Immobilization of mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum in E coli and application for kraft pulp biobleaching / Imobilização de xilanase mutada de Neocallimastix patriciarum em E coli e aplicação para polpa kraft

As an important enzyme, xylanase is widely used in the food, pulp, and textile industry. Different applications of xylanase warrant specific conditions including temperature and pH. This study aimed to carry out sodium alginate beads as carrier to immobilize previous reported mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum which expressed in E. coli, the activity of immobilization of mutated xylanase was elevated about 4% at pH 6 and 13% at 62 °C. Moreover, the immobilized mutated xylanase retained a greater proportion of its activity than the wide type in thermostability. These properties suggested that the immobilization of mutated xylanase has potential to apply in biobleaching industry.

Como importante enzima, a xilanase é amplamente utilizada na indústria alimentícia, de celulose e têxtil. Diferentes aplicações de xilanase garantem condições específicas, incluindo temperatura e pH. Este estudo teve como objetivo realizar grânulos de alginato de sódio como carreador para imobilizar xilanase mutada relatada anteriormente de Neocallimastix patriciarum que expressa em E. coli, a atividade de imobilização da xilanase mutada foi elevada em cerca de 4% em pH 6 e 13% a 62 °C. Além disso, a xilanase mutada imobilizada reteve uma proporção maior de sua atividade do que o tipo amplo em termoestabilidade. Essas propriedades sugerem que a imobilização da xilanase mutada tem potencial para aplicação na indústria de biobranqueamento.

Immobilization of mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum in E coli and application for kraft pulp biobleaching / Imobilização de xilanase mutada de Neocallimastix patriciarum em E coli e aplicação para polpa kraft

As an important enzyme, xylanase is widely used in the food, pulp, and textile industry. Different applications of xylanase warrant specific conditions including temperature and pH. This study aimed to carry out sodium alginate beads as carrier to immobilize previous reported mutated xylanase from Neocallimastix patriciarum which expressed in E. coli, the activity of immobilization of mutated xylanase was elevated about 4% at pH 6 and 13% at 62 °C. Moreover, the immobilized mutated xylanase retained a greater proportion of its activity than the wide type in thermostability. These properties suggested that the immobilization of mutated xylanase has potential to apply in biobleaching industry.(AU)

Como importante enzima, a xilanase é amplamente utilizada na indústria alimentícia, de celulose e têxtil. Diferentes aplicações de xilanase garantem condições específicas, incluindo temperatura e pH. Este estudo teve como objetivo realizar grânulos de alginato de sódio como carreador para imobilizar xilanase mutada relatada anteriormente de Neocallimastix patriciarum que expressa em E. coli, a atividade de imobilização da xilanase mutada foi elevada em cerca de 4% em pH 6 e 13% a 62 °C. Além disso, a xilanase mutada imobilizada reteve uma proporção maior de sua atividade do que o tipo amplo em termoestabilidade. Essas propriedades sugerem que a imobilização da xilanase mutada tem potencial para aplicação na indústria de biobranqueamento.(AU)

Effects of different combinations of N, P and K at different time interval on vegetative, reproductive, yield and quality traits of mango (Mangifera Indica. L) cv. Dusehri

Abstract The experiment was carried out on mango cv. Dusehri to investigate the effect of N, P and K fertilizers on vegetative, reproductive growth, yield and fruit quality. Eight different fertilizer combinations such as T1 (control), T2 (N), T3 (P), T4 (K), T5 (NP), T6 (NK), T7 (PK) and T8 (NPK) were used. Individual or combine fertilizer application of N (1000 g), P (750 g) and K (750 g) were applied during growing season in February and August. All the treatments significantly influenced on vegetative growth, flowering, fruiting, yield and other physiochemical attributes of mango as compared to control. Least effect was observed with individual fertilizer application while combine fertilizer treatments enhanced most of the investigated parameters. Especially, qualitative traits showed non-significant differences between treated and untreated mango trees. However, among the different treatments T8 (NPK) showed significance for fruiting aspects such as maximum size of growth flushes (177.51 mm), total number of panicles/tree (845), total number of flowers/panicle (974), sex ratio (69.18%), fruit retention (13.85%), total number of fruits/tree (379), yield (82 kg/tree), fruit weight (197.5 g), pulp weight (135.5 g) and physiochemical parameters namely TSS (24.53), Vit. C (57.63 mg/100 mL) and total sugar (20.84%). In general, combine application of NPK (T8) were the most effective in enhancing fruiting aspects, yield, physiochemical characteristics as well as improved fruit quality of mango trees.

Resumo O experimento foi realizado em manga cv. Dusehri para investigar o efeito dos fertilizantes N, P e K no crescimento vegetativo, reprodutivo, produtividade e de qualidade do fruto. Foram utilizadas oito combinações diferentes de fertilizantes: T1 (controle), T2 (N), T3 (P), T4 (K), T5 (NP), T6 (NK), T7 (PK) e T8 (NPK). Cada tratamento de N (1.000 g), P (750 g) e K (750 g) foi aplicado duas vezes durante a estação de crescimento em fevereiro e agosto. Todos os tratamentos influenciaram significativamente o crescimento vegetativo, floração, frutificação, produtividade e outros atributos físico-químicos da manga em relação ao controle. Menos efeito foi observado com a aplicação individual de fertilizante, enquanto os tratamentos combinados aumentaram a maioria dos parâmetros investigados. Especialmente as características qualitativas mostraram diferenças não significativas entre mangueiras tratadas e não tratadas. No entanto, entre os diferentes tratamentos, T8 (NPK) apresentou significância para aspectos de frutificação, como tamanho máximo de folgas de crescimento (177,51 mm), número total de panículas/árvore (845), número total de flores/panícula (974), razão sexual (69,18%), retenção de frutos (13,85%), número total de frutos/árvore (379), produção (82 kg/árvore), peso do fruto (197,5 g) e peso da polpa (135,5 g), além de parâmetros físico-químicos, como TSS (24,53), vitamina C (57,63 mg/100 mL) e açúcar total (20,84%). Em geral, a aplicação combinada de NPK (T8) foi a mais eficaz no aprimoramento dos aspectos de frutificação, produtividade, características físico-químicas, além da melhoria da qualidade dos frutos das mangueiras.

Effects of different combinations of N, P and K at different time interval on vegetative, reproductive, yield and quality traits of mango (Mangifera Indica. L) cv. Dusehri / Efeitos de diferentes combinações de N, P e K em diferentes intervalos nas características vegetativas, reprodutivas, produtivas e de qualidade da manga (Mangifera indica. L) cv. Dusehri

The experiment was carried out on mango cv. Dusehri to investigate the effect of N, P and K fertilizers on vegetative, reproductive growth, yield and fruit quality. Eight different fertilizer combinations such as T1 (control), T2 (N), T3 (P), T4 (K), T5 (NP), T6 (NK), T7 (PK) and T8 (NPK) were used. Individual or combine fertilizer application of N (1000 g), P (750 g) and K (750 g) were applied during growing season in February and August. All the treatments significantly influenced on vegetative growth, flowering, fruiting, yield and other physiochemical attributes of mango as compared to control. Least effect was observed with individual fertilizer application while combine fertilizer treatments enhanced most of the investigated parameters. Especially, qualitative traits showed nonsignificant differences between treated and untreated mango trees. However, among the different treatments T8 (NPK) showed significance for fruiting aspects such as maximum size of growth flushes (177.51 mm), total number of panicles/tree (845), total number of flowers/panicle (974), sex ratio (69.18%), fruit retention (13.85%), total number of fruits/tree (379), yield (82 kg/tree), fruit weight (197.5 g), pulp weight (135.5 g) and physiochemical parameters namely TSS (24.53), Vit. C (57.63 mg/100 mL) and total sugar (20.84%). In general, combine application of NPK (T8) were the most effective in enhancing fruiting aspects, yield, physiochemical characteristics as well as improved fruit quality of mango trees.

O experimento foi realizado em manga cv. Dusehri para investigar o efeito dos fertilizantes N, P e K no crescimento vegetativo, reprodutivo, produtividade e de qualidade do fruto. Foram utilizadas oito combinações diferentes de fertilizantes: T1 (controle), T2 (N), T3 (P), T4 (K), T5 (NP), T6 (NK), T7 (PK) e T8 (NPK). Cada tratamento de N (1.000 g), P (750 g) e K (750 g) foi aplicado duas vezes durante a estação de crescimento em fevereiro e agosto. Todos os tratamentos influenciaram significativamente o crescimento vegetativo, floração, frutificação, produtividade e outros atributos físico-químicos da manga em relação ao controle. Menos efeito foi observado com a aplicação individual de fertilizante, enquanto os tratamentos combinados aumentaram a maioria dos parâmetros investigados. Especialmente as características qualitativas mostraram diferenças não significativas entre mangueiras tratadas e não tratadas. No entanto, entre os diferentes tratamentos, T8 (NPK) apresentou significância para aspectos de frutificação, como tamanho máximo de folgas de crescimento (177,51 mm), número total de panículas/árvore (845), número total de flores/panícula (974), razão sexual (69,18%), retenção de frutos (13,85%), número total de frutos/árvore (379), produção (82 kg/árvore), peso do fruto (197,5 g) e peso da polpa (135,5 g), além de parâmetros físico-químicos, como TSS (24,53), vitamina C (57,63 mg/100 mL) e açúcar total (20,84%). Em geral, a aplicação combinada de NPK (T8) foi a mais eficaz no aprimoramento dos aspectos de frutificação, produtividade, características físico-químicas, além da melhoria da qualidade dos frutos das mangueiras.

Effects of different combinations of N, P and K at different time interval on vegetative, reproductive, yield and quality traits of mango (Mangifera Indica. L) cv. Dusehri / Efeitos de diferentes combinações de N, P e K em diferentes intervalos nas características vegetativas, reprodutivas, produtivas e de qualidade da manga (Mangifera indica. L) cv. Dusehri

The experiment was carried out on mango cv. Dusehri to investigate the effect of N, P and K fertilizers on vegetative, reproductive growth, yield and fruit quality. Eight different fertilizer combinations such as T1 (control), T2 (N), T3 (P), T4 (K), T5 (NP), T6 (NK), T7 (PK) and T8 (NPK) were used. Individual or combine fertilizer application of N (1000 g), P (750 g) and K (750 g) were applied during growing season in February and August. All the treatments significantly influenced on vegetative growth, flowering, fruiting, yield and other physiochemical attributes of mango as compared to control. Least effect was observed with individual fertilizer application while combine fertilizer treatments enhanced most of the investigated parameters. Especially, qualitative traits showed non significant differences between treated and untreated mango trees. However, among the different treatments T8 (NPK) showed significance for fruiting aspects such as maximum size of growth flushes (177.51 mm), total number of panicles/tree (845), total number of flowers/panicle (974), sex ratio (69.18%), fruit retention (13.85%), total number of fruits/tree (379), yield (82 kg/tree), fruit weight (197.5 g), pulp weight (135.5 g) and physiochemical parameters namely TSS (24.53), Vit. C (57.63 mg/100 mL) and total sugar (20.84%). In general, combine application of NPK (T8) were the most effective in enhancing fruiting aspects, yield, physiochemical characteristics as well as improved fruit quality of mango trees.

O experimento foi realizado em manga cv. Dusehri para investigar o efeito dos fertilizantes N, P e K no crescimento vegetativo, reprodutivo, produtividade e de qualidade do fruto. Foram utilizadas oito combinações diferentes de fertilizantes: T1 (controle), T2 (N), T3 (P), T4 (K), T5 (NP), T6 (NK), T7 (PK) e T8 (NPK). Cada tratamento de N(1.000 g), P (750 g) e K (750 g) foi aplicado duas vezes durante a estação de crescimento em fevereiro e agosto. Todos os tratamentos influenciaram significativamente o crescimento vegetativo, floração, frutificação, produtividade e outros atributos físico-químicos da manga em relação ao controle. Menos efeito foi observado com a aplicação individual de fertilizante, enquanto os tratamentos combinados aumentaram a maioria dos parâmetros investigados. Especialmente as características qualitativas mostraram diferenças não significativas entre mangueiras tratadas e não tratadas. No entanto, entre os diferentes tratamentos, T8 (NPK) apresentou significância para aspectos de frutificação, como tamanho máximo de folgas de crescimento (177,51 mm), número total de panículas/árvore (845), número total de flores/panícula (974), razão sexual (69,18%), retenção de frutos (13,85%), número total de frutos/árvore (379), produção (82 kg/árvore), peso do fruto (197,5 g) e peso da polpa (135,5 g), além de parâmetros físico-químicos, como TSS (24,53), vitamina C (57,63 mg/100 mL) e açúcar total (20,84%). Em geral, a aplicação combinada de NPK (T8) foi a mais eficaz no aprimoramento dos aspectos de frutificação, produtividade, características físico-químicas, além da melhoria da qualidade dos frutos das mangueiras.

Effects of different combinations of N, P and K at different time interval on vegetative, reproductive, yield and quality traits of mango (Mangifera Indica. L) cv. Dusehri / Efeitos de diferentes combinações de N, P e K em diferentes intervalos nas características vegetativas, reprodutivas, produtivas e de qualidade da manga (Mangifera indica. L) cv. Dusehri

The experiment was carried out on mango cv. Dusehri to investigate the effect of N, P and K fertilizers on vegetative, reproductive growth, yield and fruit quality. Eight different fertilizer combinations such as T1 (control), T2 (N), T3 (P), T4 (K), T5 (NP), T6 (NK), T7 (PK) and T8 (NPK) were used. Individual or combine fertilizer application of N (1000 g), P (750 g) and K (750 g) were applied during growing season in February and August. All the treatments significantly influenced on vegetative growth, flowering, fruiting, yield and other physiochemical attributes of mango as compared to control. Least effect was observed with individual fertilizer application while combine fertilizer treatments enhanced most of the investigated parameters. Especially, qualitative traits showed non significant differences between treated and untreated mango trees. However, among the different treatments T8 (NPK) showed significance for fruiting aspects such as maximum size of growth flushes (177.51 mm), total number of panicles/tree (845), total number of flowers/panicle (974), sex ratio (69.18%), fruit retention (13.85%), total number of fruits/tree (379), yield (82 kg/tree), fruit weight (197.5 g), pulp weight (135.5 g) and physiochemical parameters namely TSS (24.53), Vit. C (57.63 mg/100 mL) and total sugar (20.84%). In general, combine application of NPK (T8) were the most effective in enhancing fruiting aspects, yield, physiochemical characteristics as well as improved fruit quality of mango trees.(AU)

O experimento foi realizado em manga cv. Dusehri para investigar o efeito dos fertilizantes N, P e K no crescimento vegetativo, reprodutivo, produtividade e de qualidade do fruto. Foram utilizadas oito combinações diferentes de fertilizantes: T1 (controle), T2 (N), T3 (P), T4 (K), T5 (NP), T6 (NK), T7 (PK) e T8 (NPK). Cada tratamento de N(1.000 g), P (750 g) e K (750 g) foi aplicado duas vezes durante a estação de crescimento em fevereiro e agosto. Todos os tratamentos influenciaram significativamente o crescimento vegetativo, floração, frutificação, produtividade e outros atributos físico-químicos da manga em relação ao controle. Menos efeito foi observado com a aplicação individual de fertilizante, enquanto os tratamentos combinados aumentaram a maioria dos parâmetros investigados. Especialmente as características qualitativas mostraram diferenças não significativas entre mangueiras tratadas e não tratadas. No entanto, entre os diferentes tratamentos, T8 (NPK) apresentou significância para aspectos de frutificação, como tamanho máximo de folgas de crescimento (177,51 mm), número total de panículas/árvore (845), número total de flores/panícula (974), razão sexual (69,18%), retenção de frutos (13,85%), número total de frutos/árvore (379), produção (82 kg/árvore), peso do fruto (197,5 g) e peso da polpa (135,5 g), além de parâmetros físico-químicos, como TSS (24,53), vitamina C (57,63 mg/100 mL) e açúcar total (20,84%). Em geral, a aplicação combinada de NPK (T8) foi a mais eficaz no aprimoramento dos aspectos de frutificação, produtividade, características físico-químicas, além da melhoria da qualidade dos frutos das mangueiras.(AU)

Use of protein kinase C and phospholipase A2 inhibitors in bovine endometrial cells treated with estradiol and calcium ionophore / Uso de inibidores de proteína quinase C e fosfolipase A2 em células endometriais bovinas tratadas com estradiol e ionóforo de cálcio

The release of endometrial prostaglandin-F2α (PGF2α) in bovine females can be induced in vivo by estradiol (E2). However, its role in this mechanism has not been clarified. We hypothesized that E2 stimulates the activity and abundance of protein kinase C (PKC) and phospholipase A2 (PLA2). Our objective in this study was to analyze the effects of PKC and PLA2 inhibitors on PGF2α synthesis induced by E2 and calcium ionophore (CI) in bovine endometrial cells (BEND cells; Experiment 1). Additionally, we evaluated the abundance of PKC and PLA2 in endometrial explants of cows treated or not with E2 17 days after estrus (D17, D0 = estrus; Experiment 2). In Experiment 1, BEND cells were submitted to a PKC inhibitor (10 µM of C25H24N4O2; bisindolylmaleimide I, or BIS I), a PLA2 inhibitor (20 µM of arachydoniltrifluoromethane or AACOCF3), or none. The BEND cells were subsequently treated with E2 and CI, and PGF2α concentrations were measured in the culture medium through radioimmunoassay. For DIF-12 (PGF2α concentration 12 h after treatment subtracted from PGF2α concentration at hour 0), no PKC inhibitor effect was observed (P= 0.2709). However, DIF-12 was lower (P < 0.05) for groups treated with the PLA2 inhibitor and PLA2 inhibitor + CI + E2 groups than the control and CI + E2 groups. Thus, AACOCF3 was an efficient PLA2 inhibitor in the BEND cells culture system, and E2 did not stimulate the synthesis of PKC and PLA2. In Experiment 2, cyclic Nellore heifers received none (n = 5) or 3 mg (n = 6) of 17ß-E2 on D17 and were slaughtered 2 h after administration. The abundance of PKC and PLA2 in the endometrial tissue was evaluated using Western blotting analysis. No E2 effect was observed on PKC (P = 0.08) and PLA2 (P = 0.56). We concluded that E2 did not stimulate the activity and abundance of PKC and PLA2.(AU)

A liberação endometrial de prostaglandina-F2α (PGF2α) em fêmeas bovinas pode ser induzida in vivo pelo estradiol (E2). Entretanto o seu mecanismo de ação ainda não foi bem esclarecido. Nossa hipótese é que o E2 estimula a atividade e a abundância da proteína quinase C (PKC) e da fosfolipase A2 (PLA2). Nosso objetivo com este estudo foi analizar os efeitos de inibidores de PKC e PLA2 na síntese de PGF2α induzida por E2 e ionóforo de cálcio (CI) em células endometriais bovinas (células BEND; Experimento 1). Adicionalmente, nós avaliamos a abundância de PKC e PLA2 em explantes endometriais de vacas tratadas com ou sem E2 17 dias após o estro (D17, D0 = estro; Experimento 2). No Experimento 1, células BEND foram submetidas ao inibidor de PKC (10 µM de C25H24N4O2; bisindolylmaleimide I, ou BIS I), e ao inibidor de PLA2 (20 µM de arachydoniltrifluoromethane ou AACOCF3) ou a nenhum inibidor. As células BEND foram subsequentemente tratadas com E2 e CI e concentrações de PGF2α foram mensuradas no meio de cultura por radioimunoenssaio. Para DIF-12 (concentração de PGF2α 12 horas depois do tratamento, subtraída da concentração de PGF2α na hora 0), não foi observado efeito do inibidor de PKC (P = 0.2709). Entretanto DIF-12 foi menor (P < 0.05) nos grupos tratados com inibidor de PLA2 e inibidor de PLA2 + CI + E2 quando comparados com o grupo controle e o grupo CI + E2. O AACOCF3 foi um eficiente inibidor de PLA2 em sistema de cultura de células BEND e o E2 não estimulou a síntese de PKC e PLA2. No Experimento 2, novilhas Nelore cíclicas receberam 3 mg de 17ß-E2 (n = 6) ou nenhum tratamento (n = 5) no D17 e foram abatidas duas horas depois da administração dos tratamentos. A quantidade de PKC and PLA2 no tecido endometrial foi avaliada pela técnica de Western Blotting. Não foi observado efeito do E2 sobre a PKC (P= 0.08) e nem sobre a PLA2 (P= 0.56). Conclui-se que o E2 não estimulou a atividade e abundância de PKC e PLA2.(AU)

Use of protein kinase C and phospholipase A2 inhibitors in bovine endometrial cells treated with estradiol and calcium ionophore / Uso de inibidores de proteína quinase C e fosfolipase A2 em células endometriais bovinas tratadas com estradiol e ionóforo de cálcio

The release of endometrial prostaglandin-F2α (PGF2α) in bovine females can be induced in vivo by estradiol (E2). However, its role in this mechanism has not been clarified. We hypothesized that E2 stimulates the activity and abundance of protein kinase C (PKC) and phospholipase A2 (PLA2). Our objective in this study was to analyze the effects of PKC and PLA2 inhibitors on PGF2α synthesis induced by E2 and calcium ionophore (CI) in bovine endometrial cells (BEND cells; Experiment 1). Additionally, we evaluated the abundance of PKC and PLA2 in endometrial explants of cows treated or not with E2 17 days after estrus (D17, D0 = estrus; Experiment 2). In Experiment 1, BEND cells were submitted to a PKC inhibitor (10 µM of C25H24N4O2; bisindolylmaleimide I, or BIS I), a PLA2 inhibitor (20 µM of arachydoniltrifluoromethane or AACOCF3), or none. The BEND cells were subsequently treated with E2 and CI, and PGF2α concentrations were measured in the culture medium through radioimmunoassay. For DIF-12 (PGF2α concentration 12 h after treatment subtracted from PGF2α concentration at hour 0), no PKC inhibitor effect was observed (P= 0.2709). However, DIF-12 was lower (P < 0.05) for groups treated with the PLA2 inhibitor and PLA2 inhibitor + CI + E2 groups than the control and CI + E2 groups. Thus, AACOCF3 was an efficient PLA2 inhibitor in the BEND cells culture system, and E2 did not stimulate the synthesis of PKC and PLA2. In Experiment 2, cyclic Nellore heifers received none (n = 5) or 3 mg (n = 6) of 17ß-E2 on D17 and were slaughtered 2 h after administration. The abundance of PKC and PLA2 in the endometrial tissue was evaluated using Western blotting analysis. No E2 effect was observed on PKC (P = 0.08) and PLA2 (P = 0.56). We concluded that E2 did not stimulate the activity and abundance of PKC and PLA2.(AU)

A liberação endometrial de prostaglandina-F2α (PGF2α) em fêmeas bovinas pode ser induzida in vivo pelo estradiol (E2). Entretanto o seu mecanismo de ação ainda não foi bem esclarecido. Nossa hipótese é que o E2 estimula a atividade e a abundância da proteína quinase C (PKC) e da fosfolipase A2 (PLA2). Nosso objetivo com este estudo foi analizar os efeitos de inibidores de PKC e PLA2 na síntese de PGF2α induzida por E2 e ionóforo de cálcio (CI) em células endometriais bovinas (células BEND; Experimento 1). Adicionalmente, nós avaliamos a abundância de PKC e PLA2 em explantes endometriais de vacas tratadas com ou sem E2 17 dias após o estro (D17, D0 = estro; Experimento 2). No Experimento 1, células BEND foram submetidas ao inibidor de PKC (10 µM de C25H24N4O2; bisindolylmaleimide I, ou BIS I), e ao inibidor de PLA2 (20 µM de arachydoniltrifluoromethane ou AACOCF3) ou a nenhum inibidor. As células BEND foram subsequentemente tratadas com E2 e CI e concentrações de PGF2α foram mensuradas no meio de cultura por radioimunoenssaio. Para DIF-12 (concentração de PGF2α 12 horas depois do tratamento, subtraída da concentração de PGF2α na hora 0), não foi observado efeito do inibidor de PKC (P = 0.2709). Entretanto DIF-12 foi menor (P < 0.05) nos grupos tratados com inibidor de PLA2 e inibidor de PLA2 + CI + E2 quando comparados com o grupo controle e o grupo CI + E2. O AACOCF3 foi um eficiente inibidor de PLA2 em sistema de cultura de células BEND e o E2 não estimulou a síntese de PKC e PLA2. No Experimento 2, novilhas Nelore cíclicas receberam 3 mg de 17ß-E2 (n = 6) ou nenhum tratamento (n = 5) no D17 e foram abatidas duas horas depois da administração dos tratamentos. A quantidade de PKC and PLA2 no tecido endometrial foi avaliada pela técnica de Western Blotting. Não foi observado efeito do E2 sobre a PKC (P= 0.08) e nem sobre a PLA2 (P= 0.56). Conclui-se que o E2 não estimulou a atividade e abundância de PKC e PLA2.(AU)

The neuroprotection of cerebrolysin after spontaneous intracerebral hemorrhage through regulates necroptosis via Akt/ GSK3B signaling pathway

ABSTRACT Purpose: Spontaneous intracerebral hemorrhage (ICH) is a major cause of death and disability with a huge economic burden worldwide. Cerebrolysin (CBL) has been previously used as a nootropic drug. Necroptosis is a programmed cell death mechanism that plays a vital role in neuronal cell death after ICH. However, the precise role of necroptosis in CBL neuroprotection following ICH has not been confirmed. Methods: In the present study, we aimed to investigate the neuroprotective effects and potential molecular mechanisms of CBL in ICH-induced early brain injury (EBI) by regulating neural necroptosis in the C57BL/6 mice model. Mortality, neurological score, brain water content, and neuronal death were evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) staining, Evans blue extravasation, Western blotting, and quantitative real-time polymerase chain reaction (PCR). Results: The results show that CBL treatment markedly increased the survival rate, neurological score, and neuron survival, and downregulated the protein expression of RIP1 and RIP3, which indicated that CBL-mediated inhibition of necroptosis, and ameliorated neuronal death after ICH. The neuroprotective capacity of CBL is partly dependent on the Akt/GSK3β signaling pathway. Conclusions: CBL improves neurological outcomes in mice and reduces neuronal death by protecting against neural necroptosis.

Pharmacokinetics of neutron-irradiated meglumine antimoniate in Leishmania amazonensis-infected BALB/c mice

Background:Cutaneous leishmaniasis (CL) is a parasitic disease caused by the protozoan Leishmania spp. Pentavalent antimonial agents have been used as an effective therapy, despite their side effects and resistant cases. Their pharmacokinetics remain largely unexplored. This study aimed to investigate the pharmacokinetic profile of meglumine antimoniate in a murine model of cutaneous leishmaniasis using a radiotracer approach.Methods:Meglumine antimoniate was neutron-irradiated inside a nuclear reactor and was administered once intraperitoneally to uninfected and L. amazonensis-infected BALB/c mice. Different organs and tissues were collected and the total antimony was measured.Results:Higher antimony levels were found in infected than uninfected footpad (0.29% IA vs. 0.14% IA, p = 0.0057) and maintained the concentration. The animals accumulated and retained antimony in the liver, which cleared slowly. The kidney and intestinal uptake data support the hypothesis that antimony has two elimination pathways, first through renal excretion, followed by biliary excretion. Both processes demonstrated a biphasic elimination profile classified as fast and slow. In the blood, antimony followed a biexponential open model. Infected mice showed a lower maximum concentration (6.2% IA/mL vs. 11.8% IA/mL, p = 0.0001), a 2.5-fold smaller area under the curve, a 2.7-fold reduction in the mean residence time, and a 2.5-fold higher clearance rate when compared to the uninfected mice.Conclusions:neutron-irradiated meglumine antimoniate concentrates in infected footpad, while the infection affects antimony pharmacokinetics.(AU)

Impact of dexmedetomidine on amino acid contents and the cerebral ultrastructure of rats with cerebral ischemia-reperfusion injury

Purpose: To investigate the effects of dexmedetomidine (DEX) on amino acid contents and the cerebral ultrastructure of rats with cerebral ischemia-reperfusion injury (I/R). Methods: Thirty-six, male, Wistar rats were randomly divided into three groups: the sham operation group (group C), the ischemia-reperfusion group (group I/R), and the DEX group (group D). The middle cerebral artery occlusion model was prepared by the modified Longa method. The time of ischemia was 180 min, and 120 min after reperfusion, the amount of glutamate (Glu), and -aminobutyric acid (GABA) in the brain were measured, and the ultrastructure-level changes in the cerebral cortex were examined using electron microscopy. Results: Compared to group C, Glu contents in group D, and I/R significantly increased. Compared to group I/R, Glu contents in group D significantly decreased. Compared to group C, GABA contents in group D, and I/R significantly increased, and those in group D significantly increased, as compared to group I/R. The cerebral ultrastructure was normal in group C. Vacuolar degeneration in the plastiosome and nervous processes, was more critical than in group D. Vascular endothelial cells (VEC) were damaged. On the contrary, these changes in group D significantly improved. Conclusion: Dexmedetomidine is capable of decreasing glutamergic content, and increasing GABAergic content, in order to decrease the injury of the cerebral ultrastructure, following cerebral ischemia-reperfusion injury.(AU)

Anesthesia and sedation of map treefrog (Hypsiboas geographicus) tadpoles with essential oils / Anestesia e sedação de girinos da perereca geográfica Hypsiboas geographicus com óleos essenciais

The goal of this study was to investigate the sedative and anesthetic properties of essential oils (EOs) in map treefrog tadpoles (Hypsiboas geographicus) and to determine the sedation and deep anesthesia induction times as well as the recovery time. The tadpoles were exposed to one of the EOs from three plant species: Aniba rosaeodora (EOAR - 25, 50, 100 or 200μL L-1), Lippia origanoides (EOLO - 13, 25, 50, 100 or 200μL L-1), and Lippia alba (either chemotype citral [EOL-C - 25, 50, 100 or 200μL L-1] or linalool [EOL-L - 50, 75, 100 or 200μL L-1]) (n = 8 per replicate). The tadpoles exposed to 25 and 50μL L-1 EOL-C and EOL-L, respectively, were not anesthetized within 30min (the maximum time of observation), and those exposed to 200μL L-1 EOLO did not recover within 30min. Sedation, deep anesthesia and recovery times showed a concentration-dependent relationship for all EOs tested, with the exception of the recovery with EOLO. The results allowed concluding that all investigated EOs can be used to anesthetize tadpoles of H. geographicus, but the use of EOLO must not exceed 100μL L-1.(AU)

O objetivo deste estudo foi investigar as propriedades sedativas e anestésicas de óleos essenciais (OEs) em girinos da perereca Hypsiboas geographicus e determinar os tempos de indução à sedação e anestesia profunda, bem como o de recuperação. Os girinos foram expostos a um dos OEs de três espécies de plantas: Aniba rosaeodora (OEAR - 25, 50, 100 ou 200μL L-1), Lippia origanoides (OELO - 13, 25, 50, 100 ou 200μL L-1 ) ou Lippia alba quimiotipos citral (OEL-C - 25, 50, 100 ou 200μL L-1) ou linalol (OEL-L - 50, 75, 100 ou 200μL L-1) (n = 8 cada repetição). Girinos expostos a 25 e 50μL L-1 OEL-C e OEL-L, respectivamente, não foram anestesiados dentro de 30min (tempo máximo de observação) e aqueles expostos a 200μL L-1 OELO não recuperaram dentro de 30min. Os tempos de sedação, anestesia profunda e recuperação apesentaram uma relação concentração-resposta para todos os OEs testadas, exceto a recuperação com OELO. Os resultados permitem concluir que todos os OEs investigados podem ser usados para anestesiar os girinos de H. geographicus, mas o uso de OELO não deve ser superior a 100μL L-1.(AU)

Brachiaria brizantha CV. MARANDU SOB DIFERENTES ADUBAÇÕES E INTENSIDADES DE CORTE

Objetivou-se com esse trabalho avaliar o efeito de diferentes intensidades de corte associadas à diferentes adubações nas características da Brachiaria brizantha cv. Marandu. O estudo foi realizado em casa de vegetação, durante o período de abril a maio de 2019. O experimento foi conduzido em um delineamento experimental inteiramente casualizado em esquema fatorial 5 x 2, sendo cinco adubações (sem adubo, P K, N P, N K e N P K) e duas intensidade de corte (10 cm e 20 cm de altura) com quatro repetições, totalizando 40 unidades experimentais. Foram avaliadas as características de produção, crescimento, fisiológicas, bromatológicas, além da eficiência do uso água do capim Marandu. A produção de massa seca de parte aérea (PMSPA) foi influenciada pela intensidade de corte e adubação onde a intensidade de 10 cm com adubação NP e NPK foram mais eficientes na produção PMSPA. Maior PMSRE foi com intensidade de 20 cm e na adubação NP e NPK. Para PMSRA não houve diferença da intensidade de corte e a maior produção foi para a adubação com NP. A taxa de aparecimento foliar (TApF) apresentou diferença para intensidade de corte, onde o corte a 10 cm proporcionou maior média, e para adubação houve diferença estatística onde tratamento NP apresentou maior média. Para taxa de alongamento foliar (TAIF), alongamento de colmo (TAIC) e largura final da folha (LFF) não houve diferença entre as intensidades, para adubação teve diferença onde para tais variáveis o tratamento NP e NPK apresentaram maiores médias. Houve diferença estatística para o comprimento total da planta (CTP) para intensidade de corte, onde o corte a 20 cm apresentou maior média, enquanto para adubação não houve diferença. Os tratamentos que receberam adubação NP e NPK apresentaram maior crescimento de área foliar (AF) e índice de área foliar (IAF). Para intensidade de corte houve diferença significativa para a área foliar, índice de área foliar e área foliar específica, onde a intensidade de corte a 10 cm apresentou maior média para essas variáveis. A interação entre intensidade e adubação não influenciaram os teores de açúcares solúveis totais (AST) na folha, no resíduo e na raiz do capim Marandu. Na intensidade de 10 cm, os tratamentos PK e NK armazenaram menor teor de amido no resíduo, comparados à intensidade de 20 cm. Para a análise de amido na raiz foi observado que o tratamento que receberam as adubações PK e NPK apresentaram menores quantidades de amido na raiz na intensidade de 10 cm, e a adubação NK apresentou menor amido na raiz na intensidade de 20 cm. A interação entre a altura e a adubação não foi significativa para as variáveis de composição bromatológica. Foi observado que para intensidade de corte houve diferença para todas variáveis analisadas, e para a adubação houve efeito para os teores de proteína bruta, carboidratos não fibrosos, cinza e nutrientes digestíveis totais. Foi observado que para a intensidade de corte houve diferença estatística para o teor de nitrogênio total e para as frações A, B3 e C e para a adubação diferença para os teores de nitrogênio total. Foi observado que para a intensidade de corte houve diferença estatística para as frações A+B1 e B2 e para as adubações houve diferença para o teor de carboidratos totais e para as frações dos carboidratos. Houve diferença estatística entre os tratamentos, onde os que receberam a com adubação NP e NPK para L/gMS utilizaram 180 e 190 mL, respectivamente, para produzir uma grama de massa seca. Para produção de gMS/L resultados semelhantes foram observados, os tratamentos NP e NPK produziram 5,6 g de MS a cada L de água utilizada. Os tratamentos contendo nitrogênio associados ao fosforo na intensidade de corte a 20 cm, proporcionam melhores índices de valor nutricional, produção vegetal e características fisiológicas, sendo assim recomendados

The objective of this work was to evaluate the effect of different cutting intensities associated with different fertilizations on the characteristics of Brachiaria brizantha cv. Marandu. The study was carried out in a greenhouse, from April to May 2019. The experiment was conducted in a completely randomized design in a 5 x 2 factorial scheme, with five fertilizations (without fertilizer, PK, NP, NK and NPK) and two cutting intensities (10 cm and 20 cm high) with four repetitions, totaling 40 experimental units. The characteristics of production, growth, physiological, bromatological, as well as the efficiency of water use of Marandu grass were evaluated. The aerial part dry matter production (PMSPA) was influenced by the cutting and fertilizing intensity, where the 10 cm intensity with NP and NPK fertilization were more efficient in PMSPA production. The highest PMSRE was with an intensity of 20 cm and in NP and NPK fertilization. For PMSRA there was no difference in cutting intensity and the highest production was for fertilization with NP. The leaf appearance rate (TApF) showed a difference for cutting intensity, where the cut at 10 cm provided a higher average, and for fertilization there was a statistical difference where NP treatment showed a higher average. For leaf elongation rate (TAIF), stem elongation (TAIC) and final leaf width (LFF) there was no difference between the intensities, for fertilization there was a difference where for such variables the treatment NP and NPK presented higher averages. There was a statistical difference for the total length of the plant (CTP) for cutting intensity, where the cut at 20 cm showed the highest average, while for fertilization there was no difference. The treatments that received NP and NPK fertilization showed greater growth of leaf area (AF) and leaf area index (IAF). For cutting intensity, there was a significant difference for the leaf area, leaf area index and specific leaf area, where the cut intensity at 10 cm showed the highest average for these variables. The interaction between intensity and fertilization did not influence the levels of total soluble sugars (AST) in the leaf, residue and root of Marandu grass. At the intensity of 10 cm, the PK and NK treatments stored less starch content in the residue compared to the intensity of 20 cm. For the analysis of starch in the root, it was observed that the treatment that received the PK and NPK fertilizations showed lower amounts of starch in the root at an intensity of 10 cm, and the NK fertilization showed less starch in the root at an intensity of 20 cm. The interaction between height and fertilization was not significant for variables of chemical composition. It was observed that for cutting intensity there was a difference for all variables analyzed, and for fertilization there was an effect for the contents of crude protein, non-fibrous carbohydrates, ash and total digestible nutrients. It was observed that for the cutting intensity there was a statistical difference for the total nitrogen content and for the fractions A, B3 and C and for the fertilization difference for the total nitrogen content. It was observed that for the cutting intensity there was a statistical difference for fractions A + B1 and B2 and for fertilizers there was a difference for the total carbohydrate content and for the carbohydrate fractions. There was a statistical difference between the treatments, where those who received NP and NPK fertilization for L / gMS used 180 and 190 mL, respectively, to produce one gram of dry mass. For the production of gMS / L similar results were observed, the treatments NP and NPK produced 5.6 g of DM for each L of water used. Treatments containing nitrogen associated with phosphorus at a cutting intensity of 20 cm provide better indices of nutritional value, plant production and physiological characteristics, and are therefore recommended.

EXPOSIÇÃO DO PESTICIDA AMITRAZ DIMINUI A DIVERSIDADE DA FAUNA EDÁFICA E ALTERA O DESEMPENHO DE PEIXES, QUANDO NÃO HÁ SUPLEMENTAÇÃO DE Melaleuca alternifolia NA DIETA

Práticas sanitárias na produção animal, como o uso de substâncias químicas no controle parasitário, leva a longo prazo a resistência dos ectoparasitas alvos. Além disso, provoca efeitos toxicológicos em organismos não alvo e, a posteriori prejudica os ecossistemas devido a redução das atividades funcionais desses indivíduos. Diante do exposto, objetivou-se avaliar os efeitos do antiparasitário amitraz em bioindicadores nos diferentes compartimentos ambientais em duas etapas: 1) O efeito ecotoxicológico do princípio ativo amitraz através dos grupos taxonômicos do solo 2) avaliar o efeito de dietas suplementadas com óleo essencial de Melaleuca alternifolia (tea tree oil - TTO) como promotor de crescimento e seus possíveis efeitos hepatoprotetores em peixes Rhamdia quelen expostos ao amitraz. Os ensaios foram realizados em delineamento inteiramente casualizados e divididos em duas etapas: 1) O efeito do amitraz em grupos taxonômicos do solo, provenientes de uma área agrícola (Integração Lavoura-Pecuária ILP) e de uma área de Floresta Nativa FN sobre dois solos naturais o Latossolo Vermelho distroférrico (LVd) e Neossolo Quartzarênico Órtico típico (NQo) e em Solo Artificial Tropical (SAT), utilizado como referência. Avaliou-se alterações de grupos tróficos dos organismos da fauna edáfica através de ANOVA One-way e comparação de médias pelo teste de Dunnett e, PERMANOVA e SIMPER foram utilizadas para identificar quais famílias ou grupos sofreram alterações após a exposição contínua ao amitraz. 2) Seis grupos de R. quelen foram testados: controle A (dieta basal), B (dieta basal + TTO 1,0 mL/kg), C (dieta basal + 0,84 mL/kg de amitraz), D (dieta basal + 1,19 mL/kg de amitraz), E (dieta basal + 1,0 mL/kg TTO + 0,84 mL/kg amitraz) e F (dieta basal + TTO 1,0 mL/kg + 1,19 mL/kg de amitraz). Níveis de espécies reativas de oxigênio (ERO) e lipoperoxidação (LOOH) no tecido hepático, e atividades de enzimas envolvidas no metabolismo energético, adenilato quinase (AK) e piruvato quinase (PK) foram medidos, além de índices zootécnicos como, comprimento, peso corporal e o ganho de peso dos peixes. 1) Os resultados do trabalho mostraram que concentrações crescentes de amitraz reduzem a diversidade da comunidade edáfica de FN e ILP nos solos avaliados. 2) os níveis de ERO e LOOH aumentaram significativamente em peixes expostos a concentrações de amitraz, especialmente em grupos não suplementados com TTO. Por outro lado, as atividades das enzimas AK e PK foram significativamente menores para os grupos expostos ao amitraz comparado ao grupo não exposto. E por fim, peixes suplementados com TTO obtiveram melhor desempenho zootécnico. Adição de TTO minimiza distúrbios bioquímicos em peixes expostos ao amitraz e serviu como aditivo natural para melhorar a produção de peixes. Conclui-se, que exposição contínua ao amitraz apresenta toxicidade em bioindicadores de diferentes compartimentos ambientais (solo e água), os quais são importantes para manutenção de serviços ecossistêmicos, entretanto para peixes adtivos naturais na dieta podem minimizar os danos provocados por substâncias químicas.

Sanitary practices in animal production, such as the use of chemical substances in parasite control, lead in the long term to the resistance of target ectoparasites. In addition, it causes toxicological effects on non-target organisms and, later, harms ecosystems due to the reduction of functional activities of these individuals. In view of the above, the objective was to evaluate the effects of the antiparasitic amitraz on bioindicators in different environmental compartments in two stages: 1) the toxicological effect of the active ingredient amitraz using native soil communities. 2) To evaluate the effect of diets supplemented with essential oil of Melaleuca alternifolia (tea tree oil - TTO) as a growth promoter and its possible hepatoprotective effects in Rhamdia quelen exposed to amitraz. The tests were carried out in a completely randomized design and divided into two stages 1) The effect of amitraz in native soil communities, originating from an agricultural area (crop-livestock integration system -CLIS) and an area of native forest - NF, were applied in two natural soils Oxisol and Entisol and in Tropical Artificial Soil (TAS), used as a reference. Changes in the abundance of families and trophic groups of the edaphic organisms were evaluated using ANOVA One-way and comparison of means by the Dunnett test and, PERMANOVA and SIMPER were used to identify which families or groups suffered changes after continuous exposure of amitraz. 2) Six groups were tested: control A (basal diet), B (basal diet + TTO 1.0 mL/kg), C (basal diet + 0.84 mL/kg amitraz), D (basal diet + 1, 19 mL/kg of amitraz), E (basal diet + 1.0 mL/kg TTO + 0.84 mL/kg amitraz) and F (basal diet + TTO 1.0 mL/kg + 1.19 mL/kg of amitraz). Levels of reactive oxygen species (ERO) and lipoperoxidation (LOOH) in liver tissue, and activities of enzymes involved in energy metabolism, adenylate kinase (AK) and pyruvate kinase (PK) were measured, in addition to zootechnical índices such as length, weight body weight and fish weight gain. 1) The results of the work showed that increasing concentrations of amitraz altered the structure of the edaphic community of FN and CLIS in the evaluated soils. 2) ERO and LOOH levels increased significantly in fish exposed to amitraz concentrations, especially in groups not supplemented with TTO. On the other hand, AK and PK enzyme activities were significantly lower for the groups exposed to amitraz compared to the non-exposed group. Finally, fish supplemented with TTO obtained better zootechnical performance. Addition of TTO minimizes biochemical disturbances in fish exposed to amitraz and served as a natural additive to improve fish production. We conclude that continuous exposure of amitraz presents toxicity in bioindicators from different environmental compartments (soil and water), which are important for maintaining ecosystem services, however, natural, and sustainable alternatives can minimize the damage caused by chemical substances.

Anestesia e transporte de Colossoma macropomum com os óleos essenciais de Aloysia triphylla, Lippia sidoides e Mentha piperita

O tambaqui (Colossoma macropomum) e a especie nativa mais produzida no Brasil. No entanto, em funcao da grande demanda, o aumento nas densidades de estocagem nos ambientes de criacao, alem das inumeras praticas de manejo que conduzidas de forma inadequadas tem acarretado efeitos deleterios para o plantel. Com o intuito de minimizar esses efeitos, inumeros produtos comerciais vem sendo utilizados na aquicultura para reduzir os efeitos do estresse. Na ultima decada muitos estudos descrevem a necessidade de avaliar produtos alternativos provenientes de especies vegetais, que possuem propriedades anestesicas, em especial os que visam a reducao do estresse associado ao transporte dos peixes. Com isso, o objetivo do trabalho foi em uma primeira etapa, a realizacao de uma revisao de literatura visando descrever o potencial anestesico e redutor de estresse dos oleos essenciais em peixes nativos, com especial enfase para C. macropomum. Na sequencia, a partir de delineamentos experimentais implantados no campo experimental da Embrapa na Amazonia ocidental, oleos essenciais de tres fontes vegetais - Aloysia triphylla (OEAT), Lippia sidoides (OELS) e Mentha piperita (OEMP) - foram avaliados visando a determinacao dos tempos e das concentracoes necessarias para inducao e recuperacao anestesica em tambaqui e a avaliacao das respostas morfofisiologicas do estresse em funcao do transporte sob a influencia dos oleos essenciais. Para o alcance desses objetivos, as plantas foram cultivadas no setor de plantas medicinais da Embrapa Amazonia Ocidental, sendo os oleos essenciais extraidos e caracterizados quimicamente por espectrofotometria de massas e cromatografia em fase gasosa. Os peixes juvenis de C. macropomum - foram adquiridos em estacao de piscicultura comercial do municipio de Rio Preto da Eva - AM e transportados para o campo experimental da Embrapa em Manaus, onde passaram pela fase de recria ate alcancarem o tamanho desejado para realizacao dos experimentos. No primeiro ensaio, para determinacao do tempo e da concentracao necessaria dos oleos essenciais para inducao e recuperacao anestesica, os peixes foram individualmente expostos a diferentes concentracoes dos oleos essenciais (OEAT: 5, 10, 20, 40, 60, 80 e 150 mg L-1; OELS: 2, 5, 10, 20, 30, 40 e 50 mg L-1; OEMP: 5, 10, 20, 40, 60, 70 e 90 mg L-1), num periodo entre quatro minutos a seis horas de exposicao. Os tres oleos essenciais apresentaram propriedades anestesicas. Os intervalos de concentracao em que os peixes alcancaram todos os estagios de anestesia (1, 2, 3a, 3b, 4) foram entre 40 a 150 mg L-1 para OEAT, 20 a 50 mg L-1 para OELS e 40 a 90 mg L-1 para OEMP. A exposicao de C. macropomum as concentracoes anestesicas dos oleos nao foi associada ao aumento a ocorrencia de danos irreversiveis nas lamelas branquiais. No segundo ensaio, os oleos essenciais de L. sidoides e M. piperita foram avaliados como redutores de estresse no transporte de C. macropomum. Os peixes (127,55 ± 22,41 g) foram transportados durante quatro horas em sacos plasticos, compondo os seguintes tratamentos: a) controle nao estressado (NE - nao submetido ao transporte), b) controle estressado (E - submetido ao transporte), c) OELS 10 mg L-1, d) OELS 20 mg L-1, e) OEMP 20 mg L-1 e f) OEMP 40 mg L-1, com tres repeticoes. Apos o transporte foram analisados parametros de qualidade de agua, hormonais, bioquimicos e enzimaticos. C. macropomum transportado com OELS 20 mg L-1 apresentou uma reducao significativa nos niveis de cortisol se comparado aos peixes transportados sem oleo essencial. A via glicolitica foi especialmente estimulada nos peixes transportados com OEMP 20 mg L-1, pois os valores das enzimas glicoliticas hexoquinase (HK), piruvato cinase (PK) e lactato desidrogenase (LDH) estavam elevados no tecido muscular. Os oleos essenciais nao afetaram a atividade da acetilcolinesterase (AChE) no cerebro de C. macropomum, e apos o transporte os peixes de todos os tratamentos apresentaram uma reducao significativa (28,2%) da AChE muscular. As concentracoes OELS 20 mg L-1 e OEMP 20 mg L-1 promoveram aumento dos niveis da enzima glutationa S-transferase (GST) no cerebro. Conclui-se que os oleos essenciais nas concentracoes avaliadas tendem a melhorar a qualidade da agua durante o transporte, minimizam o estresse fisiologico, ajudam a manter a demanda energetica por meio da via glicogenio e, alem disso, nao demonstram ter efeitos neurotoxicos, recomendado a concentracao de 20 mg L-1 OELS para uso no transporte de C. macropomum. Diante dos resultados apresentados, as perspectivas se abrem para a avaliacao de compostos isolados dos oleos essenciais, assim como nanomoleculas com o intuito de aumentar a eficacia dos oleos essenciais e potencializar as suas atividades biologicas, a exemplo das atividades anestesicas e redutoras de estresse. Com a disponibilizacao destas informacoes pretende-se contribuir para desenvolvimento do setor produtivo, levando maior biosseguridade e biosseguranca no segmento da aquicultura.

Tambaqui (Colossoma macropomum) is the most produced native species in Brazil. However, due to the great demand, the increase in stocking densities in breeding environments, in addition to the innumerable management practices that have been carried out inappropriately, have caused deleterious effects for the breeding stock. In order to minimize these effects, numerous commercial products have been used in aquaculture to reduce the effects of stress. In the last decade, many studies have described the need to evaluate alternative products from plant species, which have anesthetic properties, especially those aimed at reducing the stress associated with fish transport. Thus, the objective of the work was, in a first step, to carry out a literature review in order to describe the anesthetic and stress-reducing potential of essential oils in native fish, with special emphasis on C. macropomum. Following, from experimental designs implanted in Embrapa Amazonia Ocidental experimental field, essential oils from three vegetable sources - Aloysia triphylla (EOAT), Lippia sidoides (EOLS) and Mentha piperita (EOMP) - were evaluated in order to determine the time and concentrations necessary for anesthetic induction and recovery in tambaqui and the evaluation of morphophysiological responses to stress due to transport under the influence of essential oils. To achieve these goals, the plants were grown in the medicinal plant sector of Embrapa Amazonia Ocidental, with essential oils extracted and chemically characterized by mass spectrophotometry and gas chromatography. The fish - juveniles of C. macropomum - were purchased at a commercial fish farming station in the municipality of Rio Preto da Eva - AM and transported to the Embrapa experimental field in Manaus, where they passed through the breeding phase until they reached the desired size for the fish experiments. In the first test, to determine the time and the necessary concentration of essential oils for anesthetic induction and recovery, the fish were individually exposed to different concentrations of essential oils (EOAT: 5, 10, 20, 40, 60, 80 and 150 mg L-1; EOLS: 2, 5, 10, 20, 30, 40 and 50 mg L-1; EOMP: 5, 10, 20, 40, 60, 70 and 90 mg L-1), in a period between four minutes at six hours of exposure. The three essential oils showed anesthetic properties. The concentration intervals at which the fish reached all stages of anesthesia were (1, 2, 3a, 3b, 4) were between40to150mgL-1 forEOAT,20to50mgL-1 forEOLSand40to90mgL-1 for EOMP. The exposure of C. macropomum to anesthetic concentrations of oils was not associated with an increase in the occurrence of irreversible damage to the gill lamellae. In the second trial, the essential oils of L. sidoides and M. piperita were evaluated as stress reducers in the transport of C. macropomum. The fish (127.55 ± 22.41 g) were transported for four hours in plastic bags, comprising the following treatments: a) non- stressed control (NS - not subjected to transport), b) stressed control (S - subjected to transport), c) EOLS 10 mg L-1, d) EOLS 20 mg L-1, e) EOMP 20 mg L-1 and f) EOMP 40 mg L-1, with three repetitions. After transport, water quality, hormonal, biochemical and enzymatic parameters were analyzed. C. macropomum transported with EOLS 20 mg L-1 showed a significant reduction in cortisol levels when compared to fish transported without essential oil. The glycolytic pathway was especially stimulated in fish transported with EOMP 20 mg L-1, since the values of glycolytic enzymes hexokinase (HK), pyruvate kinase (PK) and lactate dehydrogenase (LDH) were elevated in muscle tissue. The essential oils did not affect the activity of acetylcholinesterase (AChE) in the brain of C. macropomum, and after transport, fish from all treatments showed a significant reduction (28.2%) in muscle AChE. The EOLS 20 mg L-1 and EOMP 20 mg L-1 concentrations increased the levels of the glutathione S-transferase (GST) enzyme in the brain. It is concluded that essential oils in the concentrations evaluated tend to improve water quality during transport, minimize physiological stress, help maintain energy demand through the glycogen pathway and, in addition, do not demonstrate neurotoxic effects, recommended to concentration of 20 mg L-1 EOLS for use in the transport of C. macropomum. Given the results presented, the perspectives open up for the evaluation of compounds isolated from essential oils, as well as nanomolecules in order to increase the effectiveness of essential oils and enhance their biological activities, such as anesthetic and stress-reducing activities. With the provision of this information, it is intended to contribute to the development of the productive sector, leading to greater biosecurity and biosafety in the aquaculture segment.

EFEITO DO EXTRATO ETANÓLICO DA CASCA DE PEQUI (CARYOCAR BRASILIENSE) NA ISQUEMIA AGUDA EXPERIMENTAL DO MIOCÁRDIO EM CAMUNDONGOS

A redução aguda ou crônica do suplemento de oxigenação no coração resulta na doença cardíaca isquêmica. O pequi é um fruto do cerrado cujo extrato etanólico da casca apresenta fenóis que demonstraram elevada capacidade de neutralizar radicais livres in vitro. Objetivou- se que o extrato etanólico da casca de pequi (Caryocar brasiliense Camb.) pode reduzir lesões de isquemia experimental em camundongos submetidos à isquemia por ligação do ramo descendente da artéria coronária esquerda. Dois grupos de camundongos Swiss receberam, por gavagem, doses diárias de 300 mg/kg PV do extrato etanólico da casca de pequi, por 30 dias.Foram submetidos à isquemia por ligação do ramo descendente da artéria coronária esquerda e foram eutanasiados 48 horas ou 60 dias após o procedimento cirúrgico.Outros dois grupos receberam 1200 mg/kg PV do extrato 48 horas antes do procedimento cirúrgico e foram eutanasiados após 48 horas ou 60 dias. Os respectivos controles foram submetidos aos mesmos protocolos, mas receberam solução fisiológica a 0,9% em substituição ao extrato. As quinases ERK 1 e 2 estavam mais ativas em relação ao controle (C 30d) tanto nos grupos do extrato de pequi por 30 dias (P300/48 e P300/60) quanto por 48 horas (P1200/48 e P1200/60). A redução do m-TOR nos grupos do extrato etanólico da casca do pequi demonstraram redução da autofagia. O aumento da expressão de Akt, Bcl2 e PKC nos grupos que receberam extrato indicaram redução da apoptose. O extrato etanólico da casca de pequi possui elevado potencial de utilização como antioxidante em lesões de isquemia no miocárdio.

The acute or chronic reduction of oxygenation supplement in the heart results in ischemic heart disease. Pequi is a typical fruit from Cerrado (mid-west) which ethanolic extract from the bark has phenols that demonstrated high capacity to neutralize free radicals in vitro. The objective of ethanolic extract from the bark (Caryocar Brasiliense Camb.) can reduce experimental ischemia injuries in mices submitted to ischemia by ligation of the descending branch of the left coronary artery was evaluated. Two groups of Swiss mice were gavaged daily doses of 300 mg / kg LW of pequi peel ethanolic extract for 30 days. surgical procedure; The other two groups received 1200 mg/kg LW of the extract 48 hours before the surgical procedure and were euthanized after 48 hours or 60 days. The respective controls were submitted to the same protocols but received 0.9% physiological solution instead of the extract. ERK kinases 1 and 2 were more active compared to control (C 30d) both in the pequi extract groups for 30 days (P300 / 48 and P300 / 60) and for 48 hours (P1200 / 48 and P1200 / 60). The reduction of m- TOR in the groups of pequi ethanol extract showed reduction of autophagy. Increased Akt, Bcl2 and PKC expression in the groups receiving extract indicated a reduction in apoptosis. The ethanolic extract of pequi bark has high potential for use as an antioxidant in myocardial ischemia lesions.

Atividade antimicrobiana do óleo essencial de Cymbopogon citratus / Antimicrobial activity of Cymbopogon citratus essential oil / Actividad antimicrobiana del aceite esencial de Cymbopogon citratus

O Cymbopogon citratus é uma planta originária da Índia, pertencente à família Poaceae e facilmente adaptada em regiões tropicais como o Brasil. Este trabalho avaliou a atividade antimicrobiana do óleo essencial (OE) obtido por hidrodestilação das folhas de C. citratus. A concentração inibitória mínima (CIM) foi determinada pela técnica de microdiluição em caldo para as bactérias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e a levedura Candida albicans. O menor CIM foi de 7,81 µg mL-1 para S. aureus, a média de 15,62µg mL-1 para P. aeruginosa e C. albicans e a maior de 62,50µg mL-1 para E. coli. O óleo essencial de C. citratus apresentou atividade antimicrobiana para todos os micro-organismos testados. O óleo mostrou potencial aplicabilidade no controle microbiano e sugerem-se novos estudos para auxiliar na ampliação das aplicações desta planta.(AU)

Cymbopogon citratus is an Indian plant belonging to the Poaceae family, easily adapted to tropical regions such as Brazil. This study assesses the antimicrobial activity of essential oil from C. citratus leaves obtained by hydro-distillation. The minimum inhibitory concentration (MIC) was determined by broth micro-dilution technique for Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa and Candida albicans. The lowest MIC was 7.81 µg ml-1 for S. aureus, the medium was 15,62 µg mL-1 for P. aeruginosa and C. albicans and the highest was 62.50 µg mL-1 for E. coli. The C. citratus essential oil presented antimicrobial activity against all microorganisms. The essential oil showed potential applicability in microbial control and further studies are suggested to expand the application of this plant.(AU)

Cymbopogon citratus es una planta originaria de India, perteneciente a la familia Poaceae y fácilmente adaptable en las regiones tropicales como Brasil. Este estudio evaluó la actividad antimicrobiana del aceite esencial de las hojas de C. citratus obtenido por hidrodestilación. La concentración inhibidora mínima (CIM) se ha determinado por la técnica de microdilución en caldo para las bacterias Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa y la levadura Candida albicans. La CIM más baja fue 7.81 µg mL-1 para S. aureus, la media de 15.62µg mL-1 para P. aeruginosa y C. albicans y la mayor de 62.50 µg mL-1 para E.coli. El aceite esencial de C. citratus presentó actividad antimicrobiana para todos los microorganismos testados. El aceite mostró potencial de aplicabilidad en el control microbiano y se sugieren nuevos estudios para ampliar las aplicaciones de esta planta.(AU)

INFLUÊNCIA DA CICLOFOSFAMIDA NA FARMACOCINÉTICA DA CARBOPLATINA EM CADELAS COM CARCINOMAS MAMÁRIOS E GRADUAÇÃO DOS EFEITOS ADVERSOS DECORRENTES DA QUIMIOTERAPIA

MACHADO, M. C. A. Influência da ciclofosfamida na farmacocinética da carboplatina em cadelas com carcinomas mamários e graduação dos efeitos adversos decorrentes da quimioterapia. 2019. 105p. Tese (Doutor em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade Federal da Bahia, 2019. Em virtude da importante casuística dos carcinomas mamários na cadela, se torna imprescindível estudar e propor tratamentos combinados, que favoreçam a maior eficiência terapêutica para este tipo de neoplasia, com menores efeitos adversos. Neste contexto, objetivou-se com a realização do presente estudo avaliar a influência da ciclofosfamida na farmacocinética (PK) da carboplatina em cadelas portadoras de carcinomas mamários, além de verificar possíveis efeitos adversos associados ao tratamento. Foram estudadas 16 cadelas, todas com diagnóstico histopatológico de carcinoma mamário, divididas em dois grupos experimentais, sendo o Grupo 1 constituído por cadelas tratadas apenas com carboplatina na modalidade de quimioterapia convencional (n=8) e Grupo 2 constituído por cadelas tratadas com carboplatina como quimioterapia convencional associado a ciclofosfamida em regime metronômico (n=8). Todas as cadelas foram submetidas à avaliação clínica, mastectomia, quimioterapia com carboplatina e análise da farmacocinética, além da avaliação da taxa de sobrevida e da graduação de efeitos adversos, periodicamente. Os resultados revelaram que houve diferença significativa nos parâmetros farmacocinéticos da carboplatina + ciclofosfamida (constante de eliminação (p=0,0132), meia vida (p=0,014), volume de distribuição (p=0,025), clearance (p=0,036) e área sob a curva (p=0,045)) na quarta sessão de carboplatina, com notável redução dos valores hematológicos (variáveis hemácias (p<0,0001), plaquetas (p=0,0005), leucócitos totais (p=0,0002) e neutrófilos segmentados (p=0,0007)), nas cadelas submetidas a este protocolo quimioterápico. No entanto, estes não foram suficientes para alterarem a graduação dos efeitos adversos provocados por este tipo de tratamento. Estes resultados avaliados conjuntamente indicam que a associação entre carboplatina e ciclofosfamida representa uma alternativa factível de tratamento adjuvante de cadelas com carcinomas mamários de alto grau e/ou com metástase para linfonodo regional, pois contribui para o aumento na taxa de sobrevida (p=0,0044) destas cadelas, em comparação com a carboplatina como tratamento quimioterápico único.

MACHADO, M. C. A. Influence of cyclophosphamide and pharmacokinetics of carboplatin on female dogs with mammary carcinomas and degree of adverse effects of chemotherapy. 2019. 105p. Tese (Doutor em Ciência Animal nos Trópicos) Escola de Medicina Veterinária e Zootecnia Universidade Federal da Bahia, 2019. Due to the important casuistic of the mammary carcinomas in the female dog, it is essential to study and propose combined treatments, which favor the greater therapeutic efficiency for this type of neoplasm, with lower adverse effects. In this context, the objective of this study was to evaluate the influence of cyclophosphamide on the pharmacokinetics (PK) of carboplatin in female dogs with mammary carcinomas, and to verify possible adverse effects associated with the treatment. We studied 16 female dogs, all with histopathological diagnosis of mammary carcinoma, divided into two experimental groups: Group 1 consisted of female dogs treated with carboplatin alone in the conventional chemotherapy modality (n=8) and Group 2 consisting of female dogs treated with carboplatin as conventional chemotherapy associated with cyclophosphamide in metronomic regimen (n=8). All female dogs underwent clinical evaluation, mastectomy, chemotherapy with carboplatin, and pharmacokinetic analysis, as well as the evaluation of survival rate and adverse effect score periodically. The results showed that there was a significant difference in the pharmacokinetic parameters of carboplatin + cyclophosphamide (elimination constant (p=0.0132), half-life (p=0.014), volume of distribution (p=0.025), clearance (p=0.0005), and area under the curve (p=0,045)), with significant reduction in hematological values (red blood cells (p<0.0001), platelets (p=0.0005), total leukocytes (p=0.0002) and segmented neutrophils (p=0.0007) to this chemotherapeutic protocol. However, these were not sufficient to alter the degree of adverse effects caused by this type of treatment. These jointly assessed results indicate that the association between carboplatin and cyclophosphamide represents a feasible alternative for adjuvant treatment of female dogs with high grade mammary carcinomas and/or regional lymph node metastasis, as it contributes to the increase in survival rate (p=0,0044) of these female dogs, compared to carboplatin as a single chemotherapy treatment.

Ações do estradiol na síntese de prostaglandina f2 em células endometriais bovinas

Em fêmeas bovinas a liberação de prostaglandina F2 (PGF2) endometrial pode ser induzida in vivo pelo estradiol (E2), entretanto, seu papel ainda não foi esclarecido. Em estudos prévios realizados pelo grupo, o tratamento com E2 in vivo duas horas antes das vacas serem abatidas no 17º dia do ciclo estral, associado à adição de cálcio ionóforo (CI) in vitro em explantes endometriais, exacerbou a síntese de PGF2 quando comparado ao grupo de vacas não tratadas com E2 e CI. O mesmo foi observado em células endometriais bovinas (BEND) expostas ao E2 e CI simultaneamente. Considerando que as concentrações plasmáticas de PGF2 aumentam a partir de 3,5 horas após da aplicação do E2 in vivo, possivelmente tais ações envolvam a síntese de proteínas. Hipotetizou-se que o E2 estimule a expressão e/ou a atividade das enzimas dependentes de cálcio, especificamente a proteína quinase C (PKC) e fosfolipase A2 citosólica (cPLA2). Assim, objetivou-se analisar o efeito dos inibidores de Proteína G, PKC e PLA2 na síntese de PGF2 induzida pelo 17-estradiol e CI em células endometriais bovinas BEND (Experimento 1), e avaliar as proteínas PKC e PLA2 e ERK 1/2, pela técnica de Western Blotting, em explantes endometriais obtidos de fêmeas bovinas abatidas 2 horas após a administração de 17-estradiol no 17o dia do ciclo estral (Experimento 2). No Experimento 1, células endometriais bovinas (BEND) foram submetidas a ausência ou presença de um inibidor de proteína G - 10µM de Guanosine 5- {B-thio) difosfato trilitium (Experimento 1A), inibidor de PKC - 10µM de C25H24N4O2 Bisindolimaleimide I (Experimento 1B) ou inibidor de PLA2 - 20µM de AACOCF3 (Experimento 1C), sendo posteriormente tratadas ou não com 17-estradiol e CI. Os tratamentos foram realizados em triplicata em um total de três repetições. As concentrações de PGF2 no meio de cultivo foram mensuradas por radioimunoensaio. No Experimento 2, novilhas Nelore cíclicas receberam os tratamentos, com 0mg (n=5) ou 3mg de 17-estradiol (n=6), ia endovenosa, 17° dia do ciclo estral e foram abatidas 2 horas após. Os explantes endometriais foram avaliados por Western Blotting para as proteínas PKC, PLA2 e ERK1/2. As análises estatísticas dos experimentos foi realizada no programa SAS (SAS Institute, 1988). No experimento 1A, observou-se efeito de repetição (P<0,001) e inibidor (P<0,01), onde os grupos tratados com inibidor da proteina G (Inibidor de Proteína G e Inibidor de Proteína G+CI+ E2 ) apresentaram DIF 12 (concentração de PGF2 com 12 horas após o tratamento subtraída da concentração de PGF2 com 0 hora) maior (P<0,01) que os grupos não tratados com o inibidor da proteína G (controle e CI+ E2 ). No experimento 1B, houve efeito de repetição (<0,001) e não houve efeito do inibidor (P=0,2709). No experimento 1C, verificou-se efeito de repetição (P<0,001) e inibidor (P<0,05). As células tratadas com o inibidor de PLA2 (grupo inibidor de PLA2 e Inibidor de PLA2 + CI + E2) apresentaram uma DIF 12 menor (P<0,05) que os grupos não tratados com o inibidor de PLA2 (controle e CI + + E2). No experimento 2, não houve efeito significativo do estradiol no aumento da proteína PKC (P=0,08), PLA2 (P=0,56) e ERK1/2 (P=0,26). Concluiu-se que, no presente estudo, o E2 não estimulou a síntese das proteínas PKC e cPLA2.

In bovine females the release of endometrial prostaglandin F2 (PGF2) can be induced in vivo by estradiol (E2), however, its role has not yet been clarified. In previous studies conducted by the group, treatment with E2 in vivo two hours before cows were slaughtered on the 17th day of the estrous cycle, associated with the addition of ionophore calcium (IC) in vitro in endometrial explants, exacerbated PGF2 synthesis when compared to group of cows not treated with E2 and CI. The same was observed in bovine endometrial cells (BEND) exposed to E2 and IC simultaneously. Considering that plasma concentrations of PGF2 increase from 3.5 hours after the application of E2 in vivo, possibly such actions involve the synthesis of proteins. E2 has been hypothesized to stimulate the expression and / or activity of calcium dependent enzymes, specifically protein kinase C (PKC) and cytosolic phospholipase A2 (cPLA2). The objective of this study was to analyze the effect of Protein G, PKC and PLA2 inhibitors on the synthesis of PG2 induced by 17-estradiol and IC in BEND bovine endometrial cells (Experiment 1), and to evaluate the proteins PKC and PLA2 and ERK 1/2 by Western Blotting technique in endometrial explants obtained from bovine females slaughtered 2 hours after administration of 17-estradiol on the 17th day of the estrous cycle (Experiment 2). In Experiment 1, bovine endometrial cells (BEND) were subjected to the absence or presence of a G-10M inhibitor of Guanosine 5'- {B-thio) diphosphate trilitium (Experiment 1A), PKC inhibitor - 10M C25H24N4O2 - Bisindolimaleimide I (Experiment 1B) or inhibitor of PLA2 - 20M AACOCF3 (Experiment 1C), and subsequently treated with or without 17-estradiol and IC. Treatments were performed in triplicate for a total of three replicates. The concentrations of PGF2 in the culture medium were measured by radioimmunoassay. In Experiment 2, cyclic Nelore heifers were treated with 0mg (n = 5) or 3mg of 17-estradiol (n = 6), intravenous at day 17 of the estrous cycle and slaughtered 2 hours later. Endometrial explants were evaluated by Western blotting for PKC, PLA2 and ERK1 / 2 proteins. Statistical analysis of the experiments was performed in the SAS program (SAS Institute, 1988). In the experiment 1A, a repetitive effect (P <0.001) and inhibitor (P <0.01) were observed, where the G protein inhibitor (Protein G Inhibitor and Protein G Inhibitor + CI + E2) treated groups showed DIF 12 (concentration of PGF 2 at 12 hours post treatment subtracted from PGF 2 concentration with 0 hour) higher (P <0.01) than the groups not treated with the G protein inhibitor (control and CI + E2). In experiment 1B, there was a repetition effect (<0.001) and there was no inhibitor effect (P = 0.2709). In the experiment 1C, there was a repetition effect (P <0.001) and inhibitor (P <0.05). The cells treated with the PLA2 inhibitor (PLA2 inhibitor group and PLA2 + CI + E2 inhibitor) had a lower DIF 12 (P <0.05) than the groups not treated with the PLA2 inhibitor (control and CI + E2). In Experiment 2, there was no significant effect of estradiol on the increase of PKC (P = 0.08), PLA2 (P = 0.56) and ERK1 / 2 (P = 0.26). It was concluded that, in the present study, E2 did not stimulate the synthesis of PKC and cPLA2 proteins.

BRUCELOSE NATURAL E EXPERIMENTAL: DISTÚRBIOS BIOQUÍMICOS ENVOLVIDOS NA PATOGENIA DA DOENÇA

A brucelose é uma doença infecciosa causada por bactérias do gênero Brucella. Apresenta ampla distribuição mundial, sendo considerada uma das principais causas de aborto, problemas reprodutivos e descarte precoce dos animais, além de prejuízos para a produção de bovinos e ovinos devido às significativas perdas econômicas e barreiras sanitárias. Sabe-se que entre os mecanismos fisiológicos, a formação de radicais livres ocorre naturalmente, no entanto, sob condições patológicas, como na brucelose, pode haver uma superprodução desses radicais, causando danos às células e aos tecidos e, portanto, exigindo uma maior ativação do sistema antioxidante, do que em situações normais. Nestas mesmas condições, é enfatizada a importância de estudos sobre as enzimas que atuam como marcadores inflamatórios, como é o caso da adenosina deaminase (ADA), colinesterases e ectonucleotidases. Portanto, o objetivo deste estudo foi avaliar se há ocorrência de estresse oxidativo e alteração na atividade de enzimas purinérgicas, colinérgicas e do metabolismo energético em animais infectados para Brucella abortus e Brucella ovis em condição natural e experimental, respectivamente, além de avaliar a soroprevalência de B. abortus em propriedades localizadas no oeste do estado de Santa Catarina. Para atingir os objetivos, três experimentos foram conduzidos. Para o experimento I, foram selecionadas amostras de sangue e soro de vacas de um rebanho do oeste do estado de Santa Catarina, alimentados com a mesma dieta, e com suspeita de brucelose por apresentarem histórico de aborto no último terço de gestação e repetições estro constantes. Entre esses animais, foram selecionados o soro de 10 animais positivos para B. abortus e 10 negativos. Observou-se nos animais soropositivos uma redução na atividade da ADA, assim como da enzima catalase (CAT). Já a peroxidação lipídica (TBARS) e atividade da superóxido dismutase (SOD) foi maior nas vacas soropositivas (P<0,05). Portanto conclui-se que as vacas estão em condição de estresse oxidativo e uma redução da ADA visa diminuir a resposta inflamatória, visto que essa enzima é responsável por regular níveis da molécula anti-inflamatória conhecida como adenosina. O experimento II foi conduzido em propriedades do oeste do estado que não estão em vigilância para a doença brucelose. Um total de 1242 amostras de soro oriundas de vacas da região oeste de Santa Catarina foram submetidas ao protocolo sorodiagnóstico conhecido como teste de Antígeno Acidificado (AAT) e em seguida ao teste de 2-Mercaptoetanol (2-ME) para fins de confirmação. Todas as amostras avaliadas foram soronegativas para B. abortus. Embora não tenhamos encontrado animais soropositivos para brucelose em nosso estudo, a doença ainda requer uma vigilância contínua, devido ao seu impacto econômico e ao estresse oxidativo causado por ela, o que pode ter contribuído para casos de aborto em três vacas soropositivas (Experimento I) no terço final da gestação após analises bioquímicas. No experimento III utilizou-se 48 camundongos, sendo que 50% deles foram infectados experimentalmente por B. ovis e os demais foram utilizados como controle (não infectados). Parâmetros hematológicos, bioquímicos e histopatológicos foram avaliados nesses animais em quatro momentos (dia 7, 15, 30 e 60 pós-infecção (PI)). Observou-se que a infecção pela bactéria B. ovis em modelo experimental provoca distúrbios hematológicos como uma redução dos níveis de hematócrito e aumento da contagem de leucóticos; alterações bioquímicas como diminuição dos níveis séricos de albumina e aumento de globulinas (dia 15, 30 e 60 PI), e patológicos como esplenomegalia, esplenite granulomatosa e granulomas hepáticos multifocais. A redução dos níveis de hematócrito na fase aguda da infecção, bem como a resposta inflamatória exacerbada, pode contribuir para danos no tecido esplênico e hepático, e assim pode alterar a função hepática, diminuindo os níveis de albumina. A atividade da AChE foi elevada em sangue e homogenizado de cérebro, bem como a BChE em soro. Este aumento é caracterizado como uma resposta pró-inflamatória, visto que, estas enzimas regulam os níveis de acetilcolina (ACh), a qual apresenta efeito anti-inflamatório. Além disso, a infecção por B. ovis reduziu a atividade das enzimas NTPDase e 5'-nucleotidase em cérebro na fase aguda, com posterior elevação na fase crônica, sugerindo que a hidrólise de nucleotídeos é baixa na fase aguda devido à diminuição destas enzimas. O mesmo ocorreu com a ADA em soro, enzima responsável por regular os níveis de adenosina extracelular. A diminuição de sua atividade na fase aguda sugere ação anti-inflamatória, ao passo que, com a cronificação da doença, eleva sua atividade na tentativa de combater o agente, apresentando então ação pró-inflamatória. A resposta inflamatória também é evidenciada pelo aumento dos níveis de proteína C-reativa em soro nos animais infectados, visto que, esta proteína é produzida pelo fígado em resposta a estímulos inflamatórios, infecção e dano tecidual. Quanto as enzimas do metabolismo energético, observou-se nos animais infectados uma elevação da atividade cardíaca da creatina quinase (CK) citosólica (30 e 60 PI) e diminuição da creatina quinase mitocondrial (30 e 60 PI) bem como da piruvato quinase (PK) (60 PI). Estas alterações sugerem um comprometimento da síntese e regulação de ATP, associado a um aumento na produção de espécies reativas ao oxigênio (ROS) em soro, baço, fígado, coração, cérebro e nas concentrações de TBARS cerebrais e cardíacos observados em nosso estudo. A ativação dos mecanismos antioxidantes foi evidenciada pelo aumento dos níveis séricos e cardíacos de SOD, bem como a redução das concentrações séricas de CAT e de níveis de tióis não-proteicos (NPSH) em coração. Portanto concluímos que infecções por B. abortus e B. ovis geram um quadro de estresse oxidativo a nível sérico e tecidual, que pode contribuir negativamente para a doença, assim como concluímos também que enzimas dos sistemas purinérgico, colinérgico e metabolismo energético participam da regulação da resposta inflamatória da doença de forma direta ou indireta, conforme detalhado nessa dissertação.

Brucellosis is an infectious disease caused by bacteria of the genus Brucella. This file was distributed by the worldwide company, being one of the main causes of risk, reproductive problems and early discontinuity of the animals, besides losses for cattle and sheep production in the last decades and sanitary barriers. It is known that among the physiological mechanisms, the formation of free radicals occurs naturally, however, under pathological conditions, as in brucellosis, there may be an overproduction of these radicals, causing damage to cells and tissues and, therefore, requiring a greater activation of the antioxidant system than in normal situations. Under these same conditions, the importance of studies on the enzymes that act as inflammatory markers, such as adenosine deaminase (ADA), cholinesterases and ectonucleotidases, is emphasized. Therefore, the objective of this study was to evaluate the occurrence of oxidative stress and alteration in the activity of purinergic, cholinergic and energetic metabolism in infected animals for Brucella abortus and Brucella ovis in natural and experimental conditions, respectively, besides evaluating the seroprevalence of B. abortus on properties located in the west of the state of Santa Catarina. To achieve the objectives, three experiments were conducted. For the experiment I, blood and serum samples of cows from a herd of the state of Santa Catarina, fed with the same diet, and with suspected brucellosis were selected because they presented a history of abortion in the last third of gestation and repetitions of estrus. Among these animals, 10 sera were positive for B. abortus and 10 were negative. In the seropositive animals a reduction in ADA activity was observed, as well as of the enzyme catalase (CAT). On the other hand, lipid peroxidation (TBARS) and superoxide dismutase activity (SOD) were higher in seropositive cows (P <0.05). Therefore it is concluded that cows are in a condition of oxidative stress and a reduction of ADA aims to decrease the inflammatory response, since this enzyme is responsible for regulating levels of the anti-inflammatory molecule known as adenosine. Experiment II was conducted on western properties of the state that are not under surveillance for the brucellosis disease. A total of 1242 serum samples from cows from the western region of Santa Catarina were submitted to the serodiagnostic protocol known as the Acidified Antigen Test (AAT) and then to the 2-Mercaptoethanol (2-ME) test for confirmation purposes. All samples tested were seronegative to B. abortus. Although we did not find seropositive animals for brucellosis in our study, the disease still requires continuous surveillance due to its economic impact and the oxidative stress caused by it, which may have contributed to abortion cases in three seropositive cows (Experiment I) in the final third of gestation after biochemical analysis. In the experiment III, 48 mice were used, of which 50% were experimentally infected by B. ovis and the others were used as control (non-infected). Hematological, biochemical and histopathological parameters were evaluated in these animals at four times (days 7, 15, 30 and 60 post-infection (PI)). It was observed that infection by the B. ovis bacterium in the experimental model causes hematological disorders such as a reduction in hematocrit levels and an increase in leukocyte count; biochemical changes such as decreased serum albumin levels and increased globulins (day 15, 30 and 60 PI), and pathological conditions such as splenomegaly, granulomatous splenitis and multifocal hepatic granulomas. Reduced hematocrit levels in the acute phase of infection, as well as the exacerbated inflammatory response, may contribute to splenic and hepatic tissue damage, and thus may alter liver function, decreasing albumin levels. AChE activity was elevated in blood and brain homogenate, as well as serum BChE. This increase is characterized as a pro-inflammatory response, since these enzymes regulate the levels of acetylcholine (ACh), which has an anti-inflammatory effect. In addition, B. ovis infection reduced the activity of the NTPDase and 5'-nucleotidase enzymes in the acute phase, with subsequent elevation in the chronic phase, suggesting that the nucleotide hydrolysis is low in the acute phase due to the decrease of these enzymes. The same occurred with ADA in serum, an enzyme responsible for regulating extracellular adenosine levels. The reduction of its activity in the acute phase suggests an anti-inflammatory action, whereas, with the chronification of the disease, it raises its activity in the attempt to combat the agent, presenting then pro-inflammatory action. The inflammatory response is also evidenced by increased levels of C-reactive protein in serum in infected animals, since this protein is produced by the liver in response to inflammatory stimuli, infection and tissue damage. As for energetic metabolism enzymes, an increase in cytosolic creatine kinase (CK) and cytosolic creatine kinase activity (30 and 60 PI) and decrease in mitochondrial creatine kinase (30 and 60 PI) as well as pyruvate kinase (PK) (60 PI). These alterations suggest a compromise in the synthesis and regulation of ATP, associated to an increase in the production of oxygen reactive species (ROS) in serum, spleen, liver, heart, brain and brain and cardiac TBARS concentrations observed in our study. Activation of the antioxidant mechanisms was evidenced by increased serum and cardiac levels of SOD, as well as the reduction of serum concentrations of CAT and non-protein thiol levels (NPSH) in the heart. Therefore, we conclude that B. abortus and B. ovis infections generate a picture of oxidative stress at the serum and tissue levels, which may contribute negatively to the disease, and also conclude that purinergic, cholinergic and energy metabolism enzymes participate in the regulation of inflammatory response of the disease directly or indirectly, as detailed in this dissertation.