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1.
Acta cir. bras ; 36(9): e360904, 2021. tab, graf
Artigo em Inglês | LILACS, VETINDEX | ID: biblio-1345023

Resumo

ABSTRACT Purpose: The protective effect of silibinin on kidney and lung parenchyma during hepatic ischemia/reperfusion injury (IRI) is explored. Methods: Sixty-three Wistar rats were separated into three groups: sham; control (45 min IRI); and silibinin (200 μL silibinin administration after 45 min of ischemia and before reperfusion). Immunohistochemistry and real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) were used to evaluate the expression levels of MMP2, MMP3, MMP9, and TIMP2 on kidney and lung. Results: Comparing sham vs. control groups, confirmed that hepatic IRI increased both renal and lung MMP2, MMP3, MMP9 and TIMP2 expressions starting at 180 min (p<0.001). Comparison of the control vs. silibinin groups showed a statistically significant decrease in the expression levels of MMP2, MMP3, and MMP9 and increase of TIMP2 in kidney and lung parenchyma. The starting point of this decrease was at 120 min after reperfusion, both for kidney and lung parameters, and it was statistically significant at 240 min (p<0.001) for kidney, while silibinin showed a peak of lung protection at 180 min after hepatic reperfusion (p<0.001). Conclusions: Hepatic IRI causes distant kidney and lung damage, while a statistically significant protective action, both on kidney and lung parenchyma, is conveyed by the intravenous administration of silibinin.


Assuntos
Animais , Ratos , Traumatismo por Reperfusão/prevenção & controle , Traumatismo por Reperfusão/tratamento farmacológico , Metaloproteinase 2 da Matriz , Ratos Wistar , Metaloproteinase 3 da Matriz , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-2 , Metaloproteinase 9 da Matriz , Silimarina , Isquemia , Rim , Hepatopatias , Pulmão
2.
Ci. Anim. bras. ; 21: e-58640, Aug. 6, 2020. ilus, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-32005

Resumo

The aim of this study was to perform the immunostaining of MMP-9 and MMP-2 and its inhibitors, TIMP-1 and TIMP-2, on normal and neoplastic canine mammary tissue in order to evaluate the behavior of these proteins in extracellular matrix (ECM) remodeling in different neoplastic mammary types. Thus, 48 samples of canine mammary tissue were analyzed, 14 of which complex carcinomas, 13 tubulopapillary carcinomas, six single adenomas and 15 normal mammary tissue. There were differences in MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 according to mammary histomorphology, and MMP-9 presented increased immunoexpression in epithelial and stromal cells in tubulopapillary and complex carcinomas. TIMP-1 exhibited reduced immunostaining in the stromal cells of the complex carcinomas and TIMP-2 enhanced immunostaining in the epithelial cells of tubulopapillary carcinomas. There was a positive correlation between MMP-9 and TIMP-1 in epithelial and stromal cells regarding immunostaining intensity and number of labeled cells in the normal breast. There was a positive correlation between MMP-9 and TIMP-2 in the epithelial cells of tubulopapillary carcinomas. It is concluded that balanced activity between MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 maintains normal canine mammary tissue homeostasis while increased immunoexpression of MMP-9 and TIMP-2 and reduced TIMP- 1 in carcinomas suggest a favorable condition for tumor evolution.(AU)


Este estudo teve como objetivo realizar a imunomarcação de MMP-9 e MMP-2 e seus inibidores, TIMP-1 e TIMP-2, no tecido mamário canino normal e neoplásico, a fim de avaliar o comportamento dessas proteínas no remodelamento da matriz extracelular (MEC) em diferentes tipos neoplásicos mamários. Foram analisadas 48 amostras de tecido mamário canino, sendo 14 carcinomas complexos, 13 carcinomas tubulopapilares, seis de adenomas simples e 15 mamas sem alterações. Houve diferença em MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 de acordo com a histomorfologia mamária, sendo que MMP-9 apresentou maior imunoexpressão em células epiteliais e estromais em carcinomas tubulopapilares e complexos. TIMP-1 exibiu menor imunomarcação nas células estromais dos carcinomas complexos e TIMP-2 maior imunomarcação nas células epiteliais dos carcinomas tubulopapilares. Houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-1 nas células epiteliais e estromais quanto à intensidade de imunomarcação e número de células marcadas na mama normal. Houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-2 nas células epiteliais dos carcinomas tubulopapilares. Conclui-se que a atividade equilibrada entre MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 mantém a homeostase do tecido mamário canino normal enquanto a imunoexpressão aumentada de MMP-9 e TIMP-2 e a imunoexpressão reduzida de TIMP-1 nos carcinomas sugere condição propícia à evolução tumoral.(AU)


Assuntos
Animais , Feminino , Cães , Metaloproteinase 9 da Matriz/imunologia , Metaloproteinase 2 da Matriz/imunologia , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-2 , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-1 , Glândulas Mamárias Animais/citologia , Neoplasias Mamárias Animais , Imuno-Histoquímica/veterinária , Homeostase
3.
Ciênc. anim. bras. (Impr.) ; 21: e, 23 mar. 2020. ilus, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: biblio-1473765

Resumo

The aim of this study was to perform the immunostaining of MMP-9 and MMP-2 and its inhibitors, TIMP-1 and TIMP-2, on normal and neoplastic canine mammary tissue in order to evaluate the behavior of these proteins in extracellular matrix (ECM) remodeling in different neoplastic mammary types. Thus, 48 samples of canine mammary tissue were analyzed, 14 of which complex carcinomas, 13 tubulopapillary carcinomas, six single adenomas and 15 normal mammary tissue. There were differences in MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 according to mammary histomorphology, and MMP-9 presented increased immunoexpression in epithelial and stromal cells in tubulopapillary and complex carcinomas. TIMP-1 exhibited reduced immunostaining in the stromal cells of the complex carcinomas and TIMP-2 enhanced immunostaining in the epithelial cells of tubulopapillary carcinomas. There was a positive correlation between MMP-9 and TIMP-1 in epithelial and stromal cells regarding immunostaining intensity and number of labeled cells in the normal breast. There was a positive correlation between MMP-9 and TIMP-2 in the epithelial cells of tubulopapillary carcinomas. It is concluded that balanced activity between MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 maintains normal canine mammary tissue homeostasis while increased immunoexpression of MMP-9 and TIMP-2 and reduced TIMP- 1 in carcinomas suggest a favorable condition for tumor evolution.


Este estudo teve como objetivo realizar a imunomarcação de MMP-9 e MMP-2 e seus inibidores, TIMP-1 e TIMP-2, no tecido mamário canino normal e neoplásico, a fim de avaliar o comportamento dessas proteínas no remodelamento da matriz extracelular (MEC) em diferentes tipos neoplásicos mamários. Foram analisadas 48 amostras de tecido mamário canino, sendo 14 carcinomas complexos, 13 carcinomas tubulopapilares, seis de adenomas simples e 15 mamas sem alterações. Houve diferença em MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 de acordo com a histomorfologia mamária, sendo que MMP-9 apresentou maior imunoexpressão em células epiteliais e estromais em carcinomas tubulopapilares e complexos. TIMP-1 exibiu menor imunomarcação nas células estromais dos carcinomas complexos e TIMP-2 maior imunomarcação nas células epiteliais dos carcinomas tubulopapilares. Houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-1 nas células epiteliais e estromais quanto à intensidade de imunomarcação e número de células marcadas na mama normal. Houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-2 nas células epiteliais dos carcinomas tubulopapilares. Conclui-se que a atividade equilibrada entre MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 mantém a homeostase do tecido mamário canino normal enquanto a imunoexpressão aumentada de MMP-9 e TIMP-2 e a imunoexpressão reduzida de TIMP-1 nos carcinomas sugere condição propícia à evolução tumoral.


Assuntos
Feminino , Animais , Cães , Glândulas Mamárias Animais/citologia , Inibidor Tecidual de Metaloproteinase-1 , /imunologia , Metaloproteinase 9 da Matriz/imunologia , Homeostase , Imuno-Histoquímica/veterinária , Neoplasias Mamárias Animais
4.
Acta cir. bras. ; 33(11): 945-953, Nov. 2018. tab, graf
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-17293

Resumo

Purpose:To investigate the effect of oxymatrine on periodontitis in rats and related mechanism. Methods: Ninety SD rats were divided into control, model, 10, 20 and 40 mg/kg oxymatrine and tinidazole groups. The periodontitis model was established in later 5 groups. The 10, 20 and 40 mg/kg oxymatrine groups were intragastrically administrated with 10, 20 and 40 mg/kg oxymatrine, respectively. The tinidazole group was intragastrically administrated with 100 mg/kg tinidazole. The treatment duration was 4 weeks. The tooth mobility, gingival and plaque indexes, serum inflammatory factor levels and gingival tissue matrix metalloproteinases (MMPs) and tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP) protein levels were detected. Results: After treatment, compared with model group, in 40 mg/kg oxymatrine group the rat general conditions were obviously improved, the tooth mobility, gingival index and plaque index were significantly decreased (P<0.05), the serum tumor necrosis factor-α, interleukin-1β and prostaglandin E2 levels were significantly decreased (P<0.05), the MMP-2 and MMP-9 protein levels were significantly decreased (P<0.05), and the TIMP-2 protein level was significantly increased (P<0.05). Conclusions: Oxymatrine can alleviate the experimental periodontitis in rats. The mechanism may be related to its inhibiting inflammatory factor secretion and regulating MMPs/TIMP protein expression.(AU)


Assuntos
Animais , Ratos , Periodontite/terapia , Periodontite/veterinária , Metaloproteinases da Matriz , Gengiva
5.
Semina Ci. agr. ; 39(5): 1981-1992, Sept.-Oct. 2018. ilus, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-22757

Resumo

This study evaluated the activity of the ethanolic extract of pequi peel (EEPP) and immunostaining with matrix metalloproteinases 2 and 9 (MMP2 and MMP9), and tissue inhibitor of metalloproteinases 1 and 2 (TIMP1 and TIMP2) in the myocardium of rats subjected to acute cardiotoxicity using doxorubicin (DOX). Thirty Wistar rats (six groups of five animals) were used as follows: sham group (SG), water and saline; group G1, 16 mg/kg of DOX and 300 mg/kg of EEPP for 17 days; group G2, 16 mg/kg of DOX and 600 mg/kg of EEPP for 17 days; group G3, 16 mg/kg of DOX and 300 mg/kg of EEPP for 10 days; group G4, 16 mg/kg of DOX and 600 mg/kg of EEPP for 10 days; and control group (CG), 16 mg/kg of DOX. Three days after administering DOX (day 17), euthanasia was performed, and samples were collected for anatomopathological analysis. Myocyte vacuolar degeneration, cardiomyocyte disorganization and myofibrillar fragmentation, necrosis, mononuclear inflammatory infiltrate, Anitschkow cells, fibrosis, congestion, and edema were observed in the hearts of DOX recipients. In G1 and G2, EEPP attenuated myocyte vacuolar degeneration whereas in G4, EEPP attenuated cardiomyocyte disorganization. The percentage of cells immunoreactive for TIMP1 was higher in G1. It was concluded that EEPP minimizes the deleterious effects of DOX on rat myocardium. Doses of 300 and 600 mg/kg for 17 days attenuate the vacuolar degeneration of myocytes. The dose of 600 mg/kg for 10 days reduced cardiomyocyte disorganization, and the dose of 300 mg/kg for 17 days increased TIMP1 expression in the myocardium of DOX-treated rats.(AU)


Avaliou-se a ação do extrato etanólico da casca do pequi (EECP) e a imunomarcação de metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP2 e MMP9), e inibidores teciduais das metaloproteinases de matriz 1 e 2 (TIMP1 e TIMP2), no miocárdio de ratos submetidos à cardiotoxicidade aguda pela doxorrubicina (DOX). Utilizaram-se 30 ratos Wistar, em seis grupos de cinco animais, sendo Grupo Sham (GS) água e salina; (G1) 16 mg/kg de DOX e 300 mg/kg de EECP por 17 dias; (G2) 16 mg/kg de DOX e 600 mg/kg de EECP por 17 dias; (G3) 16 mg/kg de DOX e 300 mg/kg de EECP por 10 dias; (G4) 16 mg/kg de DOX e 600 mg/kg de EECP por 10 dias; e grupo controle (GC) 16 mg/kg de DOX. Três dias após a aplicação da DOX, no dia 17, realizaram-se a eutanásia e colheita de amostras para análises antomopatológicas. No coração dos ratos que receberam DOX observaram-se degeneração vacuolar miocítica, desorganização dos cardiomiócitos e fragmentação das miofibrilas, necrose, infiltrado inflamatório mononuclear, células de Anitschkow, fibrose, congestão e edema. Nos grupos G1 e G2 o EECP atenuou a degeneração vacuolar miocítica e no G4 atenuou a desorganização dos cardiomiócitos. TIMP1 foi constatada em maior porcentagem de células marcadas no grupo de ratos que recebeu 300 mg/kg do EECP por 17 dias. Conclui-se que o EECP minimiza os efeitos deletérios da DOX no miocárdio de ratos. Nas doses de 300 e 600 mg/kg por 17 dias atenua a degeneração vacuolar miocítica, a 600 mg/kg por 10 dias reduz a desorganização dos cardiomiócitos e a 300 mg/kg por 17 dias aumenta a expressão de TIMP1 no miocárdio de ratos tratados com DOX.(AU)


Assuntos
Animais , Cobaias , Cardiotoxicidade/tratamento farmacológico , Fitoterapia , Ericales , Ratos Wistar , Metaloproteases , Antineoplásicos/toxicidade , Preparações de Plantas/uso terapêutico
6.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-220444

Resumo

Objetivou-se determinar a concentração do inibidor tecidual de metaloprotease-1 (TIMP-1) e do ácido hialurônico (AH) em membranas amnióticas (MAs) caninas criopreservadas por diferentes períodos. Os resultados de defeitos corneais de cães reparados com MAs armazenadas por diferentes períodos também foram avaliados. Dez MAs foram utilizadas em meio modificado de Dulbecco e glicerina (1:1) a 80°C. As MAs foram criopreservadas por curto (estocadas por 2-50 dias), médio (92-210 dias), ou longo prazo (256-357 dias). A TIMP-1, e o AH foram quantificados por ELISA. Registros de 21 olhos de cães submetidos ao transplante de MA para reparar perfurações ou ulcerações corneais foram revisados. Os dados obtidos entre as avaliações das MAs das doadoras e os resultados clínicos foram comparados estatíticamente entre os períodos. Possíveis correlações entre os tempos de estocagem e com os resultados obtidos nos olhos reparados com MAs de diferentes períodos também foram avaliados (P<0,05). Os níveis do TIMP-1 foram maiores comparando-se, MAs estocadas a curto prazo com as de médio (p=0,02) e a longo prazo (p=0,0009). As concentrações de AH não diferiram entre os tempos de estocagem (p=0,18). As concentrações do TIMP-1 se correlacionaram negativamente com o tempo de estocagem (r=-0,65; p<0,0001), enquanto que as de AH não (r=-0,15; p=0,41). Defeitos reparados com MAs estocadas a curto prazo se epitelizaram mais cedo que aqueles reparados com MAs estocadas a médio (p<0,01) e longo prazo (p=0,02). Ademais, observou-se correlação entre a concentração de TIMP-1 e a epitelização corneal (r=0,62; p=0,002). A opacidade corneal foi considerada moderada em 55% dos casos. Todavia, observou-se correlação negativa entre opacidade corneal e a concetração de AH nas MAs (r=- 0,47; p=0,03). Boa visão foi observada em mais pacientes com úlceras profundas e descemetoceles que em olhos com perfuração (p=0,004). Diante dos resultados, conclui-se que a concentração da TIMP-1 de MAs caninas diminuem significativamente em um ano, enquanto que as de AH não se alteram. Defeitos corneais complicados reparados com MA criopreservadas por curto prazo cicatrizam mais cedo e tendem a serem mais transparentes, porém, resultados variando de satisfatório a ótimo são obtidos em olhos reparados com MAs preservadas a médio e longo prazo.


This study aimed to determine the concentrations of tissue inhibitor of matrix metalloproteinase-1 (TIMP-1) and hyaluronic acid (HA) in canine amniotic membranes (AMs) cryopreserved for different time points. The outcomes of complicated corneal defects of dogs repaired with AM stored for the same time points were also evaluated. Ten canine AMs were stored in Dulbeccos´s Modified Eagle Medium with glycerol (1:1) at 80°C. AMs were cryopreserved for short (stored for 2- 50 days), medium (92-210 days), or long term (256-357 days). TIMP-1 and HA were quantified by ELISA. Twenty-one dogs that had an AM transplantation to restore deep or perforating corneal wounds were selected. Data obtained between donor AM evaluations and clinical results were compared statistically between storage times and with the results obtained in the eyes repaired with AMs stored for different periods (P<0.05). TIMP-1 levels decreased in AMs stored for medium (P=0.02) and long term (P=0.0009). HA concentrations did not differ among the storage time (P=0.18). TIMP-1 concentration in AMs correlated with storage time (R=0.65, P<0.0001), while HA concentration did not (R=0.15, P= 0.41). Corneal defects repaired with AM cryopreserved for short term healed sooner than the ones repaired with the ones stored for medium (P<0.01) and long term (P=0.02). Additionally, TIMP-1 levels in AMs correlated negatively with the epithelization time (R=0.62, P=0.002). Graft opacity was severe in 55% of cases. However, the HA levels in AMs correlated negatively with the opacification score (R =0.47, P= 0.03). Good vison was observed in more patients that presented deep ulcers and descemetoceles, than in the ones with perforations (P=0.004). From our results is possible to conclude that TIMP-1 concentration in canine AMs significantly decreases over a year, while HA concentrations do not change during the same period. Our results also suggest that the concentration of TIMP-1 and HA are correlated with the epithelial healing time and the corneal transparency, respectively. Additionally, it may be assumed that complicated corneal defects repaired with AMs cryopreserved for short term healed sooner, however, satisfactory to optimal outcomes are achieved even in the eyes repaired with AMs stored for longer periods.

7.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-221701

Resumo

O presente estudo teve como objetivo investigar o efeito do GDF-9 durante o cultivo in vitro de folículos antrais iniciais caprinos isolados em meio contendo anetol. Os folículos antrais iniciais selecionados foram cultivados individualmente e os seguintes tratamentos foram testados: -MEM+ sozinho (tratamento de controle) ou -MEM+ suplementado com 200 ng/mL de GDF-9 (tratamento de GDF-9) por 18 dias a 38,5 °C e 7,5% de CO2 em óleo mineral. No final do cultivo, complexos cumulos-oócito foram recuperados e selecionados para MIV. Os seguintes parâmetros foram avaliados: (1) crescimento e morfologia folicular, (2) produção de estradiol, (3) maturação nuclear oocitária e (4) expressão relativa de genes referentes à esteroidogênese e remodelação da membrana basal. Em ambos os tratamentos, foi observada diminuição na porcentagem de folículos intactos com concomitante aumento nas taxas de extrusão e degeneração (P < 0,05). Comparado ao tratamento controle, o tratamento com GDF-9 apresentou maiores taxas de extrusão folicular apenas no dia 6 de cultivo (P < 0,05). O diâmetro folicular aumentou progressivamente ao longo do período de cultivo (P < 0,05) com diâmetros semelhantes entre os tratamentos em todos os tempos de cultivo (P > 0,05). Por outro lado, o GDF-9 aumentou a taxa de crescimento do primeiro para o segundo terço do cultivo, sendo maior (P < 0,05) do que o controle no segundo terço. Todos os outros parâmetros avaliados no dia 18 foram semelhantes entre os dois tratamentos, ou seja, produção de estradiol, níveis de mRNA para receptor de insulina, CYP19A1, CYP17, MMP-9, TIMP-2, viabilidade, crescimento e taxas de maturação oocitária (P > 0,05). Em conclusão, este estudo mostrou pela primeira vez que o GDF-9 adicionado a um meio de cultivo contendo anetol aumentou a taxa de crescimento de folículos antrais iniciais isolados caprinos cultivados in vitro. No entanto, não teve efeito na produção de estradiol e na maturação oocitária in vitro.


The present study aimed to investigate the effect of GDF-9 during the in vitro culture of isolated caprine early antral follicles in a medium containing anethole. The early antral follicles selected were individually cultured and the following treatments were tested: -MEM+ alone (Control treatment) or -MEM+ supplemented with 200 ng/mL GDF-9 (GDF-9 treatment) for 18 days at 385°C and 7.5% de CO2 under mineral oil. At the end of culture, cumulus-oocyte complexes (COC) were recovered and selected for IVM. The following endpoints were evaluated: (1) follicular growth and morphology, (2) estradiol production, (3) oocyte nuclear maturation, and (4) relative expression of genes related to steroidogenesis and basement membrane remodeling. In both treatments, it was observed a decrease in the percentage of morphologically intact follicles with a concomitant increase in the rates of extruded and degenerated follicles (P < 0.05). Compared to the control treatment, the GDF-9 treatment showed higher rates of extruded follicles only on day 6 of culture (P < 0.05). Follicle diameter increased progressively throughout the culture period (P < 0.05) with similar diameters between treatments at all culture times (P > 0.05). On the other hand, GDF-9 increased the daily growth rate from the first to the second third of culture, being higher (P < 0.05) than control in the second third. All other evaluated parameters on day 18 were comparable between the two treatments, i.e., estradiol production, mRNA levels for insulin receptor, CYP19A1, CYP17, MMP-9, TIMP-2, oocyte survival, growth, and maturation rates (P > 0.05). In conclusion, this study shows for the first time that GDF-9 added to a culture medium containing anethole increased the follicle growth rate of goat isolated early follicles cultured in vitro. Nonetheless, it had no effect on either estradiol production and oocyte in vitro maturation.

8.
Tese em Inglês | VETTESES | ID: vtt-220749

Resumo

Em alguns casos, o processo de cicatrização de feridas exige tratamento por muito tempo, principalmente em situações complexas como queimaduras na pele de grau severo que requerem remodelação do tecido sem formação de cicatrizes ou queloides na pele do paciente. Metabólitos secundários produzidos por micro-organismos têm sido explorados como uma fonte de moléculas que podem ser aplicadas na área farmacêutica para diversas aplicações e estudos anteriores mostraram que o metabólito secundário monocerina produzido pelo fungo Exserohilum rostratum induz proliferação em células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs) e em fibroblastos humanos normais (FN1). no processo de cicatrização de feridas em modelo murino. Neste estudo, o composto monocerina foi obtido a partir da cultura do fungo E. rostratum e após processo de purificação por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) foi incorporado em formulação em creme nas concentrações de 0,0006 e 0,005%. O efeito das formulações foi avaliado no tratamento de ferida cirúrgica induzida no dorso de camundongos Balb/c machos, e como grupos controles foram empregados animais sem tratamento, animais tratados com a pomada comercial Kollagenase mais cloranfenicol (colagenase 0,6 U/ g + cloranfenicol 0,01 g/g, Cristália), e animais tratados com o veículo da formulação em creme. Os animais foram tratados por 1, 3, 7 e 14 dias e o tamanho da ferida foi medido diariamente com paquímetro digital e análise de raio-X. Ao final dos tratamentos o sangue dos animais foi coletado para análise hematológica e de citocinas/quimiocinas (IL- 1, IL-6, IL-10, TNF-, TGF-, FGF-2, VEGF ). O tecido da área cicatricial foi coletado para dosagem de hidroxiprolina, análises histológicas (hematoxilina/eosina, tricrômio de masson e picrosirius red) e morfológicas por microscopia eletrônica de varredura (MEV) e imunoistoquímica (MMP-3, MMP-9, TIMP-2, VEGF). Juntamente com os parâmetros hematológicos, dosagens de citocinas/quimiocinas, análise por MEV imunoistoquímica, os resultados indicam que o tratamento com monocerina a 0,005% foi capaz de induzir a cicatrização da ferida com regeneração tecidual e intensa formação de colágeno de forma mais efetiva que os grupos controles. com. O tratamento foi eficaz e nenhuma toxicidade foi observada nas feridas de camundongo, o que promove um processo de cicatrização eficiente sem cicatriz na pele regenerada.


In some cases, the wound healing process demands treatment for a long time, especially in complex situation such as skin burn with severe degree that requires tissue remodeling without scars or keloids on the patients skin. Microorganisms secondary metabolites are being explored as a new source of molecules that could be applied on pharmaceutical area for several purposes. From the previous studies the secondary metabolite monocerin obtained from the fungus Exserohilum rostratum that induces proliferation in human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) and in normal human fibroblasts (FN1). In this study, the monocerine compound was obtained from the culture of the fungus E. rostratum and after purification by high performance liquid chromatography (HPLC), it was incorporated into a cream formulation at concentrations of 0.0006 and 0.005%. The effect of the formulations was evaluated on surgical wounds induced on the dorsal part of male Balb/c mice, considering the control groups animals were received no treatment (Untreated), animals treated with commercial Kollagenase ointment plus chloramphenicol (collagenase 0.6 U / g + chloramphenicol 0.01 g / g, Cristália), and treated with the vehicle cream formulation. The animals were treated for 1, 3, 7 and 14 days and the wound size was measured daily with paquimeter and X-ray analysis. At the end of the treatments, the animals blood was collected for hematological and cytokine / chemokine analysis (IL-1, IL-6, IL-10, TNF-, TGF-, FGF-2, VEGF). The wounded tissue was collected for various morphological analysis hydroxyproline, histological (hematoxylin & eosin, masson trichrome and picrosirius red staining), scanning electron microscopy (SEM), and immunohistochemistry (MMP-3, MMP-9, TIMP-2, VEGF). This study was designed to evaluate the effect of secondary metabolite monocerin produced by the extremophile fungus Exserohilum rostratum on wound healing process induced in a murine model. Together with the hematological, cytokine, chemokine and Immunohistochemistry parameters, the results indicate that the treatment with monocerin was able to induce signs of proliferative effect and regenerative process with collagen formation. The treatment was effective and no toxicity was observed on the mouse wounds that promotes an efficient wound healing process without scar on the regenerated skin.

9.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-219227

Resumo

O presente trabalho consiste em avaliar os efeitos do fornecimento de dieta de alta densidade energética sobre a solubilidade e turnover do colágeno em vacas de descarte em relação a novilhas. O tecido muscular esquelético é constituído por fibras musculares, tecido adiposo e tecido conjuntivo, sendo o colágeno o principal componente do tecido conjuntivo. O colágeno é uma proteína estrutural, responsável por manter a integridade do músculo esquelético. Além disso, ele é considerado uma proteína de meia-vida longa, logo o seu turnover é essencial para o crescimento animal, uma vez que uma de suas funções é a de sustentação. Tanto o colágeno quanto os outros componentes da matriz extracelular são degradados por metaloproteinases de matriz (MMPs), cuja inibição é realizada pelos inibidores das MMPs (TIMPs). As características do colágeno são ditas como uma das principais variáveis responsáveis pela maciez da carne. Estratégias dietéticas podem influenciar o turnover protéico do tecido conjuntivo intramuscular, reduzindo o cross-linking entre as moléculas do colágeno e consequentemente aumentando a solubilidade do mesmo. Apesar do conhecimento atual sobre os efeitos da dieta nas propriedades do colágeno, poucos trabalhos buscam estratégias para minimizar seu efeito com o avançar da idade do animal. Sendo assim, nós avaliamos os efeitos do fornecimento de dieta de alta densidade energética sobre a solubilidade e turnover do colágeno em vacas de descarte. Dez vacas de descarte, (idade de 84±2,1 meses e peso 550±30,5 kg) e dez novilhas (idade de 24±1,8 meses e peso de 300±15,6 kg) foram alimentadas com dieta de alta densidade energética, durante 150 dias. O ganho médio diário (P = 0,51), o teor total de colágeno (P = 0,65), a abundância de mRNA de COL1A1 (P = 0,96), atividade enzimática da lisil oxidase (P = 0,80), a expressão de mRNA da MMP9 (P = 0,41) e TIMP2 (P = 0,19) não diferiram entre as idades. A solubilidade de colágeno (P < 0,01) e a força de cisalhamento (P < 0,01) foram maiores nas novilhas em relação às vacas de descarte. As vacas de descarte apresentaram maior abundância de mRNA de COL3A1 (P = 0,04), TIMP 1 (P < 0,01) e TIMP3 (P < 0,01). O teor de gordura intramuscular (P = 0,06) bem como a abundância de mRNA da MMP2 (P = 0,10) tenderam a ser maior nas vacas de descarte em relação às novilhas. Os resultados sugerem alteração no remodelamento e aumento na renovação do colágeno intramuscular em vacas de descarte em relação á novilhas sob dieta de alta densidade energética. Contudo, tais alterações não foram suficientes para causar equivalência da solubilidade do colágeno intramuscular entre vacas de descarte e novilhas.


The present study aims to evaluate the effects of supplying a high energy density diet on collagen solubility and turnover in cull cows in relation to heifers. Skeletal muscle tissue is made up of muscle fibers, adipose tissue and connective tissue, in which the collagen is the main component of connective tissue. Collagen is a structural protein, responsible for maintaining the integrity of skeletal muscle. In addition, collagen is considered a protein with a long half-life, so its turnover is essential for animal growth since one of its functions is to provide support for the skeletal muscle. Both collagen and other components of the extracellular matrix are degraded by matrix metalloproteinases (MMPs), which are inhibited by MMP inhibitors (TIMPs). The characteristics of collagen are the main factors responsible for meat tenderness. Dietary strategies can influence the protein turnover of the intramuscular connective tissue, reducing the cross-linking between the collagen molecules and consequently increasing its solubility. Despite current knowledge about the effects of diet on the properties of collagen, few studies seek out strategies to minimize its effect with advancing age of the animal. Therefore, we evaluated the effects of providing a high energy density diet on solubility and turnover of collagen in cull cows. Ten cull cows, (age 84 ± 2.1 months and weight 550 ± 30.5 kg) and ten heifers (age 24 ± 1.8 months and weight 300 ± 15.6 kg) were fed a high energy density diet for 150 days. The average daily gain (P = 0.51), the total collagen content (P = 0.65), the mRNA abundance of COL1A1 (P = 0.96), enzymatic activity of lysyl oxidase (P = 0.80) ), mRNA expression of MMP9 (P = 0.41) and TIMP2 (P = 0.19) did not differ between ages. Collagen solubility (P <0.01) and shear force (P <0.01) were higher in heifers compared to cull cows. Cull cows showed higher mRNA abundance of COL3A1 (P = 0.04), higher mRNA expression of TIMP 1 (P <0.01) and TIMP3 (P <0.01). Intramuscular fat (P = 0.06) as well as mRNA expression of MMP2 (P = 0.10) tended to be higher in cull cows compared to heifers. The data obtained suggest changes in remodeling and increasing in renewal of intramuscular collagen in cull cows compared to heifers under a high energy density diet. However, such changes were not sufficient to cause equivalence of the intramuscular collagen solubility between cull cows and heifers.

10.
Anim. Reprod. (Online) ; 8(1/2): 14-24, 2011. ilus, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: biblio-1461657

Resumo

The present study aims to investigate the influence of two concentrations of ascorbic acid on the survival, growth , antral formation and m RNA expression of the matrix metalloproteinases - 9 (MMP - 9) and their tissue inhibitor - 2 (TIMP - 2) on caprine preantral follicles during long - term in vitro culture. Isolated preantral follicles were individ ually cultured without or with ascorbic acid at 50 μ g/ml (AA50) or 100 μ g/ml (AA100) during 18 days. The parameters evaluated were follicular viability, growth, antrum formation and extruded oocytes. The genes MMP - 9 and TIMP - 2 were quantified by real - time polymer ase chain reaction (qPCR) after 18 days of culture in the control medium (MEM + ) or ascorbic acid (50 or 100 μ g/ml) and in fresh control (non cultured) . At the end of culture, AA50 significantly increased the percentage of viable follicles compared w ith other treatments . Moreover, mean daily increase in follicular diameter (μm/day) was significantly higher in the presence of both concentrations of ascorbic acid than in MEM + alone. Higher rates of antral formation and lower percentages of extruded oocy tes were observed in medium containing AA50 compared with control medium. Real Time RT - PCR assays showed that AA50 increase s MMP - 9 expression significantly compared with fresh control and MEM + alone. In conclusion, ascorbic acid at 50 μ g/ml was very import ant for the maintenance of caprine preantral follicle viability and development after in vitro culture and influences in vitro the enzymes involved with basement membrane remodeling.


Assuntos
Animais , Folículo Ovariano/anatomia & histologia , Membrana Basal/anatomia & histologia , Oócitos/citologia , Ácido Ascórbico/química , Cabras/fisiologia
11.
Anim. Reprod. ; 8(1/2): 14-24, 2011. ilus, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: vti-8569

Resumo

The present study aims to investigate the influence of two concentrations of ascorbic acid on the survival, growth , antral formation and m RNA expression of the matrix metalloproteinases - 9 (MMP - 9) and their tissue inhibitor - 2 (TIMP - 2) on caprine preantral follicles during long - term in vitro culture. Isolated preantral follicles were individ ually cultured without or with ascorbic acid at 50 μ g/ml (AA50) or 100 μ g/ml (AA100) during 18 days. The parameters evaluated were follicular viability, growth, antrum formation and extruded oocytes. The genes MMP - 9 and TIMP - 2 were quantified by real - time polymer ase chain reaction (qPCR) after 18 days of culture in the control medium (MEM + ) or ascorbic acid (50 or 100 μ g/ml) and in fresh control (non cultured) . At the end of culture, AA50 significantly increased the percentage of viable follicles compared w ith other treatments . Moreover, mean daily increase in follicular diameter (μm/day) was significantly higher in the presence of both concentrations of ascorbic acid than in MEM + alone. Higher rates of antral formation and lower percentages of extruded oocy tes were observed in medium containing AA50 compared with control medium. Real Time RT - PCR assays showed that AA50 increase s MMP - 9 expression significantly compared with fresh control and MEM + alone. In conclusion, ascorbic acid at 50 μ g/ml was very import ant for the maintenance of caprine preantral follicle viability and development after in vitro culture and influences in vitro the enzymes involved with basement membrane remodeling.(AU)


Assuntos
Animais , Ácido Ascórbico/química , Folículo Ovariano/anatomia & histologia , Membrana Basal/anatomia & histologia , Oócitos/citologia , Cabras/fisiologia
12.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-203626

Resumo

O presente estudo teve como objetivo avaliar a ação do extrato etanólico da casca do pequi (EECP) (Caryocar brasiliense), por meio de avaliação morfológica e expressão das proteínas MMP2, MMP9, TIMP1 e TIMP2 no miocárdio de ratos submetidos à cardiotoxicidade experimental aguda e crônica pela doxorrubicina (DOX), visando melhor entendimento dos mecanismos envolvidos nesse processo patológico. Para isso foram realizados dois experimentos. No experimento de fase aguda foram utilizados 30 ratos da raça Wistar, distribuídos em seis grupos de cinco animais cada, sendo (GC) água e solução salina; (G1) 16 mg/kg de DOX e tratamento com 300 mg/kg de EECP durante 17 dias; (G2) 16 mg/kg de DOX e 600 mg/kg de EECP durante 17 dias; (G3) 16 mg/kg de DOX e 300 mg/kg de EECP durante 10 dias; (G4) 16 mg/kg de DOX e 600 mg/kg de EECP durante 10 dias; e (G5) 16 mg/kg de DOX. O tratamento de G1 e G2 teve início no dia um e se estendeu até o término do experimento, no dia 17. Os animais de G3 e G4 foram submetidos a tratamento com EECP durante 10 dias, a partir do dia sete, e a DOX foi aplicada no 14° dia após o início do experimento. Três dias após a aplicação da DOX, no dia 17, os animais foram submetidos à eutanásia, avaliação macroscópica e colheita de amostras para análises histopatológica e imunoistoquímica. No experimento de fase crônica foram utilizados 30 ratos da raça Wistar, distribuídos em seis grupos de cinco animais. G1 e G2 receberam como pré-tratamento com 300 mg/kg e 600 mg/kg de EECP, respectivamente, por gavagem, durante sete dias e mantiveram o tratamento durante os 21 dias de aplicação da DOX. Em G1, G2, G3, G4 e G5 a cardiotoxicidade foi induzida com aplicações semanais de 2 mg/kg de DOX, via intraperitoneal, totalizando quatro aplicações (8 mg/kg) e, no grupo controle (GC), foi aplicado 1 ml de solução fisiológica. Os animais de G3 receberam diariamente 300 mg/kg e os de G4 600 mg/kg de EECP, por gavagem, durante os 21 dias de aplicação da DOX. Os de G5 e G6 receberam 1 ml de água, diariamente, também por gavagem. Após o término das aplicações, os animais foram mantidos por dois meses em observação, totalizando três meses de experimento. A avaliação macroscópica foi realizada aos 90 dias, momento em que foram colhidas amostras para análise em microscopia eletrônica, histopatologia e imunoistoquímica. No experimento de fase aguda concluiu-se que o EECP apresenta atividade antioxidante no miocárdio de ratos submetidos à cardiotoxicidade aguda induzida pela DOX por atenuar os efeitos deletérios do fármaco no músculo cardíaco. Quando utilizado nas doses de 300 e 600 mg/kg durante 17 dias o EECP atenua a degeneração vacuolar miocítica. Quando utilizado na dose de 600 mg/kg durante 10 dias o EECP reduz a desorganização das fibras. O EECP na dose de 300 mg/kg durante 17 dias aumenta a expressão de TIMP1 no miocárdio de ratos tratados com DOX.. No experimento de fase crônica concluiu-se que o extrato etanólico da casca do pequi (EECP) é eficiente em minimizar os efeitos da cardiotoxicidade crônica induzida pela DOX no miocárdio de ratos, considerando que nas doses de 300 e 600 mg/kg, o EECP atenua a degeneração vacuolar miocítica e na dose de 600 mg/kg o EECP reduz a quantidade de células de Anitschkow e a fragmentação das miofibrilas.


This study aimed to evaluate the effects of pequi shell etanolic extract (PSEE) (Caryocar brasiliense), through morphological evaluation and expression of MMP2, MMP9, TIMP1 and TIMP2 proteins in the myocardium of rats with experimental acute and chronic doxorubicin (DOX) cardiotoxicity, to better understand the mechanisms involved in this disease process. Thus, two experiments were carried out. In the experiment of acute phase 30 Wistar rats were divided in six groups of five animals each, being (GC) water and saline; (G1) 16 mg/kg DOX and treatment with 300 mg/kg of PSEE for 17 days; (G2) 16 mg/kg of DOX and 600 mg/kg of PSEE for 17 days; (G3) 16 mg/kg of DOX and 300 mg/kg of PSEE for 10 days; (G4) 16 mg/kg of DOX and 600 mg/kg of PSEE for 10 days; and (G5) 16 mg/kg DOX. Treatment of G1 and G2 began on day one and continued until the end of the experiment, on the 17th. G3 and G4 animals were treated with PSEE for ten days, from the day seven, and DOX was applied on the 14th day after the experiment beginning. Three days after the application of DOX, on the 17th, the animals were euthanized and macroscopic evaluation and collection of samples for enzymatic analysis, histopathology and immunohistochemistry were performed. In the experiment of chronic phase 30 Wistar rats were divided in six groups of five animals. G1 and G2 received 300 mg/kg and 600 mg/kg of PSEE, respectively, as pretreatment, by gavage for seven days. In G1, G2, G3, G4 and G5, cardiotoxicity was induced with weekly applications of 2 mg/kg DOX, intraperitoneally, totaling four applications (8 mg/kg), and control group (CG) received 1 ml saline solution. G3 animals received daily 300 mg/kg of PSEE and G4, 600 mg/kg, by gavage, for 21 days of application of DOX. The G5 and GC received 1 ml of water daily by gavage also. After completion of the application animals were kept for two months, totaling three months of treatment. Macroscopic evaluation was performed by the 90 days and samples were taken for analysis in electron microscopy, histopathology and immunohistochemistry. In acute experiment was concluded that PSEE shows antioxidant activity in the myocardium of rats with acute induced cardiotoxicity of DOX mitigating the deleterious effects of the drug on cardiac muscle. When used at doses of 300 and 600 mg/kg for 17 days PSEE attenuates vacuolar degeneration in myocytes. When used at a dose of 600 mg/kg for 10 days PSEE reduces the fibers disruption. PSEE at a dose of 300 mg/kg for 17 days increases TIMP1 expression in the myocardium of rats treated with DOX. In chronic experiment was concluded that PSEE is effective in minimizing effects of chronic cardiotoxicity induced by DOX in the myocardium of rats, whereas at doses of 300 and 600 mg/kg, PSEE attenuates vacuolar degeneration in myocytes and at the dose of 600 mg/kg the PSEE reduces the amount of Anitschkow cells and myofibrils fragmentation.

13.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-2332

Resumo

Nas fêmeas caninas, as glândulas mamárias são os locais mais comuns para a ocorrência de neoplasias. Para avaliar o comportamento biológico dessas lesões empregam-se rotineiramente métodos histológicos descritivos que, associados à graduação histológica, auxiliam na predição prognóstica dessas enfermidades. Ainda, o desequilíbrio entre a quantidade tissular de metaloproteinases de matriz (MMP), enzimas proteolíticas implicadas em processos fisiológicos e patológicos, e seus inibidores (TIMP), desempenha papel importante na evolução e invasão tumoral. Para avaliar o comportamento biológico de alguns tipos tumorais frequentes da mama das cadelas esta pesquisa foi dividida em duas etapas. A primeira teve como objetivo relacionar a classificação e a graduação histológicas das neoplasias mamárias de cadelas, bem como correlacionar a graduação dos tumores malignos com o tamanho tumoral. Para isso, avaliaram-se 119 amostras de tumores mamários caninos, sendo considerados tumores todos os distúrbios do crescimento da glândula mamária canina, incluindo os neoplásicos (benignos e malignos) e os não neoplásicos (alterações hiperplásicas). Todos os tumores foram classificados e apenas os malignos graduados histologicamente e correlacionados ao tamanho tumoral. Concluiu-se que o carcinoma complexo é o tipo histológico mais comum e que possui menor grau histológico em relação aos demais tipos tumorais de classificação maligna. Ainda, neoplasias maiores que cinco centímetros foram predominantemente malignas (92,3% ou 12/13) e não foi observada correlação entre tamanho tumoral e grau histológico. A relação entre a classificação e a graduação histológica compreendeu instrumento auxiliar na descrição microscópica dos tumores mamários malignos das cadelas. A segunda etapa teve como objetivo avaliar a expressão de MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 no tecido mamário canino normal e neoplásico. Para isso, foram selecionadas 48 amostras de glândula mamária canina, sendo 14 de carcinoma complexo (CC), 13 de carcinoma tubulopapilar (CT), seis de adenoma mamário simples (AM) e 15 de mama normal (MN), submetidas à técnica de imuno-histoquímica para a avaliação da intensidade de marcação e do número de células epiteliais e estromais marcadas. Houve diferença na expressão de MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 de acordo com a histomorfologia mamária. A MMP-9 apresentou maior expressão nas células epiteliais e estromais dos CC e CT em relação às MN. Constatou-se menor expressão de TIMP-1 nas células estromais do CC e superexpressão de TIMP-2 nas células epiteliais do CT. Ainda, houve correlação positiva entre MMP-9 e TIMP-1 quanto a intensidade de marcação e número de células epiteliais e estromais marcadas na MN, e entre MMP-9 e TIMP-2 nas células epiteliais neoplásicas do CT. Concluiu-se que há variação na expressão da MMP-9, TIMP-1 e TIMP-2 entre os tipos tumorais, além de correlação positiva entre TIMP-1 e MMP-9 nas mamas normais e entre MMP-9 e TIMP-2 no carcinoma tubulopapilar. A atividade equilibrada entre MMP-9, MMP-2, TIMP-1 e TIMP-2 é fundamental à homeostase da glândula mamária canina normal enquanto a superexpressão de MMP-9 e TIMP-2, e a expressão reduzida de TIMP-1 nos carcinomas pode representar condição adequada à evolução tumoral


In bitchs, mammary glands are the most common sites for the occurrence of neoplasms. To evaluate the biological behavior of these lesions is routinely employ descriptive histological methods that, combined with histological grading, help predict prognosis of these diseases. The imbalance between the amount of tissue matrix metalloproteinases (MMPs), proteolytic enzymes involved in physiological and pathological processes, and their inhibitors (TIMP), plays an important role in development and tumor invasion. To evaluate the biological behavior of some common types of breast tumor bitches this research was divided in two steps. The first one was correlating histological classification and degree of mammary neoplasms in bitches, and to correlating the degree of malignancy and tumor size. For this, 119 samples were evaluated in canine mammary tumors, all tumors were considered disorders of the growth of canine mammary gland, including neoplastic (benign and malignant) and non-neoplastic (hyperplastic changes). All tumors were classified and only the malignant were graded histologically and correlated with tumor size. It was concluded that the complex carcinoma is the most common cancer histological type and which has the lowest histological grade compared to other malignant tumor types. Further, neoplasms larger than five centimeters were predominantly malignant (92,3% or 12/13) and no correlation was observed between tumor size and histologic grade. The relation between histological classification and graduation helped in microscopic description of malignant mammary tumors in bitches. The second step was to evaluate the expression of MMP-9, MMP-2 TIMP-1 and TIMP-2 in normal and neoplastic canine mammary tissue. For this purpose it was selected 48 samples of canine mammary tissue, 14 complex carcinomas (CC), 13 tubulopapillary carcinoma (TC), six simple mammary adenoma (MA) and 15 normal breast (MN), and submitted to technical immunohistochemistry for the evaluation of the intensity staining and the number of epithelial and stromal cells selected. Differences were observed in the expression of MMP-9 and TIMP-1 and TIMP-2 according to the mammary histomorphology. The MMP-9 showed higher expression in epithelial and stromal cells of the CC and CT compared to MN. It was found a lower expression of TIMP-1 in stromal cells of the CC and overexpression of TIMP-2 in epithelial cells of the CT. Also a positive correlation between MMP-9 and TIMP-1 and the intensity staining and number of epithelial and stromal cells marked in MN and between MMP-9 and TIMP-2 on TC neoplastic epithelial cells. It was concluded that there is variation between expression of MMP-9, TIMP-1 and TIMP-2 among the tumor types, and a positive correlation between TIMP-1 and MMP-9 in normal mammary gland and between MMP-9 and TIMP-2 in tubulopapilar carcinoma. The balanced expression of MMP-9, MMP-2, TIMP-1 and TIMP-2 is essential for the homeostasis of canine normal mammary gland, while the overexpression of MMP-9 and TIMP-2, and the reduced expression of TIMP-1 in carcinomas represents an appropriate condition to the tumor development

14.
São Paulo; s.n; 28/02/2011.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-5341

Resumo

A cirrose hepática é um processo irreversível caracterizado pelo desequilíbrio entre a deposição e a degradação de componentes da matriz extracelular (MEC), acarretando disfunção hepatocelular e aumento da resistência ao fluxo sanguíneo, resultando em insuficiência hepática e na hipertensão portal. A cirrose em cães, muitas vezes é identificada nos estágios finais, já que o estágio inicial é assintomático. Em humanos, no estágio final da cirrose, o transplante é o único tratamento. Desta forma, a busca por tratamentos alternativos torna-se imprescindível. A administração de fatores hepatotróficos (FH) tem sido estudada como uma alternativa de tratamento. Este estudo objetivou avaliar os efeitos dos FHs na cirrose hepática murina induzida pela tioacetamida (TAA), imediatamente após o tratamento, e 60 dias pós o seu término. 75 ratas Wistar foram subdivididas em quatro grupos; FH (n=15) e o seu grupo controle (CT, n=30), e FH+60d (n=15) e seu controle (CT, n=15); todos os animais foram induzidos à cirrose hepática pela administração TAA (200mg/Kg), ip, 3 vezes/semana, por 14 semanas. Após a indução, dois grupos receberam a solução de FHs por 12 dias. Um foi eutanasiado imediatamente após o tratamento e o outro, 60 dias após o seu término. Foram realizadas análises bioquímica sérica e histopatológica; a quantificação do colágeno; avaliação da proliferação celular e da ativação das células estreladas. Ainda, foram avaliadas a expressão gênica de proteínas envolvidas na fibrogênese, como, colágeno tipo 1, TGF-1, TIMP-1, MMP-2, MMP-13 e PLAU. Os resultados obtidos imediatamente após o tratamento mostraram que os FHs melhoraram as funções hepáticas, reduziram a deposição de colágeno e a ativação das células estreladas; alterando os mecanismos moleculares envolvidos na fibrogênese pela redução da expressão do colágeno tipo 1, aumento de TIMP-1, MMP-13 e PLAU. A maioria destes efeitos se manteve após o término do tratamento. Os resultados indicam que os FHs auxiliam no restabelecimento das funções e arquitetura hepáticas, atuando sobre os mecanismos de deposição e degradação da MEC, e que o tratamento com os FHs têm ação prolongada, não desaparecendo imediatamente após o tratamento


Hepatic cirrhosis is an irreversible process characterized by an imbalance between deposition and degradation of extracellular matrix components (ECM). This disease leads to hepatocellular dysfunction and increased resistance to blood flow resulting in liver failure and portal hypertension. The cirrhosis, in dogs, is often identified in the final stages whereas the early stage is asymptomatic. In humans, in the final stage of the cirrhosis, transplantation is the only treatment. Thus, the search for alternative treatments becomes essential. The administration of hepatotrophic factors (HF) has been studied as a treatment alternative. This study evaluated the effects of HFs in murine liver cirrhosis induced by thioacetamide (TAA) immediately after treatment, and 60 days after it ends. 75 female Wistar rats were distributed into four groups: HF (n=15) and control group (n=30), and HF+60d (n=15) and control group (n=15). Hepatic cirrhosis was induced in all animals by TAA administration (200 mg/kg), ip, 3 times a week for 14 weeks. After induction, two groups received the HFs solution for 12 days. One group was euthanized immediately after treatment and another group was euthanized 60 days after treatment. The following analyzes were performed: serum biochemistry, histopathologic, collagen quantification, cell proliferation, and stellate cells activation. In addition, the gene expression of proteins involved in fibrogenesis such as type 1 collagen, TGF-1, TIMP-1, MMP-2, MMP-13, and PLAU was evaluated. The results found immediately after treatment showed that HFs improved liver function, and reduced collagen deposition and stellate cells activation. Alterations of the molecular mechanisms involved in fibrogenesis were observed by reducing the expression of collagen type 1 and increased expression of TIMP-1, MMP-13 and PLAU. Most of these effects remained after the treatment. The results indicate that the HFs assist in restoration of liver function and architecture, acting on the mechanisms of deposition and degradation of ECM. Furthermore, the treatment with HFs showed prolonged action, remaining during the post-treatment

15.
São Paulo; s.n; 23/04/2010.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-5471

Resumo

A fibrose hepática resulta da cronicidade da injúria celular, ocasionando acúmulo dos componentes da matriz extracelular (MEC) pela ativação, principalmente, de células estreladas e fibroblastos portais em miofibroblastos. Estas células se conectam através de junções comunicantes do tipo gap, formadas por proteínas denominadas conexinas (Cx). As junções gap são responsáveis pelo fluxo de moléculas e íons entre as células, desempenhando importante função no controle da homeostasia tecidual. Diversos tipos de conexinas foram descritas nas células hepáticas. Os hepatócitos expressam Cx32 e Cx26, enquanto as demais células não-parenquimatosas expressam Cx43. Alguns estudos analisaram a expressão das conexinas e das junções gap em processos de reparação e fibrogênese em diferentes tecidos, no entanto, poucos avaliaram seu papel na fibrogênese hepática. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os aspectos morfológicos, histopatológicos e moleculares da fibrose hepática, induzida por tetracloreto de carbono (CCl4), em animais deficientes para as conexinas 43 (Cx43+/-) ou 32 (Cx32-/-). Foram analisados dados biométricos, histopatológicos, ultra-estruturais, imuno-histoquímicos e bioquímicos, além da expressão gênica e protéica das conexinas. Os aspectos moleculares da fibrose hepática foram analisados pela expressão de genes relacionados com a deposição e degradação da matriz extracelular por PCR em tempo real. As análises macroscópicas e de varredura demonstraram um processo de micronodulação da superfície hepática mais acentuado nos camundongos Cx43+/- fibróticos em relação aos animais wild-type (Cx43+/+) fibróticos. Adicionalmente, estes animais apresentaram maior proporção volumétrica de colágeno no tecido hepático; redução na atividade necroinflamatória tecidual; redução nas concentrações séricas de AST e ALT; redução na proliferação celular dos hepatócitos e redução na expressão dos genes: colágeno tipo I, TGFβ-1, MMP-2, MMP-13 e TIMP-1. Por sua vez, os camundongos Cx32-/- fibróticos apresentaram aumento na deposição de colágeno no parênquima hepático; aumento na atividade necroinflamatória tecidual e aumento nos níveis séricos das enzimas hepáticas AST, ALT e fosfatase alcalina em comparação aos animais wild-type (Cx32+/+) fibróticos. Também foram observadas redução na proliferação hepatocelular e maior quantidade de corpúsculos apoptóticos no tecido hepático. Baseando-se em todos os resultados obtidos, observou-se que ambos os modelos animais apresentaram aumento da fibrose hepática, aparentemente ocasionada por diferentes modos de ação. Os animais deficientes em Cx43 apresentaram menor capacidade de degradação do colágeno, ocasionando seu acúmulo no tecido hepático. Por outro lado, os animais deficientes em Cx32 apresentaram maior deposição de colágeno em resposta à injúria hepatocelular mais acentuada, aliada ao desequilíbrio entre as taxas de proliferação celular e apoptose. Em conclusão, os resultados obtidos neste trabalho demonstraram a importante participação das conexinas no controle da fibrogênese hepática, e que podem representar potenciais alvos terapêuticos para o tratamento das doenças hepáticas crônicas em humanos e animais


Hepatic fibrosis results from chronic cell injury, leading to accumulation of components of extracellular matrix (ECM) through activation mainly of hepatic stellate cells and portal fibroblasts into myofibroblasts. These cells communicate through intercellular gap junctions composed of proteins known as connexins (Cx). Gap junctions are responsible for the exchange of molecules and ions among cells, playing an important role in the control of tissue homeostasis. Several subtypes of connexins were described among hepatic cells. Hepatocytes express Cx32 and Cx26, while the other non-parenchymal cells express Cx43. Some studies analyzed the expression of connexins and gap junctions on processes of healing and fibrogenesis in different tissues; however, few studies evaluated its role on hepatic fibrogenesis. Thus, the objective of this study was to evaluate morphological, histopathological and molecular aspects of hepatic fibrosis induced by carbon tetrachloride (CCl4) in animals with connexin 43 (Cx43+/-) or 32 (Cx32-/-) deficiency. We analyzed biometric, histopathological, ultrastructural, immunohistochemical and biochemical data, besides gene and protein expression of connexins. Molecular aspects of hepatic fibrosis were analyzed with the expression of genes related to deposition and degradation of extracellular matrix by real time PCR. Macroscopic and Scanning Electron Microscopy analyses showed a process of micronodulation of hepatic surface more accentuated on Cx43+/- fibrotic mice when compared to fibrotic wild-type (Cx43+/+) animals. Additionally, these animals presented a higher collagen volumetric proportion on hepatic tissue; reduction of tissue necroinflammatory activity; reduction of serum AST and ALT; reduction of hepatocytes proliferation and reduction of expression type I collagen, TGFβ-1, MMP-2, MMP-13 and TIMP-1 genes. Fibrotic Cx32-/- mice presented an increase of collagen deposition in hepatic parenchyma; increase of tissue necro-inflammatory activity and increase of liver enzymes AST, ALT and alkaline phosphatase when compared to fibrotic wild-type (Cx32+/+) animals. Reduction of hepatocellular proliferation and a higher amount of apoptotic bodies on hepatic tissue were also observed. Based on the results obtained, we observed that both animal models showed an increase of hepatic fibrosis, apparently caused by different modes of action. Cx43 deficient animals showed a reduced capacity to degrade collagen, causing its accumulation in the hepatic tissue. Cx32 deficient animals showed an increased collagen deposition in response to accentuated hepatocellular injury, together to an unbalance between rates of cellular proliferation and apoptosis. In conclusion, results obtained on this study demonstrate an important role of connexins on the control of hepatic fibrogenesis, which could represent potential therapeutical targets for the treatment of chronic liver diseases in humans and animals

16.
São Paulo; s.n; 04/09/2009.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-5288

Resumo

Integrinas são glicoproteínas transmembrânicas envolvidas na adesão célula-célula e célula-proteina da matriz extracellular (ECM) que participam da migração e fusão de células trofoblásticas gigantes (TGC) com células do epitélio materno no placentoma bovino e interagem com inibidores teciduais de metalloproteinases (TIMPs), considerados importantes reguladores das metaloproteinases de matriz (MMPs), que são reconhecidas como passo limitande para ação de enzimas que atuam no remodelamento da ECM na implantação e na gestação. Uma vez que as integrinas são consideradas responsáveis pela manutenção da arquitetura tecidual e que as MMPs podem regular a degradação e a reconstituição da ECM necessária para a invasão do trofoblasto, temos como objetivo verificar uma possível relação das integrinas com alterações placentárias comumente observadas em gestações de animais clonados (SCNT). Para avaliar a funcionalidade placentária, a expressão do lactogênio placentário (PL) e do antígeno Ki-67 foram também verificadas. Placentomas bovinos foram coletados e divididos em 3 grupos: 1) início (n = 6) e 2) final (n = 3) da gestação de animais derivados de monta natural (n=9) e final da gestação de animais clonados (n=8), clones machos (n=4) e clones fêmeas (n=4). As proteínas foram localizadas por imuno-histoquímica indireta, exceto as subunidades de integrina α6, β1, αV e β3 que foram localizadas por imunofluorescência. A especificidade dos anticorpos e expressão protéica foi confirmada por Western blot e a expressão do RNAm foi avaliada por meio de RT-PCR e PCR em tempo real quantitativo. As células positivas para a laminina, TIMP-2, Ki-67 e lactogênio placentário (PL) foram quantificadas e para comparação entre os grupos. A proteína das subunidades α6 do receptor de integrina e β1 foi observada nos animais clonados e não clonados nos estromas materno e fetal e porção basal dos epitélios materno e fetal e foi co-localizada com a laminina. A proteína das subunidades αV e β3 do receptor de integrina foi observado nos estromas materno e fetal e foi co-localizado com a fibronectina. O TIMP-2 foi exclusivamente e especificamente localizado nas TGCs no início e final da gestação de animais clonados e não clonados, mas não houve diferença significativa em sua expressão. O PL apresentou a mesma localização do TIMP-2 em todos os grupos analisados. Houve diferença significativa (p<0,05) entre 270d e clones ao se comprar a expressão relativa do RNAm da subunidade de integrina β1 e do lactogênio placentário e ao se comparar a expressão protéica por western blot da laminina e do TIMP-2. Foi possível observar diferença significativa (p<0,05) entre o grupo controle e o grupo de animais clonados ao se quantificar o número de TGCs positivas para a laminina e para o lactogênio placentário. Apesar de algumas diferenças terem sido observadas na expressão de integrinas e de proteínas da ECM, sugere-se que a interação das integrinas com seus ligantes da ECM a termo não é um determinante da sobrevivência neonatal de bovinos clonados. Contudo, outros estudos são necessários para esclarecer se estas proteínas representam elementos chave na placentação de bovinos clonados em início de gestação. As diferenças observadas na expressão de integrinas e principalmente do PL entre clones fêmeas e machos sugerem possível influência de genes associados ao cromossomo sexual ou imprinting


Integrins are transmembrane glycoproteins involved in cell-cell and cell-extracellular matrix (ECM) adhesion and signal transduction. They participate in the migration and fusion of trophoblast giant cells (TGC) with uterine epithelial cells in bovine placentomes, and interact with tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMPs), considered important regulators of matrix metalloproteinases (MMPs). MMPs are rate-limiting enzymes degrading ECM proteins during tissue remodeling around embryo implantation, pregnancy and parturition. Since integrins are considered to be responsible for the maintenance of the architecture within tissues and MMPs may also regulate degradation and reconstitution of ECM required for trophoblast invasion, we aimed to verify a potential relation of integrins with common placental alterations observed in cloned animals (SCNT). To verify the placental functionality, expression of placental lactogen (PL) and Ki-67 antigen was also assessed. Bovine placentomes were collected and divided into 3 groups: 1) early and 2) late gestation derived from natural mating (n=9) and 3) late gestational bovine clones (n=8), also divided into male clones (n=4) and female clones (n=4). All proteins were localized by indirect immunohistochemistry except for integrin subunits α6, β1, αV and β3 that were shown by immunofluorescence. The antibody specificity and protein expression were confirmed by Western blot. Expression of mRNA was evaluated using RT-PCR and quantitative Real Time PCR. Positive cells for laminin, TIMP-2, Ki-67 and placental lactogen were quantified for comparisons among groups. The protein of integrin receptor subunits α6 and β1 was observed in both cloned and non-cloned animals in the fetal and maternal stroma and at the basal membrane of maternal and fetal epithelial cells, co-localized with laminin and with collagen IV. The integrin receptor subunits αV and β3 were observed in the fetal and maternal stroma, co-localized with fibronectin. TIMP-2 was specifically and exclusively localized in TGC in the early and term gestation in both cloned and non-cloned animals. PL has shown the same localization of TIMP-2 in all analyzed samples. Statistically significant differences (p<0,05) between term gestation of non-cloned and cloned animals were observed comparing the mRNA expression of integrin β1 subunit and placental lactogen and the protein expression of laminin and TIMP-2. There were also statistically significant differences (p<0,05) between non-cloned and cloned animals in the number of laminin and placental lactogen positive cells. Despite some differences in integrin and ECM proteins expression, our results suggest that the interaction between integrins and their ECM ligands in term gestation is not a determinant for the survival rate of newborn cloned calves. However further studies are necessary to elucidate if integrins represent key elements in the early placentation of SCNT bovines. The differences found in the integrin and principally in the placental lactogen expression between female and male cloned calves suggests the influence of sex-chromosome associated genes or imprinting

17.
Semina ciênc. agrar ; 39(5): 1981-1992, 2018. ilus, tab
Artigo em Inglês | VETINDEX | ID: biblio-1501227

Resumo

This study evaluated the activity of the ethanolic extract of pequi peel (EEPP) and immunostaining with matrix metalloproteinases 2 and 9 (MMP2 and MMP9), and tissue inhibitor of metalloproteinases 1 and 2 (TIMP1 and TIMP2) in the myocardium of rats subjected to acute cardiotoxicity using doxorubicin (DOX). Thirty Wistar rats (six groups of five animals) were used as follows: sham group (SG), water and saline; group G1, 16 mg/kg of DOX and 300 mg/kg of EEPP for 17 days; group G2, 16 mg/kg of DOX and 600 mg/kg of EEPP for 17 days; group G3, 16 mg/kg of DOX and 300 mg/kg of EEPP for 10 days; group G4, 16 mg/kg of DOX and 600 mg/kg of EEPP for 10 days; and control group (CG), 16 mg/kg of DOX. Three days after administering DOX (day 17), euthanasia was performed, and samples were collected for anatomopathological analysis. Myocyte vacuolar degeneration, cardiomyocyte disorganization and myofibrillar fragmentation, necrosis, mononuclear inflammatory infiltrate, Anitschkow cells, fibrosis, congestion, and edema were observed in the hearts of DOX recipients. In G1 and G2, EEPP attenuated myocyte vacuolar degeneration whereas in G4, EEPP attenuated cardiomyocyte disorganization. The percentage of cells immunoreactive for TIMP1 was higher in G1. It was concluded that EEPP minimizes the deleterious effects of DOX on rat myocardium. Doses of 300 and 600 mg/kg for 17 days attenuate the vacuolar degeneration of myocytes. The dose of 600 mg/kg for 10 days reduced cardiomyocyte disorganization, and the dose of 300 mg/kg for 17 days increased TIMP1 expression in the myocardium of DOX-treated rats.


Avaliou-se a ação do extrato etanólico da casca do pequi (EECP) e a imunomarcação de metaloproteinases de matriz 2 e 9 (MMP2 e MMP9), e inibidores teciduais das metaloproteinases de matriz 1 e 2 (TIMP1 e TIMP2), no miocárdio de ratos submetidos à cardiotoxicidade aguda pela doxorrubicina (DOX). Utilizaram-se 30 ratos Wistar, em seis grupos de cinco animais, sendo Grupo Sham (GS) água e salina; (G1) 16 mg/kg de DOX e 300 mg/kg de EECP por 17 dias; (G2) 16 mg/kg de DOX e 600 mg/kg de EECP por 17 dias; (G3) 16 mg/kg de DOX e 300 mg/kg de EECP por 10 dias; (G4) 16 mg/kg de DOX e 600 mg/kg de EECP por 10 dias; e grupo controle (GC) 16 mg/kg de DOX. Três dias após a aplicação da DOX, no dia 17, realizaram-se a eutanásia e colheita de amostras para análises antomopatológicas. No coração dos ratos que receberam DOX observaram-se degeneração vacuolar miocítica, desorganização dos cardiomiócitos e fragmentação das miofibrilas, necrose, infiltrado inflamatório mononuclear, células de Anitschkow, fibrose, congestão e edema. Nos grupos G1 e G2 o EECP atenuou a degeneração vacuolar miocítica e no G4 atenuou a desorganização dos cardiomiócitos. TIMP1 foi constatada em maior porcentagem de células marcadas no grupo de ratos que recebeu 300 mg/kg do EECP por 17 dias. Conclui-se que o EECP minimiza os efeitos deletérios da DOX no miocárdio de ratos. Nas doses de 300 e 600 mg/kg por 17 dias atenua a degeneração vacuolar miocítica, a 600 mg/kg por 10 dias reduz a desorganização dos cardiomiócitos e a 300 mg/kg por 17 dias aumenta a expressão de TIMP1 no miocárdio de ratos tratados com DOX.


Assuntos
Animais , Cobaias , Cardiotoxicidade/tratamento farmacológico , Ericales , Fitoterapia , Antineoplásicos/toxicidade , Metaloproteases , Preparações de Plantas/uso terapêutico , Ratos Wistar
18.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-2328

Resumo

A próstata canina, além das similaridades com a próstata humana, apresenta grande incidência de afecções. As principais lesões que acometem a próstata são as prostatites, a hiperplasia prostática benigna (HPB), os cistos e o adenocarcinoma, sendo que, recentemente, se tem dado atenção às lesões consideradas pré-malignas, como a neoplasia intraepitelial prostática (PIN) e a atrofia inflamatória proliferativa (PIA), ambas estudadas na glândula humana, e também verificadas na próstata do cão. Para avaliar o desenvolvimento de neoplasias prostáticas a partir das lesões pré-malignas, alguns marcadores imunoistoquímicos são empregados, como os inibidores teciduais de metaloproteinases (TIMP), que apresentam importante função na regulação da ação catalítica das metaloproteinases (MMP), e o fator de crescimento transformador ? (TGF-?), que induz a angiogênese e inibe a proliferação celular, sendo considerado um mediador do crescimento prostático. O objetivo deste estudo foi verificar a expressão de TIMP-1, TIMP-2 e TGF-? no tecido prostático canino normal e com lesões proliferativas. Para isso foram colhidas, em exames necroscópicos, 150 próstatas de cães adultos e idosos. O material foi avaliado histologicamente e selecionadas amostras de 54 próstatas com predominância de histomorfologia normal, HPB epitelial, HPB estromal, PIA, PIN e adenocarcinoma, que foram utilizadas para a confecção de um bloco de microarranjo tecidual (Tissue Microarray - TMA). As lâminas de TMA foram submetidas à imunoistoquímica com os anticorpos anti-TIMP-1, anti-TIMP-2 e anti-TGF-?, sendo avaliada a intensidade de marcação das células epiteliais e estromais. Verificou-se que há marcação citoplasmática das células prostáticas caninas para TIMP-1, TIMP-2 e TGF-?, sendo as proteínas TIMP-1 e TIMP-2 mais expressas nas lesões proliferativas pré-malignas e malignas, enquanto TGF-? foi expresso principalmente pelo tecido normal e com HPB epitelial e estromal. Ainda, houve diferença de marcação entre células epiteliais e estromais

19.
Botucatu; s.n; 2006. 99 p.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-2696

Resumo

A endometrite é a principal causa de subfertilidade em éguas sendo o processo fibrótico fator limitante no desempenho reprodutivo nesta espécie. Este trabalho teve por objetivos avaliar o colágeno presente nas endometrites crônicas das éguas, a expressão das enzimas que degradam o colágeno e de seus inibidores e as alterações vasculares. 82 biópsias uterinas recebidas na FMVZ, UNESP, Botucatu, SP foram classificadas histologicamente e a fibrose foi avaliada pelos métodos de tricrômico de Masson e picrosirius red. A avaliação vascular foi feita pelo VVG. Verificou-se a expressão das enzimas MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9 e TIMP-1 por método imunoistoquímico. A quantidade de colágeno na fibrose endometrial foi maior nas regiões periglandulares, perivasculares e no estrato esponjoso, predominando o colágeno tipo I. Quanto maior o grau de endometrite mais acentuada era a esclerose vascular e a fibroelastose. Não houve diferença na expressão das MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9 e TIMP-1 entre éguas normais e com endometrites. Porém houve diferença em relação à intensidade de marcação notando-se que esta aumentava em determinadas regiões do endométrio. As MMPs e o TIMP-1 estão envolvidos nos processos fibróticos endometriais das éguas uma vez que estas enzimas variam em expressão e intensidade de reação conforme o grau de endometrite


Endometritis is the main cause of mare subfertility and the associated uterine fibrotic process is a limitant factor for the reproductive performance. The aim of this work was to evaluate the collagen distribution and type, the enzymes that are responsible for collagen degradation and its inhibitors, and vascular changes in the endometrium of normal and chronic endometritis carrying mares. So a prospective and comparative study was conducted at Veterinary Hospital of Veterinary College UNESP, Botucatu-SP. Eighty-two uterine biopsy were histologically classified in paraffin sections stained with hematoxylin and eosin, Masson's Trichrome and Verhoeff van Gieson (VVG) stains examined under the light microscope. Picrosirius red polarization was also used for collagen evaluation. The MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9, and TIMP-1 expressions was obtained by immunohistochemichal method. The collagen concentration in fibrotic endometrium was higher at periglandular, perivascular and stratum spongiosum regions with collagen type I predominance. In the most severe endometritis had more advanced grades of vascular sclerosis and fibroelastosis. No difference was found in MMP-1, MMP-2, MMP-7, MMP-9, and TIMP-1 expressions between normal and chronic endometritis samples, but the immunohistochemical reaction was more intense in some regions of fibrotic endometrium. In conclusion, the MMPs and TIMP-1 showed variation in expression and reaction intensity in the normal and chronic affected endometrium and may plays a hole in the endometrial fibrotic process

20.
Botucatu; s.n; 03/03/2006. 101 p.
Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-2705

Resumo

O presente trabalho teve por objetivos avaliar os graus de fibrose endometrial das éguas, especificando por técnicas histoquímicas os tipos de colágeno e sua proporção nas lesões crônicas, além de verificar por método imunoistoquímico a expressão e distribuição das metaloproteinases (MMP) 2 e 9 e um dos seus inibidores - TIMP-1 - nos processos crônicos endometriais. Foram utilizadas 82 biópsias endometriais classificadas histologicamente de acordo com Kenney e Doig (1986) e segundo as definições de Ricketts & Alonso (1991) para endometrite crônica infiltrativa e endometrose. A avaliação do colágeno foi realizada pelos métodos histoquímicos Tricrômico de Masson, Reticulina e Picrosirius Red. Estudo morfométrico da fibrose periglandular foi realizado utilizando-se a técnica histoquímica do Picrosirius Red. Os resultados mostraram que nos endométrios portadores de endometrite severa há deposição de colágeno do tipo III e do tipo I, sendo este predominante. Não houve diferença significativa na extensão da fibrose periglandular entre as endometrites crônicas infiltrativas e endometroses. Tanto no endométrio hígido como nas endometrites crônicas foi observada imuno-reatividade para as enzimas estudadas. A reação imunoistoquímica para MMP-2 foi localizada no epitélio luminal, glandular, parede vascular e células estromais. MMP-9 e TIMP-1 mostraram marcação mais difusa, sendo também observadas nas células inflamatórias e endoteliais


The aim of this study was to evaluate the degrees of endometrial fibrosis in mares, specifying the types of collagen in the chronical lesions and its ratio by histochemical analysis and, the expression and distribution of matrix metalloproteinases (MMP) 2, -9 and one of its inhibitors - TIMP-1 - in the endometrial chronic processes by means of immunohistochemistry. Eighty-two biopsies of chronic endometritis were classified according to Kenney and Doig (1986) and definitions of Ricketts & Alonso (1991) for chronic infiltrative endometritis and endometrosis. The collagen evaluation was made by Massonþs trichrome, Reticulin and Picrosirius Red staining methods. The endometrial periglandular fibrosis morfometric analysis was carried out by using Picrosirius Red stained slides. Deposition of type III collagen and type I collagen was seen in severe endometritis with type I predominance. The chronic infiltrative endometritis and endometrosis didn't show significant difference in the extension of periglandular fibrosis. Immunoreactivity of MMP-2, MMP-9 and TIMP-1 was detected in healthy endometrium as in severe chronic endometritis. The luminal epithelium, glandular epithelium, vascular wall and stromal cells expressed MMP-2. MMP-9 and TIMP-1 had shown diffuser marking, and were as well observed in the inflammatory cells and the endothelium

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