Impacto de tratamentos de cama aviária reutilizada na viabilidade e infectividade de micro-organismos

A reutilização da cama aviária é uma prática comum na avicultura de corte. Porém, o reuso da cama requer a adoção de procedimentos eficientes na inativação e controle de micro-organismos indesejáveis no intervalo entre os lotes, para preservar a saúde avícola e a qualidade do alimento produzido. A preocupação com as questões sanitárias na avicultura engloba a saúde dos frangos e do consumidor. A produção está sujeita às emergências sanitárias e deve estar preparada para empregar medidas adequadas de contenção e controle. Além disso, os mercados consumidores internacionais demandam comprovação da eficiência dos métodos de tratamento para o reuso da cama entre lotes de frangos. A eficiência dos tratamentos de cama sobre os patógenos é variável e multifatorial e pode ser influenciada pelo método de tratamento e/ou pelos micro-organismos avaliados. Deste modo, o objetivo desta pesquisa foi avaliar a eficiência de diferentes estratégias de tratamento da cama aviária sobre vírus da Doença de Newcastle (VDNC), vírus da Doença Infecciosa da Bursa (VDIB) e Salmonella Heidelberg. Enterobactérias totais foram analisadas como indicador da qualidade microbiológica da cama aviária. Inicialmente, a contaminação experimental pelos vírus aviários foi padronizada, comparando-se a excreção por aves inoculadas (seeder birds) versus a aspersão direta dos vírus na cama. Para avaliação dos tratamentos, cama aviária reutilizada foi contaminada com os três micro-organismos e submetida aos tratamentos (T): T1- fermentação plana; T2- cal virgem; T3- fermentação plana seguida de adição de cal virgem; T4- não tratado. A cama aviária foi submetida às análises bacteriológicas e físico-químicas durante o tratamento. Aves sentinelas foram alojadas sobre a cama tratada, sendo monitoradas por meio de avaliação clínica e análises microbiológicas, sorológicas e moleculares. Os resultados demonstraram que as seeder birds foram eficientes em estabelecer a contaminação viral da cama. O T1 foi superior na redução de enterobactérias totais na cama aviária. A avaliação das aves sentinelas indicou que ambos T1 e T3 inativaram VDIB na cama aviária. O T2 não foi eficiente sobre os micro-organismos avaliados e sua associação ao T1 (T3) não potencializou a ação do tratamento. O VDNC não sobreviveu na cama, independente do tratamento aplicado. S. Heidelberg permaneceu viável na cama de todos os tratamentos, sendo também detectada nas aves sentinelas. A atividade antimicrobiana dos T1 e T3 foi relacionada aos maiores teores de amônia presentes na cama aviária. Os resultados indicam que a fermentação plana é eficiente para o controle do VDIB e enterobactérias totais residuais na cama aviária reutilizada. Todavia, na presença de S. Heidelberg outras alternativas devem ser consideradas no controle deste agente de importância na saúde animal e pública

Reusing litter is a common practice in broiler farming. However, it requires the adoption of efficient procedures for inactivating and controlling residual microorganisms during downtime between flocks to ensure sanitary control over the next flock and the quality of the broiler meat. The broiler production adopts a series of stringent precautionary measures to avoid sanitary emergencies and should be able to employ appropriate control measures. In addition, international consumer markets require proof of the efficiency of treatment methods for broiler litter reuse. The efficiency of broiler litter treatments on pathogens is variable and multifactorial and can be influenced by the treatment method and/or microorganisms evaluated. This study aimed to evaluate the efficiency of different strategies of treatment of broiler litter on Newcastle disease virus (NDV), Infectious bursal disease virus (IBDV) and Salmonella Heidelberg. Total enterobacteria counts were carried out as an indicator of microbiological quality of litter. First, the experimental contamination of the broiler litter by viruses was standardized, comparing the seeder birds inoculated versus the direct spray of the virus in the broiler litter. To evaluate the treatments, reused broiler litter was contaminated with the three microorganisms and submitted to the treatments (T): T1- shallow fermentation; T2- quicklime; T3- shallow fermentation followed by quicklime; and, T4- untreated. The broiler litter was submitted to bacteriological and physico-chemical analyzes during treatment. Sentinel chicks were housed on the broiler litter treated and further monitored by clinical evaluation, as well as microbiological, serological and molecular tests. The results demonstrated that seeder birds were efficient to stablish viral contamination in broiler litter. T1 was superior in reducing total enterobacteria in the broiler litter. The evaluation of sentinel chicks also indicated that T1 and T3 inactivated IBDV in the broiler litter. T2 was not able to reduce the microorganisms evaluated, and its association with T1 (T3) did not enhance the treatment action. NDV did not survive in broiler litter, regardless of the treatment applied. S. Heidelberg survived in broiler litter after all treatments evaluated and was also detected in the sentinel chicks. The antimicrobial activity of T1 and T3 was associated to ammonia levels present in the broiler litter. The results reveal that shallow fermentation is efficient to control residual IBDV and total enterobacteria in recycled broiler litter. However, other strategies should be considered in the presence of S. Heidelberg.

Apoptose e expressão de VP2 e GAPDH na infecção precoce pelo vírus da doença infecciosa da bursa de Fabricius em pintos SPF / Apoptosis and expression of VP2 and GADPH in an experimental infectious bursal disease in SPF chicks

Vinte e nove pintos SPF de um dia foram inoculados com o vírus da doença infecciosa da bursa de Fabricius (VDIB) para avaliar a ocorrência precoce de apoptose e a expressão da proteína viral 2 (VP2) e da enzima gliceraldeído fosfato dehidrogenase (GAPDH). Os animais foram distribuídos em cinco grupos: 1-controle; e 2 a 5- com 24, 48, 72 e 96 horas pós-inoculação, respectivamente. Fragmentos da bursa de Fabricius foram colhidos para processamento histológico e extração de RNA. Lâminas coradas em HE e TUNEL (marcação in situ da fragmentação do genoma com transferase terminal de deoxinucleotídeo) foram utilizadas na morfometria do índice apoptótico. Amostras de mRNA foram testadas para a expressão dos genes VP2 e GAPDH utilizando-se transcrição reversa e RT-PCR. Utilizou-se um kit SYBR GREEN PCR, e a reação foi desenvolvida em ABI Prism 7000 SDS. Os índices apoptóticos cresceram progressivamente indicando uma relação na atrofia bursal causada pelo VDIB. Paralelamente, os resultados da PCR em tempo real demonstraram queda da carga viral nas células linfóides da bursa nos diferentes intervalos de tempo do experimento. Esses resultados sugerem um papel protetor da apoptose na diminuição da replicação viral.(AU)

Twenty-nine SPF 1-day-old chicks were inoculated with infectious bursal disease virus (IBDV) to evaluate early apoptosis and the expression of viral protein 2 (VP2) and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenease (GAPDH). Five groups were formed: G1-control -and G2 to G5, - 24, 48, 72 and 96 hours post inoculation, respectively. Half of each BF was fixed and processed by routine techniques. To quantify apoptosis, 5µm-thick sections were stained with HE and submitted to TUNEL (terminal transferase UDP nick end labeling) technique. mRNA was extracted from pooled samples of 3 animals/group and used for the expression of VP2 and GADPH genes using the reverse transcription and real-time polymerase chain reaction (RT-PCR). A SYBR GREEN PCR kit was used and the reaction was carried out in an ABI Prism 7000 SDS. Apoptotic indexes progressively increased indicating a role of IBDV in inducing hypotrophy of the BF. Also, it was showed that as long as apoptosis increased, viral protein expression decreased, which suggests that apoptosis plays a role as a defense mechanism against viral replication.(AU)

Identification and molecular characterization of the infectious bursal disease virus (IBDV) from an outbreak in a broiler flock in midwestern Brazil

In order to identify and characterize the agent of a suggestive clinical case of Gumboro disease (GD) that affected a 34-day-old broiler flock in Buriti Alegre (Goias State, Midwestern Brazil) in the year 2001, we carried out a combination of classic and modern virological methods. Histopathological analysis of the bursa revealed necrosis, presence of depleted follicles, some infiltration of heterophils, edema and formation of cystic cavities that are compatible with lesions observed in GD. Inoculation of embryonated eggs of specific pathogen-free (SPF) chickens with macerated bursa suspension resulted in embryo mortality and lesions which were also compatible with those caused by IBDV. A sample of bursa was submitted to a nested reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR) procedure to amplify the hypervariable region of the VP2 gene. The amplicon that was obtained from this sample (BR-GO) was digested with the restriction enzymes TaqI, StyI and SspI, but not with SacI, a pattern similar to that observed with very virulent IBDV (vvIBDV) strains. Furthermore, nucleotide sequence analysis revealed alanine, isoleucine, and isoleucine at amino acid positions 222, 256, and 294, respectively, which are also found in vvIBDV strains. Finally, phylogenetic analysis grouped BR-GO isolate with other vvIBDV strains.

Para identificar e caracterizar o agente causador de um quadro clínico sugestivo de doença de Gumboro (DG) que afetou um plantel de frangos de corte com 34 dias de idade, em Buriti Alegre (estado de Goiás, centro-oeste do Brasil), no ano de 2001, procedeu-se uma combinação de métodos virológicos clássicos e modernos. Análises histopatológicas de bursas revelaram necrose, depleção de folículos linfóides, infiltração de heterófilos, edema e formação de cistos, lesões compatíveis com DG. A inoculação em ovos embrionados de galinhas SPF (specific pathogen-free) de uma suspensão de macerado de amostras de bursas resultou em mortalidade embrionária e lesões macroscópicas compatíveis com aquelas provocadas pelo VDIB. Amostras de bursas foram submetidas à técnica de transcrição reversa-reação em cadeia da polimerase (RT-PCR), utilizando-se oligonucleotídeos específicos para amplificação da região hipervariável do gene da VP2. Essa reação produziu um fragmento do tamanho esperado, que foi digerido pelas enzimas de restrição TaqI, StyI e SspI, mas não foi digerido com SacI. Este padrão foi o mesmo observado com cepas de VDIB hipervirulentas (vvVDIB). Análise da seqüência nucleotídica revelou a presença dos aminoácidos alanina, isoleucina e isoleucina nas posições 222, 256 e 294, respectivamente, característica dessas cepas. Além disso, análise filogenética realizada agrupou a cepa encontrada, denominada de BR-GO, com outras cepas de vvVDIB.

Influência do estresse térmico no nascedouro sobre a imunidade humoral e as características zootécnicas de frangos de corte

Dois experimentos foram conduzidos para verificar o efeito da temperatura do nascedouro sobre a imunidade humoral e as características zootécnicas dos frangos. Em cada experimento, embriões distribuídos ao acaso em três grupos foram submetidos à temperatura de 34, 37 ou 39°C (438-508 h de incubação). No experimento 1, os pintainhos foram criados sem vacinação e os títulos de anticorpos maternos contra a Doença Infecciosa da Bursa (VDIB) e a Doença de Newcastle (VDN) foram quantificados semanalmente até 42 dias, pelo método de ELlSA. No experimento 2, medidas morfométricas da bursa foram realizadas em 15 aves recém-eclodidas e as outras foram distribuídas em cinco parcelas por tratamento, de 30 aves cada e vacinadas contra VDIB (9° e 21° dia) e VDN (4° e 16° dia) e determinaram-se os títulos de anticorpos como no experimento 1. Características de desempenho e composição bromatológica foram determinadas. O peso e a área da bursa não foram afetados, entanto que, as áreas folicular, medular e cortical e a espessura do epitélio foram afetadas pelos tratamentos (pO,05). O teor de matéria seca corporal foi menor no 7° dia quando os embriões foram submetidos a 39°C em relação a 34°C. O consumo de ração foi menor e a conversão alimentar melhor até 7 dias e peso corporal foi menor até 21 dias, quando os embriões foram submetidos a 39°C. No período de 1-42 dias não houve diferenças no desempenho. Conclui-se que o estresse térmico no nascedouro: 1) diminui o desenvolvimento folicular da bursa ao nascimento, porém, não interfere na resposta imune humoral pós-natal, 2) não afeta a transferência de anticorpos maternos nem a queda dos mesmos e 3) o estresse por calor piora o desempenho nas três primeiras semanas, efeito que é compensado ao final da vida produt

Two experiments were carried out to verify the temperature effects in the hatcher on humoral immunity and performance of broiler chickens. In each experiment, the embryos were randomly distributed in three temperature: 34, 37 or 39°C (438-508 h of incubation). In the experiment 1, the chicks were reared without vaccination and the maternal antibodies titers against Infectious Bursal Disease Virus (IBDV), and Newcastle Disease Virus (NDV) were weekly assessed up to 42 days of age, by ELlSA method. In the experiment 2, bursa morphometric measures were done on hatch in 15 chicks per temperature. The other chicks were randomly distributed in five pens (30 birds each) per temperature and were vaccinated against IBDV (9th and 21st day of age) and NDV (4th and 16th day of age) and the antibodies titers were determined like in the experiment 1. Performance and body chemical composition were determined. Bursa weight and area were not affected, while follicular, medullar and cortical areas and the epithelium width were affected by temperature (p<0.05). There was not interaction between temperature and chicks age, nor temperature effect on maternal and after vaccination antibodies titers (p>0.05). The body dry matter was smaller in the 7th day of age to embryos exposed to 39°C in relation to 34°C. The feed intake was lower and feed conversion better up to 7 days of age and body weight was lower up to 21 days of age, to embryos exposed to 39°C. From 1 to 42 days of age performance was not influenced by temperature. It was concluded that heat stress in the hatcher: 1) reduces the bursa follicular development at hatch, however, it does not influence after vaccination immune humoral responses, 2) the maternal antibodies transferences and decline of its levei was not affected, 3) the heat stress impairs performance from 1 to 21 days, but not from 1 to 42 days of age

Qualidade de frangos de corte ao abate pela relação entre peso, doença de gumboro e algumas enfermidades associadas

O setor avícola tem cada vez mais importância no contexto do agronegócio brasileiro. A preocupação com a segurança alimentar e a saúde animal tem acompanhado e favorecido essa evolução. Entretanto, problemas, como a imunodepressão, continuam a provocar grandes prejuízos na avicultura industrial, por propiciar infecções secundárias, interferir na eficiência dos programas vacinais e aumentar o uso de antibióticos. Dentre as causas de imunodepressão em aves, destaca-se a Doença Infecciosa da Bolsa (DIB). O presente estudo epidemiológico transversal teve como objetivo relacionar o peso de frangos de corte no dia de abate com os seguintes fatores preditivos: alterações na bolsa de Fabrício observadas pela histopatologia e pela avaliação dos índices morfométricos (peso da bolsa/peso corporal - PB/PC e peso da bolsa / tamanho da bolsa - PB/TB); resposta sorológica pelo ELISA; e presença de outras enfermidades como a coccidiose, aerossaculite, pericardite, verminose. Foram utilizados 130 frangos de corte em idade de abate, examinados, pesados e com uma amostra de sangue colhida. A bolsa de Fabrício foi medida, pesada e armazenada, metade em formalina a 10% para histopatologia, e metade congelada para a RT/PCR. Os índices PB/TB e PB/PC foram calculados. As lesões histológicas foram classificadas de acordo com a severidade: escore 0 = sem lesões; escore1: discretas lesões, leve hiperplasia, discreta rarefação linfóide folicular; 2= sinais de inflamação, edema, atrofia de folículos, rarefação linfóide, degeneração e necrose folicular ; escore 3 = atrofia severa, cistos foliculares e epiteliais, necrose e fibrose. Aves com lesões intestinais foram investigadas para diagnóstico de coccidiose. Os resultados mostraram que lesões na bolsa favoreceram o aparecimento de enfermidades como coccidiose, aerossaculite, lesão na cabeça do fêmur, verminose, hemorragia na ponta da asa, lesão no coxim plantar de frangos de corte em idade de abate (p<0,05). Essas doenças obtiveram relação significativa com o peso dos frangos ao abate (p<0,05). Lesões na bolsa de Fabrício favoreceram a coccidiose e ambos foram fatores preditivos significativos no peso de frangos de corte (p<0,05). Os índices PB/PC e TB/PB foram fatores preditivos de lesões na bolsa (p<0,05). Apesar de vacinados, os frangos de corte em idade de abate sofreram desafio pelo VDIB, confirmado pelo RT/PCR, sem sinais clínicos, mas com quadro de imunodepressão demonstrado por alterações na bolsa de Fabrício, lesões microscópicas e favorecimento ao aparecimento de outras enfermidades que depreciaram o peso dessas aves