Lesão facial grave em um gambá-de-orelha-branca (Didelphis albiventris) - tratamento com ozonioterapia / Severe facial wound in a white-eared opossum (Didelphis albiventris) - treatment with ozone therapy

Background: Ozone therapy (OT) is a type of treatment that uses ozone gas, which has high oxidizing power. OT has been utilized for various diseases and to accelerate the wound healing process and reduce inflammation. Additionally, OT is a low-cost treatment recommended for patients that can be easily restrained. There are several methods of ozone administration, including topical use through bagging, cupping, or rectal insufflation, in addition to ozonated autohemotherapy. Based on the benefits of OT and the scarcity of reports describing its effects on white-eared opossums (Didelphis albiventris), we report on the use of ozone in the treatment of a severe facial wound in a white-eared opossum. Case: An adult female white-eared opossum weighing 1.6 kg was rescued from a fire. The patient was pregnant, dehydrated, hypothermic and had an extensive burn wound in the facial region. Due to the stress of captivity and its aggressive behavior, the animal needed to be chemically restrained with dexmedetomidine and butorphanol. Following sedation, the cephalic vein was catheterized and intravenous fluid therapy with ringer lactate was started to treat dehydration. Next, enrofloxacin, meloxicam, and tramadol hydrochloride were administered. Body rewarming was performed with thermal bags. The microbial load of the wound was reduced with chlorhexidine degerming solution followed by washing with saline solution. A thin layer of silver sulfadiazine cream was applied to the wound area. Over the following days the patient was treated with OT using the cupping technique combined with ozonated sunflower oil. After the first applications there was an improvement in the appearance of the wound, which initially had a purulent aspect. After 20 days of treatment the wound showed good granulation and there were no signs of infection, and at 45 days of treatment it was completely healed. The patient was then released with her baby. Discussion: Ozone therapy was included in the patient's treatment plan to enhance the tissue repair process in order to reintroduce the animal to the wild in the shortest possible time. The strategy was successful in improving healing and reducing tissue inflammation and infection. Ozone is known to cause the inactivation of microorganisms as a result of the oxidation of phospholipids and lipoproteins present in the cell membrane of bacteria and to interrupt viral replication. Ozone helps in the perfusion of injured tissues, contributing to the entry of humoral components, which control inflammation. Moreover, ozone contributes to increase supply of oxygen and nutrients to tissues and to stimulate increased production of fibrinogen and formation of granulation tissue. Ozone increases the enzymatic antioxidant response, while also playing a role in immunoregulation. Ozone can be used in several ways and via various methods with potential routes including intravenous, urethral, intramuscular, subcutaneous, or intra-articular, in addition to rectal and intramammary insufflation. Immunomodulatory, anti-inflammatory, analgesic, and antiseptic effects can be achieved with different doses and concentrations, which enables its application in different types of pathologies. Because of the aggressive behavior of the animal, in the current case we opted for the cupping technique combined with ozonated oil, both techniques which can be administered easily with only physical restraint of the patient. Cupping allows for the provision of a higher concentration of ozone gas locally whereas the ozonated oil maintains the effect of the gas for slightly longer, enhancing its effect and promoting tissue repair. The present report showed that OT is an effective alternative for the treatment of burn wounds in opossums, without causing adverse effects to the patient or her baby.

Ozonioterapia em animais domésticos: conceitos básicos e diretrizes / Ozone therapy in domestic animals: basic concepts and guidelines

Ozonioterapia é uma técnica de tratamento de diversas doenças locais e sistêmicas por meio da administração de uma mistura oxigênio-ozônio. O gás pode ser aplicado diretamente no corpo do paciente ou ainda ser diluído em soro ou sangue, a chamada auto-hemoterapia ozonizada. Seus efeitos são mediados por mecanismos de oxidação direta ou indireta de células ou patógenos. Dentre os efeitos de oxidação direta, destaca-se a microporação na superficie de microorganismos incapazes de se protegerem por antioxidantes, resultando em destruição fisica de suas membranas e/ou paredes celulares, o conhecido efeito antisséptico ou desinfetante da ozonioterapia local, tópica ou cavitaria. Ao entrar em contato com sangue ou outros fluidos biológicos, o gás ozônio imediatamente se combina com a água resultando em radicais livres e oxida lipídeos, formando os lipoperóxidos. Os radicais livres e lipoperóxidos passam a ser os mediadores dos efeitos do ozônio em diversas células, como as hemácias, leucócitos, plaquetas, fibroblastos, entre outras. Como resultado, obtém-se os efeitos de melhora de perfusão e oxigenação tecidual, modulação da inflamação, analgesia, cicatrização e produção de antioxidantes enzimáticos. Porém, o planejamento terapêutico deve compreender a escolha das vias adequadas de tratamento, concentrações, doses de aplicações sistêmicas e frequência de aplicação para que os resultados sejam maximizados. Além disso, o profissional deve estar corretamente capacitado e conhecer todas as limitações e efeitos adversos possíveis da técnica.

Ozone therapy is a technique for treating various local and systemic diseases by administering an oxygen-ozone mixture. The gas can be applied directly to the patient's body or diluted in serum or blood, the so-called ozone auto-hemotherapy. Its effects are mediated by mechanisms of direct or indirect oxidation of cells or pathogens. Among the direct oxidation effects is microporation on the surface of microorganisms that are unable to be protected by antioxidants, resulting in physical destruction of their membranes and/or cell walls, the well-known antiseptic or disinfectant effect of local, topical or cavitating ozone therapy. When in contact with blood or other biological fluids, ozone gas immediately combines with water resulting in free radicals and oxidizes lipids, forming lipoperoxides. The free radicals and lipoperoxides become the mediators of ozone effects on various cells, such as red blood cells, leukocytes, platelets, fibroblasts, and others. As a result, we obtain the effects of improved tissue perfusion and oxygenation, modulation of inflammation, analgesia, healing, and production of enzymatic antioxidants. However, the therapeutic planning must include the choice of adequate treatment routes, concentrations, doses of systemic applications, and frequency of application so that the results are maximized. In addition, the professional must be properly trained and know all the possible limitations and adverse effects of the technique.

Nitrogen source influences the antioxidative system of soybean plants under hypoxia and re-oxygenation

In this work, we compared nitrate-supplied plants (non-nodulated) with non-nitrate-supplied plants (nodulated) under oxygen privation of root system (hypoxia) and re-oxygenation (post-hypoxia; recovery) in order to verify whether N sources affect the antioxidant system during oxidative stress caused by hypoxia and post-hypoxia conditions. Antioxidant enzymatic activities, ascorbate redox state, and reactive oxygen species (ROS) levels were analyzed in roots and leaves of two soybean genotypes, Fundacep 53 RR and BRS Macota at reproductive stage R2, during hypoxia and post-hypoxia in an experiment carried out in a hydroponic system. The antioxidant system was strongly induced in roots of nitrate-supplied plants of both genotypes, with high activity of superoxide dismutase, ascorbate peroxidase, catalase, glutathione reductase and guayacol peroxidase. It also increased reduced ascorbate and ascorbate redox state and decreased ROS production under hypoxia and recovery, while in leaves of nodulated and non-nodulated plants, a slight increase on antioxidant system was observed. Nitrate may benefit soybean plants under hypoxic conditions and subsequent re-oxygenation by inducing the antioxidant system mainly in roots to cope with ROS production and reduce oxidative damage.

Nitrogen source influences the antioxidative system of soybean plants under hypoxia and re-oxygenation

In this work, we compared nitrate-supplied plants (non-nodulated) with non-nitrate-supplied plants (nodulated) under oxygen privation of root system (hypoxia) and re-oxygenation (post-hypoxia; recovery) in order to verify whether N sources affect the antioxidant system during oxidative stress caused by hypoxia and post-hypoxia conditions. Antioxidant enzymatic activities, ascorbate redox state, and reactive oxygen species (ROS) levels were analyzed in roots and leaves of two soybean genotypes, Fundacep 53 RR and BRS Macota at reproductive stage R2, during hypoxia and post-hypoxia in an experiment carried out in a hydroponic system. The antioxidant system was strongly induced in roots of nitrate-supplied plants of both genotypes, with high activity of superoxide dismutase, ascorbate peroxidase, catalase, glutathione reductase and guayacol peroxidase. It also increased reduced ascorbate and ascorbate redox state and decreased ROS production under hypoxia and recovery, while in leaves of nodulated and non-nodulated plants, a slight increase on antioxidant system was observed. Nitrate may benefit soybean plants under hypoxic conditions and subsequent re-oxygenation by inducing the antioxidant system mainly in roots to cope with ROS production and reduce oxidative damage.(AU)

Redox, acid-base and clinical analysis of preterm and term neonatal lambs

During pregnancy, fetal lambs are exposed to low oxygen tension. Thus, an effective antioxidant mechanism is partially developed which sensitizes fetus to oxidative stress. Consequently, term and preterm neonates are susceptible to molecular and cellular injury caused by oxygen species (ROS). This study aimed to evaluate the development of antioxidant enzymes and oxidative profile of preterm (135 days of pregnancy) and term (145 days of pregnancy) neonatal lambs, correlating with clinical analysis. Preterm lambs had significantly (P ≤ 0.05) lower score of vitality (4.00 ± 1.10), bradycardia (99 ± 34 bpm) and bradypnea (13 ± 10 mpm). However, both groups were normothermic and euglycemic. Preterm group had low blood pH (7.07 ± 0.10) and both groups had hypercapnia, more severe in preterm group (85.52 ± 18.65 mmHg). In addition, premature newborns had lower pO2 (10.67 ± 5.65 mmHg) and SO2 (6.17 ± 5.85%) values. No significant difference (P ≥ 0.05) on antioxidant enzymes and oxidative stress were verified among experimental groups, although glutathione peroxidase negatively correlated with Apgar score, heart rate, SO2 and pO2 . Our data show that preterm neonates are less adapted to the odds of labor and to overcome the immediate changes of extra-uterine life. Furthermore, we verified an influence of glutathione peroxidase in controlling oxidative stress, which highlights mature enzymatic mechanisms of cell redox, even in premature lambs.(AU)

Redox, acid-base and clinical analysis of preterm and term neonatal lambs

During pregnancy, fetal lambs are exposed to low oxygen tension. Thus, an effective antioxidant mechanism is partially developed which sensitizes fetus to oxidative stress. Consequently, term and preterm neonates are susceptible to molecular and cellular injury caused by oxygen species (ROS). This study aimed to evaluate the development of antioxidant enzymes and oxidative profile of preterm (135 days of pregnancy) and term (145 days of pregnancy) neonatal lambs, correlating with clinical analysis. Preterm lambs had significantly (P ≤ 0.05) lower score of vitality (4.00 ± 1.10), bradycardia (99 ± 34 bpm) and bradypnea (13 ± 10 mpm). However, both groups were normothermic and euglycemic. Preterm group had low blood pH (7.07 ± 0.10) and both groups had hypercapnia, more severe in preterm group (85.52 ± 18.65 mmHg). In addition, premature newborns had lower pO2 (10.67 ± 5.65 mmHg) and SO2 (6.17 ± 5.85%) values. No significant difference (P ≥ 0.05) on antioxidant enzymes and oxidative stress were verified among experimental groups, although glutathione peroxidase negatively correlated with Apgar score, heart rate, SO2 and pO2 . Our data show that preterm neonates are less adapted to the odds of labor and to overcome the immediate changes of extra-uterine life. Furthermore, we verified an influence of glutathione peroxidase in controlling oxidative stress, which highlights mature enzymatic mechanisms of cell redox, even in premature lambs.

Enzymatic potential of heterotrophic bacteria from a neutral copper mine drainage

Copper mine drainages are restricted environments that have been overlooked as sources of new biocatalysts for bioremediation and organic syntheses. Therefore, this study aimed to determine the enzymatic activities (esterase, epoxide hydrolase and monooxygenase) of 56 heterotrophic bacteria isolated from a neutral copper mine drainage (Sossego Mine, Canaã dos Carajás, Brazil). Hydrolase and monooxygenase activities were detected in 75% and 20% of the evaluated bacteria, respectively. Bacterial strains with good oxidative performance were also evaluated for biotransformation of organic sulfides. Fourteen strains with good enzymatic activity were identified by 16S rRNA gene sequencing, revealing the presence of three genera: Bacillus, Pseudomonas and Stenotrophomonas. The bacterial strains B. megaterium (SO5-4 and SO6-2) and Pseudomonas sp. (SO5-9) efficiently oxidized three different organic sulfides to their corresponding sulfoxides. In conclusion, this study revealed that neutral copper mine drainages are a promising source of biocatalysts for ester hydrolysis and sulfide oxidation/bioremediation. Furthermore, this is a novel biotechnological overview of the heterotrophic bacteria from a copper mine drainage, and this report may support further microbiological monitoring of this type of mine environment.(AU)

ANACARDATO DE CÁLCIO E SUAS ASSOCIAÇÕES COM ÁCIDO CÍTRICO NA ALIMENTAÇÃO DE POEDEIRAS COMERCIAIS

Objetivou-se avaliar, nesta tese, o efeito da inclusão na ração das poedeiras do anacardato de cálcio (ANC), associado ou não ao ácido cítrico (AC), sobre o desempenho, qualidade interna e externa dos ovos frescos, perfil bioquímico sérico, peroxidação lipídica do soro e gemas bem como atividade enzimática, peroxidação lipídica do fígado e tecidos do sistema reprodutor (ovário, magno e útero). Para isso, 432 poedeiras com peso médio de (1,440 ± 100 g), da linhagem comercial Hy-Line W-36, no período de 63 a 75 semanas de idade, foram distribuídas em um delineamento inteiramente casualizado de nove tratamentos e seis repetições. Os tratamentos consistiram em: T1 ração sem adição de antioxidantes; T2 ração com adição de 0,25% de ANC; T3 ração com 0,25% de ANC associado a 0,25% de AC; T4 ração com 0,50% de ANC; T5 ração com 0,50% de ANC associado a 0,25% de AC; T6 ração com 0,50% de ANC associado a 0,50% de AC; T7 ração com 0,75% de ANC; T8 ração com 0,75% de ANC associado a 0,25% de AC; T9 ração com 0,75% de ANC associado a 0,50% de AC. Não houve efeito significativo dos tratamentos sobre o desempenho, porcentagem de gema, albúmen e casca, densidade específica, unidades Haugh e espessura da casca dos ovos, pH e pesos relativos dos órgãos e segmentos do trato gastrointestinal, desenvolvimento do sistema reprodutor e parâmetros bioquímicos do sangue. No entanto, tratamentos com 0,75% ANC e suas associações com o AC (0,25 e 0,50) apresentaram aumento da pigmentação das gemas. Para os valores de oxidação lipídica das gemas, as aves que receberam doses isoladas de ANC (0,50% e 0,75%) apresentam menor oxidação; já as aves que receberam ração sem adição de antioxidantes 0,25% de ANC; 0,50% de ANC + 0,25% de AC e 0,75% de ANC + 0,25% de AC apresentaram efeito pró-oxidante. Observou-se ainda menores concentrações de malonaldéido (MDA) no soro sanguíneo das aves que consumiram ração com dose isolada de ANC (0,75 e 0,50%) e associados a 0,50% de AC. Para atividade enzimática nos órgãos, observou-se efeito significativo dos tratamentos nas variáveis CAT do fígado e magno. No caso em que as aves que receberam doses isoladas de ACN (0,50 e 0,75) e as associações com o AC nas doses de (0,25 e 0,50), elas apresentam menor atividade enzimática no fígado e maior atividade enzimática no magno. Para SOD, observou-se efeito significativo dos tratamentos nos tecidos do ovário, magno e útero; a atividade enzimática, no ovário, apresentou maiores valores para aves alimentadas com ração sem adição de antioxidantes e 0,25% de ANC e menor oxidação para as aves que consumiram ração contendo 0,50% de ANC associado AC (0,25 e 0,50%) e 0,75% de ANC associados a AC (0,25 e 0,50%). No magno e útero, as aves que consumiram ração sem adição de antioxidantes apresentaram maiores valores da SOD. Desta forma, doses isoladas de ANC ou associadas com o AC podem ser adicionadas na ração de poedeiras leves até o nível de 0,75%, sem que ocorram alterações no desempenho, qualidade dos ovos e bioquímico sérico no período de 63 a 75 semanas de idade. Contudo, a atividade antioxidante nos tecidos do fígado, sistema reprodutivo e a qualidade dos ovos pode ser melhorada com a redução lipídica das gemas quando se acrescenta nas rações doses isoladas de ANC (0,50 e 0,75). Se o objetivo for a pigmentação das gemas recomenda-se a utilização de 0,75% de ANC.

The objective was to evaluate the effect of the inclusion of calcium anacardate (ANC) associated or not with citric acid (CA) in the diet of laying hens on performance, internal and external quality of fresh eggs, serum biochemical profile, serum lipid peroxidation and yolks as well as enzymatic activity and lipid peroxidation of the liver and tissues of the reproductive system (ovary, magnum and uterus). For this, two experiments were carried out using 432 laying hens with an average weight of (1450 ± 100g) of the commercial strain Hy-Line W-36 in the period from 63 to 75 weeks of age. Distributed in a completely randomized design with nine treatments and six replications. The treatments consisted of: T1 ration without addition of antioxidant; T2 ration with the addition of 0.25% of ANC; T3 diet with 0.25% ANC associated with 0.25% AC; T4 ration with 0.50% of ANC; T5 diet with 0.50% ANC associated with 0.25% AC; T6 diet with 0.50% ANC associated with 0.50% AC; T7 ration with 0.75% of ANC; T8 diet with 0.75% ANC associated with 0.25% AC; T9 diet with 0.75% ANC associated with 0.50% AC. There was no significant effect of treatments on laying hens performance, pH, relative weight of the gastrointestinal tract; gizzard; liver and reproductive system, percentage of yolk, albumen and shell, specific gravity, Haugh units, shell thickness, Cr, ALT, AST, COL.Total and TAG. However, treatments with 0.75% ANC and its association with AC (0.25 and 0.50) showed an increase in bud pigmentation. For the values of lipid oxidation of the yolks, the birds that received isolated doses of ANC (0.50% and 0.75%) presented lower oxidation, whereas the birds that received feed without the addition of antioxidants; 0.25% ANC; 0.50% of ANC + 0.25% of AC and 0.75% of ANC + 0.25% of AC showed a pro-oxidant effect. Even lower concentrations of Malonaldehyde (MDA) were observed in the blood serum of birds that consumed rations with an isolated dose of ANC (0.75 and 0.50%) and associated with 0.50% of AC. For enzymatic activity in the organs, there was a significant effect of the treatments on the liver and magnum CAT variables. Where birds that received isolated doses of ACN (0.50 and 0.75) and associations with AC at doses of (0.25 and 0.50) have lower enzymatic activity in the liver and higher enzymatic activity in the magnum. For SOD, there was a significant effect of treatments on the ovary, magnum and uterus tissues, the enzymatic activity in the ovary showed higher values for birds fed with ration without addition of antioxidant and 0.25% of ANC and lower oxidation for birds who consumed rations containing 0.50% of ANC associated with AC (0.25 and 0.50%) and 0.75% of ANC associated with AC (0.25 and 0.50%). In the magnum and uterus, birds that consumed feed without the addition of antioxidants had higher SOD values. In this way, the use of isolated doses of ANC or associated with AC can be added to the diet of laying hens up to the level of 0.75%, without changes in performance, egg quality and serum biochemistry in the period from 63 to 75 weeks old. However, the antioxidant activity in the tissues of the liver and reproductive system and the quality of the eggs can be improved with the lipid reduction of the yolks when isolated doses of ANC (0.50 and 0.75) are added to the diets or if the objective is to pigmentation of the yolks, the use of 0.75% ANC is recommended.

IMOBILIZAÇÃO DE PROTEASES COLAGENOLÍTICAS OBTIDAS DE Aspergillus sclerotiorum URM 5792 EM NANOPARTÍCULAS MAGNÉTICAS REVESTIDAS COM QUITOSANA

As proteases são enzimas quem têm sido extensivamente utilizadas em diversos segmentos da indústria. Apesar de apresentar elevado interesse e inúmeras vantagens, sua aplicação expõe ainda algumas limitações. O processo de imobilização tem se tornado uma alternativa, visto que pode aumentar a estabilidade enzimática e promover a reutilização por vários ciclos. A utilização de suportes magnéticos tem sido amplamente explorada, devido a sua versatilidade no setor da biotecnologia de purificação de biomoléculas, e seu revestimento com suportes orgânicos como a quitosana, facilitam o processo, impedindo a oxidação das nanopartículas magnéticas (NPMs), conferindo propriedades ideais para a imobilização. O presente trabalho teve como objetivo selecionar, imobilizar e caracterizar proteases colagenolíticas obtidas de Aspergillus scletotiorum URM5792 em NPMs revestidas com quitosana. Para produção foi realizado um planejamento fatorial completo 22; tendo como melhor condição de produção (7g de farelo de trigo e 60% de umidade, submetidas a 30°C por 72h de fermentação, com atividade proteolítica de 56,27 U/mL e colagenolítica de 303,00 U/mL). O processo de imobilização foi realizado utilizando planejamento fatorial completo 23 visando avaliar a influência das variáveis independentes: concentração de glutaraldeído, tempo de ativação e tempo de imobilização sob o rendimento de imobilização enzimática. No ensaio composto por 4% de concentração de glutaraldeído, 2,5h de ativação e 1,5h de imobilização foram obtidos rendimentos de 86,25% para atividade proteásica e 83,83% para atividade colagenolítica. A enzima imobilizada apresentou mais de 95% da atividade inicial após 28 dias de armazenamento e reteve mais de 60% da atividade residual no décimo segundo ciclo de reutilização. Também foram analisadas a influência do pH e temperatura sob a atividade enzimática na forma livre e imobilizada, ambas apresentaram pH ótimo na faixa de 9,0, assim como, temperatura ótima de 30°C e 40°C, respectivamente. A estabilidade ao pH e à temperatura da enzima livre se manteve com mais de 80% e 60% de atividade residual nos tempos de 24h e 180min, respectivamente. E a estabilidade da enzima imobilizada se manteve com 60% e 70% de atividade residual nos mesmos tempos. A fermentação em estado sólido foi eficaz com alta produção enzimática e a imobilização da protease colagenolítica em nanopartículas magnéticas revestidas com quitosana e ativadas em glutaraldeído, mostraram ser métodos eficientes no rendimento, armazenamento e reuso da enzima. A enzima imobilizada apresentou maior afinidade ao substrato em relação à enzima livre, foi inibida pelo íon Cu2+, SDS e PMSF indicando a presença de uma serino-protease. Esses resultados indicam que Aspergillus sclerotiorum URM 5792 é uma fonte potencial para a produção de protease colagenolítica com possíveis aplicações biotecnológicas em diversos setores da indústria, na produção de detergentes, no setor têxtil e na indústria farmacêutica, no tratamento e regeneração de tecidos em necrose.

Proteases are enzymes that have been used extensively in several industry segments. Despite their high interest and numerous advantages, their application still has some limitations. The immobilization process has become an alternative since it increases enzyme stability. The use of magnetic supports has been widely explored, due to its versatility in the biotechnology sector for the purification of biomolecules, and its coating with organic supports such as chitosan, facilitates the process, preventing the oxidation of magnetic nanoparticles (MNP's), giving ideal properties for immobilization. The present work aimed to select, immobilize and characterize collagenolytic proteases obtained from Aspergillus sclerotiorum URM5792 in MNPs coated with chitosan. For production, a complete factorial planning was carried out 22; with the best production condition (7g of wheat bran and 60% humidity, submitted to 30°C for 72h of fermentation, with proteolytic activity of 56,27 U/mL and e collagenolytic of 303,00 U/mL). The immobilization process was carried out using complete factorial planning 23 aiming to evaluate the influence of independent variables: glutaraldehyde concentration, activation time and immobilization time under the enzyme immobilization yield. In the assay composed of 4% glutaraldehyde concentration, 2.5h of activation and 1.5h of immobilization yields of 86.25% for protein activity and 83.83% for collagenolytic activity were obtained. The immobilized enzyme showed more than 95% of the initial activity after 28 days of storage and retained more than 60% of the residual activity in the twelfth cycle of reuse. The influence of pH and temperature on enzyme activity in free and immobilized form were also analyzed, both had an optimal pH in the range of 9.0, as well as an optimal temperature of 30 ° C and 40 ° C, respectively. The pH and temperature stability of the free enzyme was maintained with more than 80% and 60% of residual activity within 24 hours and 180 minutes, respectively. And the stability of the immobilized enzyme was maintained with 60% and 70% of residual activity in the same times. The solid-state fermentation was effective with high enzymatic production and the immobilization of protease collagenolytic in magnetic nanoparticles coated with chitosan and activated in glutaraldehyde, proved to be efficient methods in the yield, storage and reuse of the enzyme. The immobilized enzyme showed greater affinity to the substrate in relation to the free enzyme, it was inhibited by the Cu2+ ion, SDS and PMSF indicating the presence of active serine protease sites. These results indicate that Aspergillus sclerotiorum URM 5792 is a potential source for production of collagenolytic protease with possible biotechnological applications in various sectors of the industry, in the production of detergents, in the textile and pharmaceutical industry, in the treatment and regeneration of tissues in necrosis.

Extração de zeína e sua aplicação na conservação dos alimentos / Extraction of zein and its application in food preservation

As proteínas do endosperma dos grãos de milho, referente às zeínas, apresentam grau de polimerização importante para formação de filmes em alimentos, sendo útil na conservação destes. Nesta revisão, serão abordadas formas de extração destas proteínas, através da solubilidade de seus aminoácidos em solventes alcoolicos e métodos combinados dos tratamentos químicos e enzimáticos. O polímero de zeína pode substituir polímeros sintéticos empregados em embalagens para alimentos, atribuindo valor econômico para a indústria do milho. Sua aplicação em filmes proporciona características funcionais de estabilidade de massa, controle microbiano e redução da oxidação lipídica em determinados alimentos, durante o seu armazenamento.(AU)

The proteins of the endosperm of corn, referring to zein, have important degree of polymerization for the formation of the films on food, being useful in the conservation of it. This review will address ways of extracting these proteins by their amino acid solubility in alcoholic solvents and methods of combined chemical and enzymatic treatments. The polymer of zein can replace synthetic polymers used in food packaging, it contributes for economic value to the corn industry. Its application in films provides functional characteristics of mass stability, microbial control and reduction of lipid oxidation in some kind of food during storage.(AU)

Keratinolytic abilities of Micrococcus luteus from poultry waste

Keratinolytic microorganisms have become the subject of scientific interest due to their ability to biosynthesize specific keratinases and their prospective application in keratinic waste management. Among several bacterial classes, actinobacteria remain one of the most important sources of keratin-degrading strains, however members of the Micrococcaceae family are rarely scrutinized in regard to their applicatory keratinolytic potential. The tested Micrococcus sp. B1pz isolate from poultry feather waste was identified as M. luteus. The strain, grown in the medium with 1–2% chicken feathers and a yeast extract supplement, produced keratinases of 32 KU and lower level of proteases, 6 PU. It was capable to effectively decompose feathers or “soft” keratin of stratum corneum, in contrast to other “hard” hair-type keratins. The produced keratinolytic enzymes were mainly a combination of alkaline serine or thiol proteases, active at the optimum pH 9.4, 55 °C. Four main protease fractions of 62, 185, 139 and 229 kDa were identified in the crude culture fluid. The research on the auxiliary role of reducing factors revealed that reducing sulfur compounds could be applied in keratinolysis enhancement during enzymatic digestion of keratin, rather than in culture conditions. The presented M. luteus isolate exhibits a significant keratinolytic potential, which determines its feasible applicatory capacity towards biodegradation of poultry by-products or formulation of keratin-based feed components..(AU)

Mix de óleos de cravo, mamona e caju e composto microencapsulado de Eugenol, Timol e Vanilina na suplementação de bovinos terminados em pastagem de aveia e azevém: Desempenho e qualidade da carne

No sistema de terminação de bovinos em semi confinamento são necessárias estratégias nutricionais para que ocorra a redução do ciclo produtivo. A suplementação com aditivos pode ser uma dessas medidas para auxiliar no aproveitamento dos alimentos e produzir carne de qualidade. De modo geral, estas substâncias são ionóforos ou antibióticos. Todavia, essas substâncias estão proibidas na União Europeia e em vias de proibição nos Estados Unidos. Desta forma, é necessário o desenvolvimento de substâncias alternativas e seguras na alimentação animal. Assim sendo, os aditivos naturais tornaram-se objetivos de várias pesquisas no mundo. Entre esses aditivos, os óleos essenciais e os óleos vegetais têm merecido destaque. Entretanto, para sua adição na alimentação animal é necessário caracterizar os vários produtos de plantas, bem como conhecer o modo de ação destas substâncias, que possuem comprovado efeito flavorizante, estimulante da secreção enzimática, ação antimicrobiana, antioxidante, anti-inflamatória, antiparasitária, antiviral, entre outras. Ainda mais, esses compostos têm uma ampla variedade de efeitos sobre a qualidade da carne, podendo retardar o processo de oxidação aumentando o tempo de vida útil, além de serem incorporados nos músculos e poder contribuir na saúde do consumidor, incluindo efeitos positivos sobre as doenças cardiovasculares, alguns tumores, processos inflamatórios, e em geral, doenças nas quais ocorre uma proliferação descontrolada de radicais livres. Este trabalho foi realizado para avaliar o desempenho animal, as características de carcaça e a qualidade da carne de 40 novilhos mestiços (½ Bons Mara x ½ Nelore) com cerca de 20 meses de idade, peso corporal inicial médio de 416,9 ± 5,56, sem adição (controle) ou com níveis (1.500, 3.000, 4.500 ou 6000 mg/dia/animal) de uma mistura de aditivos naturais (AN), contendo óleo essencial de cravo, óleo de mamona, óleo de caju e uma mistura de princípios ativos microencapsulados de eugenol, timol e vanilina durante 80 dias sobre o desempenho animal e qualidade da carne. Os resultados sugerem que, embora o uso da mistura de óleos não tenha modificado o ganho de peso dos animais, o suplemento teve efeito curvo linear na ingestão de forragem, e consequentemente na matéria seca, proteína bruta, fibra em detergente neutro e carboidratos não fibrosos. A maior ingestão de matéria seca foi observado no tratamento com 1.500 mg e a menor ingestão no tratamento com 6.000 mg. A digestibilidade da proteína foi menor e dos carboidratos não fibrosos foi maior nos tratamentos com AN em todas as dosagens. Um aumento nas concentrações de nitrogênio amoniacal ruminal, e nos ácidos graxos voláteis propiônico e isovalérico foram observados nos tratamentos com AN em todas as dosagens. Não foram observadas diferenças nos parâmetros macroscópicos do líquido ruminal (movimentos ruminais, cor, odor, consistência, sedimentação e flutuação, potencial redox e contagem e viabilidade de protozoários). As características de carcaça não foram alteradas pelos tratamentos, mas houve alteração na composição corporal, aumentando a deposição muscular nos animais suplementados com AN. Os tratamentos não tiveram efeito nas perdas por gotejamento da carcaça. As perdas de descongelamento/armazenamento, cozimento, textura, cor, atividade antioxidante e oxidação lipídica foram avaliadas ao longo do tempo de armazenamento em embalagem a vácuo nos dias 1, 7 e 14 e foram observadas diferenças. Houve um efeito quadrático nas perdas por descongelamento/armazenamento no primeiro dia de armazenamento da carne, sendo que o tratamento controle perdeu menos líquido que os demais. No entanto, nas perdas por cocção esse mesmo tratamento no sétimo dia de armazenamento perdeu mais líquidos. A força de cisalhamento foi similar entre os tratamentos no dia 1 e no dia 7 de armazenamento. No dia 14, foi observado um efeito linear; a carne do tratamento controle estava mais macia. Um efeito linear na luminosidade da carne foi observado. A carne de animais do tratamento controle estava mais clara e potencialmente mais atraente para o consumidor no dia 1 de armazenamento. Após 7 e 14 dias de armazenamento, as carnes foram semelhantes entre os tratamentos. Os parâmetros de intensidade de vermelho e amarelo não foram alterados. No entanto, ao avaliar o potencial antioxidante da carne, observou-se que no dia 1 de armazenamento houve um maior número de compostos fenólicos e uma maior atividade antioxidante (DPPH e FRAP) nos tratamentos com AN. Apesar dos valores mais altos de oxidação lipídica serem notados no primeiro dia de armazenamento nos tratamentos que receberam AN na dieta, foi observado também que tratamentos com maiores dosagens de aditivos retardaram a oxidação lipídica ao longo do tempo de armazenamento. O tempo de armazenamento afetou as perdas por descongelamento/armazenamento, perdas por cocção, textura, cor e oxidação lipídica. No entanto esses resultados são devido ao processo de proteólise. Em conjunto, estes resultados sugerem que a mistura de aditivos naturais tem potencial no uso na alimentação animal e pode melhorar a estabilidade da carne, no entanto, ainda devem ser estudados com relação a dose a ser empregada em animais a pasto.

In the grazing system for cattle, nutritional strategies are necessary to shorten the production cycle; supplementation with additives can be used to maximize nutrient use and meat quality. In general, these substances are ionophores or antibiotics. However, these substances are banned in the European Union and limited use in the United States. In this way, the development of safe alternative substances in animal feed is necessary. Thus, natural additives are the subject of much research around the world. Among these additives, essential oils and vegetable oils has greater prominence. However, for their addition in animal feed it is necessary to characterize the various plant products as well as to know the mode of action of these substances. These substances have proven flavoring effect, stimulating enzymatic secretion, antimicrobial action, antioxidant, anti-inflammatory, antiparasitic, antiviral, among other actions. Furthermore, these compounds have a many of effects on the quality of the meat, which can slow down the oxidation process and increase the shelf life, as well as being incorporated into the muscles and contributing to consumer health, including positive effects on cardiovascular diseases, some tumors, inflammatory processes, and in general, diseases in which there is an uncontrolled proliferation of free radicals. The objective of the study was to evaluate the animal performance, carcass characteristics and meat quality. Forty 20-month old crossbred steers (Bons Mara x Nellore) of initial body weight 416.9 ± 5,56 kg, without addition (control) or levels (1500, 3000, 43500 or 6000 mg / day / animal) of a mixture of natural additives (NA) containing clove essential oil, castor oil, cashew oil and a blend of microencapsulated active ingredients of eugenol, vanillin and thymol for 79 days. The results suggest that, although the use of the oil mixture did not modify the animals' weight gain, the supplement had a quadratic effect on forage intake, and consequently on dry matter, crude protein, neutral detergent fiber and non-fibrous carbohydrates. The greatest intake of dry matter was observed in treatment with 1500 mg and the smallest consumption in treatment with 6000 mg. Protein digestibility was smaller and non-fibrous carbohydrates were greater in AN treatments at any dosage. An increase in ruminal ammoniacal nitrogen concentrations and in propionic and isovaleric volatile fatty acids were observed in AN treatments at any dosage. No marked differences were observed in the macroscopic parameters of ruminal fluid (ruminal movements, color, odor, consistency, sedimentation and flotation, redox potential and counting and viability of protozoa). The carcass characteristics were not altered by the treatments, but there was a change in the body composition, increasing the muscular deposition in the animals supplemented with AN. The treatments had no effect on drip losses. The thawing/ ageing losses, cooking losses, texture, color, antioxidant and lipid oxidation were evaluated over the storage time in a vacuum package for 1, 7 and 14 days and differences were observed. There was a quadratic effect observed in the thawing/ageing losses on the first day of storage of the meat, and the control treatment lost less liquid than the others. However, in cooking losses that same treatment on the seventh day of storage lost more liquids. The shear force was similar between treatments on day 1 and day 7 of storage. At day 14, a linear effect was observed, and the meat from the control treatment was tender. A linear effect on meat lightness was observed. The meat from control treatment animals was clearer and potentially more attractive to the consumer on day 1 storage. After 7 and 14 days of storage, the meats were similar between the treatments. The redness and yellowness parameters were not changed. However, when evaluating the antioxidant potential of the meat, it was observed that on day 1 of storage there was a greater number of phenolic compounds and a greater antioxidant activity (DPPH and FRAP) in AN treatments. Although greater values of lipid oxidation were observed on the first day of storage in treatments receiving AN in the diet, it was also observed that treatments with greater dosages of additives delayed lipid oxidation throughout the storage time. The storage time affected the losses by thawing/ageing losses, cooking losses, texture, color and lipid oxidation, however these results are expected due to the proteolysis process. Taken together, these results suggest that the mixture of natural additives has potential use in animal feed and may improve meat stability; however, they should still be studied with respect to dose-response.

Condições de secagem de uma pasta de anchoita modificada enzimaticamente na oxidação lipídica, lisina disponível e atividade antioxidante do produto

The aim of the work was to analyze the conditions of the convective drying of an enzymatic modified paste of anchovy (Engraulis anchoita) through the response surfaces methodology, and the responses were the lipid oxidation (TBA), reduction of the available lisina and loss of the specific antioxidant activity. The modified paste of anchovy was obtained through enzymatic hydrolysis of the fish muscular fraction (fillets) by Neutrase®. In drying operation the air temperature (60, 70 and 80°C) and the samples thickness (1.5, 2.5 and 3.5mm) were studied. The statistical analysis of the drying showed significant effects of the air temperature and samples thickness (P 0.05). The best drying condition was obtained in the air temperature of 60°C and samples thickness of 2.5mm. In this condition the TBA index was of 0.93mgMDA kg-1, available lisina reduction of 16% and loss of the specific antioxidant activity of 20.2%.

O objetivo do trabalho foi analisar as condições da secagem convectiva de uma pasta de anchoita (Engraulis anchoita) modificada enzimaticamente, através da metodologia de superfícies de resposta, sendo as respostas consideradas: a oxidação lipídica (TBA), a redução da lisina disponível e a perda da atividade antioxidante específica. A pasta de anchoita modificada foi obtida por hidrólise enzimática da fração muscular (filés) do pescado por Neutrase®. Foram avaliadas na operação de secagem, a temperatura do ar (60, 70 e 80°C) e a espessura das amostras (1,5; 2,5 e 3,5mm). A análise estatística da secagem mostrou efeitos significativos da temperatura do ar e da espessura das amostras (P 0,05) nas respostas. A melhor condição de secagem foi obtida na temperatura do ar de 60°C e espessura das amostras de 2,5mm. Nessa condição, o índice de TBA foi de 0,93mgMDA kg-1, redução da lisina disponível de 16% e perda da atividade antioxidante específica de 20,2%.

Condições de secagem de uma pasta de anchoita modificada enzimaticamente na oxidação lipídica, lisina disponível e atividade antioxidante do produto

The aim of the work was to analyze the conditions of the convective drying of an enzymatic modified paste of anchovy (Engraulis anchoita) through the response surfaces methodology, and the responses were the lipid oxidation (TBA), reduction of the available lisina and loss of the specific antioxidant activity. The modified paste of anchovy was obtained through enzymatic hydrolysis of the fish muscular fraction (fillets) by Neutrase®. In drying operation the air temperature (60, 70 and 80°C) and the samples thickness (1.5, 2.5 and 3.5mm) were studied. The statistical analysis of the drying showed significant effects of the air temperature and samples thickness (P 0.05). The best drying condition was obtained in the air temperature of 60°C and samples thickness of 2.5mm. In this condition the TBA index was of 0.93mgMDA kg-1, available lisina reduction of 16% and loss of the specific antioxidant activity of 20.2%.

O objetivo do trabalho foi analisar as condições da secagem convectiva de uma pasta de anchoita (Engraulis anchoita) modificada enzimaticamente, através da metodologia de superfícies de resposta, sendo as respostas consideradas: a oxidação lipídica (TBA), a redução da lisina disponível e a perda da atividade antioxidante específica. A pasta de anchoita modificada foi obtida por hidrólise enzimática da fração muscular (filés) do pescado por Neutrase®. Foram avaliadas na operação de secagem, a temperatura do ar (60, 70 e 80°C) e a espessura das amostras (1,5; 2,5 e 3,5mm). A análise estatística da secagem mostrou efeitos significativos da temperatura do ar e da espessura das amostras (P 0,05) nas respostas. A melhor condição de secagem foi obtida na temperatura do ar de 60°C e espessura das amostras de 2,5mm. Nessa condição, o índice de TBA foi de 0,93mgMDA kg-1, redução da lisina disponível de 16% e perda da atividade antioxidante específica de 20,2%.

Condições de secagem de uma pasta de anchoita modificada enzimaticamente na oxidação lipídica, lisina disponível e atividade antioxidante do produto

The aim of the work was to analyze the conditions of the convective drying of an enzymatic modified paste of anchovy (Engraulis anchoita) through the response surfaces methodology, and the responses were the lipid oxidation (TBA), reduction of the available lisina and loss of the specific antioxidant activity. The modified paste of anchovy was obtained through enzymatic hydrolysis of the fish muscular fraction (fillets) by Neutrase®. In drying operation the air temperature (60, 70 and 80°C) and the samples thickness (1.5, 2.5 and 3.5mm) were studied. The statistical analysis of the drying showed significant effects of the air temperature and samples thickness (P 0.05). The best drying condition was obtained in the air temperature of 60°C and samples thickness of 2.5mm. In this condition the TBA index was of 0.93mgMDA kg-1, available lisina reduction of 16% and loss of the specific antioxidant activity of 20.2%.

O objetivo do trabalho foi analisar as condições da secagem convectiva de uma pasta de anchoita (Engraulis anchoita) modificada enzimaticamente, através da metodologia de superfícies de resposta, sendo as respostas consideradas: a oxidação lipídica (TBA), a redução da lisina disponível e a perda da atividade antioxidante específica. A pasta de anchoita modificada foi obtida por hidrólise enzimática da fração muscular (filés) do pescado por Neutrase®. Foram avaliadas na operação de secagem, a temperatura do ar (60, 70 e 80°C) e a espessura das amostras (1,5; 2,5 e 3,5mm). A análise estatística da secagem mostrou efeitos significativos da temperatura do ar e da espessura das amostras (P 0,05) nas respostas. A melhor condição de secagem foi obtida na temperatura do ar de 60°C e espessura das amostras de 2,5mm. Nessa condição, o índice de TBA foi de 0,93mgMDA kg-1, redução da lisina disponível de 16% e perda da atividade antioxidante específica de 20,2%.

Efeito da restrição alimentar e jejum na atividade do sistema transportador de elétrons (ETS) em juvenis de pacu (Piaractus mesopotamicus)

A finalidade deste trabalho é testar a aplicabilidade de uma ferramenta normalmente 218 utilizada na ecologia de ambientes aquáticos na bioenergética dentro da área da 219 aquicultura, por meio da qual foi testada a atividade do sistema transportador de 220 elétrons (ETS) em órgãos alvo da espécie Piaractus mesopotamicus submetidos a 221 diferentes condições alimentares. O estudo é baseado na hipótese de que a 222 atividade do ETS ou a combinação das atividades do ETS de diferentes órgãos alvo 223 podem ser avaliadas como um biomarcador celular, com capacidade de descrever 224 ou predizer parâmetros zootécnicos. O método de avaliação da atividade da ETS 225 foi desenvolvido para medir a ação enzimática do ETS quantificando por colorimetria 226 a oxidação do NADH e NADPH e redução do cloreto de 2-(p-iodofenil)-3-(p227 nitrofenil)-5-fenil tetrazolium (INT). O experimento foi desenhado para avaliar o 228 efeito de diferentes regimes alimentares no metabolismo do pacu, sob quatro 229 tratamentos: jejum, consumo ad libitum, outros dois de restrição alimentar com taxa 230 de arraçoamento de 0,6% e 1 % do peso vivo/dia. Cada tratamento teve o mínimo 231 de quatro réplicas, máximo seis (peixes) mantidos em tanques de 100 L de volume 232 útil. Os animais foram pesados (102 ± 9,5 g) e depois mantidos 15 dias em 233 aclimatação. Foram alimentados diariamente ad libitum com ração Supra Anzol de 234 ouro 24 ® registrando-se o consumo diário a partir do qual determinou-se as taxas 235 de restrição alimentar. Após aclimatação, estimou-se o peso médio inicial (115,5 236 ±10,4 g) e distribuiu-se aleatoriamente os peixes nas unidades experimentais dentre 237 os tratamentos. O ensaio teve duração de 15 dias, com acompanhamento diário 238 do consumo e a qualidade de água. Ao final do experimento os peixes foram 239 pesados para depois tomar amostras de sangue para as análises de glicose e 240 hemoglobina e por fim serem eutanasiados com o objetivo de extrair os órgãos 241 alvo que foram utilizados nas análises da atividade do ETS em fígado, rim, músculo 242 e brânquias. Foi observada a redução da glicemia no jejum e similaridade dentre 243 os demais tratamentos. A concentração de hemoglobina não diferiu entre os 244 tratamentos. Para a atividade do ETS só foi possível observar influência dos 245 tratamentos no fígado e rim. Já nos parâmetros zootécnicos avaliados (ganho de 246 peso, consumo alimentar, conversão alimentar e taxa de crescimento específico) 247 foram encontradas em todos diferenças explicadas pelos tratamentos 248 experimentais, pelo qual optou-se pela taxa de crescimento especifico (TCE) como 249 variável resposta para a exemplificar a funcionalidade dos índices de ETS no fígado 250 e rim, para a predição da TCE por meio do modelagem matemática dos dados, 251 tendo em conta que o limitado número de dados não consegue formar um modelo 252 de grande robustez. No entanto, o modelo conseguiu valores do R2 ajustado de 78 253 %, sugerindo que a atividade da ETS do fígado e rim apresentaram um potencial 254 para a descrição e predição do crescimento do pacu.

The purpose of this work is to test the applicability of a tool normally used in the 273 ecology of aquatic environments in bioenergetics within the aquaculture area, 274 through which the activity of the electron transport system (ETS) in target organs of 275 the species Piaractus mesopotamicus different food conditions. The study is based 276 on the hypothesis that ETS activity or the combination of ETS activities of different 277 target organs can be evaluated as a cellular biomarker, with the ability to describe 278 or predict zootechnical parameters. The method of evaluation of ETS activity was 279 developed to measure the enzymatic action of ETS by quantifying by colorimetry the 280 oxidation of NADH and NADPH and reduction of 2- (p-iodophenyl) -3- (p-nitrophenyl) 281 -5-phenyl chloride tetrazolium (INT). The experiment was designed to evaluate the 282 effect of different dietary regimes on pacu metabolism under four treatments: fasting, 283 ad libitum intake, and two other food restriction with 0.6% and 1% live weight / day 284 dietary intake. Each treatment had a minimum of four replicates, maximum six (fish) 285 kept in tanks of 100 L of useful volume. The animals were weighed (102 ± 9.5 g) and 286 then maintained for 15 days in acclimation. Daily ad libitum with Supra Anzol de ouro 287 24 ® were fed daily, recording the daily intake from which the food restriction rates 288 were determined. After acclimatization, the initial mean weight (115.5 ± 10.4 g) was 289 estimated and the fish were randomly distributed in the experimental units among 290 the treatments. The trial lasted 15 days, with daily monitoring of consumption and 291 water quality. At the end of the experiment the fish were weighed and then blood 292 samples were taken for glucose and hemoglobin analyzes and finally euthanized to 293 extract the target organs that were used in the analysis of ETS activity in liver, kidney, 294 muscle and gills. It was observed the reduction of fasting glucose and similarity 295 among the other treatments. Hemoglobin concentration did not differ between 296 treatments. For the ETS activity, it was only possible to observe influence of the 297 treatments in the liver and kidney. In the zootechnical parameters evaluated (weight 298 gain, food consumption, feed conversion and specific growth rate) were found in all 299 differences explained by the experimental treatments, whereby the specific growth 300 rate (SGR) was chosen as the response variable to exemplify the functionality of the 301 ETS indexes in the liver and kidney for the prediction of SGR by means of the mathematical modeling of the data, taking into account 302 that the limited number of 303 data can not form a model of great robustness. However, the model achieved 304 adjusted R2 values of 78%, suggesting that liver and kidney ETS activity presented 305 a potential for the description and prediction of pacu growth.

Avaliação da enzima paraoxonase tipo 1 no plasma seminal e sua expressão de RNAm dos tecidos das gônadas em suínos

O plasma seminal é particularmente importante na proteção do espermatozoide contra os danos causados pelas espécies reativas ao oxigênio (EROs). A paraoxonase tipo 1 (PON1) é um complexo multienzimático com propriedades antioxidantes, impedindo o aumento da quantidade de EROs, o que confere proteção às membranas celulares e neutraliza os efeitos da oxidação lipídica. O estudo objetivou correlacionar a influência da atividade de PON1 com os parâmetros de avaliação do sistema Computer Assisted Semen Analysis (CASA) e a viabilidade espermática (integridade de membrana, integridade de acrossoma, funcionalidade de mitocôndria e fragmentação do DNA) do sêmen suíno in natura e investigar a expressão da PON1 (RNAm) no tecido do testículo e epidídimo (cabeça, corpo e cauda) do reprodutor suíno adulto. A fração espermática (FE) apresentou a maior atividade de PON1 e os machos 81, 80 e 79 (P<0,05) apresentaram a maior atividade de PON1. Já em relação a comparação entre as diferentes amostras do ejaculado, nosso estudo demonstrou diferenças (P<0,05) nos machos 81 e 92 em relação a FE e a fração pós-espermática (FP). Entretanto, quando o ejaculado foi diluído (1:1) apresentou redução média de 44% na atividade da PON1. A atividade de PON1 na FE apresentou uma correlação positiva com a concentração espermática, DCL, VCL e IDNA (P<0,05) e apresentou correlação negativa para os parâmetros de STR e LIN assessorados pelo sistema CASA. A expressão de RNAm somente foi observada para a porção do corpo do epidídimo. A FE é a parte do ejaculado que mais apresentou atividade da PON1 e os parâmetros DCL, VCL, STR e LIN, juntamente, com concentração e viabilidade espermática (integridade de DNA) são os que apresentaram a maior associação com a enzima. Já a PON1 foi somente expressa (RNAm) no corpo de epidídimo do reprodutor suíno.

The seminal plasma is particularly important in sperm protection against damage caused by reactive oxygen species (ROS). The paraoxonase type 1 (PON1) is a multi-enzymatic complex with antioxidant properties, preventing the increase of ROS quantities, thus protects cell membranes and neutralizes the effects of lipid oxidation. The objective of this study was to correlate the influence of PON1 activity with the CASA system parameters and sperm viability (membrane integrity acrosome integrity, functionality of mitochondria and DNA fragmentation) of swine semen in natura, and investigate the PON1 expression (mRNA) in testicle and epididymis (head, body and tail) tissue of boars. The sperm fraction (FE) presented the major PON1 activity and males 81, 80 and 79 (P<0.05) showed the highest enzyme activity. But, when comparing the differences between the ejaculate samples, our study showed differences (P<0.05) between males 81 and 92 in FE and sperm post fraction (PF). However, when the ejaculated was diluted (1:1), it has presented 44% average reduction in the activity of PON1. The activity of PON1 in FE showed positive correlation with sperm concentration, curvaceous distance, curvy velocity and DNA integrity (P<0.05), and also showed negative correlation with straightness and linearity parameters advised by the CASA system. The mRNA expression was observed only in the body portion of the epididymis. The FE is the part of the ejaculate that more PON1 activity and presented the parameters DCL, VCL, STR and LIN, together, with concentration and sperm viability (integrity of DNA) are those who showed the greatest association with the enzyme. Already the PON1 was only expressed (Mrna) in the body of epididymis pig breeder

Controle molecular do consumo voluntário de ração, metabolismo lipídico e do sistema de defesa antioxidante em frangos de corte.

O consumo voluntário de ração é um processo que integra o sistema nervoso central e os tecidos periféricos do organismo, sendo influenciado basicamente por fatores inerentes aos animais como o sexo, a idade, e alguns neuropeptídios relacionados ao consumo de ração; e fatores externos, como a temperatura ambiental. Condições ambientais com altas temperaturas às quais as aves são expostas, e a maior deposição de gordura em detrimento à deposição de carne magra, são fatores que afetam o desenvolvimento dos animais. Nesse sentido, com este trabalho os nossos objetivos foram avaliar o efeito do sexo, da idade, do estresse térmico agudo e da suplementação de metionina sobre o desempenho, expressão de genes relacionados ao consumo, envolvidos no metabolismo lipídico, e genes relacionados ao sistema antioxidante em frangos. Para isto, no primeiro experimento, frangos de corte machos e fêmeas com 42 dias de idade, recebendo dieta formulada para atender as necessidades nutricionais, foram mantidos em conforto térmico ou expostos ao estresse térmico agudo (38C por 24 horas, iniciando aos 41 dias de idade). No segundo experimento, frangos de corte machos e fêmeas, de 1-21 e 22-42 dias de idade, recebendo dietas formuladas para atender as necessidades nutricionais, foram mantidos em ambiente com temperatura de conforto térmico. No terceiro experimento, frangos de corte de 1-21 e de 22-42 dias de idade foram divididos em dois tratamentos referentes à suplementação de metionina: sem suplementação de metionina (MD) e nível recomendado de metionina (MS). Um grupo de animais foi mantido em conforto térmico e o outro grupo de animais foi exposto ao estresse térmico agudo (38C por 24 horas, iniciando aos 20 ou aos 41 dias de idade, dependendo da fase experimental avaliada). Nestes experimentos, foram avaliados o desempenho e a expressão dos genes: neuropeptídeo Y (NPY), proteína quinase ativada por AMP subunidade -1 (AMPK-1), pró-ópiomelanocortina (POMC), grelina (GHRL), proteína quinase hepática B1 (LKB1), acetil-CoA-carboxilase (ACC),xv ácido graxo sintase (FAS), adiponectina (ADIPOQ), apolipoproteína A-I (APOA-I), apolipoproteína B (APOB), superóxido dismutase (SOD), tioredoxina (TRx), tioredoxina redutase (TRxR1), metionina sulfóxido redutase A (MsrA), catepsina L2 (CTSL2), além de alguns marcadores biológicos do estresse oxidativo. No primeiro trabalho, observamos que aves em estresse térmico reduziram o consumo de ração e apresentaram perda de peso significativa. Observamos ainda que machos apresentaram maior consumo de ração do que as fêmeas. O maior valor de expressão do gene NPY foi observado em machos em ambiente de conforto, e o menor valor em machos submetidos ao estresse térmico. Machos submetidos ao estresse térmico apresentaram maior valor de expressão do gene AMPK-1. Com relação à expressão do gene POMC, comparando animais que permaneceram em conforto térmico, observamos que fêmeas apresentaram maior expressão deste gene. Machos apresentaram maior nível de expressão do gene LKB1. Não foi observado nenhum efeito significativo sobre o gene da grelina (GHRL). Com relação ao metabolismo lipídico, comparando aves de 42 dias de idade, observamos que machos apresentaram maior consumo. Maior ganho de peso foi observado em machos e nos animais com 42 dias de idade. Fêmeas com 21 dias de idade apresentaram maior valor de expressão dos genes ACC, LKB1 e ADIPOQ. Em relação ao gene FAS, maior nível de expressão foi observado em machos com 21 dias de idade. Maior expressão do gene AMPK-1 foi observada nos machos e em animais com 21 dias de idade. A respeito da expressão do gene APOB, observamos maior expressão em fêmeas, e em aves com 42 dias de idade. A expressão do gene APOA-I foi maior em animais com 21 dias de idade. No experimento em que avaliamos os efeitos da suplementação da metionina e do estresse calórico agudo, observamos que o estresse térmico aumentou a temperatura corporal e reduziu o consumo de ração e o ganho de peso dos animais, entretanto animais na fase de crescimento sob condição de conforto térmico recebendo dieta MS apresentaram maior consumo de ração. Na fase de 1-21 e de 22-42 dias observamos que aves em estresse térmico recebendo dieta MD apresentaram maior valor de atividade da alanina aminotransferase (ALT). Na fase de 1- 21 dias observamos que o conteúdo de creatinina foi maior nas aves em conforto térmico recebendo dieta MD. Já o estresse térmico reduziu o conteúdo de ácido úrico, a atividade da enzima creatina quinase (CK), e aumentou a expressão do gene SOD. A suplementação de metionina, por sua vez, aumentou o conteúdo de ácido úrico e também a expressão do gene SOD. Em animais estressados pelo calor recebendo dieta MS, observamos maior valor de expressão dos genes TRxR1 e MsrA. Na fase de 22-42 xvi dias, observamos que aves expostas ao estresse térmico apresentaram maior valor de expressão dos genes SOD, TRxR1 e MrsA. Observamos menor atividade enzimática da creatina quinase (CK), maior atividade da aspartato aminotransferase (AST), maior conteúdo de creatinina plasmática e menor conteúdo de ácido úrico em animais estressados pelo calor. Aves recebendo dieta MS apresentaram maior valor de expressão dos genes SOD, TRxR1 e MsrA, e também menor valor de atividade da AST, maior valor de atividade da CK, e menor conteúdo de creatinina. O contéudo de homocisteína foi menor em aves estressadas pelo calor em ambas as fases avaliadas. Nossos resultados de forma conjunta nos permitem sugerir que alguns genes hipotalâmicos podem estar envolvidos nas diferenças observadas no consumo voluntário de ração entre animais de diferentes sexos e expostos a diferentes condições ambientais, e que o controle do consumo ocorre em função do balanço entre a ação de substâncias orexígenas e anorexígenas. Ainda contribui para caracterizar alguns dos mecanismos que diferenciam machos de fêmeas, e animais de 21 de animais de 42 dias no que se refere ao metabolismo lipídico. A maior deposição de gordura geralmente observada em fêmeas e em animais mais velhos pode decorrer da maior expressão de genes relacionados à síntese de lipídeos como a ACC, FAS e APOB. E animais que necessitam de maior aporte energético devido à maior taxa metabólica podem lançar mão de vias relacionadas à maior oxidação lipídica através da maior expressão dos genes LKB1, AMPK-1, e APOA-I. Suporta-se ainda a hipótese de que uma dieta suplementada com metionina pode atenuar os efeitos do estresse térmico sofridos pelos animais, por aumentar a capacidade antioxidante e por agir em via metabólica que promove o crescimento dos frangos.

Voluntary feed intake is a process that integrates the central nervous system and peripheral tissues, being influenced primarily by factors inherent to animals such as sex, age, and some neuropeptides; and external factors, such as the ambient temperature. Environmental conditions with high temperatures that birds are exposed to, and the greater fat deposition compared to lean meat, are factors that affect the development of animals. In this sense, by this work our main objective was to evaluate the effect of sex, age, acute heat stress and methionine supplementation on the performance, gene expression related to feed intake, involved in lipid metabolism, and antioxidant system related genes in broilers. For that, in the first experiment male and female broiler with 42 days of age, receiving diet formulated to meet the nutritional needs, were kept in thermal comfort or exposed to acute heat stress (38° C for 24 hours starting at 41 days of age). In the second experiment male and female broiler, 1-21 and 22-42 days of age, fed diets formulated to meet the nutritional needs were kept in an environment with a temperature of thermal comfort. In the third experiment broilers of 1-21 and 22-42 days of age were divided into two treatments regarding to methionine requeriment: without any methionine supplementation (MD) and recommended level of methionine (MS). One group of animals was kept under thermal comfort and another group of animals were exposed to heat stress (38ºC for 24 hours starting at 20 or at 41 days of age, depending on the assessed experimental phase). In these experiments, we evaluated performance, the gene expression of: neuropeptide Y (NPY), AMP-activated protein kinase subunit -1 (AMPK -1), pro-opiomelanocortin (POMC), ghrelin (GHRL), liver kinase B1 (LKB1), acetyl-CoA carboxylase (ACC), fatty acid synthase (FAS), adiponectin (ADIPOQ), apolipoprotein A-I (APOA-I), apolipoprotein B (APOB), superoxide dismutase (SOD), thioredoxin (TRx), thioredoxin reductase (TRxR1), methionine sulfoxide reductase A (MsrA), cathepsin L2 (CTSL2), besides a few xviii biological markers of oxidative stress. In the first work, we observed that birds under heat stress enviroment decreased its feed intake and showed significant weight loss. We still observed that males had higher feed intake than females. The greatest value of NPY gene expression was observed in males under thermal comfort, and the smallest value in males under thermal stress. Males under thermal stress had higher value of AMPK-1 gene expression. Regarding the expression of the POMC gene, comparing animals that remained in thermal comfort, we found that females had higher expression of this gene. Males had higher expression of LKB1 gene. There were no significant effect on ghrelin gene (GHRL). With respect to the lipid metabolism of 42-day-old broilers, males had higher feed intake. Greater weight gain was observed in males and in animals with 42- day-old. 21-day-old females had higher value of ACC, LKB1 and ADIPOQ expression. Considering FAS gene, higher level of expression was observed in males with 21 days of age. Greater AMPK-1 expression was observed in males and in birds with 21 days of age. Regarding to the APOB expression, we observed higher values for females, and in birds with 42 days of age. The APOA-I expression was higher at 21 days of age. In the experiment that we have evaluated the effects of supplementation and acute heat stress, we observed that high temperatures increased body temperature and reduced feed intake and weight gain of broilers, however animals on stage of growth under thermal comfort fed MS diet had higher feed intake. For the periods of 1 to 21 and 22 to 42 days we observed that birds in heat stress fed MD diet showed higher activity value for alanine aminotransferase (ALT). In the phase 1-21 days we observed that the creatinine content was higher in birds under thermal comfort and in birds fed MD diet. But thermal stress reduced the content of uric acid, the activity of creatine kinase (CK), and increased the SOD expression. Methionine supplementation increased the content of uric acid and the SOD expression. Broiler kept under heat stress fed MS diet, showed higher TRxR1 and MsrA genes expression. At phase 22-42 days of age we observed that birds under heat stress had higher expression values of SOD, TRxR1 and MrsA genes. We observed lower enzymatic activity of creatine kinase (CK), while aspartate aminotransferase (AST) activity was increased, as well as plasma creatinine, but uric acid values were smaller in birds under heat stress. Birds fed MS diet had higher value of SOD, TRxR1 and MsrA genes expression, lower values of AST activity, greater value of CK activity, and lower creatinine content. The homocysteine content was lower in heat stress birds in both phases. Our results jointly enable us to suggest that some hypothalamic genes may be involved in the observed differences in voluntary feed xix intake between animals of different sexes and exposed to different environmental conditions, and the control of intake is a function of the balance between orexigenic and anorectic action. Also contributes to characterize some of the mechanisms that differentiate males from females, and animals at 21 days old from animals at 42 days old in relation to lipid metabolism. The higher fat deposition usually observed in females and in older animals may result from increased expression of genes related to the synthesis of lipids such as ACC, FAS and APOB. And animals that need more energy intake due to the increased metabolic rate may resort pathways related to increased lipid oxidation through increased expression of LKB1 gene, AMPK-1 and APOA-I. It also supports the hypothesis that a diet supplemented with methionine can attenuate the effects of thermal stress suffered by the animals to increase the antioxidant capacity and act on metabolic pathways that promote the growth of chickens.

LÍQUIDO DA CASTANHA DE CAJU COMO FONTE DE ÁCIDO ANACÁRDICO NA ALIMENTAÇÃO DE POEDEIRAS COMERCIAIS

A pesquisa teve como objetivo avaliar os parâmetros bioquímicos do sangue, a atividade enzimática, a peroxidação lipídica do fígado e de tecidos do sistema reprodutor (ovário, magno e útero), assim como o desempenho e a qualidade dos ovos de poedeiras comerciais alimentadas com ração contendo o líquido da castanha de caju (LCC). Um total de 216 poedeiras comerciais Hisex White foi distribuído ao acaso em seis tratamentos, com seis repetições de seis aves. Os tratamentos consistiram em: ração sem promotor de desempenho (PD); ração com PD e rações sem PD e adição de níveis crescente de LCC (0,25; 0,50; 0,75 e 1,00%). A adição de LCC na ração não influenciou nos parâmetros bioquímicos do sangue (ácido úrico, creatinina, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, colesterol total, HDL, LDL e triglicerídeos), na atividade enzimática (superóxido dismutase e grupos sulfidrílicos não-protéicos) nos órgãos (fígado, ovário, magno e útero), na peroxidação dos lipídeos do soro sanguíneo, fígado, magno e útero, nas variáveis de desempenho e nas características dos ovos. No entanto, os níveis de 0,75% e 1,00% de LCC proporcionaram menor valor de TBARS no ovário das aves, enquanto, o tratamento sem promotor de desempenho proporcionou maior valor. A cor da gema pelo leque colorimétrico foi superior para os tratamentos sem o PD e com 0,75% de LCC na ração e inferior no tratamento com PD. Pela análise de regressão, houve efeito quadrático significativo dos níveis de inclusão de LCC sobre a coloração da gema medida pelo leque colorimétrico da DSM, com o melhor nível estimado para 0,62%. O componente de cor a* foi superior no nível de 0,50% de LCC, enquanto o tratamento com o PD obteve o menor valor. Foi observado efeito quadrático na oxidação lipídica na gema do ovo recém-posto, atingindo o mínimo de 0,58% de LCC na ração. Na comparação entre as médias o nível de 0,75% de LCC apresentou menor valor de TBARS, enquanto os tratamentos com PD, sem PD e com o nível de 1,00% de LCC apresentaram maiores valores de TBARS. A adição de até 1% do LCC, como fonte de ácido anacárdico na ração das poedeiras, não influencia os parâmetros bioquímicos do sangue, a atividade das enzimas superóxido dismutase (SOD) e grupos sulfidrílicos não-protéicos (NP-SH) no fígado, ovário magno e útero, o desempenho e a qualidade de ovos, mas melhora a cor da gema e, a partir da inclusão de 0,75% de LCC, reduz a peroxidação lipídica no ovário, sendo o nível de 0,75% de LCC efetivo em reduzir a oxidação lipídica das gemas frescas.

The objective of this study was to evaluate the blood biochemical parameters, the enzymatic activity, lipid peroxidation of liver and tissues of the reproductive system (ovary, magnum, and uterus), as well as the effects of adding the cashew nut shell (CNSL) in the diet of laying hens on performance, quality and stability of lipid eggs. A total of 216 Hisex White commercial laying hens were distributed randomly into six treatments, with six replicates of six birds. Treatments consisted of a diet without performance promoter (PP); a diet with PP; and diets without PP, with addition of increasing levels of CNSL (0.25, 0.50, 0.75, and 1.00%). Addition of CNSL to the diet did not affect the blood biochemical parameters (uric acid, creatinine, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total cholesterol, HDL cholesterol, LDL cholesterol, and triglycerides), in the enzymatic activity (superoxide dismutase and non-protein sulfhydryl groups) in the organs (liver, ovary, magnum and uterus), in the peroxidation of lipids from the blood serum, liver, magnum and uterus, in the performance variables and characteristics of eggs. However, the levels of 0.75% and 1.00% CNSL provided a lower TBARS content in the birds ovary, whereas the treatment without the growth promoter provided a higher value. The color of the yolk was superior to treatment with and without PP CNSL 0.75% in the feed in the bottom and PP treatment. Regression analysis showed a significant quadratic effect of dietary inclusion of CNSL on yolk color measured color fan, with the best estimated level to 0.62%. The color component a* was superior level of 0.50% CNSL, while treatment with PP had the lowest value. Quadratic effect was observed in lipid oxidation in the yolk of the egg station recently, reaching a minimum of 0.58% in the feed LCC. Comparing the average level of 0.75% of CNSL showed the lowest TBARS, while treatments with PP, without PP and the level of 1.00% of LCC had higher TBARS. Addition of up to 1% of the CNSL as a source of anacardic acid in the laying hen diets does not influence their blood biochemical parameters, the activity of the superoxide dismutase enzyme and non-protein sulfhydryl groups in the liver, ovary, magnum, and uterus, but improves the color of egg yolk and that the level of 0.75% of CNSL is effective in reducing lipid oxidation in the ovary and fresh gems.

ANACARDATO DE CÁLCIO COMO FONTE DE ÁCIDO ANACÁRDICO NA ALIMENTAÇÃO DE FRANGOS DE CORTE

A pesquisa foi desenvolvida com o objetivo de avaliar os efeitos da adição do anacardato de cálcio (ACC), como fonte de ácido nacrdico na ração de frangos de corte sobre o desempenho, as características de carcaça, qualidade e a estabilidade lipídica da carne, parâmetros sanguíneos, atividade enzimática e peroxidação lipídica do fígado e no crescimento, composição e qualidade dos ossos . Para isso, 840 pintos machos de um dia da linhagem Ag Ross 308 foram distribuído ao acaso em seis tratamentos, com sete repetições de vinte aves. Os tratamentos consistiram em: ração sem promotor de crescimento (PC); ração com PC e, os demais, rações sem o PC e adição de ACC nos níveis de 0,25; 0,50; 0,75 e 1%. A adição de ACC na ração não influenciou nos parâmetros bioquímicos do sangue (ácido úrico, creatinia, alanina aminotransferase, aspartato aminotransferase, colesterol total, colesterol HDL, colesterol LDL e triglicerídeos), na atividade enzimática (superóxido dismutase, grupos sulfidrílicos não-protéicos) e peroxidação dos lipídeos do fígado, no crescimento e qualidade óssea (peso, comprimento, diâmetro, índice de Seedor, resistência, deformidade, matéria seca e matéria mineral), no rendimento de carcaça e qualidade da carne (% de carcaça, peito e coxa+sobrecoxa, TBARS, L*, a*, b*, pH, perda de água por cocção e capacidade de retenção de água). No entanto, a adição a partir de 0,75% de ACC na ração reduziu o ganho de peso e piorou a conversão alimentar dos frangos até 21 dias de idade, porém, a adição de até 1% não afetou o desempenho quando se considerou o período total de criação (1 a 42 dias de idade). Para os valores de TBARS da carne os níveis de 0,75% e 1% proporcionaram os menores valores, enquanto, o tratamento sem promotor de crescimento proporcionou maior valor. O ACC pode ser adicionado na ração dos frangos de corte até o nível de 1%, sem que ocorram alterações nos parâmetros sanguíneos, enzimáticos do fígado, no desempenho ao final do período de criação (42 dias de idade), nas características de carcaça e no crescimento, composição e qualidade dos ossos. Contudo, qualidade da carne pode melhorar com a redução da oxidação lipídica a partir de 0,75%.

The research aims to evaluate the effects of adding calcium anacardic (CAC) as a source of anacardic acid in the feed of broiler about the performance, carcass characteristics, quality and lipid stability meat, blood parameters, enzyme activity and lipid peroxidation liver and growth, composition and quality of the bones. For this, 840 male chicks with a day Ross 308 line were randomly assigned to six treatments, with seven replicates of twenty birds. The treatments consisted of: diet without growth promoter (PC); diet with PC and the others without PC and adding CAC levels of 0.25; 0.50; 0.75 to 1%. The addition of CAC in the feed didnt affect the biochemical blood parameters (uric acid, creatinine, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, total cholesterol, HDL, LDL and triglycerides) in the enzyme activity (superoxide dismutase, non-protein sulfhydryl groups) and peroxidation of liver lipids, growth and bone quality (weight, length, diameter, Seedor index, strength, deformity, dry matter and mineral matter), in the carcass characteristics (% of carcass, breast and thigh + drumstick) and quality meat (L *, a *, b *, pH, loss of water by cooking and water holding capacity). However, the addition of from 0.75% CAC reduced weight gain and feed conversion detracted from the chickens up to 21 days old, however, the addition of up to 1 % did not affect performance when considering the total period (1 to 42 days old). For TBARS values for beef, the levels of 0.75% to 1% have provided the lowest values while treatment without growth promoter yielded higher value. The CAC can be added in the feed of broilers to the level of 1 %, no changes occur in the blood parameters and enzyme of the liver, the performance at the end of the growing period (42 days old), carcass characteristics and growth, composition and quality of the bones. However, the quality of the meat can improve with reduced lipid oxidation from 0,75. The CAC can be added in the feed of broiler until the level of 1%, without change the blood parameters, enzymatic liver, the performance at the end of the growing period (42 days old), carcass characteristics and growth, composition and quality of the bones. However, the quality of the flesh can be improved by reducing lipid oxidation as 0.75%.