínas de Membrana/genética , Glicoproteínas de Membrana/metabolismo , Plasmídeos/química , Plasmídeos/metabolismo , Proteínas de Protozoários/metabolismo , Proteínas Recombinantes/química , Proteínas Recombinantes/genética , Proteínas Recombinantes/metabolismo , Toxoplasma/genética , Toxoplasma/metabolismo , Transcrição Gênica , Transfecção
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