Simultaneous identification of Trypanosoma cruzi surface and internal antigens reactive to different immunoglobulin classes (radio-immunoblotting)

RESUMO

Classes e subclasses de anticorpos apresentam diferentes funçöes, influenciando a resposta imune humoral de um hospedeiro, frente a um agente infeccioso. Na maioria dos sistemas, o alvo principal é representado pelos antígenos de membrana do parasita. Entretanto, a identificaçäo de antígenos de superficie de parasitas, reativos para classe (e subclasse) de imunoglobulinas que näo se ligam a proteína-A implica em imunoprecipitaçöes sucessivas, que levam a perda de antígenos e/ou reaçöes inespecíficas. Visando esse estudo, foi desenvolvida ua técnica denominada "radio-immunoblotting", através da qual a reatividade de imunoglobulinas de diferentes classes para antígenos de membrana (e/ou internos) foi analisada simultaneamente. O método constitui na marcaçäo prévia da superfície dos parasitas por radioiodaçäo, fracionamento dos polipeptídeos por SDS/PAGE, transferência das fraçöes para nitrocelulose, reaçäo com soros e conjugados anti-Igs - peroxidase a autroradiografia dos mesmos, a análise é feita comparando-se os antígenos comuns evidenciados na autoradiografia e nas tiras de nitrocelulose coradas com o substrato da peroxidase. Essa técnica foi utilizada para analisar antígenos de superfície de formas tripomastigotas de T. cruzi reativas para IgG, IgM e IgA provenientes de soros de pacientes com doença de Chagas na fase aguda. Obtiveram-se distintos padröes de reatividade para as diferentes classes de anticorpos provenientes de um mesmo soro humano