Resumo
The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%...(AU)
O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%...(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Gatos , Sêmen , Preservação do Sêmen/veterinária , Espermatozoides , Criopreservação , Técnicas de Reprodução Assistida , Técnicas de Reprodução Assistida/veterinária , EpididimoResumo
The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. The objective of this study was to evaluate the sperm quality obtained of domestic cats by electroejaculation and recovery of the tail of the epididymis after cooling at -1°C and 4°C for 24 and 48 hours. Twenty-nine adult cats (2 to 6kg) were used. Sperm collection was performed by electroejaculation (EEJ), and after 48 hours, the cats were orchiectomized, and sperm sample was obtained from the vas deferens and epididymis tail (EPD). The samples were diluted in ACP-117® extender, and the sperm characteristics were evaluated at three different moments: when still fresh, 24 and 48 hours after cooling. In order to compare the two refrigeration temperatures, the first stage was to analyze if there was a difference between the harvesting techniques. After this, two experiments were conducted: in the first, sperm sample from 14 cats were used and the cooling was performed at -1°C; and in the second, sample from 15 cats were used and the sperm were refrigerated at 4°C. Sperm kinetics were evaluated by computerized analysis (CASA) and concentration by Neubauer chamber, spermatic morphology was evaluated by modified Karras staining, and membrane integrity was evaluated by eosin nigrosine. The results obtained were analyzed in R software, version 3.2.5 using the Mann-Whitney test for variables with abnormal distributions, considering significance at the level of 5%. In ejaculate samples, higher values of total morphological defects were observed after 24 and 48 hours of refrigeration at 4°C (P<0.022) compared to refrigeration at -1°C, using Friedman test. To quantify the decrease in sperm quality, parameter reductions were calculated among time points (F-24h/F-48h/24h-48h). In EPD samples, a greater reduction in sperm quality was detected after 24 hours of refrigeration at 4°C, both in motility and sperm kinetics and in the movement and velocity indices, compared to refrigeration at -1°C. Based on the results, it can be concluded that cooling of feline spermatozoa at -1°C for up to 48 hours was efficient in maintaining spermatic quality collected by EEJ and EPD, and it could be an alternative to spermatozoa cryopreservation in domestic felines.(AU)
O objetivo deste trabalho foi avaliar a qualidade espermática de gatos domésticos obtidos por eletroejaculação e recuperação da cauda do epidídimo após a refrigeração a -1°C e a 4°C por 24 e 48 horas. Vinte e nove gatos adultos (2 a 6kg) foram utilizados. A colheita de espermatozoides foi realizada por eletroejaculação (EEJ) e, após 48 horas, os gatos foram orquiectomizados, e as amostras espermáticas foram obtidas a partir do ducto deferente e da cauda do epidídimo (EPD). As amostras foram diluídas em ACP-117® e as características espermáticas foram avaliadas em três momentos distintos: fresco, 24 e 48 horas após a refrigeração. Para ser possível comparar as duas temperaturas de refrigeração, a primeira etapa foi analisar se havia diferença entre as técnicas de colheita. Após isto, dois experimentos foram conduzidos: no primeiro, espermatozoides de 14 gatos foram utilizados e a refrigeração foi realizada a -1°C; e no segundo, amostras de 15 gatos foram utilizados e os espermatozoides foram refrigerados a 4°C. A cinética espermática foi avaliada por análise computadorizada (CASA), a concentração por câmara de Neubauer, a morfologia espermática foi avaliada pela coloração de Karras modificada, e a integridade da membrana foi avaliada por eosina nigrosina. Os resultados obtidos foram analisados no software R, versão 3.2.5, utilizando o teste de Mann-Whitney para variáveis com distribuições anormais, considerando significância ao nível de 5%. No ejaculado, maiores valores de defeitos morfológicos totais foram observados após 24 e 48 horas de refrigeração a 4°C (P<0,022) em comparação com refrigeração a -1°C, usando o teste de Friedman. Para quantificar a diminuição na qualidade espermática, as reduções dos parâmetros foram calculadas entre os pontos de tempo (F-24h/F-48h/24h-48h). Na EPD, uma maior redução na qualidade espermática foi detectada após 24 horas de refrigeração a 4°C, tanto na motilidade e na cinética espermática quanto nos índices de movimento e velocidade, em comparação com a refrigeração a -1°C. Com base nos resultados, pode concluir-se que a refrigeração dos espermatozoides felino a -1°C, até 48 horas, foi eficaz na manutenção da qualidade espermático colhidos por EEJ e EPD, e pode ser uma alternativa para a criopreservação de espermatozoides em felinos domésticos.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Gatos , Sêmen , Preservação do Sêmen/veterinária , Espermatozoides , Criopreservação , Técnicas de Reprodução Assistida , Técnicas de Reprodução Assistida/veterinária , EpididimoResumo
A avaliação espermática é fundamental para resultados satisfatórios na biotecnologia da reprodução emovinos. A heterogeneidade das células no ejaculado pode afetar o congelamento de sêmen e morfologiasalteradas podem formar embriões de má qualidade. A análise do sêmen de 10 ovinos da raça Somalis demonstraque existe, entre as células espermáticas, variação na morfometria de nove dos 11 parâmetros avaliados namensuração computadorizada não automatizada, ao comparar as técnicas utilizadas no trabalho (coloração deKarras sob microscopia óptica e preparação úmida sob microscopia de contraste de fase). As diferençasestatísticas entre a maioria dos parâmetros medidos tornam importante a busca por uma justificativa que possaesclarecer tal fenômeno com o objetivo de aprimorar e melhorar a qualidade da avaliação seminal, já que ela estádiretamente relacionada com os índices de fertilidade nos ovinos.(AU)
Sperm evaluation is critical for satisfactory results in the biotechnology of reproduction in sheepbreeding. The heterogeneity of cells in the ejaculate can affect semen freezing, and altered morphologies canproduce bad quality embryos. The semen analysis of 10 Somalis ram found that there is variation betweenmorphometric analysis of two techniques (staining Karras and wet preparation), finding statistical differencesamong most of the parameters measured. The semen analysis of 10 Somali sheep breed shows that there isvariation among sperm cells in 9 of the 11 morphometric parameters evaluated in non-automated computedmeasurement comparing the techniques used (Karras staining under optical microscopy and wet preparationunder phase contrast microscopy). Statistical differences between measured parameters is important to searchfor a justification that can clarify this phenomenon with the aim to enhance and improve quality of seminalreview, since it is directly related to fertility rates in sheep.(AU)
Assuntos
Animais , Masculino , Ovinos/fisiologia , Contagem de Espermatozoides/métodos , Contagem de Espermatozoides/veterinária , Heterogeneidade GenéticaResumo
A avaliação espermática é fundamental para resultados satisfatórios na biotecnologia da reprodução emovinos. A heterogeneidade das células no ejaculado pode afetar o congelamento de sêmen e morfologiasalteradas podem formar embriões de má qualidade. A análise do sêmen de 10 ovinos da raça Somalis demonstraque existe, entre as células espermáticas, variação na morfometria de nove dos 11 parâmetros avaliados namensuração computadorizada não automatizada, ao comparar as técnicas utilizadas no trabalho (coloração deKarras sob microscopia óptica e preparação úmida sob microscopia de contraste de fase). As diferençasestatísticas entre a maioria dos parâmetros medidos tornam importante a busca por uma justificativa que possaesclarecer tal fenômeno com o objetivo de aprimorar e melhorar a qualidade da avaliação seminal, já que ela estádiretamente relacionada com os índices de fertilidade nos ovinos.
Sperm evaluation is critical for satisfactory results in the biotechnology of reproduction in sheepbreeding. The heterogeneity of cells in the ejaculate can affect semen freezing, and altered morphologies canproduce bad quality embryos. The semen analysis of 10 Somalis ram found that there is variation betweenmorphometric analysis of two techniques (staining Karras and wet preparation), finding statistical differencesamong most of the parameters measured. The semen analysis of 10 Somali sheep breed shows that there isvariation among sperm cells in 9 of the 11 morphometric parameters evaluated in non-automated computedmeasurement comparing the techniques used (Karras staining under optical microscopy and wet preparationunder phase contrast microscopy). Statistical differences between measured parameters is important to searchfor a justification that can clarify this phenomenon with the aim to enhance and improve quality of seminalreview, since it is directly related to fertility rates in sheep.
Assuntos
Masculino , Animais , Contagem de Espermatozoides/métodos , Contagem de Espermatozoides/veterinária , Ovinos/fisiologia , Heterogeneidade GenéticaResumo
A avaliação da morfologia espermática é um dos critérios determinantes para a seleção de machos para a reprodução. O objetivo do presente trabalho foi verificar as alterações morfológicas do sêmen de carneiros durante as estações do ano. Foram utilizados 12 animais, efetuando-se esfregaços de sêmen mensalmente para coloração do método de Karras modificado durante um ano. Observou-se que os animais apresentaram maiores percentuais de espermatozóides anormais na primavera e outono (15,46 ± 27,10 e 11,33 ± 26,38, respectivamente), quando comparados com o verão (3,18 ±1,95) e inverno (5,46 ± 2,73). Quando comparado a estação seca e chuvosa, o período de seca apresentou maiores percentuais de morfologias alteradas (7,98% ± 8,01) em relação ao período chuvoso (3,95% ± 1,78), sugerindo que tanto a variação sazonal, quanto a variação nutricional influenciaram as características do sêmen. Concluindo, os carneiros nativos não apresentaram alterações morfológicas significativas do sêmen ao longo do ano, sendo este um importante fator para a utilização do mesmo em monta natural ou inseminação artificial em qualquer período do ano.(AU)
The evaluation of sperm morphology is one of the determining criteria to select males for reproduction. The aim of this study was to evaluate the sperm morphology of native rams during the seasons of the year. 12 animals were used, and semen was smeared monthly for a year utilizing the modified method by Karras. It was observed that the animals had higher percentage of abnormal sperm in spring and autumn (15.46 ± 27.10 and 11.33 ± 26.38, respectively) when compared to summer (3.18 ± 1.95) and winter (5.46 ± 2.73). When the dry and rainy seasons were compared, the former had higher percentages of altered morphology (7.98% ± 8.01) compared to the latter (3.95% ± 1.78), suggesting that the seasonal variation as well as nutritional variation influence the characteristics of semen. It was concluded that native rams showed no significant morphological alterations of semen during the year, which is an important factor in its use for natural mating or artificial insemination at any time of the year.(AU)
La evaluación de la morfología espermática es uno de los criterios determinantes para la selección de machos para reproducción. El objetivo de este estudio ha sido verificar las alteraciones morfológicas del semen de carneros durante las estaciones del año. Se utilizaron 12 animales, efectuándose flotamiento de semen, mensualmente, para coloración del método de Karras, modificado durante un año. Se observó que los animales presentaron mayores porcentuales de espermatozoides anormales en la primavera y otoño (15,46 ± 27,10 y 11,33 ± 26,38, respectivamente), cuando comparados con el verano (3.18 ± 1.95) e invierno (5.46 ± 2.73). En comparación con la estación seca y lluviosa, el periodo de sequía presentó mayores porcentuales de morfologías alteradas (7,98% ± 8.01) en comparación al período lluvioso (3,95% ± 1,78), sugiriendo que tanto la variación estacional como la variación nutricional influenciaron las características del semen. Concluyendo, los carneros nativos no presentaron alteraciones significativas morfológicas del semen durante el año, siendo éste un factor importante para la utilización del mismo en monta natural o inseminación artificial en cualquier época del año.(AU)
Assuntos
Animais , Sêmen/citologia , Reprodução/fisiologia , Ovinos/classificaçãoResumo
The objective of this study was to evaluate the efficiency of the modified Karras staining technique (KA) to analyze domestic cat sperm morphology by comparing it with the Fast Green FCF/ Rose Bengal staining (FR), previously used for this species. Four adult cats were used, from which sperm samples were collected four times in alternate days for each tom using an artificial vagina (n=16 ejaculates). Both staining techniques were performed for each ejaculate. For the FR staining technique, the semen in natura was diluted in 2.9% sodium citrate and, afterwards, in the staining solution. After 70 seconds, smears were made onto slide and dried at 37ºC. For the KA staining technique, previously made and formol saline fixed slides were sequentially immersed in Rose Bengal solution, Tannin solution, and Victoria Blue B solution, and dried at room temperature. For sperm evaluation, 200 sperm cells were assessed for each staining technique in all ejaculate samples using a bright field microscope at 1000X magnification. Statistical analysis used the non-parametric Wilcoxon test, establishing significance at p 0.05. For the KA staining technique, higher percentage of distal cytoplasmic droplets and lower percentage of sperm head defects were obtained when compared to the FR staining technique. This way, both staining techniques were not totally efficient for the assessment of morpholo
O objetivo do estudo foi avaliar a eficiência do método de coloração Karras modificado (KA) para a análise da morfologia espermática no gato doméstico através da comparação com a coloração Fast Green FCF/Rosa Bengala (FR), previamente utilizada para esta espécie. Utilizaram-se quatro gatos adultos, colhendo-se quatro vezes amostras de sêmen em dias alternados para cada animal através de vagina artificial (n=16 ejaculados). Para cada ejaculado, realizaram-se duas colorações. Para a coloração FR, o sêmen in natura foi diluído em citrato de sódio 2,9% e, posteriormente, em solução de coloração. Após setenta segundos, procedeu-se a esfregaços em lâminas, as quais foram secas a 37ºC. Para a coloração KA, os esfregaços previamente confeccionados e fixados em formol salino foram imersos seqüencialmente nas soluções de Rosa Bengala, Tanino e Azul Vitória e secas em temperatura ambiente. Avaliaram-se duzentas células para cada tipo de coloração em todos os ejaculados, usando-se microscópio de luz em aumento de 1.000X. Efetuou-se análise estatística mediante o teste não-paramétrico de Wilcoxon, estabelecendo diferença significativa quando p 0,05. Para a coloração de KA, obtiveram-se maior porcentagem de gota citoplasmática distal e menor porcentagem de defeitos de cabeça quando comparada à coloração FR. Assim, nenhuma das colorações mostrou-se totalmente eficiente na identificação dos
Resumo
The objective of this study was to evaluate the efficiency of the modified Karras staining technique (KA) to analyze domestic cat sperm morphology by comparing it with the Fast Green FCF/ Rose Bengal staining (FR), previously used for this species. Four adult cats were used, from which sperm samples were collected four times in alternate days for each tom using an artificial vagina (n=16 ejaculates). Both staining techniques were performed for each ejaculate. For the FR staining technique, the semen in natura was diluted in 2.9% sodium citrate and, afterwards, in the staining solution. After 70 seconds, smears were made onto slide and dried at 37ºC. For the KA staining technique, previously made and formol saline fixed slides were sequentially immersed in Rose Bengal solution, Tannin solution, and Victoria Blue B solution, and dried at room temperature. For sperm evaluation, 200 sperm cells were assessed for each staining technique in all ejaculate samples using a bright field microscope at 1000X magnification. Statistical analysis used the non-parametric Wilcoxon test, establishing significance at p 0.05. For the KA staining technique, higher percentage of distal cytoplasmic droplets and lower percentage of sperm head defects were obtained when compared to the FR staining technique. This way, both staining techniques were not totally efficient for the assessment of morpholo
O objetivo do estudo foi avaliar a eficiência do método de coloração Karras modificado (KA) para a análise da morfologia espermática no gato doméstico através da comparação com a coloração Fast Green FCF/Rosa Bengala (FR), previamente utilizada para esta espécie. Utilizaram-se quatro gatos adultos, colhendo-se quatro vezes amostras de sêmen em dias alternados para cada animal através de vagina artificial (n=16 ejaculados). Para cada ejaculado, realizaram-se duas colorações. Para a coloração FR, o sêmen in natura foi diluído em citrato de sódio 2,9% e, posteriormente, em solução de coloração. Após setenta segundos, procedeu-se a esfregaços em lâminas, as quais foram secas a 37ºC. Para a coloração KA, os esfregaços previamente confeccionados e fixados em formol salino foram imersos seqüencialmente nas soluções de Rosa Bengala, Tanino e Azul Vitória e secas em temperatura ambiente. Avaliaram-se duzentas células para cada tipo de coloração em todos os ejaculados, usando-se microscópio de luz em aumento de 1.000X. Efetuou-se análise estatística mediante o teste não-paramétrico de Wilcoxon, estabelecendo diferença significativa quando p 0,05. Para a coloração de KA, obtiveram-se maior porcentagem de gota citoplasmática distal e menor porcentagem de defeitos de cabeça quando comparada à coloração FR. Assim, nenhuma das colorações mostrou-se totalmente eficiente na identificação dos
Resumo
A inseminação artificial (IA) utilizando sêmen congelado é uma ferramenta importante na reprodução de cães, visa o melhoramento genético e melhor aproveitamento do reprodutor. Além disso, a melhor metodologia para avaliar o potencial fecundante de uma amostra de sêmen é o teste in vivo. Por isso, os objetivos deste trabalho foram determinar a taxa de gestação de cadelas, utilizando sêmen congelado em meio diluente TRIS/OEP/Frutose/8%Glicerol, e comparar duas técnicas de IA: intra-uterina, por laparotomia e intravaginal. O sêmen foi colhido de um único macho, por manipulação digital do pênis e analisado, imediatamente, após a colheita e após a descongelação a 70°C, por 8 segundos. A cinética do movimento foi verificada pelo CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), e a integridade das membranas por: sondas fluorescentes (iodeto de propídio e carboxifluoresceína), pelo teste supra vital com a coloração de eosina, e pela associação de sondas (iodeto de propídio, JC-1 e FITC-PSA). A morfologia espermática foi avaliada por meio de esfregaços corados com Karras. A congelação do sêmen foi realizada pelo método descrito por Chirinéa et al. (2006). As fêmeas foram monitoradas desde o início da fase do proestro utilizando a citologia vaginal seriada e a dosagem de progesterona sérica, a cada 48 horas. Para as inseminações, as cadelas foram divididas em dois grupos: Grupo 1 (n=6) inseminadas uma única vez, via intra-uterina, por laparotomia, com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2mL; e Grupo 2 (n=6) inseminadas duas vezes, via intravaginal com uma dose inseminante de 160 x 106 espermatozóides/2 mL por inseminação. Os resultados das análises do sêmen pré e pós-descongelação não apresentaram diferenças significativas, com exceção da morfologia espermática e da associação de sondas fluorescentes...
Artificial insemination (AI) using frozen semen is an important tool on dog?s reproduction, aiming to genetic improvement and better use of a stud. Besides, the better way to evaluate the fecundate potential of a semen sample is an in vivo test. That way, the aim of this work was to determine the pregnancy rate in bitches, using TRIS/OEP/Fructose/8%Glycerol as the diluent medium, and to compare two AI techniques: intrauterine and intravaginal. Semen was collected from one male only, by digital manipulation. Semen was analyzed immediately after collection and after thawed at 70°C for 8 seconds. Movement kinetics were analyzed by CASA (Computer Assisted Semen Analyzer), membrane integrity using fluorescents probes (propidium iodide and carboxyfluorescein), supravital test, eosin staining, integrity of plasmatic, nuclear and mitochondrial membranes using the association of fluorescent probes (FITC-PSA, propidium iodide and JC-1) and sperm morphology. Semen was frozen using the method described by Chirinéa, 2006. Females were monitored since the beginning of proestrus, using vaginal smear and progesterone measurement, each 48hours. To inseminations, bitches were divided into two groups: Group 1, composed by 6 females, which were inseminated just once via intrauterine, with an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2mL and Group 2 constituted by 6 females, which were inseminated twice, via intravaginal, using an insemination dose of 160 x 106 spermatozoids/2 mL/insemination. Results from semen analyses made before and after freezing did not show any difference, except for sperm morphology and association of fluorescents probes. Pregnancy rate was 66,6% (4/6) on Group 1 and 16,6% (1/6) on Group 2. In conclusion, the success of artificial insemination depends not only on semen quality after thawed, but also on the AI technique used. In our work, intrauterine technique by laparotomy was better than intravaginal