Diagnosis of endometritis in the bitch / Diagnóstico da endometrite em cadelas

Endometritis refers to an inflammation of the uterine mucosa that does not extend beyond the stratum spongiosum. Recent studies indicate it is a common finding in 30-50% of bitches suffering from infertility/subfertility. This disorder is subclinical, and its diagnosis involves sampling the uterus, whether it is by performing a cytology from flushing the organ or histology on collected uterine biopsies. Its pathophysiology remains unclear in 2021. Some cases are associated with cystic endometrial hyperplasia, which leads to disruption in the uterine clearance mechanisms after breeding ; while other appear as a pure inflammatory process. While we don’t have all the answers yet, there is no doubt today that these disorders must be included in the differential diagnosis of infertility in the bitch. The work that has already been done on this topic already offers some idea on how to approach these cases in our veterinary clinics.

Comparison of cattle embryo collection between Ringer's lactate solution and Dulbecco's phosphatebuffered saline

The objective of this study was to determine the efficiency of Ringer's lactate solution (RL) and RL + 1% fetal bovine serum (FBS) and compare them with the efficiency of Dulbecco's phosphate-buffered saline (D-PBS). Twenty-two Wagyu female cattle were subjected to superovulation and were randomly distributed to form three groups: group 1 ­ uterine flushing with RL (n = 8), group 2 ­ uterine flushing with RL + 1% FBS (n = 7), and group 3 ­ uterine flushing with D-PBS (n = 7, control group). Cows received a CIDR® device containing 1.9 g of progesterone at random stages of the estrous cycle (day 0). Progesterone withdrawal occurred on day 8 in the morning. For heifers, 160 mg of porcine follicle-stimulating hormone (FSH-P) was used and for cows, 200 mg. Prostaglandin F2α was also injected on the eighth day of FSH-P administration. On day 9, in the morning, hCG was administered. Females were superovulated and inseminated twice in a fixed time for embryo transfer. On the 16th day, females were subjected to uterine flushing for embryo collection. We collected 76 embryos from 22 females subjected to superovulation, of which 52 were transferable and 24 had degenerated. The total of embryos collected was 23, 16, and 23 for groups 1, 2, and 3, respectively. The embryo recovery rates per group were 13.86±4.23, 15.39±4.61 and 27.16±13.33%, in groups 1, 2, and 3, respectively. The means for the total structures collected per female were 2.88±0.85, 3.00±1.23, and 4.57±1.72 in groups flushed with RL, RL + 1% FBS, and D-PBS, respectively. We conclude that Ringer's lactate solution and Ringer's lactate solution + 1% of FBS and Dulbecco's phosphate-buffered saline showed no significant differences in terms of embryo quality or quantity, suggesting that Ringer's lactate solution is an alternative for collecting embryos in cattle.

Clinical application of Doppler ultrasound in the diagnosis of fertility problems in equines / Aplicações da ultrassonografia Doppler no diagnóstico de problemas de fertilidade em equinos

The use of different ultrasound modalities (color, power and pulsed Doppler) in clinical research has enhanced knowledge of reproductive pathophysiology in equine, in addition to improving the clinical diagnosis of reproductive disorders in both the stallion and the mare. In the stallion, color Doppler ultrasound has improved the diagnostic potential of conventional ultrasound, improving the differential diagnosis of pathologies such as testicular torsion (decrease or absence of blood flow in the cord) and orchitis (increased blood flow in the cord). The function of the testicle is highly dependent on the blood flow it receives; therefore, any vascular alterations can affect both the quality and production of sperm. In recent years there have been a greater number of studies in which Doppler ultrasound is used as a tool in the diagnosis of testicular dysfunction and in the monitoring of medical and surgical treatments. In the mare, ultrasound technology has allowed numerous advances in basic research regarding the vascular hemodynamics of the ovary and uterus. Moreover, it has become an indispensable tool in reproductive practice. Among the clinical applications of this technique in mares are the evaluation of CL (corpus luteum) functionality, being a useful tool in the selection of recipients in embryo transfer programs or the use of power Doppler in the diagnosis of pregnancy as early as 7 days postovulation prior to flushing. Finally, the incorporation of color and pulsed Doppler ultrasound into the examination improves the diagnosis of mares with endometritis due to a pathological increase in uterine blood flow.

Goat incubator: Can bovine oocytes be matured in the uterine horn of a goat? / Cabra incubadora: os oócitos bovinos podem ser maturados no corno uterino de uma cabra?

We used a goat as a live incubator, along with associated nonsurgical embryo transfer techniques, to perform ex situ (in vivo) maturation of bovine oocytes. Immature bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) aspirated from 3-8 mm follicles from slaughterhouse ovaries were randomly split into two groups for in vitro (IVM; n = 38) and ex situ maturation (ESM; n = 40). IVM was performed for a period of 24 h at 38.5 ºC and with 5% CO2 in the air of maximum humidity. For ESM, a presynchronized nulliparous goat (12 months old) received 40 immature COCs in the uterine horn apiece, via the transcervical route. After 24 h the structures were retrieved through uterine flushing. Analyses of nuclear maturation and lipid quantification were performed on oocytes from both groups. Fluorescent intensity was compared using the Student’s t-test. Forty-seven percent of the structures were recovered after uterine flushing (19/40). The nuclear maturation rate was 94.5% (18/19) and 81.6% (31/38) for the ESM and IVM groups, respectively. In vitro-matured COCs contained more lipid droplets, expressed as a higher amount (p < 0.05) of emitted fluorescent light than ex situ-matured COCs (858 ± 73 vs. 550 ± 64 arbitrary fluorescence units, respectively). This is the first report to associate nonsurgical embryo transfer techniques and a goat as a live incubator for the maturation of bovine oocytes. We

Utilizamos uma cabra como incubadora viva, juntamente com técnicas de transferência de embriões não cirúrgicas associadas, para realizar a maturação ex situ (in vivo) de oócitos bovinos. Os complexos cumulus-oócitos bovinos (COCs), aspirados de folículos de 3-8 mm de ovários de abatedouro foram aleatoriamente divididos em dois grupos para maturação in vitro (IVM; n = 38) e ex situ (ESM; n = 40). A MIV foi realizada por um período de 24 h no meio TCM-199, a 38,5 ºC, e com 5% de CO2 em umidade máxima. Para o ESM, uma cabra nulípara pré-sincronizada (12 meses de idade) recebeu 40 COCs imaturos no ápice do corno uterino, por via transcervical. Após 24 h as estruturas foram recuperadas através de lavagem uterina. Análises de maturação nuclear e quantificação de lipídios foram realizadas em oócitos de ambos os grupos. A intensidade de fluorescente foi comparada usando o teste t de Student. Quarenta e sete por cento das estruturas foram recuperadas após lavagem uterina (19/40). A taxa de maturação nuclear foi de 94,5% (18/19) e 81,6% (31/38) para os grupos ESM e IVM, respectivamente. Os COCs maturados in vitro continham mais gotículas lipídicas, expressos como uma quantidade maior (p < 0,05) da luz fluorescente emitida do que os COCs ex situ (858 ± 73 vs 550 ± 64 unidades de fluorescência arbitrárias, respectivamente). Este é o primeiro relató

Aspects of embryo-maternal communication in establishment of pregnancy in cattle

Establishment of pregnancy in mammals requires reciprocal molecular communication between the conceptus and endometrium that modifies the endometrial transcriptome and uterine luminal milieu to support pregnancy. Due to the small size of the early embryo and elongating conceptus relative to the volume of the uterine lumen, collection of endometrium adjacent to the developing conceptus is difficult following conventional uterine flushing methods in cattle. Use of endometrial explants in culture can overcome this challenge and reveal information about the dialogue between the developing embryo and the uterus. The aim of this short review is to summarize some of our recent findings in relation to embryo maternal interaction during bovine pregnancy establishment and to put them in the wider context of fertility in cattle.

Aspects of embryo-maternal communication in establishment of pregnancy in cattle

Establishment of pregnancy in mammals requires reciprocal molecular communication between the conceptus and endometrium that modifies the endometrial transcriptome and uterine luminal milieu to support pregnancy. Due to the small size of the early embryo and elongating conceptus relative to the volume of the uterine lumen, collection of endometrium adjacent to the developing conceptus is difficult following conventional uterine flushing methods in cattle. Use of endometrial explants in culture can overcome this challenge and reveal information about the dialogue between the developing embryo and the uterus. The aim of this short review is to summarize some of our recent findings in relation to embryo maternal interaction during bovine pregnancy establishment and to put them in the wider context of fertility in cattle.(AU)

Uterine nitric oxide levels and isofluopredone treatment effect in mares susceptible to persistent post-breeding endometritis

Transient endometritis is a normal consequence of breeding and results from uterine contamination with both semen and bacteria. The modulation of the inflammatory response with the use of isoflupredone has been proposed as efficient for the treatment of endometritis by increasing pregnancy rates. The aim of the current study was to determine the effects of isoflupredone on nitric oxide (NO) levels in uterine samples from mares susceptible to persistent postbreeding endometritis, presenting or not the infectious process. Seven consecutive estrous cycles were induced in 11 mares, being the first one used as control (no treatment). All mares were submitted to the following four treatments: treatment 1: control, treatment 2: glucocorticoid (GC) treatment (20 mg isoflupredone acetate) every 12 h, for three consecutive days, treatment 3: infected treatment (intrauterine infusion of 1x109 CFU/ml Streptococcus equi subsp. zooepidemicus), treatment 4: combination of GC + infected treatment (infusion of bacteria 24 h after the first GC treatment). At 12 h after the end of each treatment, uterine samples were collected by flushing and NO was determined. After nitrate reduction, total nitrite was determined by spectrophotometer. No significant differences on nitric oxide concentration were verified by analysis of variance in the different experimental groups. It is concluded that the use of isoflupredone did not alter the nitric oxide concentration in uterine flushing’s from susceptible mares 12 h after treatment.

Uterine nitric oxide levels and isofluopredone treatment effect in mares susceptible to persistent post-breeding endometritis

Transient endometritis is a normal consequence of breeding and results from uterine contamination with both semen and bacteria. The modulation of the inflammatory response with the use of isoflupredone has been proposed as efficient for the treatment of endometritis by increasing pregnancy rates. The aim of the current study was to determine the effects of isoflupredone on nitric oxide (NO) levels in uterine samples from mares susceptible to persistent postbreeding endometritis, presenting or not the infectious process. Seven consecutive estrous cycles were induced in 11 mares, being the first one used as control (no treatment). All mares were submitted to the following four treatments: treatment 1: control, treatment 2: glucocorticoid (GC) treatment (20 mg isoflupredone acetate) every 12 h, for three consecutive days, treatment 3: infected treatment (intrauterine infusion of 1x109 CFU/ml Streptococcus equi subsp. zooepidemicus), treatment 4: combination of GC + infected treatment (infusion of bacteria 24 h after the first GC treatment). At 12 h after the end of each treatment, uterine samples were collected by flushing and NO was determined. After nitrate reduction, total nitrite was determined by spectrophotometer. No significant differences on nitric oxide concentration were verified by analysis of variance in the different experimental groups. It is concluded that the use of isoflupredone did not alter the nitric oxide concentration in uterine flushings from susceptible mares 12 h after treatment.(AU)

Modulação da resposta inflamatória no útero de éguas tratadas com plasma rico em plaquetas

A endometrite é a causa mais comum de subfertilidade em éguas. Todas as éguas apresentam uma inflamação endometrial fisiológica pós-cobertura; entretanto, 15-20% das éguas têm endometrite persistente pós-cobertura (EPPC). Recentemente, o plasma rico em plaquetas (PRP) vêm se tornando popular no manejo reprodutivo de éguas susceptíveis a EPPC. Atualmente, não existe uma padronização dos métodos de preparação do PRP para uso intrauterino em éguas. Desta forma, este estudo teve como objetivo comparar três métodos de preparação de PRP para infusão intrauterina em éguas e avaliar a resposta inflamatória pós-cobertura, cultura endometrial e recuperação embrionária em éguas suscetíveis a EPPC tratadas com PRP. No primeiro estudo, o PRP foi produzido por três métodos. Método 1, o sangue foi coletado em bolsa de transfusão, transferido para tubos Falcon e duplamente centrifugadas; Método 2, sangue foi coletado em tubos vacutainer e centrifugado uma única vez; Método 3 sangue foi coletado em uma seringa de 60 mL contendo anticoagulante, a qual foi mantida em posição vertical para sedimentar por 4h. Após o processamento, a contagem de células e a viabilidade plaquetária foram avaliadas. Em um subgrupo de éguas (n = 6), o PRP foi avaliado 6 e 24h pós-refrigeração a 5 °C. No estudo 2, éguas (n = 12) suscetíveis a EPPC tiveram três ciclos atribuídos aleatoriamente para receber infusões intrauterinas de LRS (controle), ou PRP autólogo ou plasma pobre em plaquetas (PPP) antes (48 e 24h) e após a inseminação artificial (IA) (6 e 24h). Tanto o PRP quanto o PPP foram obtidos pelo Método 1 no experimento 2. As éguas foram inseminadas com sêmen fresco de um garanhão com fertilidade conhecida. O acúmulo de líquido intrauterino (IUF) e as células polimorfonucleares endometriais (PMNs) foram avaliados a cada 24h até 96h pós-inseminação. Citocinas uterinas (Il, IL6, CXCL8 e IL10) foram avaliadas antes (0h), 6 e 24h após IA, e cultura endometrial três e nove dias após IA. A lavagem do embrião foi realizada 8 dias após a ovulação. Os dados foram analisados com modelo misto, teste post-hoc de Tukeys e regressão multivariada. No estudo 1, o Método 1 resultou no maior e o método 3 nas menores concentrações de plaquetas, e o último teve maior concentração de leucócitos que os outros (P<0,05). A viabilidade das plaquetas foi semelhante entre os tratamentos. O resfriamento por 24h não afetou a contagem de plaquetas. No entanto, a viabilidade plaquetária foi reduzida após o resfriamento do PRP produzido pelo método 3. Estudo 2, o tratamento com PRP reduziu os PMNs endometriais, IUF pós-reprodução e citocinas pró-inflamatórias quando comparados aos ciclos atribuídos pelo controle, mas não significativamente diferente do PPP. Os controles tiveram uma porcentagem significativamente maior de culturas bacterianas positivas (33%) em comparação com os ciclos atribuídos a PRP (0%), enquanto os ciclos tratados com PPP não foram significativamente diferentes dos outros grupos (25%). Os ciclos atribuídos ao PRP tiveram taxas de recuperação embrionária significativamente maiores (83%) do que o controle (33%), embora não significativamente diferente do PPP (60%). Em conclusão, o Método 1 resultou nas maiores concentrações de plaquetas, enquanto o método 3 resultou em maiores contagens de leucócitos. O resfriamento afetou a viabilidade das plaquetas no PRP obtido com o método 3. Resta determinar se os diferentes métodos e o resfriamento afetariam a eficácia clínica do PRP. A infusão de plasma reduziu a duração e intensidade da resposta inflamatória pós-IA e melhorou a recuperação embrionária em éguas suscetíveis a EPPC. As plaquetas parecem ter uma propriedade antimicrobiana e anti-inflamatória dependente da dose

Endometritis is the most common cause of subfertility in mares. All mares display a physiological post-breeding endometrial inflammation; however, 15-20% of mares have persistent breeding-induced endometritis (PBIE). Recently, platelet-rich plasma (PRP) is becoming popular in mare practice to mitigate post-breeding induced endometritis and improve fertility. Currently, there is no standardization of methods to prepare PRP for intrauterine use in mares. This study aimed to compare three methods to prepare PRP for intrauterine infusion in mares and to assess the post-breeding inflammatory response, endometrial culture and embryo recovery in mares susceptible to PBIE treated with PRP. In the first study, PRP was produce by three methods. Method 1, blood was collected in blood transfusion bag, transferred to Falcon tubes and double centrifuged; Method 2, blood was collected in vacutainer tubes and centrifuged once; Method 3, blood was collected in a syringe containing anticoagulant, which was kept in an upright-position to sediment for 4h. After processing, cell counts and platelet viability were assessed. In a subset of mares (n=6), PRP was evaluated at 6 and 24h post-cooling at 5°C. In study 2, mares (n=12) susceptible to PBIE had three cycles randomly assigned in a crossover design to receive intrauterine infusions of LRS (control), or autologous PRP or platelet-poor plasma (PPP) pre- (48 and 24h) and post-breeding (6 and 24h). Both PRP and PPP were obtained by Method 1. Mares were bred with fresh semen from one stallion. Intrauterine fluid accumulation (IUF) and endometrial polymorphonuclear cells (PMNs) were assessed every 24h up to 96h post-breeding. Uterine cytokines (Il, IL6, CXCL8 and IL10) were evaluated before (0h), 6 and 24h post-breeding, and endometrial culture three and nine-days after breed. Embryo flushing was performed 8d post-ovulation. Data were analyzed with mixed model, Tukeys post-hoc test, and multivariate regression. In study 1, Method 1 resulted in the greatest and method 3 in the fewest platelet concentrations, and the latter had greater WBC than the others (P<0.05). Platelet viability was similar across treatments. Cooling for 24h did not affect platelet counts. However, platelet viability was reduced after cooling PRP produced by method 3. Study 2, PRP treatment reduced endometrial PMNs, post-breeding IUF and pro-inflammatory cytokines when compared to control-assigned cycles, but not significantly different than PPP. Controls had a significantly higher percentage of positive bacterial cultures (33%) in comparison to PRP-assigned cycles (0%), whereas cycles treated with PPP were not significantly different from the other groups (25%). The PRP-assigned cycles had significantly higher embryo recovery rates (83%) than the control (33%), though not significantly different than PPP (60%). In conclusion, Method 1 resulted in the greatest platelet concentrations, while method 3 resulted had greater WBC counts. Cooling affected platelet viability in PRP obtained with method 3. It remains to be determined whether the different methods and cooling would affect PRP's clinical efficacy. Plasma infusion reduced the duration and intensity of the post-breeding inflammatory response and improved embryo recovery in mares susceptible to PBIE. Platelets incrementally downregulate PBIE and appear to have a dose-dependent antimicrobial property.

AVALIAÇÃO DE PERDAS GESTACIONAIS EM BOVINOS DE LEITE EM PROGRAMAS DE BIOTÉCNICAS DA REPRODUÇÃO E A PARTICIPAÇÃO DO Neospora caninum

O uso de biotécnicas como ferramenta de manejo reprodutivo, tem evoluído de forma significativa nas últimas décadas, proporcionando aumento da eficiência reprodutiva em bovinos de leite. Dentre as biotécnicas, Inseminação Artificial em Tempo Fixo (IATF), Transferência de Embriões (TE) e a Fertilização in vitro (FIV), são as que mais evoluíram e são atualmente utilizadas em programas reprodutivos de rebanhos leiteiros. Apesar da capacidade destas é necessária a compreensão dos fatores relacionados ao seu sucesso para a aplicação das mesmas, desta forma o desenvolvimento de estudos que avaliem a resposta superovulatória, as taxas de prenhez e perdas gestacionais podem contribuir para o aumento da eficácia. O rigoroso controle sanitário dos rebanhos, torna-se imprescindível para que os respectivos programas possam proporcionar os ganhos esperados em eficiência reprodutiva. Desta forma, dois experimentos foram desenvolvidos. O primeiro experimento teve como objetivo detectar, através da técnica de PCR, o DNA de Neospora caninum em embriões oriundos de vacas soropositivas em protocolos de superovulação para transferência de embriões. Entre receptoras de embriões provenientes de doadoras soropositivas e soronegativas não foram encontradas diferenças na taxa de prenhez (60 e 57,1%, P=0,57), perda gestacional (50% e 43,8%, P=0,79) e número de embriões produzidos após superovulação (40 e 51, P=0.64). Não houve também alteração do status sorológicos das receptoras, independente do status da doadora, assim como não foram identificados o DNA do protozoário em embriões e amostras de PBS da lavagem uterina realizada para a coleta de embriões. Assim, pode-se demonstrar que a técnica de TE é segura e pode ser utilizada em programas de controle da neosporose, ressaltando que apesar da similaridade no número de embriões, houve diferença significativa no número de estruturas congeláveis (25% e 74%, P<0,0001) e transferíveis (27,5% e 78,4%, P<0,0001). O segundo estudo avaliou o efeito do aumento da progesterona circulante (P4) pela indução da formação de corpo lúteo acessório (CL) em receptoras de embriões clonados (TNCS) e produzidos in vitro (FIV). Como esperado, o tratamento com hCG causou ovulação e aumentou a P4 circulante, embora o hCG tendesse a aumentar as prenhezes por TE (P/TE) para receptoras de embriões TNCS nos dias 28 (P = 0,07) e 42 (P = 0,09). As taxas de prenhez foram semelhantes para FIV e embriões TNCS nos dias 28 e 33, no entanto, P/TE foi maior para FIV do que TNCS no dia 42 e mais tarde, devido a maiores (P = 0,05) perdas de gestação no TNCS (44,4%) do que embriões FIV (15,0%) dos dias 33-42. Assim, o aumento da P4 circulante pode melhorar a fertilidade em receptoras de embriões TNCS, como evidenciado pela tendência do tratamento com hCG para aumentar P/ET de embriões TNCS. Conclui-se que a TE é uma técnica viável para o melhoramento genético do rebanho, podendo ser utilizadas também no controle de enfermidades como a neosporose bovina

The use of biotechniques as a reproductive management tool has evolved significantly in recent decades, increasing reproductive efficiency in dairy cattle. Among the biotechniques, FixedTime Artificial Insemination (FTAI), Embryo Transfer (ET) and in vitro Fertilization (IVF) the most evolved and currently used in reproductive programs for dairy herds. Despite their capacity, it is necessary to understand the factors related to their success for their application, thus the development of studies that assess the superovulatory response, pregnancy rates and pregnancy losses can contribute to increased effectiveness. The strict sanitary control of the herds becomes essential so that the respective programs can provide the expected gains in reproductive efficiency. In this way, two experiments were developed. The first experiment aimed to detect, through the PCR technique, the DNA of Neospora caninum in embryos from seropositive cows in superovulation protocols for embryo transfer. Among recipients of embryos from seropositive and seronegative donors, no differences were found in the pregnancy rate (60 and 57.1%, P=0.57), gestational loss (50% and 43.8%, P=0.79) and number of embryos produced after superovulation (40 and 51, P=0.64). There was also no change in the serological status of the recipients, regardless of the status of the donor, as well as the protozoan DNA in embryos and PBS samples from the uterine lavage performed for embryo flushing were not identified. Thus, it can be demonstrated that the TE technique is safe and can be used in neosporosis control programs, noting that despite the similarity in the number of embryos, there was a significant difference in the number of freezeable (25% and 74%, P <0.0001) and transferable (27.5% and 78.4%, P<0.0001) structures. The second study evaluated the effect of increasing circulating progesterone (P4) by inducing accessory corpus luteum (CL) formation in recipients of cloned (SCNT) and in vitro produced (IVF) embryos. As expected, treatment with hCG caused ovulation and increased circulating P4, although hCG tended to increase pregnancies by ET (P/ET) for SCNT embryo recipients on days 28 (P = 0.07) and 42 (P = 0.09). Pregnancy rates were similar for IVF and SCNT embryos on days 28 and 33, however, P/ET was higher for IVF than SCNT on day 42 and later, due to higher (P = 0.05) pregnancy losses in SCNT (44.4%) than IVF embryos (15.0%) from days 33-42. Thus, increasing circulating P4 may improve fertility in recipients of SCNT embryos, as evidenced by the tendency of treatment with hCG to increase P/ET of SCNT embryos. Although additional research is needed, it can be concluded that ET is a viable technique for the genetic improvement of the herd, which can also be used to control diseases such as bovine neosporosis

Proteômica do fluído uterino e do embrião durante a gestação inicial equina

O presente estudo teve como objetivo descrever o perfil proteico do embrião equino e do fluido uterino durante a fase inicial do reconhecimento materno da gestação. Foram utilizadas 10 éguas, sem anormalidades uterinas, de 5 a 8 anos de idade. O acompanhamento folicular diário foi realizado até a detecção de um folículo (35 mm) para indução da ovulação, o dia seguinte realizava a inseminação artificial e posteriormente o D0 sendo o dia da ovulação da égua. O líquido uterino foi colhido, usando tampão vaginal comercial de humanos nos dias 7 (D7), 10 (D10) e 12 (D12) de gestação. Nos mesmos períodos, após a retirada do tampão vaginal, os embriões foram colhidos por fluxo retrógrado utilizando-se tampão fosfato-salina pH 7,2. O processamento do líquido uterino foi de centrifugação e dos embriões foram sonicação e centrifugação para proteômica. A concentração de proteína total foi determinada e uma alíquota (50 µg) foi digerida in solution com tripsina, seguida da análise por espectrometria de massas. Após a análise estatística multivariada, foram identificadas 171 proteínas, sendo 29 no embrião e 142 no líquido uterino. Foram encontradas 15 proteínas mais abundantes nos embriões, sendo 10 no D10 e 5 no D12. Já no líquido uterino, 6 proteínas foram mais abundantes no D7, 3 no D10 e 6 no D12. As principais funções moleculares foram atividade catalítica e de ligação e os processos biológicos mais significativos foram o processo celular e metabólico. Este estudo descreveu proteínas que foram abundantes no fluído do endométrio e no embrião equino, fornecendo indicações sobre a nutrição e metabolismo embrionários e fatores pré-implantação no período de reconhecimento materno da gestação.

The aim of this study was to describe the protein profile of the equine embryo and uterine fluid, during the maternal recognition of pregnancy. Ten mares from 5 to 8 years of age, without uterine abnormalities were used. Daily follicular monitoring was performed until the detection of the preovulatory follicle (35 mm) to induce ovulation, the next day performed artificial insemination and then D0 was the mare's ovulation day. The uterine fluid was collected using commercial human vaginal tampon at 7 (D7), 10 (D10) and 12 (D12) of the gestation. In the same moments, after withdraw vaginal tampon, the embryos were collected by retrograde flushing using phosphate-saline buffer pH 7.2. The processing of the uterine fluid was centrifugation and the embryos were sonicated and centrifuged for proteomics. The total protein concentration was determined and an aliquot (50 µg) was digested in solution with trypsin, followed by analysis by mass spectrometry. After data analysis by multivariate statistical, 171 proteins were identified, 29 in the embryo and 142 in the uterine fluid. Fifteen abudant proteins were found in the embryos, 10 proteins in the D10 and 5 in the D12. In the uterine fluid, 6 proteins were more abundant in the D7, 3 in the D10 and 6 in the D12. The main molecular functions were catalytic and binding activity and the most significant biological processes were the cellular and metabolic processes. This study described proteins that were abundants in the uterine fluid and the equine embryo, providing indications about the embryonary nutrition, metabolism, and pre-implantation factors in the period of maternal recognition of pregnancy.

Probing the uterine microenvironment through Systems Biology approaches

In cattle, the developing preimplantation conceptus depends solely on its surrounding environment for supplying nutrients and growth stimuli. Also, throughout gestation, it is during the preimplantation stage of gest ation that most conceptus mortality is observed. Thus, one could rationalize that the composition of the uterine environment plays a major role on conceptus survival. However, the biochemical composition of the uterine environment is only just starting to be deciphered and conditions associated with optimal conceptus development are virtually unknown. In this review we attempt to briefly review and discuss issues associated with sampling and analyzing the uterine envir onment. We suggest that modern, holistic approaches such as Systems Biology are necessary to characterize the uterine functions associated with pregnancy success in cattle.

Probing the uterine microenvironment through Systems Biology approaches

In cattle, the developing preimplantation conceptus depends solely on its surrounding environment for supplying nutrients and growth stimuli. Also, throughout gestation, it is during the preimplantation stage of gest ation that most conceptus mortality is observed. Thus, one could rationalize that the composition of the uterine environment plays a major role on conceptus survival. However, the biochemical composition of the uterine environment is only just starting to be deciphered and conditions associated with optimal conceptus development are virtually unknown. In this review we attempt to briefly review and discuss issues associated with sampling and analyzing the uterine envir onment. We suggest that modern, holistic approaches such as Systems Biology are necessary to characterize the uterine functions associated with pregnancy success in cattle.(AU)

VÍRUS DA ARTRITE ENCEFALITE CAPRINA (CAEV) NO TRATO REPRODUTIVO DE CABRAS NATURALMENTE INFECTADAS E RISCO DE TRANSMISSÃO PELA TRANSFERÊNCIA DE EMBRIÕES

Objetivou-se, primeiramente fazer um levantamento sorológico em cinco, das principais propriedades produtoras de leite caprino no estado de Minas Gerais, posteriormente estudou-se a presença do vírus no trato reprodutivo de cabras naturalmente infectadas e o risco de transmissão via transferência de embriões. Cinco propriedades localizadas em cidades distintas no estado de Minas Gerais foram avaliadas, totalizando 1072 animais de diferentes faixas etárias, das raças Toggenburg, Alpina e Saanen. O estudo relativo à presença do vírus no trato reprodutivo e no lavado uteriono avaliou os embriões recuperados através das lavagens transcervicais, submetendo-os à punção de massa celular interna e com auxílio de um micromanipulador, as duas partes foram individualizadas. O trato reprodutivo (vagina, cérvix, útero e ovários) dos animais foi recuperado e submetido ao diagnóstico PCR Nested. Finalmente, no terceiro estudo, em um rebanho comercial, cabras positivas para CAEV foram selecionadas como doadoras e cabras negativas para CAEV como receptoras de embriões. Um total de 23 embriões foram coletados, pela técnica transcervical, submetidos às lavagens com tripsina e posteriormente transferidos receptoras também pela via transcervical. Durante todo o período gestacional (cinco meses) e mais quatro meses pós-parto o sangue total foi coletado uma vez ao mês, das receptoras para diagnóstico de CAEV, assim como dos animais nascidos. A ocorrência de anticorpos anti-CAEV nas propriedades estudadas foi de 49,5% (531/1072). De acordo com os resultados, uma alta ocorrência de animais soropositivos foi identificada no estado de Minas Gerais. Os tecidos estudados também demonstraram-se positivos para a presença de pró-vírus e vírus, indicando que pode estar ocorrendo replicação viral no trato reprodutivo. Entretanto os embriões oriundos deste meio, nas duas porções: zona pelúcida e massa celular interna não demonstraram a expressão de DNA ou RNA viral, o que confirma a capacidade de proteção da zona pelúcida nos mesmos. Durante todo o período investigado, não houve identificação de DNA pró-viral no sangue das receptoras. Os recém-nascidos durante os quatro meses de avaliação, também foram negativos. No presente estudo, não houve transmissão do CAEV por embriões oriundos de cabras positivas após tratamento com lavagens de tripsina. A lavagem transcervical demonstrou-se potencialmente auxiliar na eliminação do vírus no trato reprodutivo, uma vez que a quantidade de líquido infundido ajuda na diluição do mesmo. Logo, pode-se inferir que embriões oriundos de cabras naturalmente infectadas, mesmo na presença de pró-vírus e vírus livre no lúmen uterino aparentemente 17 não são permissivos a infecção pelo CAEV, devido à presença de zona pelúcida íntegra e que a lavagem transcervical é auxiliar na desinfecção dos mesmos.

The study was conducted in steps, first a serological survey in five major producing properties of goat milk in the state of Minas Gerais, to identify the occurrence of anti- CAEV antibodies. A second study was to investigate the presence of CAEV in the reproductive tract of naturally infected goats and a third the risk was conducted to evaluate the virus transmission by embryo transfer. Five properties located in different cities in the state of Minas Gerais were evaluated, totaling 1072 animals of different ages and races (Toggenburg, Alpine and Saanen). The study on the presence of the virus in the uterus these being selected as embryo donors. Embryos recovered through transcervical flushing were subjected to inner cell mass puncture using a micromanipulador. The two parties of the embryos were individualized. Where they recovered the reproductive tract (vagina cervix, uterus and ovaries), the recovered material was diagnostic by PCR Nested. Finally, the third study, in a commercial flock positive goat to CAEV was selected as donors and negative goats to CAEV as embryo recipients. 23 embryos were recovery by transcervical flushing from five donors washed with trypsin and subsequently transferred to recipients also through transcervical way. Throughout the gestational period (five months) and four postnatal months total blood was collected once a month of the recipients for CAEV diagnosing by Nested PCR method. The monitoring was also performed by the same method of diagnosis in animals born during the first four months of life. The occurrence of anti-CAEV antibodies in the studied properties was 49.5% (531/1072). According the results, a high occurrence of seropositive animals was identified in the state of Minas Gerais, which has one of the largest herds of dairy goats in Brazil. Therefore to emphasizes the need to adopt new technologies on the properties as the separation of infected and healthy animals. The exclusion of positive breeding in properties is also a measure of control, it has been demonstrated that these are an important route of transmission. Tissues studied also showed positive results for the presence of pro-virus and viruses, indicating that may be occurring viral replication in the reproductive tract. However the embryos from this medium, in two parts: the zone pellucida and inner cell mass have not shown the expression of DNA or RNA, which confirms the zone pellucida protection capacity of 18 the same. Throughout the period investigated, no proviral DNA was identify in the recipients blood. Newborns during the four-month evaluation were also seronegative. The present study did not show the transmission of CAEV by embryos from positive goats after trypsin washes. According to the results, a high occurrence of seropositive animals was identified in the state of Minas Gerais, which has one of the largest herds of dairy goats in Brazil. The transcervical washing proved to be potentially method to reduce the virus concentration in reproductive tract, since the amount of fluid infused in the uterus could reduce the concentration of free virus in reproductive tract. Therefore, it can be inferred that embryos derived from naturally infected goats, even in the presence of pro-virus and virus free in uterine lumen are apparently not permissive to CAEV infection due to the presence of intact zone pellucida and transcervical flushing can reduce the risk of virus transmission.

INFLUÊNCIA DA ADIÇÃO DE PLASMA SEMINAL AO SÊMEN CONGELADO DE JUMENTO (Equus asinus) E DA LAVAGEM UTERINA, SOBRE A FERTILIDADE DE JUMENTAS

O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição do plasma seminal autólogo ao sêmen criopreservado de jumentos, aliado a lavagem uterina pós-inseminação artificial influencia nos índices de fertilidade em jumentas. Para isso, dois experimentos foram realizados: No experimento I foram analisados os parâmetros de cinética espermática pelo método computer assisted sperm analysis (CASA), análise da integridade de membrana plasmática e acrossomal (MPAI), peroxidação lipídica (PERO) e teor de espécie reativa de oxigênio intracelular (EROS) pela técnica de citometria de fluxo, de 15 ejaculados de 3 jumentos, diluídos em INRA-96®(IC - INRA, IMV Technologies, France) - Rota et al., (2012) ou em BotuCrio® (BC - Botupharma, Botucatu, Brasil), com e sem adição de plasma seminal (PS) após a descongelação. Os resultados do CASA foram semelhantes para os 2 diluentes (P>0,05), no entanto o BC proporcionou uma maior integridade de MPAI além da PERO menor que o IC, resultando em menor EROS (P<0,05). A adição do PS reduziu os parâmetros do CASA (p<0,05), porém sem ação na MPAI e PERO (p>0,05). No experimento II, avaliou-se a influência da adição do PS autólogo na pós-descongelação e sua associação à lavagem uterina (L) pós-inseminação artificial (IA), na fertilidade de jumentas. Foram utilizados 86 ciclos de 33 jumentas, divididas em 8 grupos: G1) BC + PS + L e G2) IC + PS + L foram testados mediante inseminações em 14 ciclos cada; G3) BC + L e G4) IC + L foram testadas em 11 ciclos cada, todas as L foram feitas 10 horas após a IA; G5) BC + PS e G6) IC + PS foram empregados em 8 ciclos cada, e o G7) BC e G8) IC foram avaliados em 10 ciclos cada. Verificou-se que o PS não influiu na fertilidade de jumentas (p = 0,6582) contudo a L,10 h pós-IA, interferiu positivamente na taxa de prenhez (p = 0,0097) elevando de 0% (G7 e G8) para 42,9% (G1 e G2).

The aim of this study was to evaluate whether the addition of autologous seminal plasma to frozen donkey semen, coupled uterine flushing after artificial insemination influence on fertility rates in jennies. Two experiments were conducted: experiment I, the parameters of sperm kinetics were analyzed by using computer assisted sperm analysis (CASA), analysis of plasma membrane integrity and acrosome (MPAI), lipid peroxidation (PERO) and reactive species content intracellular oxygen (ROS) by the technique of flow cytometry, 15 ejaculated 3 donkeys, diluted in INRA-96® (IC - INRA, IMV Technologies, France) -. Rota et al, (2012) or BotuCrio® (BC - Botupharma, Botucatu, Brazil), with and without addition of seminal plasma (SP) after thawing. The results were similar for CASA to 2 extenders (P> 0.05), however BC provided greater MPAI integrity beyond smaller PERO than the IC, resulting in lower EROS (P <0.05). The addition of PS reduced the parameters of CASA (P <0.05), but no action on the MPAI and Pero (P> 0.05). Experiment II, evaluated the influence of the addition of autologous SP in post-thaw and its association with uterine lavage (L) pos-IA, in the fertility jennies. 86 cycles of 33 jennies were used, divided into 8 groups: G1) BC + SP + Land G2) IC + SP + L, were tested by 14 cycles each; G3) BC+L and G4) IC+ L, were tested on each 11 cycles, all L were made 10 hours after AI; G5) BC + SP and G6) IC + SP were used in 8 cycles each, and the G7) BC and G8) IC were evaluated in 10 cycles each. It was found that the SP, had no effect on fertility jennies (p = 0.6582) however L 10 h post-IA, increased pregnancy rate (p = 0.0097) increasing from 0% (G7 and G8) to 42.9% (G1 and G2).

CARACTERIZAÇÃO DO PADRÃO DE METILAÇÃO DA LISINA 4 DA HISTONA H3 EM EMBRIÕES BOVINOS PRODUZIDOS IN VIVO COM SÊMEN SEXADO E SUBMETIDOS A CRIOPRESERVAÇÃO

O Brasil figura como o maior produtor de embriões bovinos do mundo, mas alguns gargalos, como o uso do sêmen sexado e a criopreservação eficiente de embriões ainda tem que ser trabalhados para que a produção e a exportação do material genético sejam otimizadas. A criopreservação de embriões produzidos in vivo é considerada eficiente e o conhecimento de sua biologia básica pode ser utilizado como parâmetro para melhor entendimento dos mecanismos envolvidos na baixa eficiência da criopreservação dos embriões produzidos in vitro. O objetivo desse estudo foi avaliar as modificações da trimetilação da lisina 4 na Histona 3 (H3K4me3) em embriões bovinos produzidos in vivo com sêmen sexado e submetidos a criopreservação. Vacas da raça Girolando (n=5) foram superovuladas e inseminadas com sêmen sexado ou convencional. Após a coleta de embrião (D7), parte dos embriões coletados foram armazenados em Paraformaldeído logo após a coleta, e outra parte armazenada em Paraformaldeído após a criopreservação/descongelamento. Todos os embriões (frescos/sêmen convencional; frescos/sêmen sexado; criopreservados/sêmen convencional e criopreservados/sêmen sexado) foram avaliados por imunofluorescência sob microscopia confocal, para identificação da H3K4me3. Das 190 estruturas coletadas, 100 foram produzidas com sêmen convencional e 90 com sêmen sexado. O uso do sêmen convencional proporcionou a produção de embriões viáveis (72%), sendo a maioria (52,77%) em fases mais avançadas do desenvolvimento (blastocistos expandidos; 52,77%). Por outro lado, os embriões produzidos com sêmen sexado apresentaram menores taxas de viabilidade (36,7%) e a maioria foi coletada em estágios mais precoces de desenvolvimento (Mórula e Blastocisto; 42,42%; p<0,05). Embriões na fase de mórula (209,26±10,95), independente da criopreservação ou do uso de sêmen sexado, apresentaram maior intensidade do sinal da trimetilação da H3K4 quando comparada com o embrioblasto de blastocistos (160,35±10,52) (p<0,05). Os resultados demonstraram que fêmeas da raça Girolando produzem embriões em fases mais avançadas do desenvolvimento após lavagem uterina. Esses são os primeiros resultados que descrevem o perfil epigenético de embriões bovinos produzidos in vivo. Como esperado, todos os embriões apresentam metilação da H3K4, no entanto em mórulas essa característica foi mais acentuada.

The Brazil stands as the largest producer of embryos in the world, but some obstacles, such as the use of sexed semen and efficient cryopreservation of embryos has yet to be worked out so that the production and export of genetic material are optimized. Cryopreservation of embryos produced in vivo is considered efficient and the knowledge of its basic biology can be used as a parameter for better understanding of the mechanisms involved in the low efficiency of cryopreservation in embryos produced in vitro. The objective of this study was to characterize the modifications of tri-methylated lysine 4 on histone 3 (H3K4me3) in bovine embryos produced in vivo with sex-sorted semen and subjected to cryopreservation. Girolando cows (a common brasilian dairy breed, crossbreed Gir x Holsteins; n = 5) were superovulated and inseminated with sex-sorted or conventional semen. After the embryo collection (n = 4), aliquots of the collected embryos were stored in Paraformaldehyde immediately after collection, or stored in Paraformaldehyde after cryopreservation / thawing. All embryos (fresh / conventional semen, fresh / sexed semen; cryopreserved / conventional semen and cryopreserved / sexed semen) were evaluated by immunofluorescence in confocal microscopy to identify the H3K4me3. From 190 embryos collected, 100 were produced with conventional semen and 90 with sexed semen. The use of conventional semen provided 72% of viable embryos, the majority (52.77%) of them was in more advanced stages of development (expanded blastocysts; 52.77%). In contrast, embryos produced with sexed semen showed lower viability rate (36.7%) and earlier stages of development at time of collection (morula and blastocyst, 42.42%; p <0.05). Embryos in morula stage, regardless of cryopreservation or the use of sexed semen, showed the most prevalent signal of the H3K4me3 compared to blastocysts (209.26 ± 10.95 vs. 160.35 ± 10.52 intensity channels; p <0.05). Furthermore our results demonstrated those after uterine flushing of Girolando cows the embryos are in more advanced stages of development. These are the first results that describe the H3K4me3 profile of bovine embryos produced in vivo. As expected, all embryos show methylation of H3K4, but in morula the abundance was more pronounced.

Embryo quality of mice (Mus musculus) fed royal jelly / Qualidade embrionária de camundongos ("Mus musculus") suplementados com geléia real

The study was carried out to verify the effect of feeding royal jelly associated to follicle growth induction on number and quality of mice (Mus musculus) embryos. Sixty Swiss females ageing from eight to ten weeks were distributed into three treatments: the first one, composed by animals fed 0.2 mL of physiological solution intraperitoneal (control group, n=20); the second and third ones, composed by females fed 0.5 and 1.0 mg of royal jelly diluted in 0.2 mL of physiological solution (n=20), respectively. Royal jelly was administered during 15 days, followed by the follicular growth induction process. Embryos were collected 68 hours after mating, by uterine flushing. No treatment effects on the number of females that answered to superovulatory process, the number of total recovery structures, the number of viable and non viable structures and the morphological quality of viable embryos (P>0.05) were observed. Therefore, royal jelly doses used were not efficient to increase the number of embryos and to improve the quality recovery from superovulated mice.

Objetivou-se verificar a influência da geléia real, associada ao tratamento de indução de crescimento folicular, no número e na qualidade de embriões de camundongos (Mus musculus). Foram utilizadas 60 fêmeas da linhagem Suíço albino com idade entre oito e dez semanas, distribuídas em três tratamentos: o primeiro, composto por animais que receberam 0,2 mL de solução fisiológica, via intraperitonial (grupo controle, n=20); o segundo e terceiro, compostos de fêmeas que receberam 0,5 e 1 mg de geléia real diluídos em 0,2 mL de solução fisiológica via intraperitonial (n=20), respectivamente. Foi administrada geléia real por um período de 15 dias, segundo o processo de indução do crescimento folicular. As coletas dos embriões ocorreram 68 horas após a cobertura, utilizando-se o método da lavagem uterina. Não houve diferença no número de fêmeas que responderam ao tratamento superovulatório, no número total de estruturas recuperadas, no número de estruturas viáveis e não-viáveis e na qualidade morfológica dos embriões viáveis (P>0,05). Desta forma, nas doses utilizadas a geléia real não melhora o número e a qualidade dos embriões recuperados de fêmeas de camundongos superovuladas.

Comparação de diferentes técnicas de sincronização da emergência da onda folicular visando a superovulação em bovinos / Comparative technics of follicular wave emergence synchronization in the cattle superovulation

Foram avaliadas quatro técnicas de sincronização da onda folicular em protocolos de superovulação. Para tal, foram utilizadas 112 vacas doadoras, das raças Simental, Limousin e Red Angus, com escore corporal médio de 3,0. Os animais foram divididos aleatoriamente em cinco grupos experimentais de acordo com o método de sincronização da emergência da onda folicular. Foram realizadas 30 superovulações em cada grupo, considerando os seguintes protocolos: GI - grupo controle – animais superovulados entre o 8o e o 12o dia do ciclo estral (dia zero = estro); GII – animais que sofreram punção folicular no 9o dia (dia 0 = estro) e início do tratamento superovulatório no 11o dia; GIII – animais que sofreram punção folicular em fase não conhecida do ciclo estral, associada ao uso de um dispositivo intravaginal contendo progesterona (P4) e tratamento superovulatório iniciado 48h após a punção, GIV – animais que utilizaram implante intravaginal de progesterona colocadoem fase aleatória do ciclo estral, mantido por nove dias, associado à administração de 50 mg de P4 e de 2mg de benzoato de estradiol, sendo o tratamento superovulatório iniciado cinco dias após a colocação do dispositivo e GV – animais que receberam implante intravaginal de P4 colocado em fase aleatória do ciclo estral e mantido por oito dias, associado à administração de 50mg de P4 e 2mg de 17â-estradiol, sendo o tratamento superovulatório iniciado quatro dias após a colocação do dispositivo. Nos grupos I, II, III, IV e V o total de estruturas coletadas e de embriões viáveis foram, respectivamente (13,53±9,23 vs 13,87 ± 7,85 vs 18,70 ± 10,88 vs 9,03 ± 4,97 vs 13,60 ± 8,39) e (8,43±5,68 vs 8,27 ± 7,06 vs 10,47 ± 8,19 vs 5,37 ± 2,92 vs 7,23 ± 5,30). Os resultados observados no GIII foram superiores ao GI, GII, GIV e GV (P 0,05), enquanto o desempenho de GIV foi inferior (P<0,05). Os resultados permitem concluir que é possível sincronizar a emergência da onda folicular de vacas doadoras, com início da superovulação em qualquer momento do ciclo estral, e que o tratamento progestágeno associado à punção folicular oferece os melhores resultados.

We evaluated four different techniques of follicular wave synchronization by comparing total number of structures recovery, number of viable and degenerated embryos, number of oocytes recovery and cost of uterine flushing. One hundred twelve Simental, Limousin and Red Angus donators were randomly allocated in five treatment groups according to protocol used for follicular wave emergence synchronization. Thirty superovulations were performed in each group, the programs were: G1- Control, superovulation treatment between days 8 and 12 of the estrous cycle; G2- follicle aspiration on day 9 of the estrous cycle; G3- follicle aspiration plus intravaginal progesterone implant; G4- intravaginal progesterone implant plus estradiol benzoate and G5- intravaginal progesterone implant plus estradiol-17â. Artificial insemination was performed twice, 12 and 24 hours after detection of behavioral estrus. Embryo collection was performed on day 7 after inseminations. Total number of recovered structures (18,70 ± 10,88 vs 13,53 ± 9,23) and viable embryos (10,47 ± 8,19 vs 8,43 ± 5,68) were higher (P0,05) were detected amongst groups 2, 5 and 1, while performance of G4 was the lowest (P<0,05). Results demonstrate to be possible synchronize follicular wave emergence by initiating superstimulation at any time of the estrous cycle. Additionally we verified that the program using progesterone associated to follicular ablation had the best results in synchronizing follicular wave emergence aiming superstimulation in cattle.

Comparação de diferentes técnicas de sincronização da emergência da onda folicular visando a superovulação em bovinos / Comparative technics of follicular wave emergence synchronization in the cattle superovulation

Foram avaliadas quatro técnicas de sincronização da onda folicular em protocolos de superovulação. Para tal, foram utilizadas 112 vacas doadoras, das raças Simental, Limousin e Red Angus, com escore corporal médio de 3,0. Os animais foram divididos aleatoriamente em cinco grupos experimentais de acordo com o método de sincronização da emergência da onda folicular. Foram realizadas 30 superovulações em cada grupo, considerando os seguintes protocolos: GI - grupo controle animais superovulados entre o 8o e o 12o dia do ciclo estral (dia zero = estro); GII animais que sofreram punção folicular no 9o dia (dia 0 = estro) e início do tratamento superovulatório no 11o dia; GIII animais que sofreram punção folicular em fase não conhecida do ciclo estral, associada ao uso de um dispositivo intravaginal contendo progesterona (P4) e tratamento superovulatório iniciado 48h após a punção, GIV animais que utilizaram implante intravaginal de progesterona colocadoem fase aleatória do ciclo estral, mantido por nove dias, associado à administração de 50 mg de P4 e de 2mg de benzoato de estradiol, sendo o tratamento superovulatório iniciado cinco dias após a colocação do dispositivo e GV animais que receberam implante intravaginal de P4 colocado em fase aleatória do ciclo estral e mantido por oito dias, associado à administração de 50mg de P4 e 2mg de 17â-estradiol, sendo o tratamento superovulatório iniciado quatro dias após a colocação do dispositivo. Nos grupos I, II, III, IV e V o total de estruturas coletadas e de embriões viáveis foram, respectivamente (13,53±9,23 vs 13,87 ± 7,85 vs 18,70 ± 10,88 vs 9,03 ± 4,97 vs 13,60 ± 8,39) e (8,43±5,68 vs 8,27 ± 7,06 vs 10,47 ± 8,19 vs 5,37 ± 2,92 vs 7,23 ± 5,30). Os resultados observados no GIII foram superiores ao GI, GII, GIV e GV (P< 0,05), respectivamente. Os grupos I, II e IV não apresentaram diferenças entre si (P> 0,05), enquanto o desempenho de GIV foi inferior (P<0,05). Os resultados permitem concluir que é possível sincronizar a emergência da onda folicular de vacas doadoras, com início da superovulação em qualquer momento do ciclo estral, e que o tratamento progestágeno associado à punção folicular oferece os melhores resultados.(AU)

We evaluated four different techniques of follicular wave synchronization by comparing total number of structures recovery, number of viable and degenerated embryos, number of oocytes recovery and cost of uterine flushing. One hundred twelve Simental, Limousin and Red Angus donators were randomly allocated in five treatment groups according to protocol used for follicular wave emergence synchronization. Thirty superovulations were performed in each group, the programs were: G1- Control, superovulation treatment between days 8 and 12 of the estrous cycle; G2- follicle aspiration on day 9 of the estrous cycle; G3- follicle aspiration plus intravaginal progesterone implant; G4- intravaginal progesterone implant plus estradiol benzoate and G5- intravaginal progesterone implant plus estradiol-17â. Artificial insemination was performed twice, 12 and 24 hours after detection of behavioral estrus. Embryo collection was performed on day 7 after inseminations. Total number of recovered structures (18,70 ± 10,88 vs 13,53 ± 9,23) and viable embryos (10,47 ± 8,19 vs 8,43 ± 5,68) were higher (P< 0,05) in G3 than in G1, respectively. No differences (P>0,05) were detected amongst groups 2, 5 and 1, while performance of G4 was the lowest (P<0,05). Results demonstrate to be possible synchronize follicular wave emergence by initiating superstimulation at any time of the estrous cycle. Additionally we verified that the program using progesterone associated to follicular ablation had the best results in synchronizing follicular wave emergence aiming superstimulation in cattle.(AU)

Quantificação do interferon-tau durante o reconhecimento materno da gestação em fêmeas bovinas Bos taurus indicus / Quantification of interferon-tau during the maternal recognition of pregnancy in Bos taurus indicus cows

Durante o período crítico do reconhecimento materno, compreendidoentre o 15º e 19º dias da gestação, o concepto deve sintetizarcompetentemente moléculas capazes de bloquear a síntese deprostaglandina F2α (PGF2α) e a luteólise. Em bovinos, a principalmacromolécula protéica envolvida em tal bloqueio é o interferon-tau(IFN-τ). Durante o período crítico, falhas neste reconhecimentodeterminam à mortalidade embrionária em até 40% das fêmeasinseminadas. Informações sobre o IFN-τ em animais Bos taurus indicus,ainda são restritas. Este estudo objetivou uma avaliação quantitativado IFN-τ durante o período crítico do reconhecimento materno, emlavados uterinos obtidos por sonda de Foley (dias 14, 16 e 18 pósestro) ou post-mortem (dia 18 pós-estro). Para tanto, foram utilizadasfêmeas multíparas azebuadas (Bos taurus indicus), cíclicas ou prenhes,nos dias 14, 16 e 18 pós-estro. Para a obtenção dos lavados, os úterosforam infundidos com solução de Ringer Simples. Os lavados foramconcentrados por ultra-filtração e liofilizados. As macromoléculasprotéicas foram separadas por Eletroforese Unidimensional SDSPAGE, em gel com 15% de poliacrilamida. A quantificação doIFN-τ nos lavados uterinos foi realizada por Western-Blotting edensitometria. Tanto nos lavados obtidos por sonda de Foley quantonos post-mortem foi possível observar bandas de proteínas queapresentaram reação cruzada com os anticorpos utilizados no WesternBlotting. O IFN-τ foi detectado apenas nos lavados uterinospost-mortem de vacas prenhes (P<0,05). A densidade óptica não foiafetada pelo dia do período crítico, estado (cíclico ou prenhe) ouinteração dia x estado. Nos lavados post-mortem não houve efeito depeso do concepto ou concentração de progesterona plasmática no diado lavado na densidade da banda protéica referente ao IFN-τ .(AU)

During the critical period of the maternal recognition, which occursbetween days 15 and 19 of pregnancy, the conceptus must competentlysynthesize molecules capable of blocking the synthesis ofprostaglandin F2α (PGF2α) and luteolysis. In cattle, the majormacromolecule involved in suck blockage is the protein interferontau (IFN-τ). During the critical period, failures in the recognition ofpregnancy determine embryonic mortality on up to 40% ofinseminated cows. Data about IFN-τ in Bos taurus indicus are stillscarce. Objective of this study was to quantitatively evaluate the presenceof IFN-τ during the critical period for maternal recognition ofpregnancy in uterine flushings obtained in vivo by Foley catheter (Days14, 16 and 18 post estrus) or post-mortem (Day 18 post estrus).Multiparous, cyclic or pregnant zebu cows (Bos taurus indicus) on days14, 16 and 18 post estrus were used for in vivo or post mortem uterineflushing collection. In both cases, a Ringer solution was used to washthe uterus of cows. Uterine flushings were concentrated by ultrafiltration and lyophilized. Proteins were separated by one-dimensionalelectrophoresis (SDS-PAGE) in a 15% polyacrilamide gel. Interferontau quantification in uterine flushings was performed by westernblotting and densitometry. Non-specific protein bands were observedin both in vivo and post mortem uterine flushings. Interferon-tau wasdetected only in uterine flushings obtained from pregnant cowspost-mortem (P<0.05). Optical density of protein bands was not affectedby the day of the critical period, state (cyclic or pregnant) or interactionday x state. There was no effect of the conceptus weight orprogesterone concentration on the day of uterine flushing collectionin the optical density of the IFN-τ protein band.(AU)