Secretaria de Estado da Saúde - BVS

A raiva é uma antropozoonose, uma doença infecciosa aguda causada por vírus do gênero Lyssavírus e espécie Rabies vírus. A organização Mundial da Saúde reco-menda que sejam realizados dois testes para diagnóstico da raiva a imunofluores-cência direta (IFD) e o isolamento viral que pode ser realizado em cultura de células ou em camundongos. A técnica de IVC preconiza que os animais inoculados sejam observados diariamente e que a eutanásia seja realizada quando os animais estive-rem prostrados, apresentando sintomas severos da doença, tais como paralisia de membros, o que acarreta sofrimento animal. Sendo assim, o objetivo principal deste trabalho foi determinar um ponto final humanitário dos animais que adoecem na rotina de diagnóstico da raiva, de modo a reduzir o sofrimento sem que o diagnóstico seja prejudicado. Para tanto, foram utilizadas 20 amostras positivas da rotina laboratorial de diferentes variantes do vírus da raiva. Cada amostra foi inoculada em 5 camundon-gos recém-desmamados, sendo que cada animal foi observado e pesado em balança analítica diariamente. Os animais foram eutanasiados em 3 diferentes momentos fase 1-no início dos sintomas da doença, quando o animal apresenta perda de peso e sin-tomas inespecíficos (piloereção, apatia); fase 2-aparecimento de sintomas neurológi-cos (incoordenação, alterações de comportamento) e fase 3-fase terminal (dificuldade locomotora, tremores, paralisia de membros). O SNC dos animais eutanasiados foram coletados e submetidos a IFD utilizando anticorpo policlonal e monoclonal, que foi classificada de acordo com a sua intensidade 1 (+) a 4 (+) e para fins de comparação da carga viral obtida em diferentes momentos da doença, foi realizada a titulação viral em cultivo de células N2a para as 3 fases de 4 amostras escolhidas aleatoriamente. Todos os animais foram positivos na IFD e apresentaram intensidade de fluorescência na maioria das amostras entre 2 (+) e 4(+), o que demonstra que não há comprome-timento do diagnóstico pela IFD mesmo que o animal seja eutanasiado em fase inicial da doença. Em relação a titulação viral, não foi observado um aumento do título em relação à evolução da doença. A técnica de IFD apresentou resultados relevantes a partir da primeira fase com vários campos com inclusões. A titulação viral obteve títu-los semelhantes em todas as fases, corroborando que é possível identificar a infecção já no início dos sintomas. Assim, a determinação de um endpoint precoce no diagnós-tico da raiva ou intervenções oportunas deve ser estabelecida, aplicando-se o mais cedo possível, prevenindo, melhorando ou minimizando dores ou angústia desneces-sárias. A observação dos sintomas em fase inicial pode demandar um pouco mais de tempo e pessoal habilitado, podendo ser inviável. A partir da fase 2, a qual os sintomas neurológicos são evidentemente observáveis, pode-se fazer a eutanásia sem a ne-cessidade de esperar a fase terminal, sem causar prejuízo ao diagnóstico como pode ser evidenciado nos resultados obtidos (AU),

Rabies is an anthropozoonosis, an acute infectious disease caused by viruses of the genus Lyssavirus and Rabies virus species. The World Health Organization recom-mends that two tests be performed for rabies diagnosis direct fluorescence antibody (DFA) and viral isolation that can be carried out in cell culture or in mice. The mouse inoculation test (MIT) recommends daily observation of inoculated animals and eutha-nasia when the animals are prostrate, presenting severe symptoms of the disease, such as limb paralysis, which causes animal suffering. Therefore, the main objective of this work was to determine a humanitarian end point for animals that become ill in the routine of rabies diagnosis, in order to reduction suffering without the diagnosis being harmed. For this purpose, 20 positive samples from the laboratory routine of different rabies virus variants were used. Each sample was inoculated into 5 weaned mice, each animal was observed and weighed on an analytical balance daily. The an-imals were euthanized at 3 different times phase 1 - at the beginning of the disease symptoms, when the animal shows weight loss and nonspecific symptoms (piloerec-tion, apathy); phase 2 - appearance of neurological symptoms (incoordination, behav-ioral changes) and phase 3 - terminal phase (locomotor difficulties, tremors, limb pa-ralysis). The CNS of the euthanized animals were collected and submitted to DFA us-ing polyclonal and monoclonal antibodies, which were classified according to their in-tensity 1 (+) to 4 (+) and for the purpose of comparing the viral load obtained in different moments of the disease, viral titration was performed in N2a cell culture for the 3 phases of 4 samples chosen at random. All animals were positive in IFD and showed fluorescence intensity in most samples between 2 (+) and 4 (+), which demonstrates that there is no impairment of diagnosis by IFD even if the animal is euthanized in the initial phase of disease. Regarding the viral titration, there was no increase in the titre in relation to the evolution of the disease. The DFA technique showed relevant results from the first phase with several fields with inclusions. Viral titration obtained similar titers in all phases, corroborating that it is possible to identify the infection early in the symptoms. Thus, the determination of an early endpoint in the diagnosis of rabies or timely interventions should be established, applying as soon as possible, preventing, improving or minimizing unnecessary pain or distress. The observation of symptoms in the initial phase can demand a little more time and qualified personnel, which may not be viable. From phase 2, which neurological symptoms are clearly observable, euthanasia can be performed without the need to wait for the terminal phase, without causing damage to the diagnosis as can be seen in the results obtained (AU).