Desenvolvimento e validação de metodologia por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) para pesquisa de enrofloxacina e ciprofloxacina em dejetos de poedeiras

Os grandes avanços na área da avicultura tornaram o Brasil um grande produtor de ovos. A busca pela máxima eficiência produtiva na avicultura leva a uma contínua agregação de novas tecnologias pelo setor. Nesse sentido, a utilização de antimicrobianos e quimioterápicos contribui para a busca de uma atividade mais rentável. Entretanto, o uso dessas substâncias para controle de patógenos e parasitas durante a criação das aves tem sido motivo de preocupação, devido, principalmente, ao aumento da resistência aos antimicrobianos. Considerando que uma importante via de eliminação dessas substâncias do organismo é a excreta das aves, os riscos e impactos ambientais que podem provocar são ainda maiores. Apesar disso, não existem trabalhos no Brasil dedicados a investigar a ocorrência de antimicrobianos em dejetos de poedeiras. O primeiro passo para a realização destes estudos é o desenvolvimento e a validação de metodologias analíticas sensíveis e confiáveis. Dessa maneira, objetivou-se com este trabalho desenvolver e validar um método por CLAE-FD para análise de uma das fluorquinolonas mais utilizadas na avicultura de postura, a enrofloxacina, e seu metabólito ativo, ciprofloxacina em dejetos de poedeiras. Os parâmetros de desempenho analisados para a validação foram linearidade, seletividade, efeito matriz, precisão, exatidão, limite de detecção (LOD) e quantificação (LOQ) e robustez para os dois analitos. A metodologia analítica por CLAE-FD foi validada e permitiu analisar simultaneamente os dois antimicrobianos estudados, em um tempo relativamente curto, utilizando um procedimento de extração simples e rápido. O método apresentou linearidade, seletividade e exatidão adequada, com recuperações médias de 92,95% e 94,04% para ciprofloxacina e enrofloxacina, respectivamente. Os LODs encontrados foram de 3,17 µg kg-1 para ciprofloxacina e 3,33 µg kg-1 para enrofloxacina, enquanto os LOQs foram de 9,60 µg kg-1 e 10,10 µg kg-1 , para a ciprofloxacina e enrofloxacina, respectivamente. O método apresentou-se robusto para a análise de ciprofloxacina, porém não apresentou robustez para a análise de enrofloxacina, sendo aconselhável não realizar alterações no método antes de nova validação. Dessa maneira, o método por CLAE-FD apresenta as características de desempenho necessárias, sendo adequado para a pesquisa de resíduos de enrofloxacina e seu metabólito, ciprofloxacina, em dejetos de poedeiras

The great advances in the poultry farming field have made Brazil a major egg producer. The search for the maximum productive efficiency in poultry farming leads to a continuous aggregation of new technologies by the sector. In this sense, the use of antimicrobials and chemotherapeutics contributes to the search for a more profitable activity. However, the use of such substances for the control of pathogens and parasites during the poultry breeding has been a cause of concern, mainly due to the increase of antimicrobial resistance. Considering that an important elimination route of these substances from the body is the poultry excreta, the environmental risks and impacts that may be caused are even greater. Despite this, there are no studies in Brazil dedicated to investigate the occurrence of antimicrobials in laying hens manure. The first step to the accomplishment of these studies is the development and validation of sensible and reliable analytical methodologies. Thus, the aim with this work is to develop and validate a method using HPLC-FD for the analysis of one of the most used fluoroquinolones in the laying hens farming, the enrofloxacin, and its active metabolite, the ciprofloxacin, in laying hens manure. The performance parameters analyzed for the validation were linearity, selectivity, matrix effect, precision, accuracy, limit of detection (LOD) and quantification (LOQ) and robustness for both analytes. The analytical methodology by HPLC-FD was validated and allowed to simultaneously analyze both antimicrobials studied, in a relatively short time, using a fast and simple extraction procedure. The method presented suitable linearity, selectivity and accuracy, with average recoveries of 92.95% and 94.07% for ciprofloxacin and enrofloxacin, respectively. The LODs found were 3.17 µg kg-1 for ciprofloxacin and 3.33 µg kg-1 for enrofloxacin, while the LOQs were 9.60 µg kg-1 e 10.10 µg kg-1 , for ciprofloxacin and enrofloxacin, respectively. The method was robust for the analysis of ciprofloxacin, but it did not present robustness for the analysis of enrofloxacin, being advisable not to make changes in the method before new validation. Thus, the method by HPLC-FD presents the performance features needed, being suitable for the search of residues of enrofloxacin and its metabolite, ciprofloxacin, in laying hens manure.

Improved 1-Deoxynojirimycin (DNJ) production in mulberry leaves fermented by microorganism

DNJ, an inhibitor of α-glucosidase, is used to suppress the elevation of postprandial hyperglycemia. In this study, we focus on screening an appropriate microorganism for performing fermentation to improve DNJ content in mulberry leaf. Results showed that Ganoderma lucidum was selected from 8 species and shown to be the most effective in improvement of DNJ production from mulberry leaves through fermentation. Based on single factor and three factor influence level tests by following the Plackett-Burman design, the optimum extraction yield was analyzed by response surface methodology (RSM). The extracted DNJ was determined by reverse-phase high performance liquid chromatograph equipped with fluorescence detector (HPLC-FD). The results of RSM showed that the optimal condition for mulberry fermentation was defined as pH 6.97, potassium nitrate content 0.81% and inoculums volume 2 mL. The extraction efficiency reached to 0.548% in maximum which is 2.74 fold of those in mulberry leaf.

Emprego de casca de arroz como adsorvente para execução de técnica de MSPD para determinar aflatoxinas em cebolas / Use of rice husk as an adsorbent for performing MSPS technique for determining the aflatoxins occurrence in onion

Foi estudada a extração simultânea de aflatoxinas (AFLAs) B1, B2, G1 e G2 em cebolas por meio de técnica de dispersão da matriz em fase sólida (MSPD), utilizando-se a casca de arroz como adsorvente. A identificação e quantificação das aflatoxinas foram realizadas empregando-se cromatografia em camada delgada de alta eficiência (CCDAE) e cromatografia líquida de alta eficiência acoplada ao detector de fluorescência (CLAE-FL). O melhor adsorvente foi constituído de mistura de casca de arroz: terra diatomácea (1:1) (p/p), empregado na proporção de 1:1 (p/p) com a massa de amostra e a mistura clorofórmio:metanol (5:25) (v/v) como eluente. A metodologia mostrou limites de detecção que variaram de 0,05 a 1 µg.kg-1, de exatidão entre 78 e 93%, e coeficientes de variação compreendidos entre 11 e 14%. Após a validação, a metodologia foi testada quanto à sua aplicabilidade para determinar a ocorrência das aflatoxinas em amostras de cebola, as quais foram classificadas segundo a norma do MAPA. A contaminação com aflatoxina foi verificada em 43% das amostras analisadas com teor máximo de 90µg.kg-1 de AFLAB2.(AU)

The simultaneous determination of aflatoxins (AFLA) B1, B2, G1 and G2 was investigated in onions by means of matrix solid-phase dispersion (MSPD) extraction methodology, and using rice husk as adsorbent element. The AFLA identification and quantification were carried out by using high efficiency thin layer chromatography (HPTLC) and high efficiency liquid chromatography coupled to a fluorescence detector (HPLC-FD). The best adsorbent was the compound constituted by the rice husk:celite mixture (1:1) in a 1:1 ratio with the mass of the sample, and employing the mixture chloroform:methanol (5:25) as eluent. The methodology showed the limit of detection ranging from 0.05 to 1 µg.kg-1, and of the accuracy from 78 to 93%; and variation coefficients ranged from 11 to 14%. After being validated, the methodology was tested on its applicability in determining the aflatoxins occurrence in onion samples, which were classified according to the standard MAPA. Aflatoxin contamination was found in 43% of analyzed samples with a maximum content of 90 µg.kg-1 of AFLAB2.(AU)

Detecção de ácido ocadaico em cultivo de mexilhões Perna perna, Angra dos Reis, RJ

Okadaic acid (OA) is a phycotoxin produced by a group of microalgae known as Dino-flagellates. When mussels feed themselves from this micro seaweed the toxin accumulates in their hepatopancreas, triggering the Syndrome or Diarrhetic Shellfish Poisoning (DSP) in the human being. The symptoms appear around 30 minutes after the consumption of contaminated mussels and include abdominal nauseas, pains, vomits and diarrhea. When the toxin ingestion happens in amounts lower than 48µg g-1, the above described symptoms do not develop. However, the continued consumption favors the emergence of tumors in the gastrointestinal tract because of the high carcinogenic power of OA. This study aimed to detect and quantify the diarrheic toxin OA in Perna perna mussels collected between May and October 2006. The detection of OA in the mussels was carried out through High Performance Liquid Chromatography with Fluorimetric Detection (HPLC-FD). The chromatographic results indicate the presence of OA toxin in low concentrations in all the mussel samples gathered from May until October 2006. The results suggest the necessity of elaboration and effective application of a hygienic-sanitary mussel control program as well as environment monitoring, with the main aim of enhancing public health safety.

A ficotoxina ácido ocadaico (AO) é produzida por um grupo de microalgas conhecidas como dinoflagelados. Os mexilhões, ao se alimentarem dessas microalgas, acumulam a toxina em sua glândula digestiva, desencadeando a Síndrome ou Envenenamento Diarreico por Moluscos (EDM) no ser humano. Os sintomas se apresentam em torno de 30 minutos após o consumo do molusco contaminado, variando entre náuseas, dores abdominais, vômitos e diarreia. Quando a ingestão da toxina acontece em quantidades inferiores a 48µg g-1, os sintomas não se desenvolvem, porém seu consumo continuado favorece o surgimento de tumores no trato gastrointestinal em razão do poder carcinogênico do AO. Este estudo pretendeu detectar e quantificar a toxina diarreica AO em mexilhões Perna perna coletados entre os meses de maio e outubro de 2006. A detecção do AO nos mexilhões foi realizada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detecção Fluorimétrica (CLAE-DF). Os resultados cromatográficos indicaram a presença da toxina AO em baixas concentrações, em todas as amostras de mexilhões obtidas de maio a outubro de 2006. Os resultados indicam a necessidade da elaboração e aplicação efetiva de um programa de controle higiênico-sanitário dos moluscos, assim como o monitoramento do ambiente aquático, objetivando, acima de tudo, a segurança da saúde pública.

Detecção de ácido ocadaico em cultivo de mexilhões Perna perna, Angra dos Reis, RJ

Okadaic acid (OA) is a phycotoxin produced by a group of microalgae known as Dino-flagellates. When mussels feed themselves from this micro seaweed the toxin accumulates in their hepatopancreas, triggering the Syndrome or Diarrhetic Shellfish Poisoning (DSP) in the human being. The symptoms appear around 30 minutes after the consumption of contaminated mussels and include abdominal nauseas, pains, vomits and diarrhea. When the toxin ingestion happens in amounts lower than 48µg g-1, the above described symptoms do not develop. However, the continued consumption favors the emergence of tumors in the gastrointestinal tract because of the high carcinogenic power of OA. This study aimed to detect and quantify the diarrheic toxin OA in Perna perna mussels collected between May and October 2006. The detection of OA in the mussels was carried out through High Performance Liquid Chromatography with Fluorimetric Detection (HPLC-FD). The chromatographic results indicate the presence of OA toxin in low concentrations in all the mussel samples gathered from May until October 2006. The results suggest the necessity of elaboration and effective application of a hygienic-sanitary mussel control program as well as environment monitoring, with the main aim of enhancing public health safety.

A ficotoxina ácido ocadaico (AO) é produzida por um grupo de microalgas conhecidas como dinoflagelados. Os mexilhões, ao se alimentarem dessas microalgas, acumulam a toxina em sua glândula digestiva, desencadeando a Síndrome ou Envenenamento Diarreico por Moluscos (EDM) no ser humano. Os sintomas se apresentam em torno de 30 minutos após o consumo do molusco contaminado, variando entre náuseas, dores abdominais, vômitos e diarreia. Quando a ingestão da toxina acontece em quantidades inferiores a 48µg g-1, os sintomas não se desenvolvem, porém seu consumo continuado favorece o surgimento de tumores no trato gastrointestinal em razão do poder carcinogênico do AO. Este estudo pretendeu detectar e quantificar a toxina diarreica AO em mexilhões Perna perna coletados entre os meses de maio e outubro de 2006. A detecção do AO nos mexilhões foi realizada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detecção Fluorimétrica (CLAE-DF). Os resultados cromatográficos indicaram a presença da toxina AO em baixas concentrações, em todas as amostras de mexilhões obtidas de maio a outubro de 2006. Os resultados indicam a necessidade da elaboração e aplicação efetiva de um programa de controle higiênico-sanitário dos moluscos, assim como o monitoramento do ambiente aquático, objetivando, acima de tudo, a segurança da saúde pública.

Detecção de ácido ocadaico em cultivo de mexilhões Perna perna, Angra dos Reis, RJ

Okadaic acid (OA) is a phycotoxin produced by a group of microalgae known as Dino-flagellates. When mussels feed themselves from this micro seaweed the toxin accumulates in their hepatopancreas, triggering the Syndrome or Diarrhetic Shellfish Poisoning (DSP) in the human being. The symptoms appear around 30 minutes after the consumption of contaminated mussels and include abdominal nauseas, pains, vomits and diarrhea. When the toxin ingestion happens in amounts lower than 48µg g-1, the above described symptoms do not develop. However, the continued consumption favors the emergence of tumors in the gastrointestinal tract because of the high carcinogenic power of OA. This study aimed to detect and quantify the diarrheic toxin OA in Perna perna mussels collected between May and October 2006. The detection of OA in the mussels was carried out through High Performance Liquid Chromatography with Fluorimetric Detection (HPLC-FD). The chromatographic results indicate the presence of OA toxin in low concentrations in all the mussel samples gathered from May until October 2006. The results suggest the necessity of elaboration and effective application of a hygienic-sanitary mussel control program as well as environment monitoring, with the main aim of enhancing public health safety.

A ficotoxina ácido ocadaico (AO) é produzida por um grupo de microalgas conhecidas como dinoflagelados. Os mexilhões, ao se alimentarem dessas microalgas, acumulam a toxina em sua glândula digestiva, desencadeando a Síndrome ou Envenenamento Diarreico por Moluscos (EDM) no ser humano. Os sintomas se apresentam em torno de 30 minutos após o consumo do molusco contaminado, variando entre náuseas, dores abdominais, vômitos e diarreia. Quando a ingestão da toxina acontece em quantidades inferiores a 48µg g-1, os sintomas não se desenvolvem, porém seu consumo continuado favorece o surgimento de tumores no trato gastrointestinal em razão do poder carcinogênico do AO. Este estudo pretendeu detectar e quantificar a toxina diarreica AO em mexilhões Perna perna coletados entre os meses de maio e outubro de 2006. A detecção do AO nos mexilhões foi realizada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência com Detecção Fluorimétrica (CLAE-DF). Os resultados cromatográficos indicaram a presença da toxina AO em baixas concentrações, em todas as amostras de mexilhões obtidas de maio a outubro de 2006. Os resultados indicam a necessidade da elaboração e aplicação efetiva de um programa de controle higiênico-sanitário dos moluscos, assim como o monitoramento do ambiente aquático, objetivando, acima de tudo, a segurança da saúde pública.