Caracterização de sistemas de anti-corpos-auto-antígenos associados ao padrão de imunofluorescência de pontos citoplasmáticos isolados / Caracterization of autoantibody-autoantigen systems associated with cytoplasm discrete speckled immunofluorescence pattern

RESUMO

Objetivo - Identificação e caracterização de auto-anticorpos e auto-antígenos associados ao padrão de imunofluorescéncia indireta (IFI) de Pontos Citoplasmáticos Isolados (PU). Materiais e métodos - Foram selecionados soros que apresentavam o padrão de PCI à IFI. Esses soros foram analisados por IFI dupla em microscopia confocal, imunomicroscopia eletrônica, immunoblotting, imunoprecipitação de antígenos protéicos sintetizados in vitro, HPTLC de lipídeos seguida de imunocoloração e análise de espectrometria de massas para antígenos lipídicos. Os dados clínicos foram obtidos por revisão de prontuários e entrevistas com os médicos assistentes. Resultados Dois sistemas de auto-antigeno-auto-anticorpo associados com o padrão de IFI de pontos citoplasmáticos isolados (PCI) foram identificados e denominados de padrão PCI-I e PCI-II. O padrão PCI-I foi caracterizado por 3 a 20 pontos brilhantes bem delimitados e homogeneamente distribuídos pelo citoplasma. O padrão PCI-11 foi caracterizado por apresentar mais de 30 pontos por todo o citoplasma, com predominância perinuclear, grande heterogeneidade de tamanho e tendência a aglomeração. De acordo com esta classificação foram obtidos 27 soros PCI-I e 6 soros PCI-II. Por IFI dupla em microscopia confocal e imuno-microscopia eletrônica os soros PCI-11 mostraram co-localização com os anticorpos monoclonais anti-LAMP-2 (proteína-2 associada à membrana do lisossomo) e anti-EEA1 (antígeno-1 do endossomo primário) e com receptor de transferrina, marcadores da via endocíticaexocítica. Os domínios citoplasmáticos reconhecidos pelos auto-anticorpos PCI-11 parecem ser delimitados por membrana. Por immunoblotting soros PCI-11 reconheceram uma banda com mobilidade relativa de 180kDa e imunoprecipitaram a proteína EEA1. Em contraste, os anticorpos PCI-I não apresentaram co-localização com anti-EEA1 e anti-LAMP-2, porém apresentaram co-localização parcial com o anticorpo monoclonal anti-GW182, que reconhece uma proteína de 182 kDa (GW182), presente em aglomerados citoplasmáticos de mRNA. Os soros PCI-I não demonstraram qualquer reatividade ao immunoblotting com diversos extratos celulares e não imunoprecipitaram as proteínas GW182 e EEA1 sintetizadas in vitro...