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Tese em Português | VETTESES | ID: vtt-221460

Resumo

A kisspeptina (Kp) é um neuropeptídeo codificado pelo gene Kiss1 que estimula a liberação hipotalâmica de GnRH via seu receptor Kiss1R. Falhas na sua expressão resulta em hipogonadismo hipogonadotrófico em humanos e animais e por isso ela tem sido considerada o peptídeo chave da reprodução. No entanto, falhas na sinalização periférica de Kp, principalmente no sistema genital, também causa infertilidade. Contudo, estudos sobre o perfil de expressão do sistema Kiss-Kiss1R no sistema genital e sua relação com mediadores imunológicos e angiogênicos em condições fisiológicas e patológicas são ainda escassos, principalmente na gata doméstica que não há nenhum estudo. Nesse sentido, este estudo teve como objetivo avaliar o perfil de expressão de Kp e seu receptor (Kiss1R) no útero, ovário e placenta de gatas (Felis catus) hígidas e com piometra e sua relação com a expressão de fatores pró-angiogênicos (VEGF, Flk-1 e PIGF) e imunológicos (INF, MIF, TNF, IL6 e IL10). Para isso, o trabalho foi realizado em três etapas: no CAPITULO 1 avaliou-se a expressão do sistema Kiss-Kiss1R e dos mediadores angiogênicos e imunológicos no útero de gatas ao longo do ciclo estral e na condição de piometra; no CAPÍTULO 2 avaliou-se a influência da gestação na expressão uterina do sistema Kiss-Kiss1R e dos mediadores angiogênicos e imunológicos, como também o perfil de expressão na interface materno-fetal ao longo da gestação; e no CAPÍTULO 3 avaliou-se o perfil do sistema Kiss-Kiss1R e dos mediadores angiogênicos e imunológicos durante a foliculogênese, luteogênese e regressão luteal de gatas cíclicas e gestantes. Para o estudo foram utilizados 109 animais divididos nos grupos proestro/estro (N=20), diestro (N=41), anestro (N=32), piometra (N=4) e gestantes (N=12) após avaliação clínica, histopatológica e dosagem hormonal de estradiol (E2) e progesterona (P4) (CEUA 005/18). As amostras de útero, placenta e ovário foram avaliados quanto a expressão de Kiss, Kiss1R, VEGF, Flk-1, PIGF, INF, MIF, TNF, IL6 e IL10 por meio de imunohistoquimica e qPCR. Os dados foram analisados por ANOVA seguido do teste StudentNewmanKeuls (SNK) ou teste t de Student. Em relação ao ciclo estral, foi verificado que o útero de gatas em diestro apresenta maior expressão gênica e proteica de Kiss, como também maior expressão de fatores pró-angiogênicos e de Mif e Il6 (P<0,05). Em contrapartida, Kiss1R apresentou maior expressão uterina na fase de proestro/estro, semelhante ao observado para a imunomarcação dos fatores inflamatórios (P<0,05). Para a maioria desses fatores houve correlação gênica significativa e positiva com a expressão uterina de Kiss e/ou Kiss1r, além de ter ocorrido correlação gênica positiva entre Kiss e seu receptor no útero de gatas ao longo do ciclo estral (P<0,05). Gatas com piometra apresentaram aumento da expressão uterina de Kiss e Kiss1R (P<0,05), enquanto ocorreu redução significativa da expressão de RNAm para Vegf, Pigf, Mif e Il6, e aumento da expressão de Tnf. Em relação à interface materno-fetal, a gestação em gatas aumenta a expressão uterina de Kiss e Kiss1r , principalmente no final da gestação, além de aumentar a expressão endometrial de MIF, Vegf, Il10 e Tnf (P<0,05), diferente de Pigf que apresentou redução da expressão gênica (P<0,05). Na placenta, o sistema KissKiss1R foi expresso no meio e final da gestação, com maior expressão gênica de Kiss1r ao final da gestação. A expressão gênica e/ou proteica placentária de VEGF, Flk-1, INFy, TNF, IL6 e IL10 foi maior no meio da gestação (P<0,05), diferente de Pigf que apresentou maior expressão de RNAm no final da gestação (P<0,05). Além disso, na placenta houve correlação gênica positiva entre Kiss e Tnf, e negativa entre Kiss1r e Inf, Il6 e Il10 (P<0,05), embora não tenha ocorrido correlação significativa entre Kiss e seu receptor (P>0,05). Em relação ao ovário, expressão moderada a intensa de Kiss e dos mediadores angiogênicos e imunológicos foi observada em todos os folículos, enquanto Kiss1R apresentou expressão fraca e principalmente em folículos primordiais. Na luteogênese, a gestação aumentou a expressão luteal de Kiss, como também houve maior imunomarcação em corpos lúteos (CLs) maduros de gatas gestantes e não gestantes. Kiss1R, entretanto, apresentou maior expressão proteica somente nos CLs maduros de gatas gestantes (P<0,05). A expressão proteica de MIF foi maior em CLs maduros de gatas gestantes e não gestantes em relação aos CLs vacuolizados e corpos albicans (P<0,05), enquanto a gestação reduziu a expressão gênica luteal de Mif (P<0,05). Os corpos albicans apresentaram menor expressão de Kiss, Kiss1r, Vegf e Mif em relação aos CLs de animais gestantes e não gestantes. Conclui-se que o sistema Kiss/Kiss1R é expresso no útero, ovário e placenta da gata doméstica, sendo que o perfil de expressão do mesmo sofre influência não somente do ciclo estral, com maior expressão durante o diestro, como também da gestação, que modulou positivamente a expressão uterina e luteal de Kiss e/ou Kiss1R. Além disso, a expressão de Kiss/Kiss1r apresenta correlação gênica com a expressão de mediadores angiogênicos e imunológicos no sistema genital da gata doméstica, sendo que os mesmos variam o seu perfil de expressão de acordo com a fase do ciclo estral e o estágio luteal e gestacional.

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Kisspeptin (Kp) is a neuropeptide encoded by the Kiss1 gene that stimulates the hypothalamic release of GnRH via its Kiss1R receptor. Failures in its expression results in hypogonadotrophic hypogonadism in humans and animals and has therefore been considered the key peptide of reproduction. However, failures in peripheral Kp signaling, especially in the genital system, also cause infertility. However, studies on the expression profile of the Kiss/Kiss1R system in the genital system and its relationship with immunological and angiogenic mediators in physiological and pathological conditions are still scarce, especially in the domestic cat that there is no study. In this sense, this study aimed to evaluate the expression profile of Kp and its receptor (Kiss1R) in the uterus, ovary and placenta of healthy cats (Felis catus) and with pyometra and its relationship with the expression of pro-angiogenic (VEGF, Flk-1, and PIGF) and immunological (INF, MIF, TNF, IL6, and IL10) factors. For this, the work was carried out in three stages: in CHAPTER 1, the expression of the Kiss / Kiss1R system and of the angiogenic and immunological mediators in the uterus of cats throughout the estrous cycle and in the condition of pyometra was evaluated; in CHAPTER 2, the influence of pregnancy on the uterine expression of the Kiss/Kiss1R system and of the angiogenic and immunological mediators was evaluated, as well as the expression profile in the maternal-fetal interface throughout pregnancy; and in CHAPTER 3, the profile of the Kiss / Kiss1R system and of the angiogenic and immunological mediators during folliculogenesis, luteogenesis and luteal regression of cyclical and pregnant cats was evaluated. For the study, 109 animals were used and divided into the groups of proestrus/estrus (N = 20), diestrus (N = 41), anestrus (N = 32), pyometra (N = 4) and pregnant (N = 12) after clinical and histopathological evaluation and hormonal dosage of estradiol (E2) and progesterone (P4) (CEUA 005/18). The uterus, placenta and ovary samples were evaluated for the expression of Kiss, Kiss1R, VEGF, Flk-1, PIGF, INF, MIF, TNF, IL6 and IL10 by immunohistochemistry and qPCR. The data were analyzed by ANOVA followed by the Student Newman Keuls test (SNK) or Student t test. In relation to the estrous cycle, it was found that the uterus from cats in diestrus has higher gene and protein expression of Kiss, as well as higher expression of pro-angiogenic factors and Mif and Il6 (P <0.05). In contrast, Kiss1R showed higher uterine expression in the proestrus / estrus phase, similar to that observed for the immunostaining of inflammatory factors (P <0.05). For most of these factors there was a significant and positive gene correlation with the uterine expression of Kiss and / or Kiss1r, in addition to the positive gene correlation between Kiss and its receptor in the uterus from cats throughout the estrous cycle (P <0.05). Cats with pyometra showed higher uterine expression of Kiss and Kiss1R (P <0.05), while there was a significant reduction in mRNA expression for Vegf, Pigf, Mif and Il6, and increased expression of Tnf. In relation to the maternalfetal interface, pregnancy in cats increases the uterine expression of Kiss and Kiss1r, especially at the end of pregnancy, in addition to increasing the endometrial expression of MIF, Vegf, Il10 and Tnf (P <0.05), differently of Pigf that showed reduced gene expression (P <0.05). In the placenta, the Kiss-Kiss1R system was expressed in the middle and end of pregnancy, with higher Kiss1r gene expression at the end of pregnancy. Placental gene and/or protein expression of VEGF, Flk-1, INFy, TNF, IL6 and IL10 was higher in the middle of pregnancy (P <0.05), unlike Pigf which showed higher mRNA expression at the end of pregnancy (P <0.05). Furthermore, in the placenta there was a positive gene correlation between Kiss and Tnf, and negative between Kiss1r and Inf, Il6 and Il10 (P <0.05), although there was no significant correlation between Kiss and its receptor (P> 0.05). In relation to the ovary, moderate to intense expression of Kiss and of the angiogenic and immunological mediators was observed in all follicles, while Kiss1R showed weak expression and mainly in primordial follicles. In luteogenesis, pregnancy increased Kiss luteal expression, as well as higher immunostaining in mature corpus luteum (CLs) from pregnant and non-pregnant cats. Kiss1R, however, showed higher protein expression only in the mature CLs of pregnant cats (P <0.05). MIF protein expression was higher in mature CLs of pregnant and non-pregnant cats compared to vacuolated CLs and corpus albicans (P <0.05), while pregnancy reduced the luteal gene expression of Mif (P <0.05). Corpus albicans showed lower expression of Kiss, Kiss1r, Vegf and Mif in relation to CLs from pregnant and non-pregnant animals. It is concluded that the Kiss-Kiss1R system is expressed in the uterus, ovary and placenta of the domestic cat, and its expression profile is influenced not only by the estrous cycle, with higher expression during diestrus, but also during pregnancy, which positively modulated the uterine and luteal expression of Kiss and/or Kiss1R. In addition, the Kiss-Kiss1r expression has gene correlation with the expression of angiogenic and immunological mediators in the genital system of the domestic cat, and they vary their expression profile according to the estrous cycle phase and the luteal and gestational stage.

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