An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

ABSTRACT: Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

RESUMO: A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

An RT-rtPCR assay for detection of rabies virus in bovine specimens / Um ensaio RT-rtPCR para detecção de vírus da raiva em espécimes bovinos

Bovine rabies is endemic in most Brazilian States, including Rio Grande do Sul (RS), which has faced an unprecedented rabies outbreak between 2011 and 2018. We described a real-time reverse transcription quantitative PCR (RT-rtPCR) for detection of rabies virus (RABV) in bovine samples. The primers were designed targeting a highly conserved region of the nucleoprotein (N) gene of RABV obtained from cattle. The detection limit corresponded to 13 DNA copies and the intra- and inter-run repeatability was adequate (CV<9%) in all dilutions tested. Amplification of other pathogens associated with neurological disease in cattle or cross-contamination was not observed. Brain samples from cattle suspicious of rabies (n=21) were tested in triplicate by the RT-rtPCR and by the gold-standard direct fluorescent antibody test (DFAT), resulting in 100% of sensitivity and specificity of the RT-rtPCR. Testing of additional 41 bovine brain samples submitted to the routine DFAT testing yielded 37 (90.2%) concordant results (30 positive/7 negative) and 4 (9.7%) inconclusive in DFAT and RT-rtPCR positive. These results showed a good concordance between the tests and a higher sensitivity of the RT-rtPCR. This assay represents an alternative for RABV detection, either as a confirmatory test or for large-scale diagnosis in endemic regions.

A raiva bovina é endêmica na maioria dos estados brasileiros, inclusive no Rio Grande do Sul (RS), que enfrentou um surto de raiva sem precedentes entre 2011 e 2018. Descrevemos um PCR quantitativo de transcrição reversa em tempo real (RT-rtPCR) para detecção do vírus da raiva (RABV) em bovinos. Os primers foram desenhados visando uma região altamente conservada do gene da nucleoproteína (N) de RABV obtido de bovinos. O limite de detecção correspondeu a 13 cópias de DNA e a repetibilidade intra e inter-ensaios foi adequada (CV <9%) em todas as diluições testadas. Não foi observada amplificação de outros patógenos associados a doenças neurológicas em bovinos ou contaminação cruzada. Amostras de cérebro de bovinos com suspeita de raiva (n = 21) foram testadas em triplicata no RT-rtPCR e pelo teste de anticorpo fluorescente padrão ouro (DFAT), resultando em 100% de sensibilidade e especificidade do RT-rtPCR. O teste de 41 amostras de cérebro bovino adicionais submetidas ao teste de DFAT de rotina rendeu 37 (90,2%) resultados concordantes (30 positivos / sete negativos) e quatro (9,7%) inconclusivos em DFAT e RT-rtPCR positivo. Esses resultados mostraram boa concordância entre os testes e maior sensibilidade do RT-rtPCR. Este ensaio representa uma alternativa para a detecção do vírus da raiva, seja como teste confirmatório ou para diagnóstico em larga escala em regiões endêmicas.

Occurrence of Salmonella spp. in fecal samples from foals with and without diarrhea in the state of São Paulo: microbiological diagnosis, antimicrobial susceptibility profile, and molecular detection / Ocorrência de Salmonella spp. em amostras fecais de potros com e sem diarreia no estado de São Paulo: diagnóstico microbiológico, perfil de susceptibilidade aos antimicrobianos e detecção molecular

ABSTRACT: The present study investigated Salmonella spp. in the feces of 200 foals up to one year of age (100 with clinical signs of diarrhea and 100 without clinical signs of diarrhea). Bacteriological culture, serotyping, antimicrobial susceptibility, and real-time PCR (qPCR SYBR® Green or a TaqMan®) for detecting the invA gene (with and without a selective pre-enrichment step in tetrathionate broth) were performed. Bacterial culture revealed 15% (n=30) of positive animals (21 animals with diarrhea and nine without diarrhea). Among the 30 isolates, 13 different serovars were identified: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multidrug resistance was found in 43.33% (n=13) of the isolates, with one isolate obtained from animals without diarrhea and 12 isolates from animals with diarrhea. All qPCR techniques used in the study classified more samples as positive for Salmonella spp. than the bacterial culture of feces. In addition, all qPCR techniques detected more positive animals in the diarrhea group than in the diarrhea-free group. The results confirm the utility of the qPCR method without the pre-enrichment step in tetrathionate as a rapid test for Salmonella spp. in carrier animals. In animals with clinical signs of diarrhea, it can be combined with bacterial culture (antimicrobial susceptibility testing and serotyping). The isolation of Salmonella spp. in nine animals without diarrhea confirms the importance of asymptomatic carrier animals in the epidemiology of the disease. The multidrug resistance observed highlights the importance of rational antimicrobial use in horses and adopting biosecurity protocols that are efficacious in controlling the spread of infections between animals and zoonotic transmission in farms.

RESUMO: O presente estudo investigou a ocorrência de Salmonella spp. em fezes de 200 potros com até um ano de idade (100 com sinais clínicos de diarreia e 100 sem sinais clínicos de diarreia), utilizando as técnicas de cultivo bacteriológico e PCR em tempo real (qPCR) pelos métodos de corante fluorescente (SYBR® Green) e sonda específica (Taqman®) para a detecção do gene invA com e sem etapa de pré-enriquecimento seletivo em caldo de tetrationato. O cultivo bacteriológico revelou 15% (n=30) de animais positivos (21 animais com diarreia e nove animais sem diarreia). Dentre esses 30 isolados, 13 sorovares diferentes foram identificados: S. Infantis, S. Minnesota, S. I.4,5,12:i:-; S. Anatum, S. Cerro, S. Oranienburg, S. Braenderup, S. Give, S. Newport, S. IIIb 61:c:z35, S. 109:-:1.5, S. I.4.12:d:-, S. I.6.8:-:-. Multirresistência foi constatada em 43,33% (n=13) dos isolados, sendo um isolado obtido de animal sem diarreia e 12 isolados de animais com diarreia. Todas as técnicas de qPCR empregadas no estudo apresentaram maior número de amostras classificadas como positivas para Salmonella spp. comparadas ao cultivo bacteriológico de fezes. Adicionalmente, em todas as técnicas de qPCR houve maior número de animais detectados como positivos no grupo de animais com diarreia em relação aos animais sem diarreia. Os resultados confirmaram a utilidade do método qPCR sem a etapa de pré-enriquecimento em tetrationato, como um teste rápido para detecção de Salmonella spp. em animais portadores ou em animais com sinais clínicos de diarreia. O cultivo bacteriológico deve ser associado para a realização do teste de sensibilidade aos antimicrobianos e sorotipificação. O isolamento de Salmonella spp. em nove animais sem diarreia, confirma a importância dos animais portadores assintomáticos na epidemiologia da doença. A multirresistência observada evidencia a importância do uso racional de antimicrobianos em equinos e a importância da adoção de protocolos de biossegurança que sejam eficazes para controlar a disseminação de infecções entre animais e a transmissão zoonótica nas fazendas.

Molecular detection of Sarcocystis spp. in the breast muscle of captive birds from the southern region of Brazil / Detecção molecular de Sarcocystis spp. no músculo peitoral de aves de cativeiro da região sul do Brasil

Studies on diseases of wild birds are essential in the context of public health, as these animals act as sentinels, allowing information regarding a determined geographic area. In addition, birds are food protein sources for animals, and therefore play an important role in the life cycle of the protozoan Sarcocystis spp. This study aimed to identify the Sarcocystis spp. in breast muscle samples of naturally infected captive birds. The breast muscle of 89 birds were sampled, and the DNA amplified by PCR targeting the 18S ribosomal RNA gene to detect Sarcocystis spp. PCR products were sequenced and 5.61% (5/89) samples showed 100% similarity with Sarcocystis spp. (one Cyanoliseus patagonus, one Psittacula krameri, two Pyrrhura frontalis, and one Ramphastos dicolorus). The large number of naturally infected species analyzed by molecular methods allowed the detection of Sarcocystis spp. in different bird species, corroborating the epidemiology of Sarcocystis spp.

Estudos sobre doenças de aves silvestres são essenciais no contexto da saúde pública, pois esses animais atuam como sentinelas, permitindo obter informações sobre uma determinada área geográfica. Além disso, as aves são fontes de proteína alimentar para os animais e, portanto, desempenham um papel importante no ciclo de vida do Sarcocystis. Este estudo teve como objetivo identificar Sarcocystis spp. nos músculos do peito de aves de cativeiro naturalmente infectadas. Os músculos do peito de 89 aves foram coletados, e o DNA amplificado pela PCR do gene RNA ribossômico 18S para detecção de Sarcocystis spp. Os produtos da PCR foram sequenciados e 5,61% (5/89) amostras apresentaram 100% de similaridade com o Sarcocystis spp. (um Cyanoliseus patagonus, um Psittacula krameri, dois Pyrrhura frontalis e um Ramphastos dicolorus). O grande número de espécies naturalmente infectadas analisadas por métodos moleculares permitiu a detecção de Sarcocystis spp. em diferentes espécies de aves, corroborando a epidemiologia de Sarcocystis spp.

Molecular Epidemiology of Plasmodium species in Conflicted Federally Administered Tribal Area (FATA) Pakistan

Abstract Military conflicts have been significant obstacles in detecting and treating infectious disease diseases due to the diminished public health infrastructure, resulting in malaria endemicity. A variety of violent and destructive incidents were experienced by FATA (Federally Administered Tribal Areas). It was a struggle to pursue an epidemiological analysis due to continuing conflict and Talibanization. Clinical isolates were collected from Bajaur, Mohmand, Khyber, Orakzai agencies from May 2017 to May 2018. For Giemsa staining, full blood EDTA blood samples have been collected from symptomatic participants. Malaria-positive microscopy isolates were spotted on filter papers for future Plasmodial molecular detection by nested polymerase chain reaction (nPCR) of small subunit ribosomal ribonucleic acid (ssrRNA) genes specific primers. Since reconfirming the nPCR, a malariometric study of 762 patients found 679 positive malaria cases. Plasmodium vivax was 523 (77%), Plasmodium falciparum 121 (18%), 35 (5%) were with mixed-species infection (P. vivax plus P. falciparum), and 83 were declared negative by PCR. Among the five agencies of FATA, Khyber agency has the highest malaria incidence (19%) with followed by P. vivax (19%) and P. falciparum (4.1%). In contrast, Kurram has about (14%), including (10.8%) P. vivax and (2.7%) P. falciparum cases, the lowest malaria epidemiology. Surprisingly, no significant differences in the distribution of mixed-species infection among all five agencies. P. falciparum and P. vivax were two prevalent FATA malaria species in Pakistans war-torn area. To overcome this rising incidence of malaria, this study recommends that initiating malaria awareness campaigns in school should be supported by public health agencies and malaria-related education locally, targeting children and parents alike.

Resumo Os conflitos militares têm sido obstáculos significativos na detecção e tratamento de doenças infecciosas devido à diminuição da infraestrutura de saúde pública, resultando na endemicidade da malária. Uma variedade de incidentes violentos e destrutivos foi vivida pelas FATA (áreas tribais administradas pelo governo federal). Foi uma luta buscar uma análise epidemiológica devido ao conflito contínuo e à talibanização. Isolados clínicos foram coletados de agências Bajaur, Mohmand, Khyber e Orakzai, de maio de 2017 a maio de 2018. Para a coloração de Giemsa, amostras de sangue completo com EDTA foram coletadas de participantes sintomáticos. Isolados de microscopia positivos para malária foram colocados em papéis de filtro para futura detecção molecular plasmódica por reação em cadeia da polimerase aninhada (nPCR) de primers específicos de genes de subunidade ribossômica de ácido ribonucleico (ssrRNA). Desde a reconfirmação do nPCR, um estudo malariométrico de 762 pacientes encontrou 679 casos positivos de malária. Plasmodium vivax foi 523 (77%), Plasmodium falciparum 121 (18%), 35 (5%) eram com infecção de espécies mistas (P. vivax mais P. falciparum) e 83 foram declarados negativos por PCR. Entre as cinco agências da FATA, a agência Khyber tem a maior incidência de malária (19%), seguida por P. vivax (19%) e P. falciparum (4,1%). Em contraste, Kurram tem cerca de 14%, incluindo 10,8% casos de P. vivax e 2,7% P. falciparum, a epidemiologia de malária mais baixa. Surpreendentemente, não há diferenças significativas na distribuição da infecção de espécies mistas entre todas as cinco agências. P. falciparum e P. vivax foram duas espécies prevalentes de malária FATA na área devastada pela guerra no Paquistão. Para superar essa incidência crescente de malária, este estudo recomenda que o início de campanhas de conscientização sobre a malária na escola deve ser apoiado por agências de saúde pública e educação relacionada com a malária localmente, visando crianças e pais.

Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease

Abstract Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p 0.001). A majority (17, 40.5%) of the M. pneumoniae positive patients are within the 41-50 years of age group, followed by 10 (23.8%) patients in the age group of 61-70 years and 2 (4.8%) patients were >70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.

Resumo A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p 0,001). A maioria (17, 40,5%) dos pacientes positivos para M. pneumoniae está na faixa etária de 41-50 anos, seguida por 10 (23,8%) pacientes na faixa etária de 61-70 anos e 2 (4,8%) pacientes tinham > 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.

Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

ABSTRACT: This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

RESUMO: Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

Pathology, microbiology, and molecular evaluation of tissues from equids serologically positive for Burkholderia mallei in Midwestern Brazil / Avaliação patológica, microbiológica e molecular em amostras de tecidos de equídeos sorologicamente positivos para Burkholderia mallei no Centro-Oeste do Brasil

Glanders is a disease caused by the bacterium Burkholderia mallei that primarily affects horses, mules and donkeys. The disease can cause lesions in the skin, lungs and several other organs. However, it often manifests as an asymptomatic disease. In Brazil, serological tests of high sensitivity and specificity are used to assist in the detection of antibodies against B. mallei and to contribute to the control of the disease. However, due to the mandatory euthanasia of seroreactive animals, equids with positive serology for B. mallei and asymptomatic generated great conflicts between breeders, veterinarians and diagnostic laboratories. This study clarifies the limitations of complementary diagnostic tests for detecting B. mallei. It describes the clinical, morphological and laboratory findings in 24 equines from different municipalities in the Mato Grosso State, Brazil, which reacted to the complement fixation test and were positive in the western blotting test for glanders. Data and tissue samples were collected from 24 horses for histological, microbiological and molecular analysis. In 23 horses, no clinical signs, morphological alterations, microbiological isolation, or molecular detection would characterize B. mallei infection. On the other hand, samples from an asymptomatic horse without lesional alterations showed sequence amplification compatible with B. mallei in the PCR. Considering that the infection by B. mallei is subject to the application of animal sanitary defense measures and that, by international requirement and national legislation, the serological results are tools that should support the sanitation procedures for the error of the bacteria in the Mato Grosso State, Brazil.

Mormo é uma enfermidade causada pela bactéria Burkholderia mallei que acomete primariamente cavalos, mulas e burros. A doença pode causar lesões na pele, pulmões e em diversos outros órgãos, entretanto frequentemente manifesta-se como uma enfermidade assintomática. No Brasil são utilizados testes sorológicos de elevada sensibilidade e especificidade para auxiliar na detecção de anticorpos contra B. mallei e contribuir para controle da doença. Porém, devido à obrigatoriedade da eutanásia de animais sororeagentes, os equídeos com sorologia positiva para B. mallei e assintomáticos geraram grandes embates entre criadores, médicos-veterinários e laboratórios de diagnóstico. Este trabalho esclarece as limitações dos testes diagnósticos complementares para detecção de B. mallei e descreve os achados clínicos, morfológicos e de exames laboratoriais em 24 equídeos, procedentes de diferentes municípios do estado de Mato Grosso, Brasil, que reagiram ao teste de fixação de complemento e foram positivos no teste de "western blotting" para mormo. Foram colhidos dados e amostras de tecidos de 24 equídeos para análise histológica, microbiológica e molecular. Em 23 equídeos não existiam sinais clínicos, alterações morfológicas, isolamento microbiológico ou detecção molecular que caracterizassem infecção por B. mallei. Por outro lado, amostras de um cavalo assintomático e sem alterações lesionais apresentaram amplificação de sequência compatível com B. mallei na PCR. Considerando que a infecção por B. mallei é passível da aplicação de medidas de defesa sanitária animal e que por exigência internacional e da legislação nacional, os resultados sorológicos são ferramentas que devem amparar os procedimentos de saneamento para erradicação da bactéria no estado de Mato Grosso, Brasil.

Cryptosporidium sp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão, Brazil / Detecção de Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, Brasil

This study detected Cryptosporidium spp. in cultivated oysters and the natural oyster stock of the state of Maranhão and determine the elective tissue(s) to examine this protozoan. For this purpose, 200 cultivated oysters were purchased from the municipality of Raposa and another 100 from Paço do Lumiar. Additionally, 100 oysters were extracted from the natural stock of the municipality of Primeira Cruz, thus making up a total of 400 oysters. They were grouped into 80 pools consisting of 5 oysters each. From each pool, the gills and visceral mass were removed to obtain 160 pools, 80 pools for the gill group and another 80 for the visceral mass group. Then, DNA was extracted from each pool using a commercial kit with modifications. Subsequently, the protozoan DNA was detected using nested polymerase chain reaction. With this technique, the DNA of the protozoan under investigation was detected in 2.5% (n = 2/80) of the pools containing gills, with 1.25% of the pools (n = 1/80) belonging to the cultivation group of oysters and the other 1.25% (n = 1/80) to the natural stock. With the results obtained in this study, it was concluded that the analyzed oysters of the genus Crassostrea, from cultivation and natural stock groups, found in the state of Maranhão, were contaminated by Cryptosporidium spp. and may become potential sources of infection in humans and other animals. In addition, the gills are the elective tissue for the study of Cryptosporidium spp. in oysters.

Objetivou-se com o estudo detectar Cryptosporidium sp. em ostras de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão e determinar o(s) tecido(s) eletivo(s) para pesquisa desse protozoário. Para a realização do estudo foram adquiridas 200 ostras de cultivo do município de Raposa e 100 de Paço do Lumiar, além de 100 ostras extraídas de estoque natural do município de Primeira Cruz, totalizando 400 ostras. Estas foram agrupadas em 80 pools constituídos por cinco animais. De cada pool, as brânquias e a massa visceral foram removidas totalizando 160 pools, sendo 80 para o grupo das brânquias e 80 para o grupo de massa visceral. Na sequência, procedeu-se à extração de DNA de cada pool com a utilização de kit comercial com modificações. Posteriormente, realizou-se a detecção do DNA do protozoário por meio da técnica de Nested-PCR. Com a técnica utilizada, foi detectado o DNA do protozoário pesquisado em 2,5% (n=2/80) pools apenas de brânquias, sendo 1,25% pools (n=1/80) oriundos de cultivo e os outros 1,25% (n=1/80) de estoque natural. Com os resultados obtidos nesse estudo, conclui-se que as ostras analisadas do gênero Crassostrea sp., oriundas de cultivo e estoque natural no estado do Maranhão, estavam contaminadas por Cryptosporidium sp. e podem se reverter em fontes potenciais para seres humanos e outros animais. Para a pesquisa de Cryptosporidium sp. em ostras, as brânquias são o tecido eletivo.

Cross-genera amplification and identification of Colpodella sp. with Cryptosporidium primers in fecal samples of zoo felids from northeast China

Abstract The protozoans include many intracellular human pathogens. Accurate detection of these pathogens is necessary to treat the diseases. In clinical epidemiology, molecular identification of protozoan is considered a more reliable and rapid method for identification than microscopy. Among these protozoans, Cryptosporidium considered being one of the important water-borne zoonotic pathogens and a major cause of a diarrheal disease named cryptosporidiosis in humans, domestic animals, and wild animals. This study was aimed to identify Cryptosporidium in zoo felids (N= 56) belonging to different zoo of China, but accidentlly Colpodella was encountered in the zoo felids sample and phylogenetic data confirmed this unexpected amplification from fecal samples using two-step nested-PCR. Phylogenetic analysis revealed the fact about the specific primers used previously by many researchers and cross-genera amplification. We came to know that genetically sequenced amplicon gives more accurate identification of species. This study suggests more investigation on Colpodella which has been neglected previously but gains the attention of researchers after identified from humans and animals and has been known to correlate with neurological symptoms in patients.

Resumo Os protozoários incluem muitos patógenos humanos intracelulares. A detecção acurada desses patógenos é necessária para tratar as doenças. Na epidemiologia clínica, a identificação molecular de protozoários é considerada o método de identificação mais confiável e rápido do que a microscopia. Entre esses protozoários, o Cryptosporidium é considerado um dos importantes patógenos zoonóticos transmitidos pela água e uma das principais causas de uma doença diarreica denominada criptosporidiose em humanos, animais domésticos e selvagens. Este estudo teve como objetivo identificar Cryptosporidium em zoofelídeos (N = 56) pertencentes a diferentes zoológicos da China, mas acidentalmente Colpodella foi encontrada na amostra de zoofelídeos e os dados filogenéticos confirmaram essa amplificação inesperada de amostras fecais usando nested-PCR em duas etapas. A análise filogenética revelou o fato sobre os primers específicos usados anteriormente por muitos pesquisadores e a amplificação entre gêneros. Ficamos sabendo que o amplicon sequenciado geneticamente fornece uma identificação mais acurada das espécies. Este estudo sugere mais investigação sobre Colpodella, que foi negligenciada anteriormente, mas ganha a atenção dos pesquisadores depois de identificada em humanos e animais e é conhecida por se correlacionar com sintomas neurológicos em pacientes.

Seroprevalence of arboviruses in Nasua nasua (Mammalia, Carnivora, Procyonidae) of synanthropic habitats in the Iguaçu National Park, Brazilian Atlantic Forest / Soroprevalência de arbovirus em Nasua nasua (Mammalia, Carnivora, Procyonidae) de hábitos sinantrópicos no Parque Nacional do Iguaçu, Mata Atlântica brasileira

ABSTRACT: Arboviruses are agents transmitted by arthropods and represent a considerable threat to public health worldwide, causing diseases in humans and animals. A serological investigation was carried out to detect total antibodies against different types of arboviruses in free-living coatis (Nasua nasua) from the Iguaçu National Park (INP) through the Hemagglutination Inhibition test. Serum samples were tested using antigens from 33 arboviruses belonging to the genera Alphavirus, Flavivirus, Orthobunyavirus, and Phlebovirus. The data showed that 23.6% (17/72) of coatis were seropositive for at least one of the tested antigens, including monotypic and heterotypic reactions. Seropositivity was detected for Alphavirus (5.9%, 1/17; WEEV), Flavivirus (64.7%, 11/17; YFV, ILHV, SLEV, BSQV, ROCV, WNV, DENV-1, DENV-2, DENV-3, DENV-4, and NJLV), Phlebovirus (88.2%, 15/17; ICOV and BUJV) and Orthobunyavirus (5.9%, 1/17; ORIV). The presence of antibodies to these viruses in coatis from INP indicated an apparent silent circulation of arbovirus, implying N. nasua to be a possible amplifying host of these arboviruses in the studied area. The data reported also serve as a warning about the possible risk of establishing an arbovirus transmission cycle involving vector arthropods and coatis, or even other wild animals, consequently, including humans in this transmission chain.

RESUMO: Os arbovírus são agentes transmitidos por artrópodes que representam considerável ameaça à saúde pública em todo o mundo, causando doenças em humanos e animais. Neste trabalho foi realizada investigação sorológica para detecção de anticorpos totais contra diferentes tipos de arbovírus em quatis (Nasua nasua) de vida livre do Parque Nacional do Iguaçu (PNI) através do teste de Inibição da Hemaglutinação. Amostras de soro foram testadas utilizando-se antígenos de 33 arbovírus pertencentes aos gêneros Alphavirus, Flavivirus, Orthobunyavirus e Phlebovirus. As análises evidenciaram que 23,6% (17/72) dos quatis apresentaram soropositividade para pelo menos um dos antígenos testados, incluindo reações monotípicas e heterotípicas. Foi detectada soropositividade para Alphavirus (5,9%, 1/17; WEEV), Flavivirus (64,7%, 11/17; YFV, ILHV, SLEV, BSQV, ROCV, VNO, DEN1, DEN2, DEN3, DEN4, NJLV), Phlebovirus (88,2%, 15/17; ICOV, BUJV) e Orthobunyavirus (5,9%, 1/17; ORIV). A presença de anticorpos para esses vírus em quatis do PNI indica uma aparente transmissão silenciosa de arbovírus, incluindo N. nasua como um possível amplificador destes arbovírus na área estudada. Os dados encontrados servem de alerta quanto ao possível risco de estabelecimento de um ciclo de transmissão de arbovírus envolvendo insetos vetores e quatis, ou ainda, outros animais silvestres, consequentemente, podendo incluir o homem nessa cadeia de transmissão.

Occurrence of Pyricularia oryzae Triticum in plants of the genus Urochloa in Brazil / Ocorrência de Pyricularia oryzae Triticum em plantas do gênero Urochloa no Brasil

ABSTRACT: In this study Pyricularia spp., P. oryzae and the P. oryzae pathotype Triticum (PoT) were detected and identified in leaf segments of forage and invasive grasses located in or next to wheat fields. In 2018 and 2019, 66 samples of lesion leaf segments of Urochloa and other grasses were collected in Londrina (PR), Patos de Minas (MG), and Uberaba (MG). The detection and/or identification of the pathogens on the samples was conducted using moist chamber procedures and with the primers MoT3 and Pot2 by PCR. There were DNA amplification with the primer MoT3 (specific for PoT) for 13 (19.69%) of the samples, all of them from Urochloa. The finding that Urochloa hosts PoT at a relatively high rate raises concerns about the importance which these plants may have on the wheat blast cycle as an alternative host for the pathogen and/or source of inoculum for the disease.

RESUMO: Neste estudo Pyricularia spp., P. oryzae e o patótipo Triticum (PoT) de P. oryzae foram detectados e identificados em segmentos foliares de forrageiras e gramíneas invasoras de lavouras de trigo. Em 2018 e 2019, foram coletadas 66 amostras de segmentos foliares lesionados de Urochloa e outras gramíneas em Londrina (PR), Patos de Minas (MG) e Uberaba (MG). A detecção e/ou identificação dos patógenos nas amostras foi realizada por meio de procedimentos de câmara úmida e com os iniciadores MoT3 e Pot2 por PCR. Houve amplificações de DNA com o primer MoT3 (específico para PoT) em 13 (19,69%) das amostras, todas provenientes da Urochloa. O resultado de que Urochloa hospeda PoT em uma taxa relativamente alta levanta preocupações sobre a importância que essas plantas podem ter no ciclo de brusone do trigo como hospedeiro intermediário para o patógeno e / ou fonte de inóculo para a doença.

Pesticide residues in strawberries cultivated in the state of Rio Grande do Sul, Brazil / Resíduos de agrotóxicos em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul, Brasil

ABSTRACT: Strawberries are of high social and economic importance and the crop is mainly produced at small family enterprises. Strawberries are repetitively amongst products in which unauthorized pesticide residues are determined. The PARA program launched in Brazil by ANVISA has disclosed that many samples have residues above the maximum residue limit (MRL). The present study appraised the pesticide residues detected in strawberries produced in the state of Rio Grande do Sul and marketed at the CEASA / RS. Along the harvesting seasons of 2018 and 2019, 62 strawberry samples were collected at the CEASA-pavilion destined for growers from the state of Rio Grande do Sul. Each sample was tested for 238 active ingredients of pesticides. Of the 62 samples retrieved, 40% were considered satisfactory and 60% resulted as unsatisfactory. Of the 25 satisfactory samples, three samples did not present any residues, and 22 had residues below the MRL. Of the 37 samples with an unsatisfactory outcome, 11 had active ingredients not allowed (NA) for use on strawberries, 13 presented active ingredients above the MRL and 13 reports presented the sum of both: residues above the MRL and NA. Thirty five different active ingredients were detected in the samples summing up to a total of 303 detection events. The active ingredients detected most frequently were procymidone (66.13%); carbendazim (53.22%) and difenoconazole (50%).

RESUMO: A cultura do morangueiro tem grande participação econômica e social no estado do Rio Grande do Sul, especialmente devido a sua importância na agricultura familiar. No entanto, o morango está constantemente entre as principais culturas com resíduos de agrotóxicos não autorizados ou acima do limite máximo de resíduos no principal Programa de Análise de Resíduos de Agrotóxicos em Alimentos (PARA) do Brasil. O presente estudo teve por objetivo avaliar os resíduos de agrotóxicos encontrados em morangos produzidos no estado do Rio Grande do Sul comercializados na CEASA/RS. Nos anos de 2018 e 2019 foram coletadas 62 amostras de morangos no pavilhão destinado aos produtores gaúchos desta central de abastecimento. Cada amostra foi analisada para presença de 238 ingredientes ativos de agrotóxicos. Das 62 amostras, 40% foram consideradas satisfatórias e 60% apresentaram resultado insatisfatório. Das 25 amostras satisfatórias, três amostras não continham resíduos de agrotóxicos e 22 apresentaram resíduos abaixo do limite máximo de resíduos (LMR) estipulado pela ANVISA. Dos 37 casos de amostras insatisfatórias, 11 foram por ingrediente ativo não permitido para a cultura (NPC), 13 por ingrediente ativo acima do LMR e 13 laudos apresentaram o somatório de resíduos acima do LMR e NPC. Foram encontrados 35 diferentes ingredientes ativos nas 62 amostras de morango, totalizando 303 eventos de detecção. Os ingredientes ativos detectados com maior frequência nas 62 amostras de morango foram procimidona (66,13%); carbendazim (53,22%) e difenoconazol (50%).

Phenolic composition of jussara (Euterpe edulisMartius) from Minas Gerais and Espírito Santo, Brazil, determined by high performance liquid chromatography coupled to diode array detection and electrospray ionization tandem mass spectrometry (HPLC-DAD-ESI-MS) / Composição fenólica de Jussara (Euterpe edulisMartius) de Minas Gerais e Espírito Santo, Brasil, determinada por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à detecção de arranjo de diodos e espectrometria de massa contendo sistema de ionização por eletrospray (HPLC-DAD-ESI MS/MS)

ABSTRACT: This research assessed the phenolic composition of Jussara pulp from the Brazilian states of Minas Gerais (MG) and Espírito Santo (ES) using HPLC-DAD-MS/MS. Seventeen anthocyanins were detected in fruits, derived from cyanidin, pelargonidin and peonidin. Among the non-anthocyanic phenolic compounds, flavonols (kaempferol, quercetin and isorhamnetin derivatives), flavan-3-ols (catechin, epicatechin, B-type procyanidins and unknown dimers) and resveratrol in its glycosylated form have been identified. Catechin (32.41-60.56 mg 100g-1) and epicatechin (18.86-40.92 mg 100g-1) were the main flavan-3-ols present in the fruits. The samples showed small concentrations of resveratrol glycosides (0.02-0.91 mg 100g-1). The analytical methodology used (HPLC-DAD-ESI-MS/MS) permitted the identification of newly reported compounds in this fruit.

RESUMO: O objetivo desta pesquisa foi avaliar a composição fenólica da polpa de Jussara dos Estados brasileiros de Minas Gerais (MG) e Espírito Santo (ES) usando HPLC-DAD-MS / MS. Dezessete antocianinas foram detectadas, dentre elas, derivadas de cianidina, pelargonidina e peonidina. Dentre os compostos fenólicos não antociânicos, foram identificados flavonóis (derivados de caempferol, quercetina e isorhamnetina), flavan-3-ols (catequina, epicatequina, procianidinas do tipo B e dímeros desconhecidos) e resveratrol em sua forma glicosilada. Catequina (32,41-60,56 mg 100g-1) e epicatequina (18,86-40,92 mg 100g-1) foram os principais flavan-3-óis presentes nas frutas. As amostras apresentaram pequenas concentrações de glicosídeos resveratrol (0,02-0,91 mg 100g-1). A metodologia analítica utilizada (HPLC-DAD-ESI-MS / MS) permitiu a identificação de novos compostos relatados presentes na composição da polpa de Jussara.

Occurrence of Pyricularia oryzae Triticum in plants of the genus Urochloa in Brazil / Ocorrência de Pyricularia oryzae Triticum em plantas do gênero Urochloa no Brasil

In this study Pyricularia spp., P. oryzae and the P. oryzae pathotype Triticum (PoT) were detected and identified in leaf segments of forage and invasive grasses located in or next to wheat fields. In 2018 and 2019, 66 samples of lesion leaf segments of Urochloa and other grasses were collected in Londrina (PR), Patos de Minas (MG), and Uberaba (MG). The detection and/or identification of the pathogens on the samples was conducted using moist chamber procedures and with the primers MoT3 and Pot2 by PCR. There were DNA amplification with the primer MoT3 (specific for PoT) for 13 (19.69%) of the samples, all of them from Urochloa. The finding that Urochloa hosts PoT at a relatively high rate raises concerns about the importance which these plants may have on the wheat blast cycle as an alternative host for the pathogen and/or source of inoculum for the disease.

Neste estudo Pyricularia spp., P. oryzae e o patótipo Triticum (PoT) de P. oryzae foram detectados e identificados em segmentos foliares de forrageiras e gramíneas invasoras de lavouras de trigo. Em 2018 e 2019, foram coletadas 66 amostras de segmentos foliares lesionados de Urochloa e outras gramíneas em Londrina (PR), Patos de Minas (MG) e Uberaba (MG). A detecção e/ou identificação dos patógenos nas amostras foi realizada por meio de procedimentos de câmara úmida e com os iniciadores MoT3 e Pot2 por PCR. Houve amplificações de DNA com o primer MoT3 (específico para PoT) em 13 (19,69%) das amostras, todas provenientes da Urochloa. O resultado de que Urochloa hospeda PoT em uma taxa relativamente alta levanta preocupações sobre a importância que essas plantas podem ter no ciclo de brusone do trigo como hospedeiro intermediário para o patógeno e / ou fonte de inóculo para a doença.

Prevalence and association of mycoplasma infection in the development of coronary artery disease / Prevalência e associação de infecção por micoplasma no desenvolvimento de doença arterial coronariana

Coronary heart disease (CHD) has been associated with significant morbidity and mortality worldwide. Although remain controversial, several studies have demonstrated the association of M. pneumoniae infections with atherosclerosis. We evaluated the possible association of mycoplasma infections in patients diagnosed with atherosclerosis by ELISA and PCR methods. Atherosclerotic tissue samples and blood samples were collected for the detection of mycoplasma antibodies (IgA) by ELISA from the 97 patients with coronary artery disease (CAD). M. pneumoniae specific IgA, IgG and IgM were measured by using the Anti-M. pneumoniae IgA/IgG/IgM ELISA. Detection of M. pneumoniae targeting the P1 adhesion gene was performed by PCR Acute infection of M. pneumoniae was diagnosed in 43.3% (42) of patients by PCR. The M. pneumoniae specific antibodies were detected in 36.1% (35) of patients. Twenty-five (25.8%) cases had IgG antibodies, 15 (15.5%) cases had IgM antibodies, 3 (3.1%) cases had IgA antibodies, 10 (10.3%) cases had both IgM + IgG antibodies and 1 (1%) case of each had IgM + IgA and IgG + IgA antibodies. None of the cases was positive for all three antibodies. A Pearson correlation coefficient analysis revealed an excellent correlation between the PCR and the serological results (r=0.921, p70 years of age. Our study reported an unusually higher prevalence of M. pneumoniae by serological tests (36.1%) and PCR (43.3%). Although the hypothesis of the association of M. pneumoniae and CAD is yet to be proven, the unusually high prevalence of M. pneumoniae in CAD patients indicates an association, if not, in the development of atherosclerosis.

A doença coronariana (DCC) tem sido associada a significativa morbidade e mortalidade em todo o mundo. Embora ainda sejam controversos, vários estudos têm demonstrado a associação de infecções por M. pneumoniae com aterosclerose. Avaliamos a possível associação de infecções por micoplasma em pacientes com diagnóstico de aterosclerose pelos métodos ELISA e PCR. Amostras de tecido aterosclerótico e amostras de sangue foram coletadas para a detecção de anticorpos contra micoplasma (IgA) por ELISA de 97 pacientes com doença arterial coronariana (DAC). IgA, IgG e IgM específicos para M. pneumoniae foram medidos usando o Anti-M. pneumoniae IgA / IgG / IgM ELISA. A detecção de M. pneumoniae visando o gene de adesão P1 foi realizada por PCR. A infecção aguda por M. pneumoniae foi diagnosticada em 43,3% (42) dos pacientes pela PCR. Os anticorpos específicos para M. pneumoniae foram detectados em 36,1% (35) dos pacientes. Vinte e cinco (25,8%) casos tinham anticorpos IgG, 15 (15,5%) casos tinham anticorpos IgM, 3 (3,1%) casos tinham anticorpos IgA, 10 (10,3%) casos tinham anticorpos IgM + IgG e 1 (1%) caso de cada um tinha anticorpos IgM + IgA e IgG + IgA. Nenhum dos casos foi positivo para os três anticorpos. A análise do coeficiente de correlação de Pearson revelou uma excelente correlação entre o PCR e os resultados sorológicos (r = 0,921, p 70 anos de idade. Nosso estudo relatou uma prevalência incomumente maior de M. pneumoniae por testes sorológicos (36,1%) e PCR (43,3%). Embora a hipótese da associação de M. pneumoniae e DAC ainda não tenha sido comprovada, a prevalência incomumente alta de M. pneumoniae em pacientes com DAC indica uma associação, se não, no desenvolvimento de aterosclerose.

Molecular detection and prevalence of Rotavirus with acute gastroenteritis among the children of rural and urban areas / Detecção molecular e prevalência de rotavírus com gastroenterite aguda entre as crianças de áreas rurais e urbanas

Rotavirus is the main infective agent of acute gastroenteritis (AGE) in children under the age of five years and causing significant morbidity as well as mortality throughout the world. The study was carried out to detect the prevalence rate, genotypes strain and risk factors of Rotavirus among the children of rural and urban areas of district Bannu Khyber Pakhtunkhwa Pakistan. A total of 180 stool samples were collected from children under the age of 5 years from two major hospitals of Bannu from January to December (2015). The samples were analyzed by Reverse-transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) for the detection of Rotavirus, positive samples were further processed for genotyping (G and P type) through specific PCR. Of the total, 41 (23%) samples were positive for Rotavirus. The most prevalent G genotypes found were: G3, G8, G9 (each 29%), followed by G10 (15%), and G11 (10%). Whereas the prevalent P genotypes were: P-8 (25%), P-4 and P-10 (each 20%), P-9 (15%), followed by P-6 and P-11 (each 10%). Moreover, Rotavirus infection was more prevalent in summer (23.73%) and winter (22.7%) than spring (20%) and autumn (21.4%). Rotavirus infection exhibited high frequency in June (14%), October (8%) and November (6%). It is concluded that Rotavirus is more prevalent in children and various genotypes (G and P) of Rotavirus are present in the study area. Lack of studies, awareness and rarer testing of Rotavirus are the principal reasons of virus prevalence in district Bannu, Pakistan.

O rotavírus é o principal agente infeccioso da gastroenterite aguda (AGE) em crianças menores de 5 anos e causa de morbidade e mortalidade significativas em todo o mundo. O estudo foi realizado para detectar a taxa de prevalência, cepa de genótipos e fatores de risco de rotavírus entre as crianças de áreas rurais e urbanas do distrito de Bannu Khyber Pakhtunkhwa, Paquistão. Um total de 180 amostras de fezes foi coletada de crianças menores de 5 anos de dois grandes hospitais de Bannu de janeiro a dezembro (2015). As amostras foram analisadas por reação em cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR) para detecção de rotavírus; as amostras positivas foram posteriormente processadas para genotipagem (tipo G e P) através de PCR específica. Do total, 41 (23%) amostras foram positivas para rotavírus. Os genótipos G mais prevalentes encontrados foram: G3, G8, G9 (cada 29%), seguidos de G10 (15%) e G11 (10%). Considerando que os genótipos P prevalentes foram: P-8 (25%), P-4 e P-10 (cada 20%), P-9 (15%), seguido por P-6 e P-11 (cada 10%). Além disso, a infecção por rotavírus foi mais prevalente no verão (23,73%) e inverno (22,7%) do que na primavera (20%) e no outono (21,4%). A infecção por rotavírus apresentou alta frequência em junho (14%), outubro (8%) e novembro (6%). Conclui-se que o rotavírus é mais prevalente em crianças e vários genótipos (G e P) do rotavírus estão presentes na área de estudo. A falta de estudos, conhecimento e testes mais raros de rotavírus são as principais razões da prevalência do vírus no distrito de Bannu, Paquistão.

Neorickettsia sp. in coatis (Nasua nasua) in Brazil / Neorickettsia sp. em quatis (Nasua nasua) no Brasil

The genus Neorickettsia comprises trematode-associated bacteria that can cause diseases in animals and humans. Despite detection of Neorickettsia antigens in the intestine of coatis kept in captivity in southern Brazil through immunohistochemistry, the molecular identity of the bacteria in South American procyonids remains elusive. The aim of the present study was to investigate the occurrence of Neorickettsia sp. in blood samples from coatis in central-western Brazil. Between March 2018 and January 2019, animals were captured and recaptured in two areas of the Cerrado (Parque Estadual do Prosa, PEP; and Vila da Base Aérea, VBA) located in the city of Campo Grande, state of Mato Grosso do Sul, central-western Brazil. All captures were performed according to convenience. DNA from 97 blood samples was subjected to nested PCR (nPCR) targeting a fragment of the 16S rRNA gene of Neorickettsia sp. Six samples (3.6%; five from VBA and one from PEP) from different coatis were positive in nPCR based on the 16S rRNA. The sequences obtained (~500 bp) showed ˃ 99% similarity to N. risticii. Phylogenetic analysis clustered the sequences detected in the present study in a clade with N. risticii. This is the first molecular detection of Neorickettsia sp. in coatis in Brazil.(AU)

O gênero Neorickettsia compreende bactérias associadas a trematódeos que podem causar doenças em animais e humanos. Apesar da detecção de antígenos de Neorickettsia por imuno-histoquímica no intestino de quatis mantidos em cativeiro no sul do Brasil, a identidade molecular da bactéria em procionídeos da América do Sul permanece indefinida. O presente trabalho teve como objetivo investigar a ocorrência de Neorickettsia sp. em amostras de sangue de quatis do Centro-Oeste do Brasil. Entre março de 2018 e janeiro de 2019, os animais foram capturados em duas áreas de Cerrado (Parque Estadual do Prosa PEP e Vila da Base Aérea VBA) localizadas na cidade de Campo Grande, Mato Grosso do Sul, Centro-Oeste do Brasil. Todas as capturas e recapturas foram realizadas por conveniência. O DNA de 97 amostras de sangue foi submetido a "nested" (nPCR), baseada em um fragmento do gene 16S rRNA de Neorickettsia sp. Seis (3,6% - 5 de VBA e 1 de PEP) amostras de quatis diferentes foram positivas na nPCR, baseada no rRNA 16S. As sequências obtidas (~500 pb) apresentaram ˃99% de identidade com N. risticii. A inferência filogenética agrupou as sequencias detectadas no presente estudo em um clado com N. risticii. Esta é a primeira detecção molecular de Neorickettsia sp. em quatis do Brasil.(AU)

Molecular detection and prevalence of Rotavirus with acute gastroenteritis among the children of rural and urban areas / Detecção molecular e prevalência de rotavírus com gastroenterite aguda entre as crianças de áreas rurais e urbanas

Rotavirus is the main infective agent of acute gastroenteritis (AGE) in children under the age of five years and causing significant morbidity as well as mortality throughout the world. The study was carried out to detect the prevalence rate, genotypes strain and risk factors of Rotavirus among the children of rural and urban areas of district Bannu Khyber Pakhtunkhwa Pakistan. A total of 180 stool samples were collected from children under the age of 5 years from two major hospitals of Bannu from January to December (2015). The samples were analyzed by Reverse-transcriptase Polymerase Chain Reaction (RT-PCR) for the detection of Rotavirus, positive samples were further processed for genotyping (G and P type) through specific PCR. Of the total, 41 (23%) samples were positive for Rotavirus. The most prevalent G genotypes found were: G3, G8, G9 (each 29%), followed by G10 (15%), and G11 (10%). Whereas the prevalent P genotypes were: P-8 (25%), P-4 and P-10 (each 20%), P-9 (15%), followed by P-6 and P-11 (each 10%). Moreover, Rotavirus infection was more prevalent in summer (23.73%) and winter (22.7%) than spring (20%) and autumn (21.4%). Rotavirus infection exhibited high frequency in June (14%), October (8%) and November (6%). It is concluded that Rotavirus is more prevalent in children and various genotypes (G and P) of Rotavirus are present in the study area. Lack of studies, awareness and rarer testing of Rotavirus are the principal reasons of virus prevalence in district Bannu, Pakistan.(AU)

O rotavírus é o principal agente infeccioso da gastroenterite aguda (AGE) em crianças menores de 5 anos e causa de morbidade e mortalidade significativas em todo o mundo. O estudo foi realizado para detectar a taxa de prevalência, cepa de genótipos e fatores de risco de rotavírus entre as crianças de áreas rurais e urbanas do distrito de Bannu Khyber Pakhtunkhwa, Paquistão. Um total de 180 amostras de fezes foi coletada de crianças menores de 5 anos de dois grandes hospitais de Bannu de janeiro a dezembro (2015). As amostras foram analisadas por reação em cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR) para detecção de rotavírus; as amostras positivas foram posteriormente processadas para genotipagem (tipo G e P) através de PCR específica. Do total, 41 (23%) amostras foram positivas para rotavírus. Os genótipos G mais prevalentes encontrados foram: G3, G8, G9 (cada 29%), seguidos de G10 (15%) e G11 (10%). Considerando que os genótipos P prevalentes foram: P-8 (25%), P-4 e P-10 (cada 20%), P-9 (15%), seguido por P-6 e P-11 (cada 10%). Além disso, a infecção por rotavírus foi mais prevalente no verão (23,73%) e inverno (22,7%) do que na primavera (20%) e no outono (21,4%). A infecção por rotavírus apresentou alta frequência em junho (14%), outubro (8%) e novembro (6%). Conclui-se que o rotavírus é mais prevalente em crianças e vários genótipos (G e P) do rotavírus estão presentes na área de estudo. A falta de estudos, conhecimento e testes mais raros de rotavírus são as principais razões da prevalência do vírus no distrito de Bannu, Paquistão.(AU)

High titers of anti-Leishmania spp. antibodies in apparently healthy dogs in the North Pioneer Mesoregion of the state of Paraná, Brazil / Títulos altos de anticorpos anti-Leishmania spp. em cães aparentemente saudáveis da Mesoregião Norte Pioneiro do estado do Paraná, Brasil

Leishmaniasis is an anthropozoonosis with vector transmission, and knowledge regarding the occurrence of this parasitosis in sentinels can contribute to infection and disease control measures in humans. The objectives of this study were to evaluate the occurrence of Leishmania exposure and infection in dogs from urban and rural areas in the North Pioneer Mesoregion of the state of Paraná, to evaluate possible risk factors, and to analyze the statistical agreement between the serological techniques that were used. Using a convenience sampling, serum and whole blood samples were collected to perform serological and molecular assays, respectively. The enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and indirect fluorescent antibody test (IFAT) identified 29/204 (14.2%) and 20/204 (9.8%) seropositive dogs, respectively. Five dogs (2.4%) were seropositive for both serological tests, and four dogs presented high titers in the IFAT. None of the samples tested positive for Leishmania spp. DNA according to polymerase chain reaction analysis. No factors were significantly associated with infection. Leishmania parasites circulate in urban and rural dogs in the North Pioneer Mesoregion of the state of Paraná. Despite the absence of clinical cases, seropositive animals with high antibody titers should serve as a warning to the local population that should be properly informed regarding the prevention.(AU)

A Leishmaniose é uma antropozoonose e sua transmissão ocorre através da picada de flebotomíneos de diferentes gêneros, dependendo da localização geográfica. O conhecimento sobre a ocorrência desta parasitose nos reservatórios pode colaborar com medidas de controle da infecção e doença nos humanos. Os objetivos deste estudo foram: avaliar a ocorrência da infecção por Leishmania, em cães de áreas urbanas e rurais, na região da mesorregião Norte Pioneiro do Paraná; avaliar possíveis fatores de risco à infecção e analisar a concordância estatística entre as técnicas sorológicas utilizadas. Para tanto, foram colhidas 204 amostras de soro e sangue total de cães escolhidos aleatoriamente de municípios da mesorregião Norte Pioneiro do Paraná para a detecção de anticorpos anti-Leishmania spp., pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) e reação de imunofluorescência indireta (RIFI), e para a detecção de DNA de Leishmania spp. pela reação em cadeia pela polimerase (PCR). Dos 204 cães testados, 29 (14,2%) e 20 (9,8%) foram soropositivos pelo ELISA e RIFI, respectivamente. Cinco cães (2,4%) foram soropositivos em ambos os testes sorológicos. Não foram observados fatores abióticos e bióticos associados à infecção. A concordância entre as técnicas diagnósticas calculada por Kappa foi de 0,34. Conclui-se que, apesar da baixa ocorrência de positividade para leishmaniose e da ausência de casos sintomáticos, os resultados deste estudo devem ser um alerta para a população local por se tratar de uma importante zoonose e, portanto, medidas de prevenção e controle não devem ser negligenciadas.(AU)