Bisacurone gel ameliorated burn wounds in experimental rats via its anti-inflammatory, antioxidant, and angiogenic properties

Purpose: To investigate putative mechanism of wound healing for chitosan-based bisacurone gel against secondary burn wounds in rats. Methods: A second-degree burn wound with an open flame using mixed fuel (2 mL, 20 seconds) was induced in Sprague Dawley rats (male, 180-220 g, n = 15, each) followed by topical treatments with either vehicle control (white petroleum gel, 1%), silver sulfadiazine (1%) or bisacurone gel (2.5, 5, or 10%) for 20 days. Wound contraction rate and paw withdrawal threshold were monitored on various days. Oxidative stress (superoxide dismutase, glutathione, malondialdehyde, and nitric oxide), pro-inflammatory cytokines (tumour necrosis factor-alpha, interleukins by enzyme-linked immunosorbent assay), growth factors (transforming growth factor-ß, vascular endothelial growth factor C using real time polymerase chain reaction and Western blot assay) levels, and histology of wound skin were assessed at the end. Results: Bisacurone gel showed 98.72% drug release with a 420.90­442.70 cps viscosity. Bisacurone gel (5 and 10%) significantly (p < 0.05) improved wound contraction rate and paw withdrawal threshold. Bisacurone gel attenuated oxidative stress, pro-inflammatory cytokines, and water content. It also enhanced angiogenesis (hydroxyproline and growth factor) and granulation in wound tissue than vehicle control. Conclusions: These findings suggested that bisacurone gel can be a potential candidate to treat burn wounds via its anti-inflammatory, antioxidant, and angiogenic properties.

Carcinoma de células escamosas em gato - tratamento com quimioterapia metronômica / Squamous cell carcinoma in a cat - treatment with metronomic chemotherapy

Background: Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant neoplasm associated with prolonged exposure to ultraviolet light and lack of skin pigment in white-coated animals. The disease diagnosis is based on the animal's history, clinical signs and histopathology of the samples collected. The therapeutic alternatives are diverse. Among them, one of the most used is the metronomic chemotherapy which is based on the use of cytostatics drugs, applied in low and frequent doses for a longer period of time. One of the mechanisms of action of this type of therapy is the decrease in angiogenesis. Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are simultaneously used to maximize the angiogenic effect. The objective of this study is to report the results of a treatment accomplised with metronomic chemotherapy (cyclophosphamide with meloxicam) in a domestic feline which presented a squamous cell tumor. Case: A 7-year-old female cat, mixed breed, not neutered, weighing 3.5 kg, was assisted at the Veterinary Specialties Teaching Clinic (CEEV) of the Technical University of Machala (UTMACH), presenting bilateral ulcerative lesion in the nasal plane for 5 months. Chronic exposure to sunlight is referred to in the patient's anamnesis. Aspiration cytology performed in the patient revealed an inflammatory process with a predominance of neutrophils and macrophages, and showed absence of neoplastic cells. A treatment based on antibiotics and corticosteroids was adopted. As there were no favorable results, an excisional biopsy procedure was chosen to collect the affected tissues. The result of the histopathological analysis was a level 2 squamous cell carcinoma (SCC). The initial treatment consisted of surgical removal of the tumor and later the use of metronomic chemotherapy based on Cyclophosphamide, Meloxicam, DHA (docosahexaenoic acid) and Sucralfate for 5 months was adopted. At the beginning of the second phase of treatment, the patient developed a macula that progressively diminished. Currently, the patient does not have any recurrence of the diagnosed neoplasm. Discussion: The diagnosis of squamous cell carcinoma was based on clinical and histopathological findings. The macroscopic lesions were crusted ulcers that do not heal in the nasal plane and auricular pavilion, as reported in the literature. SCC is characterized by the infiltration of squamous cells in the dermal layer of the skin, forming epithelial islands with keratin pearls. The histopathological findings of this case present the same characteristics. The climatic conditions of Ecuador, high temperatures with greater incidence of sunlight, hypopigmented areas of the animal's body and chronic exposure to solar radiation are risk factors present in this case that foster the development of this malignant neoplasm. There are multiple treatments to be introduced in this sort of pathology. In this case, surgical removal of the tumor was adopted, followed by metronomic chemotherapy based on cyclophosphamide at 10 mg/m2 and meloxicam at a 0.05 mg/kg per day for a period of time of five months, obtaining favorable results and absence of recurrence. Despite metronomic chemotherapy being easy to administer, with fewer side effects, which includes a better acceptance of care takers who are reluctant to administer conventional chemotherapy, further studies are still necessary in what concerns certain variables such as age, carcinoma level, appropriate dosages and drugs according to each neoplasm.

Hemoperitoneum in a cow with lumbar muscle hemangiosarcoma

Background: Hemangiosarcoma is a malignant neoplasm of endothelial cells with an infiltrative growth pattern. Hemangiosarcomas are frequently reported in canines and rare in felines, sheep, goats, swine, horses and cattle. Few cases of hemangiosarcoma were reported in cattle. In the present report, we describe the clinicopathological findings of a bovine muscle hemangiosarcoma. Case: A 6-year-old, Girolando cow from the Dairy Cattle Sector of the Federal Rural University of Rio de Janeiro (UFRRJ), Seropédica, presented sternal decubitus. Clinical signs were markedly pale mucous membranes, moderate dehydration, respiratory distress, and increased heart rate. The hematological examination revealed intense regenerative anemia. Due to the worsening of the clinical condition, the cow was submitted to euthanasia. The necropsy and collection of various fragments of organs were performed, which were sent to the "Setor de Anatomia Patológica" (SAP-UFRRJ). Tissues were fixed in 10 % buffered formalin, routinely processed for histology and stained with Hematoxylin and Eosin (HE). The external mucous membranes were markedly pale. Multifocal areas of 1.5 x 1.0 cm, irregular and dark red were observed dissecting the quadratus lumborum muscle (hemangiosarcoma) fibers. These neoplasms were associated with an extensive cruoric clot adhered to the muscle fibers. The extensive, red, friable mass measured approximately 76 x 55 x 20 cm on the serous surfaces of the organs of the peritoneal cavity (hemoperitoneum). The spleen was moderately reduced. The bone marrow was markedly pale. Histologically, it was observed that there was an extensive proliferation of endothelial cells in the quadratus lumbar muscle mass dissecting the epimysium and perimysium. Endothelial cells had moderate pleomorphism, organized in vascular channels and forming multifocally solid areas with a significant amount of eosinophilic fibrillar material (fibrin). Sections of muscle neoplasm were subjected to immunohistochemistry with anti-von Willebrand factor primary antibody, which showed a multifocal moderate cytoplasmic immunolabeling of neoplastic endothelial cells. Discussion: There are few reports of striated muscle hemangiosarcoma in cattle. Muscular hemangiosarcomas were reported in a 4-month-old calf in the left cervical trapezius muscle and a 6-year-old Holstein cow with left pelvic limb mass lateral and distal to the knee. Some reports presented hemangiosarcoma in the iliopsoas muscle, left cervical trapezius muscle, pelvic limb muscles and right cervical muscle of the bovine. In the presented report, hemoperitoneum occurred as a result of hemorrhages from muscle hemangiosarcoma. Other studies have demonstrated cavity hemorrhages in joint, pelvic, pleural and cranial cavities associated with hemangiosarcoma. Hemangiosarcoma with regenerative anemia must be distinguished from other diseases that cause anemia. The main differential diagnoses of bovine with anemia are vena cava syndrome, coumarin derivatives poisoning, acute poisoning by Pteridium spp., tick fever, anaplasmosis, babesiosis and trypanosomiasis. Hemangiosarcoma should be differentiated from other lesions as hemangioma, vascular tumor of lymphatic endothelium and perivascular wall tumors. Cases with poorly differentiated morphology should be submitted for immunohistochemistry. In the present hemangiosarcoma case, we have used the von Willebrand factor for immunohistochemistry diagnosis. Expression of angiogenic growth factors such as CD31, vascular endothelial growth factor (VEGF), basic fibroblast growth factor (bFGF) and angiopoietin-1 (Ang-1) have also been used in the diagnosis of vascular proliferation lesions. Hemangiosarcoma in cattle should be included mainly in the differential diagnosis of diseases that cause acute anemia in cattle.

Evaluation of platelet-rich plasma gel as an angiogenesis-inducing agent in canine advancement skin flaps / Avaliação do gel de plasma rico em plaquetas como agente indutor da angiogênese em flapes cutâneos de avanço em cães

This work aimed to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) on advancement skin flaps in dogs regarding improvement of vascularization, with focus on increasing its viable area, since there are reports that it is a potential angiogenesis stimulator. The experimental group was composed of eight adult bitches, in which two advancement skin flaps were made in the ventral abdominal region. No product was applied in the control flap (CF), while PRP was used in the contralateral flap, called treated flap (TF). The areas were clinically evaluated every two days until the 7th postoperative day regarding skin color and presence of necrosis. At 10 days, both flaps were removed and submitted to histological examination and blood vessel morphometry. The vessels counted in each group were statistically analyzed by the F-test at 1% probability. Results showed no significant difference in macroscopic changes in the wound, or CF and TF vascularization, thus suggesting that PRP gel did not improve advancement skin flap angiogenesis in bitches under the experimental conditions in which this research was developed.(AU)

Objetivou-se com o presente artigo avaliar a ação angiogênica do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes cutâneos de avanço em animais da espécie canina, visando aumentar a viabilidade da pele após o procedimento, uma vez que existem relatos de que o produto é um potente estimulador da angiogênese. O grupo experimental foi composto por oito cadelas adultas, onde foram confeccionados dois flapes de avanço (de padrão subdérmico) na região abdominal ventral. Em um dos flapes, considerado controle (FC) não foi aplicado nenhum produto, enquanto que no flape contralateral, denominado tratado (FT), foi usado o gel de PRP. As áreas foram macroscopicamente avaliadas a cada dois dias até o 7º dia de pós-operatório em relação à coloração da pele e presença de área de necrose, e com 10 dias ambos os flapes foram coletados por biópsia e submetidos ao exame histológico e morfometria dos vasos sanguíneos. Os vasos contados em cada grupo foram estatisticamente analisados pelo teste de F ao nível de 1% de probabilidades. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa nas alterações macroscópicas das feridas e na morfometria vascular dos FC e FT, sugerindo dessa maneira que dentro das condições experimentais nas quais a pesquisa foi executada, que o gel de PRP não incrementou a angiogênese de flapes de avanço em cadelas.(AU)

Evaluation of platelet-rich plasma gel as an angiogenesis-inducing agent in canine advancement skin flaps / Avaliação do gel de plasma rico em plaquetas como agente indutor da angiogênese em flapes cutâneos de avanço em cães

This work aimed to evaluate the effect of platelet-rich plasma (PRP) on advancement skin flaps in dogs regarding improvement of vascularization, with focus on increasing its viable area, since there are reports that it is a potential angiogenesis stimulator. The experimental group was composed of eight adult bitches, in which two advancement skin flaps were made in the ventral abdominal region. No product was applied in the control flap (CF), while PRP was used in the contralateral flap, called treated flap (TF). The areas were clinically evaluated every two days until the 7th postoperative day regarding skin color and presence of necrosis. At 10 days, both flaps were removed and submitted to histological examination and blood vessel morphometry. The vessels counted in each group were statistically analyzed by the F-test at 1% probability. Results showed no significant difference in macroscopic changes in the wound, or CF and TF vascularization, thus suggesting that PRP gel did not improve advancement skin flap angiogenesis in bitches under the experimental conditions in which this research was developed.(AU)

Objetivou-se com o presente artigo avaliar a ação angiogênica do gel de plasma rico em plaquetas (PRP) em flapes cutâneos de avanço em animais da espécie canina, visando aumentar a viabilidade da pele após o procedimento, uma vez que existem relatos de que o produto é um potente estimulador da angiogênese. O grupo experimental foi composto por oito cadelas adultas, onde foram confeccionados dois flapes de avanço (de padrão subdérmico) na região abdominal ventral. Em um dos flapes, considerado controle (FC) não foi aplicado nenhum produto, enquanto que no flape contralateral, denominado tratado (FT), foi usado o gel de PRP. As áreas foram macroscopicamente avaliadas a cada dois dias até o 7º dia de pós-operatório em relação à coloração da pele e presença de área de necrose, e com 10 dias ambos os flapes foram coletados por biópsia e submetidos ao exame histológico e morfometria dos vasos sanguíneos. Os vasos contados em cada grupo foram estatisticamente analisados pelo teste de F ao nível de 1% de probabilidades. Os resultados demonstraram que não houve diferença significativa nas alterações macroscópicas das feridas e na morfometria vascular dos FC e FT, sugerindo dessa maneira que dentro das condições experimentais nas quais a pesquisa foi executada, que o gel de PRP não incrementou a angiogênese de flapes de avanço em cadelas.(AU)

Thyroid hormones affect decidualization and angiogenesis in the decidua and metrial gland of rats / Hormônios tireoidianos afetam a decidualização e a angiogênese na decídua e glândula metrial de ratas

This study aimed to evaluate the effects of thyroid hormone on the decidua and metrial gland of rats and to examine the expression of angiogenic factors. 72 adult, female rats were divided into hypothyroid, T4-treated2, and control groups. At 10, 14 and 19 days of gestation (DG), the decidua and metrial gland were collected for histomorphometric and immunohistochemical evaluation of the expression of VEGF, Flk-1 and Tie-2. Hypothyroidism reduced the area of the decidua at 10 and 19 DG. Furthermore, VEGF was increased at 10 and 14 DG, and Flk-1 only at 14 DG, but both was reduced at 19 DG in the metrial gland without significantly changing the area occupied by blood vessels. Rats treated with T4 showed an increase in the decidua blood vessels at 10 and 19 DG. However, at 10 DG, excess T4 resulted in increased of Flk-1 in the decidua and metrial gland. Hypothyroidism increased the Tie-2 at 10 and 19 DG in the decidua and metrial gland. In conclusion, hypothyroidism reduces the area of the decidua and increases the expression of VEGF, Tie-2 and Flk-1. The excess of T4 promotes tissue angiogenesis by increasing the number of vessels in the decidua because of the increased expression of Flk-1.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos dos hormônios tireoidianos sobre a decídua e a glândula metrial pela análise da expressão de fatores angiogênicos em ratas. 72 ratas adultas, fêmeas foram distribuídas nos grupos hipotiroideo, tratado com T4 e controle. Aos 10, 14 e 19 dias de gestação (DG), a decídua e a glândula metrial foram coletadas para avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica da expressão de VEGF, Flk-1 e Tie-2. O hipotireoidismo reduziu a área da decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, o VEGF aumentou aos 10 e 14 DG e o Flk-1 apenas aos 14 DG, mas ambos foram reduzidos aos 19 DG na glândula metrial sem alterar significativamente a área ocupada pelos vasos sanguíneos. As ratas tratadas com T4 apresentaram aumento do número de vasos sanguíneos na decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, aos 10 DG, o excesso de T4 resultou no aumento de Flk-1 na decídua e na glândula metrial. O hipotireoidismo aumentou o Tie-2 em 10 e 19 DG na decídua e na glândula metrial. Desta forma, pode-se concluir que o hipotireoidismo reduz a área da decídua e aumenta a expressão de VEGF, Tie-2 e Flk-1. O excesso de T4 promove a angiogênese tecidual ao aumentar o número de vasos na decídua devido ao aumento da expressão de Flk-1.(AU)

Thyroid hormones affect decidualization and angiogenesis in the decidua and metrial gland of rats / Hormônios tireoidianos afetam a decidualização e a angiogênese na decídua e glândula metrial de ratas

This study aimed to evaluate the effects of thyroid hormone on the decidua and metrial gland of rats and to examine the expression of angiogenic factors. 72 adult, female rats were divided into hypothyroid, T4-treated2, and control groups. At 10, 14 and 19 days of gestation (DG), the decidua and metrial gland were collected for histomorphometric and immunohistochemical evaluation of the expression of VEGF, Flk-1 and Tie-2. Hypothyroidism reduced the area of the decidua at 10 and 19 DG. Furthermore, VEGF was increased at 10 and 14 DG, and Flk-1 only at 14 DG, but both was reduced at 19 DG in the metrial gland without significantly changing the area occupied by blood vessels. Rats treated with T4 showed an increase in the decidua blood vessels at 10 and 19 DG. However, at 10 DG, excess T4 resulted in increased of Flk-1 in the decidua and metrial gland. Hypothyroidism increased the Tie-2 at 10 and 19 DG in the decidua and metrial gland. In conclusion, hypothyroidism reduces the area of the decidua and increases the expression of VEGF, Tie-2 and Flk-1. The excess of T4 promotes tissue angiogenesis by increasing the number of vessels in the decidua because of the increased expression of Flk-1.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos dos hormônios tireoidianos sobre a decídua e a glândula metrial pela análise da expressão de fatores angiogênicos em ratas. 72 ratas adultas, fêmeas foram distribuídas nos grupos hipotiroideo, tratado com T4 e controle. Aos 10, 14 e 19 dias de gestação (DG), a decídua e a glândula metrial foram coletadas para avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica da expressão de VEGF, Flk-1 e Tie-2. O hipotireoidismo reduziu a área da decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, o VEGF aumentou aos 10 e 14 DG e o Flk-1 apenas aos 14 DG, mas ambos foram reduzidos aos 19 DG na glândula metrial sem alterar significativamente a área ocupada pelos vasos sanguíneos. As ratas tratadas com T4 apresentaram aumento do número de vasos sanguíneos na decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, aos 10 DG, o excesso de T4 resultou no aumento de Flk-1 na decídua e na glândula metrial. O hipotireoidismo aumentou o Tie-2 em 10 e 19 DG na decídua e na glândula metrial. Desta forma, pode-se concluir que o hipotireoidismo reduz a área da decídua e aumenta a expressão de VEGF, Tie-2 e Flk-1. O excesso de T4 promove a angiogênese tecidual ao aumentar o número de vasos na decídua devido ao aumento da expressão de Flk-1.(AU)

Thyroid hormones affect decidualization and angiogenesis in the decidua and metrial gland of rats

ABSTRACT: This study aimed to evaluate the effects of thyroid hormone on the decidua and metrial gland of rats and to examine the expression of angiogenic factors. 72 adult, female rats were divided into hypothyroid, T4-treated2, and control groups. At 10, 14 and 19 days of gestation (DG), the decidua and metrial gland were collected for histomorphometric and immunohistochemical evaluation of the expression of VEGF, Flk-1 and Tie-2. Hypothyroidism reduced the area of the decidua at 10 and 19 DG. Furthermore, VEGF was increased at 10 and 14 DG, and Flk-1 only at 14 DG, but both was reduced at 19 DG in the metrial gland without significantly changing the area occupied by blood vessels. Rats treated with T4 showed an increase in the decidua blood vessels at 10 and 19 DG. However, at 10 DG, excess T4 resulted in increased of Flk-1 in the decidua and metrial gland. Hypothyroidism increased the Tie-2 at 10 and 19 DG in the decidua and metrial gland. In conclusion, hypothyroidism reduces the area of the decidua and increases the expression of VEGF, Tie-2 and Flk-1. The excess of T4 promotes tissue angiogenesis by increasing the number of vessels in the decidua because of the increased expression of Flk-1.

RESUMO: Este estudo teve como objetivo avaliar os efeitos dos hormônios tireoidianos sobre a decídua e a glândula metrial pela análise da expressão de fatores angiogênicos em ratas. 72 ratas adultas, fêmeas foram distribuídas nos grupos hipotiroideo, tratado com T4 e controle. Aos 10, 14 e 19 dias de gestação (DG), a decídua e a glândula metrial foram coletadas para avaliação histomorfométrica e imunoistoquímica da expressão de VEGF, Flk-1 e Tie-2. O hipotireoidismo reduziu a área da decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, o VEGF aumentou aos 10 e 14 DG e o Flk-1 apenas aos 14 DG, mas ambos foram reduzidos aos 19 DG na glândula metrial sem alterar significativamente a área ocupada pelos vasos sanguíneos. As ratas tratadas com T4 apresentaram aumento do número de vasos sanguíneos na decídua aos 10 e 19 DG. Além disso, aos 10 DG, o excesso de T4 resultou no aumento de Flk-1 na decídua e na glândula metrial. O hipotireoidismo aumentou o Tie-2 em 10 e 19 DG na decídua e na glândula metrial. Desta forma, pode-se concluir que o hipotireoidismo reduz a área da decídua e aumenta a expressão de VEGF, Tie-2 e Flk-1. O excesso de T4 promove a angiogênese tecidual ao aumentar o número de vasos na decídua devido ao aumento da expressão de Flk-1.

A importância da família dos fatores de crescimento endotelial vascular na reprodução

O ciclo estral da cadela difere de fêmeas de outras espécies e tem como protagonista principal o corpo lúteo, glândula endócrina transitória que secreta diversos fatores relacionados à sua manutenção e regressão. Um dos fatores chaves que regula a angiogênese é o VEGFA, fator de crescimento endotelial pertencente a uma ampla família. O objetivo do trabalho foi revisar a importância do VEGFA, de suas isoformas, seus receptores e dos fatores de crescimento na angiogênese, na reprodução e no corpo lúteo canino. Sobre as isoformas angiogênicas do VEGFA e sua estruturação em exons e introns, nada se achou na espécie canina. Sugerimos a estrutura das isoformas caninas homologas às do ser humano para posterior validação. Adicionalmente, identificamos a expressão de fatores angiogênicos durante o diestro não gestacional na espécie canina, através da técnica de RNA-seq. Para tal, foram utilizados corpos lúteos provenientes de 18 cadelas que passaram por ovariosalpingohisterectomia (OSH) nos dias 10, 20, 30, 40, 50 e 60 após a ovulação (p.o). Os corpos lúteos coletados foram utilizados para extração de RNA total a partir do protocolo de TRIZOL e posterior análise por RNA-seq, seguindo o protocolo TruSeq RNA Sample Preparation Guide, descrito por Illumina. Identificamos a expressão diferencial do VEGFA, VEGFC, VEGFD, VEGFR1, VEGFR2 e VEGFR3 nas comparações entre o período luteotrófico e regressão luteínica. Os dados demonstram maior expressão de fatores angiogênicos no dia 20 p.o, período relacionados à proliferação celular e manutenção da função do corpo lúteo canino.

The estrous cycle of bitches differs from that of other species and its main protagonist is the corpus luteum, a transient endocrine gland that secretes several factors related to its maintenance and regression. One of the main factors that regulate angiogenesis is VEGFA, an endothelial growth factor belonging to a large family. The aim of the study was to shed light on the importance of VEGFA, its isoforms and receptors in angiogenesis, reproduction and canine corpus luteum. The angiogenic isoforms of this growth factor have been investigated for its structure in exons and introns, and nothing has been found about this conformation in dogs. Here we suggest the structure of canine isoforms homologous to that of humans for further validation and we seek to identify the expression of angiogenic factors during non-gestational diestrus in the canine species, using the RNA-seq technique. For this purpose, corpus luteum of 18 bitches submitted to ovariosalpingohisterectomy (OSH) were used on days 10, 20, 30, 40, 50 and 60 after ovulation (p.o). The collected corpus luteum were used for extraction of total RNA using the TRIZOL protocol and subsequent analysis by RNA-seq, following the protocol TruSeq RNA Sample Preparation Guide, described by Illumina. We identified the differential expression of VEGFA, VEGFC, VEGFD, VEGFR1, VEGFR2 and VEGFR3 when comparing the luteotrophic and regression periods. The data demonstrate the active participation of angiogenic factors on day 20 post ovulation, a period related to cell proliferation and maintenance of canine corpus luteum function.

Marcadores moleculares em ovários de fêmeas suínas com níveis diferentes de bem-estar, no período pré-cópula

O papel do ambiente na trajetória dos indivíduos vem sendo estudado há centenas de anos. A partir da percepção que existe uma íntima relação entre o ambiente que os indivíduos estão inseridos e a forma que eles se expressam fenotipicamente. Neste estudo, revisamos a literatura atual e realizamos um estudo inédito sobre o papel das experiências ambientais sobre fatores genômicos do modelo porcino. No primeiro estudo que nós apresentamos, nós revisamos as evidências já publicadas relacionadas ao desenvolvimento de um painel de indicadores epigenéticos associados as experiências negativas que os indivíduos foram submetidos durante suas vidas. Nesta revisão das evidências coletadas nos últimos 10 anos, publicadas em revistas internacionais, revisadas por pares, nós identificamos perspectivas positivas em relação a consistência de marcadores epigenéticos no genoma de animais de produção, que poderiam predizer seu bem-estar. Ressaltamos, porém, que nós também identificamos alta variabilidade em relação aos genes diferencialmente afetados por estas marcas, que pode ser explicado por sua alta diversidade em termos de contexto experimental. No segundo manuscrito deste documento, nós evidenciamos, de forma inédita, que uma única dose de lipopolissacarídeo (LPS) é capaz de modificar a expressão gênica do gene angiogênico (VEGF), no corpo lúteo de fêmeas suínas alojadas em diferentes condições de bem-estar. Este estudo simula um dos maiores desafios da suinocultura intensiva: as infecções do trato urinário por bactérias gram-negativas, que possuem LPS em sua membrana externa. De modo geral, nosso estudo revela importantes achados em relação a fatores ambientais que podem comprometer aspectos produtivos, reprodutivos e o bem-estar animal de suínos. Além disso, é razoável dizer que outros campos de estudo possam se beneficiar das nossas evidências, uma vez que o modelo porcino é reconhecido como uma das melhores espécies para estudos translacionais.

The role of the environment in the trajectory of individuals has been studied for hundreds of years. Based on the perception that there is an intimate relationship between the environment that individuals live in and the way they express themselves phenotypically. In this study, we reviewed the current literature concerning epi-markers to predict animal welfare in farm animals and conducted an unprecedented study on the role of environmental experiences on genomic factors in the porcine corpus luteum. In the first study, we reviewed the evidences regarding the development of a panel of epigenetic indicators associated with the negative experiences that individuals have undergone during their lifetimes. In this review of evidence collected over the last 10 years, published in international peer-reviewed journals, we identified positive perspectives regarding the consistency of epigenetic markers in the genome of farm animals, which could predict their welfare. However, we also pointed out high variability concerning genes differentially affected by these markers, which can be explained by their high diversity in terms of the experimental context. In the second manuscript of this dissertation, we presented a novel study showing that a single dose of lipopolysaccharide (LPS) was capable of modifying gene expression of the angiogenic gene (VEGF) in the corpus luteum of gilts housed in different welfare conditions. This study simulates one of the biggest challenges of intensive pig farming: urinary tract infections by gram-negative bacteria, which have LPS in their external membrane. Overall, our study revealed important findings concerning environmental factors that can compromise the productive, reproductive, and animal welfare aspects of pigs. Furthermore, it is reasonable to say that other fields of study can benefit from our evidence since the porcine model is recognized as one of the best species for translational studies.

Liquid and gel Platelet Rich Plasma as skin healing adjuvant / Plasma Rico em Plaquetas em suas frações líquida e em gel como adjuvantes da cicatrização cutânea

Background: In recent decades, many researches have been conducted on processes involved in tissue repairing, mainly in the development of resources and technology designed to improve the wound healing progress. Platelet rich plasma (PRP) derived from autologous blood is defined as a plasma volume with platelet concentration higher than physiological level. It is an autogenous and low cost source of growth factors, which are essential for tissue regeneration due to their angiogenic, mitogenic, and chemotactic properties. The aim of this study was evaluate two forms of PRP- liquid and gel - regarding their capacity to influence quality and repair time of standardized skin injuries. Materials, Methods & Results: New Zealand healthy rabbits were distributed in three groups (n = 6): control group (CG), liquid platelet rich plasma group (LIQPRP), and gel platelet rich plasma group (GELPRP). Acute skin lesions were inducted in two areas approximately 2 cm close to scapular edge and depth including epidermis, dermis, and hypodermis to external muscular fascia. Animals received treatment according to each group. Injuries were measured with digital pachymeter in two directions: longer length (l) and longer width (w), every two days. Areas and healing rates were calculated. Microscopic analysis samples were collected on days seven and 14 and evaluated through hematoxylin and eosin [...](AU)

Liquid and gel Platelet Rich Plasma as skin healing adjuvant / Plasma Rico em Plaquetas em suas frações líquida e em gel como adjuvantes da cicatrização cutânea

Background: In recent decades, many researches have been conducted on processes involved in tissue repairing, mainly in the development of resources and technology designed to improve the wound healing progress. Platelet rich plasma (PRP) derived from autologous blood is defined as a plasma volume with platelet concentration higher than physiological level. It is an autogenous and low cost source of growth factors, which are essential for tissue regeneration due to their angiogenic, mitogenic, and chemotactic properties. The aim of this study was evaluate two forms of PRP- liquid and gel - regarding their capacity to influence quality and repair time of standardized skin injuries. Materials, Methods & Results: New Zealand healthy rabbits were distributed in three groups (n = 6): control group (CG), liquid platelet rich plasma group (LIQPRP), and gel platelet rich plasma group (GELPRP). Acute skin lesions were inducted in two areas approximately 2 cm close to scapular edge and depth including epidermis, dermis, and hypodermis to external muscular fascia. Animals received treatment according to each group. Injuries were measured with digital pachymeter in two directions: longer length (l) and longer width (w), every two days. Areas and healing rates were calculated. Microscopic analysis samples were collected on days seven and 14 and evaluated through hematoxylin and eosin [...]

IMUNOMARCAÇÃO DE VEGF, CD31 E BMP-2 EM NEOPLASIAS MAMÁRIAS MALIGNAS DE CADELAS

Neoplasias malignas em cadelas é uma das enfermidades mais frequentes em animais domésticos no Brasil. Tais neoplasias apresentam uma grande similaridade com neoplasias de mamas em mulheres e, devido a esse fato, o entendimento da patogênese e das características biológicas visando a identificação de fatores prognósticos e preditivos são necessários para a melhoria de tratamentos e diagnósticos mais eficazes. Estudos recentes buscam correlacionar a densidade microvascular (DMV) e a quantidade de células estromais através da quantificação de imunomarcadores considerados fatores prognósticos do câncer mamário. Nesse contexto, o objetivo deste estudo foi avaliar a densidade de microvasos, por meio da contagem de vasos marcados por CD31, além de correlacionar a imunomarcação por VEGF-A e BMP2 com o subtipo histológico e grau de malignidade de neoplasias malignas mamárias de cadelas. Para tal, neoplasias malignas de mama em cadelas foram separadas quanto ao grau de malignidade em alto e baixo. Foi realizada imuno-histoquímica para os anticorpos anti-CD31, VEGF-A e BMP2, seguindo recomendações do fabricante do kit DAKO EnVision FLEX+. As amostras utilizadas no estudo foram provenientes de diagnóstico histopatológico de clínicas veterinárias da cidade de Goiânia-GO. Foram construídos blocos de microarranjo de tecido para otimização dos experimentos. Os testes estatísticos foram feitos com o software GraphPad Prism 7.0, considerando o nível de significância de 5%. A imunomarcação de CD31 foi diferente em todos os grupos analisados, assim como a marcação por VEGF-A e BMP2. Carcinomas com baixo grau de malignidade apresentaram maior imunomarcação por VEGF-A e BMP2, bem como maior DMV por CD31. O presente estudo demonstrou que carcinomas de baixo grau apresentaram uma maior imunomarcação pelos marcadores angiogênicos VEGF-A e CD31, bem como uma maior imunomarcação por BMP2, e tal achado reforça a ideia de que o VEGF-A é uma molécula envolvida na formação vascular e que BMP2 pode agir estimulando a angiogênese, principalmente por liberação de VEGF-A. Os nossos achados também sugerem a importância de outros fatores angiogênicos do microambiente do tumor na regulação da angiogênese tumoral em tumores mamários caninos. A realização deste trabalho demonstrou a importância da avaliação angiogênica por imuno-histoquímica na determinação de fatores prognósticos associados à neoplasias malignas mamárias caninas.

Malignant neoplasms in dogs is one of the most frequent diseases in domestic animals in Brazil. Such neoplasms have a great similarity with breast neoplasms in women and, due to this fact, an understanding of the pathogenesis and biological characteristics aiming at the identification of prognostic and predictive factors are necessary for the improvement of more effective treatments and diagnoses. Recent studies seek to demonstrate the microvascular density and the amount of stromal cells through the quantification of immunomarkers considered prognostic factors for breast cancer. In this context, the objective of this study was to evaluate the microvessel density, by counting vessels marked by CD31, in addition to correlating immunomarking by VEGF-A and BMP2 with the histological subtype and degree of malignancy of dogs' malignant neoplasms. For this, malignant breast neoplasms in dogs were separated as to the degree of malignancy in high and low. Immunohistochemistry was performed for anti-CD31, VEGF-A and BMP2 antibodies, following recommendations from the DAKO EnVision FLEX + kit manufacturer. The samples used in the study came from the histopathological diagnosis of veterinary clinics in the city of Goiânia-GO. Tissue microarray blocks were built to optimize the experiments. Statistical tests were performed using the GraphPad Prism 7.0 software, considering the significance level of 5%. The immunostaining of CD31 was different in all groups analyzed, as well as the staining by VEGF-A and BMP2. Carcinomas with a low degree of malignancy showed greater immunostaining by VEGF-A and BMP2, as well as greater MVD by CD31. The present study demonstrated that low-grade carcinomas show greater immunostaining by angiogenic markers VEGF-A and CD31, as well as greater immunostaining by BMP2, and this finding reinforces the idea that VEGF-A is a molecule involved in vascular formation and that BMP2 can act by stimulating angiogenesis, mainly by releasing VEGF-A. Our findings also suggest the importance of other angiogenic factors of the tumor microenvironment in the regulation of tumor angiogenesis in canine mammary tumors. This work demonstrated the importance of angiogenic evaluation by immunohistochemistry in determining prognostic factors associated with canine mammary malignancies.

AVALIAÇÃO DO SISTEMA KISS-KISS1R NO SISTEMA GENITAL DE GATAS HÍGIDAS E COM PIOMETRA E SUA RELAÇÃO COM A EXPRESSÃO DE MEDIADORES ANGIOGÊNICOS E IMUNOLÓGICOS

A kisspeptina (Kp) é um neuropeptídeo codificado pelo gene Kiss1 que estimula a liberação hipotalâmica de GnRH via seu receptor Kiss1R. Falhas na sua expressão resulta em hipogonadismo hipogonadotrófico em humanos e animais e por isso ela tem sido considerada o peptídeo chave da reprodução. No entanto, falhas na sinalização periférica de Kp, principalmente no sistema genital, também causa infertilidade. Contudo, estudos sobre o perfil de expressão do sistema Kiss-Kiss1R no sistema genital e sua relação com mediadores imunológicos e angiogênicos em condições fisiológicas e patológicas são ainda escassos, principalmente na gata doméstica que não há nenhum estudo. Nesse sentido, este estudo teve como objetivo avaliar o perfil de expressão de Kp e seu receptor (Kiss1R) no útero, ovário e placenta de gatas (Felis catus) hígidas e com piometra e sua relação com a expressão de fatores pró-angiogênicos (VEGF, Flk-1 e PIGF) e imunológicos (INF, MIF, TNF, IL6 e IL10). Para isso, o trabalho foi realizado em três etapas: no CAPITULO 1 avaliou-se a expressão do sistema Kiss-Kiss1R e dos mediadores angiogênicos e imunológicos no útero de gatas ao longo do ciclo estral e na condição de piometra; no CAPÍTULO 2 avaliou-se a influência da gestação na expressão uterina do sistema Kiss-Kiss1R e dos mediadores angiogênicos e imunológicos, como também o perfil de expressão na interface materno-fetal ao longo da gestação; e no CAPÍTULO 3 avaliou-se o perfil do sistema Kiss-Kiss1R e dos mediadores angiogênicos e imunológicos durante a foliculogênese, luteogênese e regressão luteal de gatas cíclicas e gestantes. Para o estudo foram utilizados 109 animais divididos nos grupos proestro/estro (N=20), diestro (N=41), anestro (N=32), piometra (N=4) e gestantes (N=12) após avaliação clínica, histopatológica e dosagem hormonal de estradiol (E2) e progesterona (P4) (CEUA 005/18). As amostras de útero, placenta e ovário foram avaliados quanto a expressão de Kiss, Kiss1R, VEGF, Flk-1, PIGF, INF, MIF, TNF, IL6 e IL10 por meio de imunohistoquimica e qPCR. Os dados foram analisados por ANOVA seguido do teste StudentNewmanKeuls (SNK) ou teste t de Student. Em relação ao ciclo estral, foi verificado que o útero de gatas em diestro apresenta maior expressão gênica e proteica de Kiss, como também maior expressão de fatores pró-angiogênicos e de Mif e Il6 (P<0,05). Em contrapartida, Kiss1R apresentou maior expressão uterina na fase de proestro/estro, semelhante ao observado para a imunomarcação dos fatores inflamatórios (P<0,05). Para a maioria desses fatores houve correlação gênica significativa e positiva com a expressão uterina de Kiss e/ou Kiss1r, além de ter ocorrido correlação gênica positiva entre Kiss e seu receptor no útero de gatas ao longo do ciclo estral (P<0,05). Gatas com piometra apresentaram aumento da expressão uterina de Kiss e Kiss1R (P<0,05), enquanto ocorreu redução significativa da expressão de RNAm para Vegf, Pigf, Mif e Il6, e aumento da expressão de Tnf. Em relação à interface materno-fetal, a gestação em gatas aumenta a expressão uterina de Kiss e Kiss1r , principalmente no final da gestação, além de aumentar a expressão endometrial de MIF, Vegf, Il10 e Tnf (P<0,05), diferente de Pigf que apresentou redução da expressão gênica (P<0,05). Na placenta, o sistema KissKiss1R foi expresso no meio e final da gestação, com maior expressão gênica de Kiss1r ao final da gestação. A expressão gênica e/ou proteica placentária de VEGF, Flk-1, INFy, TNF, IL6 e IL10 foi maior no meio da gestação (P<0,05), diferente de Pigf que apresentou maior expressão de RNAm no final da gestação (P<0,05). Além disso, na placenta houve correlação gênica positiva entre Kiss e Tnf, e negativa entre Kiss1r e Inf, Il6 e Il10 (P<0,05), embora não tenha ocorrido correlação significativa entre Kiss e seu receptor (P>0,05). Em relação ao ovário, expressão moderada a intensa de Kiss e dos mediadores angiogênicos e imunológicos foi observada em todos os folículos, enquanto Kiss1R apresentou expressão fraca e principalmente em folículos primordiais. Na luteogênese, a gestação aumentou a expressão luteal de Kiss, como também houve maior imunomarcação em corpos lúteos (CLs) maduros de gatas gestantes e não gestantes. Kiss1R, entretanto, apresentou maior expressão proteica somente nos CLs maduros de gatas gestantes (P<0,05). A expressão proteica de MIF foi maior em CLs maduros de gatas gestantes e não gestantes em relação aos CLs vacuolizados e corpos albicans (P<0,05), enquanto a gestação reduziu a expressão gênica luteal de Mif (P<0,05). Os corpos albicans apresentaram menor expressão de Kiss, Kiss1r, Vegf e Mif em relação aos CLs de animais gestantes e não gestantes. Conclui-se que o sistema Kiss/Kiss1R é expresso no útero, ovário e placenta da gata doméstica, sendo que o perfil de expressão do mesmo sofre influência não somente do ciclo estral, com maior expressão durante o diestro, como também da gestação, que modulou positivamente a expressão uterina e luteal de Kiss e/ou Kiss1R. Além disso, a expressão de Kiss/Kiss1r apresenta correlação gênica com a expressão de mediadores angiogênicos e imunológicos no sistema genital da gata doméstica, sendo que os mesmos variam o seu perfil de expressão de acordo com a fase do ciclo estral e o estágio luteal e gestacional.

Kisspeptin (Kp) is a neuropeptide encoded by the Kiss1 gene that stimulates the hypothalamic release of GnRH via its Kiss1R receptor. Failures in its expression results in hypogonadotrophic hypogonadism in humans and animals and has therefore been considered the key peptide of reproduction. However, failures in peripheral Kp signaling, especially in the genital system, also cause infertility. However, studies on the expression profile of the Kiss/Kiss1R system in the genital system and its relationship with immunological and angiogenic mediators in physiological and pathological conditions are still scarce, especially in the domestic cat that there is no study. In this sense, this study aimed to evaluate the expression profile of Kp and its receptor (Kiss1R) in the uterus, ovary and placenta of healthy cats (Felis catus) and with pyometra and its relationship with the expression of pro-angiogenic (VEGF, Flk-1, and PIGF) and immunological (INF, MIF, TNF, IL6, and IL10) factors. For this, the work was carried out in three stages: in CHAPTER 1, the expression of the Kiss / Kiss1R system and of the angiogenic and immunological mediators in the uterus of cats throughout the estrous cycle and in the condition of pyometra was evaluated; in CHAPTER 2, the influence of pregnancy on the uterine expression of the Kiss/Kiss1R system and of the angiogenic and immunological mediators was evaluated, as well as the expression profile in the maternal-fetal interface throughout pregnancy; and in CHAPTER 3, the profile of the Kiss / Kiss1R system and of the angiogenic and immunological mediators during folliculogenesis, luteogenesis and luteal regression of cyclical and pregnant cats was evaluated. For the study, 109 animals were used and divided into the groups of proestrus/estrus (N = 20), diestrus (N = 41), anestrus (N = 32), pyometra (N = 4) and pregnant (N = 12) after clinical and histopathological evaluation and hormonal dosage of estradiol (E2) and progesterone (P4) (CEUA 005/18). The uterus, placenta and ovary samples were evaluated for the expression of Kiss, Kiss1R, VEGF, Flk-1, PIGF, INF, MIF, TNF, IL6 and IL10 by immunohistochemistry and qPCR. The data were analyzed by ANOVA followed by the Student Newman Keuls test (SNK) or Student t test. In relation to the estrous cycle, it was found that the uterus from cats in diestrus has higher gene and protein expression of Kiss, as well as higher expression of pro-angiogenic factors and Mif and Il6 (P <0.05). In contrast, Kiss1R showed higher uterine expression in the proestrus / estrus phase, similar to that observed for the immunostaining of inflammatory factors (P <0.05). For most of these factors there was a significant and positive gene correlation with the uterine expression of Kiss and / or Kiss1r, in addition to the positive gene correlation between Kiss and its receptor in the uterus from cats throughout the estrous cycle (P <0.05). Cats with pyometra showed higher uterine expression of Kiss and Kiss1R (P <0.05), while there was a significant reduction in mRNA expression for Vegf, Pigf, Mif and Il6, and increased expression of Tnf. In relation to the maternalfetal interface, pregnancy in cats increases the uterine expression of Kiss and Kiss1r, especially at the end of pregnancy, in addition to increasing the endometrial expression of MIF, Vegf, Il10 and Tnf (P <0.05), differently of Pigf that showed reduced gene expression (P <0.05). In the placenta, the Kiss-Kiss1R system was expressed in the middle and end of pregnancy, with higher Kiss1r gene expression at the end of pregnancy. Placental gene and/or protein expression of VEGF, Flk-1, INFy, TNF, IL6 and IL10 was higher in the middle of pregnancy (P <0.05), unlike Pigf which showed higher mRNA expression at the end of pregnancy (P <0.05). Furthermore, in the placenta there was a positive gene correlation between Kiss and Tnf, and negative between Kiss1r and Inf, Il6 and Il10 (P <0.05), although there was no significant correlation between Kiss and its receptor (P> 0.05). In relation to the ovary, moderate to intense expression of Kiss and of the angiogenic and immunological mediators was observed in all follicles, while Kiss1R showed weak expression and mainly in primordial follicles. In luteogenesis, pregnancy increased Kiss luteal expression, as well as higher immunostaining in mature corpus luteum (CLs) from pregnant and non-pregnant cats. Kiss1R, however, showed higher protein expression only in the mature CLs of pregnant cats (P <0.05). MIF protein expression was higher in mature CLs of pregnant and non-pregnant cats compared to vacuolated CLs and corpus albicans (P <0.05), while pregnancy reduced the luteal gene expression of Mif (P <0.05). Corpus albicans showed lower expression of Kiss, Kiss1r, Vegf and Mif in relation to CLs from pregnant and non-pregnant animals. It is concluded that the Kiss-Kiss1R system is expressed in the uterus, ovary and placenta of the domestic cat, and its expression profile is influenced not only by the estrous cycle, with higher expression during diestrus, but also during pregnancy, which positively modulated the uterine and luteal expression of Kiss and/or Kiss1R. In addition, the Kiss-Kiss1r expression has gene correlation with the expression of angiogenic and immunological mediators in the genital system of the domestic cat, and they vary their expression profile according to the estrous cycle phase and the luteal and gestational stage.

RELAÇÃO MASTÓCITOS E ANGIOGÊNESE EM NEOPLASIAS MAMÁRIAS CANINAS

As neoplasias mamárias são o tipo tumoral mais frequente em cadelas e mulheres. As cadelas são consideradas excelente modelo espontâneo no estudo do câncer de mama. O microambiente tumoral tem sido estudado nos últimos anos para maior compreensão do desenvolvimento e progressão dessa doença. Os mastócitos são um tipo celular presente neste microambiente que podem promover as neoplasias por meio da liberação de fatores pró-angiogênicos presentes em seus grânulos. Do mesmo modo, a fibrose tumoral tem sido considerada como fator prognóstico em diferentes tipos de tumores. O presente trabalho objetiva verificar a relação entre mastócitos e angiogênese em neoplasias mamárias benignas e malignas avaliando o papel da degranulação e da microlocalização dos mastócitos em neoplasias mamárias caninas. As mamas avaliadas foram divididas em três grupos: grupo controle (n=46); grupo maligno (n=57) e grupo benigno (n=19). Também foram avaliados linfonodos sem alterações (n=59) e com metástases (n=6). A marcação de mastócitos, vasos sanguíneos e fibrose tumoral foram realizados por técnicas histoquímicas e avaliadas por software ImageJ versão 1.42q. A densidade total de vasos (P=0,03) e vasos peritumorais (P=0,05) foram maiores no grupo maligno. Houve ainda correlação positiva entre densidade de vasos intratumorais e totais e densidade de mastócitos. Diante desses achados pode ser concluído que uma maior densidade de mastócitos está relacionada à maior densidade de vasos sanguíneos e que estes são mais abundantes em neoplasias malignas reforçando o papel crucial da angiogênese no desenvolvimento neoplásico.

The mammary neoplasias are the most often tumor type in bitchs and women. Female dogs are considered an excelent spontaneous model in the breast cancer study. The tumor microenvironment has been studied in the recent years to a greater understanding of the development and progression of this disease. Mast cells are a cell type present in this microenvironment that can promote neoplasms by releasing pro-angiogenic factors present in their granules. Likewise, tumor fibrosis has been considered a prognostic factor in different types of tumors. The present work aims to verify the connection between mast cells and angiogenesis in different histological types of mammary tumors by measuring the role of degranulation and microlocation in canine mammary glands tumors. The analyzed mammary glands were splitted into three groups: control group (n = 46); malignant group (n = 57) and benign group (n = 19). Lymph nodes without changes (n = 59) and with metastases (n = 6) were also evaluated. The staining of the mast cells, the blood vessels and the tumor fibrosis were performed by histochemical techniques and evaluated by ImageJ software version 1.42q. The total density of vessels (p = 0.03) and peritumoral vessels (p = 0.05) were higher in the malignant group. There was even a positive correlation between the intratumoral and total vessels and the mast cell density. In the face of these findings, we can conclude that a higher density of mast cells is related to a higher density of blood vessels and that these are more abundant in malignant neoplasms reinforcing the crucial role of angiogenesis in neoplastic development.

Morphological and immunohistochemical characterization of angiogenic and apoptotic factors and the expression of thyroid receptors in the ovary of tilapia Oreochromis niloticus in captivity / Caracterização morfológica e imuno-histoquímica de fatores angiogênicos e apoptóticos e da expressão de receptores tireoidianos no ovário de tilápia Oreochromis niloticus em cativeiro

Morphological and immunohistochemical characterization of angiogenic and apoptotic factors and the expression of thyroid receptors in the ovary of tilapia Oreochromis niloticus in captivity were studied. The morphological evaluation of the ovaries was performed by histological paraffin embedded and stained with HE. The immunohistochemical expressions of CDC47, VEGF, Flk-1, angiopoietin, Tie-2 and thyroid receptor (TRα) were performed by the technique of streptavidein-biotin-peroxidase. Apoptosis was assessed using the TUNEL kit. The relative expression of thyroid hormone receptors (TRα and TRß) was assessed by RT-PCR real time. The nuclear expression of CDC47 increased with the stage of maturation of the oocyte and was observed in the follicle cells. Apoptotic bodies were observed in the follicular cells of atretic follicles and postovulatory follicles from the ovaries of 150g and 350g fish. Expression of VEGF and its receptor Flk-1 was also observed in the follicular cells, and the expression of both increased with the maturity of the oocyte, with a higher intensity observed in the full-grown follicle. The expression of angiopoietin and of its receptor (Tie 2) was discrete and moderate respectively. TRα expression was independent of follicular development. However, the 350 g tilapia exhibited higher expression of TRß compared with the 50 g tilapia. We conclude that the proliferative activity and the expression of VEGF and its receptor increase with follicular maturation and that the TRs expression increases with ovarian maturity in tilapia (Oreochromis niloticus).(AU)

Foram estudadas as caracterizações morfológica e imuno-histoquímica de fatores angiogênicos e apoptóticos e a expressão de receptores tireoidianos no ovário de tilápia Oreochromis niloticus de cativeiro. A avaliação morfológica dos ovários foi realizada por cortes histológicos incluídos em parafina e corados por HE. As expressões imuno-histoquímicas de CDC47, VEGF e seu receptor Flk-1, angiopoetina e seu receptor Tie-2 e recertor tireoidiano (TRα) foram realizadas pela técnica de estreptavideina-biotina-peroxidade. A apoptose foi avaliada utilizando-se kit de TUNEL. A expressão relativa dos receptores de hormônios tireoidianos (TRα e TRß) foi avaliada pela técnica de RT-PCR tempo real. A expressão nuclear de CDC47 aumentou com a fase de maturação do oócito e foi observada nas células foliculares. Corpos apoptóticos foram observados nas células foliculares de folículos atrésicos e folículos pós-ovulatórios de ovários de peixes com 150g e 350g. A expressão de VEGF e do seu receptor Flk-1 foi também observada nas células foliculares , e a expressão de ambos aumentou com a maturidade do oócito , com uma maior intensidade no folículo maduro. A expressão de angiopoietina e do seu receptor (Tie 2) foi discreta e moderada, respectivamente. A expressão de TRα foi independente do desenvolvimento folicular. No entanto, a tilápia de 350g apresentou maior expressão de TRß em comparação com a tilápia de 50g. Conclui-se que a atividade proliferativa e a expressão de VEGF e de seu receptor aumenta com a maturação folicular e que a expressão dos TRs aumenta com a maturidade do ovário em tilápia (Oreochromis niloticus).(AU)

Morphological and immunohistochemical characterization of angiogenic and apoptotic factors and the expression of thyroid receptors in the ovary of tilapia Oreochromis niloticus in captivity / Caracterização morfológica e imuno-histoquímica de fatores angiogênicos e apoptóticos e da expressão de receptores tireoidianos no ovário de tilápia Oreochromis niloticus em cativeiro

Morphological and immunohistochemical characterization of angiogenic and apoptotic factors and the expression of thyroid receptors in the ovary of tilapia Oreochromis niloticus in captivity were studied. The morphological evaluation of the ovaries was performed by histological paraffin embedded and stained with HE. The immunohistochemical expressions of CDC47, VEGF, Flk-1, angiopoietin, Tie-2 and thyroid receptor (TRα) were performed by the technique of streptavidein-biotin-peroxidase. Apoptosis was assessed using the TUNEL kit. The relative expression of thyroid hormone receptors (TRα and TRβ) was assessed by RT-PCR real time. The nuclear expression of CDC47 increased with the stage of maturation of the oocyte and was observed in the follicle cells. Apoptotic bodies were observed in the follicular cells of atretic follicles and postovulatory follicles from the ovaries of 150g and 350g fish. Expression of VEGF and its receptor Flk-1 was also observed in the follicular cells, and the expression of both increased with the maturity of the oocyte, with a higher intensity observed in the full-grown follicle. The expression of angiopoietin and of its receptor (Tie 2) was discrete and moderate respectively. TRα expression was independent of follicular development. However, the 350 g tilapia exhibited higher expression of TRβ compared with the 50 g tilapia. We conclude that the proliferative activity and the expression of VEGF and its receptor increase with follicular maturation and that the TRs expression increases with ovarian maturity in tilapia (Oreochromis niloticus).(AU)

Foram estudadas as caracterizações morfológica e imuno-histoquímica de fatores angiogênicos e apoptóticos e a expressão de receptores tireoidianos no ovário de tilápia Oreochromis niloticus de cativeiro. A avaliação morfológica dos ovários foi realizada por cortes histológicos incluídos em parafina e corados por HE. As expressões imuno-histoquímicas de CDC47, VEGF e seu receptor Flk-1, angiopoetina e seu receptor Tie-2 e recertor tireoidiano (TRα) foram realizadas pela técnica de estreptavideina-biotina-peroxidade. A apoptose foi avaliada utilizando-se kit de TUNEL. A expressão relativa dos receptores de hormônios tireoidianos (TRα e TRβ) foi avaliada pela técnica de RT-PCR tempo real. A expressão nuclear de CDC47 aumentou com a fase de maturação do oócito e foi observada nas células foliculares. Corpos apoptóticos foram observados nas células foliculares de folículos atrésicos e folículos pós-ovulatórios de ovários de peixes com 150g e 350g. A expressão de VEGF e do seu receptor Flk-1 foi também observada nas células foliculares , e a expressão de ambos aumentou com a maturidade do oócito , com uma maior intensidade no folículo maduro. A expressão de angiopoietina e do seu receptor (Tie 2) foi discreta e moderada, respectivamente. A expressão de TRα foi independente do desenvolvimento folicular. No entanto, a tilápia de 350g apresentou maior expressão de TRβ em comparação com a tilápia de 50g. Conclui-se que a atividade proliferativa e a expressão de VEGF e de seu receptor aumenta com a maturação folicular e que a expressão dos TRs aumenta com a maturidade do ovário em tilápia (Oreochromis niloticus).(AU)

TREINAMENTO INTERVALADO DE ALTA INTENSIDADE EM PARÂMETROS REPRODUTIVOS DE RATOS ESPONTANEAMENTE HIPERTENSOS

A hipertensão é uma das causas da baixa fertilidade nos homens, pois reduz a produção de testosterona e espermatogênese. Os exercícios físicos são indicados por diminuir a pressão arterial e melhorar a saúde geral do indivíduo. A tese consta de uma revisão sobre os efeitos do treinamento intervalado de alta intensidade em parâmetros reprodutivos de ratos adultos espontaneamente hipertensos e de um artigo sobre um trabalho experimental realizado através de treinamento intervalado de alta intensidade que modula efeitos da hipertensão sobre parâmetros espermáticos em ratos adultos espontaneamente hipertensos. O objetivo do presente estudo foi avaliar parâmetros reprodutivos, de ratos espontaneamente hipertensos (SHR) submetidos ao treinamento intervalado de alta intensidade (HIIT). Foram utilizados 24 ratos divididos em três grupos: WKY (grupo controle ratos Wistar-Kyoto, normotenso sedentário, n=5); SHR (grupo de ratos SHR, n=9); e SHR-HIIT (grupo de ratos SHR submetidos ao HIIT, n=10). O HIIT foi realizado em esteira por 5 dias na semana durante 8 semanas, por 50 minutos aproximadamente, baseado na velocidade de exaustão máxima, com intervalos de descanso. O protocolo de treinamento consistia em 5 minutos de aquecimento a 60% da velocidade máxima de exaustão, e após o aquecimento, o treinamento foi de 4 minutos a 100% da velocidade máxima atingida no teste de exaustão, seguido de 3 minutos a 60% da velocidade máxima de exaustão, que se repetiu por 5 vezes na primeira semana, seis vezes na segunda e terceira semanas e da quarta a oitava semana repetiu por sete vezes cada sessão, sendo ajustada a velocidade máxima de exaustão antes de iniciar a quinta semana e nas duas últimas semanas do treinamento. Após a eutanásia, os órgãos reprodutivos e os espermatozoides foram colhidos. Todos os dados foram testados pela ANOVA seguida de Tukey, exceto os dados das células testiculares que foram submetidos ao teste de Kruskal-Wallis, seguido de Dunn (P<0,05). O grupo SHR apresentou menor porcentagem de espermatozoides móveis com trajetória progressiva (P<0,05) e maior número de espermatozoides imóveis, que demais grupos, WKY e SHR-HIIT. Não houve diferença significativa entre os grupos na morfologia espermática nem no diâmetro de epitélio seminífero. O grupo SHR-HIIT apresentou maior número de células germinativas e de Sertoli. Os SHR tiveram menor expressão gênica de fatores angiogênicos Vegf, Flt-1, Kdr e fator indutor de hipóxia (Hif-1). Concluimos que o HIIT por dois meses restaura a motilidade espermática de ratos hipertensos e o número de células germinativas e de Sertoli e que a hipertensão diminui a expressão gênica relativa de fatores angiogênicos.

Hypertension is one of the causes of low fertility in men, as it reduces the production of testosterone and spermatogenesis. Physical exercises are indicated for lowering blood pressure and improving the individual's general health. The thesis consists of a review on the effects of high-intensity interval training on reproductive parameters of spontaneously hypertensive adult rats and an article on an experimental work carried out through high-intensity interval training that modulates the effects of hypertension on sperm parameters in adult rats spontaneously hypertensive. The aim of the present study was to evaluate reproductive parameters of spontaneously hypertensive rats (SHR) submitted to high-intensity interval training (HIIT). 24 rats were used, divided into three groups: WKY (control group Wistar-Kyoto rats, sedentary normotensive, n = 5); SHR (SHR rat group, n = 9); and SHR HIIT (group of SHR rats submitted to HIIT, n = 10). HIIT was performed on a treadmill for 5 days a week for 8 weeks, for approximately 50 minutes, based on maximum exhaustion speed, with rest intervals. The training protocol consisted of 5 minutes of warm-up at 60% of the maximum speed of exhaustion, and after warm-up, the training was 4 minutes at 100% of the maximum speed achieved in the exhaustion test, followed by 3 minutes at 60% of the maximum exhaustion speed, which was repeated 5 times in the first week, six times in the second and third weeks and from the fourth to the eighth week repeated each session seven times, with the maximum exhaustion speed being adjusted before starting the fifth week and in the last two weeks of training. After euthanasia, the reproductive organs and sperm were harvested. All data were tested by ANOVA followed by Tukey, except for data from testicular cells that were subjected to the Kruskal-Wallis test, followed by Dunn (P <0.05). The SHR group had a lower percentage of mobile sperm with a progressive trajectory (P <0.05) and a higher number of immobile sperm than other groups, WKY and SHR-HIIT. There was no significant difference between groups in sperm morphology or in the diameter of seminiferous epithelium. The SHR-HIIT group had a higher number of germ cells and Sertoli cells. SHR had less gene expression of angiogenic factors Vegf, Flt-1, Kdr and hypoxia-inducing factor (Hif-1). We concluded that HIIT for two months restores the sperm motility of hypertensive rats and the number of germ cells and Sertoli cells and that hypertension decreases the relative gene expression of angiogenic factors.

Efeito dos fatores peptídicos de crescimento recombinantes (PDGF-BB e/ou VEGF165) no secretoma de células-tronco mesenquimais e em modelo animal de cicatrização de pele

A Medicina Regenerativa visa alcançar tratamentos que acelerem as diferentes fases do processo de cicatrização em humanos e animais e a manipulação da composição dos fatores de crescimento (FC) pode melhorar ou modificar o processo de reparo e remodelação dos tecidos lesados, bem como proporcionar cicatrizes mais estéticas e funcionais. O presente estudo objetivou avaliar o efeito dos fatores peptídicos de crescimento recombinantes humanos derivado de plaquetas (PDGF- BB) e/ou de crescimento endotelial e/ou vascular (VEGF165) em células-tronco mesenquimais do tecido adiposo (canino) e de medula óssea (equino) e seu secretoma, e em modelo de cicatrização de pele em ratos nude Rowett. Os FC foram obtidos a partir de meios purificados por cromatografia de afinidade a heparina e caracterizados por ELISA e Western blot, e foram utilizados em tampão como veículo ou em hidrogel de alginato 2%. As células foram obtidas, caracterizadas, cultivadas e tratadas com FC e o meio condicionado foi utilizado para isolamento de exossomos. O modelo animal de cicatrização de feridas foi estabelecido em ratos nude Rowett, onde foram aplicados 3g/mL de FC sozinhos ou combinados em feridas no dorso dos animais, e após 7 dias a evolução da cicatrização foi avaliada macroscópica e histopatologicamente. O presente estudo demonstrou pela primeira vez o potencial da suplementação de rhPDGF-BB e/ou rhVEGF165 na cicatrização de feridas cutâneas em sete dias, estimulando angiogênese, reação de fibroblastos e reepitelização. O hidrogel de alginato 2% mostrou ser a melhor abordagem para ser usada como veículo para aplicações de FC in vivo em relação ao tampão veículo, mas não em ensaios in vitro. O tratamento com ambos os fatores combinados melhorou o perfil terapêutico de células-tronco mesenquimais de tecido adiposos estimulando a migração celular e a secreção de exossomos. O estudo demonstrou pela primeira vez que o tratamento com rhVEGF165 estimulou proliferação celular, o perfil angiogênico e a secreção de exossomos por células-tronco mesenquimais de medula óssea equina. Juntos os dados embasam futuras investigações sobre efeito da suplementação com FC in vitro, no conteúdo celular e molecular do secretoma de células-tronco mesenquimais, e in vivo em um modelo seguro e reprodutível, abrindo uma nova perspectiva para abordagem terapêutica livre de células para cicatrização de feridas. Palavras-chave: Cicatrização de feridas. PDGF-BB. VEGF. Células-tronco mesenquimais. Exossomos.

Regenerative Medicine aims to achieve treatments that accelerate the different stages of the healing process in both humans and animals, and the manipulation of the growth factor (GF) composition can improve or modify the repair and remodeling process of injured tissues, as well as providing more aesthetic and functional scars. The present study aimed to evaluate the effect of recombinant human platelet- derived growth factor (PDGF-BB) and/or endothelial vascular growth factor (VEGF165) on adipose (canine) and bone marrow (equine) mesenchymal stem cells and their secretome, as well as in a model of skin healing in nude rats. GF were obtained from purified media by heparin affinity chromatography and characterized by ELISA and Western blot, and were used in vehicle buffer or in 2% alginate hydrogel. Mesenchymal stem cells were obtained, characterized, cultured and treated with GF and exosomes were isolated from conditioned media. The animal model of wound healing was established in Rowett nude rats, where 3g/mL of GF were applied alone or combined in wounds on the animals' backs, and after 7 days the healing evolution was evaluated macroscopically and histopathologically. The present study demonstrated for the first time the potential of rhPDGF-BB and/or rhVEGF165 supplementation in the healing of skin wounds in seven days, stimulating angiogenesis, fibroblast reaction and re-epithelialization, but a long-term evaluation is necessary. The 2% alginate hydrogel proved to be the best approach to be used as a vehicle for GF applications in vivo in relation to the vehicle buffer, but not in vitro assays. The treatment with both factors combined improved the therapeutic profile of adipose mesenchymal stem cells by stimulating cell migration and exosome secretion. The study demonstrated for the first time that treatment with rhVEGF165 stimulated cell proliferation, angiogenic profile and secretion of exosomes by equine bone marrow mesenchymal stem cells. Together, the data support future investigations into the effect of GF supplementation in vitro, on cellular and molecular content of the mesenchymal stem cell secretome and in vivo, in a safe and reproducible model, opening a new perspective for a cell-free therapeutic approach for wound healing.

INFLUÊNCIA DO ENXERTO OMENTAL LIVRE NA CICATRIZAÇÃO DE FERIDAS CUTÂNEAS EXPERIMENTAIS EM COELHOS

Cicatrização é a combinação de eventos físicos, químicos e celulares que tem início após o trauma e é constituída por uma cadeia contínua de fases que se sobrepõe para restabelecer a continuidade do tecido lesionado. Falhas ou atrasos nessas fases resultam em feridas crônicas, sendo um desafio na rotina clínica veterinária. Nesse sentido, tem-se buscado cada vez mais alternativas terapêuticas eficazes que auxiliem no processo cicatricial. Em virtude das suas propriedades angiogênicas, riqueza vascular e presença de fatores de crescimento, o omento vem sendo amplamente estudado e utilizado no auxílio à cicatrização, não sendo encontrados estudos da utilização dos enxertos omentais livres sem microanastomose vascular (LSMAV) como auxiliar no reparo cutâneo. Desta forma, nesse estudo objetiva-se avaliar a influência do enxerto omental LSMAV na cicatrização cutânea de feridas experimentalmente produzidas em coelhos. Utilizou-se 24 coelhos provenientes do Laboratório de Quimioterapia Experimental em Parasitologia Veterinária da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro divididos em Grupo Controle (GC) e Omento (GO), submetidos à celiotomia longitudinal mediana para coleta de fragmento omental de 9cm2 . Após a celiorrafia foi produzida em todos os animais ferida linear de 3cm na linha média dorsal à altura da borda caudal das escápulas. Aprofundou-se a incisão até a fáscia toracodorsal em ambos os grupos, porém nos animais do GO o fragmento omental coletado foi fixado no subcutâneo com seis pontos simples interrompidos, seguindo-se a dermorafia com padrão intradérmico em ambos os grupos. As feridas experimentais foram avaliadas diariamente no que diz respeito à coloração, presença de crosta, tecido desvitalizado, secreção, resistência e medidas do aumento de volume, caso houvesse. Obteve-se imagens termográficas das feridas experimentais nos dias 0 (pré-operatório), 3, 7 e 14 de pós-operatório. Ainda, cada um dos grupos foi dividido em dois subgrupos com 6 animais cada, dos quais obteve-se material para avaliação anatomopatológica (macroscópica e microscópica) no 7º e 14º dias de pós-operatório. Clinicamente destacou-se a ativação do omento, observada pelo aumento de volume de consistência firme a partir do segundo dia de pós-operatório, com diminuição do edema e manutenção na coloração rósea ao longo dos momentos de avaliação. A avaliação anatomopatológica macroscópica evidenciou intensa reação orgânica (congestão e hemorragia) próximo ao enxerto no dia 7, com posterior abrandamento das respostas metabólicas, e sobretudo neovascularização em direção ao enxerto omental, indicando sua viabilidade. A microscopia corroborou os dados da avaliação macroscópica, sendo possível observar maior neovascularização na derme profunda do GO já no sétimo dia de pós-operatório, e mais quantidade de células polimorfonucleares e mononucleares, bem como aumentada presença de colágeno (sem diferença estatística) na derme profunda e superficial, indicando acelerado processo de remodelamento e reparo tecidual. A termografia captou menor temperatura cutânea na ferida experimental já no sétimo dia de avaliação, que juntamente à maior produção de colágeno na microscopia, ainda que sem diferença estatística, pode estar relacionada a um processo de fibroplasia mais acelerado no GO. Conclui-se que o enxerto omental LSMAV influenciou positivamente a cicatrização cutânea de feridas experimentais em coelhos, mantendo-se viável e sem sinais deletérios à região implantada.

Healing is the combination of physical, chemical and cellular events that begins after the trauma and consists of a continuous chain of phases that overlap to restore the continuity of the injured tissue. Failures or delays in these phases result in chronic wounds, being a challenge in the veterinary clinical routine. In this sense, more and more effective therapeutic alternatives that assist in the healing process have been sought. Due to its angiogenic properties, vascular richness and the presence of growth factors, the omentum has been widely studied and used to aid healing, and studies on the use of free omental grafts without vascular microanastomosis (LSMAV) as an aid in skin repair have not been found. Thus, this study aims to evaluate the influence of the LSMAV omental graft on the skin healing of wounds experimentally produced in rabbits. Twenty-four rabbits from the Experimental Chemotherapy Laboratory in Veterinary Parasitology of the Federal Rural University of Rio de Janeiro were used, divided into a Treated Group (GT) and Omento (GO), submitted to median longitudinal celiotomy to collect a 9cm2 omental fragment. After celiorraphy, a linear wound of 3 cm was produced in all animals on the dorsal midline at the height of the caudal border of the scapulae. The incision was deepened to the thoracodorsal fascia in both groups, but in the animals of the GO, the collected omental fragment was fixed in the subcutaneous tissue with six simple interrupted points, followed by dermoraphy with an intradermal pattern in both groups. The experimental wounds were evaluated daily with respect to color, presence of crust, devitalized tissue, secretion, resistance and volume measurements, in case of an increase. Thermographic images of the experimental wounds were obtained on days 0 (preoperative), 3, 7 and 14 postoperatively. In addition, each group was divided into two subgroups with 6 animals each, from which material was obtained for anatomopathological evaluation (macroscopic and microscopic) on the 7th and 14th postoperative days. Clinically, the activation of the omentum stood out, observed by the increase in the volume of firm consistency from the second postoperative day, with a decrease in edema and maintenance of pink color throughout the evaluation moments. The macroscopic anatomopathological evaluation showed an intense organic reaction (congestion and hemorrhage) close to the graft on day 7, with subsequent slowdown in metabolic responses, and especially neovascularization towards the omental graft, indicating its viability. Microscopy corroborated the data from the macroscopic evaluation, and it was possible to observe greater neovascularization in the GO deep dermis on the seventh postoperative day, and more polymorphonuclear and mononuclear cells, as well as an increased presence of collagen (without statistical difference), in deep and superficial dermis, indicating an accelerated remodeling and tissue repair process. Thermography captured lower skin temperature in the experimental wound on the seventh day of evaluation, which together with the higher collagen production under microscopy, although without statistical difference, may be related to a more accelerated fibroplasia process in the GO. It was concluded that the LSMAV omental graft positively influenced the cutaneous healing of experimental wounds in rabbits, remaining viable and without deleterious signs to the implanted region.