A
quantitative real time polymerase chain reaction (
PCR) revealed
canine distemper virus presence in peripheral
blood samples from asymptomatic and non vaccinated
dogs. Samples from eleven domestic
dogs with no signs of
canine distemper and not vaccinated at the month of collection were used.
Canine distemper virus vaccine samples in
VERO cells were used as positive controls.
RNA was isolated with Trizol®, and treated with a TURBO
DNA-free kit. Primers were designed for
canine distemper virus nucleocapsid protein coding region fragment amplification (84 bp). Canine b-
actin (93 bp) was utilized as the endogenous control for normalization. Quantitative results of
real time PCR generated by ABI Prism 7000 SDS
Software showed that 54.5 percent of
dogs with asymptomatic
canine distemper were positive for
canine distemper virus.
Dissociation curves confirmed the
specificity of the
real time PCR fragments. This
technique could detect even a few copies of
viral RNA and identificate subclinically infected
dogs providing accurate
diagnosis of this
disease at an early stage.
A
reação em cadeia da polimerase (
PCR) em
tempo real revelou a presença do
vírus da cinomose canina em amostra de
sangue de
cães assintomáticos e não vacinados. Amostra de onze
cães domésticos sem nenhum
sinal clínico de
cinomose e que não foram vacinados no mês da coleta de
sangue foram utilizados para
análise. Amostra vacinal do
vírus da cinomose canina em
células VERO foi utilizada como controle positivo. O
RNA total foi isolado utilizando-se Trizol®, e tratadas com o Kit TURBO
DNA-free. Os iniciadores foram desenhados para amplificar a região do
nucleocapsídeo viral com 319pb e 84pb para a
PCR convencional e
PCR em tempo real, respectivamente. O fragmento alvo da b-
actina canina com 93pb foi utilizado como controle endógeno e normalizador. Resultados quantitativos da
PCR em tempo real gerados pelo programa ABI Prism 7000
SDS demonstraram que 54,5 por cento dos
cães assintomáticos foram positivos para o
vírus da cinomose canina. As curvas de
dissociação confirmaram a
especificidade dos fragmentos da
PCR em tempo real. A
detecção precoce do
RNA viral é importante para a identificação de
cães subclinicamente infectados e limitar a
difusão da
doença.