Development of a new assay for quantification of parasite load of intracellular Leishmania sp. in macrophages using flow cytometry.

Finding novel methodologies that enhance the precision, agility, and standardization of drug discovery is crucial for studying leishmaniasis. The slide count is the technique most used to assess the leishmanicidal effect of a given drug in vitro. Despite being consolidated in the scientific environment, it presents several difficulties in its execution, assessment, and results. In addition to being laborious, this technique takes time, both for the preparation of the material for analysis and for the counting itself. Our research group suggests a fresh approach to address this requirement, which involves utilizing nuclear labeling with propidium iodide and flow cytometry to determine the quantity of Leishmania sp. parasites present in macrophages in vitro. Our results show that the fluorescence of infected samples increases as the infection rate increases. Using Pearson's Correlation analysis, it was possible to establish a correlation coefficient (Pearson r = 0.9473) that was strongly positive, linear, and directly proportional to the fluorescence and infection rate variables. Thus, it is possible to infer a mathematical equation through linear regression to estimate the number of parasites in each sample using the Relative Fluorescence Units (RFU) values. This new methodology opens space for the possibility of using this methodological resource in the in vitro quantification of Leishmania in macrophages.

Antigenic extracts of Leishmania braziliensis and Leishmania amazonensis associated with saponin partially protects BALB/c mice against Leishmania chagasi infection by suppressing IL-10 and IL-4 production

This study evaluated two vaccine candidates for their effectiveness in protecting BALB/c mice against Leishmania chagasiinfection. These immunogenic preparations were composed of Leishmania amazonensisor Leishmania braziliensisantigenic extracts in association with saponin adjuvant. Mice were given three subcutaneous doses of one of these vaccine candidates weekly for three weeks and four weeks later challenged with promastigotes of L. chagasiby intravenous injection. We observed that both vaccine candidates induced a significant reduction in the parasite load of the liver, while the L. amazonensisantigenic extract also stimulated a reduction in spleen parasite load. This protection was associated with a suppression of both interleukin (IL)-10 and IL-4 cytokines by spleen cells in response to L. chagasiantigen. No change was detected in the production of IFN-γ. Our data show that these immunogenic preparations reduce the type 2 immune response leading to the control of parasite replication.

Gene therapy with VEGF 165 for angiogenesis in experimental acute myocardial infarction

OBJETIVO: Verificar a induçäo de angiogênese miocárdica pela injeçäo transmural de plasmídeo VEGF 165 (Genentech/ USA) em zonas do infarto agudo do miocárdio (IAM) de cäes, mediante avaliaçäo por cintilografia miocárdica e estudo histológico. MÉTODOS: Em onze cäes anestesiados o coraçäo foi abordado em toracotomia antero-lateral esquerda e produzido IAM pela ligadura simples de ramo diagonal da artéria coronária descendente anterior. Em cada de 10 pontos selecionados da área infartada e sua periferia foi realizada a injeçäo de um total de 1 ml de soluçäo salina (grupo controle: cinco cäes) ou de soluçäo contendo plasmídeo VEGF 165 na concentraçäo de 200 ug/ml (grupo tratado: seis cäes). Os animais foram recuperados e realizada cintilografia miocárdica com Tecnécio imediatamente e 14 dias após IAM. Os animais foram sacrificados e o coraçäo retirado para estudo histológico da área de infarto, de sua periferia e de área da parede ventricular posterior, visando contagem eletrônica de capilares e arteríolas. RESULTADOS: Cintilografia mostrou modificações na perfusäo miocárdica comparáveis entre os grupos quanto ao estudo imediato e 15 dias após IAM, sendo que os dois grupos mostraram uma recuperaçäo de 70 a 90 % da hipoperfusäo demonstrada no 1o exame. O estudo histológico da área de transiçäo do IAM revelou um maior número de vasos no grupo tratado em relaçäo ao grupo controle (média de 123,81 + 21,48 e 40 + 6,13, respectivamente; p <0,01). Este crescimento do número de vasos é atribuível principalmente ao aumento do número de capilares (97,5 + 16,04 no grupo tratado e 22,18 + 3,25 no grupo controle, p < 0,01), sendo que em relaçäo ao número de arteríolas o aumento näo foi significativo (25,16 + 10,89 e 16,8 + 4,75; NS). A comparaçäo entre a regiäo de transiçäo do IAM do grupo tratado e de área normal, revelou um maior número de vasos na regiäo tratada, ainda que a diferença näo fosse significativa (respectivamente 123,81 + 21,48 e 95,14 + 41,19, p > 0,05). CONCLUSÕES: Injeçäo transmural de plasmídeo VEGF 165 resultou em significativo aumento no número de capilares na zona de transiçäo do IAM experimental. O aumento de capilares pela terapia gênica tem presumível efeito benéfico na reduçäo e recuperaçäo da área isquêmica.