Resumo
A leishmaniose tornou-se uma das doenças mais importantes da atualidade, dada a sua incidência e alta letalidade em indivíduos não tratados, idosos e crianças desnutridas. Dessa forma, na tentativa de descoberta de novos agentes mais eficazes e menos tóxicos para o combate à leishmaniose, os produtos naturais foram uma opção considerada no presente trabalho. Então foi realizada avaliação dos metabolitos primários e secundários de fungos e vegetais oriundos da Caatinga quanto às suas características químicas e às atividades biológicas, incluindo toxicidade às formas promastigotas e amastigotas de Leishmania sp., bem como o comparativo dessa atividade à de outros fitoterápicos. Foi selecionada a planta Caryocar coriaceum, bem como fungos endofíticos da planta Jatropha curcas a serem utilizados para a extração de enzimas hidrolíticas. De fungos do gênero Dichothomophtora e endofíticos dos gêneros Vermisporium-like e Emericella nidulans isolados de J. curcas, foram obtidos extratos proteicos ricos em lipases que foram testados contra fungos dermatófitos e Leishmania amazonensis. Os metabólitos secundários produzidos por C. coriaceum demonstraram possuir substâncias potencialmente bioativas com atividade antioxidante que atuaram como antifúngicas e antileishmaniais, principalmente pela eliminação de radicais livres dentro do vacúolo parasitário e mecanismos anticolinesterásicos de membrana. A caracterização química por cromatografia liquida de alta eficiência da presença de quercetina, rutina e isoquercitrina é indicativa dessas atividades. Extratos da folha de C. coriaceum exercem efeito leishmanicida atuando em formas primitivas por mecanismo semelhante a apoptose e amastigotas intracelulares pela resposta dependente da ferrugina Nrf2 / HO-1 / ferritina e depleção de ferro. Já extratos de frutos de C. coriaceum causam ação leishmanicida de forma direta em promastigotas e indireta em amastigotas intracelulares por modulação do metabolismo de ferro. Foi determinada a atividade antileishmanial de extratos proteicos de fungos endofíticos na caatinga, sem que essas substâncias causassem danos a células do hospedeiro, evidenciando nível de seletividade superior à droga padrão. Os dados obtidos nesse estudo comprovam a importância do estudo de metabolitos secundários obtidos de vegetais e de fungos endofíticos da caatinga, abrindo perspectivas ao uso desses extratos naturais, e substâncias isoladas, como agentes terapêuticos capazes de interromper o curso de infecções por Leishmania sp.
Leishmaniasis has become one of the most important diseases today, given its incidence and high lethality in untreated individuals, the elderly and malnourished children. Thus, to find new, more effective and less toxic agents to combat leishmaniasis, natural products were an option considered in the present work. Then, the primary and secondary metabolites of Caatinga fungi and vegetables were evaluated for their chemical characteristics and biological activities, including toxicity to the promastigote and amastigote forms of Leishmania sp., As well as the comparison of this activity to that of other phytotherapics. The Caryocar coriaceum plant was selected, as well as endophytic fungi of the Jatropha curcas plant to be used for the extraction of hydrolytic enzymes. From fungi of the genus Dichothomophtora and endophytic genera of Vermisporium-like and Emericella nidulans isolated from J. curcas, lipase-rich protein extracts were tested against dermatophytes fungi and Leishmania amazonensis. Secondary metabolites produced by C. coriaceum were shown to have potentially bioactive substances with antioxidant activity that acted as antifungal and antileishmanial, mainly by the elimination of free radicals within the parasitic vacuole and anticholinesterase membrane mechanisms. The chemical characterization by high performance liquid chromatography of the presence of quercetin, rutin and isoquercitrin is indicative of these activities. Extracts of C. coriaceum leaf exert leishmanicidal effect acting in primitive forms by apoptosis-like mechanism and intracellular amastigotes by Nrf2 / HO-1 / ferritin-dependent response and iron depletion. Already fruit extracts of C. coriaceum cause leishmanicidal action directly in promastigotes and indirectly in intracellular amastigotes by modulation of iron metabolism. The antileishmanial activity of protein extracts of endophytic fungi in the caatinga was determined, without these substances causing damage to host cells, showing a level of selectivity superior to the standard drug. The data obtained in this study confirm the importance of studying secondary metabolites obtained from caatinga endophytic plants and fungi, opening perspectives for the use of these natural extracts and isolated substances as therapeutic agents capable of interrupting the course of infections by Leishmania sp.
Resumo
Avaliou-se a eficiência do óleo de pequi (Caryocar brasiliense) como antioxidante ao diluidor tris-gema, na qualidade seminal de touros curraleiros pé duro. Foram coletados o sêmen de 6 touros, provenientes da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária EMBRAPA Meio Norte, localizada na cidade de Campo Maior, Piauí, Brasil. Foram aferidas as características biométricas de desenvolvimento testicular dos animais como circunferência escrotal, comprimento e largura testicular, para o cálculo do volume testicular. Os ejaculados de cada animal foram divididos em quatro tratamentos, um controle (tris-gema), outro com tris-gema + 0,5 ml/L de óleo de pequi, tris-gema + 1,0 ml/L de óleo de pequi e tris-gema+1,5 ml/L de oléo de pequi. Adotou-se o delineamento inteiramente casualisado -DIC em esquema fatorial 4 x 6, com quatro tratamentos, seis animais e seis medidas repetidas no tempo. As coletas de sêmen foram realizadas duas vezes por semana, por três semanas, totalizando 36 ejaculados, com o auxílio de um eletro estimulador controlado automaticamente (Biocon ® Soluções para Biotecnologia, Uberaba, Minas Gerais, 150 Brasil). O teste de termorresistência rápido, avaliação da integridade da membrana plasmática, avaliação da integridade do acrossoma e a avaliação de danos na morfologia espermática foram realizadas no Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal (UFPI). A cinética espermática foi avaliada por meio de um sistema analisador de espermatozoide auxiliado por computador (CASA) no Laboratório de Reprodução Animal (UECE) cujos dados de motilidade progressiva não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos.
Avaliou-se a eficiência do óleo de pequi (Caryocar brasiliense) como antioxidante ao diluidor tris-gema, na qualidade seminal de touros curraleiros pé duro. Foram coletados o sêmen de 6 touros, provenientes da Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária EMBRAPA Meio Norte, localizada na cidade de Campo Maior, Piauí, Brasil. Foram aferidas as características biométricas de desenvolvimento testicular dos animais como circunferência escrotal, comprimento e largura testicular, para o cálculo do volume testicular. Os ejaculados de cada animal foram divididos em quatro tratamentos, um controle (tris-gema), outro com tris-gema + 0,5 ml/L de óleo de pequi, tris-gema + 1,0 ml/L de óleo de pequi e tris-gema+1,5 ml/L de oléo de pequi. Adotou-se o delineamento inteiramente casualisado -DIC em esquema fatorial 4 x 6, com quatro tratamentos, seis animais e seis medidas repetidas no tempo. As coletas de sêmen foram realizadas duas vezes por semana, por três semanas, totalizando 36 ejaculados, com o auxílio de um eletro estimulador controlado automaticamente (Biocon ® Soluções para Biotecnologia, Uberaba, Minas Gerais, 150 Brasil). O teste de termorresistência rápido, avaliação da integridade da membrana plasmática, avaliação da integridade do acrossoma e a avaliação de danos na morfologia espermática foram realizadas no Laboratório de Biotecnologia da Reprodução Animal (UFPI). A cinética espermática foi avaliada por meio de um sistema analisador de espermatozoide auxiliado por computador (CASA) no Laboratório de Reprodução Animal (UECE) cujos dados de motilidade progressiva não apresentaram diferença estatística entre os tratamentos.
Resumo
ABSTRACT The main objective of this study was to demonstrate the effects of topical treatment with ointment containing pequi oil (Caryocar coriaceum Wittm), using 40 male 60-day-old mice (Rattus norvegicus albinus) from the Wistar line. These were divided into two groups: I) composed by 20 mice with cutaneous wounds treated by topical application of the ointment based on 10% pequi oil; II) the same number of mice, receiving the topical application of ointment without pequi oil. After antisepsis and local anesthesia, round 1-cm-diameter wounds were made on the lower back region. The wounds were evaluated in regard to clinical, morphometric and histological aspects on the 3rd, 7th, 14th and 21st postoperative days. The group treated with the pequi ointment presented acceleration in the healing process. The animals wounds of this group showed a meaningful reduction from the 14th postoperative day, when histological characteristics from the ending of the healing process were noted, such as a large amount of fibroblasts, collagen fibers and a complete process of reepithelialization, while the wounds of the control group needed more time for the healing process.
RESUMO O objetivo deste estudo foi demonstrar os efeitos do tratamento tópico do creme à base de óleo de pequi (Caryocar coriaceum Wittm) utilizando 40 ratos (Rattus norvegicus albinus) da linhagem Wistar, machos, com 60 dias de idade. Esses foram divididos em dois grupos: I) composto por 20 ratos com feridas cutâneas tratados com aplicação tópica do creme base com 10% de óleo de pequi; II) com o mesmo número de animais que receberam a aplicação tópica do creme base sem o óleo de pequi. Após antissepsia e anestesia local foi produzida cirurgicamente ferida circular de 1 cm de diâmetro na região dorso lombar. As lesões cutâneas foram avaliadas sob o aspecto clínico, morfométrica e histológico no 3o, 7o, 14o e 21o dias pós-operatório. No grupo tratado com creme à base de óleo de pequi houve aceleração na evolução do processo cicatricial. As feridas dos animais desse grupo apresentaram redução significativa a partir do décimo quarto dia pós-operatório, bem como foram verificados nesse período achados histológicos característicos da etapa final do processo de cicatrização tais como: acentuada quantidade de fibroblastos, fibras colágenas e completo processo de reepitelização, enquanto que as feridas do grupo controle necessitaram de mais tempo para resolução do processo cicatricial.
Resumo
Este trabalho descreve a produção de Lipases de fungos endofíticos (Vermisporiumlike e Emericella nidulans, isolados a partir de sementes de Jatropha curcas, bem como Dichotomophtora portulacae e D. boerhaaviae), e testá-los contra os dermatófitos Malassezia sp. e Microsporum canis, como bem como Leishmania amazonensis e macrófagos derivados de células de medula óssea de murino. Também foi realizada avaliação da composição fenólica e das propriedades biológicas dos extratos etanólicos de Caryocar coriaceum Wittm e Ricinus communis L., plantas presentes no bioma brasileiro Caatinga, os extratos foram preparados com folhas (EEFRC) e talo (EETRC) de R. communis e folhas (EEFCC), polpa (EEPCC) e casca (EECCC) de frutas de C. coriaceum. Isoquercitrina foi o principal flavonóide encontrado por Cromatografia Liquida de Alta Performance, em todos os extratos. O extrato com o maior teor de isoquercitrina foi EECCC com 129,198 g.mL-1. EECCC mostrou a melhor atividade antioxidante, em relação ao padrão. No ensaio de inibição de acetilcolinesterase EEFCC e EETRC demonstraram atividade inibidora superior a fisostigmina, padrão. Na atividade antimicrobiana os extratos mostraram semelhante MIC e MFC de 39,06 e 4,88 g.mL-1, respectivamente, para Malassezia sp. e Microsporum canis. Os extratos mais promissores fungicidas foram os de EEFCC e EETRC, talvez devido à grande quantidade de flavonóides. Portanto, estes resultados sugerem um potencial biotecnológico de metabolitos secundários de extratos etanólicos de C. coriaceum e R. communis para o desenvolvimento de novas drogas, corroborando o potencial farmacológico das espécies. Extratos de Dichotomophtora demonstraram melhor ação fungicida, usando patógenos fúngicos da pele animal. Todos os extratos de fungos foram eficazes contra a forma promastigota de Leishmania amazonensis em 5 mg.mL-1. Os extratos contra formas amastigotas, respectivamente, causaram o decréscimo de 78,88, 39,65, 63,17 e 98,13% de macrófagos infectados. Os resultados atuais levam a um índice de seletividade de 19,56, 30,68, 18,09 e 20,99, respectivamente, demonstrando o potencial destes extratos de fungos contra patógenos da pele. As propriedades terapêuticas de fungos e vegetais conduzem à pesquisa dos princípios ativos de várias espécies. A exploração destes recursos pode levar a identificação de metabólitos inestimáveis que podem servir como drogas ou ao desenvolvimento de substâncias terapêuticas.
This work describes the production of lipases by the fungi Vermisporium-like fungus, Emericella nidulans (isolated from seeds of Jatropha curcas L.), Dichotomopthora potulacae and D. boerhaaviae and the assay against the dermatophytes Malassezia sp. and Microsporum canis, as well as Leishmania amazonensis and macrophages derived from bone barrow murine cells. As well as evaluate the phenolic composition and biological properties of ethanolic extracts of Caryocar coriaceum Wittmand Ricinus communis L., plants present in the Brazilian Biome Caatinga. The extracts were prepared with leaves (EELRC) and stalk (EESRC) of R. communis and leaves (EELCC), pulp (EEPUCC) and peel (EEPECC) of C. coriaceum fruits. Isoquercitrin was the main flavonoid found in all extracts by High Performance Liquid Chromatography. The extracts with the highest content of isoquercitrin was EEPECC with 129.198 g.mL-1. EEPECC showed the best antioxidant activity, compared to standard. In the inhibition of the acetylcholinesterase assay EELCC and EESRC demonstrated inhibitory activity higher than physostigmine. The antimicrobial activity of extracts showed similar MIC and MFC of 39.06 and 4.88 g.mL-1, respectively for Malassezia sp. and Microsporum canis. The most promising fungicide extracts were those from EELCC and EESRC, maybe due to the large amount of flavonoids and its main constituent Isoquercitrin. Therefore, these results suggest a biotechnological potential of secondary metabolites of ethanolic extracts from C. coriaceum and R. communis for the development of new drugs, corroborating the pharmacological potential of the species.Dichothomophtora extracts demonstrate best fungicidal action, using animal skin fungi pathogens. All fungi crude extracts were effective against promastigote form of Leishmania amazonensis at 5 mg.mL-1. The effect of extracts against amastigote forms caused a decrease respectively of 78.88, 39.65, 63.17 and 98.13 % of infected macrophages. The current results lead to a selectivity index of 19.56, 30.68, 18.09 and 20.99 respectively, demonstrating the potential of these fungi extracts against skin pathogens. The therapeutic properties of fungi and plants lead to the search of active ingredients of various species. The exploitation of these resources can lead to identification of priceless metabolites that can serve as drugs or lead to the development of new therapeutic substances.
Resumo
O objetivo deste estudo foi demonstrar os efeitos do tratamento tópico do creme à base de óleo de pequi (Caryocar coriaceum Wittm) utilizando 40 ratos (Rattus norvegicus albinus) da linhagem Wistar, machos, com 60 dias de idade. Esses foram divididos em dois grupos: I) composto por 20 ratos com feridas cutâneas tratados com aplicação tópica do creme base com 10% de óleo de pequi; II) com o mesmo número de animais que receberam a aplicação tópica do creme base sem o óleo de pequi. Após antissepsia e anestesia local foi produzida cirurgicamente ferida circular de 1 cm de diâmetro na região dorso lombar. As lesões cutâneas foram avaliadas sob o aspecto clínico, morfométrica e histológico no 3o, 7o, 14o e 21o dias pós-operatório. No grupo tratado com creme à base de óleo de pequi houve aceleração na evolução do processo cicatricial. As feridas dos animais desse grupo apresentaram redução significativa a partir do décimo quarto dia pós-operatório, bem como foram verificados nesse período achados histológicos característicos da etapa final do processo de cicatrização tais como: acentuada quantidade de fibroblastos, fibras colágenas e completo processo de reepitelização, enquanto que as feridas do grupo controle necessitaram de mais tempo para resolução do processo cicatricial.
The main objective of this study was to demonstrate the effects of topical treatment with ointment containing pequi oil (Caryocar coriaceum Wittm), using 40 male 60-day-old mice (Rattus norvegicus albinus) from the Wistar line. These were divided into two groups: I) composed by 20 mice with cutaneous wounds treated by topical application of the ointment based on 10% pequi oil; II) the same number of mice, receiving the topical application of ointment without pequi oil. After antisepsis and local anesthesia, round 1-cm-diameter wounds were made on the lower back region. The wounds were evaluated in regard to clinical, morphometric and histological aspects on the 3rd, 7th, 14th and 21st postoperative days. The group treated with the pequi ointment presented acceleration in the healing process. The animals' wounds of this group showed a meaningful reduction from the 14th postoperative day, when histological characteristics from the ending of the healing process were noted, such as a large amount of fibroblasts, collagen fibers and a complete process of reepithelialization, while the wounds of the control group needed more time for the healing process.