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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-219806

Resumo

Plaquetas e endotélio de vasos interagem em direção da homeostase circulatória durante processos inflamatórios, contudo, efeitos paradoxais podem ocorrer em função do balanço entre mediadores anti e prótrombóticos. A administração de uma única e alta dose de Aspirina pode ocasionar a formação de trombos arteriais em oito a dez dias. Tem-se observado que Aspirina ultradiluída também promove trombogênese após uma hora de administração, porém não é sabido se ambos os casos envolvem a mesma via regulatória. Os efeitos antitrombóticos de altas doses podem ser revertidos pela ação protrombótica da Aspirina ultradiluída. Para compreender os mecanismos envolvidos nessa regulação, postula-se que a Aspirina ultradiluída tenha seu mecanismo de ação relacionado a efeito rebote envolvendo COX-2 e células inflamatórias, como macrófagos. Objetivo: Estudar os efeitos da Aspirina 15 cH sobre macrófagos ativados ou não por LPS, um ativador de COX-2. Métodos: Água, água sucussionada e Aspirina 200 µg/ml foram usadas como controle. A atividade macrofágica foi estudada mediante avaliação de espraiamento; dosagens de óxido nítrico, peróxidos, citocinas, quimiocinas; expressão de receptores TLR4, viabilidade celular e produção intracelular de espécies reativas de oxigênio. Resultados: O tratamento das células com Aspirina 15 cH levou ao aumento no spreading e produção de H2O2 com a mesma magnitude do LPS, mas anulou seu efeito quando administrados ambos conjuntamente. A Aspirina 200 µg/ml produziu efeito anti-inflamatório clássico em todos os parâmetros analisados, revertendo os efeitos do LPS. A água sucussionada per se mostrou efeitos pró-inflamatórios independente do LPS, como aumento de spreading e redução de IL 10; ação regulatória sobre a produção de TNF e H2O2 e aumento na atividade oxidativa celular, com efeito paradoxal após estímulo com LPS. O tratamento com Aspirina 15 cH não alterou a atividade oxidativa intracelular, mas água sucussionada elevou o número absoluto de células que expressam essa atividade. A expressão de TLR-4, por sua vez, foi significativamente maior nos grupos tratados com LPS, independentemente dos co-tratamentos. Conclusão: O efeito paradoxal da Aspirina 15 cH observado in vivo foi reproduzido neste modelo in vitro. A Aspirina 15 cH isoladamente ou em associação com LPS produz efeitos antagônicos, com reversão de efeitos sobre spreading e produção de H2O2. Especula-se que sua ação seja sobre as proteínas dos microtúbulos, favorecendo o spreading. A Aspirina 200 µg/ml produz efeitos anti-inflamatórios clássicos e a água sucussionada produz efeitos pró-inflamatórios e regulação de TNF e H2O2 após o estímulo com LPS.

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Introduction: platelets and endothelium interact towards circulatory homeostasis during inflammatory processes however, paradoxical effects may occur due to the balance between anti and prothrombotic mediators. The administration of a single high dose of Aspirin can lead to the formation of arterial thrombi in eight to ten days. It has been observed that ultra-diluted aspirin also promotes thrombogenesis after one hour of administration, but it is not known whether both cases involve the same regulatory pathway. The antithrombotic effects of high doses can be reversed by the prothrombotic action of ultra-diluted aspirin. To understand the mechanisms involved in this regulation, it is postulated that ultra-diluted aspirin has its mechanism of action related to a rebound effect involving COX-2 and inflammatory cells, such as macrophages. Objective: To study the effects of Aspirin 15 cH on macrophages activated or not by LPS, a COX-2 activator. Methods: Water, sucussed water and Aspirin 200 µg/ml were used as controls. The macrophage activity was studied by means of spreading evaluation; nitric oxide, peroxides, cytokines, and chemokines measurements; expression of TLR4 receptors; cell viability and intracellular production of reactive oxygen species. Results: The treatment of cells with Aspirin 15 cH led to increase in the cell spreading and production of H2O2, with the same magnitude as LPS did, but nullified its effect when both were administered together. Aspirin 200 µg/ml produced a classic anti-inflammatory effect in all parameters analyzed, reversing the effects of LPS. Sucussed water per se showed pro-inflammatory effects independent of LPS, such as increase in the cell spreading and reduction of IL 10; as well as regulatory action on the production of TNF and H2O2. Moreover, it increased the cellular oxidative activity, with paradoxical effect after stimulation with LPS. Treatment with Aspirin 15 cH did not change the intracellular oxidative activity, but sucussed water increased the absolute number of cells that express this activity. TLR-4 expression, in turn, was significantly higher in LPS-treated groups, regardless of the co-treatments. Conclusion: The paradoxical effect of Aspirin 15 cH observed in vivo was reproduced in this in vitro model. Aspirin 15 cH alone or in association with LPS produces antagonistic effects, with reversal of the effects on spreading and production of H2O2. It is speculated that it could act on microtubule proteins, favoring the spreading. Aspirin 200 µg/ml produces classic anti-inflammatory effects and sucussed water produces pro-inflammatory effects and regulation of TNF and H2O2 after being stimulated with LPS.

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