Reversible assembly and disassembly of V-ATPase during the lysosome regeneration cycle.

Regulation of the luminal pH of late endocytic compartments in continuously fed mammalian cells is poorly understood. Using normal rat kidney fibroblasts, we investigated the reversible assembly/disassembly of the proton pumping V-ATPase when endolysosomes are formed by kissing and fusion of late endosomes with lysosomes and during the subsequent reformation of lysosomes. We took advantage of previous work showing that sucrosomes formed by the uptake of sucrose are swollen endolysosomes from which lysosomes are reformed after uptake of invertase. Using confocal microscopy and subcellular fractionation of NRK cells stably expressing fluorescently tagged proteins, we found net recruitment of the V1 subcomplex during sucrosome formation and loss during lysosome reformation, with a similar time course to RAB7a loss. Addition of invertase did not alter mTORC1 signalling, suggesting that the regulation of reversible V-ATPase assembly/disassembly in continuously fed cells differs from that in cells subject to amino acid depletion/refeeding. Using live cell microscopy, we demonstrated recruitment of a fluorescently tagged V1 subunit during endolysosome formation and a dynamic equilibrium and rapid exchange between the cytosolic and membrane bound pools of this subunit. We conclude that reversible V-ATPase assembly/disassembly plays a key role in regulating endolysosomal/lysosomal pH in continuously fed cells.

Correlação eletro-ecocardiográfica no diagnóstico da hipertrofia ventricular esquerda / Electro-echocardiographic correlation in the diagnosis of left ventricular hypertrophy

OBJETIVO - Comparar a eficácia diagnóstica de 4 critérios eletrocardiográficos: índices de Sokolov, Gubner, Cornell e Romhilt, na detecção da hipertrofia ventricular esquerda (HVE) em pacientes hipertensos. MÉTODOS - Foram avaliados 30 pacientes ambulatoriais, com hipertensão arterial sistêmica leve, moderada ou grave, sendo considerado o diagnóstico de HVE quando os índices eram: Sokolov 'maior ou igual' 35mm, Gubner 'maior ou igual' 22mm, Romhilt 'maior ou igual' 5 pontos e Cornell 'maior ou igual' 20mm para mulheres e 28mm para homens. Determinaram-se, então, a sensibilidade, especificidade, eficácia diagnóstica e outras variaáveis diagnósticas para cada um dos critérios, isoladamente, e para os 4 considerados simultaneamente, utilizando-se como padrão ouro para HVE o índice de massa do ventrículo esquerdo 'maior ou igual'98g/m² para mulheres e 'maior ou igual' 120g/m² para homens, obtidos ao ecocardiograma. RESULTADOS - Considerando cada critério eletrocardiográfico isolado, o índice de Sokolov apresentou a melhor eficácia, com sensibilidade = 40 'por cento', eficácia diagnóstica de 50 'por cento' e especificidade 100 'por cento'; o 2§ critério mais eficaz foi o índice de Gubnere, em 3§ lugar, empatados, os índices de Romhilt e Cornell. Quando considerados, simultaneamente, ou seja, a presença de pelo menos um dos quatro critérios, a sensibilidade foi 52 'por cento' e a eficácia diagnóstica 57 'por cento'. CONCLUSÄO - Os quatro critérios eletrocardiográficos considerados individualmente ou em conjunto foram pouco eficazes na detecção da HVE e, considerando a importância desta entidade patológica, concluímos que é imprescindível a utilização de método propedêutico mais sensível para tal diagnósticos.

Biopsia de lesoes encefalicas por trepanacao. / Biopsy of encephalic lesions by trephining

O diagnostico anatomopatologico das lesoes encefalicas de natureza expansiva e necessario para a instituicao do tratamento adequado. Muitas lesoes localizadas nas estruturas cerebrais profundas ou em centros nervosos de grande importancia funcional nao podem ser abordadas por procedimentos neurocirurgicos habituais, sem riscos para os doentes. Nesses casos, a biopsia percutanea, estereotaxica ou assistida pela tomografia computadorizada deve ser empregada para esclarecimento diagnostico. Os autores apresentam o resultado da bipsia por trepanacao de lesoes encefalicas inabordaveis pelos metodos neurocirurgicos tradicionais, em 63 doentes. O procedimento foi realizado a mao livre em 18 casos, por estereotaxia em 28 e por estereotomografia em 17. O indice de mortalidade e de morbidade foi baixo. Cinco doentes foram, durante o mesmo ato operatorio, submetidos a radioterapia intersticial por tecnica de "after loading". Os criterios de selecao, a avaliacao pre-operatoria e as vantagens da biopsia por trepanacao sao discutidos