Isolation and antimicrobial resistance of coagulase-negative staphylococci recovered from healthy tortoises in Minas Gerais, Brazil / Isolamento e resistência aos antimicrobianos de estafilococos coagulase negativos recuperados de jabutis saudáveis em Minas Gerais, Brasil

In the last few decades, there has been a global increase in the adoption of reptiles as companion animals, mainly turtles and tortoises. Considering the popularity of reptiles as pets in Brazil, and a notable lack of data about potentially pathogenic staphylococci in these animals, this study isolated and evaluate the antimicrobial susceptibility of staphylococcal species from healthy tortoises (Chelonoidis carbonaria) in Brazil. During a 12-month period (February 2019 to February 2020), cloacal swabs from 66 healthy tortoises were collected at the Wild Animals Screening Center in Belo Horizonte, Minas Gerais, Brazil. The swabs were plated onto mannitol salt agar for staphylococci isolation, and species identification was performed using MALDI-TOF MS. Antimicrobial susceptibility was investigated using the disk diffusion method, and the presence of the mecA gene was investigated by PCR to detect methicillin resistance. Of the tested animals, 72.7% were positive for staphylococcal isolation. All isolates were coagulase-negative staphylococci (CoNS), and Staphylococcus sciuri (81.3%), and S. xylosus (12.5%) were the most frequently isolated species. The majority of the isolates (56%) were resistant to at least one antimicrobial agent. A high frequency of resistance was observed for penicillin (35.5%) and tetracycline (29.1 %). All strains were susceptible to cefoxitin, chloramphenicol, ciprofloxacin, erythromycin, and gentamicin. All isolates were negative for the mecA gene. The present work suggests that healthy tortoises are mainly colonized by CoNS, especially S. sciuri. Half of the isolates were resistant to at least one antimicrobial, raising questions regarding the possible role of these animals as reservoirs of antimicrobial resistance genes.

Nas últimas décadas, houve um aumento global na adoção de répteis como animais de companhia, principalmente tartarugas e jabutis. Considerando a popularidade dos répteis como animais de estimação no Brasil e a notável falta de dados sobre estafilococos potencialmente patogênicos nesses animais, o objetivo deste estudo foi isolar e avaliar a susceptibilidade antimicrobiana de espécies estafilocócicas de jabutis (Chelonoidis carbonaria) saudáveis no Brasil. Durante um período de 12 meses (fevereiro de 2019 a fevereiro de 2020), suabes cloacais de 66 jabutis saudáveis foram coletados no Centro de Triagem de Animais Silvestres em Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil. Os suabes foram plaqueados em ágar manitol salgado para isolamento de estafilococos e a identificação das espécies foi realizada usando MALDI-TOF MS. A susceptibilidade aos antimicrobianos foi investigada pelo método de difusão em disco, e a presença do gene mecA foi investigada por PCR para detectar resistência à meticilina. Dos animais testados, 72,7% foram positivos para o isolamento estafilocócico. Todos os isolados eram estafilococos coagulase-negativos (CoNS), sendo Staphylococcus sciuri (81,3%) e S. xylosus (12,5%) as espécies mais frequentemente isoladas. A maioria dos isolados (56%) foi resistente a pelo menos um antimicrobiano. Alta frequência de resistência foi observada para penicilina (35,5%) e tetraciclina (29,1%). Todas as estirpes foram sensíveis à cefoxitina, cloranfenicol, ciprofloxacina, eritromicina e gentamicina. Todos os isolados foram negativos para o gene mecA. O presente trabalho sugere que jabutis saudáveis são colonizados principalmente por CoNS, especialmente S. sciuri. Metade dos isolados foram resistentes a pelo menos um antimicrobiano, levantando questões sobre o possível papel desses animais como reservatórios de genes de resistência aos antimicrobianos.

Antimicrobial resistance profile of Staphylococcus spp. isolates in cattle herds from Western Amazon / Perfil de resistência antimicrobiana de Staphylococcus spp. isolados em rebanhos leiteiros da Amazônia Ocidental

Staphylococcus is one of the most frequent etiological agents of bovine mastitis, causing economic losses to milk farming. This study aimed to describe the milk production and management practices in 15 herds located in three microregions of the State of Rondônia and to identify the antimicrobial resistance profile of 97 isolates of the genus Staphylococcus from these herds. The isolates were subjected to antimicrobial susceptibility tests using the agar diffusion method. Twenty-nine S. aureus isolates were selected to determine their minimum inhibitory concentration (MIC). In the farms studied, the breeding system was semi-intensive, with the Girolando breed being predominant. Milking was performed predominantly using a mechanical milking system (86.7%), twice a day (66.7%), in the presence of the calf (53.8%). The average number of lactating cows in the farms was 24, with an average milk production of 204.9 L d-1 and a milk productivity of 10.2 L animal-1 d-1. The use of antimicrobials for the treatment and prevention of bovine mastitis was reported for all properties, and therapy for dry cows was adopted in 80% of the herds. The percent susceptibility to antimicrobials ranged from 85.5% to 100% for S. aureus, 22.2% to 88.9% for coagulase-positive staphylococci (CPS), and 69.2% to 100% for coagulase-negative staphylococci (CNS), with the highest resistance frequencies for penicillin, ampicillin, and tetracycline. Among the S. aureus isolates, 100% susceptibility to oxacillin, cefalexin, and gentamicin was observed, and among the CNS isolates, 100% susceptibility to gentamicin was observed. None of the antimicrobials tested showed 100% in vitro effectiveness for CPS. CPS and CNS presented lower percentages of susceptibility to penicillin, ampicillin, and tetracycline than the S. aureus isolates. Twelve resistance patterns were detected, six of which were multiresistance patterns. The most prevalent resistance patterns were penicillin and ampicillin (PEN-AMP) and penicillin, ampicillin, and tetracycline (PEN-AMP-TET). Results of the MIC assay revealed that all 29 S. aureus isolates were susceptible to cephalothin, cefoxitin, tetracycline, and erythromycin, whereas 25 (86.2%) were susceptible to penicillin.(AU)

O gênero Staphylococcus destaca-se como um dos agentes etiológicos mais frequentes da mastite bovina, causando prejuízos econômicos à pecuária de leite. Este estudo teve o objetivo de descrever a produção de leite e práticas de manejo de 15 rebanhos localizados em três microrregiões do Estado de Rondônia, e identificar o perfil de resistência aos antimicrobianos de 97 isolados do gênero Staphylococcus provenientes destes rebanhos. Os isolados foram submetidos a testes de suscetibilidade a antimicrobianos, utilizandose a técnica de difusão em ágar. Foram selecionados 29 isolados de Staphylococcus aureus (S. aureus) para determinação da concentração inibitória mínima (CIM). Nas propriedades estudadas, o sistema de criação era semi-intensivo, com predomínio da raça Girolando. A ordenha era realizada predominantemente em sistema de ordenha mecânica (86,7%), duas vezes ao dia (66,7%) e com a presença do bezerro (53,8%). A média do número de vacas em lactação das propriedades era de 24 animais, com média de produção de leite de 204,9 L d-1 e produtividade de leite de 10,2 L animal-1 d-1. O uso de antimicrobianos para o tratamento e prevenção da mastite bovina foi relatado em todas as propriedades, sendo adotada a terapia da vaca seca em 80% dos rebanhos. A percentagem de susceptibilidade aos antimicrobianos variou de 85,5 a 100% para S. aureus, 22,2 a 88,9% para Staphylococcus coagulase positivos (SCP) e 69,2 a 100% para Staphylococcus coagulase negativos (SCN), sendo as maiores frequências de resistência para penicilina, ampicilina e tetraciclina. Entre os isolados de S. aureus foi observada 100% de susceptibilidade aos antimicrobianos oxacilina, cefalexina e gentamicina, e entre os isolados de SCN, 100% de susceptibilidade à gentamicina. Nenhum dos antimicrobianos testados apresentou 100% de efetividade in vitro para SCP. SCP e SCN apresentaram menores percentagens de susceptibilidade à penicilina, ampicilina e tetraciclina do que os isolados de S. aureus. Foram observados 12 padrões de resistência, sendo seis padrões de multirresistência. Os padrões de resistência mais prevalentes foram resistência à penicilina e ampicilina (PEN-AMP) e à penicilina, ampicilina e tetraciclina (PEN-AMP-TET). A determinação da CIM dos 29 isolados de S. aureus mostraram que todos foram susceptíveis à cefalotina, cefoxitina, tetraciclina e eritromicina, e 25 (86,2%) foram susceptíveis à penicilina.(AU)

Susceptibilidade a antimicrobianos de bactérias isoladas de leite caprino em Sergipe - Brasil / Antimicrobial susceptibility of bacteria isolated from goat milk in Sergipe - Brazil

Background: Bacterial resistance is a fundamental aspect of One Health, which is defined as the inseparable unity of animal, human, and environmental health. Epidemiological surveillance on the spread of bacterial resistance in animals and their derived products is essential given that meat, milk, and dairy products can carry resistant microorganisms that may reach humans through the food chain either by direct consumption or by handling the product. To eliminate the scarcity of information, it is necessary to characterize the epidemiological situation in terms of bacterial resistance in dairy production in northeastern Brazil. Thus, the objective of this study was to determine the frequency and antimicrobial susceptibility profile of bacteria isolated from goat milk samples from some municipalities in the Brazilian state of Sergipe. Materials, Methods & Results: The study included 28 goat farms in 4 municipalities of the Semiarid region of the State of Sergipe in Northeastern Brazil, namely Canindé de São Francisco (n = 11), Nossa Senhora da Glória (n = 6), Poço Verde (n = 6), and Porto da Folha (n = 5). All lactating does of each herd (n = 263) aged >1 year were, sampled randomly by non-probabilistic convenience sampling. Milk samples were collected from both teats, resulting in 526 samples in total. Bacterial culturing and isolation were performed, followed by antimicrobial susceptibility profile analysis to the following active principles: amoxicillin with and without clavulanic acid, amikacin, ampicillin with sulbactam, ciprofloxacin, cefalexin, cefalotin, ceftriaxone, chloramphenicol, doxycycline, enrofloxacin, gentamicin, levofloxacin, ofloxacin, penicillin G, and tetracycline. A survey form was used to obtain zootechnical information for each farm. Data are described as absolute and relative frequencies. The significance assessment of the differences between herd characteristics and bacterial isolation was performed using Pearson's chi-squared test. Bacterial isolation occurred in 15.4% (81/526) of the samples from 23.2% (61/263) of the goats. Escherichia coli (45.9% = 28/61), Staphylococcus caprae (16.4% = 10/61) and Enterococcus faecalis (11.5% = 7/61), were the most frequently isolated species. Bacterial isolations were predominant in dairy herds with up to 50 animals, production of 20 to 50 L/day and in the municipality of Porto da Folha. In terms of antimicrobial susceptibility, most isolates demonstrated resistance to penicillin and amoxicillin (88.5%), followed by ceftriaxone (23%), ofloxacin (23%), tetracycline (23%), doxycycline (19.7%), chloramphenicol (11.5%), levofloxacin (11.5%), ampicillin/ sulbactam (8.2%), amikacin (6.6%), cephalothin (4.9%), cephalexin (3.3%) and gentamicin (3.3%). Approximately 20% of the isolates were multidrug resistant, especially E. coli (50%) and S. aureus (16.7%). Discussion: E. coli was the most frequently isolated species from the samples. It is considered an environmental pathogen, and its high frequency in different herds indicates poor milking hygiene. E. coli also stood out as the species presenting the most multidrug-resistant (MDR) isolates (50%), with strains resistant to beta-lactams, aminoglycosides, quinolones, tetracycline, and chloramphenicol. Coagulase-negative staphylococci are recognized as a public health problem as they are etiological agents of various diseases and can easily acquire antimicrobial resistance genes. Although it was not the most frequently isolated species, S. aureus was the species with the second-highest frequency of MDR strains. The presence of MDR species is relevant and indicates the need for urgent action to reduce the dissemination of antimicrobial resistance. Relevant steps must be taken jointly by professionals involved in human, animal, and environmental health.

Valvular endocarditis associated with Helcococcus ovis in a cow in Southern Brazil / Endocardite vegetativa associada à Helcococcus ovis em uma vaca no Sul do Brasil

A 4-year-old cow with a history of breathing difficulty, progressive weight loss, and muffled heart sound was treated for a period of two weeks, but died and underwent necropsy examination. Macroscopic examination revealed heart with vegetative proliferative lesion firmly adhered to pulmonary valve, lungs with marked consolidation, and the presence of thrombus in vessels. There were grade II ulcers in abomasal mucosa associated to blood clots. Microscopic examination revealed marked thickening of the pulmonary valve due to the proliferation of fibrous connective tissue, inflammatory neutrophil infiltration, fibrin deposition, and a significant number of coccoid basophilic bacteria. Septic thromboemboli were present in the large and small pulmonary blood vessels suggestive of embolic pneumonia. The bacterial culture of the valve showed growth of small, nonhemolytic colonies that demonstrated satellitism to coagulase-negative staphylococci contaminating colonies, which were subjected to 16S gene sequencing and were compatible with Helcococcus ovis in GenBank. This was the first report of H. ovis endocarditis in cattle in South America.(AU)

Um bovino, fêmea, 4 anos com histórico de dificuldade respiratória, perda de peso progressiva e som cardíaco abafado, foi tratado por um período de duas semanas, porém veio a óbito e foi submetido a exame de necropsia. No exame macroscópico, notou-se coração com lesão proliferativa vegetativa firmemente aderida em valva pulmonar, pulmões com consolidação acentuada, e presença de trombos no interior de vasos. Havia ainda úlcera abomasal grau II em mucosa associada a coágulo sanguíneo. No exame microscópico notou-se acentuado espessamento da valva pulmonar por proliferação de tecido conjuntivo fibroso, infiltrado inflamatório de neutrófilos, deposição de fibrina e acentuado número de miríades bacterianas basofílicas cocoides. Tromboembolia séptica foi vista no interior de vasos pulmonares de pequeno e médio calibre, sugestivo de pneumonia embólica. Em cultivo bacteriano da valva notou-se crescimento de colônias pequenas, não hemolíticas que demonstravam satelitismo a colônias contaminantes de estafilococos coagulase negativa, essas foram submetidas ao sequenciamento do gene 16S e foram compatíveis com Helcococcus ovis no GenBank. Este foi o primeiro relato de endocardite por H. ovis em bovino na América do Sul.(AU)

Produção de biofilme por Staphylococcus coagulase negativa isolados de queijos e equipamentos / Biofilm production by coagulase-negative Staphylococci isolated from cheese and equipments

Biofilme é uma comunidade organizada de microrganismos que se forma em superfícies mal higienizadas, constituindo um mecanismo de defesa microbiana para permanência no ambiente. O objetivo do presente estudo foi investigar a capacidade de formação de biofilme de espécies de Staphylococcus coagulase negativa (SCN) isoladas de queijo Mussarela fatiado e de fatiadores de frios de estabelecimentos do município de Garanhuns-PE. De 103 isolados de SCN 56 (54,4%) foram negativos para produção de biofilme e 47 (45,6%) positivos, com a maior frequência de detecção nas espécies S. saprophyticus e S. cohnii subsp. urealyticum. Os resultados apontam para o potencial risco de contaminação cruzada de outros alimentos, uma vez que cepas bacterianas produtoras de biofilmes podem colonizar e persistir em superfícies de diversos equipamentos.(AU)

Produção de biofilme por Staphylococcus coagulase negativa isolados de queijos e equipamentos / Biofilm production by coagulase-negative Staphylococci isolated from cheese and equipments

Biofilme é uma comunidade organizada de microrganismos que se forma em superfícies mal higienizadas, constituindo um mecanismo de defesa microbiana para permanência no ambiente. O objetivo do presente estudo foi investigar a capacidade de formação de biofilme de espécies de Staphylococcus coagulase negativa (SCN) isoladas de queijo Mussarela fatiado e de fatiadores de frios de estabelecimentos do município de Garanhuns-PE. De 103 isolados de SCN 56 (54,4%) foram negativos para produção de biofilme e 47 (45,6%) positivos, com a maior frequência de detecção nas espécies S. saprophyticus e S. cohnii subsp. urealyticum. Os resultados apontam para o potencial risco de contaminação cruzada de outros alimentos, uma vez que cepas bacterianas produtoras de biofilmes podem colonizar e persistir em superfícies de diversos equipamentos.

Detecção de beta-lactamase por Staphylococcus coagulase-negativo isolados de queijo mussarela fatiados e fatiadores de frios / Beta-lactamase detection in coagulase-negative Staphylococci isolated from sliced mozzarella cheese and cold-cut slicers

A resistência de bactérias a antimicrobianos é considerada um problema de saúde pública, sendo a resistência aos beta-lactâmicos uma das mais importantes. O objetivo do presente estudo foi detectar a produção da enzima β-lactamase por isolados de Staphylococcus coagulase-negativo (SCN), provenientes de queijos Mussarela fatiados e equipamentos de fatiamento de frios. Os testes foram realizados utilizando discos impregnados com cefalosporina cromógena para detecção da β-lactamase. Dos 103 isolados de Staphylococcus spp. analisados, 55 (53%) produziram β-lactamase e 48 (47%) não produziram. Portanto, é possível inferir que SCN isolados neste estudo, podem inativar antimicrobianos β-lactâmicos e assim, exercer influência negativa na saúde pública, devido ao potencial em transferir genes de resistência antimicrobiana para outras bactérias.(AU)

Detecção de beta-lactamase por Staphylococcus coagulase-negativo isolados de queijo mussarela fatiados e fatiadores de frios / Beta-lactamase detection in coagulase-negative Staphylococci isolated from sliced mozzarella cheese and cold-cut slicers

A resistência de bactérias a antimicrobianos é considerada um problema de saúde pública, sendo a resistência aos beta-lactâmicos uma das mais importantes. O objetivo do presente estudo foi detectar a produção da enzima β-lactamase por isolados de Staphylococcus coagulase-negativo (SCN), provenientes de queijos Mussarela fatiados e equipamentos de fatiamento de frios. Os testes foram realizados utilizando discos impregnados com cefalosporina cromógena para detecção da β-lactamase. Dos 103 isolados de Staphylococcus spp. analisados, 55 (53%) produziram β-lactamase e 48 (47%) não produziram. Portanto, é possível inferir que SCN isolados neste estudo, podem inativar antimicrobianos β-lactâmicos e assim, exercer influência negativa na saúde pública, devido ao potencial em transferir genes de resistência antimicrobiana para outras bactérias.

Bacterial identification, somatic cell count, antimicrobial profile and toxigenic Staphylococcus strains search from mastitic cow milk samples on small farms properties

ABSTRACT: Bovine mastitis has a negative impact on milk production and can pose risks to public health. The present study aimed to evaluate the quality of bovine milk from small farms in the Botucatu/SP region. Somatic cell counts (SCC), identification of pathogens involved in mastitis, and sensitivity antimicrobial profile of staphylococci isolated were performed. The presence of enterotoxin encoding genes in isolates of staphylococci obtained from milk was investigated. Milk samples from individual mammary quarters of cows were submitted to the California mastitis test (CMT) and SCC. Of the 239 dairy cows from 21 dairy herds evaluated (mean = 11.4 animals/property), two cows (0.8%) presented clinical mastitis and 86 (35.9%) subclinical mastitis. Bacterial culture was performed in 177 quarter milk samples. Staphylococci were identified in 55 (31.1%), corynebacteria in 45 (25.4%), streptococci in 25 (14.1%) and coliforms in four (2.3%) milk samples. Average SCC from culture-positive samples was 1598x103 cells/mL, in case of staphylococci was 1362x103 cells/ml, streptococci was 2857x103 cells/mL, corynebacteria was 976x103 cells/mL and in the cases of coliforms 1161x103 cells/mL were obtained. Staphylococci showed a high sensitivity (>95%) to cephalothin, cotrimoxazole, enrofloxacin, and gentamicin, with a 41.2% resistance to penicillin and 11.8% to oxacillin. Both coagulase positive (CPS) and negative staphylococci (CNS) carried genes encoding enterotoxins in 21.6% of the first group and 41.9% in the second. The sea gene was the most detected 45.8% (n=24) between them, followed by seb with 29.2% and sec with 25.0%. The sed gene was not identified. We highlight the potential risk to public health in the possibility of strains of Staphylococcus spp. enterotoxin-producing genes that can cause staphylococcal food poisoning.

RESUMO: A mastite bovina impacta negativamente a produção leiteira e pode acarretar riscos à saúde pública. O presente estudo teve como objetivo a avaliação da qualidade do leite bovino proveniente de pequenas propriedades na região de Botucatu/SP. Foi realizada a contagem de células somáticas (CCS), identificação dos patógenos envolvidos nas mastites, e realizado o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos dos estafilococos isolados. Pesquisou-se a presença de genes codificadores de enterotoxinas em isolados de estafilococos obtidos a partir do leite mastítico. Amostras de leite de quartos mamários individuais de vacas foram submetidas ao California mastitis test (CMT) e à CCS. Das 239 vacas em lactação provenientes de 21 rebanhos leiteiros avaliados (média = 11,4 animais/propriedade), dois (0,8%) animais apresentaram mastite clínica e, 86 (35,9%) mastite subclínica. 177 amostras de leite foram cultivadas em ágar sangue bovino 5% e ágar MacConckey e obteve-se 55 (31,1%) Staphylococcus spp., 25 (14,1%) Streptococcus spp., 45 (25,4%) Corynebacterium spp. e quatro (2,3%) coliformes. A média da CCS das amostras procedentes de todos os quartos mamários infectados avaliados foi de 1598x103 células/mL, enquanto que nos casos que foram isolados Staphylococcus spp. foi de 1362x103 células/mL, Streptococcus spp. 2857x103 células/mL, Corynebacterium spp. de 976x103 células/mL e nos casos de coliformes 1161x103 células/mL. Os estafilococos revelaram grande sensibilidade (>95%) à cefalotina, cotrimoxazol, enrofloxacina e gentamicina, com resistência de 41,2% à penicilina e 11,8% à oxacilina. Tanto estafilococos coagulase positivos (ECP) como negativos (ECN) revelaram genes codificadores de enterotoxinas em 21,6% do primeiro grupo e 41,9% no segundo. O gene sea foi o mais detectado 45,8% (n=24), seguido pelo seb com 29,2% e sec com 25,0%. O gene codificador da sed não foi identificado. Frente aos resultados, destaca-se o risco potencial à saúde pública pela possibilidade de veiculação de linhagens de Staphylococcus spp. carreadores de genes produtores de enterotoxinas, podendo ocasionar toxi-infecções alimentares.

Frequency of microorganisms isolated at different stages of lactation and milk production loss associated with somatic cell count and to mastitis-causing pathogens / Frequência de microrganismos isolados em diferentes fases da lactação e perda de produção de leite associada à contagem de células somáticas e aos patógenos causadores de mastite

The aim of this study was to evaluate the frequency of isolation of agents causing subclinical mastitis in a herd and to estimate production losses associated with SCC> 200,000cells/mL. Three 7-day interval microbiological cultures were performed in all lactating animals from the same farm that was evaluated from June to July. To evaluate the negative and positive isolation frequencies between the lactation phases, a Chi-square test was performed. Simple linear regressions were performed to evaluate the lactation curve of animals grouped by pathogens isolated from negative cows in the microbiological culture and with SCC <200,000cells/mL. To estimate the production losses between the groups, regression coefficients were used. Results found in this experiment were: Culture-negative cows with SCC ≥ 200,000cells/mL, cows testing positive in milk culture, with SCC <200,000cells/mL and cows testing positive in milk culture, with SCC ≥ 200,000cells/mL. Milk production was -3.5; -0.5 and -4.27kg, respectively, when compared to culture-negative cows with SCC <200,000cells/mL. Cows infected with yeast cells, Coagulase-negative staphylococci (CNS), Staphylococcus aureus and environmental streptococci produced -3.42; -0.5; -0.168 and -2.5kg of milk when compared to culture-negative cows with SCC <200,000cells/mL. SCC indicates an inflammatory reaction in the mammary gland and it is directly associated with milk production losses and with presence of microorganisms in the mammary gland.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a frequência de isolamento de agentes causadores de mastite subclínica em um rebanho e estimar as perdas de produção associadas com CCS>200.000 cél./mL. Três cultivos microbiológicos intervalados por sete dias foram realizados em todos os animais em lactação da propriedade avaliada, no período de junho a julho. Para avaliar as frequências de isolamento negativo e positivo entre as fases da lactação, foi realizado um teste de qui-quadrado. Foram realizadas regressões lineares simples para avaliar a curva de lactação dos animais agrupados por patógenos isolados em relação a vacas negativas na cultura microbiológica e com CCS < 200.000 cél./mL. Os coeficientes das regressões foram utilizados para estimar as perdas de produção entre os grupos. Vacas com resultado negativo na microbiologia, mas com CCS ≥ 200.000 cél./mL, positivas na microbiologia com CCS < 200.000 cél./mL e positivas com CCS ≥ 200.000 cél./mL, produziram por dia, respectivamente, -3,5; -0,5 e -4,27kg de leite em relação às vacas negativas com CCS < 200.000 cél./mL. Vacas infectadas com células leveduriformes, Staphylococcus coagulase negativa, Staphylococcus aureus e Streptococcus ambientais produziram, respectivamente, -3,42; -0,5; -0,168 e -2,5kg de leite, comparadas a vacas negativas com CCS < 200.000 cél./mL. A CCS, indicativa de reação inflamatória, encontra-se diretamente associada às perdas de produção de leite, assim como a presença do microrganismo na glândula mamária.(AU)

Frequency of microorganisms isolated at different stages of lactation and milk production loss associated with somatic cell count and to mastitis-causing pathogens / Frequência de microrganismos isolados em diferentes fases da lactação e perda de produção de leite associada à contagem de células somáticas e aos patógenos causadores de mastite

The aim of this study was to evaluate the frequency of isolation of agents causing subclinical mastitis in a herd and to estimate production losses associated with SCC> 200,000cells/mL. Three 7-day interval microbiological cultures were performed in all lactating animals from the same farm that was evaluated from June to July. To evaluate the negative and positive isolation frequencies between the lactation phases, a Chi-square test was performed. Simple linear regressions were performed to evaluate the lactation curve of animals grouped by pathogens isolated from negative cows in the microbiological culture and with SCC <200,000cells/mL. To estimate the production losses between the groups, regression coefficients were used. Results found in this experiment were: Culture-negative cows with SCC ≥ 200,000cells/mL, cows testing positive in milk culture, with SCC <200,000cells/mL and cows testing positive in milk culture, with SCC ≥ 200,000cells/mL. Milk production was -3.5; -0.5 and -4.27kg, respectively, when compared to culture-negative cows with SCC <200,000cells/mL. Cows infected with yeast cells, Coagulase-negative staphylococci (CNS), Staphylococcus aureus and environmental streptococci produced -3.42; -0.5; -0.168 and -2.5kg of milk when compared to culture-negative cows with SCC <200,000cells/mL. SCC indicates an inflammatory reaction in the mammary gland and it is directly associated with milk production losses and with presence of microorganisms in the mammary gland.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a frequência de isolamento de agentes causadores de mastite subclínica em um rebanho e estimar as perdas de produção associadas com CCS>200.000 cél./mL. Três cultivos microbiológicos intervalados por sete dias foram realizados em todos os animais em lactação da propriedade avaliada, no período de junho a julho. Para avaliar as frequências de isolamento negativo e positivo entre as fases da lactação, foi realizado um teste de qui-quadrado. Foram realizadas regressões lineares simples para avaliar a curva de lactação dos animais agrupados por patógenos isolados em relação a vacas negativas na cultura microbiológica e com CCS < 200.000 cél./mL. Os coeficientes das regressões foram utilizados para estimar as perdas de produção entre os grupos. Vacas com resultado negativo na microbiologia, mas com CCS ≥ 200.000 cél./mL, positivas na microbiologia com CCS < 200.000 cél./mL e positivas com CCS ≥ 200.000 cél./mL, produziram por dia, respectivamente, -3,5; -0,5 e -4,27kg de leite em relação às vacas negativas com CCS < 200.000 cél./mL. Vacas infectadas com células leveduriformes, Staphylococcus coagulase negativa, Staphylococcus aureus e Streptococcus ambientais produziram, respectivamente, -3,42; -0,5; -0,168 e -2,5kg de leite, comparadas a vacas negativas com CCS < 200.000 cél./mL. A CCS, indicativa de reação inflamatória, encontra-se diretamente associada às perdas de produção de leite, assim como a presença do microrganismo na glândula mamária.(AU)

Avaliação de diferentes culturas starters na elaboração de salame tipo italiano / Evaluation of different starters cultures in the obtaining of Italian-type sausage

O Salame Tipo Italiano produzido no Brasil é predominantemente obtido de carne suína, com maturação aproximada de 30 dias, atingindo pH em torno de 5,4. O uso das bactérias do gênero Lactobacillus como culturas iniciadoras propicia o processo de fermentação e a obtenção de produtos uniformes e seguros, com redução do tempo de maturação devido à rápida formação de ácido lático, obtendo-se melhores características sensoriais, químicas e microbiológicas. Os estafilococos coagulase-negativos (comumente em produtos cárneos fermentados Staphylococcus xylosus e S. carnosus)possuem vantagens tecnológicas, como atividade de nitrito e nitrato redutase, consumo de oxigênio e atividade de catalase que melhoram a estabilidade de cor e diminuem o desenvolvimento de rancidez no produto, além de contribuírem para a geração de sabor devido à capacidade proteolítica e lipolítica. Portanto, este trabalho objetivou estudar a influência de diferentes culturas starters (S. xylosus, S. carnosus, L. sakei e L. plantarum)combinadascom diferentes concentrações de substrato de glicose (40,5 e 99,5%) na fabricação do Salame Tipo Italiano, bem como a influência da concentração destes no desempenho das culturas starters. Durante o processamento e shelf life, os salames foram avaliados quanto às características físico-químicas, microbiológicas e sensoriais. Em todas as amostras de Salame Tipo Italiano houve comportamento similar em relação aos parâmetros físico-químicos (umidade, proteína e gordura). Não houve crescimento de micro-organismos indesejáveis nas amostras analisadas após 60 dias de shelf life. Na análise sensorial, a amostra com menor concentração de substrato (40,5%), utilizando as culturas S. carnosus e L. sakei, foi a que recebeu as melhores notas e melhor aceitação pelos degustadores, além de apresentar valores de nitritos e nitratos de acordo com a legislação.

The Italian-Type Sausage produced in Brazil is predominantly obtained from swine meat, with maturation approximately 30 days, reaching pH around 5.3. The use of Lactobacillus bacteria as starter cultures provide fermentation processes and products more uniform and safe, reducing the maturation time due to the rapid formation of lactic acid, obtaining products with better sensorial, chemical and microbiological characteristics. Coagulase-negative staphylococci (commonly in S. xylosus and S. carnosus fermented meat products) have technological advantages such as nitrite and nitrate redutase activity, oxygen uptake and catalase activity that improve color stability and decrease the development of rancidity in the skin, contribute to the generation of flavor due to the proteolytic and lipolytic capacity. This work aimed to study the influence of different starters cultures (S. xylosus, S. carnosus, L. sakei and L. plantarum) combined with different concentrations of glucose substrate (40.5 and 99.5%) in properties of Italian-Type Sausage, as well as the influence of their concentration on starter performance. During the processing and shelf life the sausages were evaluated in relation to physic-chemical, microbiological and sensorial characteristics. In all samples of Italian-type Sausages have similar behavior in relation to physical-chemical parameters (moisture, protein, and fat). There was no growth of undesirable micro-organisms in the samples after 60 days of shelf life. By the sensorial analysis, the sample with low concentration of substrate (40.5%) and with S. carnosus and L. sakei cultures was the one that received the best grades and better acceptance by the tasters, and presented values of nitrites and nitrites according to the legislation.

Avaliação de diferentes culturas starters na elaboração de salame tipo italiano / Evaluation of different starters cultures in the obtaining of Italian-type sausage

O Salame Tipo Italiano produzido no Brasil é predominantemente obtido de carne suína, com maturação aproximada de 30 dias, atingindo pH em torno de 5,4. O uso das bactérias do gênero Lactobacillus como culturas iniciadoras propicia o processo de fermentação e a obtenção de produtos uniformes e seguros, com redução do tempo de maturação devido à rápida formação de ácido lático, obtendo-se melhores características sensoriais, químicas e microbiológicas. Os estafilococos coagulase-negativos (comumente em produtos cárneos fermentados Staphylococcus xylosus e S. carnosus)possuem vantagens tecnológicas, como atividade de nitrito e nitrato redutase, consumo de oxigênio e atividade de catalase que melhoram a estabilidade de cor e diminuem o desenvolvimento de rancidez no produto, além de contribuírem para a geração de sabor devido à capacidade proteolítica e lipolítica. Portanto, este trabalho objetivou estudar a influência de diferentes culturas starters (S. xylosus, S. carnosus, L. sakei e L. plantarum)combinadascom diferentes concentrações de substrato de glicose (40,5 e 99,5%) na fabricação do Salame Tipo Italiano, bem como a influência da concentração destes no desempenho das culturas starters. Durante o processamento e shelf life, os salames foram avaliados quanto às características físico-químicas, microbiológicas e sensoriais. Em todas as amostras de Salame Tipo Italiano houve comportamento similar em relação aos parâmetros físico-químicos (umidade, proteína e gordura). Não houve crescimento de micro-organismos indesejáveis nas amostras analisadas após 60 dias de shelf life. Na análise sensorial, a amostra com menor concentração de substrato (40,5%), utilizando as culturas S. carnosus e L. sakei, foi a que recebeu as melhores notas e melhor aceitação pelos degustadores, além de apresentar valores de nitritos e nitratos de acordo com a legislação.(AU)

The Italian-Type Sausage produced in Brazil is predominantly obtained from swine meat, with maturation approximately 30 days, reaching pH around 5.3. The use of Lactobacillus bacteria as starter cultures provide fermentation processes and products more uniform and safe, reducing the maturation time due to the rapid formation of lactic acid, obtaining products with better sensorial, chemical and microbiological characteristics. Coagulase-negative staphylococci (commonly in S. xylosus and S. carnosus fermented meat products) have technological advantages such as nitrite and nitrate redutase activity, oxygen uptake and catalase activity that improve color stability and decrease the development of rancidity in the skin, contribute to the generation of flavor due to the proteolytic and lipolytic capacity. This work aimed to study the influence of different starters cultures (S. xylosus, S. carnosus, L. sakei and L. plantarum) combined with different concentrations of glucose substrate (40.5 and 99.5%) in properties of Italian-Type Sausage, as well as the influence of their concentration on starter performance. During the processing and shelf life the sausages were evaluated in relation to physic-chemical, microbiological and sensorial characteristics. In all samples of Italian-type Sausages have similar behavior in relation to physical-chemical parameters (moisture, protein, and fat). There was no growth of undesirable micro-organisms in the samples after 60 days of shelf life. By the sensorial analysis, the sample with low concentration of substrate (40.5%) and with S. carnosus and L. sakei cultures was the one that received the best grades and better acceptance by the tasters, and presented values of nitrites and nitrites according to the legislation.(AU)

Bacterial identification, somatic cell count, antimicrobial profile and toxigenic Staphylococcus strains search from mastitic cow milk samples on small farms properties / Identificação bacteriana, contagem de células somáticas, perfil antimicrobiano e pesquisa de linhagens toxigênicas de Staphylococcus em amostras de leite bovino de pequenas propriedades rurais

Bovine mastitis has a negative impact on milk production and can pose risks to public health. The present study aimed to evaluate the quality of bovine milk from small farms in the Botucatu/SP region. Somatic cell counts (SCC), identification of pathogens involved in mastitis, and sensitivity antimicrobial profile of staphylococci isolated were performed. The presence of enterotoxin encoding genes in isolates of staphylococci obtained from milk was investigated. Milk samples from individual mammary quarters of cows were submitted to the California mastitis test (CMT) and SCC. Of the 239 dairy cows from 21 dairy herds evaluated (mean = 11.4 animals/property), two cows (0.8%) presented clinical mastitis and 86 (35.9%) subclinical mastitis. Bacterial culture was performed in 177 quarter milk samples. Staphylococci were identified in 55 (31.1%), corynebacteria in 45 (25.4%), streptococci in 25 (14.1%) and coliforms in four (2.3%) milk samples. Average SCC from culture-positive samples was 1598x103 cells/mL, in case of staphylococci was 1362x103 cells/ml, streptococci was 2857x103 cells/mL, corynebacteria was 976x103 cells/mL and in the cases of coliforms 1161x103 cells/mL were obtained. Staphylococci showed a high sensitivity (>95%) to cephalothin, cotrimoxazole, enrofloxacin, and gentamicin, with a 41.2% resistance to penicillin and 11.8% to oxacillin. Both coagulase positive (CPS) and negative staphylococci (CNS) carried genes encoding enterotoxins in 21.6% of the first group and 41.9% in the second. The sea gene was the most detected 45.8% (n=24) between them, followed by seb with 29.2% and sec with 25.0%. The sed gene was not identified. We highlight the potential risk to public health in the possibility of strains of Staphylococcus spp. enterotoxin-producing genes that can cause staphylococcal food poisoning.(AU)

A mastite bovina impacta negativamente a produção leiteira e pode acarretar riscos à saúde pública. O presente estudo teve como objetivo a avaliação da qualidade do leite bovino proveniente de pequenas propriedades na região de Botucatu/SP. Foi realizada a contagem de células somáticas (CCS), identificação dos patógenos envolvidos nas mastites, e realizado o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos dos estafilococos isolados. Pesquisou-se a presença de genes codificadores de enterotoxinas em isolados de estafilococos obtidos a partir do leite mastítico. Amostras de leite de quartos mamários individuais de vacas foram submetidas ao "California mastitis test" (CMT) e à CCS. Das 239 vacas em lactação provenientes de 21 rebanhos leiteiros avaliados (média = 11,4 animais/propriedade), dois (0,8%) animais apresentaram mastite clínica e, 86 (35,9%) mastite subclínica. 177 amostras de leite foram cultivadas em ágar sangue bovino 5% e ágar MacConckey e obteve-se 55 (31,1%) Staphylococcus spp., 25 (14,1%) Streptococcus spp., 45 (25,4%) Corynebacterium spp. e quatro (2,3%) coliformes. A média da CCS das amostras procedentes de todos os quartos mamários infectados avaliados foi de 1598x103 células/mL, enquanto que nos casos que foram isolados Staphylococcus spp. foi de 1362x103 células/mL, Streptococcus spp. 2857x103 células/mL, Corynebacterium spp. de 976x103 células/mL e nos casos de coliformes 1161x103 células/mL. Os estafilococos revelaram grande sensibilidade (>95%) à cefalotina, cotrimoxazol, enrofloxacina e gentamicina, com resistência de 41,2% à penicilina e 11,8% à oxacilina. Tanto estafilococos coagulase positivos (ECP) como negativos (ECN) revelaram genes codificadores de enterotoxinas em 21,6% do primeiro grupo e 41,9% no segundo. O gene sea foi o mais detectado 45,8% (n=24), seguido pelo seb com 29,2% e sec com 25,0%. O gene codificador da sed não foi identificado. Frente aos resultados, destaca-se o risco potencial à saúde pública pela possibilidade de veiculação de linhagens de Staphylococcus spp. carreadores de genes produtores de enterotoxinas, podendo ocasionar toxi-infecções alimentares.(AU)

Bacterial identification, somatic cell count, antimicrobial profile and toxigenic Staphylococcus strains search from mastitic cow milk samples on small farms properties / Identificação bacteriana, contagem de células somáticas, perfil antimicrobiano e pesquisa de linhagens toxigênicas de Staphylococcus em amostras de leite bovino de pequenas propriedades rurais

Bovine mastitis has a negative impact on milk production and can pose risks to public health. The present study aimed to evaluate the quality of bovine milk from small farms in the Botucatu/SP region. Somatic cell counts (SCC), identification of pathogens involved in mastitis, and sensitivity antimicrobial profile of staphylococci isolated were performed. The presence of enterotoxin encoding genes in isolates of staphylococci obtained from milk was investigated. Milk samples from individual mammary quarters of cows were submitted to the California mastitis test (CMT) and SCC. Of the 239 dairy cows from 21 dairy herds evaluated (mean = 11.4 animals/property), two cows (0.8%) presented clinical mastitis and 86 (35.9%) subclinical mastitis. Bacterial culture was performed in 177 quarter milk samples. Staphylococci were identified in 55 (31.1%), corynebacteria in 45 (25.4%), streptococci in 25 (14.1%) and coliforms in four (2.3%) milk samples. Average SCC from culture-positive samples was 1598x103 cells/mL, in case of staphylococci was 1362x103 cells/ml, streptococci was 2857x103 cells/mL, corynebacteria was 976x103 cells/mL and in the cases of coliforms 1161x103 cells/mL were obtained. Staphylococci showed a high sensitivity (>95%) to cephalothin, cotrimoxazole, enrofloxacin, and gentamicin, with a 41.2% resistance to penicillin and 11.8% to oxacillin. Both coagulase positive (CPS) and negative staphylococci (CNS) carried genes encoding enterotoxins in 21.6% of the first group and 41.9% in the second. The sea gene was the most detected 45.8% (n=24) between them, followed by seb with 29.2% and sec with 25.0%. The sed gene was not identified. We highlight the potential risk to public health in the possibility of strains of Staphylococcus spp. enterotoxin-producing genes that can cause staphylococcal food poisoning.(AU)

A mastite bovina impacta negativamente a produção leiteira e pode acarretar riscos à saúde pública. O presente estudo teve como objetivo a avaliação da qualidade do leite bovino proveniente de pequenas propriedades na região de Botucatu/SP. Foi realizada a contagem de células somáticas (CCS), identificação dos patógenos envolvidos nas mastites, e realizado o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos dos estafilococos isolados. Pesquisou-se a presença de genes codificadores de enterotoxinas em isolados de estafilococos obtidos a partir do leite mastítico. Amostras de leite de quartos mamários individuais de vacas foram submetidas ao "California mastitis test" (CMT) e à CCS. Das 239 vacas em lactação provenientes de 21 rebanhos leiteiros avaliados (média = 11,4 animais/propriedade), dois (0,8%) animais apresentaram mastite clínica e, 86 (35,9%) mastite subclínica. 177 amostras de leite foram cultivadas em ágar sangue bovino 5% e ágar MacConckey e obteve-se 55 (31,1%) Staphylococcus spp., 25 (14,1%) Streptococcus spp., 45 (25,4%) Corynebacterium spp. e quatro (2,3%) coliformes. A média da CCS das amostras procedentes de todos os quartos mamários infectados avaliados foi de 1598x103 células/mL, enquanto que nos casos que foram isolados Staphylococcus spp. foi de 1362x103 células/mL, Streptococcus spp. 2857x103 células/mL, Corynebacterium spp. de 976x103 células/mL e nos casos de coliformes 1161x103 células/mL. Os estafilococos revelaram grande sensibilidade (>95%) à cefalotina, cotrimoxazol, enrofloxacina e gentamicina, com resistência de 41,2% à penicilina e 11,8% à oxacilina. Tanto estafilococos coagulase positivos (ECP) como negativos (ECN) revelaram genes codificadores de enterotoxinas em 21,6% do primeiro grupo e 41,9% no segundo. O gene sea foi o mais detectado 45,8% (n=24), seguido pelo seb com 29,2% e sec com 25,0%. O gene codificador da sed não foi identificado. Frente aos resultados, destaca-se o risco potencial à saúde pública pela possibilidade de veiculação de linhagens de Staphylococcus spp. carreadores de genes produtores de enterotoxinas, podendo ocasionar toxi-infecções alimentares.(AU)

Isolation of Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes and coagulase-positive Staphylococcus from salami sold at street fairs in Porto Alegre, Brazil / Isolamento de Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes e Staphylococcus coagulase positiva de salames comercializados em feiras livres de Porto Alegre, Brasil

Salami is a ready-to-eat (RTE) product frequently purchased at street fairs in Porto Alegre. Salmonella enterica, Listeria monocytogenes, and coagulase-positive Staphylococcus (CPS) are important causes of foodborne disease and can be transmitted through the consumption of RTE foods. The aim of this study was to evaluate the presence of these pathogens in salami sold at street fairs. Ninety salami samples from three commercial brands available at street fairs were analyzed by routine bacteriological methods for Salmonella spp. and Listeria spp., as well as enumeration of CPS. In addition, two samples from each commercial brand were analyzed for water activity (aw). Samples of brand A showed aw values (0.938 and 0.942) above those set by the legislation, while brand B (0.849 and 0.860) and brand C (0.826 and 0.854) were compliant. Microbiological analyses showed that 67.7% were negative to all investigated bacteria. Salmonella Typhimurium was isolated from 4.4% (4/90) of salami samples, all from commercial brand A. ­Listeria monocytogenes was detected in 3.3% (3/90) of samples, from commercial brands B and C. Moreover, 7.7% (7/90) of samples contained CPS populations non-compliant with legislation. Although the great majority of salami sold at street fairs of Porto Alegre was compliant with standards, S. enterica, L. monocytogenes, and CPS ≥ 5 × 103 cfu.g-1 could be found in this RTE product. Therefore, control measures in the processing industry and consumer's education about foodborne illness prevention should be maintained.(AU)

Salame é um alimento pronto para o consumo frequentemente adquirido pela população em feiras livres de Porto Alegre. Salmonella enterica, Listeria monocytogenes e Staphylococcus coagulase positiva são importantes causas de doenças transmitidas por alimentos e podem ser veiculadas por alimentos prontos para o consumo. O objetivo desse estudo foi avaliar a presença desses patógenos em salames vendidos em feiras livres. Noventa amostras de salame pertencentes a três marcas comerciais foram analisados por métodos bacteriológicos de rotina quanto à presença de Salmonella spp. e Listeria spp., bem como enumeração de Staphylococcus coagulase positiva (SCP). Além disso, foi determinada a Atividade de Água (aw) de duas amostras de cada marca comercial. Amostras da marca A apresentaram valores de aw (0,938 e 0,942) acima do permitido na legislação, enquanto as amostras da marca B (0,849 e 0,860) e C (0,826 e 0,854) não violaram esse parâmetro. A análise microbiológica demonstrou que 67,7% das amostras foram negativas para todas as bactérias investigadas. Salmonella Typhimurium foi isolada de 4,4% (4/90) das amostras de salame, todas da marca comercial A. Listeria monocytogenes foi detectada em 3,3% (3/90) das amostras das marcas B e C. Além disso, 7,7% (7/90) das amostras apresentaram SCP acima do número permitido pela legislação. Apesar da grande maioria dos salames comercializados em feiras livres estarem de acordo com a legislação, S. enterica, L. monocytogenes e SCP ≥ 5 × 103 cfu.g-1 podem estar presentes nesse alimento pronto para o consumo. Dessa forma, o controle nas indústrias e a educação dos consumidores sobre a prevenção de doenças transmitidas por alimentos devem ser mantidos.(AU)

Isolation of Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes and coagulase-positive Staphylococcus from salami sold at street fairs in Porto Alegre, Brazil / Isolamento de Salmonella Typhimurium, Listeria monocytogenes e Staphylococcus coagulase positiva de salames comercializados em feiras livres de Porto Alegre, Brasil

Salami is a ready-to-eat (RTE) product frequently purchased at street fairs in Porto Alegre. Salmonella enterica, Listeria monocytogenes, and coagulase-positive Staphylococcus (CPS) are important causes of foodborne disease and can be transmitted through the consumption of RTE foods. The aim of this study was to evaluate the presence of these pathogens in salami sold at street fairs. Ninety salami samples from three commercial brands available at street fairs were analyzed by routine bacteriological methods for Salmonella spp. and Listeria spp., as well as enumeration of CPS. In addition, two samples from each commercial brand were analyzed for water activity (aw). Samples of brand A showed aw values (0.938 and 0.942) above those set by the legislation, while brand B (0.849 and 0.860) and brand C (0.826 and 0.854) were compliant. Microbiological analyses showed that 67.7% were negative to all investigated bacteria. Salmonella Typhimurium was isolated from 4.4% (4/90) of salami samples, all from commercial brand A. ­Listeria monocytogenes was detected in 3.3% (3/90) of samples, from commercial brands B and C. Moreover, 7.7% (7/90) of samples contained CPS populations non-compliant with legislation. Although the great majority of salami sold at street fairs of Porto Alegre was compliant with standards, S. enterica, L. monocytogenes, and CPS ≥ 5 × 103 cfu.g-1 could be found in this RTE product. Therefore, control measures in the processing industry and consumer's education about foodborne illness prevention should be maintained.(AU)

Salame é um alimento pronto para o consumo frequentemente adquirido pela população em feiras livres de Porto Alegre. Salmonella enterica, Listeria monocytogenes e Staphylococcus coagulase positiva são importantes causas de doenças transmitidas por alimentos e podem ser veiculadas por alimentos prontos para o consumo. O objetivo desse estudo foi avaliar a presença desses patógenos em salames vendidos em feiras livres. Noventa amostras de salame pertencentes a três marcas comerciais foram analisados por métodos bacteriológicos de rotina quanto à presença de Salmonella spp. e Listeria spp., bem como enumeração de Staphylococcus coagulase positiva (SCP). Além disso, foi determinada a Atividade de Água (aw) de duas amostras de cada marca comercial. Amostras da marca A apresentaram valores de aw (0,938 e 0,942) acima do permitido na legislação, enquanto as amostras da marca B (0,849 e 0,860) e C (0,826 e 0,854) não violaram esse parâmetro. A análise microbiológica demonstrou que 67,7% das amostras foram negativas para todas as bactérias investigadas. Salmonella Typhimurium foi isolada de 4,4% (4/90) das amostras de salame, todas da marca comercial A. Listeria monocytogenes foi detectada em 3,3% (3/90) das amostras das marcas B e C. Além disso, 7,7% (7/90) das amostras apresentaram SCP acima do número permitido pela legislação. Apesar da grande maioria dos salames comercializados em feiras livres estarem de acordo com a legislação, S. enterica, L. monocytogenes e SCP ≥ 5 × 103 cfu.g-1 podem estar presentes nesse alimento pronto para o consumo. Dessa forma, o controle nas indústrias e a educação dos consumidores sobre a prevenção de doenças transmitidas por alimentos devem ser mantidos.(AU)

Detection of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli in Brazilian mastitic milk goats by multiplex-PCR

ABSTRACT: This study evalueted the prevalence of Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae and Escherichia coli in milk samples from 257 goats (513 half-udders) and ten bulk tanks, from ten dairy goat farms of São Paulo State, Brazil, by multiplex-PCR. The samples were screened by microbiological culture (gold-standard), and tested by different multiplex-PCR protocols for the detection of each bacterium. A total of 178 half-udders resulted positive by microbiological culture, with coagulase-negative staphylococci (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%), and Enterobacteriaceae (4%) the prevalent pathogens. In other way, multiplex-PCR detected 173 pathogens in 151/523 (28.9%; CI95% 25.2-32.9%) milk samples 144/513 (28.1%) half-udders and 7/10 (70%) bulk tanks, with E. coli (86/162, 51.9%) and S. aureus (50/162, 30.9%) the prevalent ones in half-udders, and S. aureus (6/10, 60%) and E. coli (4/5, 36.4%) in bulk tanks. Multiplex-PCR showed a high performance for the detection of three bacteria at a time in mastitic goat milk direct from half-udders or bulk tanks. Thus, this multiplex-PCR protocol proved to be an adequate tool for the identification of the most common mastitis pathogens, independent of their phenotypic characteristics in the diagnosis of clinical mastitis in goats, allowing a continuous and better vigilance and monitoring the herd, being included in quality programs.

RESUMO: Este estudo avaliou por multiplex-PCR a prevalência de Staphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae e Escherichia coli em amostras de leite de 257 caprinos (513 tetos) e dez tanques de expansão, em dez fazendas leiteiras do estado de São Paulo, Brasil. As amostras foram triadas por cultura microbiológica (padrão-uro) e testadas por diferentes protocolos multiplex-PCR para a detecção de cada bactéria. Um total de 178 amostras de leite foram positivos na cultura microbiológica, com estafilococos coagulase-negativos (70%), S. aureus (13,5%), S. intermedius (7,9%) e Enterobacteriaceae (4%) como patógenos prevalentes. Por outro lado, a PCR multiplex detectou 173 patógenos em 151/523 (28,9%, IC95% 25,2-32,9%) amostras de leite, 144/513 (28,1%) amostras de tetos e 7/10 (70%) em tanques de expansão, E. coli (86/162, 51,9%) e S. aureus (50/162, 30,9%) foram identificados nas amostras de tetos e S. aureus (6/10, 60%) e E. coli (4/5, 36,4%) em tanques expansão. Multiplex-PCR mostrou um alto desempenho para a detecção das três bactérias em leite de cabra com mastite ou em tanques de expansão. Dessa forma, este protocolo multiplex-PCR provou ser uma ferramenta adequada para a identificação dos patógenos mais comuns da mastite, independentemente de suas características fenotípicas no diagnóstico de mastite clínica em caprinos, permitindo uma vigilância contínua e melhor acompanhamento do rebanho, sendo incluído em programas de qualidade.

Ocorrência, patógenos e fatores de risco para mastite subclínica em cabras leiteiras / Occurrence, pathogens and risk factors for subclinical mastitis in dairy goats

Milk samples from 257 goats and 513 half udders of 10 dairy goat farms were analyzed by microbiological culture, to evaluate the sanitary management, and epidemiological questionnaire results. Multivariate analysis of risk factors for subclinical mastitis in goats, with the adjusted Odds Ratio for subclinical mastitis was performed. The prevalence of subclinical mastitis in goats by microbiological culture was 43.6%, and clinical mastitis was 5.84%. From 178 positive teats by microbiological culture, the most prevalent pathogens were coagulase-negative staphylococci - CNS (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%), and Enterobacteriaceae (4%). The risk factors analysis revealed significant association between the disease and the flock size (OR= 3.33; P= 0.0268), and the farm was a confounding factor, being kept in the final statistical model. Despite the non-identification of all the factors associated with subclinical mastitis in herds and the existence of confounding factors that hinder statistical analyzes, the study of risk factors is important for the improvement of disease control and prevention programs in dairy goat, and it can be used as a tool in the reduction of environmental and contagious pathogens such as staphylococci that were the most identified pathogens causing caprine mastitis in the study.(AU)

Ocorrência, patógenos e fatores de risco para mastite subclínica em cabras leiteiras / Occurrence, pathogens and risk factors for subclinical mastitis in dairy goats

Milk samples from 257 goats and 513 half udders of 10 dairy goat farms were analyzed by microbiological culture, to evaluate the sanitary management, and epidemiological questionnaire results. Multivariate analysis of risk factors for subclinical mastitis in goats, with the adjusted Odds Ratio for subclinical mastitis was performed. The prevalence of subclinical mastitis in goats by microbiological culture was 43.6%, and clinical mastitis was 5.84%. From 178 positive teats by microbiological culture, the most prevalent pathogens were coagulase-negative staphylococci - CNS (70%), S. aureus (13.5%), S. intermedius (7.9%), and Enterobacteriaceae (4%). The risk factors analysis revealed significant association between the disease and the flock size (OR= 3.33; P= 0.0268), and the farm was a confounding factor, being kept in the final statistical model. Despite the non-identification of all the factors associated with subclinical mastitis in herds and the existence of confounding factors that hinder statistical analyzes, the study of risk factors is important for the improvement of disease control and prevention programs in dairy goat, and it can be used as a tool in the reduction of environmental and contagious pathogens such as staphylococci that were the most identified pathogens causing caprine mastitis in the study.(AU)