The effect of Lacticaseibacillus casei on inflammatory cytokine (IL-8) gene expression induced by exposure to Shigella sonnei in Zebrafish (Danio rerio) / [O efeito do Lacticaseibacillus casei na citoquina inflamatória (IL-8) expressão genética induzida pela exposição a Shigella sonnei em Zebrafish (Danio rerio)]

This study aimed to evaluate the protective function of probiotics against Shigella sonnei pathogenicity. For this purpose, 400 zebrafish were divided into four groups with two replications: (T1): receiving Lacticaseibacillus casei for 27 days, (T2): receiving L. casei for 27 days followed by 72 hr exposure to S. sonnei, (T3): receiving basal diet for 27 days followed by 72 hr exposure to S. sonnei, and control group (C): receiving basal diet without exposure to the pathogen. According to the results, feeding with L. casei for 27 days reduced the interleukin-8 (IL-8) expression significantly (P<0.05). The results showed a decrease in IL-8 expression in the group exposed to the pathogen and fed with the probiotic compared to the group only fed with the basal diet (P<0.05). Considering the role of IL-8 as a pro-inflammatory cytokine, our results indicated that feeding with L. casei could modulate inflammatory responses.

Este estudo teve como objetivo avaliar a função protetora dos probióticos contra a patogenicidade Shigella sonnei. Para este fim, 400 zebrafish foram divididos em quatro grupos com duas réplicas: (T1): recebendo Lacticaseibacillus casei por 27 dias, (T2): recebendo L. casei por 27 dias seguido por 72 horas de exposição a S. sonnei, (T3): recebendo dieta basal por 27 dias seguido por 72 horas de exposição a S. sonnei, e grupo controle (C): recebendo dieta basal sem exposição ao patógeno. De acordo com os resultados, a alimentação com L. casei por 27 dias reduziu significativamente a expressão da interleucina-8 (IL-8) (P<0,05). Os resultados mostraram uma diminuição na expressão de IL-8 no grupo exposto ao patógeno e alimentado com o probiótico em comparação com o grupo alimentado apenas com a dieta basal (P<0,05). Considerando o papel da IL-8 como uma citocina pró-inflamatória, nossos resultados indicaram que a alimentação com L. casei poderia modular as respostas inflamatórias.

Detection of respiratory viruses and expression of inflammatory cytokines in patients with acute exacerbation chronic obstructive pulmonary disease in Mongolia China / Detecção de vírus respiratórios e expressão de citocinas inflamatórias em pacientes com doença pulmonar obstrutiva crônica de exacerbação aguda na Mongólia, China

Chronic obstructive pulmonary disease (COPD) was estimated to be the third cause of global mortality by 2020. Acute exacerbation COPD (AECOPD) is a sudden worsening of COPD symptoms and could be due to virus/bacterial infections and air pollution. Increased expression of inflammatory markers in patients with AECOPD is associated with viral infection. This study aimed to detect different viruses and analyze the expression of various inflammatory markers associated with AECOPD patients. Three hundred and forty-seven patients diagnosed with COPD according to GOLD criteria were included in this study. Swab samples and blood were collected for the detection of viruses by RT-PCR and expression of inflammatory markers, respectively. Of the swab samples, 113 (32.6%) of samples were positive for virus detection. Of these, HRV (39.8%) was the predominant virus detected followed by FluB (27.4%) and FluA (22.1%). The presence of HRV was significantly higher (p=0.044) among the other detected viruses. When compared to healthy controls the expression levels of TNF-α, IL-6 and IL-8 were significantly higher (p<0.05) in virus-positive patients. The IL-6 and IL-8 were the next predominantly expressed in markers among the samples. The higher expression rate of IL-8 was significantly (p<0.05) associated with patients having COPD GOLD III severity level and smoking history. Although HRV was the predominant virus detected the combined prevalence of Influenza A and B surpassing the rate of HRV. The high-level expression of well known inflammatory markers of AECOPD, TNF-α, IL-6 and IL-8 indicates a chronic severe illness. These markers play an important role and could be used as a marker for determining the severity of AECOPD.(AU)

Estima-se que a doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC) seja a terceira causa de mortalidade global em 2020. A exacerbação aguda DPOC (AECOPD) é um agravamento súbito dos sintomas da DPOC e pode ser devido a infecções por vírus/bactérias e poluição do ar. O aumento da expressão de marcadores inflamatórios em pacientes com AECOPD está associado à infecção viral. Este estudo teve como objetivo detectar diferentes vírus e analisar a expressão de vários marcadores inflamatórios associados a pacientes com AECOPD. Trezentos e quarenta e sete pacientes com diagnóstico de DPOC de acordo com os critérios GOLD foram incluídos neste estudo. Amostras de swab e sangue foram coletadas para detecção de vírus por RT-PCR e expressão de marcadores inflamatórios, respectivamente. Das amostras de esfregaço, 113 (32,6%) amostras foram positivas para detecção de vírus. Nestas, o HRV (39,8%) foi o vírus predominante detectado, seguido do FluB (27,4%) e do FluA (22,1%). A presença de VFC foi significativamente maior (p = 0,044) entre os demais vírus detectados. Quando comparados a controles saudáveis, os níveis de expressão de TNF-α, IL-6 e IL-8 foram significativamente maiores (p <0,05) em pacientes com vírus positivo. A IL-6 e a IL-8 foram as próximas predominantemente expressas em marcadores entre as amostras. A maior taxa de expressão de IL-8 foi significativamente (p <0,05) associada a pacientes com grau de gravidade GOLD III da DPOC e história de tabagismo. Embora o HRV tenha sido o vírus predominante, a prevalência combinada de Influenza A e B ultrapassou a taxa de HRV. O alto nível de expressão de marcadores inflamatórios bem conhecidos de AECOPD, TNF-α, IL-6 e IL-8 indica uma doença crônica grave. Esses marcadores desempenham um papel importante e podem ser usados como um marcador para determinar a gravidade da AECOPD.(AU)

Effects of systemic inflammation due to hepatic ischemia-reperfusion injury upon lean or obese visceral adipose tissue

Purpose: To evaluate how the induction of liver damage by ischemia and reperfusion affects the adipose tissue of lean and obese mice. Methods: Lean and diet-induced obese mice were subjected to liver ischemia (30 min) followed by 6 h of reperfusion. The vascular stromal fraction of visceral adipose tissue was analyzed by cytometry, and gene expression was evaluated by an Array assay and by RT-qPCR. Intestinal permeability was assessed by oral administration of fluorescein isothiocyanate (FITC)-dextran and endotoxemia by serum endotoxin measurements using a limulus amebocyte lysate assay. Results: It was found that, after liver ischemia and reperfusion, there is an infiltration of neutrophils, monocytes, and lymphocytes, as well as an increase in the gene expression that encode cytokines, chemokines and their receptors in the visceral adipose tissue of lean mice. This inflammatory response was associated with the presence of endotoxemia in lean mice. However, these changes were not observed in the visceral adipose tissue of obese mice. Conclusions: Liver ischemia and reperfusion induce an acute inflammatory response in adipose tissue of lean mice characterized by an intense chemokine induction and leukocyte infiltration; however, inflammatory alterations are already present at baseline in the obese adipose tissue and liver ischemia and reperfusion do not injure further.

Changes in somatic cell count, composition and cytokine levels in milk from cows with mastitis due to mixed infections

Mastitis is a mammary gland inflammation that is very common worldwide, mostly caused by bacteria, and causes enormous economic losses. Many microorganisms cause this disease. The most common causes of mastitis by these microorganisms are Staphylococcus aureus (S. aureus), Escherichia coli (E. coli) and Streptococcus agalactiae (S. agalactiae). The anti-inflammatory properties of transforming growth factor (TGF)-ß include: 1) limiting interferon (IFN)-γ production; 2) increasing the expression of the interleukine (IL)-1 receptor antagonist; 3) inhibiting macrophage production of chemokines, pro-inflammatory cytokines, nitric oxide, and reactive oxygen intermediates; and 4) increasing macrophage clearance of bacterial debris and damaged parenchymal cells. It is stated that cytokines and milk composition change in case of mastitis. In this study, it was aimed to reveal the changes in milk TGF-ß1 and Tumor necrosis factor (TNF)-α concentrations and milk composition in mixed infections caused by three pathogens causing mastitis. In this study, milk samples from 90 cows were divided into 5 groups. Tumor necrosis factor (TNF)-α and TGF-ß1 concentrations and milk composition were determined in these milk samples. The California Mastitis Test (CMT) was applied to the cows included in the study and scoring was done. According to the CMT results of the milk samples taken, CMT(-) cows were included in group 1 (n = 22). Those with the CMT(+) were sent to the microbiology laboratory for analysis within 2 h. After the bacteria was determined, combination groupings were formed. Group 2 (n = 17), in which S. aureus and E. coli grew together, group 3 (n = 21), in which S. aureus and S. agalactiae grew together, group 4 (n = 8), in which S. agalactiae and E. coli grew together in milk samples, and milk samples without any bacterial growth in CMT (+) formed group 5 (n = 22), respectively. Somatic cell count was measured with the DeLaval Cell Counter® (Cell Counter DCC) device. Mineral matter, fat, protein, lactose, electrical conductivity and specific gravity were measured in milk samples using Lactoscan Milk Analyzer (Milkotronic/EUROPE). Milk samples were then stored at -80°C to measure TGF-ß1 and TNF-α. Tumor necrosis factor-α and TGF-ß1 concentrations in milk samples were measured using ELISA kits (Sunred Biological Technology). Changes in milk TNF-α and TGF-ß1 concentration and milk composition were determined in milk samples with mastitis caused by mixed infection. The TNF-α concentration of group 4 was higher than the other groups. On the other hand, the highest concentration of TGF-ß1 was found in group 2. While the number of somatic cells in group 1 was lower than in groups 2, 3, and 4, there was no statistical difference between groups 1 and 5. The lowest milk fat ratio was found in group 1, and it was found to be statistically lower than groups 2, 3, and 4. While the rate of solid-non-fat of group 1 increased compared to groups 2 and 3, the highest protein ratio was found in groups 1 and 5. There was no difference between the 5 groups in terms of mineral matter ratios. While the specific gravity was highest in group 1, there was no statistical difference between the other 4 groups. Overall, it was concluded that there was an increase in TNF-α and TGF-ß1 concentrations and a change in milk composition in samples with bacterial growth.(AU)

Inhibition of CXCR2 alleviates the development of abdominal aortic aneurysm in Apo E-/- mice

Purpose To investigate the relationship between atherosclerotic abdominal aortic aneurysm (AAA) and CXC chemokine receptor type 2 (CXCR2). Methods Mouse AAA model was established by embedding angiotensin-II pump (1000 ng/kg/min) in ApoE-/- mice. Mice were received SB225002, a selective CXCR2 antagonist, for treatment. Blood pressure was recorded, and CXCR2+ macrophages were examined by flow cytometry analysis. Terminal-deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling (TUNEL) staining was performed to detect cell apoptosis of abdominal aortic aneurysms. Macrophages were isolated from ApoE-/- mice and treated with Ang II and/or SB225002. Dihydroethidium staining was carried out to determine reactive oxygen species (ROS) activity. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was performed to determine the production of IL-1 and TNF-. The corresponding gene expressions were measured using real-time polymerase chain reaction (PCR), western blot, and immunohistochemistry staining. Results We found that Ang II activated the expression of CXCR2 in monocytes during the formation of AAA. Inhibition of CXCR2 significantly reduced the size of AAA, attenuated inflammation and phenotypic changes in blood vessels. Ang II-induced macrophages exhibited elevated ROS activity, and elevated levels of 1 and TNF-, which were then partly abolished by SB225002. Conclusions CXCR2 plays an important role in AAA, suggesting that inhibiting CXCR2 may be a new treatment for AAA.(AU)

Subclinical endometritis and postpartum ovarian resumption in respect to TNF-alpha, IL-8 and CRP in Egyptian buffaloes

The study was carried out to find the relation between subclinical endometritis (SCE) and postpartum (pp.) ovarian resumption as well as to evaluate serum and endometrial TNF-α, IL-8 and serum CRP in buffaloes with and without SCE. Thirty-nine pluriparous buffaloes at the 3rd (W3), 5th (W5) and 7th (W7) week pp. were involved in this experiment. The parity of the buffaloes ranged from 4 to 8 with an average 5.8±0.2. Subclinical endometritis was diagnosed by the percentage of polymorphonuclear cells (PMNs) in uterine cytology obtained from endometrial cytobrush at W5 and W7. The cut-off point of PMNs% in buffaloes for SCE was ≥ 6% at W5 or ≥ 4% at W7. According to PMNs%, buffaloes were divided into SCE group (n=27) and non-SCE group (n=12). Ovarian cyclicity was monitored by rectal palpation, ultrasonography and progesterone assay at W3, W5 and W7. Serum and endometrial TNF-α, IL-8 and serum CRP were estimated at W5 and W7. Buffaloes with SCE (55.6%) showed delayed ovarian activity as compared to non-SCE (16.7%) animals (P=0.036). Significant increase in serum cytokines and CRP levels were detected at W5 (P ˂0.05) and W7 (P <0.01) in SCE buffaloes as compared to non-SCE. Endometrial levels of cytokines were significantly (P ˂0.05) elevated in SCE buffaloes. Serum and endometrial cytokines showed significant positive correlation. Furthermore, levels of TNF-α, IL-8 and CRP exhibited significant positive correlation with PMNs%. In conclusion, SCE delayed postpartum ovarian cyclicity in buffaloes. Moreover, TNF-α, IL-8 and CRP assessments could be efficient tools in prediction of SCE in buffaloes.(AU)

HMGB1 and inflammatory cytokines in experimental acute lung injury induced in rabbits / [HMGB1 e citocinas inflamatórias em lesão pulmonar aguda experimental induzida em coelhos]

The aim of this work was to measure HMGB1, TNF-alpha, and IL-8 in bronchoalveolar lavage (BAL), serum and TLR2 and TLR4mRNA expression in lung tissue of rabbits with two grades of acute lung injury (ALI). The animals were randomly assigned to groups with severe (S) and mild/moderate (MM) ALI, induced with warm saline, and a control group. HMGB1, TNF-alpha, IL-8, TLR2mRNA and TLR4mRNA were measured after ALI induction. The results showed increased levels of IL-8, TNF-alpha, HMGB1 and TLR4mRNA in the ALI groups. HMGB1, IL-8 and TNF-alpha concentrations in BAL were higher in S compared MM. Increased TLR4mRNA was observed in S and MM versus control. The results suggest an early participation of HMGB1 in ALI together with IL-8 and TNF-alpha and association with severity. TLR4 has early expression and role in ALI pathophysiology but is not associated with severity.(AU)

O objetivo deste trabalho é determinar os níveis de HMGB1, TNF-alfa e IL-8 no lavado broncoalveolar (BAL), bem como quantificar a expressão sérica de TLR2 e TLR4 mRNA em tecido pulmonar de coelhos com dois graus de lesão pulmonar aguda (LPA). Os animais foram distribuídos aleatoriamente em grupos com LPA grave (S) e leve / moderada (MM), induzidas com solução salina morna, e um grupo controle. HMGB1, TNF-alfa, IL-8, TLR2mRNA e TLR4mRNA foram medidos após a indução de LPA e quatro horas de ventilação mecânica. Os resultados mostraram níveis aumentados de IL-8, TNF-alfa, HMGB1 e TLR4mRNA nos grupos com LPA. As concentrações de HMGB1, IL-8 e TNF-alfa no LBA foram maiores no S comparado ao MM. Aumento de TLR4mRNA foi observado em S e MM versus controle. Os resultados sugerem uma participação precoce da HMGB1 na LPA em conjunto com IL-8 e TNF-alfa e associação com a gravidade da LPA. O TLR4 foi expresso na ALI e possivelmente possui papel precoce na fisiopatologia da LPA, mas sem associação com a gravidade.(AU)

HMGB1 and inflammatory cytokines in experimental acute lung injury induced in rabbits / [HMGB1 e citocinas inflamatórias em lesão pulmonar aguda experimental induzida em coelhos]

The aim of this work was to measure HMGB1, TNF-alpha, and IL-8 in bronchoalveolar lavage (BAL), serum and TLR2 and TLR4mRNA expression in lung tissue of rabbits with two grades of acute lung injury (ALI). The animals were randomly assigned to groups with severe (S) and mild/moderate (MM) ALI, induced with warm saline, and a control group. HMGB1, TNF-alpha, IL-8, TLR2mRNA and TLR4mRNA were measured after ALI induction. The results showed increased levels of IL-8, TNF-alpha, HMGB1 and TLR4mRNA in the ALI groups. HMGB1, IL-8 and TNF-alpha concentrations in BAL were higher in S compared MM. Increased TLR4mRNA was observed in S and MM versus control. The results suggest an early participation of HMGB1 in ALI together with IL-8 and TNF-alpha and association with severity. TLR4 has early expression and role in ALI pathophysiology but is not associated with severity.(AU)

O objetivo deste trabalho é determinar os níveis de HMGB1, TNF-alfa e IL-8 no lavado broncoalveolar (BAL), bem como quantificar a expressão sérica de TLR2 e TLR4 mRNA em tecido pulmonar de coelhos com dois graus de lesão pulmonar aguda (LPA). Os animais foram distribuídos aleatoriamente em grupos com LPA grave (S) e leve / moderada (MM), induzidas com solução salina morna, e um grupo controle. HMGB1, TNF-alfa, IL-8, TLR2mRNA e TLR4mRNA foram medidos após a indução de LPA e quatro horas de ventilação mecânica. Os resultados mostraram níveis aumentados de IL-8, TNF-alfa, HMGB1 e TLR4mRNA nos grupos com LPA. As concentrações de HMGB1, IL-8 e TNF-alfa no LBA foram maiores no S comparado ao MM. Aumento de TLR4mRNA foi observado em S e MM versus controle. Os resultados sugerem uma participação precoce da HMGB1 na LPA em conjunto com IL-8 e TNF-alfa e associação com a gravidade da LPA. O TLR4 foi expresso na ALI e possivelmente possui papel precoce na fisiopatologia da LPA, mas sem associação com a gravidade.(AU)

In silico prediction of the functional and structural consequences of the non-synonymous single nucleotide polymorphism A122V in bovine CXC chemokine receptor type 1 / Predição in silico das consequências funcionais e estruturais do polimorfismo de nucleotídeo único não-sinônimo A122V no receptor de quimiocina CXC do tipo I bovino

The current study aimed to assess whether the A122V causal polymorphism promotes alterations in the functional and structural proprieties of the CXC chemokine receptor type 1 protein (CXCR1) of cattle Bos taurus by in silico analyses. Two amino acid sequences of bovine CXCR1 was selected from database UniProtKB/Swiss-Prot: a) non-polymorphic sequence (A7KWG0) with alanine (A) at position 122, and b) polymorphic sequence harboring the A122V polymorphism, substituting alanine by valine (V) at same position. CXCR1 sequences were submitted as input to different Bioinformatics' tools to examine the effects of this polymorphism on functional and structural stabilities, to predict eventual alterations in the 3-D structural modeling, and to estimate the quality and accuracy of the predictive models. The A122V polymorphism exerted tolerable and non-deleterious effects on the polymorphic CXCR1, and the predictive structural model for polymorphic CXCR1 revealed an alpha helix spatial structure typical of a receptor transmembrane polypeptide. Although higher variations in the distances between pairs of amino acid residues at target-positions are detected in the polymorphic CXCR1 protein, more than 97% of the amino acid residues in both models were located in favored and allowed conformational regions in Ramachandran plots. Evidences has supported that the A122V polymorphism in the CXCR1 protein is associated with increased clinical mastitis incidence in dairy cows. Thus, the findings described herein prove that the replacement of the alanine by valine amino acids provokes local conformational changes in the A122V-harboring CXCR1 protein, which could directly affect its post-translational folding mechanisms and biological functionality.(AU)

O presente estudo objetivou avaliar se o polimorfismo causal A122V promove alterações nas propriedades funcionais e estruturais da proteína receptora de quimiocina CXC do tipo 1 (CXCR1) de bovino Bos taurus por análises in silico. Duas sequências de aminoácidos da CXCR1 bovina foram selecionadas a partir do banco de dados UniProtKB/Swiss-Prot: a) sequência não-polimórfica (A7KWG0) contendo alanina (A) na posição 122, e b) sequência polimórfica carreando o polimorfismo A122V, causando a substituição de alanina por valina (V) na mesma posição. As sequências CXCR1 foram analisadas por diferentes ferramentas de Bioinformática para examinar o efeito desse polimorfismo sobre sua estabilidade, função e estrutura, predizer eventuais alterações na sua modelagem estrutural 3-D, bem como estimar a qualidade dos modelos preditos. O polimorfismo A122V exerceu efeitos toleráveis e não-deletérios sobre a CXCR1 polimórfica, apresentando um modelo estrutural de alfa-hélice típico de uma proteína receptora transmembranar para ambas as proteínas. Embora maiores variações nas distâncias entre os pares de aminoácidos nas posições-alvo tenham sido detectadas na proteína polimórfica, mais do que 97% dos aminoácidos em ambos os modelos foram situados em regiões ditas favoráveis e permitidas nos diagramas de Ramachandran. Evidências sustentam que o polimorfismo de nucleotídeo único A122V na proteína receptora CXCR1 está associado à aumentada incidência de mastite clínica em vacas leiteiras. Assim, as descobertas descritas aqui comprovam que a substituição do aminoácido alanina por valina provoca mudanças conformacionais locais na proteína CXCR1 polimórfica, que podem estar diretamente afetando seus mecanismos de enovelamento pós-traducionais e sua função biológica.(AU)

Interleukin 8 (-251 T>A) polymorphism in children and teenagers infected with Helicobacter pylori

Background Helicobacter pylori (H. pylori) is a gram-negative bacterium that colonizes the human stomach and causes a variety of gastric diseases. This study evaluated the correlations between the -251 (T>A) (rs4073) polymorphism of interleukin-8 (IL-8), the etiology of gastric disease, and H. pylori infection in pediatric and adolescent patients. Methods DNA samples were obtained from 285 gastric biopsies from pediatric patients. H. pylori was detected by PCR, whereas PCR-RFLP was used to characterize the -251 (T>A) polymorphism of IL-8. Results The histological analysis revealed the presence of gastritis in 158 patients (55.44%). H. pylori was found in 71 samples (24.9%). The -251 (T>A) polymorphism revealed that 58 (29.47%) samples were TT, 143 (50.18%) samples were TA, and 84 (20.35%) samples were AA. Conclusions Our findings suggest that IL8-251 A allele may be an important risk factor for the development of gastric disease when associated with H. pylori infection.(AU)

Helicobacter pylori with East Asian-type cagPAI genes is more virulent than strains with Western-type in some cagPAI genes

A gravidade da Helicobacter pylori relacionados com a doença está relacionada com a presença e a integridade de uma cag ilha de patogenicidade ( cag PAI). O genótipo de cag PAI pode ter um efeito modificador sobre o potencial patogênico da cepa infectante. Depois de analisar as seqüências de genes de cag PAI, algumas cepas com os genes PAI de cag do tipo do Leste Oriental foram selecionadas para análise posterior para examinar a associação entre a diversidade dos genes PAI cag e a virulência de H. pylori . Os resultados mostraram que a infiltração de células inflamatórias da mucosa gástrica foi significativamente maior em pacientes com genes PAI cag do leste asiáticoH. pylori estirpe em comparação com mosaicismo cag genes PAI H. pylori estirpe ( p <0,05). As cepas de H. pylori com os genes PAI do cag do tipo do Leste Asiático foram intimamente associadas à secreção de IL-8 in vitro e in vivo em comparação com cepas de H. pylori com os genes PAI do mosaicism cag ( p <0,01). As cepas de H. pylori com genes PAI cag do leste asiático são capazes de translocar fortemente CagA para células hospedeiras. Estes resultados sugerem que as cepas de H. pylori com cag do tipo East AsianOs genes PAI são mais virulentos do que as cepas do gene / genes PAI de CAG que são de tipo ocidental.(AU)

Interleukin 8 (-251 T>A) polymorphism in children and teenagers infected with Helicobacter pylori

Background Helicobacter pylori (H. pylori) is a gram-negative bacterium that colonizes the human stomach and causes a variety of gastric diseases. This study evaluated the correlations between the -251 (T>A) (rs4073) polymorphism of interleukin-8 (IL-8), the etiology of gastric disease, and H. pylori infection in pediatric and adolescent patients. Methods DNA samples were obtained from 285 gastric biopsies from pediatric patients. H. pylori was detected by PCR, whereas PCR-RFLP was used to characterize the -251 (T>A) polymorphism of IL-8. Results The histological analysis revealed the presence of gastritis in 158 patients (55.44%). H. pylori was found in 71 samples (24.9%). The -251 (T>A) polymorphism revealed that 58 (29.47%) samples were TT, 143 (50.18%) samples were TA, and 84 (20.35%) samples were AA. Conclusions Our findings suggest that IL8-251 A allele may be an important risk factor for the development of gastric disease when associated with H. pylori infection.(AU)

Histologic and inflammatory lamellar changes in horses with oligofructose-induced laminitis treated with a CXCR1/2 antagonist / Alterações histológicas e inflamatórias no tecido laminar de equinos submetidos ao modelo de laminite por oligofrutose e tratados com um antagonista para CXCR1/2

With the hypothesis that blocking chemokine signaling can ameliorate acute laminitis, the aim was to evaluate the therapeutic effect of intravenous DF1681B, a selective antagonist for CXCR1 and CXCR2 (chemokine receptors), in an oligofructose equine laminitis model. To twelve mixed breed clinically healthy hoses with no previous history of hoof-related lameness was administered oligofructose (10g/kg given by nasogastric tube) and divided into two groups: treated (intravenous DF1681B at 30mg/kg 6, 12, 18, and 24h after oligofructose) and non-treated groups. Laminar biopsies were performed before and 12, 36, and 72h after administering oligofructose. Samples were stained with periodic acid-Schiff (PAS) and scored from 0 to 6 according to epidermal cell and basal membrane changes. The IL-1β, IL-6, and CXCL1 RNA expressions were determined by RT-PCR. Parametric and non-parametric tests were used to compare times within each group (P<0.05). The PAS grades and IL-1β and IL-6 RNA expression increased in the non-treated group, but remained constant in the treated horses. In conclusion, DF1681B therapy reduced laminar inflammation and epidermal deterioration in treated horses. CXCR1/2 blockage should be considered therapeutically for equine acute laminitis(AU)

A expressão de quimiocinas e a infiltração de leucócitos no tecido laminar são característicos de laminite aguda de equinos. O presente estudo avaliou o efeito terapêutico da administração intravenosa de DF1681B , um antagonista seletivo para CXCR1 e CXCR2 (receptores de quimiocinas), em um modelo de laminite equina por oligofrutose. Utilizaram-se doze cavalos sem raça definida, compreendendo quatro machos e oito fêmeas não gestantes, com idade (média ±SD) 7±3,5 anos, pesando 305±35kg e com uma pontuação média de condição corporal de 5±1/9. Os indivíduos elegíveis eram clinicamente saudáveis, sem história prévia de claudicação relacionados ao casco. Após administração de oligofrutose (10g/kg por sonda nasogástrica), os animais foram divididos em dois grupos: tratado (30mg/kg de DF1681B intravenosa, 6, 12, 18 e 24h após a oligofrutose) e não tratado, que recebeu placebo. Biópsias laminares foram realizadas antes e 12, 36 e 72h após a administração de oligofrutose. As amostras foram coradas com ácido periódico de Schiff (PAS) e classificadas de 0-6 de acordo com alterações nas células epidérmicas e na membrana basal. Também determinaram-se as expressões gênicas de IL-1β, CXCL1 e IL-6 por RT-PCR. Testes paramétricos e não paramétricos foram utilizados para comparar os momentos em cada grupo (P<0,05). Estatisticamente, os graus PAS e as expressões de IL-1β e IL-6 se elevaram após a indução no grupo não tratado, mas se mantiveram constantes nos cavalos tratados. Em conclusão, a terapia por DF1681B reduziu a inflamação laminar e a deterioração epidérmica em equinos submetidos ao modelo de intoxicação por oligofructose. O bloqueio de receptores CXCR1/2 deve ser considerado como uma opção terapêutica para prevenção da laminite aguda de equinos(AU)

Regulação da Atividade Macrofágica pela Aspirina 15 cH in vitro

Plaquetas e endotélio de vasos interagem em direção da homeostase circulatória durante processos inflamatórios, contudo, efeitos paradoxais podem ocorrer em função do balanço entre mediadores anti e prótrombóticos. A administração de uma única e alta dose de Aspirina pode ocasionar a formação de trombos arteriais em oito a dez dias. Tem-se observado que Aspirina ultradiluída também promove trombogênese após uma hora de administração, porém não é sabido se ambos os casos envolvem a mesma via regulatória. Os efeitos antitrombóticos de altas doses podem ser revertidos pela ação protrombótica da Aspirina ultradiluída. Para compreender os mecanismos envolvidos nessa regulação, postula-se que a Aspirina ultradiluída tenha seu mecanismo de ação relacionado a efeito rebote envolvendo COX-2 e células inflamatórias, como macrófagos. Objetivo: Estudar os efeitos da Aspirina 15 cH sobre macrófagos ativados ou não por LPS, um ativador de COX-2. Métodos: Água, água sucussionada e Aspirina 200 µg/ml foram usadas como controle. A atividade macrofágica foi estudada mediante avaliação de espraiamento; dosagens de óxido nítrico, peróxidos, citocinas, quimiocinas; expressão de receptores TLR4, viabilidade celular e produção intracelular de espécies reativas de oxigênio. Resultados: O tratamento das células com Aspirina 15 cH levou ao aumento no spreading e produção de H2O2 com a mesma magnitude do LPS, mas anulou seu efeito quando administrados ambos conjuntamente. A Aspirina 200 µg/ml produziu efeito anti-inflamatório clássico em todos os parâmetros analisados, revertendo os efeitos do LPS. A água sucussionada per se mostrou efeitos pró-inflamatórios independente do LPS, como aumento de spreading e redução de IL 10; ação regulatória sobre a produção de TNF e H2O2 e aumento na atividade oxidativa celular, com efeito paradoxal após estímulo com LPS. O tratamento com Aspirina 15 cH não alterou a atividade oxidativa intracelular, mas água sucussionada elevou o número absoluto de células que expressam essa atividade. A expressão de TLR-4, por sua vez, foi significativamente maior nos grupos tratados com LPS, independentemente dos co-tratamentos. Conclusão: O efeito paradoxal da Aspirina 15 cH observado in vivo foi reproduzido neste modelo in vitro. A Aspirina 15 cH isoladamente ou em associação com LPS produz efeitos antagônicos, com reversão de efeitos sobre spreading e produção de H2O2. Especula-se que sua ação seja sobre as proteínas dos microtúbulos, favorecendo o spreading. A Aspirina 200 µg/ml produz efeitos anti-inflamatórios clássicos e a água sucussionada produz efeitos pró-inflamatórios e regulação de TNF e H2O2 após o estímulo com LPS.

Introduction: platelets and endothelium interact towards circulatory homeostasis during inflammatory processes however, paradoxical effects may occur due to the balance between anti and prothrombotic mediators. The administration of a single high dose of Aspirin can lead to the formation of arterial thrombi in eight to ten days. It has been observed that ultra-diluted aspirin also promotes thrombogenesis after one hour of administration, but it is not known whether both cases involve the same regulatory pathway. The antithrombotic effects of high doses can be reversed by the prothrombotic action of ultra-diluted aspirin. To understand the mechanisms involved in this regulation, it is postulated that ultra-diluted aspirin has its mechanism of action related to a rebound effect involving COX-2 and inflammatory cells, such as macrophages. Objective: To study the effects of Aspirin 15 cH on macrophages activated or not by LPS, a COX-2 activator. Methods: Water, sucussed water and Aspirin 200 µg/ml were used as controls. The macrophage activity was studied by means of spreading evaluation; nitric oxide, peroxides, cytokines, and chemokines measurements; expression of TLR4 receptors; cell viability and intracellular production of reactive oxygen species. Results: The treatment of cells with Aspirin 15 cH led to increase in the cell spreading and production of H2O2, with the same magnitude as LPS did, but nullified its effect when both were administered together. Aspirin 200 µg/ml produced a classic anti-inflammatory effect in all parameters analyzed, reversing the effects of LPS. Sucussed water per se showed pro-inflammatory effects independent of LPS, such as increase in the cell spreading and reduction of IL 10; as well as regulatory action on the production of TNF and H2O2. Moreover, it increased the cellular oxidative activity, with paradoxical effect after stimulation with LPS. Treatment with Aspirin 15 cH did not change the intracellular oxidative activity, but sucussed water increased the absolute number of cells that express this activity. TLR-4 expression, in turn, was significantly higher in LPS-treated groups, regardless of the co-treatments. Conclusion: The paradoxical effect of Aspirin 15 cH observed in vivo was reproduced in this in vitro model. Aspirin 15 cH alone or in association with LPS produces antagonistic effects, with reversal of the effects on spreading and production of H2O2. It is speculated that it could act on microtubule proteins, favoring the spreading. Aspirin 200 µg/ml produces classic anti-inflammatory effects and sucussed water produces pro-inflammatory effects and regulation of TNF and H2O2 after being stimulated with LPS.

Caracterização dos genes CCL5, FST e SLIT2 no processo de desenvolvimento e regressão do corpo lúteo de cadelas não prenhes

Resumo: A cadela é um animal monoéstrico, não sazonal, que apresenta anestro entre as fases reprodutivas ativas. O ciclo estral é controlado pelo eixo hipotálamo-hipófise-gonadal por atuação dos hormônios folículo estimulante (FSH), luteinizante (LH), 17ß-estradiol (E2) e progesterona (P4), e ainda por ativinas e inibinas. O corpo lúteo (CL), glândula endócrina presente no diestro de cadelas prenhes e de não prenhes, secreta tanto P4 quanto E2, que atua de maneira autócrina, parácrina e endócrina, controlando a função luteínica. O E2 se liga aos receptores (ERs) alfa (ERa) e beta (ERb), considerados em algumas espécies como luteotrófico e luteolítico, respectivamente. Os processos que rodeiam a formação, manutenção e regressão luteínica de cadelas cílicas ainda não estão completamente elucidados, e a expressão gênica e proteica durante esse período é variável. Quimiocinas, como RANTES (CCL5), folistatina (FST) e slit guidance ligand 2 (SLIT2) podem estar relacionados a esses processos e serem regulados pela ligação E2-ERs. Este estudo teve interesse em caracterizar a expressão de CCL5, FST, SLIT2, ESR1 (ERa) e ESR2 (ERb) no CL de cadelas cíclicas não prenhes através da técnica RNAseq, validá-los pelo qPCR e relacioná-los a interação entre E2-ERs. Foram utilizados 30 CLs provenientes de cadelas não prenhes nos dias 10, 20, 30, 40, 50 e 60 após a ovulação (RNAseq n=3/grupo; qPCR n=5/grupo). ESR1 e ESR2 não considerados diferencialmente expressos ao RNAseq; CCL5, FST e SLIT2 apresentaram aumento progressivo nas comparações do início em relação ao final do diestro. Ao qPCR, o mRNA de SLIT2 estava mais expresso no dia 60 após a ovulação (p.o.) em relação ao dia 10. O mRNA do ESR2 apresentou aumento na expressão nos dias 20 e 40 p.o. em relação ao dia 30 p.o. Não houve diferença significativa para CCL5, FST e ESR1 ao qPCR. Os resultados sugerem que a expressão de SLIT2 varie ao longo do diestro e responda a interação entre E2 e ERb, contribuindo com os sinais apoptóticos que aparecem durante a regressão luteínica. Apesar do mRNA de FST e CCL5 estarem presentes no CL canino, estes não apresentam variações significativas durante a formação, manutenção e regressão do corpo lúteo. Assim, o papel desta expressão precisa ser melhor investigado.

Abstract: The female dog is a monoestric, non-seasonal breeder, wihch presents anestrus between the active reproductive phases. The estrus cycle is controlled by the hypothalamus-pituitary-ovarian axis by the action of the follicle stimulating (FSH), luteinizing (LH), 17b-estradiol (E2) and progesterone (P4) hormones, and also by activins and inhibins. The canine corpus luteum (CL), an endocrine gland present along diestrus, secretes both P4 and E2, which acts in an autocrine, paracrine and endocrine manner controlling the luteal function. E2 binds to its receptors alpha (ERa) and beta (ERb), considered in some species as luteotropic and luteolytic, respectively. The processes surrounding the formation, maintenance and regression of the CL are still not completely elucidated, genes and proteins expression during this period is variable. Chemokines like RANTES (CCL5), follistatin (FST) and slit guidance ligant 2 (SLIT2) can be releated to these processes and regulated by E2-ERs. The aim of this study was to characterize expression of CCL5, FST, SLIT2, ESR1 (ERa) and ESR2 (ERb) in the cyclic CL throught RNAseq technique, validate them by qPCR and relate them to the interaction between E2-ERs. Thirty CLs from non-pregnant dogs on days 10, 20, 30, 40, 50 and 60 after avulation (p.o.) were used (RNAseq n=3/group; qPCR n=5/group). ESR1 and ESR2 were not significantly different in the RNAseq analysis; CCL5, FST and SLIT2 showed progressive increase from day 10 post-ovulation ownards. By qPCR analysis, SLIT2 mRNA was upregulated on the day 60 in comparison to day 10 p.o. ESR2 mRNA was upregulated on days 20 and 40 in comparison to day 30 p.o. CCL5, FST and ESR1 mRNA showed no significant difference. Results suggest that the SLIT2 expression varies through the diestrus and responds to the interaction between E2 and ERb, contributing to the apoptotic signals during the luteal regression. Althought FST and CCL5 mRNAs are expressed in the canine CL, they do not present signifficant variation during the formation, maintenance and regression of the CL. Thus, their role needs further investigation.

Toxoplasma gondii: EXPRESSÃO DE CITOCINASAPÓS INFECÇÃO EXPERIMENTAL E AVALIAÇÃO DA RESPOSTA IMUNE INATA MEDIADA POR FAGÓCITOS, EM GATOS NATURALMENTE INFECTADOS PELO FIV

No primeiro experimento, objetivou-se avaliar a resposta imune inata mediada por células polimorfonucleares de gatos naturalmente infectados pelos vírus da imunodeficiência felina após exposição in vitro a taquizoitos de Toxoplasma gondii. As células polimorfonucleares foram avaliadas quanto a sua viabilidade pelo método do MTT, quanto a liberação de DNA extracelular dosado com um kit comercial (Picogreen dsDNA), produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) avaliadas em citômetro de fluxo e a expressão das citocinas TNF-, IL8, IL-10, IL-12, IL-1 e IFN- pela RT- qPCR em gatos FIV positivos (FIV+) e em gatos FIV negativos (FIV-). Os resultados demonstram (i) diminuição da viabilidade celular após exposição ao T. gondii em todos os tempos de incubação, entre as células puras e as interações no grupo (FIV + FIV-) e entre os grupos (FIV+ x FIV-)(p<0,05); (ii) Diferenças significativas (p<0,05), com aumento da liberação de DNA extracelular nas interações em comparação as culturas puras de neutrófilos e nas interações entre os tempos tanto nos animais FIV+ como nos FIV- e ainda, subtraindo das interações o efeito fisiológico da célula, maior liberação de DNA pelos animais FIV positivos nos 30 minutos iniciais da interação; (iii) Aumento significativo da produção de ROS pelos neutrófilos após estímulo com T. gondii e com PMA, com comportamento similar entre os grupos tratados; (iv) Regulação positiva da expressão de IFN-y no grupo FIV+ e negativa no FIV- após estímulo in vitro com T. gondii, sendo significativas entre si (p=0,0172); (v) Redução significativa da expressão de TNF- nas interações dos animais FIV+ comparadas a cultura pura (p=0,0181). Estes resultados sugerem que, in vitro, a viabilidade das células não é afetada pela presença do FIV mesmo frente a uma infecção por T. gondii, entretanto, a ativação dos neutrófilos de gatos FIV- é mais rápida do que nos FIV+ nos 30 minutos iniciais da interação. No segundo experimento objetivamos avaliar o efeito do T. gondii na expressão das citocinas TNF-, IL-8, IL-10, IL-12, IL-1 e IFN- antes e após infecção experimental in vivo por T. gondii,frente ao desafio in vitro com taquizoítos do T. gondii. Os neutrófilos foram mantidos em cultura puras ou interagindo com T. gondii durante 3 horas. As amostras foram avaliadas pela técnica RT-qPCR e os resultados demonstram (i) significativa redução da expressão de IL-8 nos animais após a infecção experimental em relação ao período anterior a infecção; (ii) aumento significativo da expressão de TNF- nos animais em fase aguda da infecção in vivo. Nossos resultados sugerem que o T. gondii influencia de maneira diferente na expressão de cada citocina estudada, podendo aumentar ou diminuir a expressão, reduzindo principalmente a capacidade quimiotática dos neutrófilos na fase aguda da infecção.

No first experiment aimed to evaluate the immune response mediated by polymorphonuclear cells of cats naturally infected by feline immunodeficiency viruses after in vitro exposure to Toxoplasma gondii tachyzoites. As polymorphonuclear cells were evaluated for their viability by the MTT method, for the release of extracellular DNA dosed with a commercial kit (Picogreen dsDNA), production of reactive oxygen species (ROS) evaluated on the flow cytometer and expression of the cytokines TNF- , IL-8, IL-10, IL-12, IL-1 and IFN- by RT-qPCR in FIV positive cats (FIV +) and in FIV negative cats (FIV-). The results demonstrated (i) reduced cell viability after exposure to T. gondii at all incubation times, between pure cells and interactions in the group (FIV + FIV-) and between groups (FIV + x FIV -) (p <0.05); (ii) Isolated differences (p <0.05), with increased release of extracellular DNA in interactions compared to neutrophil cultures and interactions between times between IVF + animals such as IVF and subtracting from the interactions or physiological effect of the cell, greater release of DNA by positive IVF animals in the initial 30 minutes of interaction; (iii) Significant increase in ROS production by neutrophils after stimulation with T. gondii and PMA, with similar behavior between the groups used; (iv) Positive regulation of IFN-y expression in the FIV + group and negative regulation in the FIV- after in vitro stimulation with T. gondii, being applicable to each other (p = 0.0172); (v) Significant reduction in TNF- expression in the interactions of IVF + animals compared to pure culture (p = 0.0181). These results suggest that, in vitro, cell viability is not affected by the presence of FIV even in the presence of a T. gondii infection, however, an activation of neutrophils in FIV- cats is faster than in FIV + in 30 minutes initiates of the interaction. No second experiment evaluated the effect of T. gondii on the expression of TNF-, IL-8, IL-10, IL-12, IL-1 and IFN- and IFN- cytokines before and after experimental in vivo infection by T. gondii, facing the in vitro challenge with T. gondii tachyzoites. Neutrophils were maintained in culture or interacted with T. gondii for 3 hours. As the samples were evaluated by the RT-qPCR technique and the results demonstrated (i) reduced reduction of IL-8 expression in the animals after an experimental infection in relation to the period before the infection; (ii) significant increase in the expression of TNF in animals in the acute phase of infection in vivo. Our results suggest that T. gondii influences differently on the expression of each studied cytokine, increases or decreases an expression, mainly affects the chemotactic capacity of neutrophils in the acute phase of infection.

CARACTERIZAÇÃO E BIOCOMPATIBILIDADE DE SCAFFOLD DE BURITI (Mauritia flexuosa) PARA CULTIVO DE CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS ASSOCIADAS A FOLÍCULOS OVARIANOS PRÉ-ANTRAIS CAPRINOS

O desenvolvimento de sistemas de cultivo de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) com células-tronco pode reduzir o estresse oxidativo, por meio dos secretomas liberados por essas células, que são pequenas moléculas constituídas por agentes antioxidantes, fatores de crescimento e quimiocinas o que pode favorecer o desenvolvimento desses folículos. Os FOPA poderiam ser beneficiadas por serem estruturas celulares de elevada exigência metabólica, que se desenvolvem mediante interação com radicais oxidativos e peptídeos bioativos, tornando seu cultivo in vitro complexo e oneroso. O óleo do buriti, palmeira típica da região norte-nordeste, apresenta baixo custo de extração e relevantes propriedades antioxidantes, denotando potencial para a utilização em cultivo celular. Este trabalho tem como objetivo caracterizar física e quimicamente o scaffold de óleo de buriti (SB), avaliar a bioincorporação com células-tronco mesenquimais e o efeito em sistema de co-cultivo com folículos ovarianos pré-antrais (FOPA) caprinos. Para caracterização do SB foram realizadas a espectroscopia na região do Infravermelho (FTIR) e Análise Termogravimétrica (TG e DTG). Analisadas a morfologia e adesão celular por meio da microscopia eletrônica de varredura (MEV) e técnicas histológicas. Para avaliar a biocompatibilidade foram empregados os testes de MTT e atividade hemolítica. A capacidade de ativação de células do sistema imune foi mensurada pelos testes de capacidade fagocítica e síntese de oxido nítrico. Os FOPA caprinos foram cultivados a partir de fragmentos do córtex ovariano, dos quais um deles foi imediatamente fixado em carnoy (controle fresco). Os demais fragmentos, foram cultivados por 1 e 7 dias em placas de cultura na presença ou ausência do scaffold de buriti com células-tronco da geleia de Wharton (SB-CTMGW). Após o cultivo os fragmentos ovarianos foram fixados em carnoy para exame histológico. Quanto à caracterização, o SB apresenta composição amorfa, alta estabilidade térmica e alta capacidade de expansão em água. Em relação à morfologia, demonstra superfície com micro e macroporos e boa adesão de CTMGW. Foi observada a ausência de citotoxicidade e atividade hemolítica, e o SB não estimulou a ativação de macrófagos. Os folículos pré-antrais foram morfologicamente classificados em primordiais ou folículos em desenvolvimento. O grupo cultivado tratamento apresenta a maior redução das porcentagens de folículos primordiais (p <0,05), e as porcentagens de folículos em desenvolvimento, aumentaram (p <0,05), comparando-os, ao grupo controle. Em conclusão o co-cultivo de células-tronco da geleia de Wharton sob scaffold de buriti mantém a estrutura e promove a ativação e o crescimento in vitro de folículos ovarianos pré-antrais caprinos, apesar de reduzir a viabilidade folicular.

The development of preantral ovarian follicular (POF) culture systems with stem cells can reduce oxidative stress by means of the secretasomes released by these cells, which are small molecules composed of antioxidants, growth factors and chemokines. may favor the development of these follicles. POF could benefit from being highly metabolic cellular structures that develop through interaction with oxidative radicals and bioactive peptides, making their in vitro culture complex and costly. Buriti oil, a typical palm of the north-northeast region, presents low extraction costs and relevant antioxidant properties, denoting potential for use in cell culture. The aim of this work was to characterize the scaffold of buriti oil (SB), to evaluate the bioincorporation with mesenchymal stem cells and the effect on co-culture with preantral ovarian follicles (goat's POF). To characterize the SB were the Infrared Spectroscopy (FTIR) and Thermogravimetric Analysis (TG and DTG). The morphology and cellular adhesion were analyzed through scanning electron microscopy (SEM) and histological techniques. MTT tests and hemolytic activity were used to evaluate the biocompatibility. The activation capacity of cells of the immune system was measured by tests of phagocytic capacity and synthesis of nitric oxide. Goat POF were cultured from fragments of the ovarian cortex, one of which was immediately fixed in carnoy (fresh control). The remaining fragments were cultured for 1 and 7 days in culture plates in the presence or absence of buriti scaffold with Wharton jelly mesenquimal stem cells (SB-CTMGW). After culture the ovarian fragments were fixed in carnoy for histological examination. Regarding the characterization, the SB has amorphous composition, high thermal stability and high water expansion capacity. In relation to the morphology, it shows micro and macropore surfaces and good adhesion of CTMGW. The absence of cytotoxicity and hemolytic activity was observed, and SB did not stimulate the activation of macrophages. Preantral ovarian follicles were morphologically classified into primordial or developing follicles. The cultivated treatment group showed the greatest reduction in the percentages of primordial follicles (p <0.05), and the percentages of developing follicles increased (p <0.05), comparing them to the control group. In conclusion, the co-cultivation of mesenquimal stem cells from Wharton jelly under buriti scaffold maintains the structure and promotes the activation and in vitro growth of preantral follicles of goat preantral, although reducing follicular viability.

Avaliação clínica e hematológica de equinos submetidos ao modelo de laminite por oligofructose, tratados ou não com um agente antagonista de receptores CXCR1/2 / Clinical and hematological evaluation of horses subjected to oligofructose-induced laminitis treated or not with a CXCR1/2 antagonist

O recrutamento de leucócitos aos tecidos é uma parte essencial da resposta imune inata e esse processo de forma desregulada pode resultar em lesões aos tecidos. Assim, a infiltração de leucócitos tem sido implicada na patogênese de laminite aguda em equinos. Os objetivos dessa pesquisa foram verificar a ação da ICXCR1/2 sobre os sinais clínicos e parâmetros hematológicos de cavalos com laminite induzida por oligofrutose. Doze equinos receberam oligofrutose (10g/kg de peso vivo PO) no tempo 0 e foram divididos em 2 grupos: tratados (30mg/kg p.v. ICXCR1/2 IV, nos tempos 6, 12, 18 e 24 h) e não tratados. As frequências cardíaca e respiratória, temperatura retal, coloração de membranas mucosas, presença e intensidade de pulso digital, sensibilidade ao exame com pinça de casco e grau de claudicação segundo Obel, bem como parâmetros hematológicos e bioquímicos (hemograma e as concentrações sanguíneas de glicose, uréia, creatinina, ALT, AST, FA, GGT, bilirrubina total e proteína total) foram aferidos nos tempos 0, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 e 72 horas . O modelo usando oligofructose foi adequado para induzir sinais de laminite e de sinais de endotoxemia, como diarreia, febre e leucocitose em cavalos sem raça definida de origem nacional. Também, não foram observadas quaisquer reações adversas clínicas ou hematológicas relacionadas ao uso intravenoso do antagonista de CXCR1/2, contudo essa substância, quando administrada na dose de 30mg/kg de peso vivo, 4 vezes ao dia, por 4 aplicações, não foi capaz de prevenir os sinais clínicos e as alterações hematológicas causadas pela administração de oligofructose nos equinos deste estudo.(AU)

Leucocytes recruitment to tissues is an essential part of the innate immune response and an unregulated process can result in tissue damage. Thus, leucocytes infiltration has been implicated in the pathogenesis of acute laminitis. The objectives of this stud were to determine the effect of an antagonist for CXCR1/2, a chemokine receptor for neutrophils attraction on clinical signs and hematological parameters in horses given oligofructose to induce laminitis. Twelve horses were given oligofructose (10g/kg bw PO) in time 0 and divided into two groups: one treated (30mg/kg bw. ICXCR1/2 IV, times 6, 12, 18 e 24 h) and the other not treated. Cardiac and respiratory frequency, rectal temperature, mucous membrane colour, digital pulse, hoof sensitivity and Obel's grade of lameness were recorded. Values for RBC, WBC and blood glucose, BUN, creatinin, ALT, AST, alkaline phosphatase, GGT, total bilirubin and serum protein concentrations were measured on times 0, 6, 12, 18, 24, 36, 48, 60 e 72 h. All the horses given oligofructose developed signs of endotoxemia like diarrhea, fever and leukocytosis and laminitis. Also, CXCR1/2 antagonist treatment did not cause any adverse effects. However, this substance when injected intravenously (30mg/kg) 6/6 hours in 4 applications, did not ameliorate clinical and hematological signs of endotoxemia.(AU)

Avaliação da capacidade da modulação da saliva de Amblyomma cajennense diante da infecção de macrófagos por Leishmania major in vitro

Os carrapatos são ectoparasitas obrigatoriamente hematófagos, que secretam através de sua saliva componentes bioativos com ação imunomoduladora. Alguns protozoários utilizam esses componentes da saliva como meio de transporte e proteção para estabelecer sua infecção. A Leishmnia major causadora da leishmaniose cutânea é um importante microrganismo que pode ser transmitido pela saliva. O objetivo deste estudo foi avaliar a capacidade imunomoduladora da saliva de Amblyomma cajennense diante da infecção por Leishmania major in vitro. Foram utilizados macrófagos infectados com Leishmania e posteriormente tratados com diferentes concentrações de saliva, 10µg/ml; 5 µg/ml, 1 µg/ml; 0,1 µg/ml; 0,01 µg/ml; 0,001 µg/ml. Também foi avaliado a capacidade fagocítica, por meio da citometria de fluxo. A produção de óxido nítrico foi realizada pela reação colorimétrica de Griess utilizando o sobrenadante coletado das culturas, e as citocinas IL-12, TNF-, IL-10 e a quimiocina MCP-1 foram analisadas através do método de CBA. Foi observado um aumento da capacidade fagocítica pelos macrófagos tratados com as menores concentrações de saliva após uma hora de infecção. Ao avaliar a produção óxido nítrico, evidenciou-se um aumento significativo culturas tratadas com baixa concentração de saliva. Em relação às citocinas, houve um aumento nas condições de infecção e não infecção dos macrófagos. Nas condições de não infecção houve aumento das citocinas IL-12, TNF- e IL-10 nas culturas que receberam as menores concentrações de saliva. A quimiocina MCP-1 apresentou uma diminuição dose dependente nas culturas que receberam somente saliva. Em condições de infecção foi observado o aumento de IL-12, TNF-, IL-10 e da quimicina MCP-1 nas culturas tratadas com saliva, em todas as concentrações. Desta forma podemos concluir que a saliva de Amblyomma cajennense possui mecanismos específicos que conseguem modular células e moléculas do sistema imunológico do hospedeiro incluindo macrófagos e as citocinas e quimiocinas produzidas por eles.

Ticks are ectoparasites obligatorily hematophagous, which secrete through their saliva bioactive components with immunomodulatory action. Some protozoa use these components of saliva as a means of transport and protection to establish their infection. The Leishmnia major that causes cutaneous leishmaniasis is an important microorganism that can be transmitted by saliva. The objective of this study was to evaluate the immunomodulatory capacity of Amblyomma cajennense saliva in relation to Leishmania major infection in vitro. Leishmania-infected macrophages were used and subsequently treated with different concentrations of saliva 10µg/ml; 5 µg/ml, 1 µg/ml; 0,1 µg/ml; 0,01 µg/ml; 0,001 µg/ml. The phagocytic capacity was also assessed by flow cytometry. Nitric oxide production was evaluated by the Griess colorimetric reaction through the supernatant collected from the cultures, and the cytokines IL-12, TNF-, IL-10 and the chemilone MCP-1 were analyzed by the CBA method. An increase in phagocytic capacity was observed by macrophages treated with the lowest concentrations of saliva after one hour of infection. When evaluating nitric oxide production, a significant increase was observed in cultures treated with low saliva concentration. In relation to the cytokines, there was an increase in the infection conditions and no infection of the macrophages. In the conditions of non-infection there was an increase in IL-12, TNF- and IL-10 cytokines in the cultures that received the lowest concentrations of saliva. MCP-1 chemokine showed a dose-dependent decrease in cultures that received saliva alone. Under infection conditions, the increase of IL-12, TNF-, IL-10 and the chemistry MCP-1 in saliva treated cultures at all concentrations was observed. In this way we can conclude that Amblyomma cajennense saliva has specific mechanisms that can modulate cells and molecules of the host immune system including macrophages and the cytokines and chemokines produced by them.

Expression of RANTES, eotaxin-2, ICAM-1, LFA-1 and CCR-3 in chronic rhinosinusitis patients with nasal polyposis / Expressão de RANTES, eotaxina-2, ICAM-1, LFA-1 e CCR-3 em pacientes com rinossinusite crônica associada à polipose nasossinusal

PURPOSE: To compare gene expression of the chemokines RANTES and eotaxin-2, its receptor, CCR-3, adhesion molecule ICAM-1 and its receptor LFA-1 in eosinophilic polyps and in control normal nasal mucosa. METHODS: Gene expression was quantified by Real Time PCR in polyps (n=35) and in healthy nasal mucosa (n=15). RESULTS: Eosinophilic polyps showed a higher expression of eotaxin-2 and RANTES, but not of CCR-3, ICAM-1 or LFA-1 compared to control nasal mucosa. CONCLUSION: Eosinophilic polyps present greater expression of eotaxin-2 and RANTES, but not of CCR-3, ICAM-1 or LFA-1 compared to control nasal mucosa.(AU)

OBJETIVO: Comparar a expressão gênica das quimiocinas RANTES e eotaxina-2, do seu receptor CCR-3, da molécula de adesão ICAM-1 e do seu receptor LFA-1 entre pólipos nasais eosinofílicos (PE) (n=35) e mucosa nasal controle (n=15). MÉTODOS: Quantificou-se a expressão gênica dos mediadores citados pela técnica de PCR em tempo real em PEs e em mucosas de concha média de pacientes sem doenças nasais ou alteração endoscópica. RESULTADOS: Pólipos eosinofílicos apresentam maior expressão de eotaxina-2 e RANTES, mas não de CCR-3, ICAM-1 e LFA-1, quando comparados as mucosas nasais controles. CONCLUSÃO: Pólipos eosinofícios apresentaram maior expressão de eotaxin-2 and RANTES, mas não de CCR-3, ICAM-1 ou LFA-1,comparada à mucosa nasal controle.(AU)