Producción y purificación de anticuerpos (IgY) a partir de huevos de gallinas inmunizadas con epimastigotas de trypanosoma cruzi / Production and purification of IgY antibodies from eggs laid by hens inmunized with trypanosoma cruzi epimastigotes
Contreras, Víctor T; De Lima, Ana R; Navarro, María C; Arteaga, Rosa Y; Graterol, Diana; Cabello, Liliana; Farias, María.
Salus
; 9(2): 21-27, ago. 2005. ilus, tab, graf
Artigo
em Espanhol
| LILACS | ID: lil-502799
No obstante las ventajas de producir anticuerpos en gallinas, no se ha reportado inducción y purificación de anticuerpos contra estadios de Trypanosoma cruzi en el modelo aviario. La inducción de anticuerpos anti-estadios de T. cruzi en gallina puede garantizar la producción de reactivos útiles en diagnóstico y terapéutica de la enfermedad de Chagas. Aquí reportamos la obtención y rápido aislamiento de IGY procedente de yema de huevos de gallinas inmunizadas contra epimastigotas de T. cruzi a los 7, 22 y 61 días post-inmunización. Se compararon tres estrategias de purificación de IgY el método de la dilución acuosa, el método del polietilén glicol (PEG) y el método del cloroformo-PEG, respecto a un estuche comercial. El método del cloroformo-PEG dio un rendimiento de 6,4 mg/mL de proteínas de yema de huevo de 61 días con una sensibilidad tal que 7 ng de IgY detectaron 1 µg de antígeno (ELISA). Por Western blot, 5 µg/mL de IgY revelaron 11 antígenos diferentes en 8 µg de proteína total de epimastigotas. El análisis por SDS-PAGE demostró que las IgY extraídas contienen dos bandas proteícas dominantes de 70/57 y 37/35 kDa y dos tenues de 81 y 41 kDa, las cuales pueden ser eliminadas por re-precipitación con PEG. Para la extracción de IgY el método del cloroformo-polietilén glicol dio la mejor combinación por facilidad de ejecución y bajo costo. Si bien rindió 50 por ciento menos que el estuche comercial bajo las mismas condiciones, la sensibilidad de los anticuerpos fue 4 veces mayor. Estos resultados evidencian la factibilidad del modelo aviario para producir anticuerpos contra estadios de T. cruzi y muestran la experticia para purificarlos usando una tecnología local de bajo costo
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