Parasitological and histological aspects of Holochilus sciureus naturally infected by Schistosoma mansoni / Aspectos parasitológicos e histológicos de Holochilus sciureus naturalmente infectados por Schistosoma mansoni

Schistosomiasis is a neglected disease that affects millions of people around the world, being common in the state of Maranhão. A total of 225 rodents of the Holochilus sciureus species from the Western Lowland Maranhão were studied, of which 144 animals (64%) exhibited Schistosoma eggs in their feces samples. Macroscopic lesions characterized as well-defined whitish areas on the liver and spleen surfaces were observed. Histopathological examination revealed multifocal granulomas in the esophagus, liver, spleen, pancreas and duodenum, with structures compatible with Schistosoma mansoni eggs, as well as severe hepatic micro-vacuolar degeneration, multifocal and coalescent, with proliferation of random bile ducts and associated epithelial hyperplasia to areas of fibrosis. Adult forms of the parasite were observed in the blood vessels of the portal space. The lungs exhibited moderate and diffuse interstitial pneumonia with intralesional S. mansoni eggs. In the kidneys, hyaline cylinders were observed in the pelvis and diffuse hemorrhage. In conclusion, H. sciureus displays a pathological picture similar to human being. This rodent plays a role as sentinel in Baixada Maranhense.(AU)

A esquistossomose é uma doença negligenciada que afeta milhões de pessoas em todo o mundo, sendo comum no estado do Maranhão. Um total de 225 roedores da espécie Holochilus sciureus da Planície Ocidental do Maranhão foram estudados, dos quais 144 animais (64%) apresentaram ovos de Schistosoma em suas fezes. Lesões macroscópicas caracterizadas como áreas esbranquiçadas bem definidas nas superfícies do fígado e baço foram observadas. O exame histopatológico revelou granulomas multifocais no esôfago, fígado, baço, pâncreas e duodeno, com estruturas compatíveis com ovos de Schistosoma mansoni, degeneração micro-vacuolar hepática grave, multifocal e coalescente, com proliferação de ductos biliares aleatórios e hiperplasia epitelial associada a áreas de fibrose. Formas adultas do parasito foram observadas nos vasos sanguíneos do espaço portal. Os pulmões exibiram pneumonia intersticial moderada e difusa com ovos de S. mansoni intralesionais. Nos rins, foram observados cilindros hialinos na pelve e hemorragia difusa. Em conclusão, H. sciureus apresenta um quadro patológico semelhante ao ser humano. Este roedor desempenha um papel de sentinela na Baixada Maranhense.(AU)

Could mesenchymal stem cell therapy help in the treatment of muscle damage caused by Bothrops alternatus venom? / Podem as células tronco mesenquimais auxiliarem no tratamento da lesão muscular causada pelo veneno de Bothrops alternatus?

The aim of this study was to evaluate the use of mesenchymal stem cells (MSC) in the treatment of myonecrosis induced by Bothrops alternatus venom in rats. Seventy-five male adult Wistar rats were divided into three experimental groups. G1 and G2 were injected in the gastrocnemius muscle with 120g of B. alternatus venom, while G3 received 200L of PBS only. Three days after the venom injection, 12 rats from G1 were treated with 5.0 x 106 MSC in PBS, whereas G2 and G3 rats received PBS. Every three days, blood and muscle samples of five animals from each group were taken for serum biochemical and pathological analyses. Histological examinations showed more intense muscle lesions following MSC treatment, characterized by disorganization and loss of muscle fibers, with focal necrosis and inflammatory infiltration by mononuclear cells. In conclusion, the use of MSC for the treatment of local damage caused by inoculation of B. alternatus venom impaired muscle regeneration and interfered in the healing process.(AU)

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a utilização das células tronco mesenquimais (MSC) no tratamento da mionecrose induzida pelo veneno de Bothrops alternatus em ratos. 75 ratos Wistar adultos foram distribuídos em três grupos experimentais. G1 e G2 receberam 120g de veneno de B. alternatus, enquanto o G3 recebeu apenas 200L de PBS. Três dias após a administração do veneno, os ratos do grupo G1 foram tratados com 5.0 x 106 MSC, enquanto G2 e G3 receberam exclusivamente PBS. A cada três dias, amostras de sangue e tecido muscular foram coletadas de cinco animais de cada grupo para avaliação bioquímica sérica e patológica, respectivamente. A análise histológica revelou lesão muscular mais intensa após a aplicação das MSC, caracterizada pela desorganização e perdas das fibras musculares, com necrose focal e infiltrado inflamatório mononuclear. É possível concluir que a utilização das MSC para o tratamento da lesão local causada pela inoculação do veneno B. alternatus deteriorou a regeneração muscular e interferiu com o processo de cicatrização.(AU)

Could mesenchymal stem cell therapy help in the treatment of muscle damage caused by Bothrops alternatus venom? / Podem as células tronco mesenquimais auxiliarem no tratamento da lesão muscular causada pelo veneno de Bothrops alternatus?

The aim of this study was to evaluate the use of mesenchymal stem cells (MSC) in the treatment of myonecrosis induced by Bothrops alternatus venom in rats. Seventy-five male adult Wistar rats were divided into three experimental groups. G1 and G2 were injected in the gastrocnemius muscle with 120g of B. alternatus venom, while G3 received 200L of PBS only. Three days after the venom injection, 12 rats from G1 were treated with 5.0 x 106 MSC in PBS, whereas G2 and G3 rats received PBS. Every three days, blood and muscle samples of five animals from each group were taken for serum biochemical and pathological analyses. Histological examinations showed more intense muscle lesions following MSC treatment, characterized by disorganization and loss of muscle fibers, with focal necrosis and inflammatory infiltration by mononuclear cells. In conclusion, the use of MSC for the treatment of local damage caused by inoculation of B. alternatus venom impaired muscle regeneration and interfered in the healing process.

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a utilização das células tronco mesenquimais (MSC) no tratamento da mionecrose induzida pelo veneno de Bothrops alternatus em ratos. 75 ratos Wistar adultos foram distribuídos em três grupos experimentais. G1 e G2 receberam 120g de veneno de B. alternatus, enquanto o G3 recebeu apenas 200L de PBS. Três dias após a administração do veneno, os ratos do grupo G1 foram tratados com 5.0 x 106 MSC, enquanto G2 e G3 receberam exclusivamente PBS. A cada três dias, amostras de sangue e tecido muscular foram coletadas de cinco animais de cada grupo para avaliação bioquímica sérica e patológica, respectivamente. A análise histológica revelou lesão muscular mais intensa após a aplicação das MSC, caracterizada pela desorganização e perdas das fibras musculares, com necrose focal e infiltrado inflamatório mononuclear. É possível concluir que a utilização das MSC para o tratamento da lesão local causada pela inoculação do veneno B. alternatus deteriorou a regeneração muscular e interferiu com o processo de cicatrização.

Thyroid hormones affect decidualization and angiogenesis in the decidua and metrial gland of rats

ABSTRACT: This study aimed to evaluate the effects of thyroid hormone on the decidua and metrial gland of rats and to examine the expression of angiogenic factors. 72 adult, female rats were divided into hypothyroid, T4-treated2, and control groups. At 10, 14 and 19 days of gestation (DG), the decidua and metrial gland were collected for histomorphometric and immunohistochemical evaluation of the expression of VEGF, Flk-1 and Tie-2. Hypothyroidism reduced the area of the decidua at 10 and 19 DG. Furthermore, VEGF was increased at 10 and 14 DG, and Flk-1 only at 14 DG, but both was reduced at 19 DG in the metrial gland without significantly changing the area occupied by blood vessels. Rats treated with T4 showed an increase in the decidua blood vessels at 10 and 19 DG. However, at 10 DG, excess T4 resulted in increased of Flk-1 in the decidua and metrial gland. Hypothyroidism increased the Tie-2 at 10 and 19 DG in the decidua and metrial gland. In conclusion, hypothyroidism reduces the area of the decidua and increases the expression of VEGF, Tie-2 and Flk-1. The excess of T4 promotes tissue angiogenesis by increasing the number of vessels in the decidua because of the increased expression of Flk-1.

RESUMO: Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos dos hormônios tireoidianos sobre a decídua e a glândula metrial pela análise da expressão de fatores angiogênicos em ratas. 72 ratas adultas, fêmeas foram distribuídas nos grupos hipotiroideo, tratado com T4 e controle. Aos 10, 14 e 19 dias de gestação (DG), a decídua e a glândula metrial foram coletadas para avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica da expressão de VEGF, Flk-1 e Tie-2. O hipotireoidismo reduziu a área da decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, o VEGF aumentou aos 10 e 14 DG e o Flk-1 apenas aos 14 DG, mas ambos foram reduzidos aos 19 DG na glândula metrial sem alterar significativamente a área ocupada pelos vasos sanguíneos. As ratas tratadas com T4 apresentaram aumento do número de vasos sanguíneos na decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, aos 10 DG, o excesso de T4 resultou no aumento de Flk-1 na decídua e na glândula metrial. O hipotireoidismo aumentou o Tie-2 em 10 e 19 DG na decídua e na glândula metrial. Desta forma, pode-se concluir que o hipotireoidismo reduz a área da decídua e aumenta a expressão de VEGF, Tie-2 e Flk-1. O excesso de T4 promove a angiogênese tecidual ao aumentar o número de vasos na decídua devido ao aumento da expressão de Flk-1.

Thyroid hormones affect decidualization and angiogenesis in the decidua and metrial gland of rats / Hormônios tireoidianos afetam a decidualização e a angiogênese na decídua e glândula metrial de ratas

This study aimed to evaluate the effects of thyroid hormone on the decidua and metrial gland of rats and to examine the expression of angiogenic factors. 72 adult, female rats were divided into hypothyroid, T4-treated2, and control groups. At 10, 14 and 19 days of gestation (DG), the decidua and metrial gland were collected for histomorphometric and immunohistochemical evaluation of the expression of VEGF, Flk-1 and Tie-2. Hypothyroidism reduced the area of the decidua at 10 and 19 DG. Furthermore, VEGF was increased at 10 and 14 DG, and Flk-1 only at 14 DG, but both was reduced at 19 DG in the metrial gland without significantly changing the area occupied by blood vessels. Rats treated with T4 showed an increase in the decidua blood vessels at 10 and 19 DG. However, at 10 DG, excess T4 resulted in increased of Flk-1 in the decidua and metrial gland. Hypothyroidism increased the Tie-2 at 10 and 19 DG in the decidua and metrial gland. In conclusion, hypothyroidism reduces the area of the decidua and increases the expression of VEGF, Tie-2 and Flk-1. The excess of T4 promotes tissue angiogenesis by increasing the number of vessels in the decidua because of the increased expression of Flk-1.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos dos hormônios tireoidianos sobre a decídua e a glândula metrial pela análise da expressão de fatores angiogênicos em ratas. 72 ratas adultas, fêmeas foram distribuídas nos grupos hipotiroideo, tratado com T4 e controle. Aos 10, 14 e 19 dias de gestação (DG), a decídua e a glândula metrial foram coletadas para avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica da expressão de VEGF, Flk-1 e Tie-2. O hipotireoidismo reduziu a área da decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, o VEGF aumentou aos 10 e 14 DG e o Flk-1 apenas aos 14 DG, mas ambos foram reduzidos aos 19 DG na glândula metrial sem alterar significativamente a área ocupada pelos vasos sanguíneos. As ratas tratadas com T4 apresentaram aumento do número de vasos sanguíneos na decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, aos 10 DG, o excesso de T4 resultou no aumento de Flk-1 na decídua e na glândula metrial. O hipotireoidismo aumentou o Tie-2 em 10 e 19 DG na decídua e na glândula metrial. Desta forma, pode-se concluir que o hipotireoidismo reduz a área da decídua e aumenta a expressão de VEGF, Tie-2 e Flk-1. O excesso de T4 promove a angiogênese tecidual ao aumentar o número de vasos na decídua devido ao aumento da expressão de Flk-1.(AU)

Thyroid hormones affect decidualization and angiogenesis in the decidua and metrial gland of rats / Hormônios tireoidianos afetam a decidualização e a angiogênese na decídua e glândula metrial de ratas

This study aimed to evaluate the effects of thyroid hormone on the decidua and metrial gland of rats and to examine the expression of angiogenic factors. 72 adult, female rats were divided into hypothyroid, T4-treated2, and control groups. At 10, 14 and 19 days of gestation (DG), the decidua and metrial gland were collected for histomorphometric and immunohistochemical evaluation of the expression of VEGF, Flk-1 and Tie-2. Hypothyroidism reduced the area of the decidua at 10 and 19 DG. Furthermore, VEGF was increased at 10 and 14 DG, and Flk-1 only at 14 DG, but both was reduced at 19 DG in the metrial gland without significantly changing the area occupied by blood vessels. Rats treated with T4 showed an increase in the decidua blood vessels at 10 and 19 DG. However, at 10 DG, excess T4 resulted in increased of Flk-1 in the decidua and metrial gland. Hypothyroidism increased the Tie-2 at 10 and 19 DG in the decidua and metrial gland. In conclusion, hypothyroidism reduces the area of the decidua and increases the expression of VEGF, Tie-2 and Flk-1. The excess of T4 promotes tissue angiogenesis by increasing the number of vessels in the decidua because of the increased expression of Flk-1.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos dos hormônios tireoidianos sobre a decídua e a glândula metrial pela análise da expressão de fatores angiogênicos em ratas. 72 ratas adultas, fêmeas foram distribuídas nos grupos hipotiroideo, tratado com T4 e controle. Aos 10, 14 e 19 dias de gestação (DG), a decídua e a glândula metrial foram coletadas para avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica da expressão de VEGF, Flk-1 e Tie-2. O hipotireoidismo reduziu a área da decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, o VEGF aumentou aos 10 e 14 DG e o Flk-1 apenas aos 14 DG, mas ambos foram reduzidos aos 19 DG na glândula metrial sem alterar significativamente a área ocupada pelos vasos sanguíneos. As ratas tratadas com T4 apresentaram aumento do número de vasos sanguíneos na decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, aos 10 DG, o excesso de T4 resultou no aumento de Flk-1 na decídua e na glândula metrial. O hipotireoidismo aumentou o Tie-2 em 10 e 19 DG na decídua e na glândula metrial. Desta forma, pode-se concluir que o hipotireoidismo reduz a área da decídua e aumenta a expressão de VEGF, Tie-2 e Flk-1. O excesso de T4 promove a angiogênese tecidual ao aumentar o número de vasos na decídua devido ao aumento da expressão de Flk-1.(AU)

Excesso de tiroxina materna associado ao hipertireoidismo pós-natal reduz o crescimento ósseo e o perfil proliferativo e angiogênico das cartilagens de crescimento de ratos / Excess maternal thyroxine associated with postnatal hyperthyroidism reduces bone growth and proliferative and angiogenic profile of rats growth cartilage

Foram estudados os efeitos do excesso da tiroxina materna associado ao hipertireoidismo pós-natal sobre o crescimento ósseo e o perfil proliferativo e angiogênico das cartilagens. Dezesseis ratas Wistar adultas foram distribuídas nos grupos tratados com L-tiroxina e controle. A prole do grupo tratado recebeu L-tiroxina do desmame até 40 dias de idade. Ao desmame, foi realizada dosagem plasmática de T4 livre nas mães. Na prole, foram realizados: dosagem plasmática de T3 total e T4 livre, morfometria das tireoides, mensuração do comprimento e largura do fêmur. Nas cartilagens, foi avaliada a expressão imuno-histoquímica e gênica de CDC-47, VEGF, Flk-1, Ang1, Ang2 e Tie2. As médias entre grupos foram comparadas pelo teste T de Student. As concentrações de T4 livre das mães tratadas e de T3 total e T4 livre da prole foram significativamente mais elevadas. A largura do fêmur foi menor nos animais tratados. Houve também redução da imunoexpressão de CDC-47 e de VEGF e dos transcritos gênicos para VEGF e Ang1 nas cartilagens. Conclui-se que o excesso de tiroxina materna associado ao hipertireoidismo pós-natal reduz a largura da diáfise femoral, a proliferação celular e a expressão de VEGF e de Ang1 nas cartilagens de crescimento de ratos.(AU)

The effects of excess of maternal thyroxine associated with postnatal hyperthyroidism at bone growth and proliferative and angiogenic profile of cartilage were studied. Sixteen adult Wistar rats were divided into treated and control groups. The offspring of the treated group received L-thyroxine from weaning to 40 days-old. At weaning, plasma assay of free T4 was measurement on female rats. In the offspring, the following assessments were performed: measurement of total T3 and free T4, histomorphometry analysis of the thyroid, measurement of body weight and length and width of the femur. In femoral growth cartilage, immunostaining of CDC-47, gene or protein expression of VEGF, Flk-1, Ang1, Ang2 and Tie2 were evaluated. Data were analyzed using Student's t-test. Free T4 was significantly higher in treated rats and total T3 and free T4 were significantly higher in offspring. The width of the femur was significantly lower in treated animals. There was lower immunoreactivity of CDC-47, VEGF and lower expression of gene transcripts for VEGF and Ang1. We concluded that the excess maternal thyroxine associated with postnatal hyperthyroidism reduces the width of the femoral shaft, the cell proliferation and gene and protein expression of VEGF and gene expression of Ang1 on the growth cartilage in rats.(AU)

Excesso de tiroxina materna associado ao hipertireoidismo pós-natal reduz o crescimento ósseo e o perfil proliferativo e angiogênico das cartilagens de crescimento de ratos / Excess maternal thyroxine associated with postnatal hyperthyroidism reduces bone growth and proliferative and angiogenic profile of rats growth cartilage

Foram estudados os efeitos do excesso da tiroxina materna associado ao hipertireoidismo pós-natal sobre o crescimento ósseo e o perfil proliferativo e angiogênico das cartilagens. Dezesseis ratas Wistar adultas foram distribuídas nos grupos tratados com L-tiroxina e controle. A prole do grupo tratado recebeu L-tiroxina do desmame até 40 dias de idade. Ao desmame, foi realizada dosagem plasmática de T4 livre nas mães. Na prole, foram realizados: dosagem plasmática de T3 total e T4 livre, morfometria das tireoides, mensuração do comprimento e largura do fêmur. Nas cartilagens, foi avaliada a expressão imuno-histoquímica e gênica de CDC-47, VEGF, Flk-1, Ang1, Ang2 e Tie2. As médias entre grupos foram comparadas pelo teste T de Student. As concentrações de T4 livre das mães tratadas e de T3 total e T4 livre da prole foram significativamente mais elevadas. A largura do fêmur foi menor nos animais tratados. Houve também redução da imunoexpressão de CDC-47 e de VEGF e dos transcritos gênicos para VEGF e Ang1 nas cartilagens. Conclui-se que o excesso de tiroxina materna associado ao hipertireoidismo pós-natal reduz a largura da diáfise femoral, a proliferação celular e a expressão de VEGF e de Ang1 nas cartilagens de crescimento de ratos.(AU)

The effects of excess of maternal thyroxine associated with postnatal hyperthyroidism at bone growth and proliferative and angiogenic profile of cartilage were studied. Sixteen adult Wistar rats were divided into treated and control groups. The offspring of the treated group received L-thyroxine from weaning to 40 days-old. At weaning, plasma assay of free T4 was measurement on female rats. In the offspring, the following assessments were performed: measurement of total T3 and free T4, histomorphometry analysis of the thyroid, measurement of body weight and length and width of the femur. In femoral growth cartilage, immunostaining of CDC-47, gene or protein expression of VEGF, Flk-1, Ang1, Ang2 and Tie2 were evaluated. Data were analyzed using Student's t-test. Free T4 was significantly higher in treated rats and total T3 and free T4 were significantly higher in offspring. The width of the femur was significantly lower in treated animals. There was lower immunoreactivity of CDC-47, VEGF and lower expression of gene transcripts for VEGF and Ang1. We concluded that the excess maternal thyroxine associated with postnatal hyperthyroidism reduces the width of the femoral shaft, the cell proliferation and gene and protein expression of VEGF and gene expression of Ang1 on the growth cartilage in rats.(AU)

Maternal and fetal toxicity of Wistar rats exposed to herbicide metolachlor / Toxicidade materna e fetal de ratas Wistar expostas ao herbicida metolacloro

Metolachlor is a selective pre-emergent herbicide widely used in agriculture to control weeds. The aim of this study was to evaluate the possible effects of metolachlor on reproductive performance of adult rats, as well as its teratogenic potential when administered during the period of organogenesis. Pregnant adult female rats were allocated into 4 experimental groups (n = 10 group-1), that received 0 (control); 150 (TA); 300 (TB); or 1000 mg kg-1 bw day-1 (TC) of metolachlor, by gavage, from the 6th to 15th gestational day (GD). There is reduction in the weight gain of the animals from TB and TC groups compared to the control group. Liver and placenta weights were reduced in TB and TC groups, respectively, while the percentage of post-implantation loss was increased in the TC group. There were no external malformations in either rat of the control or treated groups. However, an increased incidence of skeletal anomalies and visceral anomalies (especially in the urogenital system) was observed in TC group. These results demonstrate that exposure of pregnant rats to metolachlor can lead to signs of general toxicity, late embryonic losses and congenital anomalies.(AU)

O metolacloro é um herbicida seletivo de pré-emergência, amplamente usado na agricultura para controlar ervas daninhas. O objetivo deste estudo foi avaliar os possíveis efeitos do metolacloro sobre o desempenho reprodutivo de ratas adultas, bem como o seu potencial teratogênico quando administrado durante o período da organogênese. Ratas adultas prenhes foram divididas em quatro grupos experimentais (n = 10 grupo-1), que receberam 0 (controle); 150 (TA); 300 (TB); ou 1.000 mg kg-1 dia-1 (TC) do metolacloro, via gavagem, do sexto ao 15º dia de gestação (DG). Foi observada redução no ganho de peso dos animais dos grupos TB e TC em comparação ao grupo controle. Os pesos do fígado e placenta foram reduzidos nos grupos TB e TC, respectivamente, enquanto que a percentagem de perda pós-implantação foi aumentada no grupo TC. Não foram observadas malformações externas nos ratos dos grupos controle e tratados. No entanto, foi observado aumento da incidência de anomalias esqueléticas e anomalias viscerais (especialmente no sistema urogenital) no grupo TC. Estes resultados demonstram que a exposição de ratas prenhes ao metolacloro pode levar a sinais de toxicidade geral, perdas embrionárias tardias e anomalias congênitas.(AU)

PAPEL DA KISSPEPTINA E SEU POTENCIAL TERAPÊUTICO NA DISFUNÇÃO FETO-PLACENTÁRIA DE RATAS HIPOTIREOIDEAS: AVALIAÇÃO DE FATORES DE CRESCIMENTO PLACENTÁRIO E MEDIADORES DE ESTRESSE CELULAR E DO INFLAMASSOMA

Alterações no nível plasmático e/ou placentário de kisspeptina (Kp) estão associadas 9 com doenças gestacionais. No entanto, embora estudos tenham sugerido que Kp 10 apresenta efeito antioxidante e imunomodulatório na interface materno-fetal e outros 11 tenham demonstrado que o hipotireoidismo causa disfunção gestacional e estresse 12 placentário, ainda não há informações sobre o papel da kisspeptina na disfunção 13 placentária causada pelo hipotireoidismo materno. Por isso, o objetivo deste trabalho 14 foi avaliar o papel da kisspeptina e seu potencial terapêutico na disfunção feto- 15 placentária de ratas hipotireoideas. Foram utilizadas Ratas Wistar adultas e o 16 hipotireoidismo foi induzido pela administração diária de propiltiouracil (PTU) 17 (4mg/Kg/dia). No Experimento 1, os animais foram divididos nos grupos controle 18 (N=18) e hipotireoideo (N=20) e foram avaliados o desenvolvimento feto-placentário e 19 a expressão gênica e proteica de Kiss1 e seu receptor (Kiss1R) na decídua e placenta 20 aos 14 e 18 dias de gestação (DG). O hipotireoidismo reduziu o peso fetal e 21 uteroplacentário, além de reduzir a expressão de mRNA de Kiss1 na decídua e 22 placenta aos 14 e 18 DG, respectivamente. Para Kiss1R, o hipotireoidismo não 23 somente reduziu a imunomarcação no triângulo Metrial e camada de células gigantes 24 aos 14 DG, como reduziu a expressão gênica na decídua e placenta no mesmo 25 período gestacional. Considerando que teve redução do sistema Kiss1/Kiss1R na 26 interface materno-fetal das ratas hipotireoideas, no Experimento 2 foi avaliado o 27 potencial terapêutico de Kisspeptina-10 (Kp10) na disfunção feto-placentária desses 28 animais. Os animais foram divididos nos grupos controle (N=8), hipotireoideo (N=8) e 29 hipotireoideo tratado com Kp10 (8µg/Kg/dia) dia sim/dia não (KpT1) (N=8) ou 30 diariamente (KpT2) (N=8). O tratamento iniciou no 8º DG e no 18º DG foram avaliados 31 o desenvolvimento feto-placentário, a histomorfometria placentária e a expressão 32 gênica e/ou proteica de fatores de crescimento (VEGF, PLGF, IGF1, IGF2 e GLUT1), 33 mediadores inflamatórios (TNF, IL10 e IL6), mediadores de estresse oxidativo (HIF, 34 SOD1, Cat, GPx1), mediadores de estresse de retículo endoplasmático (ATF4, 35 GRP78 e CHOP) e mediadores do inflamassoma (NLRP3, IL1, IL18) e piroptose 36 (Caspase1, Gasdermina D). O tratamento diário com Kp10 aumentou o peso fetal e 37 reverteu o crescimento fetal assimétrico causado pelo hipotireoidismo materno. 38 Ambos os tratamentos reestabeleceram parcialmente a morfologia da zona juncional 39 e aumentaram a vascularização no labirinto placentário. O tratamento diário com Kp10 40 aumentou a expressão gênica de fatores de crescimento (Plgf, Igf1) e de transporte 41 (Glut1) na placenta dos animais hipotireoideos, além de aumentar a expressão 42 proteica e de mRNA de enzimas antioxidantes (SOD1, Cat, GPx1). Embora o 43 tratamento diário com Kp10 não tenha alterado a maior expressão gênica e/ou 44 proteica de VEGF, HIF1, IL10, GRP78 e CHOP causada pelo hipotireoidismo, 45 especialmente na zona juncional, reduziu a imunomarcação desses mediadores na 46 zona do labirinto quando comparado ao grupo hipotireoideo. Além disso, o tratamento 47 com Kp10 bloqueou o aumento da expressão gênica placentária de mediadores do1 inflamassoma (Nlrp3, Il18) causado pelo hipotireoidismo materno. No entanto, o 2 tratamento com Kp10 aumentou a imunomarcação placentária de TNF e a expressão 3 gênica de Il1 e Caspase1 em relação aos grupos controle e hipotireoideo, enquanto 4 não foi observado diferenças na expressão placentária de Gasdermina D entre os 5 grupos experimentais. Conclui-se que a restrição de crescimento feto-placentária 6 observada em ratas com hipotireoidismo materno está associada com uma redução 7 do sistema kisspeptina/Kiss1R na interface materno-fetal. Além disso, o tratamento 8 diário com Kp10 em ratas gestantes hipotireoideas não somente melhora o 9 desenvolvimento feto-placentário e a vascularização placentária, como aumenta a 10 expressão de fatores de crescimento e enzimas antioxidantes e bloqueia a ativação 11 do inflamassoma causado pelo hipotireoidismo. 12

Changes in the plasma and / or placental level of kisspeptin (Kp) are associated with 9 pregnancy disorders. However, although studies have suggested that Kp has an 10 antioxidant and immunomodulatory effect at the maternal-fetal interface and others 11 have shown that hypothyroidism causes gestational dysfunction and placental stress, 12 there is still no information on the role of kisspeptin in placental dysfunction caused by 13 maternal hypothyroidism. Therefore, the objective of this work was to evaluate the role 14 of kisspeptin and its therapeutic potential in the fetal-placental dysfunction of 15 hypothyroid rats. Adult Wistar rats were used and hypothyroidism was induced by daily 16 administration of propylthiouracil (PTU) (4mg/Kg/day). In Experiment 1, the animals 17 were divided into the control (N=18) and hypothyroid (N=20) groups and the fetal- 18 placental development and the gene and protein expression of Kiss1 and its receptor 19 (Kiss1R) in the decidua and placenta were evaluated at 14 and 18 days of gestation 20 (DG). Hypothyroidism reduced fetal and uteroplacental weight, in addition to reducing 21 Kiss1 mRNA expression in the decidua and placenta at 14 and 18 DG, respectively. 22 For Kiss1R, hypothyroidism not only reduced immunostaining in the Metrial triangle 23 and giant cell layer at 14 DG, but also reduced gene expression in the decidua and 24 placenta in the same gestational period. Considering that there was a reduction in the 25 Kiss1/Kiss1R system in the maternal-fetal interface of the hypothyroid rats, in 26 Experiment 2 the therapeutic potential of Kisspeptin-10 (Kp10) in the fetal-placental 27 dysfunction of these animals was evaluated. The animals were divided into the control 28 (N=8), hypothyroid (N=8) and hypothyroid groups treated with Kp10 (8µg/Kg/day) 29 every other day (KpT1) (N=8) or daily (KpT2) (N=8). The treatment started in the 8th 30 DG and the fetal-placental development, the placental histomorphometry and the gene 31 and/or protein expression of growth factors (VEGF, PLGF, IGF1, IGF2 and GLUT1), 32 inflammatory mediators (TNF, IL10 and IL6), oxidative stress mediators (HIF, SOD1, 33 Cat, GPx1), endoplasmic reticulum stress mediators (ATF4, GRP78 and CHOP) and 34 inflammasome (NLRP3, IL-1, IL-18) and pyroptosis (Caspase1, Gasdermin D) 35 mediators were evaluated at 18 GD. Daily treatment with Kp10 increased fetal weight 36 and reversed asymmetric fetal growth caused by maternal hypothyroidism. Both 37 treatments partially reestablished the morphology of the junctional zone and increased 38 vascularization in the placental labyrinth. Daily treatment with Kp10 increased the gene 39 expression of growth factors (Plgf, Igf1) and transport (Glut1) in the placenta of 40 hypothyroid animals, in addition to increasing protein and mRNA expression of 41 antioxidant enzymes (SOD1, Cat, GPx1). Although daily treatment with Kp10 did not 42 alter the greater VEGF, HIF1, IL10, GRP78 and CHOP expression caused by 43 hypothyroidism, especially in the junctional zone, it reduced the immunostaining of 44 these mediators in the labyrinth zone when compared to the hypothyroid group. In 45 addition, treatment with Kp10 blocked the increase in placental gene expression of 46 inflammasome mediators (Nlrp3, Il18) caused by maternal hypothyroidism. However, 47 treatment with Kp10 increased the placental immunostaining of TNF and the gene 48 expression of Il1 and Caspase1 in relation to the control and hypothyroid groups, 49 while no differences were observed in the placental expression of Gasdermin D 50 between the experimental groups. It is concluded that the fetal-placental growth1 restriction observed in rats with maternal hypothyroidism is associated with a reduction 2 in the kisspeptin/Kiss1R system at the maternal-fetal interface. In addition, daily 3 treatment with Kp10 in hypothyroid pregnant rats not only improves fetal placental 4 development and placental vascularization but increases the expression of growth 5 factors and antioxidant enzymes and blocks the activation of the inflammasome 6 caused by hypothyroidism. 7

Efeito do consumo de etanol durante a gestação e lactação sobre a histomorfometria óssea e a diferenciação osteogênica, in vitro, das células tronco mesenquimais maternas da medula óssea de ratas

O objetivo do estudo foi avaliar o efeito do consumo materno de etanol durante a gestação e lactação sobre a massa óssea e sobre a diferenciação osteogênica in vitro das células tronco mesenquimais da medula óssea (CTM-MO) de ratas. Foram utilizadas 13 ratas Wistar adultas distribuídas em dois grupos: 1) controle e 2) tratado com etanol. As ratas do grupo etanol e controle, receberam diariamente, a partir do nono dia de gestação, solução alcoólica 40% (4g de etanol/kg) e água destilada, respectivamente até o trigésimo dia de lactação. As CTM-MO foram extraídas dos fêmures e tíbias direitas e cultivadas em meio osteogênico por sete, 14 e 21 dias. Foram realizados os testes de conversão do MTT em cristais de formazan, atividade de fosfatase alcalina e avaliação da porcentagem de células por campo. Aos 21 dias, foram realizadas as quantificações dos nódulos mineralizados por campo e dos transcritos gênicos para osteopontina, osteocalcina e BMP-2 por RT-PCR tempo real. As avaliações morfológicas e morfométricas da porcentagem de osso trabecular e espessura do osso cortical foram realizadas nos fêmures e tíbias esquerdas. As médias foram comparadas pelo teste t de student e as diferenças foram consideradas significativas se p<0,05. As CTM-MO das ratas que consumiram etanol durante a gestação e lactação, quando submetidas a diferenciação osteogênica, in vitro, apresentaram maior conversão de MTT em formazan, maior atividade de fosfatase alcalina, maior porcentagem de células por campo, maior expressão de BMP-2 e maior síntese de nódulos mineralizados quando comparadas às células das ratas controle. Entretanto, não houve diferença significativa entre grupos, na porcentagem de tecido ósseo trabecular e na espessura da cortical. Conclui-se que, o consumo de etanol durante a gestação e lactação não altera os tecidos ósseos trabecular e cortical do fêmur e tíbia em comparação ao de ratas gestantes e lactantes controles, apesar das CTM-MO apresentarem, in vitro, maior diferenciação osteogênica caracterizada pela maior síntese de matriz mineralizada.

The aim of this study was to evaluate the effect of maternal ethanol consumption during gestation and lactation on bone mass and the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells of the bone marrow (BMMSCs) of rats. Thirteen adult Wistar rats were used. The rats were distributed in two groups: 1) control and 2) ethanol treated. The rats of the ethanol and control groups received daily, from the ninth day of gestation, 40% alcoholic solution and distilled water, respectively, until the thirtieth day of lactation. The BMMSCs were extracted from the right femurs and tibiae and cultured on osteogenic medium for 7, 14 and 21 days. The conversion of MTT to formazan crystals, alkaline phosphatase activity, and porcentage of cells per field were performed. The number of mineralized nodules per field and the quantification of the gene transcripts for osteopontin, osteocalcin and BMP-2 by real-time RT-PCR were performed at day 21. Morphometric evaluations of the percentage of trabecular bone and cortical thickness were performed in the left femur and tibia. The means were compared by the Students t test and the differences were considered significant if p < 0.05. The BMMSCs of the rats that consumed ethanol during gestation and lactation, when submitted to osteogenic differentiation in vitro, presented higher conversion of MTT to formazan, higher alkaline phosphatase activity, higher percentage of cells per field, higher expression of BMP-2 and higher synthesis of mineralized nodules when compared to that of control rat cells. However, there was no significant difference in the percentage of trabecular bone or cortical thickness between both groups. It is concluded that the consumption of ethanol during pregnancy and lactation did not alter the trabecular and cortical bone tissues of the femur and tibia compared with that of pregnant and lactating control rats that did not consume alcohol, despite in vitro BMMSCs showing greater osteogenic differentiation characterized by greater synthesis of mineralized matrix.

ADMINISTRAÇÃO DE LUFFA OPERCULATA EM RATOS WISTAR ADULTOS E JOVENS ADULTOS E EM RATAS ADULTAS PÓS

Luffa operculata, popularmente conhecida como buchinha-do-norte, é uma planta usada no combate à sinusite e também para interromper a gravidez. A influência da administração de 1,0mg/kg do extrato aquoso de buchinha-do-norte (EBN) em ratas prenhes (GD17 a GD21) foi analisada, bem como em machos da geração F1, comparados a machos F0. Foi realizada uma avaliação comportamental das fêmeas da geração F0 e dos machos da geração F1 em aparelho de campo aberto e em caixa claro-escuro. Nos machos F1 foram analisadas alterações dos índices de corticosterona, hormônio adrenocorticotrófico (ACTH), melatonina e testosterona séricas, análise das citocinas Il-1, Il-1, Il-6 e TNF-, e análise macroscópica e microscópica dos testículos. Os machos F1 (grupos controle e tratado CGF1 e EGF1) tiveram seus parâmetros comparados aos parâmetros dos machos F0 (grupos controle e tratado CGF0 e EGF0). As ratas da geração F0 tratadas com EBN apresentaram diminuição em parâmetros comportamentais na caixa claro-escuro, com aumento de peso das fêmeas e dos machos da geração F1 dos grupos tratados. Os machos F1 não apresentaram alterações comportamentais significativas em relação aos machos F0. Os testículos de F1 não apresentaram alterações macroscópicas significativas, porém as alterações microscópicas foram mais significativas para os machos F0 tratados do que para os F1. Para os F1, as células de Leydig apresentaram-se em menor número nos machos EGF1. O número de células de Leydig diminuídas não influenciou na quantidade de testosterona produzida por machos F1, em relação aos machos F0. As citocinas IL-1 e IL-6 apresentaram-se aumentadas em CGF0, corticosterona, diminuída em CGF0, ACTH diminuído em EGF1 e melatonina aumentada em EGF1. A administração direta de EBN em ratas prenhes influenciou o comportamento e o peso de fêmeas F0 e de machos F1. Nos machos F1, em relação aos F0, não foram observadas diferenças comportamentais, hormonais, inflamatórias ou morfo-histológicas significativas nos machos F1 que receberam EBN por via transgeracional. A administração transgeracional de EBN mostrou-se menos prejudicial sobre os parâmetros observados nos ratos da geração F1 do que sobre os mesmos parâmetros observados nos ratos da geração F0, que receberam EBN por gavagem. Conclui-se, portanto, que a administração direta de EBN causa alterações comportamentais e fisiológicas, tanto em machos quanto nas fêmeas.

Luffa operculata (popularly known as buchinha-do-norte) is a plant used to fight sinusitis and also to terminate pregnancy. The influence of the administration of 1.0 mg/kg of aqueous extract of buchinha-do-norte (EBN) in pregnant rats (GD17 to GD21) was analyzed, as well as in males of the F1 generation, compared to F0 males. A behavioral evaluation of the females of the F0 generation and of the males of the F1 generation was carried out in an open field device and in a light-dark box. In F1 males, changes in the levels of corticosterone, adrenocorticotropic hormone (ACTH), melatonin and serum testosterone were analyzed, as well as the analysis of cytokines Il-1, Il-1, Il-6 and TNF-, and macroscopic and microscopic analysis of the testicles. F1 males (CGF1 and EGF1 control and treated groups) had their parameters ompared to F0 males (CGF0 and EGF0 control and treated groups). The F0 generation rats treated with EBN showed a decrease in behavioral parameters in the light-dark box, with an increase in the weight of the F1 generation males and females in the treated groups. F1 males did not show significant behavioral changes in relation to F0 males. F1 testicles did not show significant macroscopic changes, but microscopic changes were more significant for F0 treated males than for F1 males. For F1, Leydig cells were less frequent in EGF1 males. The number of Leydig cells decreased did not influence the amount of testosterone produced by F1 males, compared to F0 males. The cytokines IL-1 and Il-6 were increased in CGF0, corticosterone, decreased in CGF0, ACTH decreased in EGF1 and melatonin increased in EGF1. The direct administration of EBN in pregnant rats influenced the behavior and weight of F0 females and F1 males. In F1 males, in relation to F0, there were no significant behavioral, hormonal, inflammatory or morpho-histological differences in F1 males who received EBN vertically.

EFEITO DO GEL INTRAVAGINAL COM 4-VINILCICLOHEXENO DIEPÓXIDO SOBRE OS OVÁRIOS DE RATAS

A superpopulação de cães e gatos errantes gera prejuízos a saúde pública, biodiversidade e aos próprios animais que sobrevivem sem condições de bem-estar. Para o controle reprodutivo, o método mais comumente empregado é a esterilização, sendo as opções cirúrgicas (orquiectomia e ovariohisterectomia) as mais aplicadas. Porém, o método é ineficiente para o controle populacional em massa de animais errantes. Assim, métodos alternativos, menos invasivos vêm sendo estudados. Nesse interim, a esterilização química demonstra-se como alternativa promissora, mas com limitação de ter uso praticamente exclusivo em machos. Sabe-se que para o controle populacional eficaz, os métodos devem ser úteis em ambos os sexos. Neste contexto, o composto químico 4-vinilciclohexeno diepóxido (4-VCD), vem sendo utilizado em roedoras para induzir a perda de folículos ovarianos e mimetizar a menopausa humana. O composto apresenta ovotoxicidade seletiva, acelerando o processo de atresia em folículos primordiais e primários, culminando em falha ovariana prematura. Para tal, o composto é utilizado pela via intraperitoneal, considerada invasiva e passível de complicações. Vislumbrando a utilização do 4-VCD para o controle populacional de fêmeas errantes (cadelas e gatas) é necessário o estudo de uma via menos invasiva e eficaz. Assim, o objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do 4-VCD sobre os ovários e seu potencial quimioesterilizante, por meio de inoculação de gel intravaginal em modelos experimentais. Para tal, foram utilizadas 20 ratas Wistar, adultas, igual e aleatoriamente divididas em dois grupos, de acordo com o tratamento recebido: controle e tratadas com gel contendo 4-vinilciclohexeno diepóxido. O grupo controle recebeu 0,2mL de gel à base de quitosana e o grupo tratamento recebeu o mesmo gel, contendo 4-vinilciclohexeno diepóxido na dose de 160 mg/kg. As inoculações foram diárias por 15 dias consecutivos. As ratas foram avaliadas diariamente por citologia vaginal até a eutanásia. Os animais foram submetidos à eutanásia em dois momentos distintos (metade do grupo em cada): após 16 dias do início do tratamento (M1) ou após 30 dias (M2). Os ovários foram colhidos, preparados e avaliado à luz da microscopia óptica para contagem de folículos primordiais e primários e sua classificação em atrésicos ou saudáveis. Irregularidades no ciclo estral das ratas foram notadas no grupo tratado, com prolongamento nas fases de diestro em M1 e M2; em M2, observou-se ainda prolongamento da fase de estro. No grupo tratado com 4-VCD houve diminuição no número de ciclos estrais em relação ao controle. A avaliação folicular revelou aumento na proporção de folículos primordiais atrésicos no grupo tratado em comparação ao grupo controle nos dois momentos de avaliação. Em contrapartida, no grupo controle notou-se maior proporção de folículos primordiais saudáveis, quando comparado ao grupo tratamento, nos dois momentos. Na contagem global de folículos em M2, o grupo tratado apresentou maior média de folículos primordiais atrésicos comparado ao grupo controle. Deste modo, foi possível observar ação ovotóxica do 4-VCD pela via intravaginal em meio gel de quitosana. Contudo, o tratamento por 15 dias com gel intravaginal composto por 4-VCD na dose de 160 mg/kg não promoveu falha ovariana durante o período de experimento. Estudos futuros devem ser realizados com intuito de determinar tempo de exposição e dose ideal, suficiente para promover infertilidade em ratas.

The overpopulation of stray dogs and cats damages public health, biodiversity, and the animals themselves that survive without conditions of well-being. For reproductive control, the most commonly used method is sterilization, with surgical options (orchiectomy and ovariohysterectomy) being the most applied. However, the method is inefficient for mass population control of stray animals. Thus, alternative and less invasive methods have been studied. Therefore, chemical sterilization shows it self as a promising alternative, but with the limitation of having practically exclusive use in males. It is known that for effective population control, the methods must be useful in both sexes. In this context, the chemical compound 4-vinylcyclohexene diepoxide (4-VCD), has been used in rodents to induce loss of ovarian follicles and mimic human menopause. The compound shows selective ovotoxicity, accelerating the atresia process in primordial and primary follicles, culminating in premature ovarian failure. For this, the compound is used by the intraperitoneal route, considered invasive and prone to complications. In order to use the 4-VCD for the population control of wandering females (bitches and cats) it is necessary to study a less invasive and effective route. Thus, the objective of the present study was to evaluate the effect of 4-VCD on the ovaries and their chemosterilizing potential, through inoculation of intravaginal gel in experimental models. For this purpose, 20 adult Wistar rats were used, equally and randomly divided into two groups, according to the treatment received: control and treated with gel containing 4-VCD. The control group received 0.2 mL of chitosan-based gel and the treatment group received the same gel, containing 4-VCD at a dose of 160 mg/kg. The inoculations were daily for 15 consecutive days. The rats were evaluated daily by vaginal cytology until euthanasia. The animals were euthanized at two different times (half of the group each): 16 days after the start of treatment (M1) or after 30 days (M2). The ovaries were collected, prepared, and assessed under light microscopy to count primordial and primary follicles and their classification into healthy or atretic. Irregularities in the estrous cycle of rats were noted in the treated group, with prolongation in the diestrus phases in M1 and M2; in M2, prolongation of the estrus phase was also observed. In the group treated with 4-VCD, there was a decrease in the number of estrous cycles compared to the control. The follicular evaluation revealed an increase in the proportion of primordial atresia follicles in the treated group compared to the control group at both times of evaluation. In contrast, in the control group, there was a higher proportion of healthy primordial follicles, when compared to the treatment group, at both times. In the global follicle count in M2, the treated group had a higher mean of primordial atretic follicles compared to the control group. Thus, it was possible to observe the ovotoxic action of 4-VCD through the intravaginal route in chitosan gel. However, treatment for 15 days with intravaginal gel composed of 4-VCD at a dose of 160 mg/kg did not promote ovarian failure during the experiment period. Future studies should be carried out in order to determine the exposure time and ideal dose, sufficient to promote infertility in rats.

Avaliação do efeito protetor da melatonina exógena em neonatos nascidos de matrizes submetidas aos inseticidas metomil e cipermetrina durante a prenhez

A crescente utilização de agrotóxicos nas plantações tem preocupado a população quanto aos seus efeitos na saúde humana. Metomil e cipermetrina são praguicidas muito utilizados na agricultura mundial. A exposição intrauterina a tais compostos pode causar danos graves a embriões e fetos, seja pela ação direta do composto ao atravessar a barreira placentária, seja por efeitos indiretos. O mecanismo de ação desses praguicidas parece estar relacionado com um desequilíbrio no sistema de defesa antioxidante celular, causando aumento do estresse oxidativo e danos na molécula de DNA. Os danos celulares provocados pela exposição à praguicidas podem ser minimizados com a utilização de substâncias com potencial antioxidante, como a melatonina. A melatonina é um neuro-hormônio que estimula a ação de diversas enzimas com potencial antioxidante e suprime a atividade de enzimas próoxidantes, protegendo as células de danos oxidativos. Sendo assim, esse trabalho teve por objetivo avaliar o efeito protetor da melatonina exógena em ratas adultas e sua prole expostos ao metomil e cipermetrina durante a prenhez. Foram utilizadas trinta ratas adultas divididas em cinco grupos, a partir do primeiro dia de prenhez: Cn controle negativo; Mth recebeu 0,02 mg/kg/dia de metomil; Cyp recebeu 0,05 mg/kg/dia de cipermetrina; MthMl recebeu 0,02 mg/kg/dia de metomil combinado com 10 mg/kg/dia de melatonina; CypMl recebeu 0,05 mg/kg/dia de cipermetrina combinado com 10 mg/kg/dia de melatonina. Após o nascimento, as matrizes e seus respectivos filhotes, de cada grupo experimental, foram anestesiados e submetidos às análises. Para avaliar a presença de danos genéticos e mutações, das matrizes foram coletadas amostras de sangue e fígado, da prole foram coletados também fragmentos de encéfalo. Todos os tecidos foram utilizados para o ensaio cometa; enquanto o sangue também foi usado para o teste do micronúcleo. De modo geral, cipermetrina e metomil induziram dano genético nas mães e na sua prole. Houve variações de danos de acordo com os testes utilizados e com os tecidos analisados. Após o tratamento com melatonina foi observado uma diminuição significativa nos danos genéticos induzidos pela cipermetrina nas matrizes e sua prole; no entanto, a administração da melatonina não foi eficiente contra os danos genéticos causados pelo metomil. Fragmentos do fígado das matrizes também foram utilizados para análises histomorfométricas e imunohistoquímicas (PCNA e IL-1). A análise histopatológica no fígado dos animais apresentou padrões de normalidade, sem a presença de infiltrados inflamatórios, áreas apoptóticas e necróticas. Entretanto, foram observados hepatócitos hipertróficos e maior número de células hepáticas (hepatócitos). Houve um aumento na expressão do PCNA e da IL-1 no fígado das matrizes dos grupos que receberam apenas os inseticidas, e uma redução significativa no fígado das ratas dos grupos que receberam melatonina. Os resultados da presente pesquisa sugerem que, a exposição gestacional aos inseticidas metomil e cipermetrina, mesmo que em doses consideradas seguras durante a gestação, é considerado prejudicial à saúde. Por sua vez, a melatonina parece ser um agente promissor contra a hepatotoxicidade relatada para o metomil e cipermetrina.

The increasing use of pesticides in plantations has been worrying the population about their health human effects. Methomyl and cypermethrin are pesticides widely used in world agriculture. Intrauterine exposure to such compounds can cause serious damage to embryos and fetuses, either by direct action of the compound crossing the placental barrier or by indirect effects. The mechanism of action of these pesticides seems to be related to an imbalance in the cellular antioxidant defense system, causing increased oxidative stress and damage to DNA molecules. Cellular damage from exposure to pesticides can be minimized with the use of potentially antioxidant substances such as melatonin. Melatonin is a neurohormone that stimulates the action of several enzymes with antioxidant potential and suppresses the activity of pro-oxidant enzymes, protecting cells from oxidative damage. Thus, this study aimed to evaluate the protective effect of exogenous melatonin in adult rats and their offspring exposed to methomyl and cypermethrin during pregnancy. Thirty adult female rats were divided into five groups from the first day of pregnancy: Cn - negative control; Mth received 0.02 mg / kg / day of methomyl; Cyp received 0.05 mg / kg / day cypermethrin; MthMl received 0.02 mg / kg / day of methomyl combined with 10 mg / kg / day of melatonin; CypML received 0.05 mg / kg / day cypermethrin combined with 10 mg / kg / day melatonin. After birth, the mothers and their respective puppies, from each experimental group, were anesthetized and subjected to analysis. To assess the presence of genetic damage and mutations, samples of blood and liver were collected from the matrices, and fragments of the brain were also collected from the offspring. All tissues were used for the comet assay; while blood was also used for testing the micronucleus. In general, cypermethrin and metomil induced genetic damage in mothers and their offspring. There were variations in damage according to the tests used and the tissues analyzed. After treatment with melatonin, a significant decrease in genetic damage induced by cypermethrin was observed in the sows and their offspring; however, the administration of melatonin was not effective against the genetic damage caused by methomyl. Liver fragments from the matrices were also used for histomorphometric and immunohistochemical analyzes (PCNA and IL-1). Histopathological analysis of the animals' liver showed normal patterns, without the presence of inflammatory infiltrates or apoptotic and necrotic areas. However, hypertrophic hepatocytes and larger liver cells (hepatocytes) were observed. There was an increase in the expression of PCNA and IL1 in the liver of the mothers of the groups that received only the insecticides, and a significant reduction in the liver of the rats of the groups that received melatonin. The results of this research suggest that, the gestational exposure to the insecticides metomil and cypermethrin, even in doses considered safe during pregnancy, is considered harmful to health. In turn, melatonin appears to be a promising agent against the hepatotoxicity reported for methomyl and cypermethrin.

Efeitos do propil-parabeno e butil-parabeno na atividade reprodutiva de ratas Wistar adultas

As substâncias desreguladores endócrinas de diversas origens e propriedades químicas acomentem uma diversidade de mamíferos, animais silvestres e seres humanos, que podem interagir com o sistema reprodutivo feminino e prejudicar a homeostase hormonal. Dentro dessa classificação, os parabenos podem ser utilizados como conservantes em diversos produtos comerciais. Seus efeitos se tornam cada vez mais complexos em relação à idade, história reprodutiva, ambiente endócrino da espécime no momento da exposição, como também não é sabido todos os reais mecanismos desses compostos quando associados. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos dos parabenos em ratas Wistar durante um período de 90 dias consecutivos de exposição. Assim, as ratas foram distribuídas em quatro grupos experimentais: controle, que recebeu somente óleo de milho como veículo, e tratados com propil e buti-parabeno nas doses de 10 mg/kg, 100 mg/kg, ou 200 mg/kg e expostas via subcutânea. Foi utilizada a técnica de citologia vaginal para investigar a ciclicidade das fêmeas, bem como a caracterização das fases do ciclo estral pelo método Shorr. Além desses parâmetros, foram analisados aspectos morfológicos de ovários e útero, quantificação das estruturas ovarianas e avaliação ultraestutural de folículos pré-ovulatórios. Foram avaliados a concentração plasmática de estrógeno, peso corporal bem como o peso dos órgãos reprodutivos. Os resultados revelaram que o método Shorr, foi eficaz para identificar e caracterizar os tipos celulares encontrados no epitélio vaginal como a identificação de cada fase do ciclo estral. Além disso, o peso absoluto e relativo dos órgãos reprodutivos não apresentou diferença entre os grupos experimentais. A análise histológica dos ovários revelou que, todos os estágios foliculares permaneceram inalterados, como também a classificação morfológica dos Complexos Cumulus oophurus coletados. Porém, houve diminuição significativa de folículos totais primordiais e primários em fêmeas que receberam 10 e 200 mg/kg. Quanto aos folículos atrésicos houve maior incidência no grupo de 100mg/Kg. A avaliação ultraestrutural de folículos pré-ovulatórios confirmou a análise morfológica, pois permaneceram saudáveis, sem alterações a nível celular. A partir da avaliação histopatológica do útero, infiltrados leucocitários não apresentaram diferença nas proporções de células mononucleadas e polimorfonucleadas, como a intensidade. Os parâmetros histomorfométricos do tecido uterino não foram alterados como também a expressão de receptores estrogênicos (RE) no tecido uterino e ovariano. A intensidade de marcação dos receptores de progesterona no útero apresentaram diminuídas nas doses de 10 e 100 mg/Kg, e no tecido ovariano apenas a dose 100 mg/Kg. A partir dos parâmetros avaliados no presente estudo, sugere-se que após a exposição prolongada dos compostos de parabeno, a funcionalidade dos tecidos reprodutivos em fêmeas adultas pode ter sido prejudicada. Apesar da morfologia e estrutura dos órgãos sexuais permanecerem inalterados, mais estudos a nível celular e molecular precisam ser realizados para melhor entendimento da atuação conjunta dessas substâncias.

The endocrine disruption substances of many origins and chemistry properties affect a diversity of mammals, wild animals and human beings. These substances can interact with the female reproductive system and damage the hormonal homeostasis. In this classification, the paraben could be used as preservatives in different commercial products. Its effects get even worst and complex with the age, reproductive history, and endocrine environment of the specie in the moment of exposure of the drug. In complement, it is not known the actual mechanisms of those compounds when they are associated. Thus, the goal of this experiment was evaluate the effects of parabens in females Wistar during 90 consecutive days of exposure. Therefore, the females were divided in four experimental groups: Control group Corn oil; and a mixture of propil and butyl paraben with 10 mg/kg, 100 mg/kg and 200 mg/kg and exposed through the subcutaneous pathway. The vaginal cytology was performed to investigate the cyclicality as well as the characterization of the estrous phases by the Shor method. Besides that, morphological aspects of the ovary and uterus, counting of ovaries structure and ultrastructural of pre-ovulatory follicle. To complete the evaluation, the plasmatic estrogen, body weight and reproductive organ weight were assessed. The Shor method was effective to characterize and identify the cells types of the vaginal epithelium and identify the estrous cycle phase. Moreover, the relative and absolute weight have shown no difference between the experimental groups. The follicle stages had no alteration, as well as the morphological evaluating of the Cumulus oophurus by the histological analyses of the ovaries. However, there was decrease of primordial and primary follicles in females treated with 10 and 200 mg/kg. The ultrastructural evaluation of the pre-ovulatory follicles has shown no difference, confirming the morphological evaluation, with no cellular level alteration. From the histopathology evaluation, there was no difference in leukocytes infiltrates have not shown difference on proportions of mononucleated and polymorphonuclear cells, such as the intensity. No differences in the uterine tissue and expression of the estrogenic receptors were found. Regarding the progesterone receptors, there was a decrease of the expression in the uterus to the 10 and 100 mg/kg treatments, and to the 100 mg/kg dosage in the ovarian tissue. From the parameters evaluated in the present study, it is suggested that after the long exposure to the parabens, the function of the reproductive systems could be damaged. Although the morphology and the structure of the reproductive systems had no alteration, more molecular and cellular studies must be performed to the completely understand the action of these substances in association.

Efeitos da ingestão de cafeína durante a gestação e a lactação sobre a pele de ratas e de filhotes e sua relação com as concentrações séricas do cortisol materno / Effects of caffeine intake during pregnancy and lactation on the skin of rats and offspring and their relationship to maternal serum concentrations of cortisol

O objetivo deste trabalho foi verificar os efeitos da ingestão materna de diferentes doses de cafeína durante a gestação e a lactação, na pele de ratas-mães e filhotes, bem como sua relação com as concentrações séricas do cortisol materno. Vinte e quatro ratas Wistar adultas foram distribuídas em quatro grupos, representados pelo controle e tratados, com cafeína nas doses de 25, 50 e 100mg/kg. Os grupos tratados receberam cafeína por sonda orogástrica durante toda a gestação e a lactação. O controle recebeu água destilada como placebo. Foram avaliados e quantificados os diferentes tipos de folículos pilosos e a espessura da epiderme. A técnica de imuno-histoquímica, com o uso do anticorpo anti-CDC47, foi utilizada para avaliar a proliferação celular da epiderme e dos folículos pilosos das mães. Na mãe, também foram mensurados os níveis séricos de cortisol pela técnica da quimioluminescência. Os dados foram submetidos à análise de variância com comparação das médias pelos testes Kruskal-Wallis e SNK. Nos grupos tratados com cafeína nas doses de 25 e 50mg/kg, tanto as mães quanto seus filhotes apresentaram hipotricose e/ou alopecia focal. Apesar de a frequência de alterações macroscópicas das mães ter sido superior a dos filhotes, nestes as lesões, quando presentes, foram difusas. A análise histológica demonstrou calcinose de folículos pilosos nas mães e nos filhotes. Mas a morfometria somente revelou diferença significativa no número de folículos pilosos das mães, bem como redução significativa da proliferação celular dos folículos pilosos do grupo tratado com 50mg/kg de cafeína. Os níveis de cortisol materno somente foram significativamente elevados no grupo tratado com 100mg/kg de cafeína. Conclui-se que a cafeína ingerida pelas ratas gestantes e lactantes pode causar lesões cutâneas tanto nas mães quanto nos filhotes, caracterizadas por hipotricose e/ou alopecia, independentemente dos níveis séricos do cortisol materno.(AU)

The aim of this study was to investigate the effects of maternal caffeine intake during pregnancy and lactation on the skin of rats and their offspring, as well as their relationship to maternal serum levels of cortisol. 24 adult Wistar rats were equally divided into four groups represented by the control and treated with caffeine at doses of 25, 50 and 100mg/kg. The groups received caffeine by orogastric tube during the entire pregnancy and lactation. The control received distilled water as placebo. Different types of hair follicles and the thickness of the epidermis were assessed and quantified. Immunohystochemistry technique using antibody anti-CDC47 was used to evaluate cellular proliferation of the epidermis and hair follicles of the mothers. Also in the mothers, serum levels of cortisol were measured by the chemiluminescence technique. Data were submitted to analysis of variance comparing mediums by Kruskall Wallis Test and SNK. In groups treated with caffeine 25 and 50mg/kg, both mothers and their puppies had focal alopecia and/or hypotrichosis. Despite the higher frequency of macroscopic changes on the mothers, these lesions were diffuse when present on the puppies. Histological analysis showed calcinosis of hair follicles in the mothers and their puppies. But morphometry revealed significant difference in the number of hair follicles from mothers, as well as a significant reduction of cell proliferation of hair follicles in the group treated with 50mg/kg of caffeine. Maternal cortisol levels were significantly elevated in the group treated with 100mg/kg of caffeine. It is concluded that caffeine intake by pregnant and lactating rats can cause skin lesions in both the mothers and their offspring, characterized by alopecia and/or hypotrichosis, regardless of serum levels of maternal cortisol.(AU)

Avaliação in vitro de condrócitos da cartilagem articular e da diferenciação osteogênica das células tronco da medula óssea extraídas da prole de ratas tratadas com etanol

Foram realizados dois estudos para avaliar os efeitos do consumo materno de etanol sobre os condrócitos da cartilagem articular e na diferenciação osteogênica das células tronco mesenquimais da medula óssea (CTM-MO) da prole. Foram utilizadas 13 ratas Wistar adultas distribuídas em dois grupos experimentais, grupo controle e o grupo tratado com etanol. As ratas do grupo etanol e controle, receberam por gavagem diária, a partir do nono dia de gestação, solução alcoólica 40% e água destilada, respectivamente até o trigésimo dia de lactação. No dia do parto, foram eutanasiados quatro neonatos por fêmea e, aos 30 dias de lactação, três filhotes por fêmea. O primeiro estudo avaliou, in vitro, o efeito do consumo materno de etanol sobre os condrócitos da cartilagem articular. Os condrócitos foram extraídos das cartilagens articulares e cultivados em meio condrogênico por sete, 14 e 21 dias. Foram realizados os testes de conversão do MTT, atividade de fosfatase alcalina, porcentagem de células por campo e porcentagem de áreas PAS+ em cultura 3D. Aos 21 dias, foi realizada a quantificação dos transcritos gênicos para agrecano, Sox-9, colágeno tipo II, colágeno X, Runx-2 e VEGF pelo RT-PCR em tempo real. O segundo estudo avaliou o efeito do consumo materno de etanol durante a gestação e lactação sobre a diferenciação osteogênica CTM-MO dos filhotes ao desmame. As CTM-MO foram extraídas dos membros pélvicos e cultivadas em meio osteogênico por sete, 14 e 21 dias. Foram realizados os testes de conversão do MTT, atividade de fosfatase alcalina e porcentagem de células por campo. Aos 21 dias, foram realizados a quantificação do tamanho médio dos nódulos mineralizados e a quantificação dos transcritos gênicos para osteopontina, osteocalcina, BMP-2, Runx-2 e colágeno tipo I por RT-PCR em tempo real. As médias foram comparadas pelo teste t de student e as diferenças foram consideradas significativas se p<0,05. Os neonatos das mães que receberam etanol foram menos pesados quando comparados aos neonatos controle. A cultura dos condrócitos do grupo etanol apresentou maior conversão de MTT, maior atividade de fosfatase alcalina e maior porcentagem de células relação ao grupo controle em todos os períodos. Não houve diferença entre ambos os grupos na porcentagem de áreas PAS+ em cultura 3D. Houve maior expressão de colágeno tipo II e menor expressão de Sox-9 no grupo etanol 15 em relação ao grupo controle. O peso dos filhotes, ao desmame, das mães que receberam etanol foi significativamente menor quando comparado ao controle. As CTM-MO do grupo etanol apresentaram menor conversão de MTT aos sete dias de diferenciação osteogênica porém maior atividade de fosfatase alcalina, maior porcentagem de células, maior tamanho médio dos nódulos mineralizados bem como maior expressão de BMP-2, osteopontina e osteocalcina. Conclui-se que o consumo materno de etanol durante a gestação e lactação altera, in vitro, o fenótipo e a atividade de síntese dos condrócitos dos neonatos bem como aumenta a diferenciação osteogênica das CTM-MO da prole ao desmame

Two studies were performed to evaluate the effects of maternal ethanol consumption on articular cartilage chondrocytes and on osteogenic differentiation of offspring bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSCs). Thirteen adult female Wistar rats were divided into two experimental groups, the control group and the ethanol-treated group. The rats of the ethanol and control group received by daily gavage, from the ninth day of gestation, 40% alcohol solution and distilled water, respectively until the thirtieth day of lactation. On the day of delivery, four newborns were euthanized per female and, at 30 days of lactation, three pups per female. The first study evaluated in vitro the effect of maternal ethanol consumption on articular cartilage chondrocytes. Chondrocytes were extracted from articular cartilage and cultivated in chondrogenic medium for seven, 14 and 21 days. MTT conversion tests, alkaline phosphatase activity, percentage of cells per field and percentage of PAS+ areas in 3D culture were performed. At 21 days, the quantification of gene transcripts for agrecan, Sox-9, collagen type II, collagen X, Runx-2 and VEGF was performed by real-time RT-PCR. The second study evaluated the effect of maternal ethanol consumption during pregnancy and lactation on BMMSCs osteogenic differentiation of pups at weaning. The BMMSCs were extracted from the pelvic limbs and cultured in osteogenic medium for seven, 14 and 21 days. MTT conversion, alkaline phosphatase activity and cell percentage per field tests were performed. At 21 days, the average size of the mineralized nodules was quantified and the gene transcripts were quantified for osteopontin, osteocalcin, BMP-2, Runx-2 and collagen I by real-time RT-PCR. Means were compared by Student's t-test and differences were considered significant if p <0.05. Neonates of mothers receiving ethanol were less heavy when compared to control neonates. The chondrocyte culture of the ethanol group showed higher MTT conversion, higher alkaline phosphatase activity and higher percentage of cells compared to the control group in all periods. There was no difference between both groups in the percentage of PAS+ areas in 3D culture. There was higher expression of collagen type II and lower expression of Sox-9 in the ethanol group compared to the control group. The weight of pups at weaning of mothers receiving ethanol was significantly lower when compared to control. BMMSCs ethanol group showed lower MTT conversion after seven days of osteogenic differentiation but 17 higher alkaline phosphatase activity, increased percentage of cells larger average size of mineralized nodules as well as increased expression of BMP-2, osteopontin and osteocalcin. In conclusion, maternal ethanol consumption during pregnancy and lactation alters, in vitro, the phenotype and chondrocyte synthesis activity of neonates, as well as increases the osteogenic differentiation of BMMSCs from weaning offspring

AÇÃO ANTIOFÍDICA DA CREOLINA® FRENTE A PEÇONHA DE Bothrops jararaca EM RATOS: ASPECTOS CLÍNICOS, HEMATOLÓGICOS E HISTOPATOLÓGICOS

RESUMO GERAL Os acidentes ofídicos representam um grave problema de saúde única no mundo, além de prejuízos econômicos nos sistemas de produção animal. No Brasil, serpentes do gênero Bothrops são responsáveis pela maioria dos acidentes. O tratamento específico preconizado no Brasil é a utilização do soro antibotrópico pentavalente associado ao tratamento auxiliar sintomático, de acordo com a gravidade do acidente. No entanto, essa conduta terapêutica apresenta dificuldades na obtenção e distribuição, alto custo, reações imunológicas consideráveis e não é eficaz frente aos danos teciduais locais causados pela peçonha. Diante disso, novas terapias que tratem os efeitos do veneno e/ou complementem a soroterapia se fazem necessárias. Este estudo tem como objetivo avaliar a possível atividade antiofídica da Creolina® frente a peçonha de Bothrops jararaca. Em ratas Wistar adultas, foi inoculado a peçonha botrópica por via intramuscular, e imediatamente após administrada Creolina® por via oral, tópica, intramuscular e a mistura: (Peçonha + Creolina®), por via intramuscular. Os animais foram avaliados clinicamente por oito horas, em seguida eutanasiados para coleta de amostras de sangue e tecidos. Os grupos que tiveram contato com a Creolina® por via oral, tópica e muscular separadamente desenvolveram a sintomatologia local e achados laboratoriais semelhantes ao grupo que recebeu apenas o veneno. Já os animais inoculados com a peçonha junto à Creolina® em uma mistura, não apresentaram sinais característicos da ação local do veneno (necrose, hemorragia) e apresentaram parâmetros hematológicos dentro da normalidade. Tais resultados sugerem que a Creolina® isoladamente não apresente ação antiofídica, porém quando misturada a peçonha botrópica possa inativar parcialmente seus componentes bioativos. Diante disso, mais estudos são necessários para avaliação dessa terapia alternativa utilizada empiricamente.

ABSTRACT Snakebites represent a serious one health problem in the world, as well as economic losses in animal production systems. In Brazil, snakes of the genus Bothrops are responsible for most accidents. The specific treatment recommended in Brazil is the use of pentavalent antibotropic serum associated to the symptomatic auxiliary treatment, according to the severity of the accident. However this therapeutic treatment presents difficulties in obtaining and distribution, high cost, considerable immunological reactions and is not effective against to local tissue damage caused by venom. Therefore, new therapies that treat the effects of venom and/or complement the serum therapy are necessary. This study aims to evaluate the possible antiofidic activity of Creolin® against Bothrops jararaca venom. In adult Wistar rats, the bothropic venom was inoculated intramuscularly and immediately after administration of Creolin® orally, topically, intramuscularly, and the mixture: (Venom + Creolin®), intramuscularly. The animals were clinically evaluated for eight hours, then euthanized for collection of blood and tissue samples. Groups that had oral, topical, and muscle contact with Creolin® separately developed local symptomatology and laboratory findings similar to those receiving only the venom. However, the animals inoculated with the venom with Creolin® in a mixture did not show signs of local venom action (necrosis, hemorrhage) and presented hematological parameters within the normal range. These results suggest that Creolin® alone does not present antiofidic action, but when mixed the bothropic venom can partially inactivate its bioactive components. Therefore, more studies are needed to evaluate this alternative therapy used empirically.

RESPOSTA INFLAMATÓRIA E RESISTÊNCIA MECÂNICA DA PAREDE ABDOMINAL DE RATAS APÓS LAPARORRAFIA COM FIO DE QUITOSANA

Os materiais à base de quitosana são uma classe em desenvolvimento por possuírem excelentes características para utilização nas ciências biomédicas. Em relação ao fio de quitosana, poucas pesquisas foram realizadas e não há estudos que avaliaram sua resposta à inflamação sistêmica e à resistência mecânica. Diante disso, a presente tese tem por objetivo analisar, em ratas adultas submetidas à laparorrafia com fio de quitosana, as possíveis reações inflamatórias sistêmicas, por meio da análise eletroforética em gel de poliacrilamida (SDSPAGE) e sua relação com os achados hematológicos e bioquímicos. Além disso, investigar a resistência mecânica da parede abdominal, as prováveis alterações inflamatórias locais e a formação do colágeno, por meio das análises tensiométrica e histopatológica. Para tal, 54 ratas adultas (Rattus norvegicus) foram divididas em três grupos, basal (sem cirurgia), quitosana e polidioxanona (padrão ouro), avaliados com três, sete, 14 e 21 dias póslaparorrafia. O resultado foi que os fios de quitosana e polidiaxonona possuem comportamentos semelhantes na resposta inflamatória sistêmica e local, apesar do fio de polidioxanona ter resposta mais intensa. Na avaliação de resistência, também apresentaram resultados semelhantes, sendo que com a polidioxanona, a resistência foi melhor no vigésimo primeiro dia, tendo como conclusão que o fio de quitosana, apesar do pequeno número de pesquisas realizadas, é um fio promissor. Com isso, abrem-se perspectivas para a utilização do fio de quitosana em cirurgias na medicina veterinária. Todavia, por tratar-se de um novo produto, outros estudos devem ser realizados, mesmo que em áreas distintas, bem como, em outras espécies/ tecidos e em diferentes períodos de avaliação.

Chitosan based materials are a class in development because they possess excellent characteristics for use in the biomedical sciences. Regarding chitosan suture, few studies have been performed and no studies have evaluated its response to systemic inflammation and mechanical resistance. Therefore, the aim of this thesis is to analyze the possible systemic inflammatory reactions in adult rats subjected to laparorrhaphy with chitosan suture by means of the electrophoretic analysis of polyacrylamide gel (SDS-PAGE) and its relation with the hematological findings and biochemical. In addition, investigate the mechanical resistance of the abdominal wall, the probable local inflammatory changes and the formation of collagen, through the tensiometric and histopathological analyzes. To that end, 54 adult rats (Rattus norvegicus) were divided into three groups, basel group (without surgery), chitosan and polydioxanone (gold standard), evaluated at three, seven, 14 and 21 days after laparorrhaphy. The result was that the chitosan and polydiaxonone wires have similar behaviors in the systemic and local inflammatory response, although the polydioxanone thread has a more intense response. In the evaluation of resistance, they also presented similar results, and with polydioxanone, resistance was better on the twenty-first day, with the conclusion that chitosan suture, despite the small number of researches, is a promising thread. With this, perspectives are opened for the use of chitosan suture in surgeries in veterinary medicine. However, as this is a new product, other studies should be carried out, even in different areas, as well as in other species / tissues and at different evaluation periods.

Efeito dos hormônios tireoidianos no perfil angiôgenico e imune da decídua e glândula metrial de ratas e seu impacto na decidualização, vascularização e população de células uNKs na interface materno-fetal.

Durante a gestação, a decídua e a glândula metrial coordenam o processo de placentação permitindo a troca seletiva de nutrientes e metabólitos entre a mãe e o feto e dão subsídio para a permanência do embrião/feto semi-alogênico em íntimo contato com o útero. Mas, para o sucesso da gestação é fundamental que haja a interação coordenada entre a placenta e o útero comandanda por vários hormônios, dentre os quais os hormônios tireoidianos. Foram realizados dois experimentos distintos. O primeiro teve como objetivo avaliar a decidualização e a expressão de fatores angiogênicos na decídua e glândula metrial de ratas com hipotireoidismo e tratadas com L-tiroxina (T4) e o segundo objetivou avaliar o perfil de expressão espaçotemporal de fatores imunológicos e as células Natural Killer uterinas (uNKs) na decídua e glândula metrial de ratas com hipotireoidismo e tratadas com L-tiroxina (T4). Para o primeiro experimento foram utilizadas 72 ratas Wistar adultas distribuídas nos grupos hipotiroideo, tratado com T4 e controle. Aos 10, 14 e 19 dias de gestação (DG), a decídua e a glândula metrial foram coletadas para avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica da expressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), Flk-1 e Tie-2. Para o segundo experimento foram utilizadas 108 ratas Wistar adultas, distribuídas em três grupos experimentais, hipotireoideo, tratado com T4 e controle. As ratas foram eutanasiadas aos 7, 10, 12, 14 e 19 DG. Avaliou-se a detecção imunoistoquímica de IFN, MIF, IL15, iNOS e a marcação com Lectina DBA para evidenciação das células uNK DBA+ na decídua e glândula metrial. Além disso, avaliou-se a expressão gênica de Ifn, Il15 e iNos por RT-PCR em tempo real. Os dados de ambos os experimentos foram analisados pelo teste Student-Newman-Keuls (SNK). No primeiro experimento, evidenciou-se que o hipotireoidismo reduziu a área da decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, o VEGF aumentou aos 10 e 14 DG e o Flk-1 apenas aos 14 DG, nos animais hipotireoideos, mas ambos foram reduzidos aos 19 DG na glândula metrial, sem alterar significativamente a área ocupada pelos vasos sanguíneos. As ratas tratadas com T4 apresentaram aumento do numero de vasos sanguíneos deciduais aos 10 e 19 DG. Além disso, aos 10 DG, o excesso de T4 resultou no aumento de Flk-1 na decídua e na glândula metrial. O hipotireoidismo aumentou o Tie-2 aos 10 e 19 DG na decídua e na glândula metrial. O segundo experimento mostrou que a expressão de fatores pró e anti-inflamatórios estudados oscilou ao longo da gestação em todos os grupos tanto na decídua quanto na glândula metrial. O hipotireoidismo aumentou a expressão proteica de iNOS aos 7 DG, IL15 e MIF aos 10 e 12 dias, IFN e MIF aos 14 DG na decídua e/ou glândula metrial e dos transcritos gênicos para iNos aos 12 e 19 DG e para Ifn e Il5 aos 14 DG. Além disso, o hipotireoidismo reduziu a expressão proteica dos fatores pró-inflamatórios MIF, aos 7 DG, e IFN, aos 12 dias, e do transcrito gênico para Ifn aos 10 e 19 DG. O hipotireoidismo também reduziu a expressão proteica do fator anti-inflamatório iNOS aos 12, 14 e 19 DG e reduziu seus transcritos gênicos aos 10 e 14 DG. Os grupos tratados com T4 apresentaram aumento da expressão proteica de IFN, IL15 e MIF aos 7 DG, IL15, iNOS e MIF aos 10 DG, MIF aos 12 DG na glândula metrial, IFN e MIF na decídua basal aos 14 DG. Além disso, o tratamento com T4 reduziu a expressão proteica de IFN aos 12 e 19 DG, IL15 aos 12 e 14 DG e iNOS aos 12 e 14 DG. Aos 7 e 10 DG houve a redução da migração de células uNK DBA+ para a decídua em ambos os grupos de tratamento. Entretanto, aos 12 DG houve aumento no grupo tratado com T4 e aos 14 DG redução no grupo hipotireoideo. Pode-se concluir com o primeiro experimento, que o hipotireoidismo reduz a área da decídua e aumenta a expressão de VEGF, Tie-2 e Flk-1. O excesso de T4 promove a angiogênese tecidual ao aumentar o número de vasos na decídua associado ao aumento da expressão de Flk-1. Com o segundo experimento conclui-se que, tanto o hipotireoidismo quanto o tratamento com tiroxina alteram o perfil de expressão espaço22 temporal dos fatores imunológicos da decídua e da glândula metrial ao longo da gestação. A redução dos fatores pró-inflamatórios IFN e IL15 é mais predominante no grupo tratado com T4, enquanto o hipotireoidismo compromete o desenvolvimento de um ambiente antiinflamatório na interface materno-fetal, uma vez que a redução do fator anti-inflamatório iNOS e das células uNK DBA+ é principalmente evidenciada neste grupo

During gestation, the decidua and metrial gland coordinate the placentation process, allowing the selective exchange of nutrients and metabolites between mother and fetus, and provides subsidy for the semi-allogeneic embryo/fetus to remain in close contact with the uterus. But for the success of gestation, it is essential that there is a coordinated interaction between the placenta and the uterus by various hormones, among which thyroid hormones. Two different experiments were performed. The first one was goal to evaluate the decidualization and expression of angiogenic factors and the second one evaluates the spatiotemporal expression profile of immunological factors and the uterine Natural Killer cells (uNKs) in the decidua and metrial gland of rats with hypothyroidism and treated with L-tyroxine (T4). For the first experiment, 72 adults Wistar rats were distributed in the hypothyroid, T4 treated and control groups. At 10, 14 and 19 days of gestation (DG), the decidua and metrial gland were collected for histomorphometric and immunohistochemical evaluation of vascular endothelial growth factor (VEGF), Flk-1 and Tie-2 expression. For the second experiment, 108 adults Wistar rats were distributed in three experimental groups, hypothyroid, treated with T4 and control. The rats were euthanized at 7, 10, 12, 14 and 19 DGs. The immunohistochemical detection of IFN, MIF, IL15, iNOS and the labeling with Lectin DBA were evaluated for the detection of uNK DBA+ cells in the decidua and metrial gland. In addition, the expression of Ifn, Il15 and iNos by real-time RT-PCR was evaluated. Data from both experiments were analyzed by the Student- Newman-Keuls (SNK) test. In the first experiment, it was shown that hypothyroidism reduced the decidua area at 10 and 19 DG. In addition, VEGF increased at 10 and 14 DG and Flk-1 only at 14 DGs in the hypothyroid animals, but both were reduced to 19 DGs in the metrial gland, without significantly altering the area occupied by the blood vessels. The rats treated with T4 showed an increase in the number of deciduous blood vessels at 10 and 19 DG. In addition, at 10 DGs, excess T4 resulted in the increase of Flk-1 in the decidua and in the metrial gland. Hypothyroidism increased Tie-2 at 10 and 19 DGs in the decidua and metrial gland. The second experiment showed that the expression of pro and anti-inflammatory factors studied oscillated throughout gestation in all groups, both in the decidua and in the metrial gland. Hypothyroidism increased the protein expression of iNOS at 7 DGs, IL15 and MIF at 10 and 12 days, IFN and MIF at 14 DGs in the decidua and/or metrial gland and the gene transcripts for iNos at 12 and 19 DGs and for Ifn and Il5 To 14 DGs. In addition, hypothyroidism reduced the protein expression of the proinflammatory factors MIF, at 7 DG, and IFN at 12 days, and of the gene transcript for Ifn at 10 and 19 DGs. Hypothyroidism also reduced the protein expression of the anti-inflammatory factor iNOS at 12, 14 and 19 DG and reduced its gene transcripts at 10 and 14 DGs. The T4 treated groups showed increased expression of IFN, IL15 and MIF at 7 DG, IL15, iNOS and MIF at 10 DG, MIF at 12 DGs in the metrial gland, IFN and MIF at the baseline decidua at 14 DGs. In addition, treatment with T4 reduced the protein expression of IFN at 12 and 19 DG, IL15 at 12 and 14 DG and iNOS at 12 and 14 DGs. At 7 and 10 DG there was a reduction of migration of uNK DBA+ cells to decidua in both treatment groups. However, at 12 DG there was an increase in the group treated with T4 and at 14 DG a reduction in the hypothyroid group. It can be concluded from the first experiment that hypothyroidism reduces the decidua area and increases the expression of VEGF, Tie-2 and Flk-1. Excess T4 promotes tissue angiogenesis by increasing the number of vessels in the decidua associated with increased expression of Flk-1. With the second experiment it was concluded that both hypothyroidism and thyroxine treatment altered the spatiotemporal expression profile of the immunological factors of the decidua and metrial gland throughout pregnancy. The reduction of the proinflammatory factors IFN and IL15 is more predominant in the group treated with T4, whereas hypothyroidism compromises the development of an anti-inflammatory environment at 24 the feto-maternal interface, since the reduction of the anti-inflammatory factor iNOS and of the uNK DBA+ cells is mainly evidenced in this group.