Aloenxertos ósseos e enxerto sintético de hidroxiapatita em falha óssea ulnar em galinhas (Gallus gallus domesticus), aspectos radiográficos e histológicos / Bone allografts and synthetic grafts hydroxyapatite on ulnar bone defect in fowl (Gallus gallus domesticus), radiographic and histological aspects

Dos atendimentos ortopédicos realizados em aves no HCV-UFRGS, 86% são fraturas, sendo aproximadamente 30% delas cominutivas com perda óssea expressiva, justificando a importância da utilização de enxertos em fraturas de aves. O objetivo deste trabalho foi avaliar dois aloenxertos e enxerto sintético de hidroxiapatita em defeito ósseo de galinhas. Utilizaram-se 30 galinhas separadas em três grupos: aloenxerto congelado em ultra-freezer (GUF), aloenxerto congelado em nitrogênio líquido (GNL) e enxerto sintético de hidroxiapatita deficiente em cálcio (GHA). Nos três grupos, os enxertos foram aplicados com placas e parafusos bloqueados de 2mm na ulna direita das aves, avaliando-se a evolução por meio de exames radiográficos até serem completados 90 dias de pós-operatório e o resultado final mediante exame histológico. A média e desvio-padrão relacionando o tempo de consolidação óssea radiográfica foi: GNL 61,67±21,79 dias (90% de consolidação), GUF 47,14±13,50 dias (70% de consolidação) e GHA 70±18,17 dias (60% de consolidação). Houve diferença significativa no tempo de consolidação óssea entre o GUF e o GHA. Histologicamente, os enxertos do GUF foram os que estavam em consolidação mais avançada. Os aloenxertos do GNL foram superiores no preenchimento de falha óssea ulnar de galinhas.(AU)

Of the orthopedic visits performed on birds at HCV-UFRGS, 86% are fractures, and approximately 30% of them are comminuted with expressive bone loss, justifying the importance of the use of grafts in bird fractures. The objective of this work was to test two allografts and a synthetic HADC graft on finishing in Gallus gallus domesticus. 30 laying hens were used, divided in three groups: frozen allograft in ultrafreezer (UFG); frozen allograft in liquid nitrogen (LNG); calcium deficient synthetic hydroxyapatite graft (HAG). The three graft groups were exposed to serial radiographs until the 90 postoperative days, as well as the histological examination at the end of the experiment were: LNG 61.67±21.79 days (90% consolidation), UFG 47.14±13.50 days (70% consolidation) and HAG 70±18.17 days (60% consolidation). There was a significant difference in bone healing time between GUF and GHA. Histologically, GUF grafts were the ones that were in the most advanced consolidation. LNG allografts were superior in filling ulnar bone failure of fowl.(AU)

Aloenxertos ósseos e enxerto sintético de hidroxiapatita em falha óssea ulnar em galinhas (Gallus gallus domesticus), aspectos radiográficos e histológicos / Bone allografts and synthetic grafts hydroxyapatite on ulnar bone defect in fowl (Gallus gallus domesticus), radiographic and histological aspects

Dos atendimentos ortopédicos realizados em aves no HCV-UFRGS, 86% são fraturas, sendo aproximadamente 30% delas cominutivas com perda óssea expressiva, justificando a importância da utilização de enxertos em fraturas de aves. O objetivo deste trabalho foi avaliar dois aloenxertos e enxerto sintético de hidroxiapatita em defeito ósseo de galinhas. Utilizaram-se 30 galinhas separadas em três grupos: aloenxerto congelado em ultra-freezer (GUF), aloenxerto congelado em nitrogênio líquido (GNL) e enxerto sintético de hidroxiapatita deficiente em cálcio (GHA). Nos três grupos, os enxertos foram aplicados com placas e parafusos bloqueados de 2mm na ulna direita das aves, avaliando-se a evolução por meio de exames radiográficos até serem completados 90 dias de pós-operatório e o resultado final mediante exame histológico. A média e desvio-padrão relacionando o tempo de consolidação óssea radiográfica foi: GNL 61,67±21,79 dias (90% de consolidação), GUF 47,14±13,50 dias (70% de consolidação) e GHA 70±18,17 dias (60% de consolidação). Houve diferença significativa no tempo de consolidação óssea entre o GUF e o GHA. Histologicamente, os enxertos do GUF foram os que estavam em consolidação mais avançada. Os aloenxertos do GNL foram superiores no preenchimento de falha óssea ulnar de galinhas.(AU)

Of the orthopedic visits performed on birds at HCV-UFRGS, 86% are fractures, and approximately 30% of them are comminuted with expressive bone loss, justifying the importance of the use of grafts in bird fractures. The objective of this work was to test two allografts and a synthetic HADC graft on finishing in Gallus gallus domesticus. 30 laying hens were used, divided in three groups: frozen allograft in ultrafreezer (UFG); frozen allograft in liquid nitrogen (LNG); calcium deficient synthetic hydroxyapatite graft (HAG). The three graft groups were exposed to serial radiographs until the 90 postoperative days, as well as the histological examination at the end of the experiment were: LNG 61.67±21.79 days (90% consolidation), UFG 47.14±13.50 days (70% consolidation) and HAG 70±18.17 days (60% consolidation). There was a significant difference in bone healing time between GUF and GHA. Histologically, GUF grafts were the ones that were in the most advanced consolidation. LNG allografts were superior in filling ulnar bone failure of fowl.(AU)

Bioengineering the ovary to preserve and reestablish female fertility

Different bioengineering strategies can be presently adopted and have been shown to have great potential in the treatment of female infertility and ovarian dysfunction deriving from chemotherapy, congenital malformations, massive adhesions as well as aging and lifestyle. One option is transplantation of fresh or cryopreserved organs/fragments into the patient. A further possibility uses tissue engineering approaches that involve a combination of cells, biomaterials and factors that stimulate local ability to regenerate/ repair the reproductive organ. Organ transplant has shown promising results in large animal models. However, the source of the organ needs to be identified and the immunogenic effects of allografts remain still to be solved before the technology may enter the clinical practice. Decellularization/ repopulation of ovary with autologous cells or follicles could represent an interesting, still very experimental alternative. Here we summarize the recent advancements in the bioengineering strategies applied to the ovary, we present the principles for these systems and discuss the advantages of these emerging opportunities to preserve or improve female fertility.

Bioengineering the ovary to preserve and reestablish female fertility

Different bioengineering strategies can be presently adopted and have been shown to have great potential in the treatment of female infertility and ovarian dysfunction deriving from chemotherapy, congenital malformations, massive adhesions as well as aging and lifestyle. One option is transplantation of fresh or cryopreserved organs/fragments into the patient. A further possibility uses tissue engineering approaches that involve a combination of cells, biomaterials and factors that stimulate local ability to regenerate/ repair the reproductive organ. Organ transplant has shown promising results in large animal models. However, the source of the organ needs to be identified and the immunogenic effects of allografts remain still to be solved before the technology may enter the clinical practice. Decellularization/ repopulation of ovary with autologous cells or follicles could represent an interesting, still very experimental alternative. Here we summarize the recent advancements in the bioengineering strategies applied to the ovary, we present the principles for these systems and discuss the advantages of these emerging opportunities to preserve or improve female fertility.(AU)

Expression patterns of mesenchymal stem cell-specific proteins in adipose tissue-derived cells: possible immunosuppressing agent in partial allograft for restoring the urinary bladder in rabbits / Padrão de expressão de proteínas específicas das células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo: possível agente imunossupressor em aloenxerto parcial para restauração de vesícula urinária de coelhos

Adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) are an attractive source of mesenchymal stem cells (MSCs) for use in tissue engineering and clinical applications. This paper focuses on the characterization of ADSCs used as immunosuppressive agent in rabbits undergoing partial allograft for urine bladder restorage. For this study highlighted the characterization of the ADSCs used as immunosuppressive agents in rabbits submitted to partial allograft for restoration of the urinary vesicle, using 25 animals, six months old, New Zealand. ADSCs at the third peal were characterized by the MSC-specific CD105, CD73 and CD90 expression and by the absence of the hematopoietic marker CD45, as revealed by flow cytometry analysis. Moreover, ADSCs were efficient in preventing allograft rejection from the urinary bladder, as judged by biochemical, clinical and ultrasonography analysis. Together, these results compose characterization of protein expression profiles and immunosuppressive functionality of ADSCs in rabbits, which had undergone partial allografts of the urinary bladder, foreseeing future applications in clinical practice.(AU)

As células mesenquimais derivadas de tecido adiposo (ADSCs) são uma fonte atraente de células-tronco mesenquimais (MSCs) para uso na engenharia de tecidos e suas aplicações clínicas. Este trabalho destacou a caracterização das ADSCs utilizadas como agentes imunossupressores em coelhos submetidos a aloenxerto parcial para restauração da vesícula urinária, sendo utilizados 25 animais, de seis meses de idade, Nova Zelândia. As ADSCs, após o terceiro repique, foram caracterizadas pela expressão específica de MSC CD105, CD73 e CD90 e pela ausência do marcador hematopoiético CD45, tal como revelado por análise de citometria de fluxo. Além disso, os ADSCs foram eficientes na prevenção da rejeição de aloenxertos da vesícula urinária, conforme avaliado por análises clínica, bioquímica e ultrassonográfica. Juntos, esses resultados compõem a caracterização dos perfis de expressão proteica e a funcionalidade imunossupressora de ADSCs em coelhos, que sofreram aloenxertos parciais da bexiga, prevendo futuras aplicações na prática clínica.(AU)

Expression patterns of mesenchymal stem cell-specific proteins in adipose tissue-derived cells: possible immunosuppressing agent in partial allograft for restoring the urinary bladder in rabbits / Padrão de expressão de proteínas específicas das células-tronco mesenquimais derivadas de tecido adiposo: possível agente imunossupressor em aloenxerto parcial para restauração de vesícula urinária de coelhos

Adipose tissue-derived stem cells (ADSCs) are an attractive source of mesenchymal stem cells (MSCs) for use in tissue engineering and clinical applications. This paper focuses on the characterization of ADSCs used as immunosuppressive agent in rabbits undergoing partial allograft for urine bladder restorage. For this study highlighted the characterization of the ADSCs used as immunosuppressive agents in rabbits submitted to partial allograft for restoration of the urinary vesicle, using 25 animals, six months old, New Zealand. ADSCs at the third peal were characterized by the MSC-specific CD105, CD73 and CD90 expression and by the absence of the hematopoietic marker CD45, as revealed by flow cytometry analysis. Moreover, ADSCs were efficient in preventing allograft rejection from the urinary bladder, as judged by biochemical, clinical and ultrasonography analysis. Together, these results compose characterization of protein expression profiles and immunosuppressive functionality of ADSCs in rabbits, which had undergone partial allografts of the urinary bladder, foreseeing future applications in clinical practice.(AU)

As células mesenquimais derivadas de tecido adiposo (ADSCs) são uma fonte atraente de células-tronco mesenquimais (MSCs) para uso na engenharia de tecidos e suas aplicações clínicas. Este trabalho destacou a caracterização das ADSCs utilizadas como agentes imunossupressores em coelhos submetidos a aloenxerto parcial para restauração da vesícula urinária, sendo utilizados 25 animais, de seis meses de idade, Nova Zelândia. As ADSCs, após o terceiro repique, foram caracterizadas pela expressão específica de MSC CD105, CD73 e CD90 e pela ausência do marcador hematopoiético CD45, tal como revelado por análise de citometria de fluxo. Além disso, os ADSCs foram eficientes na prevenção da rejeição de aloenxertos da vesícula urinária, conforme avaliado por análises clínica, bioquímica e ultrassonográfica. Juntos, esses resultados compõem a caracterização dos perfis de expressão proteica e a funcionalidade imunossupressora de ADSCs em coelhos, que sofreram aloenxertos parciais da bexiga, prevendo futuras aplicações na prática clínica.(AU)

Autologous and homologous skin grafts treated with platelet-rich plasma (PRP): experimental study in rabbits / Enxertos cutâneos autólogos e homólogos tratados com plasma rico em plaquetas (PRP): estudo experimental em coelhos

The aim of the present study was to compare tissue repair of skin defects in rabbits submitted to autologous and homologous grafts treated or not with platelet-rich plasma (PRP). We selected nine rabbits and constituted four groups, designated as G1, in which were performed autologous graft treated with PRP; G2, autologous graft only; G3, homologous graft treated with PRP; and G4, homologous graft only. Macroscopic and histomorphometric evaluation was realized. The histomorphometric evaluation was performed by Hematoxylin/Eosin and Masson´s Trichrome staining with quantification of collagen fibers, macrophages, fibroblasts and vessels. The autologous graft treated with PRP showed positive influence on the early stage of the tissue repair process at the macroscopic evaluation, characterized by rosy color and cosmetic appearance. At the histomorphometric evaluation, there was no statistical difference in the number of macrophages and fibroblasts between the treated grafts or not with the PRP, as well as the quantification of vessels and collagen fibers. It can be concluded that PRP promotes a positive influence on the initial phase or "take" of the graft.(AU)

Objetiva-se com o presente estudo comparar a reparação tecidual de defeitos cutâneos em coelhos, submetidos a enxertos autólogos e homólogos, tratados ou não com plasma rico em plaquetas (PRP). Para isso, foram selecionados nove coelhos e constituídos quatro grupos experimentais, designados como G1, no qual foi realizado enxerto autólogo tratado com PRP; G2, enxerto autólogo; G3, enxerto homólogo tratado com PRP; e G4, enxerto homólogo. Foram realizadas avaliações macroscópica e histomorfométrica, por meio das colorações de Hematoxilina/Eosina e Tricômio de Masson, incluindo quantificação de fibras colágenas, contagem de macrófagos, fibroblastos e vasos. O uso do enxerto autólogo com PRP influenciou positivamente na fase inicial do processo de reparação tecidual à avaliação macroscópica, caracterizada por coloração rósea e de aspecto cosmético. À avaliação histomorfométrica, não houve diferença estatística quanto ao número de macrófagos e fibroblastos entre os enxertos tratados ou não com o PRP, bem como quanto às contagens de vasos e a quantificação das fibras colágenas. Conclui-se que o PRP sob a promoveu influência positiva na fase inicial ou de "pega" do enxerto autólogo.(AU)

Tibial tunnel enlargement and joint instability after anterior cruciate ligament reconstruction. A prospective comparison between autograft and allograft

Purpose: To investigate tibial tunnel widening and knee instability after ACL reconstruction with hamstring autograft or irradiated soft tissue allograft. Methods: Eight-two patients were divided into two groups: autograft group and allograft group. Radiographic and clinical evaluations were performed. Results: Seventy patients were followed up with median of 36.3 months (range 36-38 months). Tibial tunnel widening was at or greater than 30% for nine patients in the autograft group and 15 patients in the allograft group (P = 0.0417). The average percentage of tibial tunnel widening was 26.7 ± 4.0 % and 29.7 ± 5.3 % in autograft and allograft groups, respectively (P = 0.0090). Knee range of motion was not affected by the reconstruction operation or different grafts. Thigh atrophy improved significantly within 24 months after ACL reconstructions in both groups. ACL reconstruction with the allograft leaded to less knee stability than that with the autograft from one year after operation (P = 0.0023). There was no significant difference between two groups with respect to Lysholm score (P = 0.1925) and Tegner score (P = 0.0918) at the final follow-up. Conclusion: The allograft group reported significantly more tibial tunnel widening and knee instability compared with the autograft group.(AU)

USO DE IMPLANTE 3D DE COPOLIAMIDA ASSOCIADA À ELASTÔMERO TERMOPLÁSTICO ALIADO AO ENXERTO AUTÓLOGO DE OMENTO MAIOR PARA REPARAÇÃO TRAQUEAL DE COELHOS (Oryctolagus cuniculus)

Objetivos: Avaliar o uso da copoliamida associada à elastômero termoplástico (PCTPE) em próteses impressas em 3D para reparação de defeitos parciais da traqueia de coelhos associada ao enxerto autólogo de omento maior para auxiliar na regeneração tecidual. Metodologia: Foram utilizados 32 coelhos machos da raça Nova Zelândia Branco, submetidos à criação de um defeito parcial de traqueia na região ventral do 4º ao 8º anel traqueal. Os animais foram distribuídos em dois grupos com 16 animais cada: GI (grupo com implante) e GII (grupo com implante e enxerto autólogo de omento maior). Cada grupo foi subdividido (n=4) de acordo com o momento das eutanásias, programadas com intervalo de sete (GI7 e GII7), quinze (GI15 e GII15), trinta (GI30 e GII30) e sessenta dias (GI60 e GII60). Resultados: Um animal do GI60 veio a óbito. Até os 60 dias de avaliação sugere-se que não ocorreu a reepitelização da traqueia devido à presença de secreção intraluminal visibilizada por meio da traqueoscopia em ambos os grupos sem diferença significativa (p>0,05), entretanto existiram indicadores positivos da interação implante-traqueia como visibilização de pontos de sutura, presença de tecido recobrindo a prótese e alterações clínicas pouco presentes e importantes. Por estes motivos o PCTPE mostrou resultados promissores para reconstrução de defeitos parciais da traqueia em coelhos. O enxerto de omento não apresentou resultados satisfatórios no presente estudo, pois o GII apresentou complicações como exacerbação da inflamação possivelmente pela necrose e consequente perpetuação de infeção no local.

Objectives: Evaluating the use of copolyamide associated with thermoplastic elastomer (PCTPE) in 3D printed prostheses used to repair partial defects in the trachea of rabbits and comparing the tissue regeneration when associated with autologous greater omental graft. Methodology: 32 male New Zealand White rabbits were submitted to the induction of a partial defect in the ventral region from the 4th to the 8th tracheal rings. The animals were divided into two groups of 16: GI (group with implant) and GII (group with implant and greater omentum graft). Each group was subdivided (n=4) according to the time of euthanasia, scheduled with an interval of seven (GI7 and GII7), fifteen (GI15 and GII15), thirty (GI30 and GII30) and sixty days (GI60 and GII60). Results: One animal from GI60 has died. Up to the 60 days of evaluation, it was suggested that the tracheal reepithelization did not occur due to the presence of intraluminal secretion visualized by tracheoscopy in both groups without significant difference (p>0,05), however there were some positive indicators of the implant-trachea interaction visualized by the sutures, presence of tissue covering the prosthesis and little present and important clinical changes. For these reasons, the PCTPE showed promising results for the reconstruction of partial defects of the trachea in rabbits. The greater omentum graft has not present satisfactory results in the present study, because GII has presented complications such as exacerbation of inflammation, which is suggested due to the necrosis and the consequent perpetuation of infection at the site.

Bacterial cellulose and bacterial cellulose/polycaprolactone composite as tissue substitutes in rabbits' cornea / Celulose bacteriana e composto de celulose bacteriana/policaprolactone para substituto tissular na córnea de coelho

In order to test the performance of bacterial cellulose/polycaprolactone composite (BC/PCL) and pure bacterial cellulose (BC) as tissue substitutes in rabbits' cornea, a superficial ulcer containing 5mm in diameter and 0.2mm deep was made in the right cornea of 36 rabbits, then a interlayer pocket was created from the basis of this ulcer. Twelve rabbits received BC/PCL membrane and 12 were treated with BC membranes, both membranes with 8mm in diameter. The remaining rabbits received no membrane constituting the control group. The animals were clinically followed up for 45 days. Three animals of each group were euthanized at three, seven, 21, and 45 days after implantation for histological examination of the cornea along with the implant. Clinical observation revealed signs of moderate inflammatory process, decreasing from day 20th in the implanted groups. Histology showed absence of epithelium on the membranes, fibroplasia close to the implants, lymph inflammatory infiltrate with giant cells, collagen disorganization, with a predominance of immature collagen fibers in both groups with implants. Although inflammatory response is acceptable, the membranes used does not satisfactorily played the role of tissue substitute for the cornea during the study period.(AU)

Com objetivo de testar o desempenho do compósito celulose bacteriana/policaprolactona (CB/PCL) e da celulose bacteriana pura (CB) como substitutos teciduais em córnea de coelhos, foi realizada uma úlcera superficial de 5 mm de diâmetro e 0,2 mm de profundidade na córnea direita de 36 coelhos, criando-se um bolso interlamelar a partir da base dessa úlcera. Doze animais receberam a membrana do compósito CB/PCL e 12 foram tratados com membranas de CB, ambas com 8 mm de diâmetro, os coelhos restantes não receberam nenhuma membrana, constituindo o grupo controle. Os animais foram acompanhados clinicamente até 45 dias. Três animais de cada grupo sofreram eutanásia aos três, sete, 21 e 45 dias após o implante das membranas para análise histológica da córnea juntamente com o implante. À observação clínica, houve sinais de processo inflamatório moderado, diminuindo a partir do 20º dia nos grupos implantados. A histologia demonstrou ausência de epitélio sobre as membranas, fibroplasia próxima aos implantes, infiltrado inflamatório linfo-histiocitário com células gigantes, desorganização do colágeno, com predominância de fibras imaturas de colágeno em ambos os grupos com implantes. Embora a resposta inflamatória seja aceitável, as membranas utilizadas não desempenharam satisfatoriamente o papel de substituto tecidual para a córnea, no período estudado.(AU)

Bacterial cellulose and bacterial cellulose/polycaprolactone composite as tissue substitutes in rabbits' cornea / Celulose bacteriana e composto de celulose bacteriana/policaprolactone para substituto tissular na córnea de coelho

In order to test the performance of bacterial cellulose/polycaprolactone composite (BC/PCL) and pure bacterial cellulose (BC) as tissue substitutes in rabbits' cornea, a superficial ulcer containing 5mm in diameter and 0.2mm deep was made in the right cornea of 36 rabbits, then a interlayer pocket was created from the basis of this ulcer. Twelve rabbits received BC/PCL membrane and 12 were treated with BC membranes, both membranes with 8mm in diameter. The remaining rabbits received no membrane constituting the control group. The animals were clinically followed up for 45 days. Three animals of each group were euthanized at three, seven, 21, and 45 days after implantation for histological examination of the cornea along with the implant. Clinical observation revealed signs of moderate inflammatory process, decreasing from day 20th in the implanted groups. Histology showed absence of epithelium on the membranes, fibroplasia close to the implants, lymph inflammatory infiltrate with giant cells, collagen disorganization, with a predominance of immature collagen fibers in both groups with implants. Although inflammatory response is acceptable, the membranes used does not satisfactorily played the role of tissue substitute for the cornea during the study period.(AU)

Com objetivo de testar o desempenho do compósito celulose bacteriana/policaprolactona (CB/PCL) e da celulose bacteriana pura (CB) como substitutos teciduais em córnea de coelhos, foi realizada uma úlcera superficial de 5 mm de diâmetro e 0,2 mm de profundidade na córnea direita de 36 coelhos, criando-se um bolso interlamelar a partir da base dessa úlcera. Doze animais receberam a membrana do compósito CB/PCL e 12 foram tratados com membranas de CB, ambas com 8 mm de diâmetro, os coelhos restantes não receberam nenhuma membrana, constituindo o grupo controle. Os animais foram acompanhados clinicamente até 45 dias. Três animais de cada grupo sofreram eutanásia aos três, sete, 21 e 45 dias após o implante das membranas para análise histológica da córnea juntamente com o implante. À observação clínica, houve sinais de processo inflamatório moderado, diminuindo a partir do 20º dia nos grupos implantados. A histologia demonstrou ausência de epitélio sobre as membranas, fibroplasia próxima aos implantes, infiltrado inflamatório linfo-histiocitário com células gigantes, desorganização do colágeno, com predominância de fibras imaturas de colágeno em ambos os grupos com implantes. Embora a resposta inflamatória seja aceitável, as membranas utilizadas não desempenharam satisfatoriamente o papel de substituto tecidual para a córnea, no período estudado.(AU)

EFEITO DE EXTRATOS DE PRÓPOLIS VERDE E GEOPRÓPOLIS DE ABELHA CANUDO (Scaptotrigona sp.) E JANDAÍRA (Melipona subnitida) NA RESPOSTA INFLAMATÓRIA E VIABILIDADE DE TRANSPLANTES CUTÂNEOS ALOGÊNICOS E AUTÓLOGOS

A própolis e a geoprópolis são produtos resinosos elaborados a partir de exsudatos, óleos e resinas colhidas de plantas pelas abelhas. Esses produtos são conhecidos por apresentarem efeitos biológicos e são utilizados por populares devido às propriedades medicinais, inclusive no tratamento de feridas. Objetivou-se avaliar o efeito do extrato hidroalcoólico de própolis verde (EHPv), geoprópolis de abelha canudo, Scaptotrigona sp., (EHG-Can) e geoprópolis de abelha jandaíra, Melipona subnitida, (EHG-Jan) sobre a inflamação aguda, inflamação crônica por corpo estranho, cicatrização e transplante cutâneo alogênico e autólogo em ratos wistar. Para tanto, foram utilizados 36 ratos adultos saudáveis, de ambos os sexos, distribuídos em cinco grupos: animais tratados com formulação contendo 20% de EHPv; tratados com 20% de EHG-Can; tratados com 20% de EHG-Jan; grupo controle positivo (GC+) com fármaco registrado, e; apenas veículo como controle negativo (GC-). Anteriormente as análises in vivo, foi feita uma análise físico-química das para caracterização preliminar dos extratos. A inflamação aguda foi induzida por carragenina a 1% (n = 36), a inflamação crônica foi realizada por corpo estranho (lâmina de vidro) (n = 16) e a cicatrização foi acompanhada a partir de ferida circular de 8 mm de diâmetro (n = 16). Os transplantes (n = 20) foram feitos com a incisão e realocação de dois enxertos cutâneos quadrados (1cm2), um para autoenxerto e outro para aloenxerto, respectivamente. Sobre o teor de flavonoides, amostra do grupo EHG-Jan apresentou a maior quantidade (p<0,05), EHPv quantidade intermediária e a do grupo EHG-Can apresentou a menor. Verificou-se um efeito positivo antiedematoso pronunciado do EHPv, moderado efeito nos grupos EHG-Can e EHG-Jan. Na inflamação crônica, o grupo EHG-Jan destacou-se por acelerar a formação do granuloma. Houve aceleração da cicatrização com reepitelização completa por efeito dos extratos EHPv e EHG-Can em 16 dias. Os extratos aumentaram a proteção das áreas lesionadas e induziram retardo na rejeição (necrose) dos enxertos autólogos. De modo similar, porém menos acentuado ocorreu com os transplantes alogênicos. Provavelmente as diversas classes químicas, com substâncias biologicamente ativas específicas, presentes na geoprópolis foram responsáveis pelo satisfatório desempenho nas análises. Além disso, é provável que o efeito protetor contra infecções oportunistas tenha colaborado com os bons resultados. Os extratos hidroalcoólicos de própolis e geoprópolis apresentaram efeitos positivos sobre os processos inflamatórios e reparo de ferida, assim como promoveram proteção do enxerto e retardo na rejeição.

Propolis and geopropolis are resinous products elaborated starting from exudates, oils and picked resins of plants by the bees. Those products are known for they present biological effects and they are used for popular due to the medicinal properties, besides in the treatment of wounds. The aim of this work was to evaluate the effect of the hydroalcoholic extract of green propolis (HEP), canudo bee geopropolis (Scaptotrigona sp.) (HEG-Can) And the geopropolis of bee jandaíra (Melipona subnitida) (HEG-Jan) on acute inflammation, chronic inflammation, cicatrization of wounds and autogenic and allogenic skin flaps. 36 healthy adult wistar rats, of both sexes, were distributed in five groups: treated animals with formulation containing 20% of; agreements with 20% of HEG-Can; agreements with 20% of HEG-Jan; group positive control (CG+) with pharmaceutical products registered as a positive control group (CG +); only vehicle as a negative control (CG-). Previously the analyses in vivo, was made a physical-chemical analysis for preliminary characterization of the extracts. The acute inflammation was induced by 1% carrageenan, chronic inflammation caused by a foreign body (circular sight glass) and wound healing was accompanied starting from wound circular of 8mm of diameter. Transplants were made with the incision and reallocation of two grafts cutaneous squares (1cm2), first to autograft and second to allograft, respectively. On the flavonoides content, the HEG-Jan group has a large amount (p<0.05), an intermediate amount of HEP and a lower amount of HEG-Can. HEP presented a pronounced effect on the acute inflammation (anti-edematous effect), moderate effect of the HEP-Can and HEG-Jan groups was registered. In chronic inflammation, the group HEG-Jan accelerated the process of formation of the granuloma when compared to the other extracts (HEP and HEP- Can). In healing wounds, there was acceleration of the cicatrization due to effect of the extracts of HEP and HEP-Can in 16 days. The extracts show the protection of the skin graft area and discreet retard in the graft rejection (necrosis) of the autografts. In a similar way, however fewer accentuated it happened with the allografts. The several chemical classes of the geopropolis were probably responsible for the satisfactory acting in the analyses. Possibly the effects are biologically related to the presence of substances specific active. Besides, it is probable that the protecting effect against infections opportunists has collaborated with the sastisfatory results. The hydroalcoholic extracts of propolis from geopropolis have positive effects on the inflammatory processes and I repair of wound, as well as they promoted protection of the graft and retard in the graft rejection.

Functional restoration of the equine long digital extensor tendon submitted to homologous jugular graft after partial tenectomy / Restabelecimento funcional do tendão extensor digital longo submetido a implante de enxerto jugular homólogo pós-ressecção parcial em equinos

The functional restoration of the equine long digital extensor tendon after partial tenectomy was studied comparing one group submitted to homologous jugular graft (GE) and other group without graft used as control (GC). The animals were submitted to partial resection of the long digital extensor tendon with skin excision, followed by jugular graft suture in the GE. The wounds were treated by second intention and the limbs were supported with a bandage and cast. The horses were stall confined and monitored daily for lameness, wound tendon healing (planimetry and ultrasonography evaluation), limb functional restoration and cast sores. The repair tissue showed initial vascularization and developed granulation tissue. Three horses from GC had exuberant granulation tissue. The tendon functional restoration time from GE was significant less (average time of 28.3 days) than GC (45.9 days). The planimetry was significant different at 10 and 20 days, but it was similar at the final of experiment. Ultrasonographic exams showed the newly formed tendon tissue surrounding the implanted grafts with obvious circulatory activity, however with less organization comparing to the previous tendon before the lesion. Incorporation of a homologous jugular graft improved the quality of the repair tissue in equine extensor tendons avoiding the exuberant granulation tissue development and reduced tendon functional restoration time.

Em equinos foi estudado o restabelecimento funcional do membro submetido a tenectomia parcial do extensor digital longo. Comparou-se comparando-se um grupo de animais com aplicação de enxerto jugular homólogo fixado em glutaraldeído (GE) com um grupo sem a utilização de enxertos (GC). Os animais foram submetidos à tenectomia segmentar do extensor digital longo, com retirada de pele e de segmento do tendão, seguindo a sutura do enxerto nos animais do GE. As feridas foram tratadas por segunda intenção com curativo, bandagem e tala. Entre os grupos comparou-se as feridas macroscopicamente, o tempo de restabelecimento funcional do membro (dias), planimetria das feridas e aspectos ultrassonográficos do tendão e da região. As feridas mostraram semelhança entre os grupos com sangramento e granulação. Em três animais do GC houve granulação exuberante. Os enxertos aplicados mostraram-se escurecidos e justapostos à granulação sem exuberância nos animais do GE. O tempo de restabelecimento funcional do tendão no GE foi significativamente menor (tempo médio de 28,3 dias) que o GC (45,9 dias) As planimetrias diferiram significativamente (P < 0,05) nos momentos 10 e 20 (dias), sendo semelhantes no momento final. Exames ultrassonográficos no pós-operatório houve a observação do "tecido" neoformado envolvendo o enxerto implantado, sem sobrepô-lo, não ultrapassando as bordas da ferida e não organizado como o tendão pré-existente, e com evidente atividade circulatória visível pela movimentação do sangue na granulação neoformada. O enxerto aplicado na falha de tendão reduziu o tempo de restabelecimento funcional do membro e sugere contribuir na inibição da formação de granulação exuberante.

Functional restoration of the equine long digital extensor tendon submitted to homologous jugular graft after partial tenectomy / Restabelecimento funcional do tendão extensor digital longo submetido a implante de enxerto jugular homólogo pós-ressecção parcial em equinos

The functional restoration of the equine long digital extensor tendon after partial tenectomy was studied comparing one group submitted to homologous jugular graft (GE) and other group without graft used as control (GC). The animals were submitted to partial resection of the long digital extensor tendon with skin excision, followed by jugular graft suture in the GE. The wounds were treated by second intention and the limbs were supported with a bandage and cast. The horses were stall confined and monitored daily for lameness, wound tendon healing (planimetry and ultrasonography evaluation), limb functional restoration and cast sores. The repair tissue showed initial vascularization and developed granulation tissue. Three horses from GC had exuberant granulation tissue. The tendon functional restoration time from GE was significant less (average time of 28.3 days) than GC (45.9 days). The planimetry was significant different at 10 and 20 days, but it was similar at the final of experiment. Ultrasonographic exams showed the newly formed tendon tissue surrounding the implanted grafts with obvious circulatory activity, however with less organization comparing to the previous tendon before the lesion. Incorporation of a homologous jugular graft improved the quality of the repair tissue in equine extensor tendons avoiding the exuberant granulation tissue development and reduced tendon functional restoration time.(AU)

Em equinos foi estudado o restabelecimento funcional do membro submetido a tenectomia parcial do extensor digital longo. Comparou-se comparando-se um grupo de animais com aplicação de enxerto jugular homólogo fixado em glutaraldeído (GE) com um grupo sem a utilização de enxertos (GC). Os animais foram submetidos à tenectomia segmentar do extensor digital longo, com retirada de pele e de segmento do tendão, seguindo a sutura do enxerto nos animais do GE. As feridas foram tratadas por segunda intenção com curativo, bandagem e tala. Entre os grupos comparou-se as feridas macroscopicamente, o tempo de restabelecimento funcional do membro (dias), planimetria das feridas e aspectos ultrassonográficos do tendão e da região. As feridas mostraram semelhança entre os grupos com sangramento e granulação. Em três animais do GC houve granulação exuberante. Os enxertos aplicados mostraram-se escurecidos e justapostos à granulação sem exuberância nos animais do GE. O tempo de restabelecimento funcional do tendão no GE foi significativamente menor (tempo médio de 28,3 dias) que o GC (45,9 dias) As planimetrias diferiram significativamente (P < 0,05) nos momentos 10 e 20 (dias), sendo semelhantes no momento final. Exames ultrassonográficos no pós-operatório houve a observação do "tecido" neoformado envolvendo o enxerto implantado, sem sobrepô-lo, não ultrapassando as bordas da ferida e não organizado como o tendão pré-existente, e com evidente atividade circulatória visível pela movimentação do sangue na granulação neoformada. O enxerto aplicado na falha de tendão reduziu o tempo de restabelecimento funcional do membro e sugere contribuir na inibição da formação de granulação exuberante.(AU)

Propriedades mecânicas de aloenxertos meniscais de coelhos após preservação em glicerina e reidratação em NaCl 0,9%

We evaluated the mechanical properties, strength, strain and stress to the elastic limit, the rupture stress point and stiffness index of fresh menisci and menisci transplanted for 70 days in the knees of rabbits after preservation in glycerin. The first group (treated) was formed by six medial menisci of the left knee, collected from these animals for commercial breeding. These menisci were stored in 98% glycerin for a period of 30-60 days, and then rehydrated in a solution in 0.5% saline enrofloxacin for 12 hours, and implanted in the knees of another six rabbits underwent meniscectomy . After 70 days of surgery was performed the euthanasia of animals and removal of allografts for mechanical evaluation. The second group (control) consisted of six medial menisci, removed from the contralateral knees (right) of the same animals. For the sample studied, had no statistically significant difference between control and treated groups for any of the variables analyzed, showing that the rehydration of meniscal allografts after preservation in glycerin keeps the mechanical characteristics of these, after 70 days of implantation, similar to the meniscus fresh.

Foram avaliadas as propriedades mecânicas, força, deformação e tensão ao limite elástico, tensão ao ponto de ruptura e índice de rigidez, de meniscos frescos e meniscos transplantados por 70 dias em joelhos de coelhos, após preservação em glicerina. O primeiro grupo (tratado) foi formado por seis meniscos mediais do joelho esquerdo, coletados de animais oriundos de criação comercial. Esses meniscos foram armazenados em glicerina 98% por um período de 45-60 dias; em seguida, foram reidratados em solução salina a 0,5% de enrofloxacina, por 12 horas, e implantados em joelhos de outros seis coelhos, submetidos à meniscectomia. Após 70 dias da cirurgia, foi realizada a eutanásia dos animais e retirada dos aloenxertos para avaliação mecânica. O segundo grupo (controle) foi composto por seis meniscos mediais, retirados dos joelhos contralaterais (direito) dos mesmos animais. Para a amostra estudada, não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos controle e tratado para nenhuma das variáveis analisadas, demonstrando que a reidratação de aloenxertos meniscais, após preservação em glicerina, mantém as características mecânicas desses, após 70 dias de implantação, semelhantes às de meniscos frescos.

Propriedades mecânicas de aloenxertos meniscais de coelhos após preservação em glicerina e reidratação em NaCl 0,9%

We evaluated the mechanical properties, strength, strain and stress to the elastic limit, the rupture stress point and stiffness index of fresh menisci and menisci transplanted for 70 days in the knees of rabbits after preservation in glycerin. The first group (treated) was formed by six medial menisci of the left knee, collected from these animals for commercial breeding. These menisci were stored in 98% glycerin for a period of 30-60 days, and then rehydrated in a solution in 0.5% saline enrofloxacin for 12 hours, and implanted in the knees of another six rabbits underwent meniscectomy . After 70 days of surgery was performed the euthanasia of animals and removal of allografts for mechanical evaluation. The second group (control) consisted of six medial menisci, removed from the contralateral knees (right) of the same animals. For the sample studied, had no statistically significant difference between control and treated groups for any of the variables analyzed, showing that the rehydration of meniscal allografts after preservation in glycerin keeps the mechanical characteristics of these, after 70 days of implantation, similar to the meniscus fresh.

Foram avaliadas as propriedades mecânicas, força, deformação e tensão ao limite elástico, tensão ao ponto de ruptura e índice de rigidez, de meniscos frescos e meniscos transplantados por 70 dias em joelhos de coelhos, após preservação em glicerina. O primeiro grupo (tratado) foi formado por seis meniscos mediais do joelho esquerdo, coletados de animais oriundos de criação comercial. Esses meniscos foram armazenados em glicerina 98% por um período de 45-60 dias; em seguida, foram reidratados em solução salina a 0,5% de enrofloxacina, por 12 horas, e implantados em joelhos de outros seis coelhos, submetidos à meniscectomia. Após 70 dias da cirurgia, foi realizada a eutanásia dos animais e retirada dos aloenxertos para avaliação mecânica. O segundo grupo (controle) foi composto por seis meniscos mediais, retirados dos joelhos contralaterais (direito) dos mesmos animais. Para a amostra estudada, não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos controle e tratado para nenhuma das variáveis analisadas, demonstrando que a reidratação de aloenxertos meniscais, após preservação em glicerina, mantém as características mecânicas desses, após 70 dias de implantação, semelhantes às de meniscos frescos.

Propriedades mecânicas de aloenxertos meniscais de coelhos após preservação em glicerina e reidratação em NaCl 0,9%

We evaluated the mechanical properties, strength, strain and stress to the elastic limit, the rupture stress point and stiffness index of fresh menisci and menisci transplanted for 70 days in the knees of rabbits after preservation in glycerin. The first group (treated) was formed by six medial menisci of the left knee, collected from these animals for commercial breeding. These menisci were stored in 98% glycerin for a period of 30-60 days, and then rehydrated in a solution in 0.5% saline enrofloxacin for 12 hours, and implanted in the knees of another six rabbits underwent meniscectomy . After 70 days of surgery was performed the euthanasia of animals and removal of allografts for mechanical evaluation. The second group (control) consisted of six medial menisci, removed from the contralateral knees (right) of the same animals. For the sample studied, had no statistically significant difference between control and treated groups for any of the variables analyzed, showing that the rehydration of meniscal allografts after preservation in glycerin keeps the mechanical characteristics of these, after 70 days of implantation, similar to the meniscus fresh.

Foram avaliadas as propriedades mecânicas, força, deformação e tensão ao limite elástico, tensão ao ponto de ruptura e índice de rigidez, de meniscos frescos e meniscos transplantados por 70 dias em joelhos de coelhos, após preservação em glicerina. O primeiro grupo (tratado) foi formado por seis meniscos mediais do joelho esquerdo, coletados de animais oriundos de criação comercial. Esses meniscos foram armazenados em glicerina 98% por um período de 45-60 dias; em seguida, foram reidratados em solução salina a 0,5% de enrofloxacina, por 12 horas, e implantados em joelhos de outros seis coelhos, submetidos à meniscectomia. Após 70 dias da cirurgia, foi realizada a eutanásia dos animais e retirada dos aloenxertos para avaliação mecânica. O segundo grupo (controle) foi composto por seis meniscos mediais, retirados dos joelhos contralaterais (direito) dos mesmos animais. Para a amostra estudada, não houve diferença estatisticamente significante entre os grupos controle e tratado para nenhuma das variáveis analisadas, demonstrando que a reidratação de aloenxertos meniscais, após preservação em glicerina, mantém as características mecânicas desses, após 70 dias de implantação, semelhantes às de meniscos frescos.

Comparative study and histomorphometric analysis of bone allografts lyophilized and sterilized by autoclaving, gamma irradiation and ethylene oxide in rats

PURPOSE: To compare three sterilization methods (autoclave, gamma irradiation and ethylene oxide) over non demineralized lyophilized bone allografts. METHODS: Bone allografts were implanted on paravertebral muscles of 21 rats. After 30 days animals were sacrificed and grafts underwent comparative analysis regarding histomorphometric and macroscopic parameters. RESULTS: Allografts that underwent the three sterilization methods presents similar weight gain, cortical thickness similar to control group, and less fibrosis than the control group. Grafts that underwent sterilization in autoclave presented less presence of multinucleated giant cells, although not statistically significant. There was also no statistically significant difference regarding mineralization on the three groups. CONCLUSION: The three sterilization methods cause similar effects on bone allografts regarding macroscopic and histomorphometric parameters.(AU)

Efeitos de imunossupressores sobre o sistema imunológico em transplantes de células germinativas em trutas arco-íris

Resumo YOSHINAGA, T.T. Efeitos de imunossupressores sobre o sistema imunológico em transplantes de células germinativas em trutas arco-íris Os transplantes de células germinativas e enxertos de testículo podem ser aplicados na reprodução de espécies comerciais e na conservação de espécies ameaçadas de extinção. No entanto, a maior limitação dos transplantes está na sua limitada eficiência, devido à baixa porcentagem de hospedeiros capazes de gerar gametas derivados do doador e da rejeição de enxertos de testículo alogênicos após poucas semanas de sua implantação. O sistema imunológico dos hospedeiros podem estar envolvidos na baixa de eficiência dos transplantes e na rejeição dos enxertos. Desta forma, este trabalho buscou verificar se a administração de drogas imunossupressoras como o tacrolimus e ciclosporina em emulsão poderiam ser utilizados para prolongar a viabilidade de enxertos de testículo em trutas arco-íris. Na primeira parte, experimentos in vitro com leucócitos do sangue periférico demonstraram que ambos o tacrolimus e a ciclosporina impedem a proliferação celular mesmo sob estímulo proliferativo da concanavalina. Nos ensaios in vivo, ambas as doses de tacrolimus (0,5 e 1,5 mg/kg) e a mais baixa de ciclosporina (20 mg/kg) inibiram significativamente a expressão de il2 no rim cefálico três dias após a injeção. Já a dose de 40 mg/kg de ciclosporina inibiu a expressão de il2 por até sete dias após a injeção. Na segunda parte, enxertos alogênicos de testículo foram realizados em animais tratados semanalmente com emulsões de tacrolimus. As análises histológicas (coloração H.E.) e as de RT-PCR (vasa e txdnc6) demonstraram a presença de espermatogônias na primeira semana e indicaram a presença de espermátides/espermatócitos na quinta semana, respectivamente, em alguns animais do grupo tratado com a dose de 0,5 mg/kg de tracrolimus. No grupo tratado com a dose mais alta de tacrolimus (1,5 mg/kg) e no grupo controle (sem imunossupressor), células germinativas ou marcadores destas não foram detectados. Estes resultados, portanto, fazem do tacrolimus um imunossupressor promissor para utilização em enxertos alogênicos e também em transplantes de células germinativas de truta arco-íris. A administração concomitante de um outro imunossupressor conjugado ao tacrolimus (na baixa dosagem) para inibir duas ou mais vias de ativação do sistema imunológico, conforme utilizado em transplantes de órgãos em humanos, pode ser uma alternativa para otimizar os efeitos imunossupressivos nos animais receptores. Palavras-Chave Reprodutores substitutos; imunossupressão;transplante de células germinativas;

Abstract YOSHINAGA, T.T Effects of immunosuppressants on immune system in germ cell transplantation in rainbow trout Germ cell transplantation and testis graft can be applied for the reproduction of commercial or endangered species. However, mechanisms of rejection from the host immune system might limit the production of surrogate gametes and progeny after transplantation and induce rejection of testis allografts within few weeks. In this work, we aimed to administer immunosuppressants-containing emulsions in order to verify whether they are capable to prevent immune rejection and promote testis allograft survival in rainbow trout. In the first part of this study, it was demonstrated in vitro that tacrolimus and cyclosporine were able to inhibit leucocyte proliferation even under concanavalin-induced mitotic stimulation. In in vivo experiments, both dosage of tacrolimus (0,5 and 1,5 mg/kg) and a lower of cyclosporine (20 mg/kg) inhibited significantly the expression of il2 in head kidney at three days post-injection. A higher dosage of cyclosporine (40 mg/kg) was able to inhibit il2 expression for up to seven days post-injection. In the second part, testis allografts were conducted in fish treated weekly with tacrolimus-containing emulsions. Histological (H.E. staining) and RT-PCR (vasa and txdnc6) analysis demonstrated the presence of spermatogonias in the first week and indicated the presence of spermatids/spermatocytes in the fifth week, respectively, in some animals treated with 0,5 mg/kg of tacrolimus. In the group treated with the highest tacrolimus dose (1,5 mg/kg) and in the control group (without immunosupressant), no germ cells or their respective markers were detected. These results suggest that tacrolimus comprise a promising immunosuppressant, with applications to testis allografts or germ cell transplantation in rainbow trout. Co-administration combining tacrolimus (at lower dose) with other immunosuppressive drugs for inhibiting more than two activation pathways of the immune system, as done in human organ transplantation, can be an alternative to optimize the immunossupressive effects in host organisms. Keywords Surrogate broodstock; immunosuppression; germ cell transplantation;

An outcome analysis and long-term viability of cryopreserved cultured epidermal allografts: assessment of the conservation of transplantable human skin allografts

PURPOSE: To assess the viability of cultured epithelium and preserved by freezing for periods varying from one month to one year. METHODS: Samples of cultured epithelium were incubated in cryoprotectant medium (Group A), packed in aluminum envelopes and packed in polystyrene boxes. The boxes were subjected to a temperature of-70ºC. After freezing for a period of time ranging from one to 12 months, cultured epithelial samples were assessed for their viability by vital staining (Trypan blue) and metabolic analysis based on glucose consumption and lactate production. Samples of not frozen cultured epithelium (Group B) were also tested for viability and the results obtained were used as comparison parameter for the variation of viability. RESULTS: Statistical analysis between the group A and B indicate that the mean age of the donors (p=0.51) and the culture time (p=1.18) showed no statistical difference. In 30 days we obtained 37% of the original viability of cultured epithelium, 25% at six months and one year, less than 15%. This trend was confirmed statistically with a reduction of approximately 1.8% of the original viability epithelium cultured every 30 days of storage. In the analysis by lactate production, similar results were observed. In the analysis by the glucose consumption results were not significant. The viability indices show statistically significant difference between the group A and B (p<0.0001). CONCLUSIONS: Although cryopreserved cultured epithelium showed significant reduction of viability, all samples remained viable. It was also found that the viability of cryopreserved cultured epithelial decreased as a function of storage time.(AU)