The role of FGF-2/HGF and fibronectin matrix on pleomorphic adenoma myoepithelial cell morphology and immunophenotype: an in vitro study.

Myoepithelial cells play a central role in glandular tumors, regulating the progression of in situ to invasive neoplasias, with the tumor microenvironment being shown to be involved in both initiation and progression. This study aimed to analyze the in vitro effects of fibroblast growth factor-2 (FGF-2) and hepatocyte growth factor (HGF) in myoepithelial cells under the influence of the fibronectin matrix extracellular protein. Benign myoepithelial cells were obtained from pleomorphic adenoma and cultured on a fibronectin substratum. FGF-2 and HGF were supplemented at different concentrations and time intervals, in order to evaluate cell proliferation, morphology and immunophenotype. Individually, FGF-2 and HGF supplementation did not alter myoepithelial cell proliferation, morphology or immunophenotype. The fibronectin substratum provoked an increase in cell proliferation and immunopositivity for α-smooth muscle actin and FGF-2. The myoepithelial cell morphology changed when the fibronectin substratum and FGF-2 acted together, highlighting the importance of the fibronectin extracellular matrix protein on the behavior of these cells.

Análise molecular da comunidade bacteriana ativa nas infecções endodônticas / Molecular analysis of the active bacterial community in endodontic infections

Introdução: Como as bactérias ativas apresentam uma maior abundância de RNA ribossômico (rRNA) do que DNA (genes rRNA), a razão rRNA/DNA foi utilizada para investigar bactérias ativas em infecções endodônticas. No 1o experimento, a razão rRNA/DNA do sequenciamento de próxima geração (NGS) foi empregada para investigar a comunidade endodôntica ativa. No 2o experimento, a razão rRNA/DNA de ensaios de qPCR foi utilizada para investigar a atividade de bactérias específicas, antes e após o preparo químico-cirúrgico (PQC). Adicionalmente, foi realizada uma revisão sistemática e meta-análise para investigar a prevalência de bactérias ainda não cultivadas/difíceis de cultivar em amostras pós-preparo. Métodos: Amostras endodônticas coletadas antes (S1) e após o PQC (S2) foram submetidas à extração de DNA e RNA. Para a análise de NGS, DNA e RNA (cDNA) de 5 amostras S1 foram sequenciados usando MiSeq (Illumina, San Deigo, CA) e as diferenças analisadas pelo teste de Mann Whitney (P <0,05). A atividade metabólica de Bacteroidaceae [G-1] bacterium HMT 272 e Selenomonas spp. foi determinada pela razão rRNA/DNA baseada nos enasios de qPCR de 20 amostras pareadas S1-S2. Para a revisão sistemática, foram incluídos estudos moleculares que identificaram espécies bacterianas antes e após o PQC. A meta-análise foi realizada com o RStudio. Resultados: Os dados de NGS revelaram que Bacteroidales [G-2] bacterium HMT 274, Porphyromonas endodontalis, Tannerella forsythia, Alloprevotella tannerae, Prevotella intermedia, Pseudoramibacter alactolyticus, Olsenella sp. HMT 809 e Olsenella sp. HMT 939 foram membros ativos (rRNA/DNA 1) nas infecções primárias. Os ensaios de qPCR revelaram que a concentração de cópias de rRNA de Bacteroidaceae [G-1] bacterium HMT 272 nas amostras S2 foi maior do que os níveis correspondentes de DNA (P < 0,05). Por outro lado, houve uma redução da atividade de Selenomonas spp. após o PQC. Os resultados da revisão sistemática e meta-análise mostraram que a prevalência de espécies de difícil cultivo nas amostras pós-preparo foi baixa (<17%), sendo representadas principalmente por Firmicutes e Bacteroidetes. Conclusão: (1) a estratégia integrada de NGS baseada em DNA e rRNA foi particularmente importante para revelar a atividade de bactérias ainda não cultivadas; (2) Bacteroidaceae [G-1] bacterium HMT 272 permaneceu metabolicamente ativo após o PQC; (3) bactérias de difícel cultivo são encontradas em baixa prevalência em amostras pós-instrumentação.