[Genetic screening of multiple endocrine neoplasia type 2: experience of the USP Endocrine Genetics Unit]. / Rastreamento gênico da neoplasia endócrina múltipla tipo 2: experiência da Unidade de Endocrinologia Genética da USP.

Multiple endocrine neoplasia type 2 (MEN-2) is an inherited tumor syndrome that includes medullary thyroid carcinoma (MTC), primary hyperparathyroidism, pheochromocytoma and other non-endocrine diseases. Since the first RET missense mutations in association with MEN-2 were identified, RET mutation analysis had a great impact in the clinical management of MEN-2, such as in early diagnosis and treatment of MTC. Presently, early total thyroidectomy provides real cure of MTC for cases in which molecular diagnosis has been performed at early ages. After RET mutation identification, family members should be screened for this mutation by using methods as DGGE, SSCP, restriction enzyme, genetic sequencing or mini-sequencing. In this paper, we briefly review our experience with the direct RET gene sequencing and DGGE approaches. In 50 typical MEN-2 patients analyzed using both methods, we found no false results suggesting that DGGE is a reliable screening method for RET proto-oncogene mutation analysis.

A novel Val648Ile substitution in RET protooncogene observed in a Cys634Arg multiple endocrine neoplasia type 2A kindred presenting with an adrenocorticotropin-producing pheochromocytoma.

Multiple endocrine neoplasia type 2 (MEN 2) comprises a heterogeneous group of neoplasic disorders that most commonly have a single missense substitution of the RET protooncogene (RET) involving exons 10 and 11. It was previously reported a MEN 2A kindred in which the father presented with a rare phenotype consisting of bilateral ACTH-producing pheochromocytoma and medullary thyroid carcinoma. We recently performed mutational analysis of the father and his 4 children using a denaturing gradient gel electrophoresis approach and PCR-amplified genomic DNA, followed by direct sequencing or restriction fragment length polymorphism testing. All 4 children showed a RET sequence variation. The common exon 11 Cys(634)Arg RET mutation was present in 2 of the 4 children who had undergone thyroidectomy for C cell disease. The remaining 2 children, who did not harbor the Cys(634)Arg mutation and are negative for C cell and adrenal disease, carry a previously unreported Val(648)Ile missense change in RET exon 11. This novel substitution was not found in the unaffected mother or in 200 control alleles. Both RET variants were present in the father affected with MEN 2A and the unusual ACTH-producing pheochromocytoma. We speculate that the double RET mutation may have modified and contributed to the rare MEN 2A phenotype in the father.

Sporadic medullary thyroid carcinoma: clinical data from a university hospital.

INTRODUCTION: Medullary thyroid carcinoma may occur in a sporadic (s-medullary thyroid carcinoma, 75%) or in a multiple endocrine neoplasia type 2 form (MEN2, 25%). These clinical forms differ in many ways, as s-medullary thyroid carcinoma cases are RET-negative in the germline and are typically diagnosed later than medullary thyroid carcinoma in MEN2 patients. In this study, a set of cases with s-medullary thyroid carcinoma are documented and explored. PURPOSE: To document the phenotypes observed in s-medullary thyroid carcinoma cases from a university group and to attempt to improve earlier diagnosis of s-medullary thyroid carcinoma. Some procedures for diagnostics are also recommended. METHOD: Patients (n=26) with apparent s-medullary thyroid carcinoma were studied. Their clinical data were reviewed and peripheral blood was collected and screened for RET germline mutations. RESULTS: The average age at diagnosis was 43.9 years (+/- 10.82 SD) and did not differ between males and females. Calcitonin levels were increased in all cases. Three patients presented values that were 100-fold greater than the normal upper limit. Most (61.54%) had values that were 20-fold below this limit. Carcinoembryonic antigen levels were high in 70.6% of cases. There was no significant association between age at diagnosis, basal calcitonin levels or time of disease onset with thyroid tumor size (0.6-15 cm). Routine thyroid cytology yielded disappointing diagnostic accuracy (46.7%) in this set of cases. After total thyroidectomy associated with extensive cervical lymph node resection, calcitonin values remained lower than 5 pg/mL for at least 12 months in eight of the cases (30.8%). Immunocyto- and histochemistry for calcitonin were positive in all analyzed cases. None of the 26 cases presented germline mutations in the classical hotspots of the RET proto-oncogene. CONCLUSION: Our cases were identified late. The basal calcitonin measurements and immunostaining for calcitonin were highly useful for diagnosing s-medullary thyroid carcinoma. The rate of complete patient recovery was low, and none of the parameters analyzed were useful predictors of the thyroid tumor size. Our findings support previous recommendations for routine serum calcitonin evaluation and immunostaining analysis involving single thyroid nodules.

Sporadic medullary thyroid carcinoma: clinical data from a university hospital

INTRODUCTION: Medullary thyroid carcinoma may occur in a sporadic (s-medullary thyroid carcinoma, 75 percent) or in a multiple endocrine neoplasia type 2 form (MEN2, 25 percent). These clinical forms differ in many ways, as s-medullary thyroid carcinoma cases are RET-negative in the germline and are typically diagnosed later than medullary thyroid carcinoma in MEN2 patients. In this study, a set of cases with s-medullary thyroid carcinoma are documented and explored. PURPOSE: To document the phenotypes observed in s-medullary thyroid carcinoma cases from a university group and to attempt to improve earlier diagnosis of s-medullary thyroid carcinoma. Some procedures for diagnostics are also recommended. METHOD: Patients (n=26) with apparent s-medullary thyroid carcinoma were studied. Their clinical data were reviewed and peripheral blood was collected and screened for RET germline mutations. RESULTS: The average age at diagnosis was 43.9 years (± 10.82 SD) and did not differ between males and females. Calcitonin levels were increased in all cases. Three patients presented values that were 100-fold greater than the normal upper limit. Most (61.54 percent) had values that were 20-fold below this limit. Carcinoembryonic antigen levels were high in 70.6 percent of cases. There was no significant association between age at diagnosis, basal calcitonin levels or time of disease onset with thyroid tumor size (0.6-15 cm). Routine thyroid cytology yielded disappointing diagnostic accuracy (46.7 percent) in this set of cases. After total thyroidectomy associated with extensive cervical lymph node resection, calcitonin values remained lower than 5 pg/mL for at least 12 months in eight of the cases (30.8 percent). Immunocyto- and histochemistry for calcitonin were positive in all analyzed cases. None of the 26 cases presented germline mutations in the classical hotspots of the RET proto-oncogene. CONCLUSION: Our cases were identified late. The basal ...

Rastreamento gênico da neoplasia endócrina múltipla tipo 2: experiência da Unidade de Endocrinologia Genética da USP / Genetic screening of multiple endocrine neoplasia type 2: experience of the USP Endocrine Genetics Unit

A neoplasia endócrina múltipla tipo 2 (NEM-2) é uma síndrome tumoral hereditária que compreende: carcinoma medular de tireóide, hiperparatiroidismo primário, feocromocitoma e outras doenças não-endócrinas. Desde a identificação das primeiras mutações missense no RET associadas ao NEM-2, a detecção de mutações no RET adquiriu grande impacto no tratamento clínico da NEM-2, tais como o pronto diagnóstico e tratamento do CMT. Atualmente a tireoidectomia total possibilita real cura dos casos de CMT nos quais os diagnósticos moleculares foram efetuados precocemente. Depois de identificadas as mutações no RET, os demais familiares devem ser rastreados para esta mutação utilizando-se métodos como DGGE, SSCP, enzima de restrição, seqüenciamento e mini-seqüenciamento gênico. Apresentamos uma breve revisão da nossa experiência com seqüenciamento gênico direto do RET e DGGE. Em 50 pacientes com NEM-2 analisados por ambas as técnicas, não encontramos falsos resultados, sugerindo que o DGGE é uma metodologia de rastreamento adequada para mutações no proto-oncogene RET.

Abordagem clínica e laboratorial do bócio uninodular sólido: vantagens da determinaçäo da calcitonina sérica por métodos distintos no rastreamento do carcinoma medular de tireóide, forma esporádica / Clinical and laboratorial approach of solid uninodular goiter: advantage of serum calcitonin determination by different methods in medullar thyroid carcinoma screening, sporadic form

A apresentação clínica mais freqüente da forma esporádica do carcinoma medular da tireóide (CMT) é o bócio uninodular sólido (BUS), apresentação esta semelhante aos demais tumores que afetam a glândula. O estabelecimento da freqüência de CMT em BUS apresenta implicações importantes não só diagnósticas, como também terapêuticas, visto a abordagem cirúrgica do CMT diferir de outros tumores tireoideanos. Para investigar a prevalência de CMT em BUS, dosamos calcitonina (CT) sérica, marcador bioquímico do CMT, por métodos distintos (RIA e IRMA) em 60 casos (55 mulheres; com idades entre 22 e 75 anos). A análise citológica obtida através de punção biópsia (PAAF) revelou 100 por cento de especificidade e 67 por cento de sensibilidade na detecção de carcinoma de tireóide. Considerando-se o grau de suspeita clínica para neoplasia tireoideana e os achados anatomopatológicos, houve 60 por cento de correlação positiva. CMT foi diagnosticado através da elevação da CT sérica em um dos 59 casos (1,69 por cento) e confirmado posteriormente pela PAAF e anatomopatológico. A incidência de CMT entre os casos de neoplasias tireoideanas nesta amostra foi de 12,5 por cento (1/8). Concluímos que a dosagem rotineira da CT sérica em casos com BUS não só complementa o estudo desta doença, como auxilia fortemente no diagnóstico do CMT. Tanto o IRMA como o RIA mostraram-se métodos úteis no rastreamento do CMT. Entretanto, o RIA pode provavelmente detectar ainda mais precocemente a elevação de formas não monoméricas da molécula de CT, as quais nos casos de CMT são usualmente mais abundantes que as formas monoméricas.

Níveis de calcitonina em cultura de tecido de carcinoma medular de tireóide / Calcitonin levels in tissue culture of medullary thyroid carcinoma

Uma amostra de carcinoma medular de tireóide foi cultivada por 29 dias, tendo-se dosado a CT secretada para o meio de cultura a cada 24-48 h. Os níveis iniciais de CT (> 1000 pg/ml) demonstraram queda gradativa até o 20§ dia (110 pg/ml). Entre os dias 20 e 29, os níveis de CT secretada para o meio se mantiveram constantes. Esta abordagem abre uma nova oportunidade em nosso meio no estudo deste tumor e na sua confirmaçäo diagnóstica

Detecçäo precoce do carcinoma medular de tireóide / Early detection of the medullary thyroid carcinoma

Vinte e oito parentes de 11 pacientes com carcinoma medular de tiróide (CMT) foram testados, sendo que dois destes 11 pacientes apresentavam neoplasia endócrina múltipla tipo II. O teste combinado constou de infusäo endovenosa de 2mg de Ca++/kg de peso por 60seg, seguida imediatamente de infusäo de 0,5mcg de pentagrastrina/kg de peso, por 5seg . A calcitonina (CT) sérica foi dosada aos 0, 2, 5 e 10min. Os valores máximos da CT sérica em indivíduos normais foram considerados como 95 e 350pg/ml, em condiçöes basais e após estímulo, respectivemente. Diante de valores anormalmente elevados de CT durante o primeiro teste, um segundo teste foi realizado para confirmar o diagnóstico de hipersecreçäo do CT. Em dois entre 28 casos, estudados, fêz-se o diagnóstico precoce do CMT pelos níveis excessivemente elevados da CT, visto ser este o marcador específico desta neoplasia. A tireoidectomia total e a limpeza ganglionar preventiva foram indicadas em ambos os casos. Os achados patológicos e da imunocitoquímica confirmaram a presença do CTM nos dois casos. Nestes casos, após a cirurgia, os níveis de CT sérica se mantiveram constantemente normais até o presente (18 meses após a cirurgia). Estes achados reforçam a hipótese de cura do CMT em ambos casos. O feocromocitoma e o hiperparatireoidismo foram investigados nos 28 casos, sendo que em dois o hiperparatiroidismo foi suspeitado e está sob atual investigaçäo. Sumarizando, documentou-se a importància do aprofundamento no estudo de parentes de pacientes com CMT, por meio de dosagem de CT. Este procedimento pode levar ao diagnóstico e tratamento precoces desta neoplasia, permitindo eventual cura do paciente.

Perda do sítio de restriçäo fok-I no codon 918 do proto-oncogenese RET na neoplasia endócrina múltipla tipo 2B / Fok-1 restriction site loss in codon 918 of RET proto-oncogene in type 2b multiple endocrine neoplasm

Descreveu-se o uso de método simplificado de detecção de perda do sítio de restrição que envolve o codon 918 do protooncogene RET, usando-se digestão direta com a enzima de restrição fok-I. Este método foi aplicado na análise do DNA genômico do sangue periférico de uma paciente com neoplasia endócrina múltipla tipo 2B (NEM-2B), seus pais e irmão. Descartou-se a existência da mutação nos parentes e confirmou-se padrão eletroforético de DNA compatível com mutação no codon 918 na paciente estudada. Estes achados sugerem que esta mutação tenha ocorrido durante a gametogênese de um dos pais da afetada. Com este método elimina-se a necessidade do seqüenciamento gênico direto, economizando tempo e gastos com o exame. Propõe-se que este procedimento possa ser usado na detecção desta mutação em indivíduos pertencentes ao grupo de risco para NEM-2B, desde que cerca de 93 por cento dos pacientes com esta doença apresentam mutação no codon 918.

Detecçäo precoce do carcinoma medular de tireóide na neoplasia endócrina múltipla tipo II / Early detection of medullary thyroid carcinoma in multiple endocrine neoplasia type II

Fez-se diagnóstico precoce do carcinoma medual de tireóide em dois dos seis filhos de dois dos seis filhos de dois pacientes com neoplasia endócrina múltipla tipo II. para isto, usaram-se dosagens séricas de calcitonina durante o teste estimulatório combinado com 2 mg de Ca++/Kg de peso ou 0,5 mcg/Kg de peso de pentagastrina. Respostas exageradas (> 350 pg/ml) em dois testes feitos em diferentes dias, documentaram o diagnóstico deste tumor nos dois casos. A tireoidectomia total foi indicada e realizada em ambos os casos, associada à ressecçäo preventiva dos gânglios linfáticos do quadrilátero central do pescoço. Os exames anátomo-patológico e imunocitquímico para calcitonia documentaram em ambos os casos dois nódulos com características de carcinoma medular de tireoide, ao lado de extensas áreas de hiperplasia das células C. O eventual surgimento de feocromocitoma e/ou hiperpartireoidismo continua a ser periodicamente investigado nestas duas irmäs. A queda abrupta dos níveis de calcitonina no pós-cirúrgico e a persistência de níveis normais 18 meses após a cirurgia, indicam cura do carcinoma medular de tireóide em ambas as irmäs. Em uma segunda família, detectou-se filho de afetado com neoplasia endócrina múltipla tipo II com fortes indicaçöes de presença de hiperparatireoidismo, mas o paciente näo mais retornou ao hospital. Confirmou-se a validade da dosagem da calcitonina sérica como marcador tumoral do carcinoma medular da tireóide e do índice de cura no pós-cirúrgico, ao lado do antígeno carcinoembriônico