Dr Association of bone morphogenetic protein 15 and growth differentiation factor 9 with litter size in livestock: a review study

Litter size is one of the crucial factors in livestock production and is of high economic value, which is affected by ovulation rate, hormones, and growth factors.Growth factors play a multifaceted role in reproductive physiology. This review aims to investigate the association of bone morphogenetic protein 15 (BMP15) and growth differentiation factor 9 (GDF9)with litter size in livestock.The transforming growth factor ß(TGF-ß) superfamily includes more than 34 members; GDF9 and BMP15 are among the most significantfactors for regulating fertility and litter size in most livestock species. Ovarian follicles release BMP15 and GDF9 that are involved in the maturation of primary follicles into the basal form, proliferation of granulosa and theca cells, steroidogenesis, ovulation, and formation of the corpus luteum. Besides, these factors are highly expressed in oocytes and are necessary for female fertility and multiple ovulation in several livestock species. Animals with two inactive copies of these factors are sterile, while those with one inactive copy are fertile. Thus, the present reviewprovides valuable information on the association of BMP15 and GDF9with litter size in livestock that can be used as biological markers of multiple ovulation or for improving fertility in livestock.(AU)

Local regulation of antral follicle development and ovulation in monovulatory species

The identification of mutations in the genes encoding bone morphogenetic protein 15 (BMP15) and growth and differentiation factor 9 (GDF9) associated with phenotypes of sterility or increased ovulation rate in sheep aroused interest in the study of the role of local factors in preantral and antral folliculogenesis in different species. An additive mutation in the BMP15 receptor, BMPR1b, which determines an increase in the ovulatory rate, has been introduced in several sheep breeds to increase the number of lambs born. Although these mutations indicate extremely relevant functions of these factors, the literature data on the regulation of the expression and function of these proteins and their receptors are very controversial, possibly due to differences in experimental models. The present review discusses the published data and preliminary results obtained by our group on the participation of local factors in the selection of the dominant follicle, ovulation, and follicular atresia in cattle, focusing on transforming growth factors beta and their receptors. The study of the expression pattern and the functionality of proteins produced by follicular cells and their receptors will allow increasing the knowledge about this local system, known to be involved in ovarian physiopathology and with the potential to promote contraception or increase the ovulation rate in mammals.(AU)

Relative transcript level of BMP15, BAX and CASP3 with qRT-PCR in vitrified equine immature cumulus-oocytes complexes / Relative transcript level of BMP15, BAX and CASP3 with qRT-PCR in vitrified equine immature cumulus-oocytes complexes

Research focused on female gamete vitrification has increased attention to develop a reliable cryopreservation method to preserve immature equine oocytes. Despite the intensive implementation of biotechnological procedures for horse breeding, vitrification of immature equine cumulus-oocyte complexes (COCs) remain to be clearly elucidated. We aimed to determine the relative transcript level of target genes Bone morphogenetic protein 15 (BMP15); Bcl-2-associated X protein (BAX); and Caspase 3 (CASP3) in equine COCs prior to and after vitrification. Ovarian follicles were aspirated from ovaries collected from an abattoir. A total of 240 COCs were collected and distributed into vitrified COCs (VIT, n=120) and nonvitrified (Non-VIT, n=120) groups. Then, COCs were preserved and relative transcript expressions of BMP15, BAX, CASP3 were measured and normalized against GAPDH performed by qRT-PCR. In addition, 38 COCs were evaluated to assess chromatin configuration of germinal vesicl e stage prior and after vitrification by exposure to 10 µg/ml of bisbenzimide. A difference was observed in the COCs' mRNA level of abundance for the BAX gene between the VIT (2.05 ± 0.47) and (0.85 ± 0.08) Non-VIT groups. There was no difference in mRNA relative transcript level of CASP3 and BMP15 in Non-VIT (0.63 ± 0.20 and 1.55 ± 0.73, respectively) compared to VIT (0.64 ± 0.01 and 2.84 ± 2.20, respectively) equine COCs. All COCs where considered at immature stage of development even though COCs in Non-VIT group showed higher condensed chromatin configuration compared to VIT (100% vs 60.7%, respectively). We demonstrate that BMP15 and CASP3 are detected in VIT and Non-VIT immature COCs. In conclusion, BAX is expressed highly in vitrified immature equine COCs and indicates that activation of apoptosis signaling cascades in cells exposed to vitrification.(AU)

Pesquisas sobre a vitrificação de gametas femininos estão sendo realizadas para o desenvolvimento de um método confiável de criopreservação dos complexos cumulus-oócitos (CCOs) na espécie equina. Apesar da implementação intensiva de biotecnologias reprodutivas em equinos, a vitrificação dos CCOs imaturos permanece em estágio experimental em relação à competência celular. O objetivo do estudo foi determinar o nível de transcrição relativo dos genes Proteína morfogenética óssea 15 (BMP15); Proteína X associada a Bcl-2 (BAX); e Caspase 3 (CASP3) em CCOs equinos antes e após a vitrificação. Folículos ovarianos foram aspirados de ovários coletados em matadouro. O total de 240 CCOs foi coletado e distribuído em grupos vitrificados (VIT, n=120) e não vitrificados (N-VIT, n=120). Os CCOs foram preservados e as expressões transcritas relativas de BMP15, BAX, CASP3 foram determinadas pela técnica de qRT-PCR sendo normalizadas em relação ao GAPDH. Além disso, 38 CCOs foram avaliados para determinar a configuração da cromatina no estágio de vesícula germinativa antes e após a vitrificação pela exposição a 10 µg/ml de bisbenzimida. Os resultados mostraram uma diferença no nível de abundância de mRNA dos CCOs para o gene BAX entre os grupos VIT (2,05 ± 0,47) e N-VIT (0,85 ± 0,08). Não houve diferença no nível de transcrição relativa do mRNA de CASP3 e BMP15 nos CCOs do grupo N-VIT (0,63 ± 0,20 e 1,55 ± 0,73, respectivamente) em comparação com VIT (0,64 ± 0,01 e 2,84 ± 2,20, respectivamente). Todos os CCOs foram considerados em estágio imaturo de desenvolvimento, embora os CCOs no grupo N-VIT apresentaram a configuração de cromatina condensada em maior número de células avaliadas em comparação com VIT (100% vs 60,7%, respectivamente). Demonstramos que BMP15 e CASP3 são detectados em CCOs imaturos em VIT e N-VIT. Conclui-se que o BAX é altamente expresso em CCOs equinos imaturos vitrificados sendo relacionado à sinalização de apoptose em células expostas ao processo de vitrificação.(AU)

Paeonia lactiflora improves ovarian function and oocyte quality in aged female mice

Although ovarian aging is a key cause of decreased ovarian function and oocyte quality, it remains a problem in infertility treatment. Therefore, this study is aimed to investigate whether Paeonia lactiflora (PL), a herb improves ovarian function and oocyte quality using aged female mice. C57BL/6 female mice aged 8 months were treated orally every day with PL of 26.5 mg/kg (n=7) and 53 mg/kg (n=7) of body weight for 4 weeks using an oral zoned needle. The control group (n=7) was treated with normal saline. Ovaries and serum were collected for the H&E stain and the evaluation of reactive oxygen species (ROS) levels, respectively. In the second experiment, female mice were orally administered with PL (26.5 mg/kg: n=12, 53 mg/kg: n=12, control: n=12) and then superovulated with PMSG and hCG, and mated with male mice. Zygotes were retrieved and cultured for 4 days. Ovaries were provided for examination of expressions of genes associated with angiogenesis (VEGF and visfatin), anti-aging (Sirt1 and Sirt2), and follicular development (c-Kit, BMP-15, and GDF-9). PL significantly increased numbers of surviving follicles (primordial, primary, secondary, and antral), numbers of zygotes retrieved, embryo development rate, and ovarian expression of VEGF, visfatin, c-Kit, BMP-15, and GDF-9 at both doses. However, ovarian expression of Sirt1 and Sirt2 was increased at 53.0 mg/kg of PL. ROS levels were not affected by PL. These results suggest that PL may possess beneficial effects regarding ovarian function and oocyte quality, possibly by activation of ovarian angiogenesis and follicular development.

Paeonia lactiflora improves ovarian function and oocyte quality in aged female mice

Although ovarian aging is a key cause of decreased ovarian function and oocyte quality, it remains a problem in infertility treatment. Therefore, this study is aimed to investigate whether Paeonia lactiflora (PL), a herb improves ovarian function and oocyte quality using aged female mice. C57BL/6 female mice aged 8 months were treated orally every day with PL of 26.5 mg/kg (n=7) and 53 mg/kg (n=7) of body weight for 4 weeks using an oral zoned needle. The control group (n=7) was treated with normal saline. Ovaries and serum were collected for the H&E stain and the evaluation of reactive oxygen species (ROS) levels, respectively. In the second experiment, female mice were orally administered with PL (26.5 mg/kg: n=12, 53 mg/kg: n=12, control: n=12) and then superovulated with PMSG and hCG, and mated with male mice. Zygotes were retrieved and cultured for 4 days. Ovaries were provided for examination of expressions of genes associated with angiogenesis (VEGF and visfatin), anti-aging (Sirt1 and Sirt2), and follicular development (c-Kit, BMP-15, and GDF-9). PL significantly increased numbers of surviving follicles (primordial, primary, secondary, and antral), numbers of zygotes retrieved, embryo development rate, and ovarian expression of VEGF, visfatin, c-Kit, BMP-15, and GDF-9 at both doses. However, ovarian expression of Sirt1 and Sirt2 was increased at 53.0 mg/kg of PL. ROS levels were not affected by PL. These results suggest that PL may possess beneficial effects regarding ovarian function and oocyte quality, possibly by activation of ovarian angiogenesis and follicular development.(AU)

Survey of mutations in prolificacy genes in Santa Ines and Morada Nova sheep / Pesquisa de mutações em genes da prolificidade em ovelhas Santa Inês e Morada Nova

Polymorphisms in the BMP-15 gene related to Galway (FecXG) and Inverdale (FecXI) and in the BMPR-1B gene known as Booroola (FecB) mutations were investigated using the Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) method, on sheep from the breeds Santa Inês (n= 574) and Morada Nova (n=282). DNA was extracted and amplified through PCR with specific primers that introduced a restriction site in association with the mutation. The PCR products were submitted to endonucleases. The experiment found no FecXG and FecXI mutations. Six samples of animals with multiple offspring/birth history presented polymorphism for FecB similar to control samples, but this pattern was not confirmed by nucleotide sequencing. Although the absence of these mutations in the studied breeds, other factors related to prolificacy should be investigated to explain the inherent prolificity mechanisms.(AU)

Polimorfismos Galway (Fec XG ) e Inverdale (Fec XI), relacionados ao gene BMP-15, e Booroola (FecB), localizado no gene BMPR-1B, foram investigados usando-se a técnica de reação em cadeia da polimerase - polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP), em ovelhas Santa Inês (n= 574) e Morada Nova (n=282). O DNA foi extraído e amplificado por PCR com iniciadores específicos, que introduziram um sítio de restrição associado à mutação, em seguida os amplicons foram submetidos à ação de endonucleases. Não foram observadas as mutações Fec XG e Fec XI nas amostras estudadas. Amostras de seis animais com histórico de partos gemelares apresentaram polimorfismo para FecB semelhantes às amostras controle, mas esse padrão não foi confirmado pelo sequenciamento de nucleotídeos. Apesar da ausência dessas mutações nos animais das raças estudadas, outros fatores relacionados à prolificidade devem ser pesquisados para explicar os mecanismos da alta prolificidade desses animais.(AU)

Survey of mutations in prolificacy genes in Santa Ines and Morada Nova sheep / Pesquisa de mutações em genes da prolificidade em ovelhas Santa Inês e Morada Nova

Polymorphisms in the BMP-15 gene related to Galway (FecXG) and Inverdale (FecXI) and in the BMPR-1B gene known as Booroola (FecB) mutations were investigated using the Polymerase Chain Reaction - Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) method, on sheep from the breeds Santa Inês (n= 574) and Morada Nova (n=282). DNA was extracted and amplified through PCR with specific primers that introduced a restriction site in association with the mutation. The PCR products were submitted to endonucleases. The experiment found no FecXG and FecXI mutations. Six samples of animals with multiple offspring/birth history presented polymorphism for FecB similar to control samples, but this pattern was not confirmed by nucleotide sequencing. Although the absence of these mutations in the studied breeds, other factors related to prolificacy should be investigated to explain the inherent prolificity mechanisms.(AU)

Polimorfismos Galway (Fec XG ) e Inverdale (Fec XI), relacionados ao gene BMP-15, e Booroola (FecB), localizado no gene BMPR-1B, foram investigados usando-se a técnica de reação em cadeia da polimerase - polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP), em ovelhas Santa Inês (n= 574) e Morada Nova (n=282). O DNA foi extraído e amplificado por PCR com iniciadores específicos, que introduziram um sítio de restrição associado à mutação, em seguida os amplicons foram submetidos à ação de endonucleases. Não foram observadas as mutações Fec XG e Fec XI nas amostras estudadas. Amostras de seis animais com histórico de partos gemelares apresentaram polimorfismo para FecB semelhantes às amostras controle, mas esse padrão não foi confirmado pelo sequenciamento de nucleotídeos. Apesar da ausência dessas mutações nos animais das raças estudadas, outros fatores relacionados à prolificidade devem ser pesquisados para explicar os mecanismos da alta prolificidade desses animais.(AU)

Effects of BMP-4 and FSH on growth, morphology and mRNA expression of oocyte-secreted factors in cultured bovine secondary follicles

This study evaluated the effect of different concentrations of bone morphogenetic protein-4 (BMP-4), as well as the interaction of BMP-4 and follicle stimulating hormone (FSH) on growth, ultrastructural integrity, and expression of mRNA for growth differentiation factor-9 (GDF-9), BMP-15, maternal antigen that the embryo requires (Mater) and nucleoplasmin-2 (Npm-2) in bovine secondary follicles cultured in vitro for 18 days. Follicles cultured in the presence of 50 ng/ml BMP-4 had a progressive increase in their diameters with the increase of culture period from 0 to 6 and 12 days, but no significant differences were observed among treatments. The presence of both FSH and BMP-4 in a culture medium did not stimulate follicle growth when compared to the control medium. After 12 days, the percentage of normal follicles was maintained similar to that of day 0 in the medium supplemented with both FSH and BMP-4, but no significant differences among treatments were observed after 18 days of culture. BMP-4 maintained the ultrastructural integrity of follicles after 18 days of culture, while follicles cultured in medium supplemented with FSH or both BMP-4 and FSH had oocyte with irregular zona pellucida, vesicular bodies, and an abundance of vacuoles. Follicles cultured in the presence of BMP-4 had an increase in the levels of BMP-15 mRNA, when compared to those cultured in medium supplemented with FSH alone. In conclusion, the addition of BMP-4 in culture medium contributes to preserve follicular ultrastructure, but BMP-4 did not interact positively with FSH. Regarding secondary follicles cultured in the presence of FSH, BMP-4 increases the expression of mRNA for BMP-15.

Effects of BMP-4 and FSH on growth, morphology and mRNA expression of oocyte-secreted factors in cultured bovine secondary follicles

This study evaluated the effect of different concentrations of bone morphogenetic protein-4 (BMP-4), as well as the interaction of BMP-4 and follicle stimulating hormone (FSH) on growth, ultrastructural integrity, and expression of mRNA for growth differentiation factor-9 (GDF-9), BMP-15, maternal antigen that the embryo requires (Mater) and nucleoplasmin-2 (Npm-2) in bovine secondary follicles cultured in vitro for 18 days. Follicles cultured in the presence of 50 ng/ml BMP-4 had a progressive increase in their diameters with the increase of culture period from 0 to 6 and 12 days, but no significant differences were observed among treatments. The presence of both FSH and BMP-4 in a culture medium did not stimulate follicle growth when compared to the control medium. After 12 days, the percentage of normal follicles was maintained similar to that of day 0 in the medium supplemented with both FSH and BMP-4, but no significant differences among treatments were observed after 18 days of culture. BMP-4 maintained the ultrastructural integrity of follicles after 18 days of culture, while follicles cultured in medium supplemented with FSH or both BMP-4 and FSH had oocyte with irregular zona pellucida, vesicular bodies, and an abundance of vacuoles. Follicles cultured in the presence of BMP-4 had an increase in the levels of BMP-15 mRNA, when compared to those cultured in medium supplemented with FSH alone. In conclusion, the addition of BMP-4 in culture medium contributes to preserve follicular ultrastructure, but BMP-4 did not interact positively with FSH. Regarding secondary follicles cultured in the presence of FSH, BMP-4 increases the expression of mRNA for BMP-15.(AU)

CONCENTRADO AUTÓLOGO DE PLAQUETAS NA OSTEOARTROSE INDUZIDA EM COELHOS: AVALIAÇÕES ARTROSCÓPICA, MACROSCÓPICA, HISTOLÓGICA E IMUNO-HISTOQUÍMICA DA ARTICULAÇÃO FÊMOROTÍBIO-PATELAR

Este estudo teve como objetivo avaliar o efeito do concentrado autólogo de plaquetas (CAP) na osteoartrose (OA) induzida experimentalmente em coelhos, através da avaliação histológica, imuno-histoquímica e artroscópica, e simultaneamente, determinar as concentrações plasmáticas do fator de crescimento transformador 1 (TGF-1) e do fator de crescimento derivado das plaquetas (PDGF). Foram utilizados 30 coelhos machos, adultos jovens, saudáveis, da raça Nova Zelândia, com massa corporal média de 3,0kg, submetidos à ruptura do ligamento cruzado cranial (LCCr) (M1) por vídeo artroscopia para a indução da OA. Aos 21 dias depois da ruptura, os coelhos foram submetidos à reconstituição do ligamento (M2) por vídeo artroscopia e foram divididos em dois grupos de acordo com o tratamento: O grupo controle, que recebeu 0,5 ml de solução Ringer Lactato por via intra-articular e o grupo CAP, que recebeu 0,5 ml de concentrado autólogo de plaquetas por via intra-articular. As injeções intra-articulares dos tratamentos foram realizadas imediatamente após a reconstituição do ligamento, aos 15 e aos 30 dias após a reconstituição. Cinco coelhos de cada grupo foram eutanasiados aos 15 dias após a reconstituição (M3), outros cinco aos 30 (M4), e os restantes cinco coelhos de cada grupo aos 60 dias (M5) após a reconstituição. Nesses mesmos momentos, foram feitas avaliações artroscópicas para avaliar a evolução do processo degenerativo e a resposta aos tratamentos aplicados e antes de cada procedimento, foram coletados dois ml de sangue da artéria auricular central e depositados em tubos contendo EDTA e posteriormente acondicionadas em eppendorfes estéreis em duas alíquotas iguais para fazer a dosagem de TGF-1 e PDGF respectivamente. Nos M3, M4 e M5, depois da eutanásia dos animais, foram coletados fragmentos da cápsula sinovial e da cartilagem articular para a avaliação histológica e imuno-histoquímica. Foi observado na avaliação histológica que os animais que receberam o CAP apresentaram, significativamente, (p<0,05) menor inflamação sinovial, menor proliferação celular e menor degradação da matriz extra celular (MEC) quando comparados com os coelhos que receberam Ringer Lactato. Na avaliação imuno-histoquímica os animais que receberam o CAP apresentaram, significativamente, menor expressão (p<0,05) de interleucina 1 (IL-1), de fator de necrose tumoral (TNF), da proteína morfogenética 2 (BMP-2) e, significativamente, maior expressão de PDGF na membrana sinovial quando comparados com os coelhos que receberam Ringer Lactato, e na cartilagem dos animais desse mesmo grupo, expressão, significativamente (p<0,05) menor, de IL-1 e de TNF e maior expressão de BMP-2 e PDGF quando comparados com os animais do grupo controle. Na avaliação artroscópica foi observado nos animais que receberam o CAP melhora significativa (p<0,05) na inflamação da membrana sinovial, menor formação de cordões fibrosos e menos fibrilação da cartilagem. Finalmente, na avaliação da concentração dos fatores de crescimento, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas (p>0,05) nas concentrações de TGF-1 em nenhum dos momentos avaliados após as aplicações do CAP, e foi observado diferença estatisticamente significativa na concentração plasmática do PDGF no M5 nos animais do grupo CAP quando comparado com os animais do grupo controle. Segundo os resultados deste experimento, conclui-se que o CAP é capaz de controlar o processo inflamatório que acontece durante a OA melhorando a sinovite presente na cápsula sinovial ao tempo que diminui a degradação da cartilagem articular. Adicionalmente, esse composto biológico regula a síntese e secreção de citocinas inflamatórias e aumenta a liberação do PDGF.

This study aimed to evaluate the effect of autologous platelet concentrate (APC) on osteoarthritis (OA) experimentally induced in rabbits, through histological, immunohistochemical and arthroscopic evaluation, and simultaneously determine plasma concentrations of the transforming growth factor 1 (TGF -1) and platelet-derived growth factor (PDGF). The study used 30 male rabbits, young, healthy, New Zealand breed, with an average body mass of 3.0 kg, and submitted to rupture of the cranial cruciate ligament (CrCL) (M1) by video arthroscopy to induce OA. At 21 days after the rupture, the rabbits were submitted to ligament replacement (M2) by video arthroscopy and were divided into two groups according to the treatment: The control group, which received 0.5 ml of the Ringer Lactate solution by intra-articular injections and the CAP group, which received 0.5 ml of autologous platelet concentrate by intra-articular injections. The intra-articular injections of the treatments were performed immediately after the ligament replacement, at 15 and 30 days after the replacement. Five rabbits from each group were euthanized at 15 days after replacement (M3), another five at 30 (M4), and the remaining five rabbits from each group at 60 days (M5) after replacement. At those same moments, arthroscopic evaluations were carried out to assess the evolution of the degenerative process and the response to the treatments applied and before each procedure, two ml of blood from the central auricular artery were collected and deposited in tubes containing EDTA and later stored in sterile eppendorfs in two equal aliquots to measure TGF-1 and PDGF respectively. In M3, M4 and M5, after euthanasia of the animals, fragments of the synovial capsule and articular cartilage were collected for histological and immunohistochemical evaluation. It was observed in the histological evaluation that the animals that received the CAP had significantly (p <0.05) less synovial inflammation, less cell proliferation and less degradation of the extracellular matrix (ECM) when compared to the rabbits that received Ringer Lactate. In the immunohistochemical evaluation, the animals that received the CAP showed lower secretion (p <0.05) of interleukin 1 (IL-1), tumor necrosis factor (TNF), morphogenetic protein 2 (BMP-2) and greater secretion of PDGF in the synovial membrane when compared to the rabbits that received Ringer Lactate, and in the cartilage of the animals of that same group, significantly lower (p <0.05) IL-1 and TNF secretion and greater BMP-2 synthesis and secretion and PDGF when compared to animals in the control group. In the arthroscopic evaluation, a significant improvement (p <0.05) in inflammation of the synovial membrane, less formation of fibrous cords and less fibrillation of the cartilage was observed in the animals that received CAP. Finally, when assessing the concentration of growth factors, there were no statistically significant differences (p> 0.05) in TGF-1 concentrations in any of the moments evaluated after CAP applications, and a statistically significant difference in plasma concentration was observed of PDGF in M5 in CAP group animals when compared to control group animals. According to the results of this experiment, it is concluded that the CAP is able to control the inflammatory process that occurs during OA, improving the synovitis present in the synovial capsule while decreasing the degradation of the articular cartilage. Additionally, this biological compound regulates the synthesis and secretion of inflammatory cytokines and increases the release of PDGF.

Avaliação in vitro de condrócitos da cartilagem articular e da diferenciação osteogênica das células tronco da medula óssea extraídas da prole de ratas tratadas com etanol

Foram realizados dois estudos para avaliar os efeitos do consumo materno de etanol sobre os condrócitos da cartilagem articular e na diferenciação osteogênica das células tronco mesenquimais da medula óssea (CTM-MO) da prole. Foram utilizadas 13 ratas Wistar adultas distribuídas em dois grupos experimentais, grupo controle e o grupo tratado com etanol. As ratas do grupo etanol e controle, receberam por gavagem diária, a partir do nono dia de gestação, solução alcoólica 40% e água destilada, respectivamente até o trigésimo dia de lactação. No dia do parto, foram eutanasiados quatro neonatos por fêmea e, aos 30 dias de lactação, três filhotes por fêmea. O primeiro estudo avaliou, in vitro, o efeito do consumo materno de etanol sobre os condrócitos da cartilagem articular. Os condrócitos foram extraídos das cartilagens articulares e cultivados em meio condrogênico por sete, 14 e 21 dias. Foram realizados os testes de conversão do MTT, atividade de fosfatase alcalina, porcentagem de células por campo e porcentagem de áreas PAS+ em cultura 3D. Aos 21 dias, foi realizada a quantificação dos transcritos gênicos para agrecano, Sox-9, colágeno tipo II, colágeno X, Runx-2 e VEGF pelo RT-PCR em tempo real. O segundo estudo avaliou o efeito do consumo materno de etanol durante a gestação e lactação sobre a diferenciação osteogênica CTM-MO dos filhotes ao desmame. As CTM-MO foram extraídas dos membros pélvicos e cultivadas em meio osteogênico por sete, 14 e 21 dias. Foram realizados os testes de conversão do MTT, atividade de fosfatase alcalina e porcentagem de células por campo. Aos 21 dias, foram realizados a quantificação do tamanho médio dos nódulos mineralizados e a quantificação dos transcritos gênicos para osteopontina, osteocalcina, BMP-2, Runx-2 e colágeno tipo I por RT-PCR em tempo real. As médias foram comparadas pelo teste t de student e as diferenças foram consideradas significativas se p<0,05. Os neonatos das mães que receberam etanol foram menos pesados quando comparados aos neonatos controle. A cultura dos condrócitos do grupo etanol apresentou maior conversão de MTT, maior atividade de fosfatase alcalina e maior porcentagem de células relação ao grupo controle em todos os períodos. Não houve diferença entre ambos os grupos na porcentagem de áreas PAS+ em cultura 3D. Houve maior expressão de colágeno tipo II e menor expressão de Sox-9 no grupo etanol 15 em relação ao grupo controle. O peso dos filhotes, ao desmame, das mães que receberam etanol foi significativamente menor quando comparado ao controle. As CTM-MO do grupo etanol apresentaram menor conversão de MTT aos sete dias de diferenciação osteogênica porém maior atividade de fosfatase alcalina, maior porcentagem de células, maior tamanho médio dos nódulos mineralizados bem como maior expressão de BMP-2, osteopontina e osteocalcina. Conclui-se que o consumo materno de etanol durante a gestação e lactação altera, in vitro, o fenótipo e a atividade de síntese dos condrócitos dos neonatos bem como aumenta a diferenciação osteogênica das CTM-MO da prole ao desmame

Two studies were performed to evaluate the effects of maternal ethanol consumption on articular cartilage chondrocytes and on osteogenic differentiation of offspring bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs). Thirteen adult female Wistar rats were divided into two experimental groups, the control group and the ethanol-treated group. The rats of the ethanol and control group received by daily gavage, from the ninth day of gestation, 40% alcohol solution and distilled water, respectively until the thirtieth day of lactation. On the day of delivery, four newborns were euthanized per female and, at 30 days of lactation, three pups per female. The first study evaluated in vitro the effect of maternal ethanol consumption on articular cartilage chondrocytes. Chondrocytes were extracted from articular cartilage and cultivated in chondrogenic medium for seven, 14 and 21 days. MTT conversion tests, alkaline phosphatase activity, percentage of cells per field and percentage of PAS+ areas in 3D culture were performed. At 21 days, the quantification of gene transcripts for agrecan, Sox-9, collagen type II, collagen X, Runx-2 and VEGF was performed by real-time RT-PCR. The second study evaluated the effect of maternal ethanol consumption during pregnancy and lactation on BMMSCs osteogenic differentiation of pups at weaning. The BMMSCs were extracted from the pelvic limbs and cultured in osteogenic medium for seven, 14 and 21 days. MTT conversion, alkaline phosphatase activity and cell percentage per field tests were performed. At 21 days, the average size of the mineralized nodules was quantified and the gene transcripts were quantified for osteopontin, osteocalcin, BMP-2, Runx-2 and collagen I by real-time RT-PCR. Means were compared by Student's t-test and differences were considered significant if p <0.05. Neonates of mothers receiving ethanol were less heavy when compared to control neonates. The chondrocyte culture of the ethanol group showed higher MTT conversion, higher alkaline phosphatase activity and higher percentage of cells compared to the control group in all periods. There was no difference between both groups in the percentage of PAS+ areas in 3D culture. There was higher expression of collagen type II and lower expression of Sox-9 in the ethanol group compared to the control group. The weight of pups at weaning of mothers receiving ethanol was significantly lower when compared to control. BMMSCs ethanol group showed lower MTT conversion after seven days of osteogenic differentiation but 17 higher alkaline phosphatase activity, increased percentage of cells larger average size of mineralized nodules as well as increased expression of BMP-2, osteopontin and osteocalcin. In conclusion, maternal ethanol consumption during pregnancy and lactation alters, in vitro, the phenotype and chondrocyte synthesis activity of neonates, as well as increases the osteogenic differentiation of BMMSCs from weaning offspring

PROTOCOLOS HORMONAIS PARA OTIMIZAR A ELETROEJACULAÇÃO DE CARNEIROS

A metodologia de eleição da coleta do sêmen em pequenos ruminantes é o uso da vagina artificial, entretanto, o método alternativo mais comumente usado é eletroejculação (EE), essa técnica requer a aplicação de numerosos estímulos elétricos, o que gera estresse e dor no animal. Desta forma, é importante desenvolver alternativas para melhorar o bem-estar animal em diferentes tecnologias reprodutivas. O presente estudo teve como objetivo encontrar métodos que minimizassem os efeitos negativos da eletroejaculação (EE) com o uso de GnRH, ocitocina e prostagladina, afim de avaliar os efeitos sobre diferentes parâmetros mensurados (fisiológicos frequencia cardiíaca (Fc), frequencia respiratotia (Fr) e temperatura retal; bioquímicos - glicose, creatina quinase (Ck); hormonal cortisol e avaliação espermática - qualidade do sêmen, motilidade, cinética e integridade de membrana plasmática) O estudo buscou ainda, avaliar o bem estar dos animais através da quantidade de vocalizações emitidas pelos animais, tempo de duração da EE, quantidade de pulsos necessários para EE. A Fc diminuiu com o uso de OxPG (controle: 113,7 bmp vs OxPG: 103,5 bpm, grupado SEM; p=0,02) essa alteração não foi observada quando os protocolos foram associados simultaneamente (109,1 bpm vs 111,5 bpm respectivamente, agrupado SEM=4,5). O protocolo com OxPG também acarretou em diminuição da Fr (38,7 vs 46,3 com e sem OxPG, agrupado SEM=10.0, P=0.003), ao mesmo tempo promoveu aumento das concentrações séricas de glicose de 58,7 mg/dl para 62,4 mg/dl (agrupado SEM=1,3, p =0,014). A administração de GnRH resultou em diminuição das concentrações de cortisol de 7,3 ng/ml para 2,1 ng/ml (agrupado SEM= 1,4; P=0,04). Também demonstrou variação com o tempo. As concentrações de Ck aumentaram de 641,8mg/dl para 881,7mg/dl (agrupado SEM = 50,6) com a administração de OxPG, também variando com o tempo. Por outro lado, não houve alteração dos protocólos utilizados sobre o volume de ejaculação (2,0 mL), motilidade em massa (3,2-0-5), espermatozoides por ejaculado / mL (2649,3 x106), espermatozoides móveis (90,7%), motilidade progressivo (31,3%), VAP (62,5 µm / s), VCL (92,5 µm / s), VSL (44,2 µm / s), ALH (3,5 µm / s), BCF (8,4 Hz), STR (64,8%), LIN (45,2%) ou WOB (63,4 %). Concluiu-se que os protocolos com OxPG e GnRH diminuem diferentes respostas ao estresse, sem no entanto, alterar as características espermáticas e sem encurtar o tempo ou diminuir o número de pulsos necessa´rios para a eletroejaculação em ovinos da raça Santa Inês.

The present study aimed to evaluate the effect of the association of a GnRH agonist (4.2g buserelin acetate), prostaglandin (250g cloprostenol) and oxytocin (10UI) on the physiological and biochemical parameters of sheep subjected to electroejaculation at semen collectionefficiency and its quality. For this, four experimental groups were evaluated:Gcontrol=saline; GOXPGF2= PGF2andOxytocin; GGnRH=GnRH; GOXPGF2+GnRH=GnRH and PGF2 +Oxytocin.There was a treatment effect in the presence of OXPGF on heart rate, respiratory rate, rectal temperature, blood glucose and creatine kinase, in addition to the effect on time. In the presence of GnRH, there was a difference in serum cortisol concentration. Heart rate decreased with the use of OXPGF alone (control: 113,7 bpm vs OxPGF: 103,5 bpm, SEM grouped; p = 0,02) and was not modified when both and more GnRH were applied simultaneously (GnRH 109,1 bpm vs 111,5 bpm, SEM combined = 4.,5).Heart rate also varied over time. The respiratory rate also decreased with the administration of Ox PGF (38,7 vs 46,3 with and without OxPGF, SEM grouped = 10,0, p = 0,003). The administration of OxPGF also tended to decrease the temperature (38,77 ºC vs 38,94 ºC, with and without OxPGF, respectively, grouped SEM = 0,06; p = 0,056).Blood glucose increased with the administration of OxPGF from 58,7 mg / dL to 6,4 mg / dL (grouped SEM = 1,3, p = 0,014) and varied with time. CK concentrations increased from 641,8 mg / dL to 881,7 mg / dL (combined SEM = 50,6) with the administration of OxPG. GnRH administration decreased cortisol concentration from 7,3 ng / mL to 2,1 ng / mL (pooled SEM = 1,4; p = 0,04). It also varied with time, there was an interaction between the administration of OxPGF and time. There were no effects of the treatments on the time required for EE, the pulse at which the animals began ejaculating, ended the ejaculation or the vocalizations emmited during EE (94,67 s vs 125,40 s vs 118,73 s vs 127,53s, pooled SEM = 16,43; 13,07 vs 15,80 vs 15,20 vs 16,40, pooled SEM = 1,92; 2,87 vs 5,53 vs 4,74 vs 2,13, pooled SEM = 1,90).As for sperm evaluation, no effects were observed for the following parameters: ejaculate volume (mL), swirling (0-5), total sperm in the ejaculate (x106 ), Total motility(%), Progressive motility (%).It is concluded that the protocols OXPG2 and GnRH with Fc and Fr, and cortisol, respectively, reduced different stress responses, without, however, be in gable to decrease the time or the number of stimuli performed to promote ejaculation by electroejaculation.

EXPRESSÃO GÊNICA DE COMPLEXO CÚMULUS - OVÓCITO EQUINO ANTES E APÓS A VITRIFICAÇÃO

A vitrificação de ovócitos pode ser de grande auxílio na manutenção genética após a morte e na pesquisa científica preservando ovócitos em diferentes estágios de maturação. Esta técnica é uma biotecnologia pouco utilizada na espécie equina devido às baixas taxas de viabilidade celular após a criopreservação. O objetivo deste estudo foi determinar a expressão de genes ligados a viabilidade celular e apoptose em complexos cúmulus ovócitos (CCOs) antes e após à vitrificação. Com este propósito, folículos entre 5 a 30 mm foram aspirados e 240 CCOs imaturos foram recuperados em abatedouro localizado em São Gabriel, RS, durante a estação reprodutiva. Os CCOs foram divididos em dois grupos: não vitrificados (n=120) e vitrificados (n=120). O protocolo de vitrificação foi realizado de acordo com método comercial EquiPro-VitKit (Minitube-Alemanha). Após vitrificação, CCOs foram mantidos em meio de maturação in vitro durante 6 horas e avaliados imediatamente. Os genes utilizados para análise de viabilidade dos CCOs foram: bone morphogenetic protein 15 (BMP 15); bcl-2- like protein 4 (BAX); Caspase 3 (CASP 3) e GAPDH (controle). A análise gênica foi realizada através do método de real-time PCR quantitativo (qRT-PCR). Foi observada diferença na expressão de mRNA do gene BAX (0.85 ± 0.08) em CCOs não vitrificados em comparação com vitrificados (2.05 ± 0.47; P = 0.03). Não foi observada diferença na expressão de mRNA do BMP15 (1.55 ± 0.73) em CCOs não vitrificados em comparação com vitrificados (2.84 ± 2.20; P > 0.05). Não foi observada diferença na expressão de mRNA do CASP3 (0.63 ± 0.20) em CCOs não vitrificados em comparação com vitrificados (0.64 ± 0.01; P > 0.05). Em conclusão, os resultados observados na expressão de BMP15 sugerem a permanência da viabilidade celular em CCOs equinos, porém, BAX sugere a ativação do processo de apoptose nas células expostas ao processo de vitrificação.

Oocyte vitrification is a modern technique that can be used to ensure genetic maintenance after animal death and to improve oocyte cryopreservation at different stages of maturation. Equine oocyte vitrification is a biotechnology rarely used in horses due to the low post-cryopreservation cell viability. The aim of this study was to determine the expression of genes linked to cell viability and apoptosis in equine cumulus-oocyte complexes (COCs) prior and after vitrification. With this purpose, 5 to 30 mm ovarian follicles were aspirated and 240 COCs were collected from a slaughterhouse in Southern Brazil during breeding season. The COCs were divided into two groups: non-vitrified control COCs (CON, n=120) and vitrified oocytes (VIT, n=120). Vitrification protocol was provided according to a commercially available method from EquiPro-VitKit. After vitrification, COCs were in vitro matured for 6 hours and immediately evaluated. Genes product abundance were: Bone morphogenetic protein 15 (Bmp 15); Bcl-2-associated X protein (Bax); Caspase 3 (Casp 3); and GAPDH (control). The gene expression analysis was performed by quantitative real-time PCR (qRT-PCR). Difference was observed in COCs mRNA abundance for Bax gene from non-vitrified (0.85 ± 0.08) compared to vitrified (2.05 ± 0.47; P = 0.03). No difference was observed in the COCs mRNA abundance for Bmp 15 from non-vitrified (1.55 ± 0.73) compared to vitrified (2.84 ± 2.20; P > 0.05). There was no difference in mRNA abundance for Casp 3 in non-vitrified (0.63 ± 0.20) compared to vitrified (0.64 ± 0.01; P > 0.05). In conclusion, results demonstrate that Bmp 15 expression in vitrified COCs indicate cell viability; however, Bax suggest the activation of apoptosis cascade in cells exposed to vitrification process.

DESENVOLVIMENTO DA GLÂNDULA MAMÁRIA DE BEZERROS MESTIÇOS ALEITADAS COM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE SÓLIDOS NA DIETA LÍQUIDA.

Esta pesquisa avaliou o desenvolvimento da glândula mamária de bezerras leiteiras mestiças da quinta a décima primeira semana de vida, em resposta ao aumento dos teores de sólidos na dieta líquida (6 L leite), com adição de sucedâneo em pó, (Sprayfo Violeta SSP, NUTRECO BRASIL NUTRIÇÃO ANIMAL LTDA®) para obtenção do teor de sólidos de, 13,50; 16,10; 18,20 e 20,40%. 60 fêmeas (n=15) foram alojadas em casinhas individualizadas. Ao nascimento receberam 3L de colostro e tiveram o umbigo curado (iodo 7%). Até o 4º dia de vida receberam 6L de leite de transição, e posteriormente 6L de leite integral, acrescido de sucedâneo em pó. O volume total foi dividido em duas refeições iguais (8 e 16 h) dos cinco aos 55 dias de idade, de 56 aos 59 dias o volume foi reduzido para 3 L/d em único fornecimento (8 h). Água e concentrado, (Soylac Rumen 20% PB Floc, Total), estavam à disposição a partir do primeiro dia de vida, ad libitum. Aos 60 dias os animais foram desaleitados. Após 70 dias passaram a receber silagem de milho. Semanalmente a partir da quinta semana de vida a glândula mamária foi avaliada, com ultrassom (B-mode) equipado com transdutor micro-convexo frequência 6 MHz (DP2200, Mindray, China). As imagens foram obtidas com o animal em decúbito laterolateral nos quartos anteriores e posteriores, em posição padronizada da probe com inclinação de 45º em relação à inserção do teto, sempre no sentido caudo-cranial, sendo salvas em formato BMP e transferidas para o programa ImageJ® (NIH, Estados Unidos) para análises. A área de parênquima mamário não foi afetada pelo aumento dos teores de sólidos da dieta liquida, sendo observado efeito da idade de avaliação e quarto mamário. O escore de palpação da glândula mamária pode ser utilizado como ferramenta de avaliação do desenvolvimento da glândula mamária.

Esta pesquisa avaliou o desenvolvimento da glândula mamária de bezerras leiteiras mestiças da quinta a décima primeira semana de vida, em resposta ao aumento dos teores de sólidos na dieta líquida (6 L leite), com adição de sucedâneo em pó, (Sprayfo Violeta SSP, NUTRECO BRASIL NUTRIÇÃO ANIMAL LTDA®) para obtenção do teor de sólidos de, 13,50; 16,10; 18,20 e 20,40%. 60 fêmeas (n=15) foram alojadas em casinhas individualizadas. Ao nascimento receberam 3L de colostro e tiveram o umbigo curado (iodo 7%). Até o 4º dia de vida receberam 6L de leite de transição, e posteriormente 6L de leite integral, acrescido de sucedâneo em pó. O volume total foi dividido em duas refeições iguais (8 e 16 h) dos cinco aos 55 dias de idade, de 56 aos 59 dias o volume foi reduzido para 3 L/d em único fornecimento (8 h). Água e concentrado, (Soylac Rumen 20% PB Floc, Total), estavam à disposição a partir do primeiro dia de vida, ad libitum. Aos 60 dias os animais foram desaleitados. Após 70 dias passaram a receber silagem de milho. Semanalmente a partir da quinta semana de vida a glândula mamária foi avaliada, com ultrassom (B-mode) equipado com transdutor micro-convexo frequência 6 MHz (DP2200, Mindray, China). As imagens foram obtidas com o animal em decúbito laterolateral nos quartos anteriores e posteriores, em posição padronizada da probe com inclinação de 45º em relação à inserção do teto, sempre no sentido caudo-cranial, sendo salvas em formato BMP e transferidas para o programa ImageJ® (NIH, Estados Unidos) para análises. A área de parênquima mamário não foi afetada pelo aumento dos teores de sólidos da dieta liquida, sendo observado efeito da idade de avaliação e quarto mamário. O escore de palpação da glândula mamária pode ser utilizado como ferramenta de avaliação do desenvolvimento da glândula mamária.

TESTE DE TOXICIDADE DA FRAÇÃO DA AUXEMMA ONCOCALYX E ONCONCALYXONA A SOBRE O DESENVOLVIMENTO FOLICULAR E EMBRIONÁRIO IN VITRO

O objetivo foi avaliar o efeito da Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) e seu composto ativo oncocalyxona A (onco A) sobre os folículos pré-antrais, a maturação oocitária e a qualidade embrionária in vitro. Para a Fase I, fragmentos ovarianos caprinos foram cultivados por 1-7 dias nos tratamentos: controle cultivado sozinho ou suplementado com DMSO, BMP-15, doxorubicina (DXR), A. oncocalyx (1.2, 12 ou 34 g/mL) ou onco A (1, 10 ou 30 g/mL). Foram avaliados: sobrevivência, crescimento, apoptose e proliferação. Na fase II, folículos secundários isolados caprinos foram cultivados nos grupos; controle não-cultivado, controle cultivado, DMSO, DXR, A. oncocalyx ou onco A. Além disso, complexo culmulus oócito (CCOs) caprinos foram maturados in vitro (MIV) nos grupos: controle-cultivados sozinho; ou suplementado com DMSO; DXR; A. oncocalyx ou onco A, e foram avaliados a morfologia, sobrevivência, apoptose e configuração da cromatina. Finalmente, para a fase III, CCOs porcinos foram MIV na presença de DXR; A. oncocalyx ou onco A e a competência oocitária foi avaliada (experimento 1). Também, embriões porcinos foram cultivados in vitro nos mesmos tratamentos e o desenvolvimento embrionário foi avaliado (experimento 2). Na fase I, a DXR reduziu o percentual de viabilidade folicular sendo que para a A. oncocalyx e onco A esta redução ocorreu de forma concentração-dependente (P <0,05). DXR, A. oncocalyx 1.2 e onco A 1 aumentaram (P <0,05) a apoptose. A DXR diminuiu (P<0,05) a proliferação celular. Porém, na fase II, houve uma redução no percentual de folículos intactos, formação antro, taxa de crescimento e proliferação celular (P <0,05) comparado ao controle. A DXR apresentou indicadores de apoptose maiores (P <0,05). Após a MIV de CCOs caprinos, DXR, A. oncocalyx e onco A aumentaram (P <0,05) os oócitos anormais e diminuíram a viabilidade em comparação com o controle (P <0,05). Finalmente, na fase III, no experimento 1, a DXR, A. oncocalyx e onco A reduziram (P <0,05) a viabilidade oocitária e a eficiência da MIV (P <0,05). Após a FIV, todas as drogas reduziram (P <0,05) a eficiência da FIV e o percentual de embriões clivados, no entanto, apenas a DXR diminuiu o percentual de blastocistos. No experimento 2, a DXR e A. oncocalyx diminuíram (P <0,05) o percentual de embriões clivados, mas não teve nenhum efeito sobre a formação de blastocisto. Em conclusão, A. oncocalyx e onco A afetam a foliculogênese in vitro em caprinos de forma concentração-dependente. A Onco A tem um efeito menos prejudicial do que a DXR na sobrevivência de folículos pré- antrais. Também, A. oncocalyx e onco A não apresentam um efeito tóxico sobre folículos secundários isolados caprinos nas taxas de maturação de CCOs. Porém, estas substâncias afetam negativamente a viabilidade oocitária. Além disso, em suínos, a adição de DXR durante MIV ou cultivo embrionário in vitro afeta negativamente a eficiência da FIV e a taxa de clivagem. Além disso, a exposição de CCOs suínos à DXR, apenas durante a MIV, foi mais prejudicial à manutenção da viabilidade oocitária e à formação de blastocistos, quando comparado à A. oncocalyx e onco A.

The goal was to evaluate the effect of Auxemma oncocalyx (A. oncocalyx) and its active compound oncocalyxone A (onco A) on the in vitro culture of preantral follicles, oocyte maturation and embryo quality. For phase I, caprine ovarian fragments were cultured for 1 and 7 days in different conditions: cultured control alone or supplemented with DMSO, BMP-15, doxorubicin (DXR), A. oncocalyx (1.2, 12 or 34 g/ml) or onco A (1, 10 or 30 g/ml). The following endpoints were evaluated: survival, growth, apoptosis and proliferation. For phase II, isolated secondary caprine follicles were cultured in groups; non-cultured control, control group, DMSO, DXR, A. oncocalyx or onco A. Additionally, caprine cumulus-oocyte-complex (COCs) were in vitro maturated (IVM) in the groups: control alone or supplemented with DMSO; DXR; A. oncocalyx or onco A. Morphology, survival, apoptosis and chromatin configuration were assessed. Finally, for phase III, porcine COCs were IVM in the presence of DXR; A. oncocalyx or onco A and oocyte competence was analyzed (experiment 1). Also, porcine embryos were in vitro cultured in the same treatments and embryo development was evaluated (experiment 2). In phase I, A. oncocalyx and onco A, in a concentration-dependent manner, and DXR decreased (P<0.05) the percentage of morphologically normal follicles. DXR, A. oncocalyx 1.2 and onco A 1 increased (P<0.05) the percentage of apoptosis. DXR decreased (P<0.05) the cellular proliferation. On the other hand, in phase II, DXR showed a reduction in the percentage of intact follicles, antrum formation, growth rate and proliferation (P < 0.05) compared to control. DXR showed higher apoptosis indicators (P < 0.05). After IVM of caprine COCs, DXR, A. oncocalyx and onco A treatments had a greater percentage (P < 0.05) of abnormal oocytes and a lower percentage of viable oocytes as compared with the control (P < 0.05). Finally, in the phase III, in experiment 1; DXR, A. oncocalyx and onco A reduced (P<0.05) oocyte viability and IVM efficiency. After IVF, all the drugs reduced (P<0.05) the IVF efficiency and percentage of cleaved embryos, nevertheless, only DXR decreased the percentage of blastocyst. In experiment 2; DXR and A. oncocalyx decreased (P<0.05) the percentage of cleaved embryo, but had no effect on blastocyst formation. In conclusion, A. oncocalyx and onco A affected in vitro caprine folliculogenesis in a concentration-dependent manner. Onco A has a less harmful effect than DXR on goat preantral follicle survival. Furthermore, A. oncocalyx and onco A do not exhibit a toxic effect on caprine isolated secondary follicles and on maturation rates of COCs recovered from caprine antral follicles. However, these substances negatively affected the oocyte viability. Moreover, in the porcine model, the addition of DXR during IVM or IVC negatively affected the IVF efficiency and cleavage rate. Additionally, the exposure of porcine COCs to DXR only during IVM was more detrimental to oocyte viability and blastocyst formation than A. oncocalyx and onco A.

Padronização do eletrorretinograma de campo total em cães da raça Yorkshire Terrier

O eletrorretinograma de campo total consiste no registro da resposta elétrica difusa gerada pelas células da retina, e é considerado, nos cães, um exame essencial, principalmente nos casos de encaminhamento de cirurgia de catarata e em doenças que afetam a função retiniana. Todavia, diversos fatores podem influenciar nos valores de amplitude e tempo de culminação das respostas obtidas no exame, como idade do animal, raça, presença de catarata e seu estágio de desenvolvimento e uso da anestesia ou sedação. O objetivo desse estudo foi avaliar a interferência da idade e do estágio de desenvolvimento da catarata, além de padronizar valores da resposta dos eletrorretinogramas, nos cães da raça Yorkshire Terrier, com uso de sedação. Foram selecionadas 84 fichas e 157 olhos de exames realizados no período de 2006 a 2013. Utilizou-se aparelho de eletrorretinograma de campo total BMP-200 e eletrodo ativo corneal ERG-jet. Amplitude de pico a pico e tempo de culminação de resposta de bastonetes, máxima e cones foram obtidas. Os animais foram separados de acordo com as faixas etárias:1 a 5 anos de idade, 6 a 10 anos de idade e 11 a 15 anos de idade. Adicionalmente, os olhos selecionados foram divididos pelo estágio de desenvolvimento da catarata apresentada: incipiente, imatura, madura e hipermadura. Testes ANOVA de duas vias foram realizados para determinar possível diferença entre os grupos de tipos de catarata e entre as faixas etárias. Os valores padrão de cada grupo foi descrito. Houve diferença na amplitude da resposta de bastonetes, máxima e cones entre todas as faixas etárias, além de diferença no tempo de culminação da resposta máxima entre as faixas etárias. O aumento da idade do animal mostrou-se como o fator mais influente nos valores de amplitude de bastonetes, máxima e cones. O tempo de culminação, no entanto, mostrou-se mais estável. Os diferentes estágios de desenvolvimento de catarata apresentaram pouca interferência na resposta final do eletrorretinograma. Conclui-se que a idade é o principal fator de interferência do eletrorretinograma de campo total nos cães, nos valores de amplitude pico a pico, nas respostas de bastonetes, máxima e cones. A presença de catarata e seu estágio de desenvolvimento não foram significativos.

Full field electroretinogram is the record of a diffuse electrical response generated by the cells in the retina and is considered, in dogs, fundamental in cataract cases prior to surgery and retinal function affecting diseases. There are several aspects, however, that may influence amplitude and implicit time values of the exam, such as age, breed, cataract existence and stage of cataract development and anesthesia or sedation protocol. The aim of this study was to assess age and stage of cataract development interference and, additionally, standardize electroretinogram values in Yorkshire Terrier dogs using sedation. 84 records and 157 eyes were selected from 2006 to 2013 period. The BMP-200 full field electroretinogram system was used along with corneal active ERG-Jet contact lens electrode. Amplitude and implicit time values of rods, mixed rod-cone and cones were obtained. All animals were separated according the following age group: 1 to 5 years old, 6 to 10 years old and 11 to 15 years old. Additionally, the selected eyes were separated by cataract development stage, such as: incipient, immature, mature and hypermature cataract. Two-way ANOVA tests were performed to determine possible difference between cataract stage groups and age groups. Standardize values of each group was reported. There was difference in amplitude values response of rod, mixed rod-cones and cones amplitude in all age groups, in addition to difference in implicit time values of mixed rod-cones in all age groups. Animal age progression was found as the most influent factor in rod, mixed rod-cones and cones amplitude values. Implicit time values, however, exhibit a more stable response values. Cataract stage development was not substantial in influence amplitude values of rod, mixed rodcones and cone final electroretinogram responses. This study has shown that age is the main factor of full field electroretinogram interference in amplitude values response of rod, mixed rod-cones and cones in dogs. The presence of cataract and the development stage were not relevant.

Papel da Proteína Morfogenética Óssea 15 (BMP-15) e Kit Ligand (KL) na regulação da foliculogênese em mamíferos / Role of Bone Morphogenetic Protein 15 (BMP-15) and Kit Ligand (KL) in the regulation of folliculogenesis in mammalian

A foliculogênese é coordenada por diversos fatores de crescimento e hormônios responsáveis por garantir o sucesso do desenvolvimento folicular e oocitário. Para a obtenção de oócitos competentes, é necessária uma perfeita interação entre as células somáticas foliculares e o oócito, sendo esta potencialmente regulada por fatores parácrinos produzidos no ovário. Dentre estes fatores, destacam-se a BMP-15 e o KL, sintetizados pelo oócito e pelas células da granulosa, respectivamente. Este artigo revisa o importante papel da BMP-15 e do KL na foliculogênese, enfocando suas características, sítios de expressão, receptores e vias de sinalização, bem como a interação entre estas duas substâncias(AU)

Folliculogenesis is coordinated by many growth factors and hormones responsible for ensuring the success of follicular and oocyte development. To obtain competent oocytes is necessary to have a perfect interaction between follicular somatic cells and the oocyte, which is potentially regulated by paracrine factors produced in the ovary. Among these factors, we highlight BMP-15 and KL, synthesized by the oocyte and granulosa cells, respectively. This article reviews the important role of BMP-15 and KL in folliculogenesis, focusing on their characteristics, sites of expression, receptors and signaling pathways, as well as the interaction between these two substances(AU)

Papel da Proteína Morfogenética Óssea 15 (BMP-15) e Kit Ligand (KL) na regulação da foliculogênese em mamíferos / Role of Bone Morphogenetic Protein 15 (BMP-15) and Kit Ligand (KL) in the regulation of folliculogenesis in mammalian

A foliculogênese é coordenada por diversos fatores de crescimento e hormônios responsáveis por garantir o sucesso do desenvolvimento folicular e oocitário. Para a obtenção de oócitos competentes, é necessária uma perfeita interação entre as células somáticas foliculares e o oócito, sendo esta potencialmente regulada por fatores parácrinos produzidos no ovário. Dentre estes fatores, destacam-se a BMP-15 e o KL, sintetizados pelo oócito e pelas células da granulosa, respectivamente. Este artigo revisa o importante papel da BMP-15 e do KL na foliculogênese, enfocando suas características, sítios de expressão, receptores e vias de sinalização, bem como a interação entre estas duas substâncias

Folliculogenesis is coordinated by many growth factors and hormones responsible for ensuring the success of follicular and oocyte development. To obtain competent oocytes is necessary to have a perfect interaction between follicular somatic cells and the oocyte, which is potentially regulated by paracrine factors produced in the ovary. Among these factors, we highlight BMP-15 and KL, synthesized by the oocyte and granulosa cells, respectively. This article reviews the important role of BMP-15 and KL in folliculogenesis, focusing on their characteristics, sites of expression, receptors and signaling pathways, as well as the interaction between these two substances

Gene expression during early follicular development and mechanisms of activation and growth of primordial follicles in mammals

Background: For decades, the mechanisms maintaining the dormancy, survival and growth of mammalian primordial follicles as well as their growth up to an early antral stage have been not well understood. In recent years, data obtained from studies on the expression and quantification of mRNA for several growth factors and from studies with genetically modified mouse models have revealed a number of molecules, whose functions are indispensable for (i) the maintenance of follicular quiescence, (ii) primordial follicle survival and (iii) activation, and/or (iv) the growth of primary follicles up to an early antral stage. Review: This review focuses on expression of mRNA and protein for growth factors, cytokines and their respective receptors in early follicles, as well as on the intrafollicular signaling cascades that lead to the in-vitro activation of primordial follicles. Furthermore, fundamental information on the levels of mRNA for growth factors at different stages of follicular development and the in-vitro effects of several locally expressed factors on ovarian follicular development will be discussed. During the transition into the primary stage or from the primary into the secondary follicle stage of goats there is a significant increase in the mRNA expression of different factors (BMP-6, BMP-15, KL, EGF, VIP, GDF-9). The detection of these different factors depends on the species. In rat ovaries, GHR is detected in oocytes, granulosa and theca cells. The presence of the mRNA for GHR, but not that for GH has been detected in rat pre-antral follicles. GHR mRNA has only been found in granulosa cells, while positive immunostaining for GHR has been observed in both oocytes and granulosa cells. Also in vitro studies with goat primordial follicles have demonstrated that different factors, estradiol and progesterone promote primordial follicle activation and/or oocyte growth. Recently, several studies have been performed with mouse primordial follicles to understand how intrafollicular cytokines and growth factors may control the fate of primordial follicles in the ovary. In rodents, anti-Mullerian hormone has been shown to inhibit mouse primordial follicle growth and to downregulate c-kit expression in rats, suggesting that, at least in rodents, the kit system plays a key role in initiation of follicular growth. In relation to control of primary and secondary follicles, several in vitro studies have demonstrated that FSH, activin-A, EGF, GH, IGF-I and IGF-II stimulate oocyte growth and follicular development in different species. Conclusion: This review updates the information on expression of mRNA and proteins for growth factors and their role in the regulation of development from primordial to early antral follicles. The growing knowledge of the molecules that control the dormancy, survival, activation and growth of primordial follicles will not only contribute for a better understanding of the physiology of the mammalian ovary, but will also enable researchers to develop more promising methods for promoting growth of oocytes from primordial follicles, the richest follicular resource in the mammalian ovary.

A superfamília dos fatores de crescimento transformante-β e o controle da foliculogênese em mamíferos / Transforming growth factors -β superfamily members and control of folliculogenesis in mammals

A foliculogênese ovariana é um processo complexo caracterizado pela formação, crescimento e maturação folicular. Esta revisão discute a localização, os sítios de ação e as funções de fatores da família TGF-β [proteínas morfogenéticas ósseas dos tipos 2 (BMP-2), 4 (BMP-4), 6 (BMP-6), 7 (BMP-7), 15 (BMP-15), fator de diferenciação do crescimento-9 (GDF-9), ativina-A, inibina, hormônio anti-Mülleriano (AMH) e fator de crescimento transformante-ß (TGF-ß)] na regulação da foliculogênese em mamíferos. Alguns fatores, como o AMH, atuam inibindo o crscimento dos folículos primordiais e reduzindo a sensibilidadade dos folículos em crescimento ao FSH, enquanto vários outros (BMP-2, 4, 7, 15, GDF-9, ativina-A e TGF-ß) estimulam o crecimento folicular. Em geral, a foliculogênese é regulada por uma complexa interação desses fatores de crescimento com as gonadotrofinas.(AU)

Ovarian folliculogenesis is a complex process that includes follicular formation, growth and maturation. This review discuss the localization and functions of TGF-β family members [bone morphogenetic proteins 2 (BMP-2), 4 (BMP-4), 6 (BMP-6), 7 (BMP-7), 15 (BMP-15), growth and differentiation factor-9 (GDF-9), activin-A, inibin, anti-Müllerian hormony (AMH) and transforming growth factor-ß (TGF-ß)] in the regulation of ovarian folliculogenesis in mammals. Some of these factors, such as AMH, inhibit growth of primoridal follicles and reduce sensitity of growing follicles to FSH, while various others (BMP-2, 4, 7, 15, GDF-9, activina-A and TGF-ß) stimulate follicular growth. In general, folliculogenesis is regulated by a complex interaction of these factors with gonadotrophins.(AU)