Electrophoresis karyotype and chromosome-length polymorphism of Histoplasma capsulatum clinical isolates from Latin America.

Intact chromosomes of 19 clinical isolates of Histoplasma capsulatum recently obtained in Argentina, Mexico and Guatemala and the laboratory reference strain G186B from Panama were analyzed using pulsed-field gel electrophoresis. Chromosomal banding patterns of the human isolates revealed 5-7 bands, ranging from 1.3 to 10 Mbp in size. Strain G186B showed five bands of approximately 1.1, 2.8, 3.3, 5.4 and 9.7 Mbp. Thirteen different electrokaryotypes were identified, indicating that the genome of H. capsulatum varies widely in nature, as observed previously in laboratory strains. No definite association was found between electrokaryotype and geographical or clinical source.

[Outbreak of histoplasmosis in province of Neuquén, Patagonia Argentina]. / Brote de histoplasmosis en la provincia de Neuquén, Patagonia Argentina.

BACKGROUND: In Argentina, there are no reports of autochthonous cases of histoplasmosis in the southern regions of the country. AIM: To report a histoplasmosis outbreak in Zapala town, Province of Neuquén, Patagonia Argentina. METHODS: We evaluated the clinical and epidemiological characteristics of 5 patients involved in the outbreak. Environmental studies were conducted to determine the source of infection. The genetic profile of Histoplasma capsulatum strains isolated from the index case (IC) were compared with clinical isolates from Argentinean patients not related to the outbreak, using RAPD-PCR with primers 1281-1283. RESULTS: The patients were residents of Zapala, and had not visited other geographical areas before. All patients had an influenza-like syndrome, and X-ray revealed disseminated micronodular images throughout the lung parenchyma. The IC needed specific antifungal therapy; the remaining 4 patients had mild symptoms, and did not require therapy. All of them had a good clinical outcome. Strains of H. capsulatum isolated from blood culture and lung biopsy of the IC showed a genetic profile different from other strains analyzed. The presence of the fungus in the environment was demonstrated by the detection of anti-Histoplasma antibodies in BALB/c mice inoculated with soil obtained in a culvert where workers had dug up earth after a landslide. CONCLUSIONS: This outbreak suggests the histoplasmosis endemic area is under the 38° S parallel. Patients from Neuquén, Patagonia Argentina, with compatible symptoms of histoplasmosis should be tested, regardless of their travel or exposure history.

Brote de histoplasmosis en la provincia de Neuquén, Patagonia Argentina / Outbreak of histoplasmosis in province of Neuquén, Patagonia Argentina

Antecedentes. La República Argentina no registra casos autóctonos de histoplasmosis en regiones australes del país. Objetivo. Informar de un brote de histoplasmosis ocurrido en Zapala, Provincia de Neuquén, Patagonia Argentina. Métodos. Se evaluó el cuadro clínico y las características epidemiológicas de 5 pacientes involucrados en el brote. Se realizaron estudios ambientales para conocer la fuente de infección. Se analizó el perfil genético generado por RAPD-PCR con los primers 1281-1283 de los aislamientos de Histoplasma capsulatum del caso índice ( CI ) y se comparó con cepas de origen clínico no relacionadas con el brote. Resultados. Los pacientes residían en Zapala y no habían visitado otras áreas geográficas. Todos presentaron un síndrome gripal con imágenes radiológicas micronodulillares diseminadas. El CI necesitó tratamiento específico por la gravedad de su cuadro clínico, y los 4 pacientes restantes presentaron una sintomatología leve y no fueron tratados. La evolución clínica de todos fue favorable. Las cepas de H. capsulatum aisladas de hemocultivo y biopsia pulmonar del CI presentaron un perfil genético diferente al resto de las cepas analizadas. La presencia del hongo en el ambiente pudo inferirse mediante la detección de anticuerpos anti-Histoplasma en suero de ratones BALB/c inoculados con tierra de una alcantarilla que los trabajadores removieron después de un aluvión. Conclusiones. Este brote extiende el área endémica de histoplasmosis por debajo del paralelo 38° de latitud sur. El diagnóstico de histoplasmosis debe considerarse en pacientes de Neuquén, con síntomas compatibles con esta micosis, aun sin existir antecedentes epidemiológicos de viajes a áreas endémicas (AU)

Background: In Argentina, there are no reports of autochthonous cases of histoplasmosis in the southern regions of the country. Aim: To report a histoplasmosis outbreak in Zapala town, Province of Neuquén, Patagonia Argentina. Methods: We evaluated the clinical and epidemiological characteristics of 5 patients involved in the outbreak. Environmental studies were conducted to determine the source of infection. The genetic profile of Histoplasma capsulatum strains isolated from the index case (IC) were compared with clinical isolates from Argentinean patients not related to the outbreak, using RAPD-PCR with primers 1281-1283. Results: The patients were residents of Zapala, and had not visited other geographical areas before. All patients had an influenza-like syndrome, and X-ray revealed disseminated micronodular images throughout the lung parenchyma. The IC needed specific antifungal therapy; the remaining 4 patients had mild symptoms, and did not require therapy. All of them had a good clinical outcome. Strains of H. capsulatum isolated from blood culture and lung biopsy of the IC showed a genetic profile different from other strains analyzed. The presence of the fungus in the environment was demonstrated by the detection of anti- Histoplasma antibodies in BALB/c mice inoculated with soil obtained in a culvert where workers had dug up earth after a landslide. Conclusions: This outbreak suggests the histoplasmosis endemic area is under the 38◦ S parallel. Patients from Neuquén, Patagonia Argentina, with compatible symptoms of histoplasmosis should be tested, regardless of their travel or exposure history (AU)

Evaluación de la calidad del diagnóstico micológico: cultivos / Quality assessment of the mycological diagnosis: cultures

Se evaluó la capacidad de los laboratorios participantes del Sub Programa Micología para identificar diferentes cepas de hongos al nivel de género o especie. Tomados los resultados en conjunto, el 66% de los laboratorios identificó en forma correcta las cepas, mientras que otro 25% lo hizo en forma parcial. En el caso de los dermatofitos hubo un mayor porcentaje de respuestas correctas para el reconocimiento de Trichophyton mentagrophytes (76%) respecto de las especies de Microsporum evaluadas: M. canis (66%) y M. gypseum (65%). Los resultados de la identificación de las especies de levaduras mostraron dos grupos diferentes: uno conformado por Candida albicans y Cryptococcus neoformans, con elevados porcentajes de respuestas correctas (87 y 95%, respectivamente) y otro por C. tropicalis y C. glabrata, que ocasionó dificultades para su correcta identificación (sólo 28 y 32% de respuestas correctas). Las especies de Aspergillus evaluadas (A. fumigatus y A. niger) fueron reconocidas en forma correcta por el 63 y 72% de los participantes. Los resultados obtenidos, si bien son considerados como aceptables, evidencian la necesidad de mejorar la capacidad evaluada, teniendo en cuenta su influencia decisiva sobre la calidad del diagnóstico micológico.

The ability to identify different fungal strains at genera or specie level for participant laboratories of the Mycology Sub-Program, was evaluated. Taking into account all results as a whole, 66% of laboratories identified the strains correctly, while another 25% recognized the strains partially. Regarding dermatophytes, a higher percentage of correct responses for Trichophyton mentagrophytes recognition was observed with respect to (76%) those of the evaluated Microsporum species: M. canis (66%) and M. gypseum (65%). The results produced by the identification of yeasts species showed 2 different groups: one constituted by Candida albicans and Cryptococcus neoformans, with higher percentages of correct responses (87 and 95%, respectively) and another one constituted by C. tropicalis and C. glabrata, which presented difficulties for their correct identification (28 and 32% correct responses). The evaluated species of Aspergillus (A. fumigatus and A. niger) were recognized by 63% and 72% of the participants. The results obtained, considered as acceptable, show the need to improve the evaluated capacity, taking into account their decisive influence on mycologic diagnosis quality.

Comparación de las coloraciones de Giemsa y Grocott en el diagnóstico de la histoplasmosis / Comparison of Giemsa and Grocott stains in the diagnosis of histoplasmosis

El diagnóstico de histoplasmosis se realiza tradicionalmente mediante el reconocimiento de típicas levaduras intracelulares de Histoplasma capsulatum en preparaciones microscópicas teñidas con Giemsa. Se comparó la eficacia de una modificación rápida de la técnica de Grocott (MRG) y la tradicional de Giemsa para el diagnóstico de la histoplasmosis, a partir de la aplicación de ambas a 10 secreciones respiratorias, 8 escarificaciones de lesiones cutáneas y una biopsia ganglionar, pertenecientes todas a pacientes con sospecha clínica de esta micosis. En 15 de las 19 muestras no se encontraron diferencias significativas en la capacidad y rapidez para arribar al diagnóstico, mientras que en las 4 restantes, fueron reconocidas con la MRG estructuras que pasaron desapercibidas con la coloración de Giemsa. La modificación rápida permitió un reconocimiento más rápido del H. capsulatum en materiales donde este hongo se observó en escaso número y permitió además identificar con seguridad otros patógenos fúngicos diferentes de H. capsulatum, como Pneumocystis jiroveci, Paracoccidioides brasiliensis y Cryptococcus neoformans, difíciles de observar con la coloración de Giemsa. Se propone la técnica de Grocott o su modificación rápida para el diagnóstico de la histoplasmosis, especialmente cuando el empleo de la coloración de Giemsa da lugar a resultados negativos o dudosos.

The diagnosis of histoplasmosis is traditionally achieved by recognizing the typical intracellular yeasts of Histoplasma capsulatum, in smears stained with Giemsa stain. The usefulness of a rapid modification of Grocott and of traditional Giemsa stains for the diagnosis of histoplasmosis was compared applying both techniques in 10 respiratory secretions, 8 cutaneous lesions scrapings and 1 adenomegaly biopsy, all of them belonging to patients with clinically suspected histoplasmosis. In 15 out of the 19 evaluated samples, no significant differences were found in the ability or speed to reach the diagnosis with the applied techniques; while in the remaining 4 samples, structures that had not been observed with Giemsa stain were recognized with the rapid modification. The modification enabled quicker recognition of H. capsulatum than Giemsa stain in those clinical samples where the number of these fungal pathogens was scant. Additionally, the rapid modification also enabled the recognition of fungal pathogens other than H. capsulatum, as Pneumocystis jiroveci, Paracoccidioides brasiliensis and Cryptococcus neoformans, difficult to observe with the Giemsa stain. Use of Grocott technique or rapid modification stain is proposed for the diagnosis of histoplasmosis, when the result obtained with the Giemsa stain is doubtful or negative.

Evaluación de la calidad del diagnóstico micológico: microscopia / Evaluation of the quality of mycological diagnosis: microscopy

Se evaluó la capacidad de los participantes del Sub Programa Micología del PEEC para reconocer estructuras fúngicas microscópicas de importancia diagnóstica, presentes en materiales clínicos. Los envíos consistieron en fotografías y preparaciones microscópicas que contenian estructuras fúngicas tales como hifas, levaduras o seudohifas, y las prespuestas remitidas fueron evaluadas como correctas, parcialmente correctas o incorrectas Los porcentajes más elevados de respuestas correctas ocurrieron en las encuestas Nº 6 (hifas hialinas), Nº 10 (levadura capsulada) y Nº 11 (Malassezia en lesión de pitiriasis), con valores en las dos primeras cercanos al 70% y en la última, superior al 80%. En estas encuestas se observaron los porcentajes más bajos de respuestas incorrectas (con excepción de la entrega Nº4 [hifas de dermatofitos], con 10%), con valores entre el 8% - 11%. Los porcentajes más bajos de reconocimiento ocurrieron en las encuesta Nº 9 (hifas dematiáceas), en la cual las respuestas correctas fueron 45% y las incorrectas superaron el 37%. Los resultados obtenidos pueden ser considerados, de manera general, como aceptables, teniendo en cuenta que la mayoría de los laboratorios que intervienen son de baja complejidad, y procesan menos de 10 muestras mensuales.