Southern Brazilian geographic distribution of Migonemyia migonei (Diptera: Psychodidae), a putative vector of Leishmania infantum (Kinetoplastida: Trypanosomatidae): a systematic review / Distribuição geográfica sul brasileira de Migonemyia migonei (Diptera: Psychodidae), um vetor putativo de Leishmania infantum (Kinetoplastida: Trypanosomatidae): uma revisão sistemática

This systematic review gathered information on the spatial distribution in southern Brazil of the sandfly Migonemyia migonei, a possible vector of Leishmania species that cause visceral leishmaniasis (VL). Articles were searched from the PubMed, Scielo, Web of Science, and Scopus databases using the keywords: "Migonemyia migonei AND Paraná", "Migonemyia migonei AND Santa Catarina", "Migonemyia migonei AND Rio Grande do Sul", "phlebotomine AND Parana", " flebotomíneo AND Paraná" and "sandfly AND Paraná", "phlebotomine AND Santa Catarina;", " flebotomíneo AND Santa Catarina" and "sandfly AND Santa Catarina", "phlebotomine AND Rio Grande do Sul;", " flebotomíneo AND Rio Grande do Sul", and "sandfly AND Rio Grande do Sul". The initial search identified 322 articles that met the selection criteria. Empty files or duplicated were then excluded. The titles were screened, and the full texts were obtained. This review included 36 articles, covering 72 of the 399 (18.04%) municipalities in Paraná state, one of the 295 (0.33%) in Santa Catarina, and two of the 497 (0.40%) in Rio Grande do Sul. Mg. migonei was found in 54 municipalities of Paraná state, in one municipality of Santa Catarina, and in one of Rio Grande do Sul. Based on the wide distribution of Mg. migonei in the municipalities of Paraná, greater monitoring is required regarding cases of VL in humans and animals in this region, in addition to epidemiological investigations of these cases of suspected autochthony, as well as increased prevention and control efforts. More studies on VL are required in Santa Catarina and Rio Grande do Sul.

Esta revisão sistemática reuniu informações sobre a distribuição espacial no sul do Brasil do flebotomíneo Migonemyia migonei, um possível vetor de espécies de Leishmania causadoras da leishmaniose visceral (LV). Os artigos foram pesquisados nas bases de dados PubMed, Scielo, Web of Science e Scopus usando as palavras-chave: "Migonemyia migonei AND Paraná", "Migonemyia migonei AND Santa Catarina", "Migonemyia migonei AND Rio Grande do Sul", "phlebotomine AND Parana" , "flebotomíneo AND Paraná" e "flebotomíneo AND Paraná", "flebotomíneo AND Santa Catarina;", "flebotomíneo AND Santa Catarina" e "flebotomíneo AND Santa Catarina", "flebotomíneo AND Rio Grande do Sul;", "flebotomíneo AND Rio Grande do Sul" e "sandfly AND Rio Grande do Sul". A busca inicial identificou 322 artigos que atenderam aos critérios de seleção. Em seguida, arquivos vazios ou duplicados foram excluídos. Os títulos foram triados e os textos completos foram obtidos. Esta revisão incluiu 36 artigos, abrangendo 72 dos 399 (18,04%) municípios do Paraná, um dos 295 (0,33%) de Santa Catarina, dois dos 497 (0,40%) do Rio Grande do Sul. Mg. migonei foi encontrado em 54 municípios do Paraná estado, em um município de Santa Catarina e em um do Rio Gr ande do Sul. Com base na ampla distribuição de Mg. migonei nos municípios paranaenses, é necessária maior atenção quanto aos casos de LV em humanos e animais, além de investigações epidemiológicas desses casos de suspeita de autoctonia, bem como maiores esforços de prevenção e controle. Mais estudos são necessários em Santa Catarina e Rio Grande do Sul.

Proteolytic activity of Triatoma infestans saliva associated with PAR-2 activation and vasodilation

Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae) is a hematophagous insect and the main vector of Trypanosoma cruzi (Kinetoplastida: Trypanosomatidae). In the present study, the authors investigated whether a serine protease activity from the saliva of T. infestans has a role in vasomotor modulation, and in the insect-blood feeding by cleaving and activating protease-activated receptors (PARs). Methods T. infestans saliva was chromatographed as previously reported for purification of triapsin, a serine protease. The cleavage activity of triapsin on PAR peptides was investigated based on FRET technology. Mass spectrometry was used to analyze the sites of PAR-2 peptide cleaved by triapsin. NO measurements were performed using the DAN assay (2,3-diaminonapthalene). The vasorelaxant activity of triapsin was measured in vessels with or without functional endothelium pre-contracted with phenylephrine (3 µM). Intravital microscopy was used to assess the effect of triapsin on mouse skin microcirculation. Results Triapsin was able to induce hydrolysis of PAR peptides and showed a higher preference for cleavage of the PAR-2 peptide. Analysis by mass spectrometry confirmed a single cleavage site, which corresponds to the activation site of the PAR-2 receptor. Triapsin induced dose-dependent NO release in cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), reaching a maximum effect at 17.58 nM. Triapsin purified by gel-filtration chromatography (10-16 to 10-9 M) was applied cumulatively to mouse mesenteric artery rings and showed a potent endothelium-dependent vasodilator effect (EC30 = 10-12 M). Nitric oxide seems to be partially responsible for this vasodilator effect because L-NAME (L-NG-nitroarginine methyl ester 300 µM), a nitric oxide synthetase inhibitor, did not abrogate the vasodilation activated by triapsin. Anti-PAR-2 antibody completely inhibited vasodilation observed in the presence of triapsin activity. Triapsin activity also induced an increase in the mouse ear venular diameter. Conclusion Data from this study suggest a plausible association between triapsin activity mediated PAR-2 activation and vasodilation caused by T. infestans saliva.(AU)

Proteolytic activity of Triatoma infestans saliva associated with PAR-2 activation and vasodilation

Triatoma infestans (Hemiptera: Reduviidae) is a hematophagous insect and the main vector of Trypanosoma cruzi (Kinetoplastida: Trypanosomatidae). In the present study, the authors investigated whether a serine protease activity from the saliva of T. infestans has a role in vasomotor modulation, and in the insect-blood feeding by cleaving and activating protease-activated receptors (PARs). Methods T. infestans saliva was chromatographed as previously reported for purification of triapsin, a serine protease. The cleavage activity of triapsin on PAR peptides was investigated based on FRET technology. Mass spectrometry was used to analyze the sites of PAR-2 peptide cleaved by triapsin. NO measurements were performed using the DAN assay (2,3-diaminonapthalene). The vasorelaxant activity of triapsin was measured in vessels with or without functional endothelium pre-contracted with phenylephrine (3 µM). Intravital microscopy was used to assess the effect of triapsin on mouse skin microcirculation. Results Triapsin was able to induce hydrolysis of PAR peptides and showed a higher preference for cleavage of the PAR-2 peptide. Analysis by mass spectrometry confirmed a single cleavage site, which corresponds to the activation site of the PAR-2 receptor. Triapsin induced dose-dependent NO release in cultured human umbilical vein endothelial cells (HUVECs), reaching a maximum effect at 17.58 nM. Triapsin purified by gel-filtration chromatography (10-16 to 10-9 M) was applied cumulatively to mouse mesenteric artery rings and showed a potent endothelium-dependent vasodilator effect (EC30 = 10-12 M). Nitric oxide seems to be partially responsible for this vasodilator effect because L-NAME (L-NG-nitroarginine methyl ester 300 µM), a nitric oxide synthetase inhibitor, did not abrogate the vasodilation activated by triapsin. Anti-PAR-2 antibody completely inhibited vasodilation observed in the presence of triapsin activity. Triapsin activity also induced an increase in the mouse ear venular diameter. Conclusion Data from this study suggest a plausible association between triapsin activity mediated PAR-2 activation and vasodilation caused by T. infestans saliva.(AU)

Activity of Piperaceae extracts and fractions in the control of Phytomonas serpens / Atividade de extratos e frações de Piperaceae no controle de Phytomonas serpens

Protozoa of the genus Phytomonas are harmful parasites to several agricultural crops of economic importance. Due to their recognized biological activity, crude extracts of Piper aduncum, P. crassinervium, P. hispidum, and P. amalago leaves, were tested using the microdilution plate technique to assess the antiparasitic potential against Phytomonas serpens. Results showed that the ethanolic crude extract of P. crassinervium and P. amalago presented the best inhibitory concentration for 50% of the cells (IC50), 16.5 µg mL-1 in chloroform phase, and 18 µg mL-1 in aqueous phase, respectively, after 48 h treatment. Cytotoxicity analyses were performed using the colorimetric method of sulforhodamine-B in LLCMK2 mammalian cells. The chloroform phase of P. crassinervium was subjected to the fractionation process, in which the ethyl acetate and dichloromethane fractions obtained better IC50 values. Scanning electron microscopy (SEM) images showed alterations in the cell membrane of the treated parasites. The data obtained indicate a potential antiparasitic effect of the Piper species analyzed against P. serpens, being considered promising candidates for formulations of bioproducts to control the parasite.(AU)

Protozoários do gênero Phytomonas são parasitas prejudiciais a várias culturas agrícolas de importância econômica. Devido a sua atividade biológica reconhecida, extratos brutos de folhas de Piper aduncum, P. crassinervium, P. hispidum e P. amalago, foram testadas pela técnica de microdiluição em placa para avaliar o seu potencial antiparasitário contra Phytomonas serpens. Os resultados mostraram que o extrato bruto etanólico de P. crassinervium e P. amalago apresentaram as melhores concentrações inibitórias para 50% das células (IC50), 16,5 µg mL-1 na fase clorofórmio e 18 µg mL-1 na fase aquosa, respectivamente, após 48 h de tratamento. Análises de citotoxicidade foram realizadas através do método colorimétrico da sulforodamina-B, em células de mamíferos LLCMK2. A fase clorofórmio de P. crassinervium foi submetida ao processo de fracionamento, no qual as frações acetato de etila e diclorometano obtiveram melhores valores de IC50. Imagens de microscopia eletrônica de varredura (MEV) mostraram alterações na membrana celular dos parasitas tratados com fase aquosa de P. amalago. Os dados obtidos indicam potencial efeito antiparasitário das espécies de Piper analisadas contra P. serpens, sendo consideradas candidatas promissoras para formulações de bioprodutos para controle do parasito.(AU)

Applications of polymerase chain reaction for the detection of equine Leishmania sp. infection / Aplicação da reação em cadeia da polimerase na detecção da infecção por Leishmania sp. em equinos

Leishmaniasis is a neglected zoonotic disease caused by a variety of pathogenic Leishmania species. In the New World, especially in Brazil, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum. The pathogen can infect several animal species including dogs, foxes, rodents, primates, felines, equines and humans. Dogs act as the primary domestic reservoirs. This study aimed to use polymerase chain reaction (PCR) for detecting Leishmania infection in horses living in a canine visceral leishmaniasis (CVL) endemic region. DNA samples from horse peripheral blood were used to perform PCR. Templates were amplified using primers for the kinetoplast DNA (kDNA) minicircles, which were able to detect different species of Leishmania. In addition, primers for internal transcribed spacer (ITS) of ribosomal DNA were used for detection of Trypanosomatidae sp. Amongst the 75 (39%) positive PCR samples from total 192 samples, 21 samples were positive for kDNA and 63 samples were positive for either ITS, ITS1, or ITS2 gene markers. The kDNA PCR and sequencing allowed the detection of L. infantum in horse blood samples. To our knowledge, this is the first report of equine infection with L. infantum in Southern Brazil. These results proved that L. infantum could also infect horses in addition to humans and dogs, as well as in European countries. This conclusion emphasizes the urgent need to follow up investigation of the infection in these animals.

A leishmaniose é uma doença zoonótica negligenciada, causada por uma diversidade de espécies patogênicas de Leishmania. No Novo Mundo, especialmente no Brasil, a leishmaniose visceral é causada pelo protozoário Leishmania infantum. A infecção acomete várias espécies animais (cães, raposas, roedores, primatas, felinos, equinos) e humanos e o cão é o principal reservatório doméstico. Este estudo teve como objetivo utilizar a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar a infecção por Leishmania sp. em cavalos que vivem em uma região endêmica para leishmaniose visceral canina (LVC). Amostras de DNA do sangue periférico de equinos foram utilizadas para extração de DNA e PCR. As amplificações foram realizadas utilizando-se marcadores para a região do DNA do cinetoplasto (kDNA), que são capazes de detectar diferentes espécies de Leishmania sp. e a região dos espaçadores internos transcritos (ITS) do DNA ribossomal para detecção da família Trypanosomatidae. Dentre os 192 animais testados, 75 (39%) amostras foram positivas no PCR, 21 amostras foram positivas para PCR kDNA e 63 para os genes ITS, ITS1 e ITS2. O sequenciamento dos amplicons permitiu detectar L. infantum em amostras de sangue periférico de equinos. Este foi o primeiro relato de infecção por L. infantum no sul do Brasil na espécie equina. Os resultados demonstram que, assim como nos países europeus, a infecção foi detectada em equinos após ter sido identificada em seres humanos e cães, o que indica a urgência em acompanhar a investigação da infecção nessa espécie animal.

Applications of polymerase chain reaction for the detection of equine Leishmania sp. infection / Aplicação da reação em cadeia da polimerase na detecção da infecção por Leishmania sp. em equinos

Leishmaniasis is a neglected zoonotic disease caused by a variety of pathogenic Leishmania species. In the New World, especially in Brazil, visceral leishmaniasis (VL) is caused by Leishmania infantum. The pathogen can infect several animal species including dogs, foxes, rodents, primates, felines, equines and humans. Dogs act as the primary domestic reservoirs. This study aimed to use polymerase chain reaction (PCR) for detecting Leishmania infection in horses living in a canine visceral leishmaniasis (CVL) endemic region. DNA samples from horse peripheral blood were used to perform PCR. Templates were amplified using primers for the kinetoplast DNA (kDNA) minicircles, which were able to detect different species of Leishmania. In addition, primers for internal transcribed spacer (ITS) of ribosomal DNA were used for detection of Trypanosomatidae sp. Amongst the 75 (39%) positive PCR samples from total 192 samples, 21 samples were positive for kDNA and 63 samples were positive for either ITS, ITS1, or ITS2 gene markers. The kDNA PCR and sequencing allowed the detection of L. infantum in horse blood samples. To our knowledge, this is the first report of equine infection with L. infantum in Southern Brazil. These results proved that L. infantum could also infect horses in addition to humans and dogs, as well as in European countries. This conclusion emphasizes the urgent need to follow up investigation of the infection in these animals.(AU)

A leishmaniose é uma doença zoonótica negligenciada, causada por uma diversidade de espécies patogênicas de Leishmania. No Novo Mundo, especialmente no Brasil, a leishmaniose visceral é causada pelo protozoário Leishmania infantum. A infecção acomete várias espécies animais (cães, raposas, roedores, primatas, felinos, equinos) e humanos e o cão é o principal reservatório doméstico. Este estudo teve como objetivo utilizar a reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar a infecção por Leishmania sp. em cavalos que vivem em uma região endêmica para leishmaniose visceral canina (LVC). Amostras de DNA do sangue periférico de equinos foram utilizadas para extração de DNA e PCR. As amplificações foram realizadas utilizando-se marcadores para a região do DNA do cinetoplasto (kDNA), que são capazes de detectar diferentes espécies de Leishmania sp. e a região dos espaçadores internos transcritos (ITS) do DNA ribossomal para detecção da família Trypanosomatidae. Dentre os 192 animais testados, 75 (39%) amostras foram positivas no PCR, 21 amostras foram positivas para PCR kDNA e 63 para os genes ITS, ITS1 e ITS2. O sequenciamento dos amplicons permitiu detectar L. infantum em amostras de sangue periférico de equinos. Este foi o primeiro relato de infecção por L. infantum no sul do Brasil na espécie equina. Os resultados demonstram que, assim como nos países europeus, a infecção foi detectada em equinos após ter sido identificada em seres humanos e cães, o que indica a urgência em acompanhar a investigação da infecção nessa espécie animal.(AU)

Molecular methodology for the detection of the Leishmania genus in different biological samples extracted from dogs

Background: The leishmaniases are a group of parasitic diseases caused by trypanosomatids belonging to the genus Leishmania, members of the class Kinetoplastida, order Trypanosomatidae, family Trypanosomatidae. Despite innumerous wildspecies that are infected, the domestic dog is a potential reservoir of Leishmania infantum in urban areas, which expandsthe transmission pathway to humans. When infected, the dog becomes Visceral Canine Leishmaniasis (CVL), which ischaracterized by a diverse clinical picture that ranges from asymptomatic to non-specific signs, such as skin lesions, lymphadenomegaly, weight loss, splenomegaly, and/or ocular lesions, thus impairing accurate and rapid diagnosis. In Brazil, itis considered a public health problem since it is endemic in certain regions. Therefore, parasitological, serological, andmolecular methods can be used for the detection of the disease. However, the possibility of serological cross-reaction andthe occurrence of co-infection with other trypanosomatids decreases the specificity rate to below 100%, which suggeststhe use of more accurate diagnostic tools. Several molecular targets and starting samples for leishmaniasis diagnosis arealready standardized, but there is lack of data allowing the evaluation of the target, as well as which biological material ismore efficient for the molecular diagnosis of CVL. The sensitivity of PCR may vary with DNA quality, primer type, parasitemia level, and number of target copies per cell. The spleen, blood, liver, aspirate of bone marrow and lymph nodes arethe most frequently used for molecular diagnosis of CVL. The present study aimed to evaluate and compare three protocolsof the polymerase chain reaction (PCR) for the molecular diagnosis of CVL in different biological samples removed fromanimals...

Molecular methodology for the detection of the Leishmania genus in different biological samples extracted from dogs

Background: The leishmaniases are a group of parasitic diseases caused by trypanosomatids belonging to the genus Leishmania, members of the class Kinetoplastida, order Trypanosomatidae, family Trypanosomatidae. Despite innumerous wildspecies that are infected, the domestic dog is a potential reservoir of Leishmania infantum in urban areas, which expandsthe transmission pathway to humans. When infected, the dog becomes Visceral Canine Leishmaniasis (CVL), which ischaracterized by a diverse clinical picture that ranges from asymptomatic to non-specific signs, such as skin lesions, lymphadenomegaly, weight loss, splenomegaly, and/or ocular lesions, thus impairing accurate and rapid diagnosis. In Brazil, itis considered a public health problem since it is endemic in certain regions. Therefore, parasitological, serological, andmolecular methods can be used for the detection of the disease. However, the possibility of serological cross-reaction andthe occurrence of co-infection with other trypanosomatids decreases the specificity rate to below 100%, which suggeststhe use of more accurate diagnostic tools. Several molecular targets and starting samples for leishmaniasis diagnosis arealready standardized, but there is lack of data allowing the evaluation of the target, as well as which biological material ismore efficient for the molecular diagnosis of CVL. The sensitivity of PCR may vary with DNA quality, primer type, parasitemia level, and number of target copies per cell. The spleen, blood, liver, aspirate of bone marrow and lymph nodes arethe most frequently used for molecular diagnosis of CVL. The present study aimed to evaluate and compare three protocolsof the polymerase chain reaction (PCR) for the molecular diagnosis of CVL in different biological samples removed fromanimals...(AU)

Epidemiological aspects of human and canine visceral leishmaniasis in State of Alagoas, Northeast, Brazil

Abstract Zoonotic visceral leishmaniasis (ZVL), caused by protozoans of the genus Leishmania, it is a worldwide of great importance disease. In the northeast region of Brazil, the state of Alagoas has an endemic status for ZVL. Thus, this work aimed to analyze the epidemiological situation of human and canine visceral leishmaniasis in Alagoas, Northeast, Brazil, from 2007 to 2013. We conducted a descriptive, observational, retrospective study using secondary data from the Notifiable Diseases Information System, the Center of Zoonosis Control of Maceió, and the Central Laboratory of Public Health of Alagoas. During the studied period, it was observed that the highest incidence of human visceral leishmaniasis was in 2011 and the lowest in 2013. On the other hand, canine visceral leishmaniasis had its highest incidence in 2007 and its lowest in 2012. Of the 55 municipalities in the State of Alagoas that showed human visceral leishmaniasis (HVL), São José da Tapera presented an average of 4.4 cases over the past five years, being classified as of intense transmission. Regarding canine visceral leishmaniasis, in the same studied period, 45,112 dogs were examined in the State, of which 4,466 were positive. It resulted, thus, in a 9.9% positivity rate. Conclusions: Our data are important because canine infection is an important risk factor for the human disease.

Resumo Leishmaniose visceral zoonótica, causada por protozoários do gênero Leishmania, é uma doença importante no mundo. Na região nordeste do Brasil, do estado de Alagoas é endêmico para LVZ. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo analisar a situação epidemiológica da leishmaniose visceral humana e canina em Alagoas, Nordeste, Brasil, no período de 2007 a 2013. Foi realizado um estudo descritivo, observacional, retrospectivo, usando-se secundário do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), Centro de Controle de Zoonoses de Maceió (CCZ) e Laboratório Central de Saúde Pública de Alagoas (LACEN/AL). Durante o período de estudo, observou-se que o ano de maior incidência de Leishmaniose visceral humana (LVH) foi o de 2011 e o de menor foi no ano de 2013. Já a LVC teve maior incidência em 2007 e menor em 2012. Dos 55 municípios do Estado de Alagoas que apresentaram LVH, São José da Tapera apresentou uma média de casos de 4,4 nos últimos cinco anos classificado como de transmissão intensa; No que diz respeito à leishmaniose visceral canina (LVC), no mesmo período de estudo, foram examinados 45.112 cães no Estado, dos quais 4.466 foram positivos. Resultou assim, em uma taxa de 9,9% de positividade. Nossos dados são importantes porque a infecção canina é um importante fator de risco para a doença humana.

Epidemiological aspects of human and canine visceral leishmaniasis in State of Alagoas, Northeast, Brazil / Aspectos epidemiológicos da leishmaniose visceral canina e humana no estado de Alagoas, Nordeste, Brasil

Zoonotic visceral leishmaniasis (ZVL), caused by protozoans of the genus Leishmania, it is a worldwide of great importance disease. In the northeast region of Brazil, the state of Alagoas has an endemic status for ZVL. Thus, this work aimed to analyze the epidemiological situation of human and canine visceral leishmaniasis in Alagoas, Northeast, Brazil, from 2007 to 2013. We conducted a descriptive, observational, retrospective study using secondary data from the Notifiable Diseases Information System, the Center of Zoonosis Control of Maceió, and the Central Laboratory of Public Health of Alagoas. During the studied period, it was observed that the highest incidence of human visceral leishmaniasis was in 2011 and the lowest in 2013. On the other hand, canine visceral leishmaniasis had its highest incidence in 2007 and its lowest in 2012. Of the 55 municipalities in the State of Alagoas that showed human visceral leishmaniasis (HVL), São José da Tapera presented an average of 4.4 cases over the past five years, being classified as of intense transmission. Regarding canine visceral leishmaniasis, in the same studied period, 45,112 dogs were examined in the State, of which 4,466 were positive. It resulted, thus, in a 9.9% positivity rate. Conclusions: Our data are important because canine infection is an important risk factor for the human disease.(AU)

Leishmaniose visceral zoonótica, causada por protozoários do gênero Leishmania, é uma doença importante no mundo. Na região nordeste do Brasil, do estado de Alagoas é endêmico para LVZ. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo analisar a situação epidemiológica da leishmaniose visceral humana e canina em Alagoas, Nordeste, Brasil, no período de 2007 a 2013. Foi realizado um estudo descritivo, observacional, retrospectivo, usando-se secundário do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), Centro de Controle de Zoonoses de Maceió (CCZ) e Laboratório Central de Saúde Pública de Alagoas (LACEN/AL). Durante o período de estudo, observou-se que o ano de maior incidência de Leishmaniose visceral humana (LVH) foi o de 2011 e o de menor foi no ano de 2013. Já a LVC teve maior incidência em 2007 e menor em 2012. Dos 55 municípios do Estado de Alagoas que apresentaram LVH, São José da Tapera apresentou uma média de casos de 4,4 nos últimos cinco anos classificado como de transmissão intensa; No que diz respeito à leishmaniose visceral canina (LVC), no mesmo período de estudo, foram examinados 45.112 cães no Estado, dos quais 4.466 foram positivos. Resultou assim, em uma taxa de 9,9% de positividade. Nossos dados são importantes porque a infecção canina é um importante fator de risco para a doença humana.(AU)

Epidemiological aspects of human and canine visceral leishmaniasis in State of Alagoas, Northeast, Brazil

Abstract Zoonotic visceral leishmaniasis (ZVL), caused by protozoans of the genus Leishmania, it is a worldwide of great importance disease. In the northeast region of Brazil, the state of Alagoas has an endemic status for ZVL. Thus, this work aimed to analyze the epidemiological situation of human and canine visceral leishmaniasis in Alagoas, Northeast, Brazil, from 2007 to 2013. We conducted a descriptive, observational, retrospective study using secondary data from the Notifiable Diseases Information System, the Center of Zoonosis Control of Maceió, and the Central Laboratory of Public Health of Alagoas. During the studied period, it was observed that the highest incidence of human visceral leishmaniasis was in 2011 and the lowest in 2013. On the other hand, canine visceral leishmaniasis had its highest incidence in 2007 and its lowest in 2012. Of the 55 municipalities in the State of Alagoas that showed human visceral leishmaniasis (HVL), São José da Tapera presented an average of 4.4 cases over the past five years, being classified as of intense transmission. Regarding canine visceral leishmaniasis, in the same studied period, 45,112 dogs were examined in the State, of which 4,466 were positive. It resulted, thus, in a 9.9% positivity rate. Conclusions: Our data are important because canine infection is an important risk factor for the human disease.

Resumo Leishmaniose visceral zoonótica, causada por protozoários do gênero Leishmania, é uma doença importante no mundo. Na região nordeste do Brasil, do estado de Alagoas é endêmico para LVZ. Neste sentido, este trabalho teve como objetivo analisar a situação epidemiológica da leishmaniose visceral humana e canina em Alagoas, Nordeste, Brasil, no período de 2007 a 2013. Foi realizado um estudo descritivo, observacional, retrospectivo, usando-se secundário do Sistema de Informação de Agravos de Notificação (SINAN), Centro de Controle de Zoonoses de Maceió (CCZ) e Laboratório Central de Saúde Pública de Alagoas (LACEN/AL). Durante o período de estudo, observou-se que o ano de maior incidência de Leishmaniose visceral humana (LVH) foi o de 2011 e o de menor foi no ano de 2013. Já a LVC teve maior incidência em 2007 e menor em 2012. Dos 55 municípios do Estado de Alagoas que apresentaram LVH, São José da Tapera apresentou uma média de casos de 4,4 nos últimos cinco anos classificado como de transmissão intensa; No que diz respeito à leishmaniose visceral canina (LVC), no mesmo período de estudo, foram examinados 45.112 cães no Estado, dos quais 4.466 foram positivos. Resultou assim, em uma taxa de 9,9% de positividade. Nossos dados são importantes porque a infecção canina é um importante fator de risco para a doença humana.

Molecular detection of Trypanosoma evansi (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) in procyonids (Carnivora: Procyonidae) in Eastern Amazon, Brazil / Detecção molecular de Trypanosoma evansi (Kinetoplastida: Trypanosomatidae) em procionídeos (Carnivora: Procyonidae) na Amazônia Oriental, Brasil

The present study aimed to diagnose the natural infection of captive and free-living procyonids with Trypanosoma evansi in the states of Amapá and Pará, Brazil. From February 2012 to August 2013, whole blood samples and blood smears were obtained from 45 free-living procyonids and from nine procyonids kept in captivity in wild life refuges and zoobotanical parks in the states of Amapá and Pará. Whole blood samples were collected and kept at -20ºC for the detection of T. evansi DNA by PCR using the RoTat 1.2 forward and RoTat 1.2 reverse primers. In addition, the blood smears were processed and examined for the presence of trypomastigote forms of T. evansi. T. evansi DNA was detected in 18.52% (10/54) of the procyonids, namely, in captive crab-eating raccoons and captive and free-living coatis in Pará State. No trypomastigote forms were observed in the blood smears. DNA from T. evansi was detected in P. cancrivorus and N. nasua in Pará State, being this the first such report in P. cancrivorus.(AU)

O objetivo do presente trabalho foi realizar o diagnóstico da infecção natural por Trypanosoma evansi em procionídeos de vida livre e de cativeiro dos estados do Amapá e Pará, Brasil. Durante o período de fevereiro de 2012 a agosto de 2013, amostras de sangue total e esfregaços sanguíneos foram obtidos de 45 procionídeos de vida livre e de nove mantidos em cativeiro em mantenedores e Parques Zoobotânicos dos estados do Amapá e Pará. As amostras de sangue total foram coletadas e mantidas a -20ºC para pesquisa de DNA de T. evansi pela PCR utilizando-se os iniciadores RoTat 1.2 forward e RoTat 1.2 reverse. Os esfregaços sanguíneos também foram processados e examinados para a pesquisa de formas tripomastigotas do agente. DNA de T. evansi foi detectado em 18,52% (10/54) dos procionídeos, ocorrendo em mãos-peladas de cativeiro e quatis de vida livre e de cativeiro no estado do Pará. Não foram observadas formas tripomastigotas nos esfregaços sanguíneos. DNA de T. evansi foi detectado em P. cancrivorus e N. na sua no estado do Pará, sendo este o primeiro relato em P. cancrivorus.(AU)

Detecção molecular de Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi em equídeos em condições semiáridas

A leishmaniose e a doença de Chagas são infecções causadas por protozoários pertencentes aos gêneros Leishmania e Trypanosoma, respectivamente, considerados os mais importantes dentro da família Trypanosomatidae, devido seu caráter zoonótico. Classificadas como doenças tropicais negligenciadas, ocorrem com maior prevalência em países pobres, causando problemas de ordem econômicos, social e político. A presente tese foi dividida em três capítulos, que objetivaram descrever aspectos epidemiológicos e do diagnóstico da infecção por Leishmania infantum e Trypanosoma cruzi em equídeos. No capítulo I, foi desenvolvida uma revisão sistemática com metanálise sobre as características clínicas e a prevalência da leishmaniose em equídeos. Os principais sintomas da leishmaniose em equídeos são cutâneos (pápulas, nódulos, úlceras, crostas), autolimitantes e localizadas principalmente na cabeça e membros. A metanálise evidenciou uma prevalência combinada de 25%. Como conclusão, evidenciou-se que a leishmaniose em equídeos é uma doença benigna, e deve ser incluída como diagnóstico diferencial para doenças cutâneas nessas espécies. No capítulo II realizou-se um levantamento da infecção por Leishmania infantum em asininos e muares em condições semiáridas do Brasil. Sangue total de 72 equídeos (65 asininos e 7 muares) foi usado para realização de diagnóstico molecular por meio da técnica de Reação em Cadeia de Polimerase em Tempo Real (qPCR). Um total de 25% das amostras (18/72) resultaram positivas na qPCR, não havendo diferença significativa entre as espécies, sexo e situação de abandono dos animais (sim ou não). Asininos e muares vivendo em área rural do semiárido do Brasil apresentam alta frequência de infecção por L. infantum, sendo válido atribuir importância a essas espécies no ciclo epidemiológico da leishmaniose. No capítulo III objetivou-se detectar a infecção por Trypanosoma cruzi em asininos e muares de áreas rurais do semiárido brasileiro. Sangue total de 72 equídeos (65 asininos e 7 muares) foram analisadas por Nested Polymerase Chain Reaction (nested-PCR). Um total de 51,39% das amostras (37/72) resultaram positivas. A análise filogenética identificou os tipos TcI e TcII de T. cruzi. Esse é o primeiro relato de infecção por T. cruzi em asininos e muares no Brasil, e o modo de vida deles, a adaptabilidade dos vetores na Caatinga e as características socioeconômicas da população do semiárido criam interações que podem favorecer a transmissão e a sobreposição dos ciclos silvestre, peridoméstico e doméstico de infecção de T. cruzi.

Leishmaniasis and Chagas disease are infections caused by protozoa belonging to the genera Leishmania and Trypanosoma, respectively, considered the most important within the Trypanosomatidae family, due to their zoonotic character. Classified as neglected tropical diseases, they occur with greater prevalence in poor countries, causing economic, social and political problems. This thesis was divided into three chapters, which aimed to describe epidemiological and diagnostic aspects of infection by Leishmania infantum and Trypanosoma cruzi in equids. In chapter I, a systematic review with meta-analysis about the clinical characteristics and prevalence of leishmaniasis in equids was developed. The main symptoms of leishmaniasis in equids are cutaneous (papules, nodules, ulcers, crusts), self-limiting and mainly located on the head and limbs. The meta-analysis showed a combined prevalence of 25%. In conclusion, it was shown that leishmaniasis in equids is a benign disease and should be included as a differential diagnosis for skin diseases in these species. In chapter II, a survey of Leishmania infantum infection in donkeys and mules in semi-arid conditions in Brazil was carried out. Whole blood from 72 equidae (65 donkeys and 7 mules) was used to perform molecular diagnosis through the Real Time Polymerase Chain Reaction (qPCR) technique. A total of 25% samples (18/72) were positive in the qPCR, with no significant difference between species, sex and abandonment status of the animals (yes or no). Donkeys and mules living in rural area of the semiarid region of Brazil have a high frequency of infection by L. infantum, and it is valid to attribute importance to these species in the epidemiological cycle of leishmaniasis. Chapter III aimed to detect Trypanosoma cruzi infection in donkeys and mules from rural areas of the Brazilian semiarid region. Whole blood from 72 equidae (65 donkeys and 7 mules) were analyzed by Nested Polymerase Chain Reaction (nested-PCR). A total of 51.39% samples (37/72) were positive. Phylogenetic analysis identified the TcI and TcII types of T. cruzi. This is the first report of T. cruzi infection in donkeys and mules in Brazil, and their way of life, the adaptability of vectors in the Caatinga and the socioeconomic characteristics of the semi-arid population create interactions that can favor the transmission and overlap of wild, peridomestic and domestic cycles of T. cruzi infection.

PESQUISA DE TRIPANOSOMATIDEOS EM CAPIVARAS (HYDROCHOERUS HYDROCHAERIS) DE VIDA LIVRE DO DISTRITO FEDERAL

Os tripanossomatídeos são uma família de diversos organismos caracterizados por possuírem um único axonema e cinetoplasto rico em DNA localizado na base do flagelo. Dos 13 gêneros reconhecidos, os gêneros Leishmania e Trypanosoma são conhecidos por serem patogênicos aos humanos e animais e causarem um grupo de doenças negligenciadas. A capivara (Hydrochoerus hydrochaeris) assume papel importante na epidemiologia das mais diversas patologias de caráter zoonótico como a febre maculosa, leptospirose, salmonelose, leishmaniose e tripanossomíase. Assim, os objetivos do presente estudo foram avaliar a presença de agentes da família Trypanosomatidae em amostras de sangue total e carrapatos de capivaras de vida livre do Distrito Federal (DF) por meio de ensaios moleculares (cPCR) e sorológicos (reação de imunofluorescência indireta - RIFI) e analisar as possíveis alterações laboratoriais (hemograma e bioquímicos) decorrentes destas infecções. Das 57 amostras de sangue total testadas por meio da cPCR para o gene 24S-rDNA, 39 (68,4%) foram positivas. Todas as amostras foram negativas para Leishmania spp. e T. cruzi na cPCR e na RIFI. Houve diferença significativa entre os grupos de animais infectados e não infectados para os níveis de aspartato aminotransferase (AST), número de hemácias e leucócitos totais. Dos 60 carrapatos testados, sete foram positivos para o gene 24S-rDNA . Os resultados mostram que as capivaras de vida livre do DF estão infectadas por Trypanosoma sp. e bem como os carrapatos coletados, indicando que estes artrópodes podem, de alguma forma, participar como vetores de espécies de tripanossomatideos nas populações de capivaras, e que estes animais não oferecem riscos à saúde pública quando se trata de infecção por T. cruzi e Leishmania spp.

Trypanosomatids are a family of diverse organisms characterized by having a single axoneme and kinetoplast rich in DNA located at the base of the flagellum. Of the 13 recognized genera, the Leishmania and Trypanosoma genera are known to be pathogenic to humans and animals and to cause a group of neglected diseases. Capybara (Hydrochoerus hydrochaeris) plays an important role in the epidemiology of the most diverse pathologies of a zoonotic character such as spotted fever, leptospirosis, salmonellosis, leishmaniasis and trypanosomiasis. Thus, the objectives of the present study were to evaluate the presence of agents of the Trypanosomatidae family in samples of whole blood and ticks of free-ranging capybaras in the Federal District (DF) through molecular (cPCR) and serological tests (indirect immunofluorescence reaction - RIFI) and analyze possible laboratory changes (blood count and biochemicals) resulting from these infections. Of the 57 whole blood samples tested using the cPCR for the 24SrDNA gene, 39 (68.4%) were positive. All samples were negative for Leishmania spp. and T. cruzi at cPCR and RIFI. There was a significant difference between the groups of infected and uninfected animals for the levels of aspartate aminotransferase (AST), the number of red blood cells and total leukocyte. Of the 60 ticks tested, seven were positive for the 24S-rDNA gene. The results show that the free-ranging capybaras of the DF are infected with Trypanosoma sp. and as well as the collected ticks, indicating that these arthropods may, in some way, participate as vectors of trypanosomatid species in capybaras populations, and that these animals do not pose risks to public health when it comes to infection by T. cruzi and Leishmania spp.

MIOCARDIOPATIA EM CÃES NATURALMENTE INFECTADOS POR Leishmania i. chagasi e Erlichia canis: ASPECTOS HISTOPATOLÓGICOS

A leishmaniose visceral (LV) também conhecida como Calazar, é uma zoonose de larga distribuição em regiões tropicais e subtropicais. É causada por protozoários da ordem Kinetoplastida, família Trypanosomatidae e do gênero Leishmania, que infectam o cão e uma ampla variedade de vertebrados, incluindo o homem. Em regiões endêmicas para LVC a ocorrência de co-infecção com outros patógenos, como Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon spp. e Babesia spp. vem sendo descrita e associada ao agravamento do quadro clínico, com índices de incidência de até 80%. Apesar de menos comum, a ocorrência de alterações miocárdicas pode ser encontrada em infecções causadas por L. i. chagasi e E. canis separadamente, no entanto ainda se desconhece o quão grave a coinfecção é para o coração desses pacientes. Dessa forma o presente estudo objetivou avaliar a ocorrência de alterações histológicas no coração de cães naturalmente infectados por L. i. chagasi associado ou não a ocorrência de coinfecção com E. canis. Para isso, foram utilizados blocos parafinizados de coração de 32 cães naturalmente infectados L. i. chagasi e E. canis, atendidos no Hospital Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária, UNESP - Araçatuba. Para avaliação e comparação das lesões cardíacas os blocos foram divididos em dois grupos, sendo o Grupo 1 (G1) composto por 18 blocos de coração oriundos de animais infectados exclusivamente com Leishmania infantum chagasi, enquanto o Grupo 2 (G2) foi composto por 13 blocos de coração de cães coinfectados com Leishmania infantum chagasi e E. canis. Foram avaliados quatro fragmentos de áreas distintas do coração desses pacientes, sendo eles o átrio direito (AD), ventrículo direito (VD), ventrículo esquerdo (VE) e septo interventricular (SIV) de todos os grupos. A avaliação histológica possibilitou a identificação de alterações cardíacas em 41,12% (51/124) do total de fragmentos avaliados. Quando os fragmentos foram subdivididos de acordo com a presença ou não de coinfecção, foi possível observar que o grupo G2 obteve incidência de lesão miocárdica com 61,53% (32/52) dos fragmentos avaliados enquanto o grupo G1 obteve 27,7% (20/72) de alteração histopatológica. Desta forma, pode-se concluir que a coinfecção potencializou as lesões cardíacas nesses pacientes, tanto na incidência como também na intensidade dos infiltrados inflamatórios observados. Os achados deste trabalho trazem importante contribuição tanto do ponto vista clínico como também para o melhor entendimento dos mecanismos patogenéticos em coinfecções parasitárias.

Visceral leishmaniasis (VL) also known as Calazar, is a zoonosis of wide distribution in tropical and subtropical regions. It is caused by protozoa of the order Kinetoplastida, family Trypanosomatidae and the genus Leishmania, which infect the dog and a wide variety of vertebrates, including man. In endemic regions the occurrence of co-infection with other pathogens, such as Ehrlichia canis, Anaplasma platys, Hepatozoon spp. and Babesia spp. has been described and associated with the worsening of the clinical signs, and in some regions the incidence of co-infection can reach 80% of the population. Although less common, the occurrence of myocardial changes can be found in infections caused by L. i. chagasi and E. canis separately, however it is still unknown how severe the co-infection is for the heart of these patients. Thus, the present study aimed to evaluate the occurrence of histological changes in the heart of dogs naturally infected with L. i. chagasi associated or not with the occurrence of co- infection with E. canis. For this purpose, paraffinized heart blocks from 32 naturally infected L. i dogs were used. chagasi and E. canis, attended at the Veterinary Hospital of the Faculty of Veterinary Medicine, UNESP - Araçatuba.For the evaluation and comparison of cardiac injuries, the blocks were divided into two groups, with Group 1 (G1) consisting of 18 heart blocks from animals infected exclusively with Leishmania infantum chagasi, while Group 2 (G2) was composed of 13 blocks of heart from dogs co-infected with Leishmania infantum chagasi and E. canis. Four fragments of different areas of the heart of these patients were evaluated, namely the right atrium (AD), right ventricle (RV), left ventricle (LV) and interventricular septum (IVS) of all groups. Histological evaluation made it possible to identify cardiac changes in 41.12% (51/124) of the total fragments evaluated. When the fragments were subdivided according to the presence or absence of coinfection, it was possible to observe that the G2 group had an incidence of myocardial injury with 61,53% (32/52) of the assessed fragments while the G1 group obtained 27.7% (20/72) of histopathological alteration. Thus, it can be concluded that coinfection potentiated cardiac injuries, both in incidence and in the intensity of inflammatory infiltrates. The findings of this work make an important contribution both from a clinical point of view and also to a better understanding of the pathogenic mechanisms in parasitic coinfections.

Hemocitozoários e ectoparasitos em onças-pintadas de vida livre do bioma Pantanal

As alterações ambientais e climáticas causadas principalmente pela antropização são fatores preocupantes na conservação de espécies silvestres no mundo. Com isso, a circulação de patógenos emergentes/ reemergentes e o parasitismo por ectoparasitos vetores pode agravar ainda mais a vulnerabilidade de espécies críticas. Portanto, o conhecimento sobre os agentes que infectam populações silvestres cria uma rede de informações que pode ser utilizada para fins de conservação e para a saúde pública. Tendo em vista as espécies de felídeos neotropicais ameaçadas de extinção, destaca-se a onça-pintada, o terceiro maior felino do mundo, possuindo diferentes graus de vulnerabilidade no território brasileiro. Em virtude deste cenário, o objetivo foi avaliar a presença de hemocitozoários e ectoparasitos como subsídio de informações sobre o status sanitário de onças-pintadas de vida livre do Bioma Pantanal. Ao todo 22 amostras de sangue foram analisadas por ensaios de Reação em Cadeia Polimerase (PCR) para diferentes hematozoários. Ectoparasitos foram coletados em 19 capturas. Foi possível avaliar amostras de sangue em 12 capturas (esfregaços de sangue e microhematócrito manual) e parâmetros fisiológicos (coloração das mucosas, peso/kg, temperatura retal e tempo de preenchimento capilar) em todas as capturas (pelo menos dois parâmetros foram avaliados em cada captura). Nas análises moleculares, 100% obtiveram positividade para a Ordem Piroplasmida, Família Trypanosomatidae e Mycoplasma spp., além de 50% para o gênero Hepatozoon. Todas as amostras foram negativas para o gênero Bartonella e para a Família Anaplasmataceae. Larvas em terceiro ínstar de Dermatobia hominis foram identificadas em seis indivíduos e 454 carrapatos distribuídos no gênero Amblyomma e na espécie Rhipicephalus microplus foram identificados. Gamontes de Hepatozoon sp. e inclusão sugestiva de piroplasma foram identificados em leucócitos nas lâminas de esfregaço sanguíneo avaliadas. Não foi observada alterações nos parâmetros fisiológicos, mesmo nas onças-pintadas coinfectadas e com ectoparasitos. Dessa forma, é possível observar que as onçaspintadas sirvam como importantes reservatórios de patógenos no ambiente em que habitam, sendo necessário mais estudos para avaliar os possíveis vetores dos patógenos que circulam nestes indivíduos. Além disso, a manutenção destes estudos é importante devido as alterações ambientais que podem alterar a relação parasito-hospedeiro e, consequentemente, causar manifestações clínicas.

The environmental and climatic changes caused mainly by anthropization are factors of concern in the conservation of wild species in the world. As a result, the circulation of emerging / reemerging pathogens and parasitism by vector ectoparasites can further aggravate the vulnerability of critical species. Therefore, knowledge about the agents that infect wild populations creates a network of information that can be used for conservation purposes and for public health. In view of the species of neotropical felids threatened with extinction, the jaguar stands out, the third largest feline in the world, with different degrees of vulnerability in Brazilian territory. In view of this scenario, the objective was to evaluate the presence of hemocytozoa and ectoparasites as a subsidy for information on the health status of free-ranging jaguars in the Pantanal Biome. In total, 22 blood samples were analyzed by Polymerase Chain Reaction (PCR) assays for different hematozoa. Ectoparasites were collected from 19 captures. It was possible to evaluate blood samples in 12 captures (blood smears and manual microhematocrit) and physiological parameters (mucosal color, weight/ kg, rectal temperature and capillary refill time) in all captures (at least two parameters were evaluated in each capture). In molecular analysis, 100% were positive for the Order Piroplasmida, Family Trypanosomatidae and Mycoplasma spp., in addition to 50% for the genus Hepatozoon. All samples were negative for the genus Bartonella and for the Family Anaplasmataceae. Larvae in the third instar of Dermatobia hominis were identified in six individuals and 454 ticks distributed in the genus Amblyomma and in the species Rhipicephalus microplus were identified. Gamonts of Hepatozoon sp. and suggestive inclusion of piroplasm were identified in leukocytes in the blood smear slides evaluated. There were no changes in physiological parameters, even in co-infected jaguars with ectoparasites. In addition, the maintenance of these studies is important due to environmental changes that can alter the parasite-host relationship and, consequently, cause clinical manifestations.

"Diversidade de parasitas dos gêneros Trypanosoma e Leishmania em vertebrados silvestres e vetores da área de Sede da Reserva Legado das Águas - Votorantim, no município de Miracatu, São Paulo

Tripanossomatídeos sao protozoários da família Trypanosomatidae, representando importante papel para saúde humana e animal, apresentando ciclos de vida monoxeno e heteroxeno, onde na alternância de hospedeiros, podem infectar o ser humano. O gênero Leishmania possui ciclos silveste e urbano, infectando principalmente mamíferos silvestres e cães domésticos como hospedeiros vertebrados, respectivamente nestes ciclos. As espécies do gênero Leishmania são transmitidas a estes hospedeiros através da picada de invertebrados hematófagos da família Psychodidae, e possui duas apresentações clínicas principais quando infecta o ser humano: visceral e cutânea; onde a forma visceral é causada pela espécie Leishmania (Leishmania ) infantum na America e Europa, e pela espécie Leishmania (Leishmania ) donovani na Ásia. A Leishmaniose Visceral está classificada como uma das Doenças Tropicais Negligenciadas, pela OMS. O gênero Trypanosoma possui uma subdivisão baseada no desenvolvimento dos parasitas no trato digestivo do vetor; em duas Secções, Salivaria e Stercoaria, além também das divisões em diversos Clados, baseado em filogenia molecular; e a separação em três subgêneros: Herpetosoma, megatrypanum e Schizotrypanum. No subgênero Schizotrypanum está classificada a espécie Trypanosoma cruzi, que possui bastante complexidade epidemiológica, e capacidade de infectar mamíferos de todas as ordens, inclusive o ser humano. No ser humano o T. cruzi causa a Doença de Chagas, transmitida por diversas espécies de triatomíneos dos gêneros Triatoma, Rodnius e Panstrongylus. A Doença de Chagas também está classificada no grupo das Doenças Tropicais Negligenciadas da OMS. O presente estudo teve como objetivo investigar a ocorrência de parasitas dos gêneros Trypanosoma e Leishmania na Reserva Legado das Aguas Votorantim, na região do Vale do Ribeira, sul do estado de São Paulo, uma região de Mata Atlântica preservada, a fim de contribuir para o melhor entendimento dos ciclos de transmissão desses parasitas, e acrescentar conhecimento ao estudo dessas zoonoses. Foram capturados 324 pequenos mamíferos das ordens Rodentia, Chiroptera e Marsupialia, através de armadilhas do tipo gaiolas e redes de neblina. Foi coletado sangue e tecidos destes animais, onde o sangue foi distribuído em hemoculturas e ambos submetidos a testes moleculares. Foram também capturados triatomíneos e tabanídeos, através de busca ativa e redes de neblina (para tabanídeos). As hemoculturas não demonstraram crescimento de parasitas, e a análise molecular corroborou tais resultados negativos. Foram capturados 16 espécimes de triatomíneos, dos gêneros Triatoma e Panstrongylus. Através destes foram obtidos 11 isolados classificados como Trypanosoma cruzi II, e uma sequência obtida classificada como Trypanosoma cruzi IV. Foram capturados três tabanídeos, que possibilitou a obtenção de duas sequências de conteúdo intestinal, caracterizadas como Trypanosoma terrestris. Estes tabanídeos ainda serão classificados a nível de espécie através da análise molecular. Através da captura de animais foi possível atestar a biodiversidade e nível de preservação ambiental da Reserva Legado das Aguas Votorantim, e ainda demonstrar que há a circulação de parasitas do gênero Trypanosoma em vetores e potenciais vetores, necessitando ainda de mais estudos para determinar quais vertebrados mantem os ciclos ativos, e ainda determinar a capacidade vetorial de tabanídeos para a espécie Trypanosoma terrestris, que ainda não possui vetores caracterizado.

Trypanosomatids are protozoa of the Trypanosomatidae family, playing an important role for human and animal health, presenting monoxene and heteroxene life cycles, where in alternating hosts, they can infect humans. The Leishmania genus has wild and urban cycles, mainly infecting wild mammals and domestic dogs as vertebrate hosts, respectively in these cycles. The species of the genus Leishmania are transmitted to these hosts through the bite of blood-sucking invertebrates of the Psychodidae family, and it has two main clinical presentations when it infects humans: visceral and cutaneous; where the visceral form is caused by the species Leishmania (Leishmania) infantum in America and Europe, and by the species Leishmania (Leishmania) donovani in Asia. Visceral Leishmaniasis is classified as one of the Neglected Tropical Diseases, by the WHO. The Trypanosoma genus has a subdivision based on the development of parasites in the vector's digestive tract; in two Sections, Salivaria and Stercoaria, in addition to the divisions in several Clados, based on molecular phylogeny; and the separation into three subgenera: Herpetosoma, megatrypanum and Schizotrypanum. In the subgenus Schizotrypanum, the species Trypanosoma cruzi is classified, which has a lot of epidemiological complexity, and is capable of infecting mammals of all orders, including humans. In humans, T. cruzi causes Chagas disease, transmitted by several species of triatomines of the genera Triatoma, Rodnius and Panstrongylus. Chagas' disease is also classified in the WHO Neglected Tropical Diseases group. The present study aimed to investigate the occurrence of parasites of the genera Trypanosoma and Leishmania in the Legado das Aguas Reserve - Votorantim, in the Vale do Ribeira region, south of the state of São Paulo, a region of preserved Atlantic Forest, in order to contribute to better understanding of the transmission cycles of these parasites, and adding knowledge to the study of these zoonoses. 324 small mammals of the orders Rodentia, Chiroptera and Marsupialia were captured, using cage-type traps and mist nets. Blood and tissues were collected from these animals, where the blood was distributed in blood cultures and both subjected to molecular tests. Triatomines and tabanids were also captured, through active search and fog nets (for tabanids). Blood cultures did not show parasite growth, and molecular analysis corroborated these negative results. 16 specimens of triatomines, of the genera Triatoma and Panstrongylus, were captured. Through these 11 isolates classified as Trypanosoma cruzi II were obtained, and a sequence obtained classified as Trypanosoma cruzi IV. Three tabanids were captured, which made it possible to obtain two sequences of intestinal content, characterized as Trypanosoma terrestris. These tabanids will still be classified at the species level through molecular analysis. Through the capture of animals it was possible to attest to the biodiversity and environmental preservation level of the Legado das Aguas Reserve - Votorantim, and to demonstrate that there is the circulation of parasites of the genus Trypanosoma in vectors and potential vectors, requiring further studies to determine which vertebrates keeps the cycles active, and also determine the vectorial capacity of tabanids for the species Trypanosoma terrestris, which does not yet have characterized vectors.

Avaliação da atividade tripanocida e da segurança terapêutica de um composto benzofuroxano derivado

A doença de Chagas, causada pelo protozoário flagelado Trypanosoma cruzi, pertencente a família Trypanosomatidae, afeta mais de 8 milhões de pessoas no mundo. Este parasito possui ciclo biológico heteroxeno e passa por diferentes formas evolutivas no interior dos seus hospedeiros. A doença de Chagas representa um grande problema de saúde pública no Brasil e na América Latina, sendo descrita como uma das doenças mais negligenciadas do mundo. Mesmo após mais de cem anos de seu descobrimento, esta enfermidade não possui um tratamento seguro e totalmente eficaz. Atualmente, apenas dois medicamentos estão disponíveis para o tratamento, o Benznidazol e o Nifurtimox, contudo, ambos apresentam diversos efeitos colaterais e são tóxicos. Dessa forma, a busca por novos fármacos é necessária, sendo assim, o objetivo deste estudo foi avaliar um derivado benzofuroxano sintetizado, avaliando sua citotoxicidade e genotoxicidade in vitro, bem como, avaliar a sua atividade tripanocida in vitro e in vivo frente ao T. cruzi. Para isso, primeiramente foi realizada a síntese do composto, que foi denominado conforme IUPAC como 5-((5-(4-metoxifenil)-1,3,4-oxadiazol-2-il)carbamoil)benzo[c][1,2,5]oxadiazol-N-óxido e como composto EA2 para este trabalho. O processo de síntese foi realizado no LabSelen Nanobio (UFSM), laboratório que atuou em parceria neste estudo. O composto foi caracterizado por RMN de 1H e de 13C, foi realizada a análise da citotoxicidade pelo método de exclusão por azul de tripam, o ensaio cometa alcalino foi realizado para avaliar a genotoxicidade e para avaliar a mutagenicidade foi realizado o teste de micronúcleo, para estes testes o composto foi diluído em três diferentes concentrações: 10 µM/mL, 50 µM/mL e 100 µM/mL. Nas concentrações testadas, o composto não apresentou atividade mutagênica, contudo, apenas a menor concentração não apresentou efeitos citotóxicos e genotóxicos. Para o teste in vitro frente a formas epimastigostas de T. cruzi, o composto foi diluído em três diferentes concentrações (0,25%, 0,50% e 1%) e avaliado 24, 48 e 72 horas após a incubação. O composto EA2 apresentou atividade tripanocida in vitro nas três concentrações testadas. Após este teste foi realizado o teste in vivo. O composto foi testado em três diferentes doses:, 2,5 mg/kg, 5 mg/kg e 10 mg/kg e os animais foram divididos em dez grupos (5 animais/grupo), sendo quatro grupos de animais não infectados (A, G, H, I) e seis grupos de animais infectados (B, C, D E, F, J). Os grupos B e J eram os controles negativo e positivo, respectivamente. Os grupos G, H e I foram utilizados a fim de comprovar que o composto não era tóxico para animais sadios. O composto EA2 não apresentou eficácia curativa, contudo, foi capaz de retardar o início da parasitemia nos animais tratados, bem como, reduzir significativamente a contagem de parasitos nos grupos D e E, além disso, o composto não induziu a alterações nos parâmetros hematológicos, hepáticos e renais em animais não infectados, demostrando, neste estudo, não ser tóxico, contudo mais testes são necessários a fim de comprovar a segurança do composto EA2 para a saúde, visto que, este foi o primeiro estudo com a molécula sintetizada.

Chagas disease affects more than 8 million people worldwide and is caused by the flagellated protozoan Trypanosoma cruzi, which belongs to the Trypanosomatidae family. This parasite has a heteroxenous biological cycle with different evolutionary forms within its hosts. Chagas disease is a major public health concern in Brazil and Latin America and has been described as one of the most neglected diseases in the world. Even after more than a hundred years since its discovery, there is no safe and totally effective treatment for this disease; only two drugs, benznidazole and nifurtimox, are currently available to treat Chagas disease. Both drugs are highly toxic and have several side effects. In addition, the use of nifurtimox is prohibited in Brazil. Thus, the search for new drugs for this disease is necessary. The objectives of this study were to synthesize a benzofuroxane compound and evaluate its cytotoxicity and genotoxicity in vitro and to evaluate its trypanocidal activity in vitro and in vivo against T. cruzi. 5-((5-(4-Methoxyphenyl)-1,3,4-oxadiazol-2-yl)carbamoyl)benzo[c][1,2,5]oxadiazole-N-oxide was synthesized by our collaborator, LabSelen Nanobio (UFSM), and is referred to as compound EA2. The compound was characterized by 1H and 13C NMR. Its cytotoxicity was determined using the trypan blue exclusion method, and its genotoxicity was determined using the alkaline comet assay. Mutagenicity was evaluated using the micronucleus test. For these tests, three different concentrations of EA2 were used: 10 M/mL, 50 M/mL, and 100 M/mL. The compound did not show any mutagenic activity at any of the concentrations tested. Moreover, only 10 M/mL EA2 did not show cytotoxic or genotoxic effects. For the in vitro test against epimastigost forms of T. cruzi, the compound was used at three different concentrations (0.25%, 0.50%, and 1%) and the effects were evaluated after 24, 48, and 72 h of incubation. EA2 showed trypanocidal activity in vitro at all three concentrations. Subsequently, an in vivo test was performed using three different doses: 2.5 mg/kg, 5 mg/kg and 10 mg/kg. Test animals were divided into ten groups (5 animals per group): four groups consisting of uninfected (A, G, H, I) and six groups of infected (B, C, D, E, F, J) animals. Groups B and J were the negative and positive controls, respectively. Groups G, H, and I were used to demonstrate that the compound was not toxic to healthy animals. EA2 did not show any curative effects in vivo, but it was able to delay the onset of parasitemia in the treated animals as well as significantly reduce the parasite count in groups D and E. In addition, the compound did not alter hematological parameters or affect the liver and kidneys of uninfected animals, indicating that EA2 is not toxic. Nevertheless, further tests are necessary to prove the therapeutic safety of EA2.

CARNÍVOROS SELVAGENS GENERALISTAS COMO SENTINELAS PARA FILARIOSES E LEISHMANIOSE VISCERAL NO PARQUE NACIONAL DO IGUAÇU

Carnívoros generalistas são pouco exigentes e apresentam hábitos alimentares variados e, devido a este comportamento oportunista, estes animais aproximam-se de populações humanas, tornando-se vulneráveis aos patógenos de animais domésticos, mas também podendo carrear patógenos para os animais domésticos e o homem. No Parque Nacional do Iguaçu (PARNA Iguaçu), os quatis e os graxains são espécies frequentes de carnívoros generalistas e oportunistas e com ampla distribuição no território do parque. Recentemente, foi diagnosticada por métodos parasitológicos tradicionais a presença de alguns gêneros de filarídeos com potencial zoonótico em carnívoros selvagens no interior do parque. Além disso, casos autóctones de leishmaniose visceral canina foram confirmados em cães domésticos e em humanos na região. Dessa forma, devido à importância para o cenário da saúde pública atual, esta pesquisa teve como objetivos o estudo das filarioses e leishmaniose visceral em carnívoros generalistas do PARNA Iguaçu, bem como entender a relação parasita-hospedeiro e os processos ecológicos que podem favorecer a transmissão desses agentes entre populações silvestres, domésticas e o homem. Para isso, foram capturados 284 mamíferos selvagens, por meio de armadilhas Tomahawk e Sherman. Os animais foram contidos quimicamente para punção da jugular e coleta de amostras sanguíneas, para diagnóstico parasitológico, sorológico e molecular de filarídeos e tripanossomatídeos. Foram visitadas 64 propriedades rurais do entorno do PARNA, onde foram coletadas amostras de 226 cães domésticos. Foram realizadas ainda necropsias de 20 carnívoros selvagens atropelados na BR 469 (dentro do PARNA), visando às mesmas análises. O diagnóstico inicial de filarídeos foi realizado pelo teste de Knott modificado, posteriormente, seguiu-se a extração de DNA das amostras sanguíneas e de tecidos, realizada pela técnica de clorofórmio-álcool isoamílico. Para triagem molecular de filarídeos, as reações de PCR foram realizadas com amplificação da região 5S rDNA, posteriormente as amostras positivas passaram por novas reações de PCR com os genes Miosina e hsp70 de filarídeos, visando identificação das espécies. Com relação à pesquisa molecular de Trypanosomatidae, primeiramente foi realizada a PCR com primers do gene mitocondrial Citocromo B, e as amostras positivas, passaram por nova PCR com primers da região 18S rDNA de tripanosomatídeos. Todas as amostras positivas na PCR foram submetidas a PCR de sequenciamento com kit BigDye, em sequenciador ABI3130. Os eletroferogramas foram analisados e as sequências alinhadas junto às sequências do banco do NCBI. A partir destas, foram geradas árvores filogenéticas para cada gene estudado de cada grupo de parasitas. Foi realizada a RIFI para Leishmania infantum de todos os cães domésticos amostrados. Como resultados foi possível observar a presença de cinco espécies de filarídeos parasitando quatis (Nasua nasua) no PARNA Iguaçu: Mansonella sp. 1, Mansonela sp. 2, dois gêneros novos aqui identificados como Embainhada 1 e 2, e Dirofilaria immitis. Em cães domésticos, foi identificada a presença de Acanthocheilonema sp. Estes dados são inéditos na região em estudo, uma vez que pouco se conhece a respeito de filarídeos de animais selvagens da região neotropical. É importante ressaltar que os quatis apresentaram alta prevalência de infecção de filarídeos (74,5%), podendo atuar como bons reservatórios destes nematódeos na região estudada. Alguns dos gêneros identificados são descritos como parasitas zoonóticos em outras regiões do Brasil e do mundo, o que alerta para a necessidade de vigilância em saúde, pois estes parasitas podem ter potencial zoonótico. Com relação aos tripanossomatídeos, apenas em cães domésticos foi detectada a presença de L. infantum em animais provenientes da cidade de Foz do Iguaçu, apesar de terem sido identificados cães positivos na RIFI para L. infantum (28,7%) em algumas propriedades do entorno do PARNA. Foi ainda identificada a presença de Trypanosoma cruzi em um quati da área turística das Cataratas do Iguaçu, sendo tipificado como T. cruzi DTUs TcIV. É possível sugerir que os cães domésticos sejam os reservatórios de importância para a leishmaniose visceral em Foz do Iguaçu, PR, havendo necessidade de maior vigilância e ações no controle dos vetores e reservatórios domésticos, para evitar que o parasita adentre o PARNA e seja amplificado (spillback) nas inúmeras espécies de hospedeiros susceptíveis que habitam a mata atlântica do PARNA Iguaçu. A presença de T. cruzi em quatis é um alerta, pois estes animais atuam como bons sentinelas do ambiente selvagem, e, desta forma, demonstrando que T. cruzi está circulando na área florestal. Os dados obtidos nesta pesquisa indicam a ocorrência e circulação, no PARNA Iguaçu, de parasitas transmitidos por vetores que são de grande importância para a saúde pública em todo o mundo. Além disso, é possível sugerir que na região do PARNA Iguaçu os cães domésticos são responsáveis por manterem a circulação de L. infantum, enquanto os quatis são excelentes reservatórios de nematódeos filarídeos e podem atuar também como reservatórios de T. cruzi, conforme já relatado em outros biomas brasileiros, sendo um importante animal sentinela a ser monitorado por órgãos de vigilância em saúde na região estudada.

Generalist carnivores are undemanding and have varied eating habits, and, due to this opportunistic behavior, these animals are close to human populations, becoming vulnerable to domestic animal pathogens, but also being able to carry pathogens to domestic animals and man. In the Iguaçu National Park (PARNA Iguaçu), ring-tailed coatis and crab-eating foxes are common species of generalist and opportunistic carnivores with a wide distribution in the park's territory. Recently, by traditional parasitological methods, the presence of some filarids nematodes with zoonotic potential was diagnosed in wild carnivores from PARNA Iguaçu. Also, autochthonous cases of Canine Visceral Leishmaniasis have been confirmed in domestic dogs and humans in the region. Thus, due to the importance for the current public health, this research aims to study filariasis and visceral leishmaniasis in generalist carnivores from PARNA Iguaçu, as well as to understand the parasite-host relationship and the ecological processes that may favor transmission of these agents among wild populations, domestic dog and humans. For this, 284 wild mammals were captured using Tomahawk and Sherman traps. The animals were chemically contained for jugular puncture and collection of blood samples for parasitological, serological, and molecular diagnosis of filarids and trypanosomatids. Sixty-four rural properties were visited around PARNA, and 226 samples were collected from domestic dogs. Necropsy of 20 wild carnivores run over in the BR 469 road (inside PARNA) was performed, aiming at the same analyzes. The modified Knott test performed the initial filariid diagnosis, subsequently followed by the DNA extraction from blood and tissue samples, through by the chloroform-isoamyl alcohol technique. For molecular screening of filarids, the PCR reactions were performed with 5S rDNA region amplification, afterward new PCR reactions were performed with the filariid positive samples, with amplification of Myosin and hsp70 genes, aiming at species identification. Regarding the molecular research of Trypanosomatidae, PCR was first performed with primers from the mitochondrial Cytochrome B gene. New PCR was performed with the positive samples with amplification of the 18S rDNA region of trypanosomatids. All PCR positive samples were subjected to sequencing PCR with the BigDye kit, in an ABI3130 sequencer. The electropherograms were analyzed, and the sequences aligned with the NCBI bank sequences. From these, phylogenetic trees were generated for each gene studied in each group of parasites. Leishmania infantum IIFT was performed for all dogs sampled. As a result, it was possible to observe the presence of five species of filaridae parasitizing ring-tailed coatis (Nasua nasua) in PARNA Iguaçu: Mansonella sp1, Mansonela sp. 2, two new genera identified here as Embainhada 1 and 2, and Dirofilaria immitis. For domestic dogs, only Acanthocheilonema sp. was diagnosed. These data are unprecedented for the region under study, since the knowledge about filaridae of wild animals from the Neotropical region is limited. It is important to note that ring-tailed coatis showed a high prevalence of filarids infection (74.5%), and can act as good reservoirs for these nematodes in the studied region. Some of the identified genera are described as zoonotic parasites in other regions of Brazil and the world, warning to the need for health surveillance, once these parasites may also have zoonotic potential in this area. Regarding trypanosomatids, only L. infantum was detected in domestic dogs from Foz do Iguaçu city, although positive dogs were identified in the IIFT for L. infantum (28.7%) in some rural properties surrounding the PARNA. Trypanosoma cruzi was also identified in a ring-tailed coati from Iguazu Falls tourist area and was typified as T. cruzi DTUs TcIV. We can suggest that domestic dogs are the important visceral leishmaniasis reservoirs in Foz do Iguaçu, PR, requiring vigilance and actions to control vectors and domestic reservoirs aiming to prevent the parasite in wild mammals from PARNA Iguaçu because them can be amplified (spillback) in the many susceptible host species that inhabit the Atlantic forest of PARNA Iguaçu. The presence of T. cruzi in ring-tailed coatis is an alert, these animals act as good sentinels of the wild environment, and in this way, demonstrating that T. cruzi is circulating in the forest area. The data obtained in this research indicate the occurrence and circulation, in PARNA Iguaçu, of vector-borne parasites that are of great importance for public health worldwide. Furthermore, it is possible to suggest that domestic dogs are responsible for maintaining the circulation of L. infantum, while coatis are excellent reservoirs for filarid nematodes and can also act as reservoirs for T. cruzi in the PARNA Iguaçu region, as already reported for other Brazilian biomes, being an important sentinel animal to be monitored by health surveillance agencies in the studied region.

DIVERSIDADE, ISOLAMENTO E ANÁLISE FILOGENÉTICA DE PARASITAS DO GÊNERO Trypanosoma DE MORCEGOS DO ESTADO DO MARANHÃO.

As espécies do gênero Trypanosoma são protozoários da família Trypanosomatidae, cujo ciclo biológico se desenvolve alternadamente em mamíferos e insetos reduvídeos. Pouco se sabe sobre quais desses parasitos estão presentes nos morcegos do Maranhão e qual o papel destes na manutenção dos tripanossomatídeos em ciclos silvestres e peridomiciliares. Objetivou-se verificar a presença de parasitas do gênero Trypanosoma que circulam em morcegos dos municípios maranhenses de Turiaçu, Godofredo Viana, Cândido Mendes e Carutapera. A captura dos animais foi realizada em duas campanhas, a primeira em abril/2017 e a segunda em março/2018, com 07 dias de duração cada. Para as coletas foram utilizadas oito redes de neblina que foram armadas das 18:00 às 00:00h e vistoriadas em intervalos de 30 minutos, já o isolamento das espécies de tripanossomas, as amostras de sangue coletadas foram semeadas em tubos contendo um meio de cultura bifásico. O sangue obtido foi utilizado para a confecção de três lâminas de esfregaços sanguíneos, por amostra, que foram corados com Giemsa e analisados no microscópio óptico. Para análises moleculares amostras de sangue, baço e fígado dos animais eutanasiados foram coletadas. A extração de DNA foi realizada de acordo com o protocolo estabelecido pelo Kit GeneJet Genomic DNA Purification e amplificação foi realizada usando os marcadores moleculares V7V8 e o gGAPDH. Um total de 82 morcegos foram capturados. Não identificamos parasitos nos esfregaços sanguíneos, porém houve 4 culturas positivas para Trypanosoma, entretanto elas não se estabeleceram. 57 amostras de tecido (sangue, baço e fígado) dos municípios de Turiaçu e Candido Mendes foram analisadas e destas 25 apresentaram-se positivas para o DNA barcoding para tripanossomatídeo (V7V8) dos genes SSU rDNA. Posteriormente estas 25 amostras foram testadas para o gene gGAPDH e 11 amostras foram positivas. A diversidade de espécies, a presença constante de morcegos nas áreas estudadas e o encontro de animais positivos evidencia a importância ecológica dos quirópteros e o fato de que estes não devem ser excluídos como potenciais reservatórios para tripanossomatídeos de interesse médico.

The species of the genus Trypanosoma are protozoa of the family Trypanosomatidae, whose biological cycle develops alternately in mammals and reduvídeos insects. Little is known about which of these parasites are present in the bats of Maranhão and what their role in the maintenance of trypanosomatids in wild and peridomiciliary cycles. The objective was to verify the presence of Trypanosoma parasites that circulate in bats from the municipalities of. The animals were captured in two campaigns, the first in April / 2017 and the second in March / 2018, each of 07 days. For the collections, eight mist networks were used, which were set up from 6:00 p.m. to 6:00 p.m. and inspected at 30 minute intervals, after isolation of trypanosome species. Blood samples collected were seeded in tubes containing a culture medium biphasic. The obtained blood was used to make three blood smear blades per sample, which were stained with Giemsa and analyzed under the light microscope. For molecular analyzes blood, spleen and liver samples from euthanized animals were collected. DNA extraction was performed according to the protocol established by the GeneJet Genomic DNA Purification Kit and amplification was performed using the molecular markers V7V8 and gGAPDH. A total of 82 bats were captured. No parasites were identified in the blood smears, but there were 4 positive cultures for Trypanosoma, although they did not establish themselves. 57 tissue samples (blood, spleen and liver) from the municipalities of Turiaçu and Candido Mendes were analyzed and of these 25 were positive for the trypanosomate DNA barcoding (V7V8) of SSU rDNA genes. Subsequently these 25 samples were tested for the gGAPDH gene and 11 samples were positive. The diversity of species, the constant presence of bats in the studied areas and the meeting of positive animals shows the ecological importance of the bats and the fact that they should not be excluded as potential reservoirs for trypanosomatids of medical interest.