Isolamento ambiental e identificação bioquímica de Cryptococcus spp / Environmental isolation and biochemical identification of Cryptococcus spp

RESUMO

A Cryptococose é uma doença fúngica, oportunista, de caráter ubiquitária e crescente em número de casos nos últimos anos. Considerada atualmente como um problema de saúde pública, pode ocasionar doença em muitos hospedeiros, inclusive no homem. A infecção ocorre em decorrência da inalação de basidiósporos ou leveduras desidratadas infectantes presentes no ambiente. O gênero Cryptococcus caracteriza-se por ser uma levedura normalmente encapsulada, responsável por infecção sistêmica, causada principalmente pelas espécies, Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, comumente encontrada em substratos de origem animal, como excretas de aves, vegetais, e em troncos ocos de árvores, embora, com o avanço dos estudos, o envolvimento de outras espécies nas infecções humanas venha sendo cada vez mais relatada.Com o objetivo de conhecer a ecoepidemiologia do Cryptococcus spp em 30 amostras de material putrefado de árvores e 30 amostras excretas de aves de 10 locais representativos no perímetro do Instituto Lauro de Souza Lima-Bauru, buscamos conhecer a ecoepidemiologia desses agentes e posterior, profilaxia, minimizando riscos de contágio. As amostras foram processadas e semeadas em placas contendo ágar semente de níger e ágar Sabouraud Dextrose com cloranfenicol, incubadas a temperatura de 30°C e observadas diariamente por dez dias. O crescimento de leveduras com características de Cryptococcus spp foram avaliadas pelo aspecto colonial nos meios de cultivo e pela realização de exames diretos com tinta da China e com lactofenol azul de algodão através da análise dos aspectos micromorfológicos. As leveduras analisadas foram submetidas as provas bioquímicas como; produção de urease, produção de fenoloxidase no ágar semente de níger, termotolerância a 37°C e quimiotipagem em ágar CGB (L-canavanina-glicina-azul de bromotimol). Os dados obtidos foram avaliados estatisticamente pelo Teste exato de Fisher e pelo teste qui-quadrado, adotando o nível de significância de 5% e demonstrando crescimento de C.neoformans, C.gattii e C. Laurentii (Papiliotrema laurentii), concluindo que esses fungos podem infectar o ambiente.

ABSTRACT

Cryptococcosis is a fungal, opportunistic and ubiquitous disease which is increasing in number of cases in recent years. Currently considered as a public health problem, it can cause disease in many hosts, including humans. The infection occurs as a result of inhalation of basidiospores or dehydrated infective yeasts present in the environment. The genus Cryptococcus is characterized as a normally encapsulated yeast, responsible for systemic infection, mainly caused by the species, Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii, commonly found in substrates of animal origin, such as Bird droppings, vegetables, and in tree hollows, although, with the advancement of studies, the involvement of other species in human infections has been increasingly reported. With the aim of knowing the ecoepidemiology of Cryptococcus spp in 30 samples of putrefying material from trees and 30 samples of bird droppings from 10 representative sites in the Instituto Lauro de Souza Lima-Bauru (ILSL), we sought to know the ecoepidemiology of these agents and later, prophylaxis, minimizing the risk of contagion. The samples were processed and seeded on plates containing niger seed agar and Sabouraud Dextrose agar with chloramphenicol, incubated at 30°C and observed daily for ten days. The growth of yeasts with characteristics of Cryptococcus spp were evaluated by the colonial appearance in the fungus culture and by performing direct examinations with China ink and cotton blue lactophenol through the analysis of micromorphological aspects. The analyzed yeasts were submitted to biochemical tests such as; urease production, phenoloxidase production on niger seed agar, thermotolerance at 37°C and chemotyping on CGB agar (L-canavanine-glycine-bromothymol blue). The data obtained were statistically evaluated using Fisher's exact test and the chi-square test, adopting a significance level of 5%. Cryptococcus neoformans, Cryptococcus gattii and Cryptococcus laurentii were isolated.