Phenotypic and genotypic characterization of Brucella abortus biovar 4 isolates from cattle in Brazil / Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Brucella abortus biovar 4 em bovinos no Brasil

ABSTRACT: The aim of the present study was to characterize (phenotypically and genotypically) two strains of Brucella abortus identified as belonging to biovar 4 isolated from cattle in Brazil. The strains were isolated from cervical bursitis from cattle in the states of Pará and Rio Grande do Sul, respectively. In the phenotypic identification, the isolates were positive in CO2 requirement, produced H2S, were resistant to basic fuchsin (20 µg / mL) and sensitive to thionin (20 µg / mL and 40 µg / mL) and presented M surface antigen, but A surface antigen is absent. The isolates were positive in the PCR for the bcsp31 gene (genus-specific) and in the AMOS-enhanced PCR, both isolates showed a band profile consistent with B. abortus biovar 1, 2 or 4. Moreover, both isolates also showed restriction patterns identical to the reference strain when tested by the omp2b PCR-RFLP. In genotyping using Multiple Locus Variable Number of Tandem Repeat (VNTR) Analysis - MLVA (MLVA16), the isolates showed differences in several loci (Bruce42, Bruce19, Bruce04, Bruce16 and Bruce30); by Multiple Locus Sequence Typing (MLST), they also exhibited differences in sequence type (ST), strain 16/02 ST1 (2-1-1-2-1-3-1-1-1) and strain 128/11 ST (22-1-1 -8-9-3-1-1-1). The extensive typing of B. abortus strains isolated from cattle in Brazil using different approaches confirmed the occurrence of rare B. abortus biovar 4 in the country.

RESUMO: O objetivo do presente estudo foi caracterizar (fenotipicamente e genotipicamente) duas cepas de Brucella abortus identificadas como pertencentes ao biovar 4 isolada de bovinos no Brasil. As cepas foram isoladas de bursite cervical de bovinos dos estados do Pará e Rio Grande do Sul, respectivamente. Na identificação fenotípica, os isolados foram positivos na exigência de CO2, produziram H2S, foram resistentes à fucsina básica (20 µg / mL) e sensíveis à tionina (20 µg / mL e 40 µg / mL) e apresentaram antígeno de superfície M, mas o antígeno de superfície A foi ausente. Os isolados foram positivos na PCR para o gene bcsp31 (gênero específico) e na PCR - AMOS, ambos os isolados apresentaram perfil de banda consistente com B. abortus biovar 1, 2 ou 4. Além disso, ambos os isolados também apresentaram padrões de restrição idêntica à cepa de referência quando testada pelo omp2b PCR-RFLP. Na genotipagem usando Multiple Locus Variable Number of Tandem Repeat (VNTR) - MLVA (MLVA16), os isolados apresentaram diferenças em vários loci (Bruce42, Bruce19, Bruce04, Bruce16 e Bruce30); no Multiple Locus Sequence Typing (MLST), os isolados também exibiram diferenças na sequência tipo (ST), amostra 16/02 ST1 (2-1-1-2-1-3-1-1-1) e amostra 128/11 ST (22-1-1-8-9-3-1-1-1). A extensa tipagem de cepas de B. abortus isoladas de bovinos no Brasil por diferentes abordagens confirmou a rara ocorrência de B. abortus biovar 4 no país.

Phenotypic and genotypic characterization of Brucella abortus biovar 4 isolates from cattle in Brazi / Caracterização fenotípica e genotípica de isolados de Brucella abortus biovar 4 em bovinos no Brasil

The aim of the present study was to characterize (phenotypically and genotypically) two strains of Brucella abortus identified as belonging to biovar 4 isolated from cattle in Brazil. The strains were isolated from cervical bursitis from cattle in the states of Pará and Rio Grande do Sul, respectively. In the phenotypic identification, the isolates were positive in CO2 requirement, produced H2S, were resistant to basic fuchsin (20 µg / mL) and sensitive to thionin (20 µg / mL and 40 µg / mL) and presented M surface antigen, but A surface antigen is absent. The isolates were positive in the PCR for the bcsp31 gene (genus-specific) and in the AMOS-enhanced PCR, both isolates showed a band profile consistent with B. abortus biovar 1, 2 or 4. Moreover, both isolates also showed restriction patterns identical to the reference strain when tested by the omp2b PCR-RFLP. In genotyping using Multiple Locus Variable Number of Tandem Repeat (VNTR) Analysis - MLVA (MLVA16), the isolates showed differences in several loci (Bruce42, Bruce19, Bruce04, Bruce16 and Bruce30); by Multiple Locus Sequence Typing (MLST), they also exhibited differences in sequence type (ST), strain 16/02 ST1 (2-1-1-2-1-3-1-1-1) and strain 128/11 ST (22-1-1 -8-9-3-1-1-1). The extensive typing of B. abortus strains isolated from cattle in Brazil using different approaches confirmed the occurrence of rare B. abortus biovar 4 in the country.

O objetivo do presente estudo foi caracterizar (fenotipicamente e genotipicamente) duas cepas de Brucella abortus identificadas como pertencentes ao biovar 4 isolada de bovinos no Brasil. As cepas foram isoladas de bursite cervical de bovinos dos estados do Pará e Rio Grande do Sul, respectivamente. Na identificação fenotípica, os isolados foram positivos na exigência de CO2, produziram H2S, foram resistentes à fucsina básica (20 µg / mL) e sensíveis à tionina (20 µg / mL e 40 µg / mL) e apresentaram antígeno de superfície M, mas o antígeno de superfície A foi ausente. Os isolados foram positivos na PCR para o gene bcsp31 (gênero específico) e na PCR - AMOS, ambos os isolados apresentaram perfil de banda consistente com B. abortus biovar 1, 2 ou 4. Além disso, ambos os isolados também apresentaram padrões de restrição idêntica à cepa de referência quando testada pelo omp2b PCR-RFLP. Na genotipagem usando Multiple Locus Variable Number of Tandem Repeat (VNTR) - MLVA (MLVA16), os isolados apresentaram diferenças em vários loci (Bruce42, Bruce19, Bruce04, Bruce16 e Bruce30); no Multiple Locus Sequence Typing (MLST), os isolados também exibiram diferenças na sequência tipo (ST), amostra 16/02 ST1 (2-1-1-2-1-3-1-1-1) e amostra 128/11 ST (22-1-1-8-9-3-1-1-1). A extensa tipagem de cepas de B. abortus isoladas de bovinos no Brasil por diferentes abordagens confirmou a rara ocorrência de B. abortus biovar 4 no país.

PREVALÊNCIA DE BRUCELOSE EM REBANHOS BOVINOS DE ABATE DA REGIÃO NORTE DO TOCANTINS E IMPLICAÇÕES EM ALTERAÇÕES ANATOMOPATOLÓGICAS NA INSPEÇÃO POST MORTEM DA CARCAÇA

A brucelose é uma doença infectocontagiosa cosmopolita tendo impacto sanitário e econômico, tanto para a produção animal quanto para a saúde pública. Os bovinos são reservatórios do agente causador, Brucella abortus, que direta ou indiretamente, podem infectar o ser humano e outros animais, caracterizando-se, portanto, como zoonose. O objetivo deste trabalho foi determinar o nível da infecção por brucelose nos bovinos abatidos no norte do Tocantins, entre outubro e novembro de 2019 e a ocorrência de alterações post mortem sugestivas de brucelose nas carcaças. Foram coletadas 3.122 amostras de soros de animais abatidos em estabelecimentos sob regime de Inspeção Estadual e Federal no município de Araguaína, Tocantins. Foi realizada a prova de triagem Antígeno Acidificado Tamponado (AAT) e de confirmação 2-mercaptoetanol (2-ME) conforme preconiza o Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA). Da totalidade de amostras coletadas, 2.871 foram consideradas neste estudo. Foram eliminadas amostras de fêmeas com idade inferior a 24 meses ou por serem oriundas de outra região do estado do Tocantins. Das amostras avaliadas, 37,31% (1.071/2.871) foram reativas na prova do AAT, destas 26,14% (280/1.071) foram também positivas no teste do 2-ME; o que representa 9,75% (280/2.871) do total avaliado. A prevalência em machos foi de 4,91% (141/2.871) e em fêmeas foi de 4,84% (139/2.871). Como este estudo avaliou animais em frigorífico, a maior prevalência de fêmeas positivas pode estar relacionada com o descarte de animais com problemas reprodutivos na bovinocultura do estado. Não foram observadas alterações anatomopatológicas de bursite cervical ou artrite sugestivas de brucelose em nenhuma das carcaças de animais amostrados no presente estudo. Considerando resultados oficiais do estado do Tocantins e estudos anteriores, foi possível observar que o nível de infecção em animais abatidos no norte do estado se mantém dentro do intervalo de confiança. Mesmo com índice de positividade inferior a 10%, ações para promoção de sanidade animal e, nesse caso, de saúde pública, precisam ser aprimoradas na região, gerando redução no risco à saúde de trabalhadores diretamente ligados aos animais e de consumidores de produtos de origem animal.

Brucellosis is a cosmopolitan infectious disease with a health and economic impact, both for animal production and public health. Cattle are reservoirs of the causative agent, Brucella abortus, which can directly or indirectly infect humans and other animals, and are therefore characterized as zoonosis. The objective of this study was to determine the level of brucellosis infection in cattle slaughtered in northern Tocantins, between October and November 2019 and the occurrence of post mortem changes suggestive of brucellosis in the carcasses. 3,122 serum samples were collected from animals slaughtered in establishments under the State and Federal Inspection regime in the municipality of Araguaína, Tocantins. The Buffered Acidified Antigen (AAT) and confirmation 2-mercaptoethanol (2-ME) screening test was carried out as recommended by the Ministry of Agriculture, Livestock and Supply (MAPA). Of the totality of samples collected, 2,871 were considered in this study. Samples from females under 24 months of age or from other regions of the state of Tocantins were eliminated. Of the samples evaluated, 37.31% (1,071 / 2,871) were reactive in the AAT test, of these 26.14% (280 / 1,071) were also positive in the 2-ME test; which represents 9.75% (280 / 2,871) of the total evaluated. The prevalence in males was 4.91% (141 / 2,871) and in females it was 4.84% (139 / 2,871). As this study evaluated animals in a refrigerator, the higher prevalence of positive females may be related to the disposal of animals with reproductive problems in the state's cattle industry. No anatomopathological alterations of cervical bursitis or arthritis suggestive of brucellosis were observed in any of the carcasses of animals sampled in the present study. Considering official results from the state of Tocantins and previous studies, it was possible to observe that the level of infection in animals slaughtered in the north of the state remains within the confidence interval. Even with a positivity index below 10%, actions to promote animal health and, in this case, public health, need to be improved in the region, generating a reduction in the health risk of workers directly linked to animals and consumers of products of origin. animal.

Anatomopatologia de bursite cervical (oncocercose) encontrada em bovinos abatidos sob inspeção estadual no estado do Rio de Janeiro / Anatomopathology of onchocerciases (cervical bursitis) in slaughtered bovine in the north of Rio de Janeiro state

A patologia descritiva das lesões em animais domésticos de açougue permite enriquecer a literatura médica veterinária especializada em inspeção sanitária de carnes, assim como subsidiar tecnicamente os profissionais inspetores. A oncocercose é uma parasitose causada pelo nematódeo Onchocerca sp,, sendo que a espécie O. gutturosa é a que mais acomete bovinos na América do Sul. Foram avaliados, pelo exame anatomopatológico, dois casos de lesões localizadas no ligamento nucal de bovinos abatidos para o consumo. A macroscopia de um caso revelou bursite crônica, representada por grande quantidade de líquido citrino e viscoso e, ainda, muitos corpúsculos livres, elípticos e achatados desprovidos de raiz (arrizo). A microscopia dessas estruturas evidenciou moldes de fibrinas amorfos e eosinofílicos. O segundo caso foi caracterizado por bursite aguda, e a microscopia das lesões ligamentar e periligamentar revelou granulomas epitelioides com reação gigantocitária, centralizados por formações semelhantes ao Onchocerca sp.(AU)

The descriptive pathology of lesions in butcher's domestic animals contribute to enrich literature specialized in veterinary sanitary inspection of meat as well as to guide professional meat inspectors. Oncorcecose is a parasitic disease caused by the nematode Onchocerca sp, and the O. gutturosa species affects cattle in South America. Two cases of lesions located in the nuchal ligament of cattle slaughtered for consumption were evaluated by pathological examination. Macroscopic analysis revealed a case of chronic bursitis represented by a large amount of clear and viscous liquid, and also many free, elliptical and flat corpuscles. Microscopy showed arrizoides molds fibrin, amorphous, and eosinophilic structures. The second case was characterized by acute bursitis and microscopic lesions and ligament periligamentous revealed multiple epithelioid granulomas and giant cells centered on formations similar to Onchocerca sp.(AU)

Recebimento de gêneros correlação entre prevalência de brucelose e condenações por bursite cervical em bovinos abatidos sob inspeção federal no Estado de Mato Grosso / Receiving genres and prevalence of brucellosis and convictions for cervical bursitis in cattle slaughtered under federal inspection in the State of Mato Grosso

A bursite cervical em bovinos é uma reação inflamatória que pode ser detectada após o abate no exame visual das meias carcaças. Lesões deste gênero podem ser sugestivas de infecção por Brucella abortus em bovinos, agente zoonótico causador da brucelose. A brucelose bovina é uma das zoonoses de maior importância nas Américas, não somente por sua implicação com a saúde humana, mas pelas sérias perdas que acarreta para a criação industrial, reflexo de seu alto poder de transmissibilidade aliado aos sintomas que afetam principalmente a função reprodutiva do rebanho. A Região Centro Oeste do Brasil é a maior responsável pela produção nacional de carne bovina com destaque para o estado do Mato Grosso (IBGE, 2007). O objetivo deste trabalho foi, além de estimar o tamanho da população de bovinos portadores de bursite em Mato Grosso, apresentar a prevalência de condenações pelo Serviço de Inspeção Federal (SIF) de bursite bovina no estado comparando-a aos dados de ocorrência de brucelose nesta região. (AU)

Brucelose em bovinos com bursite cervical diagnosticada em abatedouro sob inspeção federal

Epidemiological study case-control type carried out in Triângulo abattoir in the city of Uberlândia in the State of Minas Gerais, Brazil, has identified the ocorrence of brucelosis in bovine with supraspinous bursitis, slaughtered from August, 1993 to July, 1994. To diagnose brucelosis "Rapid Agglutination" test was performed on plate with the padronizated antigen count considered positive over 100. The bursas examined were identified by technicians of the Federal Inspection Service based on the presence of ten standardized morphological characteristics. Using the case-control design, 30 animals identified as having supraspinous bursitis were compared with 90 animals randomly selected, without bursitis- but with other characteristics (sex, background, lot, conformation) similar to those affected. All animals were, then, tested for brucelosis. Within the animals with bursitis, 13.33% were found to have brucelosis against 5.56% in the control group (P=0.115). The presence of pus, nodules and viscous fluid was found only among animals who tested negative for brucelosis. The odds ratio found between brucelosis and supraspinous bursitis was 2.61 (P>0.05). As a conclusion its suggested attention of technicians and profesionals employed in slaughter houses aiming to reduce the risk of human infection, as well as of carcasses, equipment and installations contamination.

Estudo epidemiológico tipo caso-controle realizado em Uberlândia, Minas Gerais (MG), Brasil, pesquisou a ocorrência de brucelose em bovinos com bursite cervical, abatidos no período de agosto de 1993 a julho de 1994. O diagnóstico sorológico de brucelose foi realizado mediante a prova de soroaglutinação rápida em placa. Os casos de bursite foram identificados por técnico do Serviço de Inspeção Federal (SIF), com base em características morfológicas, previamente padronizadas. Para a determinação da "Razão de Odds" e do risco atribuível entre bursite e brucelose, utilizaram-se 30 animais com o quadro e, como controle, 90 bovinos sem a patologia. Dos animais com bursite, 13,3% eram brucélicos, contra 5,6% do grupo controle (P=0,115). Dentre aqueles com brucelose e bursite, as bolsas continham fibrina (40,0%) e projeções digitiformes (33,3%); apenas nas bursites dos sorologicamente negativos encontraram-se presença de pus, de nódulos e de líquido viscoso. A "Razão de Odds" encontrada entre brucelose e bursite foi da ordem de 2,61, não sendo demonstrado associação entre bursite cervical e sorologia positiva para brucelose (P>0,05). No âmbito da Saúde Pública e ocupacional, sugere-se a atenção de técnicos e profissionais, visando diminuir o risco de infecção e evitar contaminação de carcaças, equipamentos e instalações.

Brucelose em bovinos com bursite cervical diagnosticada em abatedouro sob inspeção federal

Epidemiological study case-control type carried out in Triângulo abattoir in the city of Uberlândia in the State of Minas Gerais, Brazil, has identified the ocorrence of brucelosis in bovine with supraspinous bursitis, slaughtered from August, 1993 to July, 1994. To diagnose brucelosis "Rapid Agglutination" test was performed on plate with the padronizated antigen count considered positive over 100. The bursas examined were identified by technicians of the Federal Inspection Service based on the presence of ten standardized morphological characteristics. Using the case-control design, 30 animals identified as having supraspinous bursitis were compared with 90 animals randomly selected, without bursitis- but with other characteristics (sex, background, lot, conformation) similar to those affected. All animals were, then, tested for brucelosis. Within the animals with bursitis, 13.33% were found to have brucelosis against 5.56% in the control group (P=0.115). The presence of pus, nodules and viscous fluid was found only among animals who tested negative for brucelosis. The odds ratio found between brucelosis and supraspinous bursitis was 2.61 (P>0.05). As a conclusion it’s suggested attention of technicians and profesionals employed in slaughter houses aiming to reduce the risk of human infection, as well as of carcasses, equipment and installations contamination.

Estudo epidemiológico tipo caso-controle realizado em Uberlândia, Minas Gerais (MG), Brasil, pesquisou a ocorrência de brucelose em bovinos com bursite cervical, abatidos no período de agosto de 1993 a julho de 1994. O diagnóstico sorológico de brucelose foi realizado mediante a prova de soroaglutinação rápida em placa. Os casos de bursite foram identificados por técnico do Serviço de Inspeção Federal (SIF), com base em características morfológicas, previamente padronizadas. Para a determinação da "Razão de Odds" e do risco atribuível entre bursite e brucelose, utilizaram-se 30 animais com o quadro e, como controle, 90 bovinos sem a patologia. Dos animais com bursite, 13,3% eram brucélicos, contra 5,6% do grupo controle (P=0,115). Dentre aqueles com brucelose e bursite, as bolsas continham fibrina (40,0%) e projeções digitiformes (33,3%); apenas nas bursites dos sorologicamente negativos encontraram-se presença de pus, de nódulos e de líquido viscoso. A "Razão de Odds" encontrada entre brucelose e bursite foi da ordem de 2,61, não sendo demonstrado associação entre bursite cervical e sorologia positiva para brucelose (P>0,05). No âmbito da Saúde Pública e ocupacional, sugere-se a atenção de técnicos e profissionais, visando diminuir o risco de infecção e evitar contaminação de carcaças, equipamentos e instalações.

Soroprevalência de Brucelose em Eqüinos com Bursite Cervical ou Nucal

Foi realizada uma análise para brucelose em 52 eqüinos, machos e fêmeas, portadores de bursite de cernelha ou nucal, fistuladas ou não. O sangue foi colhido por punção da veia jugular externa e encaminhado ao laboratório de análises. Após a retração do coagulo as amostras de sangue foram centrifugadas a 3000 rpm, por 15 minutos, e submetidas à prova de soroaglutinação rápida, em placa para brucelose. Foram considerados positivos os eqüinos com titulação igual ou superior a 1/50, sendo verificado 38 casos (73,1%) positivos. Dos animais portadores de fístulas, 21 (91,3%) foram considerados soropositivos. Em 17 propriedades (53,7%) com criação simultânea de eqüinos e bovinos, foi diagnosticada brucelose também em bovinos.

Aglutininas anti-Brucella abortus no soro e em secreção de bursite cervical em eqüinos / Anti-Brucella abortus agglutinins in serum and secretion of fistulous withers in horses

Fistulous wither secretions from three horses were tested by the plate agglutination (PAT), tube agglutination (SAT), buffered plate-Rose Bengal (RBPT) and 2-mercaptoethanol (2-ME) tests, comparatively with standard agglutination tests. In the modified tests, titers were increased in the PAT, SAT and 2-ME tests and positive reaction was observed in RBPT. Brucella abortus was isolated from the secretion of fistulous withers collected from one animal. These results suggest that the modified tests may be used as alternative tests to diagnose brucellosis in horses with fistulous withers.(AU)

Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão: uma abordagem sorológica, imunohistoquímica, microbiológica e molecular

GALVÃO, N. R. Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão: uma abordagem sorológica, imunohistoquímica, microbiológica e molecular. [Brucella sp. like a bioagent of cervical bursitis in cattle slaughtered in São Luís, Maranhão: a serological approach, immunohistochemistry, and molecular microbiological]. 2012. 82f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) Universidade Estadual do Maranhão, São Luís, 2012. RESUMO A brucelose é uma antropozoonose de evolução preferencialmente crônica, caracterizada pela infecção do sistema fagocítico mononuclear, por bactérias do gênero Brucella. Considerando a hipótese do abate de animais infectados e o seu risco potencial ao homem, a presente pesquisa buscou avaliar a Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão. Foram coletadas amostras de sangue, com e sem E.D.T.A (ácido etilenodiamino tetra-acético), fragmentos de bolsa cervical e linfonodos correspondentes de 47 bovinos abatidos em frigoríficos sob Inspeção Municipal, que apresentaram bursite cervical postmortem. A partir deste material coletado estimou-se a freqüência do bioagente Brucella sp. nas diferentes abordagens diagnósticas: sorologia, histopatologia, imunohistoquímica e PCR. Na sorologia de animais acima de 24 meses, 85,1% das amostras foram reagentes ao teste do AAT, confirmando-se a positividade em 78,7% através dos testes de soroaglutinação lenta e 2-mercaptoetanol. Na histopatologia foi possível observar que a maioria das amostras de bolsa cervical e linfonodos apresentaram infiltrado inflamatório linfohistioplasmocitário, mais comumente associado ao quadro crônico da doença. Todas as amostras de sangue total coletadas foram submetidas a PCR convencional, não sendo verificada a amplificação de produto de DNA compatível com Brucella sp. As 47 amostras coletadas foram submetidas ao isolamento bacteriano, sendo, posteriormente, efetuada a PCR a partir de tecidos (bolsa cervical e linfonodos correspondentes). Nesta PCR, evidenciou-se que 63,8% das amostras apresentaram um amplificado de 223pb, condizentes com o gênero Brucella sp. As amostras nas quais foram confirmadas o gênero Brucella, foram submetidas ao PCR multiplex AMOS ENHANCED, objetivando verificar quais espécies desta bactéria estavam presentes nas amostras analisadas, constatou-se que em 28,0% foram identificadas duas bandas de 498 e 178pb, correspondentes ao biovar 1, 2, 4; em 30,0% das amostras foi identificada somente uma banda de 178pb, correspondente ao biovar 3, 5, 6, 9; 6,0% das amostras foram negativas na PCR multiplex e em 36,0% não houve isolamento de colônias, demonstrando padrões diferenciados entre os amplificados. Os resultados obtidos com a conclusão deste estudo puderam fornecer subsídios para futuras publicações científicas, além de contribuir com dados para o entendimento epidemiológico, isolamento e caracterização das espécies de Brucella sp., que acometem o rebanho bovino maranhense. Palavras-chave: Brucella sp.; Brucelose bovina; Bursite cervical

Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão: uma abordagem sorológica, imunohistoquímica, microbiológica e molecular

Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão: uma abordagem sorológica, imunohistoquímica, microbiológica e molecular. [Brucella sp. like a bioagent of cervical bursitis in cattle slaughtered in São Luís, Maranhão: a serological approach, immunohistochemistry, and molecular microbiological]. 2012. 82f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) – Universidade Estadual do Maranhão, São Luís, 2012. RESUMO A brucelose é uma antropozoonose de evolução preferencialmente crônica, caracterizada pela infecção do sistema fagocítico mononuclear, por bactérias do gênero Brucella. Considerando a hipótese do abate de animais infectados e o seu risco potencial ao homem, a presente pesquisa buscou avaliar a Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão. Foram coletadas amostras de sangue, com e sem E.D.T.A (ácido etilenodiamino tetra-acético), fragmentos de bolsa cervical e linfonodos correspondentes de 47 bovinos abatidos em frigoríficos sob Inspeção Municipal, que apresentaram bursite cervical postmortem. A partir deste material coletado estimou-se a freqüência do bioagente Brucella sp. nas diferentes abordagens diagnósticas: sorologia, histopatologia, imunohistoquímica e PCR. Na sorologia de animais acima de 24 meses, 85,1% das amostras foram reagentes ao teste do AAT, confirmando-se a positividade em 78,7% através dos testes de soroaglutinação lenta e 2-mercaptoetanol. Na histopatologia foi possível observar que a maioria das amostras de bolsa cervical e linfonodos apresentaram infiltrado inflamatório linfohistioplasmocitário, mais comumente associado ao quadro crônico da doença. Todas as amostras de sangue total coletadas foram submetidas a PCR convencional, não sendo verificada a amplificação de produto de DNA compatível com Brucella sp. As 47 amostras coletadas foram submetidas ao isolamento bacteriano, sendo, posteriormente, efetuada a PCR a partir de tecidos (bolsa cervical e linfonodos correspondentes). Nesta PCR, evidenciou-se que 63,8% das amostras apresentaram um amplificado de 223pb, condizentes com o gênero Brucella sp. As amostras nas quais foram confirmadas o gênero Brucella, foram submetidas ao PCR multiplex AMOS – ENHANCED, objetivando verificar quais espécies desta bactéria estavam presentes nas amostras analisadas, constatou-se que em 28,0% foram identificadas duas bandas de 498 e 178pb, correspondentes ao biovar 1, 2, 4; em 30,0% das amostras foi identificada somente uma banda de 178pb, correspondente ao biovar 3, 5, 6, 9; 6,0% das amostras foram negativas na PCR multiplex e em 36,0% não houve isolamento de colônias, demonstrando padrões diferenciados entre os amplificados. Os resultados obtidos com a conclusão deste estudo puderam fornecer subsídios para futuras publicações científicas, além de contribuir com dados para o entendimento epidemiológico, isolamento e caracterização das espécies de Brucella sp., que acometem o rebanho bovino maranhense.

Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão: uma abordagem sorológica, imunohistoquímica, microbiológica e molecular

Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão: uma abordagem sorológica, imunohistoquímica, microbiológica e molecular. [Brucella sp. like a bioagent of cervical bursitis in cattle slaughtered in São Luís, Maranhão: a serological approach, immunohistochemistry, and molecular microbiological]. 2012. 82f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal) Universidade Estadual do Maranhão, São Luís, 2012. RESUMO A brucelose é uma antropozoonose de evolução preferencialmente crônica, caracterizada pela infecção do sistema fagocítico mononuclear, por bactérias do gênero Brucella. Considerando a hipótese do abate de animais infectados e o seu risco potencial ao homem, a presente pesquisa buscou avaliar a Brucella sp. como bioagente da bursite cervical em bovinos abatidos no Município de São Luís, Maranhão. Foram coletadas amostras de sangue, com e sem E.D.T.A (ácido etilenodiamino tetra-acético), fragmentos de bolsa cervical e linfonodos correspondentes de 47 bovinos abatidos em frigoríficos sob Inspeção Municipal, que apresentaram bursite cervical postmortem. A partir deste material coletado estimou-se a freqüência do bioagente Brucella sp. nas diferentes abordagens diagnósticas: sorologia, histopatologia, imunohistoquímica e PCR. Na sorologia de animais acima de 24 meses, 85,1% das amostras foram reagentes ao teste do AAT, confirmando-se a positividade em 78,7% através dos testes de soroaglutinação lenta e 2-mercaptoetanol. Na histopatologia foi possível observar que a maioria das amostras de bolsa cervical e linfonodos apresentaram infiltrado inflamatório linfohistioplasmocitário, mais comumente associado ao quadro crônico da doença. Todas as amostras de sangue total coletadas foram submetidas a PCR convencional, não sendo verificada a amplificação de produto de DNA compatível com Brucella sp. As 47 amostras coletadas foram submetidas ao isolamento bacteriano, sendo, posteriormente, efetuada a PCR a partir de tecidos (bolsa cervical e linfonodos correspondentes). Nesta PCR, evidenciou-se que 63,8% das amostras apresentaram um amplificado de 223pb, condizentes com o gênero Brucella sp. As amostras nas quais foram confirmadas o gênero Brucella, foram submetidas ao PCR multiplex AMOS ENHANCED, objetivando verificar quais espécies desta bactéria estavam presentes nas amostras analisadas, constatou-se que em 28,0% foram identificadas duas bandas de 498 e 178pb, correspondentes ao biovar 1, 2, 4; em 30,0% das amostras foi identificada somente uma banda de 178pb, correspondente ao biovar 3, 5, 6, 9; 6,0% das amostras foram negativas na PCR multiplex e em 36,0% não houve isolamento de colônias, demonstrando padrões diferenciados entre os amplificados. Os resultados obtidos com a conclusão deste estudo puderam fornecer subsídios para futuras publicações científicas, além de contribuir com dados para o entendimento epidemiológico, isolamento e caracterização das espécies de Brucella sp., que acometem o rebanho bovino maranhense.(AU)