Uso da ultrassonografia Doppler colorido na reprodução de pequenos ruminantes / Use of color Doppler ultrasonography in the reproduction of small ruminants

A ultrassonografia (US) Doppler colorido fornece uma ferramenta não invasiva valiosa para detectar e monitorar mudanças dinâmicas na rede vascular e fluxo sanguíneo em vários órgãos e tecidos reprodutivos. Em apoio as biotécnicas da reprodução animal assistida, a US Doppler colorido tem mostrada alta eficiência no monitoramento funcional das estruturas ovarianas. A previsão de respostas ovarianas e produções embrionária em ovinos pela identificação de sinais Doppler na parede folicular já se mostrou eficiente. A aplicação da US Doppler colorido para a identificação da funcionalidade do tecido luteal é ainda maior, desde acompanhamentos fisiológicos e diagnósticos de disfunções luteais até ampla aplicação em conjunto as diferentes biotécnicas reprodutivas. Destaca-se em ovelhas e cabras, a aplicação comercial da US Doppler colorido para o diagnóstico de gestação precoce, de disfunções luteais, de determinação de respostas ovarianas em fêmeas doadoras e receptoras de embriões, para identificar efeitos luteotrófico de estratégias hormonais, e ainda para amparar as estratégias de ressincronização de estro.(AU)

Color Doppler ultrasonography (US) provides a valuable non-invasive tool for detecting and monitoring dynamic changes in the vascular network and blood flow in various reproductive organs and tissues. In support of assisted animal reproduction biotechniques, color Doppler US has shown high efficiency in the functional monitoring of ovarian structures. The prediction of ovarian responses and embryonic production in sheep by identifying Doppler signals in the follicular wall has already proved to be efficient. The application of color Doppler US for identifying the functionality of the luteal tissue is even greater, from physiological monitoring and diagnosis of luteal dysfunctions to wide application together with different reproductive biotechniques. It stands out in sheep and goats, the commercial application of color Doppler US for the diagnosis of early pregnancy, luteal dysfunctions, determination of ovarian responses in embryo donor and recipient females, to identify luteotrophic effects of hormonal strategies, and even to support estrus resynchronization strategies.(AU)

Erasing gametes to write blastocysts: metabolism as the new player in epigenetic reprogramming

Understanding preimplantation embryonic development is crucial for the improvement of assisted reproductive technologies and animal production. To achieve this goal, it is important to consider that gametes and embryos are highly susceptible to environmental changes. Beyond the metabolic adaptation, the dynamic status imposed during follicular growth and early embryogenesis may create marks that will guide the molecular regulation during prenatal development, and consequently impact the offspring phenotype. In this context, metaboloepigenetics has gained attention, as it investigates the crosstalk between metabolism and molecular control, i.e., how substrates generated by metabolic pathways may also act as players of epigenetic modifications. In this review, we present the main metabolic and epigenetic events of pre-implantation development, and how these systems connect to open possibilities for targeted manipulation of reproductive technologies and animal production systems.

Erasing gametes to write blastocysts: metabolism as the new player in epigenetic reprogramming

Understanding preimplantation embryonic development is crucial for the improvement of assisted reproductive technologies and animal production. To achieve this goal, it is important to consider that gametes and embryos are highly susceptible to environmental changes. Beyond the metabolic adaptation, the dynamic status imposed during follicular growth and early embryogenesis may create marks that will guide the molecular regulation during prenatal development, and consequently impact the offspring phenotype. In this context, metaboloepigenetics has gained attention, as it investigates the crosstalk between metabolism and molecular control, i.e., how substrates generated by metabolic pathways may also act as players of epigenetic modifications. In this review, we present the main metabolic and epigenetic events of pre-implantation development, and how these systems connect to open possibilities for targeted manipulation of reproductive technologies and animal production systems.(AU)

Influência da somatotropina recombinante bovina no desenvolvimento folicular e na coleta de embriões em éguas / Influence of bovine recombinant somatotropin in the follicular development and embryo colletion in mares

Dez éguas, sem raça definida, foram submetidas a avaliações ultrassonográficas durante o intervalo interovulatório, avaliando-se folículos ≥ 5mm. Cinco éguas foram tratadas com 500mg de r-bST no primeiro e no 14º dia pós-ovulação (grupo GT), e as demais com soro fisiológico (grupo GC). Quando o folículo dominante atingiu diâmetro ≥ 40mm, foram induzidas com hCG e inseminadas 24 horas após, sendo submetidas à coleta de embrião seis dias após a ovulação. Os dados foram agrupados de acordo com o diâmetro do folículo dominante nas fases de emergência, divergência, dominância, pré-ovulatória, indução, inseminação e ovulação. Todas as éguas foram usadas duas vezes, no mesmo grupo. O GT apresentou crescimento folicular precoce para as fases de emergência, divergência, dominância e pré-ovulatória, assim como para o seu maior folículo subordinado, que cresceu mais cedo. As taxas de recuperação foram de 90% (GC) e 70% (GT), em 16 estruturas coletadas, obtendo-se uma não fecundada e um blastocisto inicial para o grupo GC; os demais, no estágio de mórula, apresentaram comportamento semelhante entre os grupos. Conclui-se que a r-bST influencia a dinâmica folicular de éguas, levando a uma antecipação do desenvolvimento folicular, que pode ser utilizada para encurtar o ciclo estral.(AU)

Ten undefined mare breeds were submitted to ultrasonographic evaluations during the interovulatory interval, evaluating follicles measuring ≥ 5mm. Five mares were treated with 500mg r-bST on the first and the 14th day after ovulation (TG group), and the others with saline (CG group). When the dominant follicle reached a diameter ≥ 40mm the ovulation was induced with hCG, and the mares were inseminated 24 hours later and submitted to embryo collection six days after ovulation. The data were grouped according to the diameter of the dominant follicle in the emergence, divergence, dominance, preovulatory, induction, insemination and ovulation phases. All mares were used twice, in the same group. The GT showed early follicular growth for the emergence, divergence, dominance and pre-ovulatory phases, as well as for its greater subordinate follicle, growing earlier. The recovery rates were 90% (CG) and 70% (TG), and 16 structures were collected, obtaining an unfertilized embryo and an initial blastocyst for the CG group, the others in the morula stage behaved similarly between the groups. It can be concluded that r-bST influences the follicular dynamics of the mares, leading to an anticipation of the follicular development that can be used to shorten the estrous cycle.(AU)

Influência da somatotropina recombinante bovina no desenvolvimento folicular e na coleta de embriões em éguas / Influence of bovine recombinant somatotropin in the follicular development and embryo colletion in mares

Dez éguas, sem raça definida, foram submetidas a avaliações ultrassonográficas durante o intervalo interovulatório, avaliando-se folículos ≥ 5mm. Cinco éguas foram tratadas com 500mg de r-bST no primeiro e no 14º dia pós-ovulação (grupo GT), e as demais com soro fisiológico (grupo GC). Quando o folículo dominante atingiu diâmetro ≥ 40mm, foram induzidas com hCG e inseminadas 24 horas após, sendo submetidas à coleta de embrião seis dias após a ovulação. Os dados foram agrupados de acordo com o diâmetro do folículo dominante nas fases de emergência, divergência, dominância, pré-ovulatória, indução, inseminação e ovulação. Todas as éguas foram usadas duas vezes, no mesmo grupo. O GT apresentou crescimento folicular precoce para as fases de emergência, divergência, dominância e pré-ovulatória, assim como para o seu maior folículo subordinado, que cresceu mais cedo. As taxas de recuperação foram de 90% (GC) e 70% (GT), em 16 estruturas coletadas, obtendo-se uma não fecundada e um blastocisto inicial para o grupo GC; os demais, no estágio de mórula, apresentaram comportamento semelhante entre os grupos. Conclui-se que a r-bST influencia a dinâmica folicular de éguas, levando a uma antecipação do desenvolvimento folicular, que pode ser utilizada para encurtar o ciclo estral.(AU)

Ten undefined mare breeds were submitted to ultrasonographic evaluations during the interovulatory interval, evaluating follicles measuring ≥ 5mm. Five mares were treated with 500mg r-bST on the first and the 14th day after ovulation (TG group), and the others with saline (CG group). When the dominant follicle reached a diameter ≥ 40mm the ovulation was induced with hCG, and the mares were inseminated 24 hours later and submitted to embryo collection six days after ovulation. The data were grouped according to the diameter of the dominant follicle in the emergence, divergence, dominance, preovulatory, induction, insemination and ovulation phases. All mares were used twice, in the same group. The GT showed early follicular growth for the emergence, divergence, dominance and pre-ovulatory phases, as well as for its greater subordinate follicle, growing earlier. The recovery rates were 90% (CG) and 70% (TG), and 16 structures were collected, obtaining an unfertilized embryo and an initial blastocyst for the CG group, the others in the morula stage behaved similarly between the groups. It can be concluded that r-bST influences the follicular dynamics of the mares, leading to an anticipation of the follicular development that can be used to shorten the estrous cycle.(AU)

Immunohistochemical localization of progesterone receptors alpha (PRA) in ovary of the pseudopregnant rabbit

Progesterone plays an important role in the reproductive function and follicular development in mammals. The aim of the present study was to examine the localization of progesterone receptor alpha (PRA) in ovary of pseudopregnant rabbit by immunohistochemical methods. Samples were collected from 14 h. to 18 days of pseudopregnancy. At the first stage of pseudopregnancy (14 h.), the rabbit ovary showed moderate immunostaining of PRA in the granulosa cells and theca interna cells of preovulatory follicle and in the stroma cells. At the middle stage of pseudopregnancy (3-7 days), the rabbit ovary showed strong immunostaining of PRA in ovarian surface epithelial cells, follicular cells of the primary follicle, granulosa cells and theca interna cells of the growing and antral follicles. Moderate immunoexpression of PRA were observed in the large lutein cells and endothelial cells of the corpus haemorrhagicum and corpus luteum and in the stroma cells. At the end of pseudopregnancy (18 days) strong PRA reactions were detected in the small lutein cells of the regressed corpus luteum. Moderate to strong PRA immuno-expression were observed in the proliferated theca interna cells of the atretic antral follicles. The atretic large lutein cells of the regressed corpus luteum showed negative immunostaining for PRA. This study showed that the PRA positive small lutein cells of the regressed corpus luteum and the PRA positive proliferated theca interna cells of the atretic antral follicles were transformed into PRA positive interstitial gland cells. In conclusion, the present study had described the distribution of PRA in the ovary of pseudopregnant rabbit, which is not discussed before in the available literature. It also gives more information about follicular dynamic, formation and origin of interstitial glands, mechanism of ovulation, formation and regression of the corpus luteum.

Immunohistochemical localization of progesterone receptors alpha (PRA) in ovary of the pseudopregnant rabbit

Progesterone plays an important role in the reproductive function and follicular development in mammals. The aim of the present study was to examine the localization of progesterone receptor alpha (PRA) in ovary of pseudopregnant rabbit by immunohistochemical methods. Samples were collected from 14 h. to 18 days of pseudopregnancy. At the first stage of pseudopregnancy (14 h.), the rabbit ovary showed moderate immunostaining of PRA in the granulosa cells and theca interna cells of preovulatory follicle and in the stroma cells. At the middle stage of pseudopregnancy (3-7 days), the rabbit ovary showed strong immunostaining of PRA in ovarian surface epithelial cells, follicular cells of the primary follicle, granulosa cells and theca interna cells of the growing and antral follicles. Moderate immunoexpression of PRA were observed in the large lutein cells and endothelial cells of the corpus haemorrhagicum and corpus luteum and in the stroma cells. At the end of pseudopregnancy (18 days) strong PRA reactions were detected in the small lutein cells of the regressed corpus luteum. Moderate to strong PRA immuno-expression were observed in the proliferated theca interna cells of the atretic antral follicles. The atretic large lutein cells of the regressed corpus luteum showed negative immunostaining for PRA. This study showed that the PRA positive small lutein cells of the regressed corpus luteum and the PRA positive proliferated theca interna cells of the atretic antral follicles were transformed into PRA positive interstitial gland cells. In conclusion, the present study had described the distribution of PRA in the ovary of pseudopregnant rabbit, which is not discussed before in the available literature. It also gives more information about follicular dynamic, formation and origin of interstitial glands, mechanism of ovulation, formation and regression of the corpus luteum.(AU)

Ovarian follicular dynamic and plasma progesterone concentration in Alpine goats on the breeding season / Dinâmica folicular ovariana e concentração plasmática de progesterona em cabras Alpinas durante a estação reprodutiva

Os objetivos deste estudo foram relatar a dinâmica folicular ovariana e a concentração plasmática de progesterona durante ciclos estrais de duração irregular em cabras da raça Alpina. Vinte e nove cabras tiveram sua atividade ovariana monitorada diariamente por ultrassonografia transretal durante um, dois ou três períodos interovulatórios consecutivos. Amostras de sangue foram coletadas para análise da concentração plasmática de progesterona. Dos 47 ciclos avaliados, 28 (59,57%) foram de duração normal (17 a 25 dias), sete (14,89%) de curta duração (<17 dias) e 12 (25,53%) de longa duração (>25 dias). Os ciclos estrais de curta duração tiveram 6,14±0,69 dias e uma onda folicular que emergiu no dia 0,43±1,13. Os ciclos estrais de longa duração tiveram entre 26 e 79 dias, com duas a nove ondas foliculares. Os ciclos estrais de curta duração ocorreram durante a estação reprodutiva e foram associados à regressão prematura do corpo lúteo (CL). Os ciclos estrais de longa duração ocorreram na transição entre o anestro e a estação reprodutiva e foram associados principalmente à persistência do CL ou à fase folicular prolongada.(AU)

Ovarian follicular dynamic and plasma progesterone concentration in Alpine goats on the breeding season / Dinâmica folicular ovariana e concentração plasmática de progesterona em cabras Alpinas durante a estação reprodutiva

Os objetivos deste estudo foram relatar a dinâmica folicular ovariana e a concentração plasmática de progesterona durante ciclos estrais de duração irregular em cabras da raça Alpina. Vinte e nove cabras tiveram sua atividade ovariana monitorada diariamente por ultrassonografia transretal durante um, dois ou três períodos interovulatórios consecutivos. Amostras de sangue foram coletadas para análise da concentração plasmática de progesterona. Dos 47 ciclos avaliados, 28 (59,57%) foram de duração normal (17 a 25 dias), sete (14,89%) de curta duração (<17 dias) e 12 (25,53%) de longa duração (>25 dias). Os ciclos estrais de curta duração tiveram 6,14±0,69 dias e uma onda folicular que emergiu no dia 0,43±1,13. Os ciclos estrais de longa duração tiveram entre 26 e 79 dias, com duas a nove ondas foliculares. Os ciclos estrais de curta duração ocorreram durante a estação reprodutiva e foram associados à regressão prematura do corpo lúteo (CL). Os ciclos estrais de longa duração ocorreram na transição entre o anestro e a estação reprodutiva e foram associados principalmente à persistência do CL ou à fase folicular prolongada.(AU)

Dynamics and role of MicroRNAs during mammalian follicular development

Ovarian functions, which involve dynamically regulated processes of selection, recruitment and dominance, are known to be regulated by an array of genes, which are expressed in spatiotemporal manner in follicular somatic cells and gametes. This differential expression of genes in mammalian follicular cells is partly regulated by posttranscriptional gene regulators named microRNAs (miRNAs). In addition to the cellular miRNAs, growing number of evidences are available on the potential role of extracellular vesicles mediated transfer of miRNAs in follicular fluid. These extracellular vesicles are shown to be involved in cellto-cell communication within the follicular environment. The molecular messages carried by the extracellular vesicles released into extracellular space are thought to be reflections of the physiological status of the cells from where they are released. Therefore due to their structural nature and potential to cargo several physiologically relevant molecules, exosomes have a great potential to be used as markers of oocyte developmental competence in follicular environment. Here, we review large sets of literatures to show the dynamic nature of miRNAs during various stages of mammalian follicular development, oocyte growth and the role of some of the miRNAs in ovarian cell functions. Moreover, the presence of microvesicle and exosome-coupled extracellular miRNAs in mammalian follicular fluid and their potential involvement in cellto-cell communication are briefly discussed.

Dynamics and role of MicroRNAs during mammalian follicular development

Ovarian functions, which involve dynamically regulated processes of selection, recruitment and dominance, are known to be regulated by an array of genes, which are expressed in spatiotemporal manner in follicular somatic cells and gametes. This differential expression of genes in mammalian follicular cells is partly regulated by posttranscriptional gene regulators named microRNAs (miRNAs). In addition to the cellular miRNAs, growing number of evidences are available on the potential role of extracellular vesicles mediated transfer of miRNAs in follicular fluid. These extracellular vesicles are shown to be involved in cellto-cell communication within the follicular environment. The molecular messages carried by the extracellular vesicles released into extracellular space are thought to be reflections of the physiological status of the cells from where they are released. Therefore due to their structural nature and potential to cargo several physiologically relevant molecules, exosomes have a great potential to be used as markers of oocyte developmental competence in follicular environment. Here, we review large sets of literatures to show the dynamic nature of miRNAs during various stages of mammalian follicular development, oocyte growth and the role of some of the miRNAs in ovarian cell functions. Moreover, the presence of microvesicle and exosome-coupled extracellular miRNAs in mammalian follicular fluid and their potential involvement in cellto-cell communication are briefly discussed.(AU)

REGULAÇÃO DAS CÉLULAS DA GRANULOSA BOVINA POR EFETOR DA VIA DE SINALIZAÇÃO HIPPO

O crescimento folicular em mamíferos é um evento complexo e dinâmico que requer uma interação de diferentes moléculas e vias de sinalização celular. Em bovinos, principalmente as células da granulosa sofrem diferenciações morfofisiológicas fundamentais para a síntese do 17-estradiol (E2), através da expressão do citocromo P450 da família 19 do membro 1 da subfamília A (CYP19A1). A via de sinalização Hippo regula a homeostase tecidual, controlando o equilíbrio entre a proliferação e a apoptose das células. O efetor YAP1 controla a transcrição de genes proliferativos e anti-apoptóticos ao interagir com fatores de transcrição membros da família de domínios TEA (TEAD), e entre os genes alvo de YAP1 destaca-se o connective tissue growth factor (CTGF). Porém, a participação da via Hippo na dinâmica do crescimento folicular em bovinos ainda não foi totalmente compreendida. No presente trabalho, buscamos entender como ocorre a regulação de YAP1, principalmente sob o estímulo de FSH, durante o processo de divergência folicular. Para isso, utilizamos um cultivo de células da granulosa que mimetiza aspectos fisiológicos (in vitro), bem como células da granulosa de animais ovariectomizados (in vivo). Nossos resultados mostram que os tratamentos com FSH parece aumentama fosforilação de YAP1 para que ocorra a diferenciação celular. Além disso, quando adicionados inibidores da ligação YAP1-TEADo cultivo de células da granulosa, houve aumento da expressão de CYP19A1. Portanto, sugerimos que os níveis de YAP1 fosforilado aumentem à medida que ocorra o estabelecimento da dominância folicular.

Follicular growth in mammals is a complex and dynamic event that requires an interaction of different molecules and cell signaling pathways. In cattle, mainly granulosa cells undergo fundamental morphophysiological differentiations for the synthesis of 17-estradiol (E2), through the expression of cytochrome P450 family 19 subfamily A member 1 (CYP19A1). The Hippo signaling pathway regulates tecidual homeostasis controlling the balance between proliferation and apoptosis. The effector YAP1 controls the transcription of proliferative and anti-apoptotic genes by interacting with transcription factors of the TEA domain family member (TEAD); among the target genes of YAP1, we are particularly interested in the connective tissue growth factor (CTGF). In the present work, we seek to understand how YAP1 regulation occurs, mainly under FSH stimulation, during the follicular divergence process. To accomplish this aim we use a culture of granulosa cells that mimics physiological aspects (in vitro) and also granulosa cells of ovariectomized animals (in vivo). Our results show that FSH appears to increase YAP1 phosphorylation, allowing cell differentiation to occur. In addition, when YAP1 inhibitors were added to the granulosa cell culture, there was an increase in CYP19A1 expression. Therefore, we suggest that the levels of phosphorylated YAP1 will increase as follicular dominance is established.

Caracterização da dinâmica folicular no pós-parto de vacas da raça Gir amamentando, criadas em regime de pastagem tropical

Este estudo teve como objetivo avaliar a dinâmica folicular de vacas da raça Gir no período pós-parto. Foram utilizadas 15 vacas recém-paridas amamentando, mantidas a pasto e recebendo água e mineralização à vontade. Os animais foram pesados semanalmente a partir do parto até a quinta semana pós-parto (medidas do PV Parto a PV5), além de ser avaliado o escore de condição corporal (ECC) da primeira semana à sexta semana pós-parto (ECC1 a ECC5). Durante todo o período experimental os animais foram monitorados visualmente, duas vezes ao dia, para possível manifestação de estro pós-parto. A involução uterina foi avaliada macroscopicamente por palpação transretal, classificando o posicionamento dos cornos uterinos. O estudo da dinâmica folicular ovariana pós-parto foi realizado por meio de ultrassonografia do quarto (4PP) ao quadragésimo dia pós-parto (40PP). Foram realizadas medições diárias registrando-se os diâmetros (mm) máximos do maior e segundo maior folículos presentes em cada ovário. As vacas foram divididas em três grupos experimentais: G1: vacas que apresentaram crescimentos foliculares esporádicos em intervalos irregulares, sem aparente perfil característico de ondas folicularese seus maiores folículos não ultrapassando diâmetros de 7mm (n=5); G2: vacas que apresentaram crescimentos foliculares regulares, com perfil característico de ondas foliculares e subordinação e com os seus maiores folículos de cada onda atingindo diâmetros de, no máximo, de 8 a 10mm (n=5); G3: vacas que apresentaram crescimentos foliculares regulares, com perfil característico de ondas foliculares e subordinação, tendo os seus maiores folículos de cada onda atingindo, pelo menos em uma onda folicular, diâmetros superiores a 10mm (n=5). Observou-se perda de peso (P<005) dos animaisdo G1, sendo o peso vivo no PV6 representando perda de 17% em relação ao PV Parto. Houve diminuição de ECC significativa nos animais dos grupos G1 e G2 no ECC6, em relação ao ECC1. O posicionamento uterino se tornou pélvico nos três grupos a partir de 17 dias pós-parto. Os animais dos grupos G2 e G3 tiveram maior número de ondas durante os 40 dias de avaliação e maior diâmetro de folículo no 4PP. Características da dinâmica folicular, diâmetro máximo do maior folículo (mm), comprimento de onda folicular (dias), duração do crescimento (dias), taxa de crescimento (mm/dia), persistência folicular (dias) e diâmetro do segundo maior folículo (mm) foram diferentes nos animais dos três grupos, sendo valores maiores para os animais do grupo G3, intermediários para G2 e menores para G1.

This study aimed to evaluate the follicular dynamics of Gir cows in the post partum period. Fifteen recently calved cows were used, which were breast feeding, kepton pasture, receiving water and mineralization. The animals were weekly weighed from the calve moment until the fifth week post partum, besides it was assessed the body condition score (ECC) from the first week to the sixt week post partum. During the experimental period, the animals were visually monitored twice a day for possible manifestation of post partum estrus. The uterine involution of the cows was evaluated macroscopically by transrectal palpation, classifying the position of the uterine horns. The study of post partum ovarian folicular dynamics was performed by ultrasonography from the fourth day (4PP) to the fortieth day post partum. Daily scores were done by recording the maximum diameters (mm) of the largest follicles and the second largest follicles presente in each ovary. The cows were divided in three groups: G1: five cows showed sporadic folicular grow that irregular intervals, with no apparent characteristic profile of folicular waves and their largest follicles not exceeded 7mm in diameter; G2: five cows showed regular folicular growth, folicular waves characteristic profile and the largest follicles reached between 8 to 10mm; G3: five cows showed regular folicular growth, folicular waves characteristic profile and the largest follicles reached, at least in one, more than 10mm. Significant weight loss was observed in G1, representing 17% of loss between PV 6 and PV Parto. Significant decrease in ECC of G1 animals and ECC6 of G2 animals in inrelation to ECC1. The uterine position became pelvic in the three groups after 17 days post partum. G2 and G3 had a greater number of waves during the 40 days of evaluation and a larger follicle diameter in the 4PP. Folicular dynamics features, such as maximum diameter of the largest follicle (mm), folicular wave (days), growth duration (days), growth rate (mm/day), folicular persistence (days), diameter of these conflargest follicle (mm) were higher in G3, intermediate for G2 and lower for G1.

HISTOLOGIA E PRODUÇÃO DE IL-1, IL-6 E IL-8 EM FRAGMENTOS DO TRATO REPRODUTIVO DE NOVILHAS DESAFIADOS COM LPS

Infecções do trato reprodutivo (TR) feminino podem acometer até 40% das vacas no pós-parto e são os maiores responsáveis pelo descarte involuntário, constituindo grandes prejuízos econômicos ao setor agropecuário. A resposta imune inata do TR é amplamente estudada com o intuito de compreender os mecanismos responsáveis pela produção do padrão de resposta inflamatória desencadeada pelas infecções uterinas. Objetivou-se verificar a resposta imune inata mediada IL-1, IL-6 e IL-8 em diferentes regiões do TR de novilhas mestiças, frente ao desafio com lipopolissacarídeo (LPS) (n = 43) nas fases folicular (n = 10) e luteínica (n = 33) do ciclo estral, bem como, avaliar a dinâmica das mudanças celulares entre as estruturas anatômicas do TR com foco na porção cervical e suas transições, por meio das avaliações macroscópica e histológica (n = 3 em fase folicular e n = 3 emluteínica). Para tanto, foram colhidos fragmentos da porção cranial da vagina, transição vaginacervix, porção cervical média, transição cervix-endométrio, carúncula uterina e endométrio intercaruncular. Observou-se resposta imune frente ao desafio com LPS em todas as porções do TR, independente da fase do ciclo estral, com maior produção de citocinas pelas transições cervicais, comparado à porção caruncular do endométrio. Além disso, a presença de células caliciformes na cervix e suas transições apresentam contribuição fundamental para a imunidade inata uterina. Concluiu-se produção interleucinas 1, 6 e 8 apresenta comportamento diferente entre as regiões no trato reprodutivo de novilhas mestiças quando desafiadas com LPS e não há efeito do ciclo estral na indução desta reposta. Além disso, que a produção de muco pela cervix suas transições constituem a principal barreira uterina contra infecções microbianas devido a suas propriedades físico-químicas.

Infections of the female reproductive tract (RT) may occur in up to 40% of the postpartum cows and are the major responsible for involuntary disposal, constituting a huge economic loss in the agricultural sector. The innate immune response of the RT is widely studied to comprehend the mechanisms responsible for the production of the inflammatory response pattern triggered by the uterine infections. We aimed to verify the innate immune response mediated by IL-1, IL-6, and IL-8 in different regions of the reproductive tract of crossbred heifers challenged with lipopolysaccharide (LPS) (n=43) at the follicular (n=10) and luteal (n=33) phases of the estrous cycle, as well as to evaluate the cellular change dynamic between the anatomic structures of the RT, focusing in the cervical portion and its transitions, using macroscopic and histologic evaluations (n=3 in the follicular phase and n=3 in the luteal phase). For that we collected samples of the cranial portion of the vagina, vagina-cervix transition, cervix medial portion, cervix-endometrium transition, uterine caruncles, and intercaruncular endometrium. Besides that, the presence of caliciform cells at the cervix and its transitions present a fundamental contribution to the innate uterine xii immunity. We concluded that the production of interleukins 1, 6, and 8 present different behavior between the regions of the reproductive tract of crossbred heifers when challenged with LPS and has no effect of the estrous cycle at the induction of this response. Moreover, the mucous production made by the cervix and its transitional portions constitute the main uterine barrier against microbial infections because of its chemical-physical properties.

Characterization of the follicular dynamic patterns in a red flemish herd in Southern Brazil

Background: The Flemish Red is one of the oldest breeds of French cattle and, in France, the crosses with other red breeds and replacing them with more productive breeds caused a severe reduction in the number of purebred Flemish Red animals. Due to this drastic decrease in the Flemish Red population, this breed is at risk of extinction. The objective of the present study is to describe follicular development and serum progesterone (P4) profiles in Flemish Red cows raised in Southern Brazil for the improvement of reproductive management of this breed, considering that these animals may exhibit traits which disappeared in European animals due to genetic dilution.Materials, Methods & Results: The estrus cycles of two groups of post-pubertal non-lactating Flemish Red (FR, n = 7) and Holstein (HOL, n = 7) cows were synchronized with a Prostaglandin F2α analog. From the day of estrus, the ovaries were evaluated by transrectal ultrasound every 24 h for 21 days or until the detection of the second ovulation. The diameters of the dominant follicle (DF) and subordinate follicles (SF) were recorded according to the day of the estrus cycles and analyzed based on the diameter of both DF and SF on the day of follicular emergence, the day and diameter of DF on the day of divergence, daily growth rates of DF and FS, and the maximum diameter of both the ovulatory follicle and the dominant non-ovulatory follicle (DNOF). Samples of blood were collected every five days for P4 measurement (RIA). During emergence of the first follicle wave, the DF measured 3.97 ± 0.19 mm for FR and 4.00 ± 0.35 mm for HOL, while the SF reached 3.40 ± 0.22 mm in FR and 3, 07 ± 0.26 mm in HOL. The daily follicle growth rates was 1.10 ± 0.04 mm for DF and 0.67 ± 0.06 mm for the SF in FR, and were 1.01 ± 0.05 mm for DF and 0.72 ± 0.09 mm for the SF in HOL.[...](AU)

Characterization of the follicular dynamic patterns in a red flemish herd in Southern Brazil

Background: The Flemish Red is one of the oldest breeds of French cattle and, in France, the crosses with other red breeds and replacing them with more productive breeds caused a severe reduction in the number of purebred Flemish Red animals. Due to this drastic decrease in the Flemish Red population, this breed is at risk of extinction. The objective of the present study is to describe follicular development and serum progesterone (P4) profiles in Flemish Red cows raised in Southern Brazil for the improvement of reproductive management of this breed, considering that these animals may exhibit traits which disappeared in European animals due to genetic dilution.Materials, Methods & Results: The estrus cycles of two groups of post-pubertal non-lactating Flemish Red (FR, n = 7) and Holstein (HOL, n = 7) cows were synchronized with a Prostaglandin F2α analog. From the day of estrus, the ovaries were evaluated by transrectal ultrasound every 24 h for 21 days or until the detection of the second ovulation. The diameters of the dominant follicle (DF) and subordinate follicles (SF) were recorded according to the day of the estrus cycles and analyzed based on the diameter of both DF and SF on the day of follicular emergence, the day and diameter of DF on the day of divergence, daily growth rates of DF and FS, and the maximum diameter of both the ovulatory follicle and the dominant non-ovulatory follicle (DNOF). Samples of blood were collected every five days for P4 measurement (RIA). During emergence of the first follicle wave, the DF measured 3.97 ± 0.19 mm for FR and 4.00 ± 0.35 mm for HOL, while the SF reached 3.40 ± 0.22 mm in FR and 3, 07 ± 0.26 mm in HOL. The daily follicle growth rates was 1.10 ± 0.04 mm for DF and 0.67 ± 0.06 mm for the SF in FR, and were 1.01 ± 0.05 mm for DF and 0.72 ± 0.09 mm for the SF in HOL.[...]

Use of injectable P4 associated with an intravaginal P4 device for early resynchronization of beef cattle submitted to three TAIs in 48 days

Resumo: Nós objetivamos avaliar a dinâmica folicular e a taxa de prenhez (P/IA) de fêmeas bovinas submetidas à ressincronização, 13 dias após a IATF, utilizando um dispositivo contendo progesterona (P4) associado ou não à progesterona injetável de ação curta (P4i). No Exp. 1, 28 vacas lactantes e 25 novilhas Nelore foram submetidas a um protocolo de sincronização da ovulação (D0 = estro esperado). No D13, os animais foram divididos em dois grupos denominados controle: (Apenas o dispositivo; 15 vacas e 13 novilhas) e P4i (Dispositivo + 100 mg P4i; 13 vacas e 12 novilhas), e foram submetidos a ultrassonografia ovariana (US) e colheita de sangue diárias, do D13 até o D22. No D22, os dispositivos foram removidos e os animais com luteólise detectada por US tiveram a ovulação induzida pelo tratamento com cipionato de E2. No Exp. 2, 760 vacas e 498 novilhas foram submetidas à 1ª IATF no D0. No D13 e D22, os animais foram submetidos aos mesmos procedimentos realizados no Exp. 1. As fêmeas não prenhes receberam a 2 ª IATF no D24, e no D37 foram ressincronizadas usando o grupo experimental oposto à 1ª ressincronização. No D37, um diagnóstico de gestação (DG) (visualização de um embrião viável) foi realizado em animais que apresentaram CL ativo no D22. Aquelas com potencial perda de gestação entre o D22 e D37 foram ressincronizadas usando um dispositivo P4 e 2 mg de benzoato de estradiol. A terceira IATF foi realizada no D48. O DGs confirmatórios da 2ª e 3ª IATFs foram realizados nos dias 61 e 85, respectivamente. No Exp. 1, o momento da emergência folicular não diferiu entre os grupos e categorias (P>0,1). O folículo dominante foi maior em vacas do que em novilhas (P<0,05) no D22 e D24, e no grupo controle no D24 (P<0,05). Maiores concentrações de P4 foram detectadas no D14 (P<0,05) e D15 (P=0,08) no grupo P4i. As concentrações de P4 reduziram gradualmente entre o D14 e o D22 (P<0,05), e a luteólise ocorreu mais cedo (P=0,07) em vacas do que em novilhas. No Exp. 2, houve uma tendência para maior P/IA (P=0,09) em novilhas tratadas com P4i do que novilhas do grupo controle (43,7% [73/167] vs. 38,1% [61/160]), mas não diferiu entre vacas do grupo P4i (43% [105/244]) e controle (38,3% [87/227]). A P/IA geral para a 2ª e 3ª IATF, foi maior (P<0,05) no grupo P4i do que grupo controle (43% [178 / 411] vs. 38% [148/387]), independentemente da categoria. Uma interação de grupo por ECC (P=0,06) indicou que o P/IA nos animais tratados com P4i comente em fêmeas com ECC2 (54% [37/69] vs. 28% [15/53]; P<0,05). A P/IA acumulada após 3 IATFs foi de 77,3% (385/498) para novilhas e 83,3% (633/760) para vacas. Em conclusão, o tratamento com 100 mg de P4i de ação curta é eficaz para aumentar a concentração plasmática de P4, entretanto não impactou na sincronia da emergência da onda folicular. Os animais tratados com P4i apresentaram melhor P/IA, especialmente aqueles com baixo ECC.

Abstract: We aimed to evaluate the follicular dynamic and pregnancy rate (P/AI) of beef cattle submitted to resynchronization 13 days after a TAI using a P4 device associated or not with short-acting injectable progesterone (iP4). In Exp. 1, 28 Nelore suckled cows and 25 heifers were submitted to an ovulation synchronization protocol (D0 = expected estrus). On D13, animals were split into two groups, namely control (only P4 device; 15 cows and 13 heifers) and iP4 (P4 device + 100 mg iP4; 13 cows and 12 heifers), and submitted to daily ovarian ultrasonography (US) exams and blood collection, from D13 to D22. On D22, the P4 devices were removed, and animals with detected luteolysis by the US had the ovulation induced by E2 cypionate treatment. In Exp. 2, 760 cows and 498 heifers were submitted to a 1st TAI on D0. On D13 and D22, animals were split into control and iP4 groups and submitted to the same procedures done in Exp. 1. Also, non-pregnant animals received the 2nd TAI on D24, and on D37 were resynchronized using the opposite groups 1st resynchronization procedure. On D37, a pregnancy diagnosis was performed in animals with an active CL on D22. Those with potential pregnancy loss between D22 and D37 were also resynchronized on D37. The 3rd TAI was performed on D48. The confirmatory PD of the 2nd and 3rd TAIs were performed on D61 and D85, respectively. In Exp. 1, the time of follicular wave emergence did not differ between groups and parity categories. The dominant follicle was larger in cows than in heifers on D22 and D24, and in the control group on D24 (P<0.05). Increased P4 concentrations were detected on D14 (P<0.05) and D15 (P=0.08) in the iP4 group. P4 concentrations reduced gradually between D14 and D22 (P<0.05), and luteolysis occurred earlier (P=0.07) in cows than in heifers. In Exp. 2, the P/AI tended to be greater (P=0.09) in iP4-treated heifers than control heifers (44% [73/167] vs. 38% [61/160]), but did not differ between iP4-treated cows (43% [105/244]) and control cows (38% [87/227]). The overall P/AI for 2nd and 3rd TAIs, regardless of category, was greater (P<0.05) in the iP4 than the controls (43% [178/411] vs. 38% [148/387]). An interaction of group by BCS (P=0.06) indicated increased P/AI due to the iP4 treatment only in females with BCS 2 (54% [37/69] vs. 28% [15/53]). Cumulative P/AI after three TAIs was 77% for heifers and 83% for cows. In conclusion, the 100 mg short-acting iP4 treatment associated with the intravaginal P4 device is effective in increasing the plasma P4 concentration, but does not impact the synchrony of the follicular wave emergence. Animals treated with iP4 presented improved P/AI, especially those with low BCS.

INFLUÊNCIA DA ORIGEM E DA CONCENTRAÇÃO DE FSH SOBRE O CULTIVO IN VITRO DE FOLÍCULOS OVARIANOS ISOLADOS NA ESPÉCIE CAPRINA

Os objetivos deste estudo foram: 1) investigar uma curva concentração-resposta do FSH recombinante humano (hrFSH) no cultivo in vitro de folículos pré-antrais (FOPA) e antrais precoces (FOA) isolados caprinos (Fase 1); 2) comparar três diferentes origens de FSH (hipofisário porcino e recombinantes bovino e humano) durante o cultivo in vitro de FOPA e FOA caprinos isolados (Fase 2); 3) investigar se a extensão do período de cultivo, juntamente com mudanças dinâmicas na composição do meio de cultivo para cada estádio folicular, poderia melhorar a eficiência do sistema de cultivo in vitro para FOPA caprinos a taxas equivalentes aos FOA (Fase 3). Na fase 1, folículos isolados foram cultivados por 18 dias nos seguintes tratamentos: meio básico de cultivo (controle); ou meio controle suplementado com 10, 50 ou 100 mUI/mL de rhFSH. Na fase 2, FOPA e FOA foram cultivados por 18 dias e os tratamentos foram: meio base suplementado sem FSH (controle), 10, 50, ou 100 mUI/mL de pFSH (pFSH10, pFSH50 e pFSH100, respectivamente), 100 ng/mL de rbFSH (rbFSH) e 50 mUI/mL de rhFSH (rhFSH). Na fase 3, foram utilizados meios específicos para o cultivo in vitro de FOPA e FOA durante 24 ou 18 dias, respectivamente. A composição do meio de cultivo foi fixa (FOPA e FOA) ou dinâmica (FOPA). Os FOPA foram cultivados em meio fixo com alta concentração de insulina ou em meio dinâmico (insulina alta nos primeiros 6 dias, seguida de baixa insulina + GH até o final do período de cultivo) com ou sem GDF-9. Foram avaliadas a morfologia folicular, a formação de antro, a taxa de crescimento e a produção de estradiol, a viabilidade oocitária e a configuração da cromatina, bem como a expressão gênica relativa do mRNA da parede folicular, nas três fases. Na fase 1, nos FOA, a adição de FSH50 aumentou o diâmetro folicular e a taxa de crescimento, o percentual de oócitos totalmente crescidos e o diâmetro oocitário (P < 0,05) e tendeu a aumentar o percentual de oócitos em MII quando comparados ao controle (P = 0,07). Na fase 2, os tratamentos contendo pFSH apresentaram um percentual menor de folículos intactos e produção de estradiol e maior taxa de extrusão (P < 0,05). Para FOPA, a adição de pFSH10, pFSH100 e rhFSH diminuiu (P < 0,05) a retomada meiótica de oócitos em comparação aos tratamentos controle e rbFSH. Nos folículos antrais, rhFSH e pFSH10 aumentaram (P < 0,05, P = 0,08) a maturação oocitária. Em conclusão, a fonte de FSH afetou diferentemente a expressão gênica e a dinâmica folicular dos folículos pré-antrais e antrais in vitro. Na fase 3, o sistema de cultivo (fixo vs dinâmico) afetou diferentemente o resultado de todos os parâmetros avaliados, ou seja, morfologia e crescimento folicular, produção de estradiol, expressão gênica e maturação oocitária. Dependendo do sistema de cultivo, FOPA e FOA apresentaram taxas de crescimento e de maturação oocitária semelhantes quando cultivados in vitro sob as mesmas condições experimentais.

The aims of this study were: 1) investigate a concentration-response curve of human recombinant FSH (rhFSH) for in vitro culture of isolated caprine preantral and early antral follicles. (Phase 1); 2) compare three different sources of FSH (recombinant bovine, recombinant human, and porcine pituitary) during the in vitro culture of isolated caprine preantral and early antral follicles under the same experimental conditions (Phase 2); 3) investigate whether the extension of the culture period together with dynamic changes in the culture medium composition for each follicular stage could improve the efficiency of the in vitro culture system for late caprine preantral follicles (LPF) to rates equivalent to early antral follicles (EAF) (Phase 3). In phase 1, isolated follicles were cultured for 18 days in the following treatments: basic culture medium (control); or control medium supplemented with 10, 50, and 100 mIU/mL of hrFSH.In phase 2, preantral and early antral follicles were cultured for 18 days and the treatments were: base medium supplemented with no FSH (control), 10, 50, or 100 mIU/mL pFSH (pFSH10, pFSH50, and pFSH100, respectively), 100 ng/mL rbFSH (rbFSH), and 50 mIU/mL rhFSH (rhFSH). In phase 3, specific media were used for the in vitro culture of LPF and EAF during 24 or 18 days, respectively. Culture medium composition was either fixed (LPF and EAF) or dynamic (LPF). LPF were cultured either in a fixed medium with high insulin concentration, or in a dynamic medium (high insulin in the first 6 days followed by low insulin + GH until the end of the culture period) with or without GDF-9. EAF were cultured in a fixed medium containing low insulin, GH, and with or without GDF-9. Follicle morphology, antrum formation, growth rate, and estradiol production, and oocyte viability and chromatin configuration, and follicle wall mRNA relative gene expression were evaluated in the three phases. In phase 1, in antral follicles, the FSH addition at 50 mIU/mL increased follicular diameter and growth rate, the percentage of fully grown oocytes, and oocyte diameter (P < 0.05), and tended to increase the percentage of MII oocytes when compared to the control (P = 0.07). For preantral follicles, the addition of pFSH10, pFSH100, and rhFSH decreased (P < 0.05) oocyte meiotic resumption compared to control and rbFSH treatments. For antral follicles, rhFSH and pFSH10 increased (P = 0.08 P < 0.05) oocyte maturation. In conclusion, the source of FSH differently affected gene expression and follicular dynamics of preantral and antral follicles in vitro. In phase 3, the culture system (fixed vs. dynamic) differently affected the outcome of all parameters evaluated, i.e., follicle morphology and growth, estradiol production, gene expression, and oocyte maturation. Depending on the culture system, LPF and EAF had similar growth rates and oocyte maturation rates when cultured in vitro under the same experimental conditions.

CARACTERIZAÇÃO DE FOLÍCULOS OVARIANOS DE OVELHAS SANTA INÊS PORTADORAS DA MUTAÇÃO FecGE

Objetivou-se caracterizar os folículos ovarianos de ovelhas Santa Inês portadoras da mutação FecGE. Para isso, o trabalho foi constituído por quatro experimentos, nos quais as ovelhas foram distribuídas conforme seu grupo genótipo em homozigotas não mutantes (FecG+/+), heterozigotas (FecG+/E) e homozigotas mutantes (FecGE/E). No Primeiro Experimento objetivou-se avaliar algumas características ovarianas e foliculares e analisar a possibilidade de discriminação entre os grupos genótipos. Os ovários das ovelhas (n = 65) foram pesados, mensurados e os folículos (oócito, núcleo e nucléolo) histologicamente avaliados quanto a sua morfometria e morfologia. Os folículos morfologicamente normais, nos estágios primordiais e de transição, explicaram 70,18% da variabilidade existente entre ovelhas mutantes e não mutantes. Na avaliação morfométrica houve discriminação das ovelhas FecGE/E, FecG+/E daquelas FecG+/+ nos estágios de folículos primordiais em 36,76% e nos secundários em 10,63%. Os resultados permitem concluir que folículos morfologicamente normais nos estágios de desenvolvimento primordial e de transição são os parâmetros que possibilitam uma melhor discriminação das ovelhas portadoras da mutação FecGE. Além disso podem servir para viabilizar, de modo mais eficiente, o uso de biotécnicas que utilizam os folículos nos estágios iniciais como base na morfologia. No Segundo experimento objetivou-se caracterizar a morfologia e a morfometria dos folículos multioócitos (MOFs) e analisar a influência da variante genética FecGE sobre suas características. Os MOFs foram identificados e classificados quanto ao estágio de desenvolvimento, quantidade de oócitos inclusos, morfologia e morfometria. A frequência dos MOFs não sofreu influência (P > 0,05) da mutação (FecGE/E - 3,5%, FecG+/E - 3,3%, FecG+/+ - 3,0%), porém, constatou-se uma maior viabilidade (P < 0,05) nos MOFs de transição nas ovelhas FecGE/E (95,0%) e FecG+/E (90,9%) em relação as FecG+/+ (73,3%). Os resultados permitem concluir que a frequência dos MOFs não é influenciada pela mutação FecGE. Porém, as ovelhas mutantes possuem uma maior frequência desses folículos morfologicamente normais no estágio de transição. Ainda permitem concluir que os MOFs de transição morfologicamente normais com dois oócitos é o parâmetro que melhor discrimina as ovelhas portadoras da mutação. No Terceiro Experimento objetivou-se caracterizar a influência da mutação FecGE sobre a morfometria, morfologia e dinâmica dos folículos ovarianos. Fragmentos ovarianos (n=84) foram processados e os folículos analisados quanto a morfologia e morfometria pela histologia clássica. Para a avaliação da dinâmica folicular, as ovelhas tiveram o ciclo estral sincronizado e monitorado durante o período interovulatório. Foi observada uma maior (P < 0,05) porcentagem de folículos morfologicamente normais no estágio primordial nas ovelhas FecGE/E (90,0%) e FecG+/E (88,1%) quando comparadas àquelas FecG+/+ (73,0%). Maior (P < 0,05) quantidade de folículos morfologicamente normais no estágio de transição foi registrado nas ovelhas FecGE/E (87,3%) e FecG+/E (83,3%) do que naquelas FecG+/+ (76,8%). Na dinâmica folicular, registrou-se maior (P < 0,05) número de ovulações nas ovelhas FecGE/E (2,5 ± 0,2) quando comparado àquelas FecG+/+ (1,5 ± 0,3). Os folículos ovulatórios apresentaram menor diâmetro (P < 0,05) nas ovelhas FecGE/E (5,1 mm) e FecG+/E (5,2 mm) do que naquelas FecG+/+ (5,8 mm). Os resultados permitem concluir que as ovelhas com a mutação FecGE apresentam maior porcentagem de folículos morfologicamente normais nos estágios primordial e de transição e que as ovelhas FecGE/E expressam maior número de ovulações. Além disso, as ovelhas FecGE/E e FecG+/E apresentam folículos ovulatórios de menor diâmetro do que aquelas FecG+/+. No quarto experimento objetivou-se caracterizar a influência da mutação FecGE em ovelhas doadoras superovuladas e avaliar a probabilidade de modelos logísticos para a obtenção de melhores respostas superovulatórias. Constatou-se que a quantidade de corpos lúteos, bem como a taxa de embriões congeláveis e de fertilização discriminou ovelhas portadoras da mutação daquelas não portadoras. A taxa de recuperação foi maior (P<0,05) nas doadoras FecGE/E em relação as FecG+/E e as FecG+/+. Nas ovelhas FecG+/+ a taxa de fertilização foi maior que a FecG+/E e as ovelhas FecGE/E apresentaram valores semelhantes as demais. Constatou-se que a associação de ovelhas solteiras e portadoras do genótipo E/E, ovelhas solteiras pluríparas e ovelhas solteiras com mais de 6 anos são combinações que aumentam a probabilidade de melhores resultados superovulatórios. Os resultados permitem concluir que existe discriminação entre os grupos genótipos quando se avalia a resposta superovulatória. Que as ovelhas FecGE/E apresentaram maior taxa de estruturas recuperadas quando comparadas aos demais genótipos, porém com valor similar da taxa de estruturas fertilizadas em relação àquelas FecG+/+. Conclui-se ainda que modelos que incluem o status reprodutivo e a mutação, status reprodutivo e idade, status reprodutivo e quantidade de partos são adequados para predizer uma boa quantidade de corpos lúteos em ovelhas com ovário estimulados.

The aim was to characterize the ovarian follicles from Santa Inês ewes harboring the FecGE mutation. Therefore, this work was composed of four experiments, in which ewes were distributed according to the genotype into non-mutant homozygote (FecG+/+), heterozygotes (FecG+/E) and homozygous mutant (FecGE/E). In the first experiment, it was aimed to evaluate ovarian and follicular characteristics and to analyze the possibility of grouping them according to the genotypes. Ewes ovaries (n = 65) were weighted, measured and follicles (oocyte, nucleus and nucleolus) were histologically evaluated for its morphometrics and morphology. The follicles were morphologically normal, within the primordial and transition stages, thus explaining 70.18% of the variability existing between mutant and non-mutant. The morphometrics analysis did distinguish FecGE/E, FecG+/E ewes from their FecG+/+ controls on the primordial follicle stage in 36.76% and secondary stage in 10.63% of them. The results allow the conclusion that morphologically normal follicles in the primordial and transition stages of development allow for a better discrimination of ewes harboring the Fec E mutation. Moreover, such information can make it more viable and efficient to use biotechnologies that are based on follicles within the initial stages based on morphologic standards. In the second experiment, the aim was to characterize the morphology and morphometrics of multi-oocyte follicles (MOFs) and further analyze the influence of the FecGE genetic variance on such trait. The MOFs were identified and classified according to their stage of development, quantity of included oocytes, morphology, and morphometrics. The frequency of MOFs was not influenced (P > 0.05) by the mutation (FecGE/E- 3.5%, FecG+/E 3.3%, FecG+/+ - 3.0%), however, there was a greater viability (P < 0.05) in transition MOFs of FecGE/E (95.0%) and FecG+/E (90.9%) ewes in comparison to FecG+/+ ewes (73.3%). The results allow concluding that the frequency of MOFs was not influenced by the FecGE mutation. However, mutant ewes hold a greater frequency of such morphologically normal follicles in the transition stage. It still allows for concluding that transition MOFs with two oocytes is the best predictor to discriminate ewes harboring the mutation. In the third experiment, it was aimed to characterize the of the FecGE mutation on the morphometrics, morphology, and ovarian follicle dynamics. Ovarian fragments (n = 84) were processed and the follicles were analyzed according to their morphology and morphometrics by classical histology. To evaluate follicular dynamics, ewes had their estrous cycle synchronized and further monitored during the inter-ovulatory period. It was observed a greater (P < 0.05) percentage of morphologically normal follicles in the primordial stage for FecGE/E (90.0%) and FecG+/E (88.1%) ewes when compared to the FecG+/ + (73.0%) group. A greater (P < 0,05) quantity of morphologically normal follicles on the transition stage were registered in FecGE/E (87.3%) and FecG+/E (83,3%) ewes than FecG+/+ (76.8%) ewes. For follicular dynamic, it was observed a higher (P < 0.05) number of ovulations in FecGE/E ewes (2.5 ± 0.2) than FecG+/+ ewes (1.5 ± 0.3). The ovulatory follicles displayed smaller diameter (P < 0.05) than FecGE/E (5.1 mm) and FecG+/E (5.2 mm) ewes than FecG+/+ ewes (5.8 mm). The results allow the conclusion that ewes harboring a FecGE mutation display a greater percentage of morphologically normal follicles in both primordial and transition stages and FecGE/E ewes hold a greater number of ovulations. Further, FecGE/E and FecG+/E ewes display smaller ovulatory follicles than FecG+/+ ewes. In the fourth experiment, it was aimed to characterize the influence of the FecGE mutation in donor ewes subject to super-ovulation and to evaluate the probability of using logistic models to obtain better super-ovulatory responses. It was found that the quantity of corpus luteum, fertilization and freezable embryo rates allowed for determining ewes harboring the mutation to those non-mutant controls. The recovery rate was higher (P < 0.05) in FecGE/E donors than FecG+/E and FecG+/+ ewes. In FecG+/+ ewes, the fertilization was higher than the FecG+/E and FecGE/E ewes, which showed similar results to each other. It was noted that the association of single ewes and those from the E/E genotype, single pluriparous ewes and six-year old single ewes are combinations that increase the probability of better super-ovulatory results. The results allow concluding that there is discrimination between genotypes in terms of super-ovulatory response. Since FecGE/E ewes display higher recovery rates than other genotypes, although fertilization rates were similar among genotypes. In conclusion, models that include the reproductive status and the mutation, the reproductive status and age, reproductive status and number of deliveries are adequate to predict the quantity of corpus luteum in super-ovulated ewes.

Eficiência reprodutiva e dinâmica folicular de éguas Campolina de acordo com a condição corporal / Reproductive efficiency and follicular dynamic of Campolina mares according to body condition

O presente estudo teve como objetivo avaliar o efeito da condição corporal (CC) sobre a eficiência reprodutiva e a dinâmica folicular de éguas, no decorrer da estação de monta. Foram acompanhadas 134 éguas (92 não lactantes e 42 lactantes) que, em novembro e dezembro, foram submetidas à inseminação artificial e, de janeiro a março, à monta natural controlada, em dias alternados. Mantidas sob rufiação diária em grupo e a campo, quando o cio era detectado, iniciou-se o controle folicular diário por palpação trans-retal até a detecção da ovulação. O escore da CC foi avaliado nos meses de agosto, novembro, janeiro e março. A taxa de anestro foi 26,11% e a de gestação 56,7%, mas, considerando-se  apenas as éguas cíclicas, 77% tornaram-se gestantes. O número de ciclos/concepção foi 2,3 e de saltos/ciclo 2,1. Houve efeito (P<0,05) da evolução da CC sobre o número de éguas cíclicas e a taxa de gestação. O mês da estação de monta e a CC influenciaram todas as características foliculares e a taxa de gestação (P<0,05). Concluiu-se que a condição corporal tem efeito sobre a atividade cíclica, a dinâmica folicular e a fertilidade de éguas.

The aim of this study was to evaluate the effect of body condition (BC) on the reproductive efficiency and follicular dynamics of mares during the breeding season. We evaluated 134 mares (92 broodmares and 42 lactating) that were submitted to artificial insemination in November and December, and then put under natural controlled breeding, in alternating days, from January to March. They were kept under daily heat detection in group at field, so that at the moment it was detected, daily follicular control was initiated by rectal palpation until the detection of ovulation. The BC was evaluated in the months of August, November, January and March. Anestro rate was 26.11% and pregnancy rate was 56.7%; however, when considering only the cyclic mares, it was 77%. The number of cycles/conception was 2.3 and of mounts/cycle 2.1. The BC evolution affected (P<0.05) the number of cyclic mares and the pregnancy rate. The month of breeding season and the BC influenced all follicular characteristics and pregnancy rate (P<0.05). We could conclude that the body condition affects the mares cyclical activity, follicular dynamics and fertility.