Southern Brazilian geographic distribution of Migonemyia migonei (Diptera: Psychodidae), a putative vector of Leishmania infantum (Kinetoplastida: Trypanosomatidae): a systematic review / Distribuição geográfica sul brasileira de Migonemyia migonei (Diptera: Psychodidae), um vetor putativo de Leishmania infantum (Kinetoplastida: Trypanosomatidae): uma revisão sistemática

This systematic review gathered information on the spatial distribution in southern Brazil of the sandfly Migonemyia migonei, a possible vector of Leishmania species that cause visceral leishmaniasis (VL). Articles were searched from the PubMed, Scielo, Web of Science, and Scopus databases using the keywords: "Migonemyia migonei AND Paraná", "Migonemyia migonei AND Santa Catarina", "Migonemyia migonei AND Rio Grande do Sul", "phlebotomine AND Parana", " flebotomíneo AND Paraná" and "sandfly AND Paraná", "phlebotomine AND Santa Catarina;", " flebotomíneo AND Santa Catarina" and "sandfly AND Santa Catarina", "phlebotomine AND Rio Grande do Sul;", " flebotomíneo AND Rio Grande do Sul", and "sandfly AND Rio Grande do Sul". The initial search identified 322 articles that met the selection criteria. Empty files or duplicated were then excluded. The titles were screened, and the full texts were obtained. This review included 36 articles, covering 72 of the 399 (18.04%) municipalities in Paraná state, one of the 295 (0.33%) in Santa Catarina, and two of the 497 (0.40%) in Rio Grande do Sul. Mg. migonei was found in 54 municipalities of Paraná state, in one municipality of Santa Catarina, and in one of Rio Grande do Sul. Based on the wide distribution of Mg. migonei in the municipalities of Paraná, greater monitoring is required regarding cases of VL in humans and animals in this region, in addition to epidemiological investigations of these cases of suspected autochthony, as well as increased prevention and control efforts. More studies on VL are required in Santa Catarina and Rio Grande do Sul.

Esta revisão sistemática reuniu informações sobre a distribuição espacial no sul do Brasil do flebotomíneo Migonemyia migonei, um possível vetor de espécies de Leishmania causadoras da leishmaniose visceral (LV). Os artigos foram pesquisados nas bases de dados PubMed, Scielo, Web of Science e Scopus usando as palavras-chave: "Migonemyia migonei AND Paraná", "Migonemyia migonei AND Santa Catarina", "Migonemyia migonei AND Rio Grande do Sul", "phlebotomine AND Parana" , "flebotomíneo AND Paraná" e "flebotomíneo AND Paraná", "flebotomíneo AND Santa Catarina;", "flebotomíneo AND Santa Catarina" e "flebotomíneo AND Santa Catarina", "flebotomíneo AND Rio Grande do Sul;", "flebotomíneo AND Rio Grande do Sul" e "sandfly AND Rio Grande do Sul". A busca inicial identificou 322 artigos que atenderam aos critérios de seleção. Em seguida, arquivos vazios ou duplicados foram excluídos. Os títulos foram triados e os textos completos foram obtidos. Esta revisão incluiu 36 artigos, abrangendo 72 dos 399 (18,04%) municípios do Paraná, um dos 295 (0,33%) de Santa Catarina, dois dos 497 (0,40%) do Rio Grande do Sul. Mg. migonei foi encontrado em 54 municípios do Paraná estado, em um município de Santa Catarina e em um do Rio Gr ande do Sul. Com base na ampla distribuição de Mg. migonei nos municípios paranaenses, é necessária maior atenção quanto aos casos de LV em humanos e animais, além de investigações epidemiológicas desses casos de suspeita de autoctonia, bem como maiores esforços de prevenção e controle. Mais estudos são necessários em Santa Catarina e Rio Grande do Sul.

In-house serological ELISA as a leishmaniosis diagnostic test: development and applications in canines from the western border of Brazil / ELISA "in house" para o diagnóstico de leishmaniose: desenvolvimento e aplicação em caninos da fronteira Oeste do Brasil

ABSTRACT: Leishmaniosis is a great public health problem affecting both humans and animals. The disease is caused by the protozoan Leishmania spp., which has a complex cycle involving a phlebotomine vector. The ELISA test (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) along with a chromatographic immunoassay was defined by the Brazil Health Ministry as the confirmatory screening protocol in 2011. Uruguaiana city is 630 km away from Porto Alegre, which makes it difficult to send samples and diagnose leishmaniasis, as well as receive quick results. In view of this, the present study evaluated an in-house indirect ELISA method compared to indirect immunofluorescence assay (IFA) and dual-path platform chromatographic immunoassay (DPP-BioManguinhos®) for the detection of an immune response to Leishmania spp. in canine species. The serological evaluation included 48 canines from the western border of Brazil (Uruguaiana and Barra do Quaraí city). Among the 48 canine samples tested, 18 were positive when using the ELISA technique, 19 were positive with IFA, and 17 were positive with rapid test DPP®. The ELISA technique showed a sensitivity/specificity of 83.3%/86.7% when compared to IFA and 100%/96.8% compared to DPP®. The present study showed a prevalence of 37.5%, demonstrating that the infection circulates in the studied population. It can be concluded that the ELISA technique was valuable for use in field conditions when performing screening tests in endemic areas.

RESUMO: A leishmaniose é um grande problema de saúde pública que afeta tanto humanos quanto animais. A doença é causada pelo protozoário Leishmania spp., que possui um ciclo complexo envolvendo um vetor flebotomíneo. O teste ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), juntamente com um imunoensaio cromatográfico, foi definido pelo Ministério da Saúde do Brasil como protocolo de triagem confirmatória em 2011. A cidade de Uruguaiana fica a 630 km de Porto Alegre, o que dificulta o envio de amostras e o diagnóstico da leishmaniose, além da demora para obter os resultados. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar um método de ELISA indireto in-house comparado ao ensaio de imunofluorescência indireta (IFA) e imunoensaio cromatográfico de plataforma de dupla via (DPP-BioManguinhos®) para a detecção de uma resposta imune contra Leishmania spp. na espécie canina. A avaliação sorológica incluiu 48 caninos da fronteira oeste do Brasil (cidade de Uruguaiana e Barra do Quaraí). Das 48 amostras caninas testadas, 18 foram positivas na técnica de ELISA, 19 foram positivas com IFA e 17 foram positivas com o teste rápido DPP®. A técnica de ELISA apresentou sensibilidade/especificidade de 83,3%/86,7% quando comparada ao IFA e 100%/96,8% em relação ao DPP®. O presente estudo apresentou prevalência de 37,5%, demonstrando que a infecção circula na população estudada. Pode-se concluir que a técnica de ELISA foi valiosa para uso em condições de campo na realização de testes de triagem em áreas endêmicas.

In-house serological ELISA as a leishmaniosis diagnostic test: development and applications in canines from the western border of Brazil / ELISA "in house" para o diagnóstico de leishmaniose: desenvolvimento e aplicação em caninos da fronteira Oeste do Brasil

Leishmaniosis is a great public health problem affecting both humans and animals. The disease is caused by the protozoan Leishmania spp., which has a complex cycle involving a phlebotomine vector. The ELISA test (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) along with a chromatographic immunoassay was defined by the Brazil Health Ministry as the confirmatory screening protocol in 2011. Uruguaiana city is 630 km away from Porto Alegre, which makes it difficult to send samples and diagnose leishmaniasis, as well as receive quick results. In view of this, the present study evaluated an in-house indirect ELISA method compared to indirect immunofluorescence assay (IFA) and dual-path platform chromatographic immunoassay (DPP-BioManguinhos®) for the detection of an immune response to Leishmania spp. in canine species. The serological evaluation included 48 canines from the western border of Brazil (Uruguaiana and Barra do Quaraí city). Among the 48 canine samples tested, 18 were positive when using the ELISA technique, 19 were positive with IFA, and 17 were positive with rapid test DPP®. The ELISA technique showed a sensitivity/specificity of 83.3%/86.7% when compared to IFA and 100%/96.8% compared to DPP®. The present study showed a prevalence of 37.5%, demonstrating that the infection circulates in the studied population. It can be concluded that the ELISA technique was valuable for use in field conditions when performing screening tests in endemic areas.

A leishmaniose é um grande problema de saúde pública que afeta tanto humanos quanto animais. A doença é causada pelo protozoário Leishmania spp., que possui um ciclo complexo envolvendo um vetor flebotomíneo. O teste ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay), juntamente com um imunoensaio cromatográfico, foi definido pelo Ministério da Saúde do Brasil como protocolo de triagem confirmatória em 2011. A cidade de Uruguaiana fica a 630 km de Porto Alegre, o que dificulta o envio de amostras e o diagnóstico da leishmaniose, além da demora para obter os resultados. Diante disso, o presente estudo teve como objetivo avaliar um método de ELISA indireto in-house comparado ao ensaio de imunofluorescência indireta (IFA) e imunoensaio cromatográfico de plataforma de dupla via (DPP-BioManguinhos®) para a detecção de uma resposta imune contra Leishmania spp. na espécie canina. A avaliação sorológica incluiu 48 caninos da fronteira oeste do Brasil (cidade de Uruguaiana e Barra do Quaraí). Das 48 amostras caninas testadas, 18 foram positivas na técnica de ELISA, 19 foram positivas com IFA e 17 foram positivas com o teste rápido DPP®. A técnica de ELISA apresentou sensibilidade/especificidade de 83,3%/86,7% quando comparada ao IFA e 100%/96,8% em relação ao DPP®. O presente estudo apresentou prevalência de 37,5%, demonstrando que a infecção circula na população estudada. Pode-se concluir que a técnica de ELISA foi valiosa para uso em condições de campo na realização de testes de triagem em áreas endêmicas.

Persistent cutaneous canine leishmaniasis caused by Leishmania (Viannia) braziliensis in an area with predominance of Nyssomyia neivai in the state of São Paulo, Brazil / Leishmaniose cutânea canina persistente causada por Leishmania (Viannia) braziliensis em uma área com predomínio de Nyssomyia neivai no estado de São Paulo, Brasil

American cutaneous leishmaniasis (ACL) is a neglected zoonotic disease caused mainly by Leishmania (Viannia) braziliensis, which is endemic throughout Brazil. Canine ACL cases were investigated in a rural area of Monte Mor, São Paulo, where a human ACL case had been confirmed. Dogs were evaluated through clinical and laboratory diagnosis including serology, cytological tissue preparations and PCR on skin lesions, lymph node and bone marrow samples. Entomological investigations on sandflies trapped in the surroundings of the study area were performed for 14 months. Nyssomyia neivai was the predominant phlebotomine species, comprising 94.65% of the captured specimens (832 out of 879). This species was the most abundant in all trapping sites, including human homes and dog shelters. Ny. whitmani, Migonemyia migonei, Pintomyia monticola, Evandromyia cortellezzii, Pi. fischeri and Expapilata firmatoi were also captured. Two of the three dogs examined were positive for anti-Leishmania IgG in ELISA using the antigen Fucose mannose ligand and skin samples were positive for L. (V.) braziliensis in PCR, but all the samples collected were negative for L. (L.) infantum. One of the dogs had a confirmed persistent infection for more than one year.(AU)

A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) é uma doença zoonótica negligenciada, causada principalmente por Leishmania (Viannia) braziliensis, sendo endêmica em todo o Brasil. Foram investigados casos de LTA canina em uma área rural da cidade de Monte Mor, São Paulo, onde foi confirmado um caso humano de LTA. Os cães foram avaliados por diagnóstico clínico e laboratorial, incluindo sorologia, esfregaços microscópicos e PCR de amostras em lesões de pele, linfonodos e medula óssea. Também foram realizadas investigações entomológicas durante 14 meses, usando-se armadilhas luminosas para flebotomíneos nas proximidades da área de estudo. Nyssomyia neivai foi a espécie de flebotomíneo predominante com 94,65% dos espécimes capturados (832 de 879). Essa espécie foi a mais abundante em todos os locais de captura, incluindo-se abrigos para humanos e cães. Foram também capturadas as espécies Ny. whitmani, Migonemyia migonei, Pintomyia monticola, Evandromyia cortellezzii, Pi. fischeri e Expapilata firmatoi. Dos três cães examinados, dois apresentaram IgG anti-Leishmania positivo no ELISA, usando-se o antígeno “Fucose mannose ligand”, PCR da lesão de pele positivo para L. (V.) braziliensis e negativo em todas amostras para L. (L.) infantum. Um dos cães apresentou infecção persistente por mais de um ano.(AU)

Situação da leishmaniose visceral canina (LVC) no estado de São Paulo / Situation of canine visceral leishmaniosis (LVC) in the state of São Paulo / Situación de leishmaniosis visceral canina (LVC) en el estado de São Paulo

A leishmaniose visceral (LV) é uma enfermidade zoonótica transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, conhecido popularmente como “mosquito-palha”, tendo o cão doméstico como seu principal reservatório no ambiente urbano. Apresenta-se em plena expansão no estado de São Paulo, com 76 munícipios apresentando transmissão canina e humana, 54 municípios silenciosos receptivos vulneráveis no ano de 2015, e com 13 casos humanos e dois óbitos registrados no primeiro trimestre do ano de 2019. O diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) pode ser realizado através de técnicas indiretas ou diretas. O protocolo oficial do Ministério da Saúde preconiza a triagem pela técnica Dual Plath Platform (DPP) e a confirmação pela técnica de ensaio imunoenzimático (ELISA). O tratamento pode ser realizado como medicamento MilteforanTM (miltefosina 2%), o qual possibilita apenas a cura clínica do animal e redução da capacidade de transmissão. A eutanásia, por sua vez, permanece como medida de controle controversa, e a prevenção ainda figura como a melhor medida para controlar a transmissão da doença.

Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease transmitted by the phlebotomine vector Lutzomyia longipalpis, popularly known as “sandfly”. In the urban environment, the main reservoir is the domestic dog. It is in full expansion throughout the São Paulo State, with 76 municipalities presenting canine and human transmission, 54 silent receptive vulnerable municipalities in 2015, and 13 human cases and two deaths recorded in the first quarter of 2019. The diagnosis of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) can be performed using in director direct techniques. The official protocol recommended by the Brazilian Ministry of Health uses the Dual Plath Platform (DPP) technique as screening test and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) as confirmatory test. Animal can be treated using MilteforanTM (miltefosine 2%), which allows only the clinical cure of the animal and the reduction of the transmission power. Euthanasia, in turn, remains as a controversial control measure. Prevention continues to be the best solution for the transmission of the disease.

La leishmaniasis visceral (LV) es una enfermedad zoonótica transmitida por el flebótomo Lutzomyia longipalpis, conocido popularmente como “mosquito de la paja”. En el entorno urbano, el reservorio principal es el perro doméstico. Está en plena expansión en todo el estado de São Paulo, con 76 municipios con transmisión canina y humana, 54 municipios vulnerables receptivos silenciosos, en 2015, y 13 casos humanos y dos muertes registradas en el primer trimestre de 2019. El diagnóstico de leishmaniasis visceral canina (CVL) puede ser realizado utilizando técnicas indirectas o directas. El protocolo oficial utiliza la detección utilizando la técnica de Plataforma Dual Plath (DPP) y la confirmación mediante la técnica de ensayo inmunoenzimático (ELISA). El tratamiento puede ser realizado con el medicamento MillteforanTM, que permite solo la curación clínica del animal. La eutanasia, a su vez, sigue siendo una medida de control controvertida. La prevención sigue siendo la mejor solución para la transmisión de esta enfermedad.

Leishmaniose visceral canina: breve revisão e relatos de casos / Canine visceral leishmaniosis: brief review and case reports / Leishmaniosis visceral canina: breve revisión e informes de casos

La leishmaniasis es una enfermedad causada por un protozoo de la especie Leishmania chagasi. Se transmite por la picadura de las hembras del insecto vector infectado, un mosquito de la especie Lutzomyia longipalpis, conocido popularmente como mosquito de la paja. Con una amplia distribución geográfica, Brasil es responsable del 96% de los casos notificados en las Américas. Es una zoonosis de evolución crónica, con afectación sistémica y, si no se trata, puede provocar la muerte hasta en un 90% de los casos. En los perros, considerada el principal reservorio urbano del agente etiológico, la leishmaniasis visceral canina es una enfermedad que causa gran sufrimiento a los animales afectados, guardianes y contactos. Las manifestaciones clínicas dependen intrínsecamente del tipo de respuesta inmune que presente su hospedador, que pueden aparecer desde tres meses hasta varios años después de la infección y en ocasiones son inespecíficas. El diagnóstico de laboratorio de la leishmaniasis visceral canina se basa en la tríada de métodos serológicos, parasitológicos y moleculares y es fundamental para la definición de las etapas de la enfermedad y la elección del tratamiento adecuado. Los principales objetivos del tratamiento son reducir la carga parasitaria del perro, neutralizar su capacidad infecciosa, restablecer adecuadamente su respuesta inmunitaria, promover la mejoría clínica...

Leishmaniasis is a disease caused by a protozoan of the species Leishmania chagasi. It is transmitted by the bite of females of the infected vector insect, the sandfly known popularly as the straw mosquito; In Brazil, the main species responsible for transmission is Lutzomyia longipalpis. In Brazil, the disease has a wide geographical distribution and is responsible for 96% of reported cases in the Americas. It is a chronic evolutionary zoonosis with systemic involvement and, if left untreated, can lead to death in up to 90% of cases. In dogs, considered the main urban reservoir of the etiological agent, CVL is a disease that causes great suffering to affected animals, tutors and contactants. The clinical manifestations of CVL depend intrinsically on the type of immune response presented by its host. Clinical signs may appear from three months to several years after infection and are sometimes nonspecific. The laboratory diagnosis of CVL is based on the triad of serological, parasitological and molecular methods and is essential for staging the disease and choosing the appropriate treatment. Treatment aims to reduce the dog's parasitic load, neutralizing its infectious capacity, properly restoring its immune response, promoting clinical improvement and preventing relapses. The aim of this paper was to present a review of the expository literature on the epidemiological aspects...

A leishmaniose é uma doença causada por um protozoário da espécie Leishmania chagasi. É transmitida pela picada de fêmeas do inseto vetor infectado, um flebotomíneo da espécie Lutzomyia longipalpis, conhecido popularmente como mosquito palha. De ampla distribuição geográfica, o Brasil é responsável por 96% dos casos notificados nas Américas. Trata-se de uma zoonose de evolução crônica, com acometimento sistêmico e, se não tratada, pode levar a óbito até 90% dos casos. No cão, considerado o principal reservatório urbano do agente etiológico, a leishmaniose visceral canina é uma enfermidade que provoca grande sofrimento aos animais acometidos, tutores e contactantes. As manifestações clínicas dependem intrinsecamente do tipo de resposta imunológica apresentada pelo seu hospedeiro, podendo surgir de três meses até vários anos após a infecção e são, por vezes, inespecíficas. O diagnóstico laboratorial da leishmaniose visceral canina baseia-se na tríade de métodos sorológicos, parasitológicos e moleculares e é essencial para o estadiamento da doença e escolha do tratamento adequado. O tratamento possui como principais objetivos reduzir a carga parasitária do cão, neutralizando a sua capacidade infectante, restaurando adequadamente a sua resposta imune, promovendo a melhora clínica e prevenindo recaídas. O objetivo com esse trabalho foi apresentar uma revisão de literatura expositiva...

Persistent cutaneous canine leishmaniasis caused by Leishmania (Viannia) braziliensis in an area with predominance of Nyssomyia neivai in the state of São Paulo, Brazil / Leishmaniose cutânea canina persistente causada por Leishmania (Viannia) braziliensis em uma área com predomínio de Nyssomyia neivai no estado de São Paulo, Brasil

Abstract American cutaneous leishmaniasis (ACL) is a neglected zoonotic disease caused mainly by Leishmania (Viannia) braziliensis, which is endemic throughout Brazil. Canine ACL cases were investigated in a rural area of Monte Mor, São Paulo, where a human ACL case had been confirmed. Dogs were evaluated through clinical and laboratory diagnosis including serology, cytological tissue preparations and PCR on skin lesions, lymph node and bone marrow samples. Entomological investigations on sandflies trapped in the surroundings of the study area were performed for 14 months. Nyssomyia neivai was the predominant phlebotomine species, comprising 94.65% of the captured specimens (832 out of 879). This species was the most abundant in all trapping sites, including human homes and dog shelters. Ny. whitmani, Migonemyia migonei, Pintomyia monticola, Evandromyia cortellezzii, Pi. fischeri and Expapilata firmatoi were also captured. Two of the three dogs examined were positive for anti-Leishmania IgG in ELISA using the antigen Fucose mannose ligand and skin samples were positive for L. (V.) braziliensis in PCR, but all the samples collected were negative for L. (L.) infantum. One of the dogs had a confirmed persistent infection for more than one year.

Resumo A leishmaniose tegumentar Americana (LTA) é uma doença zoonótica negligenciada, causada principalmente por Leishmania (Viannia) braziliensis, sendo endêmica em todo o Brasil. Foram investigados casos de LTA canina em uma área rural da cidade de Monte Mor, São Paulo, onde foi confirmado um caso humano de LTA. Os cães foram avaliados por diagnóstico clínico e laboratorial, incluindo sorologia, esfregaços microscópicos e PCR de amostras em lesões de pele, linfonodos e medula óssea. Também foram realizadas investigações entomológicas durante 14 meses, usando-se armadilhas luminosas para flebotomíneos nas proximidades da área de estudo. Nyssomyia neivai foi a espécie de flebotomíneo predominante com 94,65% dos espécimes capturados (832 de 879). Essa espécie foi a mais abundante em todos os locais de captura, incluindo-se abrigos para humanos e cães. Foram também capturadas as espécies Ny. whitmani, Migonemyia migonei, Pintomyia monticola, Evandromyia cortellezzii, Pi. fischeri e Expapilata firmatoi. Dos três cães examinados, dois apresentaram IgG anti-Leishmania positivo no ELISA, usando-se o antígeno "Fucose mannose ligand", PCR da lesão de pele positivo para L. (V.) braziliensis e negativo em todas amostras para L. (L.) infantum. Um dos cães apresentou infecção persistente por mais de um ano.

Situação da leishmaniose visceral canina (LVC) no estado de São Paulo / Situation of canine visceral leishmaniosis (LVC) in the state of São Paulo / Situación de leishmaniosis visceral canina (LVC) en el estado de São Paulo

A leishmaniose visceral (LV) é uma enfermidade zoonótica transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis, conhecido popularmente como “mosquito-palha”, tendo o cão doméstico como seu principal reservatório no ambiente urbano. Apresenta-se em plena expansão no estado de São Paulo, com 76 munícipios apresentando transmissão canina e humana, 54 municípios silenciosos receptivos vulneráveis no ano de 2015, e com 13 casos humanos e dois óbitos registrados no primeiro trimestre do ano de 2019. O diagnóstico da Leishmaniose Visceral Canina (LVC) pode ser realizado através de técnicas indiretas ou diretas. O protocolo oficial do Ministério da Saúde preconiza a triagem pela técnica Dual Plath Platform (DPP) e a confirmação pela técnica de ensaio imunoenzimático (ELISA). O tratamento pode ser realizado como medicamento MilteforanTM (miltefosina 2%), o qual possibilita apenas a cura clínica do animal e redução da capacidade de transmissão. A eutanásia, por sua vez, permanece como medida de controle controversa, e a prevenção ainda figura como a melhor medida para controlar a transmissão da doença.(AU)

Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonotic disease transmitted by the phlebotomine vector Lutzomyia longipalpis, popularly known as “sandfly”. In the urban environment, the main reservoir is the domestic dog. It is in full expansion throughout the São Paulo State, with 76 municipalities presenting canine and human transmission, 54 silent receptive vulnerable municipalities in 2015, and 13 human cases and two deaths recorded in the first quarter of 2019. The diagnosis of Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) can be performed using in director direct techniques. The official protocol recommended by the Brazilian Ministry of Health uses the Dual Plath Platform (DPP) technique as screening test and the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) as confirmatory test. Animal can be treated using MilteforanTM (miltefosine 2%), which allows only the clinical cure of the animal and the reduction of the transmission power. Euthanasia, in turn, remains as a controversial control measure. Prevention continues to be the best solution for the transmission of the disease.(AU)

La leishmaniasis visceral (LV) es una enfermedad zoonótica transmitida por el flebótomo Lutzomyia longipalpis, conocido popularmente como “mosquito de la paja”. En el entorno urbano, el reservorio principal es el perro doméstico. Está en plena expansión en todo el estado de São Paulo, con 76 municipios con transmisión canina y humana, 54 municipios vulnerables receptivos silenciosos, en 2015, y 13 casos humanos y dos muertes registradas en el primer trimestre de 2019. El diagnóstico de leishmaniasis visceral canina (CVL) puede ser realizado utilizando técnicas indirectas o directas. El protocolo oficial utiliza la detección utilizando la técnica de Plataforma Dual Plath (DPP) y la confirmación mediante la técnica de ensayo inmunoenzimático (ELISA). El tratamiento puede ser realizado con el medicamento MillteforanTM, que permite solo la curación clínica del animal. La eutanasia, a su vez, sigue siendo una medida de control controvertida. La prevención sigue siendo la mejor solución para la transmisión de esta enfermedad.(AU)

Leishmaniose visceral canina: breve revisão e relatos de casos / Canine visceral leishmaniosis: brief review and case reports / Leishmaniosis visceral canina: breve revisión e informes de casos

La leishmaniasis es una enfermedad causada por un protozoo de la especie Leishmania chagasi. Se transmite por la picadura de las hembras del insecto vector infectado, un mosquito de la especie Lutzomyia longipalpis, conocido popularmente como mosquito de la paja. Con una amplia distribución geográfica, Brasil es responsable del 96% de los casos notificados en las Américas. Es una zoonosis de evolución crónica, con afectación sistémica y, si no se trata, puede provocar la muerte hasta en un 90% de los casos. En los perros, considerada el principal reservorio urbano del agente etiológico, la leishmaniasis visceral canina es una enfermedad que causa gran sufrimiento a los animales afectados, guardianes y contactos. Las manifestaciones clínicas dependen intrínsecamente del tipo de respuesta inmune que presente su hospedador, que pueden aparecer desde tres meses hasta varios años después de la infección y en ocasiones son inespecíficas. El diagnóstico de laboratorio de la leishmaniasis visceral canina se basa en la tríada de métodos serológicos, parasitológicos y moleculares y es fundamental para la definición de las etapas de la enfermedad y la elección del tratamiento adecuado. Los principales objetivos del tratamiento son reducir la carga parasitaria del perro, neutralizar su capacidad infecciosa, restablecer adecuadamente su respuesta inmunitaria, promover la mejoría clínica...(AU)

Leishmaniasis is a disease caused by a protozoan of the species Leishmania chagasi. It is transmitted by the bite of females of the infected vector insect, the sandfly known popularly as the straw mosquito; In Brazil, the main species responsible for transmission is Lutzomyia longipalpis. In Brazil, the disease has a wide geographical distribution and is responsible for 96% of reported cases in the Americas. It is a chronic evolutionary zoonosis with systemic involvement and, if left untreated, can lead to death in up to 90% of cases. In dogs, considered the main urban reservoir of the etiological agent, CVL is a disease that causes great suffering to affected animals, tutors and contactants. The clinical manifestations of CVL depend intrinsically on the type of immune response presented by its host. Clinical signs may appear from three months to several years after infection and are sometimes nonspecific. The laboratory diagnosis of CVL is based on the triad of serological, parasitological and molecular methods and is essential for staging the disease and choosing the appropriate treatment. Treatment aims to reduce the dog's parasitic load, neutralizing its infectious capacity, properly restoring its immune response, promoting clinical improvement and preventing relapses. The aim of this paper was to present a review of the expository literature on the epidemiological aspects...(AU)

A leishmaniose é uma doença causada por um protozoário da espécie Leishmania chagasi. É transmitida pela picada de fêmeas do inseto vetor infectado, um flebotomíneo da espécie Lutzomyia longipalpis, conhecido popularmente como mosquito palha. De ampla distribuição geográfica, o Brasil é responsável por 96% dos casos notificados nas Américas. Trata-se de uma zoonose de evolução crônica, com acometimento sistêmico e, se não tratada, pode levar a óbito até 90% dos casos. No cão, considerado o principal reservatório urbano do agente etiológico, a leishmaniose visceral canina é uma enfermidade que provoca grande sofrimento aos animais acometidos, tutores e contactantes. As manifestações clínicas dependem intrinsecamente do tipo de resposta imunológica apresentada pelo seu hospedeiro, podendo surgir de três meses até vários anos após a infecção e são, por vezes, inespecíficas. O diagnóstico laboratorial da leishmaniose visceral canina baseia-se na tríade de métodos sorológicos, parasitológicos e moleculares e é essencial para o estadiamento da doença e escolha do tratamento adequado. O tratamento possui como principais objetivos reduzir a carga parasitária do cão, neutralizando a sua capacidade infectante, restaurando adequadamente a sua resposta imune, promovendo a melhora clínica e prevenindo recaídas. O objetivo com esse trabalho foi apresentar uma revisão de literatura expositiva...(AU)

Identification of Leishmania spp. in horses and a dog from rural areas of Uruguaiana, Rio Grande do Sul, Brazil / Identificação de Leishmania spp. em equinos e um cão da área rural de Uruguaiana, Rio Grande do Sul, Brasil

Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonosis caused by the protozoan of the genus Leishmania. The disease is transmitted by the bite of a sand fly vector. Although the main reservoirs are dogs, other hosts can be infected and may play this role. Rio Grande do Sul western region, located on the triple border of Brazil-Uruguay-Argentina, represents a VL transmission area. The goal of the present study was to identify Leishmania spp. infection in animals from rural areas of Uruguaiana, Rio Grande do Sul. Nine farms in the Uruguaiana municipality, Rio Grande do Sul state, were included. Peripheral blood samples were collected from 113 animals (canine [n=22], equine [n=91]) for detection of Leishmania spp. DNA was isolated and polymerase chain reaction was performed. Eight (7%) animals with Leishmania spp. infection were detected on two farms in the same geographical area, seven of which were horses and one was canine, all of which were asymptomatic. To investigate the species of Leishmania, one of the positive equine samples was subjected to direct sequencing, which confirmed the presence of L. infantum genetic material. Results of this study confirm the presence of L. infantum-infected animals in rural areas of Uruguaiana, and provide evidence supporting further investigation of risk factors for dissemination in such áreas.(AU)

A leishmaniose visceral é uma zoonose causada por protozoários do gênero Leishmania. A doença é transmitida pela picada de um vetor flebotomíneo. Os principais reservatórios são cães, porém outros mamíferos podem se infectar e desempenhar esse papel. A região oeste do Rio Grande do Sul, localizada na tríplice fronteira Brasil-Uruguai-Argentina, representa uma área de transmissão para a leishmaniose visceral. O objetivo deste estudo foi identificar a infecção por Leishmania spp. em animais de áreas rurais de Uruguaiana, Rio Grande do Sul. Nove fazendas do município de Uruguaiana, no Rio Grande do Sul, and foram incluídas. O sangue periférico foi coletado de 113 animais, caninos (n = 22) e equinos (n = 91), para a pesquisa de DNA de Leishmania spp. por reação em cadeia da polimerase (PCR). Oito animais infectados por Leishmania spp. (7%) foram detectados em duas fazendas na mesma área geográfica, sete equinos e um canino. Todos eles eram assintomáticos. Para investigar as espécies de Leishmania, uma das amostras positivas da espécie equina, também foi submetida ao sequenciamento e a presença de material genético de L. infantum foi confirmada. Este estudo garante a existência de animais infectados por Leishmania infantum nas áreas rurais de Uruguaiana e evidencia a importância de estudos para investigar os fatores de risco de disseminação nestes locais.(AU)

Canine leishmaniasis in the semi-arid region of Pernambuco, northeastern Brazil: epidemiology, factors associated with seropositivity and spatial analysis / Leishmaniose visceral canina na região semiárida de Pernambuco, nordeste do Brasil: epidemiologia, fatores associados à soropositividade e análise espacial

This study aimed to determine the seroprevalence, factors associated with seropositivity to Leishmania infection in dogs and spatial analysis in six municipalities in the semiarid region of Pernambuco, Brazil. Blood samples were collected from 462 dogs, 77 in each municipality, and used for serological analysis [dual path platform (DPP®) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)]. Clinical signs of dogs were evaluated and associated factors for Leishmania infection were analyzed using robust Poisson regression model. A seroprevalence of 42.8% (198/462, IC: 95% = 38.6%-47.6%) was detected in dogs that tested positive in both tests, ranging from 29.8% to 55.8%, with higher prevalence in the municipality of Cabrobó (55.8%; P = 0.006). About 67% (132/198) of the seropositive dogs showed one or more clinical signs suggestive of canine leishmaniasis (CanL), such as lymphadenomegaly, skin lesions and conjunctivitis, which were associated with seropositivity. High seroprevalence levels were identified in urban and rural areas in all the municipalities, and the buffer for sand flies around cases covered almost these entire areas. Spatial analysis revealed a significant cluster, showing a relative risk of 1.88 in the urban area of Cabrobó. The higher density of seropositive dogs in urban areas indicates the need effective control measures against CanL to prevent the emergence of canine and human diseases.(AU)

Este estudo objetivou determinar a soroprevalência, fatores associados com a soropositividade da infecção por Leishmania em cães e análise espacial em seis municípios do semiárido de Pernambuco. Amostras de sangue foram coletadas de 462 cães, 77 em cada município, e utilizadas para análise sorológica [teste rápido imunocromatográfico (DPP®) e ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA)]. Os sinais clínicos dos cães foram avaliados, e os fatores associados à infecção por Leishmania foram analisados, ​​usando-se modelo robusto de regressão de Poisson. Foi detectada uma soroprevalência de 42,8% (198/462, IC: 95% = 38,6%-47,6%) em cães com resultados positivos em ambos os testes, variando de 29,8% a 55,8%, com maior prevalência no município de Cabrobó (55,8%; P = 0,006). Cerca de 67% (132/198) dos cães apresentaram um ou mais sinais clínicos sugestivos de CanL, como linfadenomegalia, lesões de pele e conjuntivite, os quais foram associados à soropositividade. Altos níveis de soroprevalência foram identificados nas áreas urbanas e rurais de todos os municípios, e os buffers da área de vôo do flebotomíneo em torno dos casos cobriam quase todas as áreas dos municípios. A análise espacial revelou um cluster significativo, mostrando um risco relativo de 1,88 na área urbana de Cabrobó. A maior densidade de casos em áreas urbanas indica a necessidade de medidas efetivas de controle contra o CanL, para evitar o surgimento da doença canina e humana.(AU)

Histopathological alterations in the reproductive tract of male dogs with Canine Visceral Leishmaniasis / Alterações histopatológicas no trato reprodutivo de cães machos com Leishmaniose Visceral Canina

Dogs are considered the main domestic host of Leishmania infantum. The transmission between vertebrate hosts normally occurs during blood feeding of Lutzomyia sp., a genus of phlebotomine sand flies. However, other forms of transmission without a vector have been reported. Presence of amastigotes of Leishmania sp. in different organs can cause several pathologies depending on the immune status of the host and the parasite load. The aim of this study was to evaluate histopathological changes in the reproductive tract of male dogs. Samples of testes, epididymis, and prostate gland were collected from 70 animals that were grouped according to serology test results for visceral leishmaniasis and clinical symptoms. Three experimental groups were formed based on serological results and clinical presentation: asymptomatic, symptomatic and control. Prostatic changes were seen regardless of the serological results; however, the changes were more severe in symptomatic animals. In the testes and epididymis, lesions such as interstitial infiltrate, degeneration, and fibrosis were seen more frequently and were more severe in positive animals when compared to the control group. These results demonstrate that dogs infected with Leishmania sp. can develop nonspecific changes in the reproductive tract, which are more severe in symptomatic animals.(AU)

Os cães são considerados os principais hospedeiros domésticos de Leishmania infantum. A transmissão entre hospedeiros vertebrados normalmente ocorre durante o repasto sanguíneo de Lutzomyia sp., gênero de flebotomíneo. Entretanto, outras formas de transmissão sem a presença do vetor têm sido relatadas. A presença de amastigotas de Leishmania sp. em diferentes órgãos pode causar diversas patologias de acordo com o status imune do hospedeiro e a carga parasitária. O objetivo deste trabalho foi avaliar as alterações histopatológicas no trato reprodutivo de cães machos. Amostras de testículo, epidídimo e próstata foram coletadas de 70 animais, os quais foram agrupados conforme o resultado da sorologia para leishmaniose visceral e os sinais clínicos. Três grupos experimentais foram formados baseados nos resultados sorológicos e manifestações clínicas: assintomático, sintomático e controle. Alterações prostáticas foram observadas independentemente dos resultados sorológicos; entretanto, foram mais acentuadas nos animais sintomáticos. Nos testículos e epidídimos, lesões como infiltrado intersticial, degeneração e fibrose foram observadas mais frequentemente e de forma mais severa nos animais positivos quando comparados ao grupo controle. Estes resultados demonstram que cães infectados com Leishmania sp. podem desenvolver alterações não específicas no trato reprodutivo, as quais são...(AU)

A new species of phlebotomine sandfly, Pintomyia (Pifanomyia) duckei (Diptera: Psychodidae) from Manaus, State of Amazonas, Brazil / Uma nova espécie de flebotomíneo, Pintomyia (Pifanomyia) duckei (Diptera: Psychodidae) de Manaus, Estado do Amazonas, Brasil

Pintomyia (Pifanomyia) duckei Oliveira, Alencar and Freitas sp. n. from Adolpho Ducke Reserve, Manaus, Amazonas state, Brazil, is described and illustrated based on three male specimens, the holotype and two paratypes. The paratypes have abnormalities in the external genitalia, one with asymmetric bilateral anomaly (different anomalies in each of certain paired structures) and the other with unilateral anomaly (anomaly in one of the paired structures). The new species probably belongs to the Serrana Series, integrating the list of the species whose males possess gonostylus with two stout spines (one apical and other subapical), as well as a small and very thin spine on the inner surface of the basal half.

Pintomyia (Pifanomyia) duckei Oliveira, Alencar e Freitas sp. n. da Reserva Florestal Adolpho Ducke, Manaus, Estado do Amazona, Brasil, é descrita e ilustrada com base em três espécimes machos, o holótipo e dois parátipos. Os parátipos possuem anomalias na genitália externa, sendo um com anomalia bilateral assimétrica (anomalias diferentes em cada uma das estruturas pareadas) e outro com anomalia unilateral (anomalia em uma das estruturas pareadas). A nova espécie provavelmente pertence à Série Serrana, integrando a lista das espécies, cujos machos possuem gonóstilo com dois espinhos robustos (um apical e outro subapical), bem como um espinho delgado e muito curto na superfície interna da metade basal.

A new species of phlebotomine sandfly, Pintomyia (Pifanomyia) duckei (Diptera: Psychodidae) from Manaus, State of Amazonas, Brazil / Uma nova espécie de flebotomíneo, Pintomyia (Pifanomyia) duckei (Diptera: Psychodidae) de Manaus, Estado do Amazonas, Brasil

Pintomyia (Pifanomyia) duckei Oliveira, Alencar and Freitas sp. n. from Adolpho Ducke Reserve, Manaus, Amazonas state, Brazil, is described and illustrated based on three male specimens, the holotype and two paratypes. The paratypes have abnormalities in the external genitalia, one with asymmetric bilateral anomaly (different anomalies in each of certain paired structures) and the other with unilateral anomaly (anomaly in one of the paired structures). The new species probably belongs to the Serrana Series, integrating the list of the species whose males possess gonostylus with two stout spines (one apical and other subapical), as well as a small and very thin spine on the inner surface of the basal half.(AU)

Pintomyia (Pifanomyia) duckei Oliveira, Alencar e Freitas sp. n. da Reserva Florestal Adolpho Ducke, Manaus, Estado do Amazona, Brasil, é descrita e ilustrada com base em três espécimes machos, o holótipo e dois parátipos. Os parátipos possuem anomalias na genitália externa, sendo um com anomalia bilateral assimétrica (anomalias diferentes em cada uma das estruturas pareadas) e outro com anomalia unilateral (anomalia em uma das estruturas pareadas). A nova espécie provavelmente pertence à Série Serrana, integrando a lista das espécies, cujos machos possuem gonóstilo com dois espinhos robustos (um apical e outro subapical), bem como um espinho delgado e muito curto na superfície interna da metade basal.(AU)

Avaliação da infectividade parasitária a Lutzomyia longipalpis por xenodiagnóstico em cães tratados para leishmaniose visceral naturalmente adquirida

ABSTRACT: The outcome of a multidrug chemotherapeutic protocol against canine visceral leishmaniasis (VL) has been evaluated for its effect on dogs capacity of transferring Leishmania infantum to sand flies by xenodiagnosis. Thirty-five naturally infected dogs were examined before and during treatment with a combination of metronidazole, ketoconazole, and allopurinol, at every three months up to one year. For each evaluation, treated dogs were individually submitted to xenodiagnosis and quantitative PCR to quantify parasite load in sand flies. The treatment was effective in blocking parasite transmission from host to sand flies (p=0.011) in the assessed dogs. There was a significant correlation between clinical improvement and sand fly infectivity: dogs that achieved better clinical conditions showed a lower chance of L. infantum transference to vector by xenodiagnosis (r=0.528, p=0.002). These results demonstrate that the treatment of dogs with the proposed protocol may represent an alternative to dog culling in Brazil for disease control, since these drugs are not used for treating human VL in endemic areas.

RESUMO: O efeito de um protocolo quimioterápico multidrogas contra a leishmaniose visceral (LV) canina, sobre a capacidade de transmissão de Leishmania infantum ao vetor, foi analisado por meio de xenodiagnóstico. Trinta e cinco cães naturalmente infectados foram avaliados antes e durante o tratamento com a combinação de metronidazol, cetoconazol e alopurinol a cada três meses por até um ano. Em cada avaliação, os cães foram individualmente submetidos ao xenodiagnóstico e quantificação da carga parasitária por PCR quantitativa. O tratamento foi eficaz em bloquear a transmissibilidade parasitária do cão para o flebotomíneo (p= 0,011) nos cães avaliados. Houve significante correlação entre recuperação clínica e infectividade: cães com melhora clínica mais evidente apresentaram menores chances de transferir L. infantum ao Lutzomyia longipalpis via xenodiagnóstico (r=0,528, p= 0,002). Esses resultados demonstram que o tratamento canino com o protocolo proposto pode representar uma alternativa ao sacrifício de cães no Brasil como medida de controle da doença, uma vez que as drogas utilizadas não são aplicadas ao tratamento da LV humana em áreas endêmicas.

Avaliação da infectividade parasitária a Lutzomyia longipalpis por xenodiagnóstico em cães tratados para leishmaniose visceral naturalmente adquirida / Evaluation of parasite infectivity for Lutzomyia longipalpis by xenodiagnosis in dogs treated for natural visceral leishmaniasis

O efeito de um protocolo quimioterápico multidrogas contra a leishmaniose visceral (LV) canina, sobre a capacidade de transmissão de Leishmania infantum ao vetor, foi analisado por meio de xenodiagnóstico. Trinta e cinco cães naturalmente infectados foram avaliados antes e durante o tratamento com a combinação de metronidazol, cetoconazol e alopurinol a cada três meses por até um ano. Em cada avaliação, os cães foram individualmente submetidos ao xenodiagnóstico e quantificação da carga parasitária por PCR quantitativa. O tratamento foi eficaz em bloquear a transmissibilidade parasitária do cão para o flebotomíneo (p= 0,011) nos cães avaliados. Houve significante correlação entre recuperação clínica e infectividade: cães com melhora clínica mais evidente apresentaram menores chances de transferir L. infantum ao Lutzomyia longipalpis via xenodiagnóstico (r=0,528, p= 0,002). Esses resultados demonstram que o tratamento canino com o protocolo proposto pode representar uma alternativa ao sacrifício de cães no Brasil como medida de controle da doença, uma vez que as drogas utilizadas não são aplicadas ao tratamento da LV humana em áreas endêmicas.(AU)

The outcome of a multidrug chemotherapeutic protocol against canine visceral leishmaniasis (VL) has been evaluated for its effect on dogs' capacity of transferring Leishmania infantum to sand flies by xenodiagnosis. Thirty-five naturally infected dogs were examined before and during treatment with a combination of metronidazole, ketoconazole, and allopurinol, at every three months up to one year. For each evaluation, treated dogs were individually submitted to xenodiagnosis and quantitative PCR to quantify parasite load in sand flies. The treatment was effective in blocking parasite transmission from host to sand flies (p=0.011) in the assessed dogs. There was a significant correlation between clinical improvement and sand fly infectivity: dogs that achieved better clinical conditions showed a lower chance of L. infantum transference to vector by xenodiagnosis (r=0.528, p=0.002). These results demonstrate that the treatment of dogs with the proposed protocol may represent an alternative to dog culling in Brazil for disease control, since these drugs are not used for treating human VL in endemic areas.(AU)

Avaliação da infectividade parasitária a Lutzomyia longipalpis por xenodiagnóstico em cães tratados para leishmaniose visceral naturalmente adquirida / Evaluation of parasite infectivity for Lutzomyia longipalpis by xenodiagnosis in dogs treated for natural visceral leishmaniasis

O efeito de um protocolo quimioterápico multidrogas contra a leishmaniose visceral (LV) canina, sobre a capacidade de transmissão de Leishmania infantum ao vetor, foi analisado por meio de xenodiagnóstico. Trinta e cinco cães naturalmente infectados foram avaliados antes e durante o tratamento com a combinação de metronidazol, cetoconazol e alopurinol a cada três meses por até um ano. Em cada avaliação, os cães foram individualmente submetidos ao xenodiagnóstico e quantificação da carga parasitária por PCR quantitativa. O tratamento foi eficaz em bloquear a transmissibilidade parasitária do cão para o flebotomíneo (p= 0,011) nos cães avaliados. Houve significante correlação entre recuperação clínica e infectividade: cães com melhora clínica mais evidente apresentaram menores chances de transferir L. infantum ao Lutzomyia longipalpis via xenodiagnóstico (r=0,528, p= 0,002). Esses resultados demonstram que o tratamento canino com o protocolo proposto pode representar uma alternativa ao sacrifício de cães no Brasil como medida de controle da doença, uma vez que as drogas utilizadas não são aplicadas ao tratamento da LV humana em áreas endêmicas.(AU)

The outcome of a multidrug chemotherapeutic protocol against canine visceral leishmaniasis (VL) has been evaluated for its effect on dogs' capacity of transferring Leishmania infantum to sand flies by xenodiagnosis. Thirty-five naturally infected dogs were examined before and during treatment with a combination of metronidazole, ketoconazole, and allopurinol, at every three months up to one year. For each evaluation, treated dogs were individually submitted to xenodiagnosis and quantitative PCR to quantify parasite load in sand flies. The treatment was effective in blocking parasite transmission from host to sand flies (p=0.011) in the assessed dogs. There was a significant correlation between clinical improvement and sand fly infectivity: dogs that achieved better clinical conditions showed a lower chance of L. infantum transference to vector by xenodiagnosis (r=0.528, p=0.002). These results demonstrate that the treatment of dogs with the proposed protocol may represent an alternative to dog culling in Brazil for disease control, since these drugs are not used for treating human VL in endemic areas.(AU)

miRNA-21 na regulação da resposta imunológica na Leishmaniose Visceral Canina

A Leishmaniose Visceral (LV) no homem é uma doença crônica e frequentemente fatal se não tratada. Segundo a Organização Mundial da Saúde, a doença está em expansão e apresenta alta taxa de mortalidade. A região de Araçatuba/SP concentra grande número de casos de LV no estado. A Leishmaniose Canina (LCan) constitui um grave problema de Saúde Pública, pois os animais infectados são potentes transmissores do parasito para humanos pelo vetor flebotomíneo. Também, a doença canina é mais prevalente que a doença humana e normalmente os casos caninos precedem os casos humanos. O cão é, portanto, um alvo importante nas medidas de controle da doença. A progressão da infecção canina é acompanhada por falha na imunidade celular com redução de linfócitos circulantes e citocinas que suprimem a função dos macrófagos. A função da célula T na indução da resposta celular é determinante para a eliminação do parasito no interior dos macrófagos. Embora a supressão imunológica já esteja caracterizada, os fatores determinantes são pouco conhecidos. Na última década, estudos mostraram que a regulação da função efetora dos macrófagos e células T parece depender de miRNAs. Existem muitas evidências da função dos miRNAs na regulação da expressão de proteínas que são fundamentais para o desenvolvimento, função e diferenciação de vários tipos celulares do sistema imunológico. O miRNA-21 tem sua expressão aumentada em leucócitos esplênicos de cães com LCan e possui como alvo o mRNA de diversas proteínas relacionadas à resposta imune. Nosso objetivo foi avaliar a expressão das proteínas FAS, FASL, CD69, CCR7 e IL-10 em leucócitos esplênicos após a tranfecção utilizando ferramentas moleculares para aumentar ou diminuir miR-21. Nossos resultados irão melhorar a compreensão da patogênese da LCan no hospedeiro, e como tal, revelar novos caminhos que possam constituir alvos terapêuticos.

Visceral Leishmaniasis (VL) in humans is a chronic and often fatal disease if left untreated. According to World Health Organization, the disease is expanding with a high mortality rate. The Araçatuba/SP region concentrating a large number of cases in the state. Canine Leishmaniasis (CanL) is a serious public health problem because infected animals are powerful transmitters of the parasite to humans by phlebotomine vector, canine disease is more prevalent than human disease and usually canine cases precede human cases. Dogs are therefore an important target in the control measures of the disease. The progression of canine infection is accompanied by failure of cellular immunity with reduction of circulating lymphocytes and cytokines that suppress the function of macrophages. The function of T cell in the induction of cellular response is determinant for the elimination of the parasite inside the macrophages. Although immune suppression is already characterized, the determining factors are poorly understood. In the last decade, studies have shown that the regulation of the effector function of macrophages and T cells seems to depend on miRNAs. There are many evidences of the role of miRNAs in regulating the expression of proteins that are critical for the development, function, and differentiation of various cellular types of the immune system. miRNA-21 has increased expression in splenic leukocytes of dogs with CanL and targets mRNA of several proteins related to the immune response. Our objective was to evaluate the expression of FAS, FASL, CD69, CCR7 and IL-10 proteins in splenic leukocytes after transfection using molecular tools to increase or decrease miR-21. Our results will improve understanding of the pathogenesis of CanL in the host, and as such, reveal new pathways that may be therapeutic targets.

AVALIAÇÃO HISTOMORFOLÓGICA E IMUNO-HISTOQUÍMICA DE ÓRGÃOS LINFOIDES DE CÃES REAGENTES PARA LEISHMANIOSE AOS TESTES DPP® E ELISA

No Brasil, a leishmaniose visceral (LV) é transmitida pelo flebotomíneo Lutzomyia longipalpis e causada pelo protozoário do gênero Leishmania, acometendo principalmente seres humanos e cães. O parasita tem preferência por células do sistema mononuclear fagocitário e órgãos como baço, linfonodos, medula óssea e fígado. A interação do parasita com o sistema imune do hospedeiro determina a manifestação dos sinais clínicos e cães suscetíveis desenvolvem reação inflamatória crônica e progressiva. Tendo a relevância da LV no cenário nacional, este trabalho teve por objetivo realizar estudo histomorfológico e imuno-histoquímico (IHQ) dos órgãos linfoides de cães reagentes para leishmaniose aos testes imunocromatográfico Dual Path Platform (DDP®) e ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA). Para isso, foram realizados dois experimentos, sendo utilizados 27 cães provenientes da rotina de vigilância epidemiológica para LVC, realizada pela Diretoria de Vigilância em Zoonoses de Goiânia (DVZ), GO, Brasil, e submetidos a exame anatomopatológico. No primeiro foram utilizadas amostras de baço e linfonodo dos 27 animais e, no segundo, amostras de medula óssea de 13 cães, para a realização de estudo histomorfológico e imuno-histoquímico. A maioria dos animais era sintomática e alterações cutâneas, esplenomegalia e linfadenomegalia compreenderam as principais alterações macroscópicas. No baço, esplenite granulomatosa e, no linfonodo, hiperplasia e hipertrofia dos cordões medulares, representaram as alterações microscópicas de maior relevância. Na medula óssea, a hiperplasia de macrófagos e hemossiderose destacaram-se à avaliação histopatológica. Em ambos os experimentos houve boa concordância de positividade da LVC quando empregadas as técnicas de histopatologia e IHQ. Concluiu-se que baço, linfonodo e medula óssea de cães exibem alterações histomorfológicas decorrentes da LVC, independente da presença ou intensidade do parasita. Nesse sentido, desorganização do tecido linfoide, hiperplasia e hipertrofia dos cordões medulares e hiperplasia macrofágica, compreendem as principais alterações nesses órgãos, respectivamente. Ainda, baço, linfonodo e medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal compreendem órgãos úteis ao diagnóstico da LVC por métodos diretos.

In Brazil, visceral leishmaniasis (VL) is transmitted by the sand fly Lutzomyia longipalpis and it is caused by the Leishmania protozoan, affecting mainly humans and dogs. The parasite has preference for cells of the mononuclear phagocytic system and organs such as spleen, lymph nodes, bone marrow and liver. The interaction of the parasite with the host's immune system determines the manifestation of clinical signs and susceptible dogs develop a chronic and progressive inflammatory reaction. Due to the relevance of LV in the national scenario, this study aimed to perform a histomorphological and immunohistochemical (IHC) study of lymphoid organs of dogs that are reactive for leishmaniasis to the Dual Path Platform (DDP®) immunochromatographic tests and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). For this, two experiments were done using 27 dogs from the routine of epidemiological surveillance for CVL, carried out by the Directorate of Zoonoses Surveillance of Goiânia (DVZ), GO, Brazil, and submitted to anatomopathological examination. In the first study, spleen, and lymph node samples from the 27 animals were used and, in the second study, bone marrow samples from 13 dogs were collected to perform histomorphological and immunohistochemical studies. Most animals were symptomatic, and the main macroscopic changes observed were cutaneous alterations, splenomegaly and lymphadenomegaly. In the spleen, granulomatous splenitis were detected and, in the lymph node, hyperplasia and hypertrophy of the spinal cord represented the most relevant microscopic changes. In the bone marrow, macrophage hyperplasia and hemosiderosis stood out on histopathological evaluation. In both experiments there was a good agreement on the positivity of CVL when the techniques of histopathology and IHC were used. It was concluded that the spleen, lymph node and bone marrow of dogs exhibited histomorphological changes due to CVL, regardless of the presence or intensity of the parasite. Thus, disorganization of the lymphoid tissue, hyperplasia and hypertrophy of the spinal cord and macrophage hyperplasia comprise the main changes in these organs, respectively. In addition, the spleen, lymph node and bone marrow of the femur and sternal manubrium demonstrated to be useful organs for the diagnosis of CVL by direct methods.

PADRONIZAÇÃO DE ENSAIO ELISA IN HOUSE PARA DIAGNÓSTICO DE LEISHMANIOSE EM EQUINOS E CANINOS

As leishmanioses são doenças causadas pelo protozoário Leishmania spp. e estão distribuídas globalmente. Na América do Sul, o Brasil concentra o maior número de casos de leishmaniose visceral e cutânea em humanos. No estado do Rio Grande do Sul, na região da fronteira Oeste, é descrita a presença do flebotomíneo vetor e, também, a infecção em humanos, caninos e equinos. O cão doméstico é o principal reservatório nas zonas urbanas, entretanto, a participação dos equinos na manutenção do parasito vem sendo discutida. Diferentes técnicas diagnósticas estão disponíveis para identificação tanto do agente quanto da resposta imunológica do indivíduo. O teste de ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) permite a identificação da resposta imune por meio da ligação antígeno anticorpo. Em 2011, foi definido como teste confirmatório para Leishmaniose visceral canina (LVC) pelo Ministério da Saúde. Tendo em vista a importância da Leishmaniose em cães no município de Uruguaiana e, a necessidade de estudos referentes à manutenção da doença e possíveis reservatórios, o presente trabalho teve por objetivo a padronização de um protocolo in house de ELISA indireto para detecção de resposta imunológica contra Leishmania spp. nas espécies canina e equina, bem como a avaliação sorológica de amostras provenientes dos municípios de Uruguaiana e Barra do Quaraí-RS. Inicialmente, foram padronizados os protocolos para o cultivo de Leishmania no laboratório. As cepas de Leishmania infantum, espécie utilizada como antígeno, foram disponibilizadas pela FRIOCRUZ/RJ. A fixação do antígeno foi realizada utilizando as formas promastigotas do parasito, sendo que, a concentração de 10ug/ml demonstrou melhores resultados. O protocolo de ELISA utilizado para as espécies equina e canina foram iguais. O teste das diluições do anticorpo primário variou entre as espécies: para equinos foram utilizadas as concentrações 1/100, 1/200, 1/400, 1/800 e 1/1000; e para caninos 1/100, 1/400 e 1/800. As concentrações de anticorpo secundário utilizadas nos testes foram de: 1/5000 e 1/10000 para equinos e caninos. Após a padronização, foram realizados os testes sorológicos em amostras provenientes de caninos e equinos dos municípios de Barra do Quaraí e Uruguaiana. Foram testados 51 cães e 159 equinos. Dentre os 51 caninos testados, 17 (33%) foram positivos na técnica de ELISA sendo que, 16 destes foram também positivos no teste imunocromatográfico DPP®. Referente aos equinos testados, 159 animais, 16 (10%) foram positivos no ELISA. Com isso, pode-se concluir que, foi possível a padronização de um protocolo de ELISA indireto in house para diagnóstico da leishmaniose em equinos e caninos e, a presença de animais positivos demonstra que há circulação da doença na população estudada.

Leishmaniasis are diseases caused by the protozoan Leishmania spp. and are distributed globally. In South America, Brazil concentrates the most significant number of visceral and cutaneous leishmaniasis cases in humans. In the western border of the state of Rio Grande do Sul, Brazil, there are reports about sandflies (the vectors) and the infection in humans, canines, and horses. The domestic dog is the main reservoir in urban areas; however, there is a discussion about horses' participation in the maintenance of the parasite. Several diagnostic techniques are available to identify both the agent and the individual's immune response. The ELISA test (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) allows identifying the immune response through antibody-antigen binding. In 2011, it was defined as a confirmatory test for canine visceral Leishmaniasis (LVC) by the Ministry of Health. Given the importance of Leishmaniasis in dogs in the municipality of Uruguaiana and the need for studies regarding the maintenance of the disease and possible reservoirs, the present work aimed to standardize an in house indirect ELISA protocol to detect an immune response against Leishmania spp. in canine and equine species, as well as the serological evaluation of samples from the municipalities of Uruguaiana and Barra do Quaraí-RS. Initially, protocols for the cultivation of Leishmania in the laboratory were standardized. The strains of Leishmania infantum, a species used as an antigen, were made available by FRIOCRUZ / RJ. Antigen fixation was performed using the parasite's promastigote forms, and the concentration of 10ug/ml demonstrated the best results. The ELISA protocol used for equine and canine species was the same. The test of the dilutions of the primary antibody varied between species: for horses, the concentrations 1/100, 1/200, 1/400, 1/800, and 1/1000 were used; and 1/100, 1/400, and 1/800 for canines. The secondary antibody concentrations used in the tests were: 1/5000 and 1/10000 for horses and canines. After standardization, serological tests were carried out on samples from canines and horses from the municipalities of Barra do Quaraí and Uruguaiana. Testes englobed 51 dogs and 159 horses. Among the 51 canines tested, 17 (33%) were positive in the ELISA technique, 16 of which were also positive in the DPP® immunochromatographic test. Regarding the tested horses, 159 animals, 16 (10%) were positive in the ELISA. With this, it was possible to conclude that it was possible to standardize an indirect ELISA protocol in house to diagnose Leishmaniasis in horses and canines. The presence of positive animals demonstrates that the disease is occurring in the studied population.