Anticoagulants and their effects on the hematological and biochemical parameters of yellow-spotted amazon river turtle / Anticoagulantes e seus efeitos em parâmetros hematológicos e bioquímicos de tracajá

Knowledge of suitable methods and reagents for assessing the health condition of specimens of a given species is essential. The present study evaluated the efficacy of the heparin anticoagulants 5,000 I.U. mL-1, Na2EDTA, and K3EDTA on the blood parameters of yellow-spotted amazon river turtle Podocnemis unifilis, employing different solutions for red blood cells count. The use of the various anticoagulants evaluated after 10 hours of storage efficiently inhibited coagulation in blood samples from P. unifilis. An increased number of erythrocytes was observed with the use of K3EDTA 5% when compared with heparin. Statistically significant changes in the erythrocyte number were observed with the use of the different solutions. Solutions which featured sodium citrate and formaldehyde in their composition, allowed erythrocytes counting up to 120 hours after blood collection, without a change in values. The use of the heparin anticoagulants 5,000 I.U. mL-1, Na2EDTA 3%, Na2EDTA 5%, K3EDTA 3% was recommended in the hematological analysis of P. unifilis. Also recommended was the use of the formaldehyde-citrate solution containing 1.9 g of sodium citrate and 1.0 mL of formaldehyde (in 50 mL of distilled water) to perform red blood cells counts in yellow-spotted amazon river turtle.

O conhecimento sobre métodos e reagentes apropriados para as avaliações da condição de saúde de exemplares de determinada espécie é fundamental. Este estudo avaliou a eficácia dos anticoagulantes heparina 5.000 U.I. mL-1, Na2EDTA (3% e 5%), e K3EDTA (3 e 5%) em parâmetros sanguíneos de tracajá (Podocnemis unifilis), bem como diferentes soluções para contagem de eritrócitos totais. A coagulação foi eficientemente inibida nas amostras de sangue de P. unifilis com o uso dos diferentes anticoagulantes avaliados após 10 horas de armazenamento. Maior número de eritrócitos com o uso de K3EDTA 5% foi observado quando comparado com a coleta de sangue realizada com heparina. Diferenças, estatisticamente significativas, entre as contagens de eritrócitos com o uso das diferentes soluções de reagentes avaliadas foram verificadas. As soluções contendo citrato de sódio e formol na composição possibilitaram contagens de eritrócitos até 120 horas após a coleta, sem alteração em seus valores. Recomenda-se o uso dos anticoagulantes heparina 5000 U.I. mL-¹, Na2EDTA 3%, Na2EDTA 5%, K3EDTA 3% nas análises hematológicas de tracajá. Assim como o uso da solução de formol-citrato contendo 1,9 g de citrato de sódio e 1,0 mL de formol (em 50 mL de água destilada) para realização das contagens de eritrócitos totais em tracajá.

Isolation, fractionation and anticoagulant activity of a sulfated galactan extracted from the green algae Penicillus capitatus / Isolamento, fracionamento e atividade anticoagulante da galactana sulfatada extraída da alga verde Penicillus capitatus

Marine algae are natural sources of macromolecules known as sulfated polysaccharides. This class of compounds has attracted the interest of Pharmaceutical Sciences due to its pharmacological anticoagulant, antiplatelet and antithrombotic properties. Therefore, this study evaluated the anticoagulant potential of sulfated polysaccharides extracted from the algae Penicillus capitatus. The extracted sulfated polysaccharides were purified, partially characterized and their anticoagulant activity was evaluated. The extraction process followed by ethanol precipitation resulted in five fractions. Among the analyzed fractions, F44 contained highest concentration of sulfated polysaccharides. After the purified fraction F23, F44 displayed in vitro anticoagulant activity in a time testing for activated partial thromboplastin time and pro-thrombin time. The preferential mechanism effect was based on interactions between thrombin and factor Xa. Additional studies on structure pharmacological are required to test the viability of the use of sulfated polysaccharides as therapeutic agents.

As algas marinhas são fontes naturais de macromoléculas conhecidas como polissacarídeos sulfatados. Esta classe de compostos atraiu o interesse das Ciências Farmacêuticas devido às suas propriedades farmacológicas como anticoagulante, antiplaquetária e antitrombótica. Portanto, este estudo tem como objetivo avaliar o potencial anticoagulante de polissacarídeos sulfatados extraídos de algas de Penicillus capitatus. Os polissacarídeos sulfatados extraídos foram purificados, parcialmente caracterizados e sua atividade anticoagulante foi avaliada. O processo de extração seguido pela precipitação com etanol resultou em cinco frações. Entre as frações analisadas, F44 foi a maior concentração de polissacarídeos sulfatados. Após a purificação, as frações F23 e F44 mostraram atividade anticoagulante in vitro em um teste de tempo de tromboplastina parcialmente ativada e tempo de protrombina. Seu mecanismo preferencial é baseado nas interações entre trombina e fator Xa. Estudos adicionais sobre a estrutura farmacológica são necessários para testar a viabilidade do uso como agente terapêutico.

Isolation, fractionation and anticoagulant activity of a sulfated galactan extracted from the green algae Penicillus capitatus / Isolamento, fracionamento e atividade anticoagulante da galactana sulfatada extraída da alga verde Penicillus capitatus

Marine algae are natural sources of macromolecules known as sulfated polysaccharides. This class of compounds has attracted the interest of Pharmaceutical Sciences due to its pharmacological anticoagulant, antiplatelet and antithrombotic properties. Therefore, this study evaluated the anticoagulant potential of sulfated polysaccharides extracted from the algae Penicillus capitatus. The extracted sulfated polysaccharides were purified, partially characterized and their anticoagulant activity was evaluated. The extraction process followed by ethanol precipitation resulted in five fractions. Among the analyzed fractions, F44 contained highest concentration of sulfated polysaccharides. After the purified fraction F23, F44 displayed in vitro anticoagulant activity in a time testing for activated partial thromboplastin time and pro-thrombin time. The preferential mechanism effect was based on interactions between thrombin and factor Xa. Additional studies on structure pharmacological are required to test the viability of the use of sulfated polysaccharides as therapeutic agents.(AU)

As algas marinhas são fontes naturais de macromoléculas conhecidas como polissacarídeos sulfatados. Esta classe de compostos atraiu o interesse das Ciências Farmacêuticas devido às suas propriedades farmacológicas como anticoagulante, antiplaquetária e antitrombótica. Portanto, este estudo tem como objetivo avaliar o potencial anticoagulante de polissacarídeos sulfatados extraídos de algas de Penicillus capitatus. Os polissacarídeos sulfatados extraídos foram purificados, parcialmente caracterizados e sua atividade anticoagulante foi avaliada. O processo de extração seguido pela precipitação com etanol resultou em cinco frações. Entre as frações analisadas, F44 foi a maior concentração de polissacarídeos sulfatados. Após a purificação, as frações F23 e F44 mostraram atividade anticoagulante in vitro em um teste de tempo de tromboplastina parcialmente ativada e tempo de protrombina. Seu mecanismo preferencial é baseado nas interações entre trombina e fator Xa. Estudos adicionais sobre a estrutura farmacológica são necessários para testar a viabilidade do uso como agente terapêutico.(AU)

Properties, bioactive potential and extraction processes of glycosaminoglycans: an overview / Propriedades, potencial bioativo e processos de extração de glicosaminoglicanos: uma visão geral

Glycosaminoglycans (GAGs) are long-chain polysaccharides that are divided into sulphates and non-sulphates, these being chondroitin sulphate, heparan sulphate, dermatan sulphate, heparin sulphate and the only non-sulphate in the group is hyaluronic acid. GAGs are obtained from animal tissue and by an expensive low-yield extraction process; however, they are highly commercially valued polysaccharides and exploited in the biomedical market. Their disaccharidic composition, chain length and sulfation pattern present great variability depending on the species and extraction factors. GAGs possess immunomodulatory, antioxidant, antiviral, anti-inflammatory, neuroprotective, antiproliferative and anticoagulant properties, functioning as therapeutic agents modulating an array of biological processes. This report presents the general aspects of each GAG, source and extraction process, in addition to the characteristics that give them the most varied therapeutic properties and pharmacological applications.(AU)

Os glicosaminoglicanos (GAGs) são polissacarídeos de cadeias longas que se dividem em sulfatados e não sulfatados, sendo estes, sulfato de condroitina, sulfato de heparana, sulfato de dermatana, sulfato de heparina e o único não sulfatado do grupo que é o ácido hialurônico. Os GAGs são encontrados em todo tecido animal, são extraídos por um processo de alto custo e baixo rendimento, no entanto, o material obtido é valorizado comercialmente e amplamente explorado no mercado biomédico. Sua composição dissacarídica, comprimento da cadeia e padrão de sulfatação apresentam grande variabilidade dependendo das espécies e fatores de extração. Os GAGs possuem propriedades imunomoduladoras, antioxidantes, antivirais, anti-inflamatórias, neuroprotetoras, antiproliferativas e anticoagulantes, além de farmacológicas, funcionando como agentes terapêuticos moduladores de uma série de processos biológicos. Este relatório apresenta os aspectos gerais de cada GAG, fonte e processo de extração, além das características que lhes conferem as mais variadas propriedades terapêuticas e aplicações farmacológicas.(AU)

Role of crotoxin in coagulation: novel insights into anticoagulant mechanisms and impairment of inflammation-induced coagulation

Snake venom phospholipases A2 (svPLA2) are biologically active toxins, capable of triggering and modulating a wide range of biological functions. Among the svPLA2s, crotoxin (CTX) has been in the spotlight of bioprospecting research due to its role in modulating immune response and hemostasis. In the present study, novel anticoagulant mechanisms of CTX, and the modulation of inflammation-induced coagulation were investigated. Methods: CTX anticoagulant activity was evaluated using platelet poor plasma (PPP) and whole blood (WB), and also using isolated coagulation factors and complexes. The toxin modulation of procoagulant and pro-inflammatory effects was evaluated using the expression of tissue factor (TF) and cytokines in lipopolysaccharide (LPS)-treated peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and in WB. Results: The results showed that CTX impaired clot formation in both PPP and WB, and was responsible for the inhibition of both intrinsic (TF/factor VIIa) and extrinsic (factor IXa/factor VIIIa) tenase complexes, but not for factor Xa and thrombin alone. In addition, the PLA2 mitigated the prothrombinase complex by modulating the coagulation phospholipid role in the complex. In regards to the inflammation-coagulation cross talk, the toxin was capable of reducing the production of the pro-inflammatory cytokines IL-1β, IL-6 and TNF-α, and was followed by decreased levels of TF and procoagulant activity from LPS-treated PBMC either isolated or in WB. Conclusion: The results obtained in the present study recognize the toxin as a novel medicinal candidate to be applied in inflammatory diseases with coagulation disorders.(AU)

Role of crotoxin in coagulation: novel insights into anticoagulant mechanisms and impairment of inflammation-induced coagulation

Snake venom phospholipases A2 (svPLA2) are biologically active toxins, capable of triggering and modulating a wide range of biological functions. Among the svPLA2s, crotoxin (CTX) has been in the spotlight of bioprospecting research due to its role in modulating immune response and hemostasis. In the present study, novel anticoagulant mechanisms of CTX, and the modulation of inflammation-induced coagulation were investigated. Methods: CTX anticoagulant activity was evaluated using platelet poor plasma (PPP) and whole blood (WB), and also using isolated coagulation factors and complexes. The toxin modulation of procoagulant and pro-inflammatory effects was evaluated using the expression of tissue factor (TF) and cytokines in lipopolysaccharide (LPS)-treated peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and in WB. Results: The results showed that CTX impaired clot formation in both PPP and WB, and was responsible for the inhibition of both intrinsic (TF/factor VIIa) and extrinsic (factor IXa/factor VIIIa) tenase complexes, but not for factor Xa and thrombin alone. In addition, the PLA2 mitigated the prothrombinase complex by modulating the coagulation phospholipid role in the complex. In regards to the inflammation-coagulation cross talk, the toxin was capable of reducing the production of the pro-inflammatory cytokines IL-1β, IL-6 and TNF-α, and was followed by decreased levels of TF and procoagulant activity from LPS-treated PBMC either isolated or in WB. Conclusion: The results obtained in the present study recognize the toxin as a novel medicinal candidate to be applied in inflammatory diseases with coagulation disorders.(AU)

In vitro haemostatic efficacy of aqueous, methanol and ethanol plant extracts of three medicinal plant species in Palestine / Eficácia hemostática in vitro de extratos aquosos, metanólicos e etanólicos de três espécies de plantas medicinais na Palestina

The haemostatic efficacy of different extract types of Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) and Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) was evaluated in this study via the Prothrombin time (PT) and Activated partial thromboplastin time (aPTT) analysis. Aqueous, methanol and ethanol extracts of the examined plant species leaves were prepared to a final concentration 50 mg/mL. In vitro PT and aPTT assays were conducted on normal platelet poor plasma blood samples by a digital coagulation analyzer. The obtained results revealed anticoagulation activity of all investigated plant species with observed variations among them. The aqueous and ethanol extracts of T. spicata as well as the aqueous extract of S. thymbra prolonged PT values significantly (p < 0.05). While, all V. fruticulosum extract types have had no significant effect on the PT values. The recorded aPTT data showed that all aqueous extracts have had a significant effect on the blood haemostasis as they increased aPTT values in all plant species under study. Out of which, both the ethanol and methanol extracts of T. spicata and methanol extract of S. thymbra showed similar effect. Of great concern, it was clearly noticed that the aqueous and ethanol extract of T. spicata and the aqueous extract of S. thymbra possess the strongest anticoagulation effect as they increased both PT and aPTT values significantly relative to the control (p < 0.05). The variable anticoagulation bioactivity among the studied plant species could be referred to the various solvents degrees of solubility of different phyto-constituents. Thus, the efficacy of the plant species extracts evaluation as anticoagulants or coagulants were related to the plant species and to the solvent of extraction.(AU)

A eficácia hemostática de diferentes tipos de extrato de Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) e Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) foi avaliada neste estudo pelo tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). Os extratos aquosos, metanólicos e etanólicos das folhas das espécies de plantas examinadas foram preparados para uma concentração final de 50 mg/mL. Os ensaios de TP e TTPa in vitro foram realizados em amostras normais de sangue, pobre em plaquetas, por um analisador de coagulação digital. Os resultados obtidos revelaram atividade anticoagulante de todas as espécies de plantas investigadas, com variações observadas dentre elas. Os extratos aquosos e etanólicos de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra prolongaram significativamente os valores de TP (p < 0,05). Entretanto, todos os tipos de extratos de V. fruticulosum não tiveram efeito significativo sobre os valores de TP. Os dados registrados do TTPa mostraram que todos os extratos aquosos tiveram um efeito significativo na hemostase do sangue, pois aumentaram os valores de TTPa em todas as espécies de plantas em estudo. Dos quais, ambos os extratos etanólicos e metanólicos de T. spicata e o extrato metanólico de S. thymbra mostraram efeito semelhante. De grande preocupação, notou-se claramente que os extratos aquoso e etanólico de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra apresentam efeito anticoagulante mais forte, aumentando os valores de TP e TTPa significativamente em relação ao controle (p < 0,05). A variável bioatividade anticoagulante dentre as espécies vegetais estudadas pôde ser referida aos vários graus de solventes de solubilidade de diferentes fitoconstituintes. Assim, a eficácia da avaliação de extratos de espécies vegetais como anticoagulantes ou coagulantes foi relacionada às espécies vegetais e ao solvente de extração.(AU)

In vitro haemostatic efficacy of aqueous, methanol and ethanol plant extracts of three medicinal plant species in Palestine

Abstract The haemostatic efficacy of different extract types of Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) and Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) was evaluated in this study via the Prothrombin time (PT) and Activated partial thromboplastin time (aPTT) analysis. Aqueous, methanol and ethanol extracts of the examined plant species leaves were prepared to a final concentration 50 mg/mL. In vitro PT and aPTT assays were conducted on normal platelet poor plasma blood samples by a digital coagulation analyzer. The obtained results revealed anticoagulation activity of all investigated plant species with observed variations among them. The aqueous and ethanol extracts of T. spicata as well as the aqueous extract of S. thymbra prolonged PT values significantly (p 0.05). While, all V. fruticulosum extract types have had no significant effect on the PT values. The recorded aPTT data showed that all aqueous extracts have had a significant effect on the blood haemostasis as they increased aPTT values in all plant species under study. Out of which, both the ethanol and methanol extracts of T. spicata and methanol extract of S. thymbra showed similar effect. Of great concern, it was clearly noticed that the aqueous and ethanol extract of T. spicata and the aqueous extract of S. thymbra possess the strongest anticoagulation effect as they increased both PT and aPTT values significantly relative to the control (p 0.05). The variable anticoagulation bioactivity among the studied plant species could be referred to the various solvents degrees of solubility of different phyto-constituents. Thus, the efficacy of the plant species extracts evaluation as anticoagulants or coagulants were related to the plant species and to the solvent of extraction.

Resumo A eficácia hemostática de diferentes tipos de extrato de Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) e Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) foi avaliada neste estudo pelo tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). Os extratos aquosos, metanólicos e etanólicos das folhas das espécies de plantas examinadas foram preparados para uma concentração final de 50 mg/mL. Os ensaios de TP e TTPa in vitro foram realizados em amostras normais de sangue, pobre em plaquetas, por um analisador de coagulação digital. Os resultados obtidos revelaram atividade anticoagulante de todas as espécies de plantas investigadas, com variações observadas dentre elas. Os extratos aquosos e etanólicos de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra prolongaram significativamente os valores de TP (p 0,05). Entretanto, todos os tipos de extratos de V. fruticulosum não tiveram efeito significativo sobre os valores de TP. Os dados registrados do TTPa mostraram que todos os extratos aquosos tiveram um efeito significativo na hemostase do sangue, pois aumentaram os valores de TTPa em todas as espécies de plantas em estudo. Dos quais, ambos os extratos etanólicos e metanólicos de T. spicata e o extrato metanólico de S. thymbra mostraram efeito semelhante. De grande preocupação, notou-se claramente que os extratos aquoso e etanólico de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra apresentam efeito anticoagulante mais forte, aumentando os valores de TP e TTPa significativamente em relação ao controle (p 0,05). A variável bioatividade anticoagulante dentre as espécies vegetais estudadas pôde ser referida aos vários graus de solventes de solubilidade de diferentes fitoconstituintes. Assim, a eficácia da avaliação de extratos de espécies vegetais como anticoagulantes ou coagulantes foi relacionada às espécies vegetais e ao solvente de extração.

Extraction, physical-chemical characterization and in vitro inhibitorypotential of thrombin generation of crude sulfated polysaccharides from Brazilian tropical seaweeds / Extração, caracterização físico-química e potencial inibitório in vitro da geração detrombina de polissacarídeos sulfatados brutos de algas marinhas tropicais brasileiras

The biotechnological value of macroalgae for screening assays of thrombin generation-TG using sulfated polysaccharides-SPs as substitutes to heparin has been poorly explored. Five Brazilian species of macroalgae (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides and C. racemosa) wereanalyzed and compared for their abundance, physical-chemical characteristics and in vitro anticoagulant assays of activated partial thromboplastin time-APTT, prothrombin time-PT and TG. Papain extraction yielded (p < 0.001) from 0.66±0.03% (C. racemosa) to 41.60±1.10% (Halymenia sp.) of crude SPs varying sulfate (8.41-42.60%) and total sugars (47.80-70.53%). Crude SPs showed difference in mobility and resolution pattern by agarose electrophoresis, while polyacrylamide analysis revealed SPs of > 100 kDa. These procedures,combined with the use of Stains-All, also indicated nonSPs. APTTs ranged from 2.81 (A. muscoides) to 21.30 IU(Halymenia sp.) vs. heparin (193 IU), and were dependent on sulfation of the crude SPs. PT was not altered. Withrespect to TG assay, crude SPs modified concentration-dependent and independently from molecular mass TGby both intrinsic/extrinsic pathways in 60-fold diluted human plasma, with total intrinsic inactivation using crudeSPs from A. muscoides in parallel to heparin (p < 0.05). Thrombosis in vitro is differentially modulated by distinctcrude SPs from Brazilian seaweeds.(AU)

O valor biotecnológico das macroalgas para ensaios de varredura de geração de trombina-GT pouco tem sido explorado usando polissacarídeos sulfatados-PSs como substitutos à heparina. Foramanalisadas e comparadas cinco espécies brasileiras de macroalgas (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides e C. racemosa) quanto à abundância, às característicasfísico-químicas e os ensaios anticoagulantes in vitro de tempo de tromboplastina parcial ativada-TTPA, aotempo de protrombina-TP e a GT. A extração com papaína rendeu (p < 0,001) de 0,66±0,03%(C. racemosa) a 41,60±1,10% (Halymenia sp.) de PSs brutos variando sulfato (8,41-42,60%) e açúcarestotais (47,80-70,53%). Os PSs brutos mostraram diferenças na mobilidade e resolução por eletroforese emagarose, enquanto pela análise em poliacrilamida revelou PSs brutos de >100 kDa. Esses procedimentos,combinados ao uso de azul de toluidina/Stains-All, indicaram também polissacarídeos-não sulfatados. OsTTPAs foram dependentes da sulfatação dos PSs brutos e variaram de 2,81 (A. muscoides) a 21,30 UI (Halymenia sp.) vs. heparina (193 UI). O TP não foi alterado. Com respeito ao ensaio de GT, os PSs brutos modificaram, dependente de concentração e independentemente de massa molecular, GT pelas viasintrínseca/extrínseca no plasma humano diluído 60 vezes, com inativação intrínseca total usando PSs brutosde A. muscoides em paralelo à heparina (p < 0,05). A trombose in vitro é modulada diferencialmente porPSs brutos distintos de algas marinhas brasileiras.(AU)

Extraction, physical-chemical characterization and in vitro inhibitorypotential of thrombin generation of crude sulfated polysaccharides from Brazilian tropical seaweeds / Extração, caracterização físico-química e potencial inibitório in vitro da geração detrombina de polissacarídeos sulfatados brutos de algas marinhas tropicais brasileiras

The biotechnological value of macroalgae for screening assays of thrombin generation-TG using sulfated polysaccharides-SPs as substitutes to heparin has been poorly explored. Five Brazilian species of macroalgae (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides and C. racemosa) wereanalyzed and compared for their abundance, physical-chemical characteristics and in vitro anticoagulant assays of activated partial thromboplastin time-APTT, prothrombin time-PT and TG. Papain extraction yielded (p 100 kDa. These procedures,combined with the use of Stains-All, also indicated nonSPs. APTTs ranged from 2.81 (A. muscoides) to 21.30 IU(Halymenia sp.) vs. heparin (193 IU), and were dependent on sulfation of the crude SPs. PT was not altered. Withrespect to TG assay, crude SPs modified concentration-dependent and independently from molecular mass TGby both intrinsic/extrinsic pathways in 60-fold diluted human plasma, with total intrinsic inactivation using crudeSPs from A. muscoides in parallel to heparin (p < 0.05). Thrombosis in vitro is differentially modulated by distinctcrude SPs from Brazilian seaweeds.

O valor biotecnológico das macroalgas para ensaios de varredura de geração de trombina-GT pouco tem sido explorado usando polissacarídeos sulfatados-PSs como substitutos à heparina. Foramanalisadas e comparadas cinco espécies brasileiras de macroalgas (Gracilaria birdiae, Acanthophora muscoides, Halymenia sp., Caulerpa cupressoides e C. racemosa) quanto à abundância, às característicasfísico-químicas e os ensaios anticoagulantes in vitro de tempo de tromboplastina parcial ativada-TTPA, aotempo de protrombina-TP e a GT. A extração com papaína rendeu (p 100 kDa. Esses procedimentos,combinados ao uso de azul de toluidina/Stains-All, indicaram também polissacarídeos-não sulfatados. OsTTPAs foram dependentes da sulfatação dos PSs brutos e variaram de 2,81 (A. muscoides) a 21,30 UI (Halymenia sp.) vs. heparina (193 UI). O TP não foi alterado. Com respeito ao ensaio de GT, os PSs brutos modificaram, dependente de concentração e independentemente de massa molecular, GT pelas viasintrínseca/extrínseca no plasma humano diluído 60 vezes, com inativação intrínseca total usando PSs brutosde A. muscoides em paralelo à heparina (p < 0,05). A trombose in vitro é modulada diferencialmente porPSs brutos distintos de algas marinhas brasileiras.

Perfil hematológico de cães em diferentes concentrações de anticoagulante e bioquímica sérica em tempos diferentes de armazenamento / Hematologic profile of dogs in different concentrations of anticoagulant and serum biochemistry at different storage times

O objetivo deste estudo foi verificar as alterações hematológicas e bioquímicas em amostras sanguíneas de cães, em diferentes concentrações de anticoagulante EDTA-Na2 e diferentes tempos de armazenamento em temperatura entre 4 e 8°C por até 48 horas. Para isso, foram coletados 12mL de sangue por venopunção jugular ou cefálica de 30 cães (Canis lupus familiaris), procedentes do atendimento clínico realizados no Hospital Veterinário da UFERSA - Mossoró-RN. As amostras foram distribuídas em 4 tubos de ensaio, sendo 3 tubos contendo 50uL de EDTA-Na2 para a análise hematológica, preenchidos com 1mL, 3mL e 4mL, e o quarto tubo, para análise bioquímica, sem anticoagulante, foi acondicionado 4mL da amostra. As análises foram realizadas durante a primeira hora, 24 e 48 horas após a coleta. Posteriormente às análises, observou-se que as variáveis hematológicas se mostraram estáveis ao longo do tempo e independente da concentração de anticoagulante, sem diferenças significativas. Os resultados revelaram que a relação sangue/anticoagulante não interfere nos parâmetros do hemograma quando mantidas em condições adequadas de armazenamento e processadas em analisador hematológico Scil Vet abc™. Quanto às análises bioquímicas, submetidas às mesmas condições de armazenamento, também se mostraram estáveis por até 48 horas. Desse modo, conclui-se que as amostras sanguíneas podem ser armazenadas entre 4°C e 8°C por até 48 horas.(AU)

The objective of this study was to verify hematological and biochemical alterations in blood samples from dogs, in different concentrations of anticoagulant EDTA-Na2 and different storage times in temperature between 4 and 8°C for up to 48 hours. For this, 12mL of blood were collected by jugular or cephalic venipuncture from 30 dogs (Canis lupus familiaris), from the clinical care performed at the Veterinary Hospital of UFERSA - Mossoró-RN. The samples were distributed in 4 test tubes, 3 tubes containing 50uL of EDTA-Na2 for the hematological analysis, filled with 1mL, 3mL and 4mL, and the fourth tube, for biochemical analysis, without anticoagulant, was conditioned 4 mL of the sample. The analyzes were performed during the first hour, 24 and 48 hours after collection. Subsequent to the analyzes, it was observed that the hematological variables were stable over time and independent of the anticoagulant concentration, without significant differences. The results showed that the blood / anticoagulant ratio did not interfere in the hemogram when stored under adequate conditions of storage and processed in a hematology analyzer Scil Vet abc ™. As for the biochemical analyzes, submitted to the same storage conditions, they were also stable for up to 48 hours. Thus, it is concluded that blood samples can be stored between 4°C and 8°C for up to 48 hours.(AU)

Consumption Pattern of Bromadiolone in Presence of Alternative Food by House Mice (Mus musculus) Infesting Poultry Farms

Poultry farms in Central Argentina are often infested by Mus musculus L., despite the regular application of the rodenticide bromadiolone. This failure may be explained by the consumption pattern of mice, which may prefer alternative foods available on the farms to bromadiolone baits. Here we examine the consumption pattern of bromadiolone in the presence of wheat by M. musculus infesting poultry farms compared with the laboratory CF1 mouse strain. Overall, the poultry farm mice had longer survival and lower total food consumption in comparison with the CF1 mice. On the first day of the experiment, rodents from both strains and sexes consumed bromadiolone in the same proportion as wheat. On the second day, female mice of both origins showed a significant decrease in the consumption of bromadiolone, while males kept that proportion constant. Despite the consumption differences between males and females, survival rates were not different. We concluded that rodents from farms behaved as if they had never been in contact with bromadiolone, since they showed the same pattern of poison consumption that the CF1 mice. Females may have associated physical upset with the consumption of bromadiolone, since they decreased its consumption relative to wheat. However, this consumption pattern did not help them to achieve higher survival than males. On poultry farms, the balanced food fed to chickens may function as an alternative food to the poison for rodents. Therefore, we propose that rodenticide should be applied during downtime, when shed are cleaned and there is no chicken feed, which could be used as alternative food.(AU)

Consumption Pattern of Bromadiolone in Presence of Alternative Food by House Mice (Mus musculus) Infesting Poultry Farms

Poultry farms in Central Argentina are often infested by Mus musculus L., despite the regular application of the rodenticide bromadiolone. This failure may be explained by the consumption pattern of mice, which may prefer alternative foods available on the farms to bromadiolone baits. Here we examine the consumption pattern of bromadiolone in the presence of wheat by M. musculus infesting poultry farms compared with the laboratory CF1 mouse strain. Overall, the poultry farm mice had longer survival and lower total food consumption in comparison with the CF1 mice. On the first day of the experiment, rodents from both strains and sexes consumed bromadiolone in the same proportion as wheat. On the second day, female mice of both origins showed a significant decrease in the consumption of bromadiolone, while males kept that proportion constant. Despite the consumption differences between males and females, survival rates were not different. We concluded that rodents from farms behaved as if they had never been in contact with bromadiolone, since they showed the same pattern of poison consumption that the CF1 mice. Females may have associated physical upset with the consumption of bromadiolone, since they decreased its consumption relative to wheat. However, this consumption pattern did not help them to achieve higher survival than males. On poultry farms, the balanced food fed to chickens may function as an alternative food to the poison for rodents. Therefore, we propose that rodenticide should be applied during downtime, when shed are cleaned and there is no chicken feed, which could be used as alternative food.

Giant Anteater (Myrmecophaga tridactyla Linnaeus, 1758) of the Brazilian cerrado: hematology and storage effect / Tamanduás-bandeiras (Myrmecophaga tridactyla Linnaeus, 1758) do cerrado brasileiro: hematologia e efeito de estocagem

Giant Anteater (Myrmecophaga tridactyla) is a vulnerable species because of progressive habitat destruction, mostly affected by wildfires and car accidents. The increasing number of animals that are attended by wildlife rescue centres reinforces the need of knowledge about haematological parameters, especially for those that inhabit Brazilian cerrado biome. For this purpose and in order to establish reference values for this species and also to compare them with previous studies, haematological analysis of captive giant anteaters from Brazilian cerrado were performed. Moreover, the alterations of blood samples after 24 and 48 hours of storage at refrigeration temperatures (4oC) and preserved with two different EDTA concentrations (5% and 10%) were studied. Means and standard deviations of haematological parameters analysed immediately after collection were: RBC: 2,07 x106/µL ± 0,40; hematocrit: 38,08%± 5,93; haemoglobin: 11.33g/dL±2.15; MCV:186.52 fL±21.72; MCHC: 29.68g/dL±2.56; MCH: 55.08pcg±5,94; total leucocytes: 8.142/µL±2.441; neutrophils: 5.913/µL±2.168; lymphocytes: 1.460/µL±740; eosinophil: 522/µL±385; monocytes: 247/µL±176; thrombocytes: 123.458/µL±31.362 and total plasma protein: 6.23g/dL±0.49. This data shows evidence of the existence of important differences between these values and others from other areas, either from Brazil or from other South American countries. Those variations might be connected to environment, genetic, nutritional and/or management factors. Regarding the storage effect analysis, it can be concluded that in giant anteaters, haematological analysis can be performed until 24h after collection without any significant alterations on the haematological parameters, except for thrombocytes. Concerning the different EDTA concentrations, it can be concluded that there are no quantitative differences in haematological variables. Nevertheless, relevant morphologic alterations in blood cells can be observed after a 24h storage period, being most noticeable in the leucocytes. Those alterations can lead to misinterpretation of the results, interfering diagnosis, prognosis and treatment.(AU)

O tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) é uma espécie vulnerável devido à destruição progressiva do seu habitat natural, sendo afetado por queimadas e atropelamentos. O aumento na casuística de atendimentos de animais silvestres reforça a necessidade de se ter conhecimento dos parâmetros hematológicos, em especial para os que vivem no bioma do cerrado. Por isso, este trabalho teve por objetivos realizar o hemograma de tamanduás-bandeiras de cativeiro localizados no cerrado brasileiro, a fim de estabelecer valores de referência para essa espécie e compará-los a estudos prévios. Além disso, verificar quais alterações podem ser encontradas em amostras armazenadas por 24 e 48 horas após a colheita, em temperatura de refrigeração (4oC) e tratadas com duas concentrações distintas de EDTA (5% e 10%). A média e o desvio padrão das variáveis hematológicas encontradas nas amostras processadas logo após a colheita foram: hemácias (2,07x106/µL±0,40); volume globular (38,08%± 5,93); hemoglobina (11,33g/dL±2,15); VCM (186,52 fL±21,72); CHCM (29,68g/dL±2,56); HCM (55,08pcg±5,94); leucócitos totais (8.142/µL±2.441); neutrófilos (5.913/µL±2.168); linfócitos (1.460/µL±740); eosinófilos (522/µL±385); monócitos (247/µL±176); plaquetas (123.458/µL±31.362) e proteínas plasmáticas totais (6,23g/dL±0,49). Tais dados permitem afirmar que existem importantes diferenças entre os valores hematológicos destes em relação aos animais provenientes de outras regiões, tanto do Brasil quanto de outros países da América do Sul. Provavelmente, tais divergências estão associadas a fatores ambientais, genéticos, nutricionais e/ou de manejo. Quanto à análise das amostras estocadas, conclui-se que, em tamanduás-bandeiras, as amostras para a realização de hemograma podem ser processadas até 24 horas após a colheita, sem alteração significativa das variáveis hematológicas, com exceção das plaquetas. Com relação às duas concentrações de EDTA, pode-se inferir que não há diferença quantitativa entre ambas para as variáveis hematológicas. Contudo, é possível constatar que o EDTA promove alterações morfológicas relevantes nas células sanguíneas após 24 horas de armazenamento, sendo os leucócitos os mais afetados. Tais alterações, quando relatadas, podem induzir interpretações equivocadas, interferindo no diagnóstico, prognóstico e tratamento.(AU)

Giant Anteater (Myrmecophaga tridactyla Linnaeus, 1758) of the Brazilian cerrado: hematology and storage effect / Tamanduás-bandeiras (Myrmecophaga tridactyla Linnaeus, 1758) do cerrado brasileiro: hematologia e efeito de estocagem

Giant Anteater (Myrmecophaga tridactyla) is a vulnerable species because of progressive habitat destruction, mostly affected by wildfires and car accidents. The increasing number of animals that are attended by wildlife rescue centres reinforces the need of knowledge about haematological parameters, especially for those that inhabit Brazilian cerrado biome. For this purpose and in order to establish reference values for this species and also to compare them with previous studies, haematological analysis of captive giant anteaters from Brazilian cerrado were performed. Moreover, the alterations of blood samples after 24 and 48 hours of storage at refrigeration temperatures (4oC) and preserved with two different EDTA concentrations (5% and 10%) were studied. Means and standard deviations of haematological parameters analysed immediately after collection were: RBC: 2,07 x106/µL ± 0,40; hematocrit: 38,08%± 5,93; haemoglobin: 11.33g/dL±2.15; MCV:186.52 fL±21.72; MCHC: 29.68g/dL±2.56; MCH: 55.08pcg±5,94; total leucocytes: 8.142/µL±2.441; neutrophils: 5.913/µL±2.168; lymphocytes: 1.460/µL±740; eosinophil: 522/µL±385; monocytes: 247/µL±176; thrombocytes: 123.458/µL±31.362 and total plasma protein: 6.23g/dL±0.49. This data shows evidence of the existence of important differences between these values and others from other areas, either from Brazil or from other South American countries. Those variations might be connected to environment, genetic, nutritional and/or management factors. Regarding the storage effect analysis, it can be concluded that in giant anteaters, haematological analysis can be performed until 24h after collection without any significant alterations on the haematological parameters, except for thrombocytes. Concerning the different EDTA concentrations, it can be concluded that there are no quantitative differences in haematological variables. Nevertheless, relevant morphologic alterations in blood cells can be observed after a 24h storage period, being most noticeable in the leucocytes. Those alterations can lead to misinterpretation of the results, interfering diagnosis, prognosis and treatment.(AU)

O tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) é uma espécie vulnerável devido à destruição progressiva do seu habitat natural, sendo afetado por queimadas e atropelamentos. O aumento na casuística de atendimentos de animais silvestres reforça a necessidade de se ter conhecimento dos parâmetros hematológicos, em especial para os que vivem no bioma do cerrado. Por isso, este trabalho teve por objetivos realizar o hemograma de tamanduás-bandeiras de cativeiro localizados no cerrado brasileiro, a fim de estabelecer valores de referência para essa espécie e compará-los a estudos prévios. Além disso, verificar quais alterações podem ser encontradas em amostras armazenadas por 24 e 48 horas após a colheita, em temperatura de refrigeração (4oC) e tratadas com duas concentrações distintas de EDTA (5% e 10%). A média e o desvio padrão das variáveis hematológicas encontradas nas amostras processadas logo após a colheita foram: hemácias (2,07x106/µL±0,40); volume globular (38,08%± 5,93); hemoglobina (11,33g/dL±2,15); VCM (186,52 fL±21,72); CHCM (29,68g/dL±2,56); HCM (55,08pcg±5,94); leucócitos totais (8.142/µL±2.441); neutrófilos (5.913/µL±2.168); linfócitos (1.460/µL±740); eosinófilos (522/µL±385); monócitos (247/µL±176); plaquetas (123.458/µL±31.362) e proteínas plasmáticas totais (6,23g/dL±0,49). Tais dados permitem afirmar que existem importantes diferenças entre os valores hematológicos destes em relação aos animais provenientes de outras regiões, tanto do Brasil quanto de outros países da América do Sul. Provavelmente, tais divergências estão associadas a fatores ambientais, genéticos, nutricionais e/ou de manejo. Quanto à análise das amostras estocadas, conclui-se que, em tamanduás-bandeiras, as amostras para a realização de hemograma podem ser processadas até 24 horas após a colheita, sem alteração significativa das variáveis hematológicas, com exceção das plaquetas. Com relação às duas concentrações de EDTA, pode-se inferir que não há diferença quantitativa entre ambas para as variáveis hematológicas. Contudo, é possível constatar que o EDTA promove alterações morfológicas relevantes nas células sanguíneas após 24 horas de armazenamento, sendo os leucócitos os mais afetados. Tais alterações, quando relatadas, podem induzir interpretações equivocadas, interferindo no diagnóstico, prognóstico e tratamento.(AU)

In vitro haemostatic efficacy of aqueous, methanol and ethanol plant extracts of three medicinal plant species in Palestine

Abstract The haemostatic efficacy of different extract types of Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) and Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) was evaluated in this study via the Prothrombin time (PT) and Activated partial thromboplastin time (aPTT) analysis. Aqueous, methanol and ethanol extracts of the examined plant species leaves were prepared to a final concentration 50 mg/mL. In vitro PT and aPTT assays were conducted on normal platelet poor plasma blood samples by a digital coagulation analyzer. The obtained results revealed anticoagulation activity of all investigated plant species with observed variations among them. The aqueous and ethanol extracts of T. spicata as well as the aqueous extract of S. thymbra prolonged PT values significantly (p 0.05). While, all V. fruticulosum extract types have had no significant effect on the PT values. The recorded aPTT data showed that all aqueous extracts have had a significant effect on the blood haemostasis as they increased aPTT values in all plant species under study. Out of which, both the ethanol and methanol extracts of T. spicata and methanol extract of S. thymbra showed similar effect. Of great concern, it was clearly noticed that the aqueous and ethanol extract of T. spicata and the aqueous extract of S. thymbra possess the strongest anticoagulation effect as they increased both PT and aPTT values significantly relative to the control (p 0.05). The variable anticoagulation bioactivity among the studied plant species could be referred to the various solvents degrees of solubility of different phyto-constituents. Thus, the efficacy of the plant species extracts evaluation as anticoagulants or coagulants were related to the plant species and to the solvent of extraction.

Resumo A eficácia hemostática de diferentes tipos de extrato de Satureja thymbra L., Thymbra spicata L. (Lamiaceae) e Verbascum fruticulosum Post. (Scrophulariaceae) foi avaliada neste estudo pelo tempo de protrombina (TP) e tempo de tromboplastina parcial ativada (TTPa). Os extratos aquosos, metanólicos e etanólicos das folhas das espécies de plantas examinadas foram preparados para uma concentração final de 50 mg/mL. Os ensaios de TP e TTPa in vitro foram realizados em amostras normais de sangue, pobre em plaquetas, por um analisador de coagulação digital. Os resultados obtidos revelaram atividade anticoagulante de todas as espécies de plantas investigadas, com variações observadas dentre elas. Os extratos aquosos e etanólicos de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra prolongaram significativamente os valores de TP (p 0,05). Entretanto, todos os tipos de extratos de V. fruticulosum não tiveram efeito significativo sobre os valores de TP. Os dados registrados do TTPa mostraram que todos os extratos aquosos tiveram um efeito significativo na hemostase do sangue, pois aumentaram os valores de TTPa em todas as espécies de plantas em estudo. Dos quais, ambos os extratos etanólicos e metanólicos de T. spicata e o extrato metanólico de S. thymbra mostraram efeito semelhante. De grande preocupação, notou-se claramente que os extratos aquoso e etanólico de T. spicata e o extrato aquoso de S. thymbra apresentam efeito anticoagulante mais forte, aumentando os valores de TP e TTPa significativamente em relação ao controle (p 0,05). A variável bioatividade anticoagulante dentre as espécies vegetais estudadas pôde ser referida aos vários graus de solventes de solubilidade de diferentes fitoconstituintes. Assim, a eficácia da avaliação de extratos de espécies vegetais como anticoagulantes ou coagulantes foi relacionada às espécies vegetais e ao solvente de extração.

In vitro inactivation of thrombin generation by polysulfated fractions isolated from the tropical coenocytic green seaweed Caulerpa racemosa (Caulerpaceae, Bryopsidales) / Inativação in vitro da geração de trombina por frações polissulfatadas isoladas damacroalga verde cenocítica tropical Caulerpa racemosa (Caulerpaceae; Bryopsidales)

Pharmacological efficacy of Caulerpa racemosa (Chlorophyta) sulfated polysaccharidic (SPs) fractions (F IIII) on models of coagulation and inflammation has been demonstrated, but not their effects on thrombin generation (TG). This study examined fractions for composition and physical-chemical characteristics and in vitro inactivation of TG by F I and F II in 60-fold diluted human plasma using continuous method. Papain-extraction yield of 0.7% revealed F IIII by DEAE-cellulose chromatography, with differences among the relative proportions of sulfate (17.37-24.00%), total sugars (30.03-48.34%) and absence of proteins. Charge density patterns and molecular sizes > 100 kDa of the fractions were verified by both agarose/polyacrylamide analyses, respectively. These electrophoreses combined with toluidine blue/Stains-All also indicated nonSPs. Anticoagulant effects of 4.76 (F I), 12.00 (F II) and 2.32 (F II) IU mg-1 by activated partial thromboplastin time test were recorded against heparin (193 IU mg-1), without changes in prothrombin time. Diluted plasma treated with F I and F II reduced concentration-dependent and sulfation pattern TG by both intrinsic and extrinsic pathways, with 50% inactivation by intrinsic pathway of F II even at 4.1 µg. Heparin abolished TG at least 4-fold lower. Therefore, C. racemosa produces SPs with TG inhibition.(AU)

Eficácia farmacológica de frações (F I→III) polissacarídicas sulfatadas (PSs) da Chlorophyta Caulerpa racemosa sobre modelos de coagulação e inflamação tem sido demonstrada, exceto seus efeitos sobre geração de trombina (GT). Examinaram-se frações quanto à composição, características físico-químicas e inativação in vitro de GT por F I e F II, em plasma humano diluído 60 vezes usando método contínuo. Rendimento de extração-papaína (0,7%) revelou, por cromatografia de DEAE-celulose, F I→III com diferenças entre as proporções relativas de sulfato (17,37-24,00%), açúcares totais (30,03-48,34%) e ausência de proteínas. Foram verificados, por ambas as análises agarose/poliacrilamida, graus de densidade de carga e tamanhos moleculares > 100 kDa das frações, respectivamente. Também essas eletroforeses, combinadas com azul de toluidina/Stains-All, indicaram polissacarídeos não sulfatados. Foram registrados, pelo teste do tempo de tromboplastina parcial ativada, efeitos anticoagulantes de 4,76 (F I), 12,00 (F II) e 2,32 (F II) UI mg-1 contra heparina (193 UI mg-1), porém não modificando tempo de protrombina. Plasma diluído tratado com F I e F II reduziu GT por ambas as vias intrinsíca/extrínsica, dependente de concentração e grau de sulfatação, com F II em 4,1 μg apresentando eficácia de 50% pela via intrínsica. Heparina, quatro vezes menos, aboliu GT. Portanto, C. racemosa produz PSs com inibição de GT.(AU)

Thromboelastometric evaluation of horses submitted to experimental thrombosis and jugular thrombectomy / Avaliação tromboelastométrica de equinos submetidos a trombose e trombectomia jugular experimental

Jugular thrombosis in horses occurs commonly in iatrogenic situations, secondary to endotoxemic clinical condition and disseminated vascular coagulation, potentially leading to death. Thus, hemostatic evaluation becomes necessary and extremely important for monitoring the risks of systemic hypercoagulability and for the efficiency of allopathic and surgical treatment. This paper describes the hemostatic behavior in experimental jugular thrombosis of ten healthy equines, subsequently submitted to two thrombectomy techniques and receiving heparin sodium as anti-rethrombosis therapy. These animals were evaluated for 20 days by thromboelastometry (TEM), platelet count, hematocrit and fibrinogen, at four moments: pre-induction to phlebitis (D0-MPF); three days after thrombophlebitis induction (D3-MFM); 6 days after, - moment of thrombophlebitis - (D9-MT); and 54 (D16) and 126 (D19) hours after thrombectomies (PTM). Thrombectomy was performed via a Vollmar Ring (group 1, n=5) and Fogarty catheter (group 2, n=5). All the animals received heparin (150 UI/kg, SC) every 12 hours, for ten days after the respective thrombectomies. Through the blood samples were evaluated TEM, activated partial thromboplastin time (aPTT) and prothrombin time (PT), dosing of fibrinogen, hematocrit and platelet count at the abovementioned moments. For comparison between groups and moments the t test was applied at 5% significance level. No significant difference was verified between treatment groups at any of the moments. There were reductions in clotting time (CT) and clot formation time (CFT), with increase in maximum lysis (ML) until the moment D9-MT. Evaluation through INTEM® reagent presented prolongations of CT and CFT with reduction of α angle and ML starting from D16 and D19. Similarly, aPTT presented significant differences between moments pre- (D0, 3 and 9) and post- (D16 and 19) anticoagulant and surgical treatment. The platelet numbers were diminished at moments D16 and D19. In evaluation with EXTEM® reagent, prolongation of CT and CFT occurred only between the moments D0 vs. D3 and vs. D9. O PT did not present significant differences. The results obtained demonstrate that experimental jugular thrombophlebitis leads to local clinical alterations, with impairment of tissue and of the extrinsic coagulation pathway (EXTEM® ), but without evidence of systemic hypercoagulability status, since there was no increase of the alpha angle or maximum clot firmness (MCF). Furthermore, TEM was shown useful and more sensitive than conventional coagulation tests (PT, aPTT and fibrinogen) for the monitoring of anticoagulant therapy, as demonstrated in other works.(AU)

A trombose jugular nos equinos ocorre comumente em situações iatrogênicas, secundárias a quadros endotoxêmicos e a coagulação vascular disseminada, podendo levar ao óbito. Por isso, avaliação hemostática se faz necessária e de extrema importância para monitorar os riscos de hipercoagulabilidade sistêmica e também a eficiência do tratamento alopático e cirúrgico. Este trabalho descreve o comportamento hemostático na trombose jugular experimental de dez equinos hígidos, submetidos posteriormente a duas técnicas de trombectomia e recebendo heparina sódica como terapia anti retrombosante. Estes animais foram avaliados durante 20 dias por tromboelastometria (TEM), contagem de plaquetas, hematócrito e fibrinogênio, em quatro momentos: pré-indução à flebite (D0-MPF); três dias após a indução da tromboflebite (D3-MFM); 6 dias após, - momento de tromboflebite - (D9-MT); e 54 (D16) e 126 (D19) horas após as trombectomias (MPT). A trombectomia foi realizada com Anel de Vollmar (grupo 1, n=5) e cateter de Fogarty (grupo 2, n=5). Todos os animais receberam heparina (150 UI/Kg, SC) a cada 12 horas, durante dez dias após as respectivas trombectomias. Através de amostras de sangue, foram avaliadas a TEM, o tempo de tromboplastia parcial ativada (TTPa) e tempo de protrombina (TP), a dosagem de fibrinogênio, hematócrito e contagem de plaquetas nos momentos descritos acima. Para a comparação entre os grupos e momentos foi aplicado teste t, com nível de significância de 5%. Não foi verificada diferença significativa entre os grupos de tratamento em nenhum dos momentos. Houve redução do tempo de coagulação (CT) e do tempo de formação do coágulo (CFT), com aumento da lise máxima (LM) até o momento D9-MT. A avaliação com o reagente intem apresentou prolongamento do CT e do CFT e redução do ângulo α e da LM a partir do D16 e D19. Da mesma forma, o TTPa apresentou diferenças significativas entre os momentos pré (D0, 3 e 9) e pós (D16 e 19) tratamento cirúrgico e anticoagulante. Houve diminuição do número de plaquetas nos momentos D16 e D19. Na avaliação com reagente extem ocorreu apenas o prolongamento do CT e CFT entre os momentos D0 e o D3 e D9. O TP não apresentou diferenças significativas. Os resultados obtidos demonstram que a tromboflebite jugular experimental leva a alterações clínicas locais, com comprometimento tecidual e da via extrínseca da coagulação (extem), porém sem evidências de um estado sistêmico de hipercoagulabilidade, pois não houve aumento do ângulo alfa e da firmeza máxima do coágulo (MCF). Além disso, a TEM se mostrou útil e mais sensível que os testes convencionais de coagulação (TP, TTPa e fibrinogênio) para o acompanhamento da terapia anticoagulante, conforme demonstrado em outros trabalhos.(AU)

Aortic thromboembolism in a cat

Background: The aortic thromboembolism in cats is usually associated with cardiomyopathy, when a thrombus or a clot is formed in the heart, transported through the bloodstream and fixed at somewhere. According to Virchows triad, changes in the endocardial surface or in the blood flow/composition can result in thrombus formation. The most common clinical signs are: hind limb paralysis, lack of femoral pulse, cold and cyanotic extremities. The treatment should be performed as soon as possible and it is based on antiplatelet agents, anticoagulants, thrombolytics agents or surgical procedures. It is reported the case of a cat presenting aortic thromboembolism. Case: Macroscopically it was observed that the hind limb extremities were with a dark red color and with a bad odor on cut. There were in the subcutaneous tissue of the hind limbs a severe and diffuse accumulation of a reddish material, translucent, shiny, gelatinous (intense diffuse edema) and the skeletal muscles of the hind limbs had extensive pale and friable areas. Inside the medial saphenous vein lumen there was a greyish-white and soft material which adhered to the vessel wall. The lungs were not fully collapsed, it had a smooth and shiny surface and an extensive dark red area in the right middle lobe (moderate extensive bleeding). The spleen was with slightly bulging edges and on cut flowed moderate amount of blood [...]

Thromboelastometric evaluation of horses submitted to experimental thrombosis and jugular thrombectomy / Avaliação tromboelastométrica de equinos submetidos a trombose e trombectomia jugular experimental

Jugular thrombosis in horses occurs commonly in iatrogenic situations, secondary to endotoxemic clinical condition and disseminated vascular coagulation, potentially leading to death. Thus, hemostatic evaluation becomes necessary and extremely important for monitoring the risks of systemic hypercoagulability and for the efficiency of allopathic and surgical treatment. This paper describes the hemostatic behavior in experimental jugular thrombosis of ten healthy equines, subsequently submitted to two thrombectomy techniques and receiving heparin sodium as anti-rethrombosis therapy. These animals were evaluated for 20 days by thromboelastometry (TEM), platelet count, hematocrit and fibrinogen, at four moments: pre-induction to phlebitis (D0-MPF); three days after thrombophlebitis induction (D3-MFM); 6 days after, - moment of thrombophlebitis - (D9-MT); and 54 (D16) and 126 (D19) hours after thrombectomies (PTM). Thrombectomy was performed via a Vollmar Ring (group 1, n=5) and Fogarty catheter (group 2, n=5). All the animals received heparin (150 UI/kg, SC) every 12 hours, for ten days after the respective thrombectomies. Through the blood samples were evaluated TEM, activated partial thromboplastin time (aPTT) and prothrombin time (PT), dosing of fibrinogen, hematocrit and platelet count at the abovementioned moments. For comparison between groups and moments the t test was applied at 5% significance level. No significant difference was verified between treatment groups at any of the moments. There were reductions in clotting time (CT) and clot formation time (CFT), with increase in maximum lysis (ML) until the moment D9-MT. [...] (AU)

A trombose jugular nos equinos ocorre comumente em situações iatrogênicas, secundárias a quadros endotoxêmicos e a coagulação vascular disseminada, podendo levar ao óbito. Por isso, avaliação hemostática se faz necessária e de extrema importância para monitorar os riscos de hipercoagulabilidade sistêmica e também a eficiência do tratamento alopático e cirúrgico. Este trabalho descreve o comportamento hemostático na trombose jugular experimental de dez equinos hígidos, submetidos posteriormente a duas técnicas de trombectomia e recebendo heparina sódica como terapia anti retrombosante. Estes animais foram avaliados durante 20 dias por tromboelastometria (TEM), contagem de plaquetas, hematócrito e fibrinogênio, em quatro momentos: pré-indução à flebite (D0-MPF); três dias após a indução da tromboflebite (D3-MFM); 6 dias após, - momento de tromboflebite - (D9-MT); e 54 (D16) e 126 (D19) horas após as trombectomias (MPT). A trombectomia foi realizada com Anel de Vollmar (grupo 1, n=5) e cateter de Fogarty (grupo 2, n=5). Todos os animais receberam heparina (150 UI/Kg, SC) a cada 12 horas, durante dez dias após as respectivas trombectomias. Através de amostras de sangue, foram avaliadas a TEM, o tempo de tromboplastia parcial ativada (TTPa) e tempo de protrombina (TP), a dosagem de fibrinogênio, hematócrito e contagem de plaquetas nos momentos descritos acima. Para a comparação entre os grupos e momentos foi aplicado teste t, com nível de significância de 5%. Não foi verificada diferença significativa entre os grupos de tratamento em nenhum dos momentos. Houve redução do tempo de coagulação (CT) e do tempo de formação do coágulo (CFT), com aumento da lise máxima (LM) até o momento D9-MT. A avaliação com o reagente intem apresentou prolongamento do CT e do CFT e redução do ângulo α e da LM a partir do D16 e D19. Da mesma forma, o TTPa apresentou diferenças significativas entre os momentos pré (D0, 3 e 9) e pós (D16 e 19) tratamento cirúrgico e anticoagulante.[...] (AU)