Análise da expressão e mecanismos de ação da proteína COX-2 em cultura de células de carcinoma epidermóide bucal humano / Analysis expression and action mechanisms of COX-2 protein in culture of human oral squamous cell carcinoma

RESUMO

Celecoxib é um antiinflamatório não esteroidal (AINE), inibidor seletivo da ciclooxigenase-2 (COX-2) usado em pesquisas recentes como agente anticarcinogênico. Os seus efeitos anti-neoplásicos dependem por um lado da suacapacidade de inibir a COX-2, mas por outro lado também age por mecanismos que independem da COX-2, em resumo o seu mecanismo de ação ainda não é completamente conhecido. O objetivo desta tese foi estudar os efeitos do celecoxib sobre as taxas de apoptose e os índices de proliferação celular de quatro linhagens celulares, Hn-6, Hn-19, Hn-30, Hn-31, de CECP e uma linhagem de queratinócitos mutada (HaCat), além de verificar se há correlação entre a expressão das proteínas COX-2, pAkt, ß-catenina, CD1 e NFKB e a inibição da proliferação celular. As células foram divididas em dois grupos a, grupo controle; b, células cultivadas tratadas com celecoxib. A análise da expressão das proteínas pAkt, NFKB, ß-catenina, COX-2 e CD1 foi feita através da técnica de Western-blot. A indução de apoptose foi estudada com o Kit de Anexina. A proliferação celular foi monitorada através de curva de crescimento, com contagem celular na câmara de Neubauer e com o teste de viabilidade celular (Kit Cell Titer96) e a localização intracelular das proteínas foi avaliada por imunofluorescência. Os resultados mostraram significante aumento noíndice celular de apoptose e diminuição da proliferação celular. Após o tratamento com celecoxib, a imunofluorescência mostrou que a proteína CD1 teve diminuição da expressão nuclear, a ß-catenina exibiu discreto aumento citoplasmático, o pAkt também passou a ser expresso no citoplasma da Hn6, enquanto as outras proteínas estudadas mantiveram o mesmo padrão de localização na célula. O western blot complementou os resultados da imunofluorescência indicando uma diminuição nos níveis de CD1.