Caracterização etiológica, epidemiológica e clínico-patológica da meningoencefalite por herpesvírus bovino em bovinos no Estado de Goiás / Etiological, epidemiological, clinical and pathological characterization of meningoencephalitis in cattle by bovine herpesvirus in the State of Goiás, Brazil

Foram estudados 26 casos de meningoencefalite por herpesvírus bovino (BoHV) diagnosticados entre 2010-2016, no Estado de Goiás (GO). A doença acometeu principalmente bovinos jovens, entre 60 dias a 18 meses de idade. Não houve associação entre os casos e o sexo dos bovinos e a sazonalidade. A doença foi observada em todas as cinco Mesorregiões do Estado, com uma frequência maior nas Mesorregiões Sul e Centro. Os sinais clínicos mais frequentemente observados incluíram cegueira, incoordenação, sialorreia e ataxia. As principais alterações macroscópicas observadas incluíram congestão com tumefação e achatamento das circunvoluções, amolecimento e amarelamento do córtex telencefálico e focos de hemorragia. Em cinco encéfalos, não foram observadas alterações macroscópicas e em quatro as alterações não foram informadas. As principais alterações histológicas ocorreram no córtex telencefálico, principalmente o córtex frontal e parietal, mas em alguns casos, lesões de menor intensidade foram também observadas no tálamo, núcleos basais, mesencéfalo, ponte, bulbo, cerebelo e hipocampo. Todos os casos apresentaram meningoencefalite linfoplasmocítica e corpúsculos de inclusão intranucleares basofílicos em astrócitos e, eventualmente, em neurônios. Outras lesões frequentes incluíram necrose neuronal laminar segmentar (neurônio vermelho), espongiose, tumefação do núcleo das células endoteliais, gliose focal ou difusa, hipertrofia de astrócitos, infiltração por células gitter, congestão e hemorragia. Lesões menos comuns incluíram astrócitos Alzheimer tipo II, lesão residual e neuronofagia. A necrose neuronal e o edema (espongiose) foram mais acentuados nas camadas granular externa, molecular, de células piramidais e granular interna dos telencéfalos. Tanto os giros quanto os sulcos foram afetados igualmente. Dos 26 casos, o DNA de BoHV-5 foi amplificado em dois (7,69%) casos, enquanto que o de BoHV-1 foi identificado em um caso (3,84%)...(AU)

Twenty six cases of bovine herpetic meningoencephalitis diagnosed from 2010-2016 in Goiás state, Brazil, were studied. Affected cattle were mainly 60-day to 18-month-old. There was no association of the disease with sex and seasonality. The disease was found in all five mesoregions with a higher prevalence in southern and central state of Goiás. Clinical signs more frequently observed included blindness, incoordination, circling, excessive salivation, and ataxia. Main gross findings in the brain were congestion with swelling and flattening of gyri, softening and yellow discoloration of cerebral cortex and hemorrhagic foci. In five cases no gross changes were observed in the brain and in four cases there is no information. The main histopathological changes were in the cortex of telencephalic lobes, especially the frontal and parietal; however less prominent and less frequently found lesions occurred in the thalamus, basal nuclei, midbrain, pons, medulla oblongata, cerebellum, and hippocampus. All cases presented lymphoplasmocytic meningoencephalitis and intranuclear basophilic inclusion bodies in astrocytes, less commonly in neurons. Other frequent lesions included segmental laminar neuronal necrosis (red neurons), spongiosis, swollen vascular endothelial nuclei, gliosis (focal and diffuse), hypertrophy of astrocytes, infiltration of gitter cells, congestion, and hemorrhage. Lesions less frequently observed were Alzheimer type II astrocytes, residual lesion and neuronophagia. The most frequently affected cortical layers by neuronal necrosis and edema were external and internal granular, molecular, and pyramidal cell layers. Gyri and sulci were equally affected. Of the 26 cases, in 2 (7.69%) the DNA of BoHV-5 was amplified with samples fixed in 10% formalin and paraffin-embedded. DNA of BoHV-1 was identified in another case (3.84%) where, positive to BoHV-1, fresh samples were used.(AU)

Outbreak of bovine herpetic meningoencephalomyelitis in Southern Brazil

Background: Herpetic meningoencephalitis is an infectious contagious disease worldwide distributed, most often caused by bovine alphaherpesvirus type 5 (BoHV-5), although bovine alphaherpesvirus type 1 (BoHV-1) may occasionally be the causative agent. The disease is characterized by subacute to acute clinical onset, often affecting animals submitted to stressful situations. Clinical signs are mainly neurologic due to meningoencephalitis and cortical necrosis. The involvement of the spinal cord has also been reported, however in BoHV-1 associated disease only. The aim of this report is to describe an outbreak of bovine meningoencephalomyelitis associated to BoHV-5.Case: In August 2017, nine 1-year-old calves died in a beef cattle farm with a flock of approximately 400 bovines. The animals presented neurological clinical signs characterized by excessive salivation, nasal and ocular discharges, incoordination, apathy, head tremors, head pressing, wide-based stance, recumbency followed by convulsions and paddling. According to the owner and referring veterinarian, affected animals displayed severe clinical signs with rapid progression and often leading to death in up to seven days. Four of these calves were submitted for necropsy, and gross lesions were present in the brain, characterized by mild to moderate multifocal hemorrhagic and soft areas. On cut surface, extensive areas of dark brown discoloration and malacia were observed. Histologically, lesions were characterized by extensive areas of liquefactive necrosis in the cerebral cortex grey matter, associated with inflammatory infiltrates composed of neutrophils, lymphocytes, plasma cells and foamy macrophages, as well as multifocal to coalescing areas of hemorrhage and fibrin deposition. Intranuclear eosinophilic inclusion bodies were rarely observed in neurons and astrocytes. On leptomeninges, there was diffuse inflammatory infiltrates of lymphocytes and plasma cells.[...]

Outbreak of bovine herpetic meningoencephalomyelitis in Southern Brazil

Background: Herpetic meningoencephalitis is an infectious contagious disease worldwide distributed, most often caused by bovine alphaherpesvirus type 5 (BoHV-5), although bovine alphaherpesvirus type 1 (BoHV-1) may occasionally be the causative agent. The disease is characterized by subacute to acute clinical onset, often affecting animals submitted to stressful situations. Clinical signs are mainly neurologic due to meningoencephalitis and cortical necrosis. The involvement of the spinal cord has also been reported, however in BoHV-1 associated disease only. The aim of this report is to describe an outbreak of bovine meningoencephalomyelitis associated to BoHV-5.Case: In August 2017, nine 1-year-old calves died in a beef cattle farm with a flock of approximately 400 bovines. The animals presented neurological clinical signs characterized by excessive salivation, nasal and ocular discharges, incoordination, apathy, head tremors, head pressing, wide-based stance, recumbency followed by convulsions and paddling. According to the owner and referring veterinarian, affected animals displayed severe clinical signs with rapid progression and often leading to death in up to seven days. Four of these calves were submitted for necropsy, and gross lesions were present in the brain, characterized by mild to moderate multifocal hemorrhagic and soft areas. On cut surface, extensive areas of dark brown discoloration and malacia were observed. Histologically, lesions were characterized by extensive areas of liquefactive necrosis in the cerebral cortex grey matter, associated with inflammatory infiltrates composed of neutrophils, lymphocytes, plasma cells and foamy macrophages, as well as multifocal to coalescing areas of hemorrhage and fibrin deposition. Intranuclear eosinophilic inclusion bodies were rarely observed in neurons and astrocytes. On leptomeninges, there was diffuse inflammatory infiltrates of lymphocytes and plasma cells.[...](AU)

Presença do genoma de BoHV-5 no líquido cefalorraquidiano de bovinos com meningoencefalite herpética / Presence of BoHV-5 genome in cerebrospinal fluid of cattle with herpetic meningoencephalitis

The diagnosis of bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) encephalitis is confirmed after death by laboratory methods applied to brain fragments. Alternative methods to confirm ante-mortem diagnosis are important because the disease is not always lethal. The aim of this study was to investigate whether the presence of the virus genome in the cerebrospinal fluid (CSF) detected by polymerase chain reaction (PCR) might be admitted as a method for ante-mortem diagnosis. CSF samples were taken from 14 animals suffering from BoHV-5 encephalitis, diagnosed by characteristic histopathological lesions in the brain and by identification of the virus genome by PCR in different portions of the brain. Virus DNA was detected in the CSF of 21.42% (3/14) of the evaluated animals. Ante-mortem detection of the virus genome in the CSF showed low sensitivity to confirm the diagnosis. The diagnosis is confirmed by a positive result but a negative one does not discard the disease.(AU)

Presença do genoma de BoHV-5 no líquido cefalorraquidiano de bovinos com meningoencefalite herpética / Presence of BoHV-5 genome in cerebrospinal fluid of cattle with herpetic meningoencephalitis

The diagnosis of bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) encephalitis is confirmed after death by laboratory methods applied to brain fragments. Alternative methods to confirm ante-mortem diagnosis are important because the disease is not always lethal. The aim of this study was to investigate whether the presence of the virus genome in the cerebrospinal fluid (CSF) detected by polymerase chain reaction (PCR) might be admitted as a method for ante-mortem diagnosis. CSF samples were taken from 14 animals suffering from BoHV-5 encephalitis, diagnosed by characteristic histopathological lesions in the brain and by identification of the virus genome by PCR in different portions of the brain. Virus DNA was detected in the CSF of 21.42% (3/14) of the evaluated animals. Ante-mortem detection of the virus genome in the CSF showed low sensitivity to confirm the diagnosis. The diagnosis is confirmed by a positive result but a negative one does not discard the disease.(AU)

Desenvolvimento e avaliação de uma vacina inativada de aplicação intravaginal contra o alphaherpesvirus bovino 5 (BoHV-5) em associação ao hidróxido de alumínio e aos polímeros mucoadesivos Polaxamer 407 e 2-hidroxietilcelulose

Os alphaherpesvirus bovinos BoHV - são patógenos que colonizam as células epiteliais das cavidades mucosas e causam doenças respiratória e reprodutiva em bovinos, além de casos de encefalite herpética bovina (BoHV-5) e persistência do genoma viral no organismo hospedeiro, com casos de reativação e excreção de progênie infecciosa. Mecanismos da imunidade inata e adaptativa conferem proteção frente a estes agentes, mas o estímulo da imunidade local, mediada por anticorpos das classes IgG e IgA, é essencial para a efetividade desta proteção. Desta forma, há a necessidade da formulação de vacinas que propiciem a imunidade adequada a estas mucosas. Neste estudo, 20 fêmeas bovinas das raças Jersey e Holandês foram divididas em três grupos (G1 (controle positivo BoHV-5+Al(OH)3), G2 (controle negativo PBS) e G3 (vacina experimental BoHV-5+Al(OH)3+2-Hidroxietilcelulose+Polaxamer 407) e inoculadas três vezes, com intervalos de vinte e um dias, pelas vias parenteral (G1 e G2) e vaginal (G3). A avaliação da resposta imunológica humoral foi realizada pelos testes de soroneutralização e ELISA. Não houve detecção de anticorpos neutralizantes no grupo tratado com a vacina experimental (G3), em nenhum dos períodos experimentais. Apenas no grupo 1 (controle positivo) foram observados títulos de anticorpos neutralizantes, a partir do dia 21 após a primeira vacinação. O teste de ELISA indireto demonstrou incremento na produção dos anticorpos IgG e IgA nas secreções nasal e vaginal (G3) e as vacinas demonstraram-se seguras e bem toleradas pelos animais. O incremento de IgG e IgA a níveis séricos não apresentou resultado satisfatório no tratamento experimental (G3). Conquanto, nosso estudo confirma a necessidade de pesquisas adicionais que avaliem a capacidade imunomoduladora e imunogênica de outras formulações que possam ser utilizadas na elaboração de um produto comercial seguro e eficaz.

Bovine alphaherpesviruses - BoHV - are pathogens that colonize epithelial cells in mucous cavities and cause respiratory and reproductive diseases in cattle, in addition to cases of bovine herpetic encephalitis (BoHV-5) and persistence of the viral genome in the host organism, with cases of reactivation and excretion of infectious progeny. Mechanisms of innate and adaptive immunity provide protection against these agents, but stimulating local immunity, mediated by antibodies of the IgG and IgA classes, is essential for the effectiveness of this protection. Thus, there is a need for the formulation of vaccines that provide adequate immunity to these mucous membranes. In this study, 20 bovine females of the Jersey and Dutch breeds were divided into three groups (G1 - (positive control - BoHV-5 + Al (OH) 3), G2 (negative control - PBS) and G3 (experimental vaccine - BoHV-5 + Al (OH) 3 + 2-Hydroxyethylcellulose + Polaxamer 407) and inoculated three times, at intervals of twenty-one days, by parenteral (G1 and G2) and vaginal (G3) routes. seroneutralization and ELISA tests There was no detection of neutralizing antibodies in the group treated with the experimental vaccine (G3), in any of the experimental periods Only in group 1 (positive control), neutralizing antibody titers were observed, starting on the 21st day after The indirect ELISA test showed an increase in the production of IgG and IgA antibodies in nasal and vaginal secretions (G3) and the vaccines were shown to be safe and well tolerated by the animals.The increase in IgG and IgA at serum levels did not show satisfactory result in t experimental treatment (G3). However, our study confirms the need for further research to assess the immunomodulatory and immunogenic capacity of other formulations that can be used in the development of a safe and effective commercial product.

Prevalência das infecções latentes por BoHV-1 e BoHV-5 em bovinos de corte no Estado do Paraná / Prevalence of latent infection with BoHV-1 and BoHV-5 in beef cattle of Parana, Brazil

O objetivo deste trabalho foi determinar a prevalência das infecções latentes por BoHV-1 e por BoHV-5 em bovinos de corte criados no Estado do Paraná. Os gânglios do nervo trigêmeo foram coletados de 400 bovinos hígidos, entre 18 e 36 meses de idade, provenientes de 90 propriedades rurais localizadas em diferentes mesorregiões geográficas do Estado e abatidos em frigorífico com Serviço de Inspeção Federal. A reação em cadeia da polimerase com amplificação do gene que codifica a glicoproteína C foi empregada para a detecção do DNA viral. Cento e nove bovinos eram herpéticos (27,25%), sendo 14,25% (57/400) infectados com BoHV-1, 9,75% (39/400) infectados com BoHV-5 e 3,25% (13/400) portadores de infecção mista. A distribuição geográfica foi heterogênea e as infecções foram mais prevalentes nas mesorregiões localizadas ao norte do Estado. A vigilância para a encefalite por BoHV-5 deve ser intensificada na mesorregião Noroeste.(AU)

The prevalence of latent infection with BoHV-1 or BoHV-5 in beef cattle raised in the state of Paraná, Brazil, was studied. The trigeminal ganglia were collected in a slaughterhouse from 400 healthy cattle, 18 to 36 months old, raised in 90 farms located in distinct geographical regions of the state. Polymerase chain reaction for amplification of the gene encoding C glycoprotein was performed to detect virus DNA. One hundred and nine (27.25%) animals were herpetic; 14.25% (57/400) were infected with BoHV-1, 9.75% (39/400) were infected with BoHV-5 and 3.25% (13/400) had mixed infection. The geographical distribution was heterogeneous and the infections were more prevalent in the north of the state. The surveillance for BoHV-5 encephalitis should be intensive in the Northwest region.(AU)

Fatal Human herpesvirus 1 (HHV-1) infection in captive marmosets (Callithrix jacchus and Callithrix penicillata) in Brazil: clinical and pathological characterization / Infecção fatal por Herpesvirus simplex Tipo 1 (HHV-1) em saguis de cativeiro (Callithrix jacchus and Callithrix penicillata) no Brasil: caracterização clínica e patológica

Fatal Human herpesvirus 1 (HHV-1) was diagnosed in 12 captive marmosets (Callithrix jacchus and Callithrix penicillata) from metropolitan region of São Paulo, São Paulo State. Clinical signs were variable among the cases, but most affected marmosets presented signs associated with viral epithelial replication: oral, lingual and facial skin ulcers and hypersalivation, and viral replication in the central nervous system: prostration, seizure and aggressive behavior. Consistent microscopic findings were diffuse mild to severe nonsuppurative necrotizing meningoencephalitis with gliosis, vasculitis and neuronal necrosis. Additionally, in the brain, oral cavity, skin, adrenal gland and myoenteric plexus intranuclear inclusion bodies were present. Immunohistochemistry confirmed the presence of the HHV-1 antigen in association with lesions in the brain, oral and lingual mucosa, facial skin, adrenal gland and myoenteric plexus. HHV-1-specific polymerase chain reaction (PCR) analysis of the brain was carried out and the virus was detected in 7/8 infected marmosets. It is concluded that HHV-1 causes widespread fatal infection in marmosets.(AU)

Infecção fatal por Herpesvirus simplex Tipo 1 (HHV-1) foi diagnosticada em 12 saguis de cativeiro (Callithrix jacchus e Callithrix penicillata) provenientes da região metropolitana de São Paulo, Estado de São Paulo. Os sinais clínicos foram variáveis entres os casos, no entanto, a maioria dos saguis afetados apresentavam sinais associados à replicação viral em epitélios: úlceras na cavidade oral, língua e pele da face e hipersalivação; e no sistema nervoso central: prostração, convulsão e comportamento agressivo. Histologicamente, o principal achado foi meningoencefalite necrosante não supurativa difusa, leve a acentuada com gliose, vasculite e necrose neuronal. Inclusões intranucleares também foram observadas em encéfalo, cavidade oral, pele, glândula adrenal e plexo mioentérico. A imuno-histoquímica anti-HHV-1 confirmou a presença do antígeno viral em associação às lesões em encéfalo, mucosa oral e lingual, pele da face, glândula adrenal e plexo mioentérico. Em 7/8 saguis infectados foi detectada a presença de HHV-1 por reação em cadeia da polimerase (PCR) a partir de amostras de encéfalo. Conclui-se que HHV-1 causa uma infecção disseminada e fatal em saguis.(AU)

Fatal Human herpesvirus 1 (HHV-1) infection in captive marmosets (Callithrix jacchus and Callithrix penicillata) in Brazil: clinical and pathological characterization / Infecção fatal por Herpesvirus simplex Tipo 1 (HHV-1) em saguis de cativeiro (Callithrix jacchus and Callithrix penicillata) no Brasil: caracterização clínica e patológica

Fatal Human herpesvirus 1 (HHV-1) was diagnosed in 12 captive marmosets (Callithrix jacchus and Callithrix penicillata) from metropolitan region of São Paulo, São Paulo State. Clinical signs were variable among the cases, but most affected marmosets presented signs associated with viral epithelial replication: oral, lingual and facial skin ulcers and hypersalivation, and viral replication in the central nervous system: prostration, seizure and aggressive behavior. Consistent microscopic findings were diffuse mild to severe nonsuppurative necrotizing meningoencephalitis with gliosis, vasculitis and neuronal necrosis. Additionally, in the brain, oral cavity, skin, adrenal gland and myoenteric plexus intranuclear inclusion bodies were present. Immunohistochemistry confirmed the presence of the HHV-1 antigen in association with lesions in the brain, oral and lingual mucosa, facial skin, adrenal gland and myoenteric plexus. HHV-1-specific polymerase chain reaction (PCR) analysis of the brain was carried out and the virus was detected in 7/8 infected marmosets. It is concluded that HHV-1 causes widespread fatal infection in marmosets.(AU)

Infecção fatal por Herpesvirus simplex Tipo 1 (HHV-1) foi diagnosticada em 12 saguis de cativeiro (Callithrix jacchus e Callithrix penicillata) provenientes da região metropolitana de São Paulo, Estado de São Paulo. Os sinais clínicos foram variáveis entres os casos, no entanto, a maioria dos saguis afetados apresentavam sinais associados à replicação viral em epitélios: úlceras na cavidade oral, língua e pele da face e hipersalivação, e no sistema nervoso central: prostração, convulsão e comportamento agressivo. Histologicamente, o principal achado foi meningoencefalite necrosante não supurativa difusa, leve a acentuada com gliose, vasculite e necrose neuronal. Inclusões intranucleares também foram observadas em encéfalo, cavidade oral, pele, glândula adrenal e plexo mioentérico. A imuno-histoquímica anti-HHV-1 confirmou a presença do antígeno viral em associação às lesões em encéfalo, mucosa oral e lingual, pele da face, glândula adrenal e plexo mioentérico. Em 7/8 saguis infectados foi detectada a presença de HHV-1 por reação em cadeia da polimerase (PCR) a partir de amostras de encéfalo. Conclui-se que HHV-1 causa uma infecção disseminada e fatal em saguis.(AU)

Cortical necrosis and cerebral atrophy in calves experimentally infected with bovine herpesvirus type 5

Bovine encephalitis herpesvirus, or bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5), a member of the family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae, is long recognized as the causative agent of bovine herpesvirus encephalitis. The disease caused by BoHV-5 is characterized by signs of nervous impairment, consequent to non-suppurative meningoencephalitis. Although bovine herpetic encephalitis is a rare event in herds from the Northern Hemisphere, BoHV-5 infections are an important cause of central nervous system disease in cattle in Brazil and Argentina. Recovery of animals from clinical illness has been documented before, both in naturally infected animals and experimentally infected individuals.[...](AU)

Cortical necrosis and cerebral atrophy in calves experimentally infected with bovine herpesvirus type 5

Bovine encephalitis herpesvirus, or bovine herpesvirus type 5 (BoHV-5), a member of the family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae, is long recognized as the causative agent of bovine herpesvirus encephalitis. The disease caused by BoHV-5 is characterized by signs of nervous impairment, consequent to non-suppurative meningoencephalitis. Although bovine herpetic encephalitis is a rare event in herds from the Northern Hemisphere, BoHV-5 infections are an important cause of central nervous system disease in cattle in Brazil and Argentina. Recovery of animals from clinical illness has been documented before, both in naturally infected animals and experimentally infected individuals.[...]

DOENÇAS NEUROLÓGICAS DE BOVINOS NO NORDESTE DO BRASIL

Em bovinos, as doenças do sistema nervoso central (SNC) provocam sérios prejuízos econômicos, tendo em vista a elevada mortalidade de animais que provocam. Considerando que o Brasil situa-se entre os maiores exportadores de carne bovina, torna-se necessário o fortalecimento do sistema de vigilância epidemiológica das doenças do SCN, realizando o diagnóstico diferencial das encefalites e encefalopatias a fim de fornecer informações epidemiológicas para os órgãos de defesa agropecuária e ao Programa Nacional de Controle da Raiva dos Herbívoros e Outras Encefalopatias (PNCRH). Dentre os agentes a serem incluídos, destaca-se os herpesvírus bovino 5 (BoHV-5), agente causador da meningoencefalite herpética bovina. O objetivo dessa dissertação é revisar as principais doenças neurológicas de bovinos no nordeste do Brasil e relatar a ocorrência em duas propriedades rurais no Estado de Pernambuco, de casos de meningoencefalite necrosante associada BoHV-5, que resultou na morte de 5 bovinos entre os anos de 2011-2012. Os sinais clínicos observados consistiram em andar em círculos, cegueira, pressão da cabeça contra objetos, tremores musculares, incoordenação, depressão acentuada e decúbito lateral permanente seguido de morte. À necropsia não foram observadas alterações significativas. Ao corte do encéfalo, após a fixação em formol, foram observadas áreas de aspecto granular ao corte, com coloração acinzentada, amolecidas e cavitações no córtex cerebral, mesencéfalo, hipocampo, tálamo, núcleos da base e cerebelo. Microscopicamente havia meningite não supurativa e encefalite difusa com a presença de manguitos perivasculares, de células mononucleares indiferenciadas e necrose neuronal. Nas áreas de polioencefalomalacia havia neuronofagia e a presença de células Gitter. Nas amostras submetidas à PCR houve amplificação do DNA de BoHV-5.

In cattle, diseases of the central nervous system (CNS) cause serious economic losses, owing to the high mortality of animals that these diseases cause. Considering that Brazil is the largest beef exporters, it is necessary to strengthen the epidemiological surveillance of SCN diseases, performing the differential diagnosis of encephalitis and encephalopathy to provide epidemiological information to agriculture defense agencies and the National Rabies Control Program and Other Brain Diseases (PNCRH). Bovine herpesvirus 5 (BoHV-5), the causative agent of bovine herpetic meningoencephalitis is one of the most important agents to be included. The objective of this work is to review the main neurological diseases of cattle in northeastern Brazil and report the occurrence of cases of necrotizing meningoencephalitis associated BoHV-5, between the years 2011-2012, in the state of Pernambuco. The clinical signs consisted of circling, blindness, nasal and ocular discharge, head pressing, muscle tremors, incoordination, and permanent lateral recumbence followed by death. At necropsy no significant changes were observed. After cutting the brain previously fixed in formaldehyde solution, softened grayish areas of granular appearance and cavitations in the cerebral cortex, midbrain, hippocampus, thalamus, basal ganglia and cerebellum were observed. Microscopically there was nonsuppurative meningitis and diffuse encephalitis with perivascular cuffs, mononuclear or undifferentiated cells and neuronal necrosis. In areas of polioencefalomalacia there was neuronophagia and the presence of Gitter cells. In the samples submitted to PCR there was amplification of DNA from BoHV-5.

Atividade de três drogas antivirais sobre os herpesvírus bovino tipos 1, 2 e 5 em cultivo celular / Activity of three antiviral drugs against bovine herpesviruses 1, 2 and 5 in cell culture

The activity of three anti-herpetic drugs (Acyclovir [ACV], Gancyclovir [GCV] and Foscarnet [PFA]) was tested against bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2) and 5 (BoHV-5) in vitro using the plaque reduction assay. Different drug concentrations were tested against one hundred 50 percent tissue culture infectious dose (TCID50) of the respective viruses. Drug concentrations lower than 200μg/mL resulted in viability rates of more than 80 percent for MDBK and Hep2 cells in the MTT test (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide). The selectivity index (IS) of the drugs was calculated dividing the concentration of the drug that is cytotoxic for 50 percent of the cells (CC50) by the concentration of the drug that was effective in reducing by 50 percent the number of viral plaques (EC50) for the three herpesviruses. Thus, ACV was shown to be moderately active against BoHV-1 (EC50: 112.9μg/mL; IS: 4.5), BoHV-2 (EC50: 114.2μg/mL; IS: 4.5) and BoHV-5 (EC50: 96.9μg/mL; IS: 5.3). GCV was effective against BoHV-2 (EC50: 33.5μg/mL; IS: 16.6), moderately effective against BoHV-5 (EC50: 123.2μg/mL; IS: 4.5) and poorly active against BoHV-1 (EC50: 335.8μg/mL; IS: 1.7). PFA exhibited the highest antiviral activity, being the only drug that, at concentration of 100μg/mL, completely inhibited plaque formation by all three viruses. PFA was the most effective in vitro against BoHV-1 (EC50: 29.5μg/mL; IS: 42.2), BoHV-2 (EC50: 45.2μg/mL; IS: 27.6) and BoHV-5 (EC50: 7.8μg/mL; IS: 160.6). Thus, the results indicate that PFA is a promising candidate for experimental therapeutic testing in vivo against bovine herpesviruses.(AU)

A atividade de três fármacos antivirais (Aciclovir [ACV], Ganciclovir [GCV] e Foscarnet [PFA]) foi testada in vitro frente aos herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2) e 5 (BoHV-5). Para isso, utilizou-se o teste de reducao de placas virais em cultivo celular, testando-se diferentes concentracoes dos farmacos frente a 100 doses infectantes para 50 por cento dos cultivos celulares (DICC50) dos respectivos virus. Pelo teste de MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol- 2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), verificou-se que concentracoes inferiores a 200ƒÊg/mL dos tres antivirais resultaram em indices de viabilidade de celulas MDBK e Hep2 superiores a 80 por cento. Com base na concentracao citotoxica para 50 por cento das celulas (CC50) e na concentracao dos farmacos efetiva para inibir em 50 por cento o numero de placas virais (EC50), calculou-se o indice de seletividade (IS) dos antivirais para os tres herpesvirus. Assim, o ACV demonstrou ser moderadamente ativo frente ao BoHV-1 (EC50: 112,9ƒÊg/mL e IS: 4,5), ao BoHV-2 (EC50: 114,2 ƒÊg/mL e IS: 4,5) e BoHV-5 (EC50: 96,9ƒÊg/mL e IS: 5,3). O GCV apresentou atividade moderada frente ao BoHV-2 (EC50: 33,5ƒÊg/mL e IS: 16,6) e, em menor grau, contra o BoHV-5 (EC50: 123,2ƒÊg/mL e IS: 4,5), sendo ineficaz frente ao BoHV-1 (EC50: 335,8ƒÊg/mL e IS: 1,7). O PFA apresentou atividade antiviral mais pronunciada, sendo o unico farmaco que, na concentracao de 100ƒÊg/mL, inibiu completamente a producao de placas pelos tres virus testados. O PFA foi o mais efetivo in vitro frente ao BoHV-1 (EC50: 29,5ƒÊg/mL e IS: 42,2), ao BoHV-2 (EC50: 45,2ƒÊg/mL e IS: 27,6) e ao BoHV-5 (EC50: 7,8ƒÊg/mL e IS: 160,6). Portanto, os resultados obtidos indicam que o PFA pode se constituir em um candidato para terapia experimental de infeccoes pelos herpesvirus de bovinos in vivo.(AU)

Efeitos do Foscarnet sobre a infecção pelos herpesvírus bovino tipos 1 e 5 em coelhos / Effects of Foscarnet on the infection by bovine herpesviruses 1 and 5 in rabbits

O efeito antiviral do Foscarnet (PFA) foi demonstrado anteriormente em células de cultivo infectadas com três herpesvírus bovino (BoHV). No presente estudo, investigaram-se os seus efeitos sobre a infecção e doença causadas pelo BoHV-1 e BoHV-5 em coelhos infectados experimentalmente. Coelhos inoculados com o BoHV-5 pela via intraconjuntival (IC) e tratados com o PFA (100mg/kg/dia) a partir do dia 1 pós-inoculação (pi) apresentaram uma redução nos títulos de vírus excretados entre os dias 2 e 6 pi em comparação com o grupo não-tratado; essa diferença foi significativa no dia 3 pi [F(9,108) = 2,23; P<0,03)]. Os coelhos inoculados com o BoHV-5 e tratados com o PFA apresentaram uma redução significativa nos índices de morbidade e mortalidade (95,4 por cento [21/22] nos controles; 50 por cento [11/22] nos tratados; [P<0,0008]). Em coelhos inoculados com o BoHV-1 pela via IC, o tratamento com o PFA resultou em redução nos títulos de vírus excretados, entre os dias 1 e 4, e 6 e 7 pi. Esses animais apresentaram um período de incubação mais curto e um curso clínico mais longo comparando-se com o grupo controle não tratado (P<0,005 e P<0,04, respectivamente). O PFA também reduziu a freqüência e severidade da doença ocular nos coelhos inoculados com o BoHV-1. Esses resultados demonstram que o PFA possui atividade frente ao BoHV-1 e BoHV-5 in vivo e são promissores para o uso desse fármaco em terapias experimentais das infecções herpéticas dos animais domésticos.(AU)

The activity of Foscarnet (PFA) against three bovine herpesviruses (BoHVs) was previously demonstrated in cell culture. Herein we evaluated the effects of PFA on the infection and disease by BoHV-1 and BoHV-5 in a rabbit model. Rabbits inoculated with BoHV-5 in the conjunctival sac (IC) and treated with PFA (100 mg/kg/day) from day 1 to 17 post-inoculation (pi) shed less virus between days 2 and 6 pi comparing to untreated controls; this difference was significant at day 3 pi [F(9,108) = 2,23; P<0.03]. The morbidity and mortality rates of rabbits inoculated with BoHV-5 IC or intranasally (IN) were also significantly reduced in PFA-treated rabbits (50 percent; 11/22) comparing to untreated controls (95.4 percent; 21/22) (P<0.0008). In rabbits inoculated IC with BoHV-1, a reduction in virus shedding was observed in PFA-treated animals between days 1 and 4 pi; 6 and 7 pi. In addition, PFA-treated rabbits presented a longer incubation period and a shorter clinical course comparing to untreated controls (P<0.005 and P<0.04, respectively). The frequency and severity of ocular signs were also reduced in the PFA-treated group. These results demonstrate that PFA is effective against BoHV-1 and BoHV-5 in vivo and open the way towards its use in experimental therapy of herpetic infections in domestic animals.(AU)

Imunogenicidade de isolados de herpesvírus bovino 5 como candidatos à vacina / Immunogenicity of bovine herpesvirus 5 isolates as vaccine candidates

O herpesvírus bovino 5 (BoHV-5) é o agente da menigoencefalite herpética bovina. A doença neurológica, associada à infecção pelo BoHV-5, apresenta altas taxas de letalidade em bovinos jovens e está disseminada no Brasil. A prevenção das perdas causadas pela infecção pelo herpesvírus está baseada, principalmente, na imunização dos animais. Nesse sentido, foi delineada uma comparação entre isolados de BoHV-5, buscando selecionar o isolado mais antigênico para a formulação de vacinas. As formulações inativadas foram produzidas com os isolados ISO9898292, SV507, SV163, 1807 e EVI145 e administradas a cinco grupos de 10 ovelhas cada, que receberam duas doses vacinais por via intramuscular com intervalo de 21 dias. Foram realizadas coletas de sangue para análise de presença de anticorpos por soroneutralização e acompanhamento dos animais até o 63° dia após a primo-vacinação. Foram observados dois picos na curva de anticorpos, o primeiro no dia 14, após a vacinação, quando os títulos médios de anticorpos variaram entre 23,1 e 138,6. O segundo pico foi observado 14 dias após a revacinação, quando os títulos médios variaram entre 301,3 e 1017,5. No 42° dia após a revacinação, foi observada variação de título entre 82,4 e 305,9. A diferença entre as médias de títulos de anticorpos de cada grupo de animais sugere uma menor antigenicidade do isolado ISO9898292 em relação aos demais, demonstrando uma possível variação antigênica entre os isolados. Todos os isolados, com exceção do ISO9898292, mostraram-se imunogênicos para a indução de anticorpos.(AU)

Herpesvirus bovine 5 (BoHV-5) is the agent of bovine herpetic menigoencephalitis. The neurological disease associated with the infection is highly lethal in young cattle and it is widespread in Brazil. Control of the clinical signs caused by herpesviruses is based mainly on the immunization of cattle. A comparative study was performed among Brazilian BoHV-5 isolates to select the more antigenic virus. Inactivated vaccines were formulated using isolates ISO9898292, SV507, SV163, 1807 and EVI145 and administered to five groups of 10 sheep, each animal receiving two intramuscular doses with a 21 days interval. Blood collection for serology by virusneutralization were performed until the 63rd day after the first vaccination, two peaks in the curve of antibodies were observed, the first on day 14, ranged from 23.l to 138.6. The second peak was observed 14 days after the booster, and ranged from 301.3 to 1017.5. In the 42nd day after the booster, it was observed a titer variation from 82.4 to 305.9. The differences among antibody titers of each group of suggests a lower antigenicity of isolate ISO9898292 in comparison with the others, demonstrating a possible antigenic variation among the isolates. Thus, all isolates, with exception of ISO9898292, were immunogenic for the induction of neutralizing antibodies.(AU)

Identificação e diferenciação de herpesvírus bovino tipos 1 e 5 isolados de amostras clínicas no Centro-Sul do Brasil, Argentina e Uruguai (1987-2006) / Identification and differentiation of herpesvirus types 1 and 5 isolated from clinical samples in central-southern Brazil, Argentina and Uruguay (1987-2006)

Os herpesvírus bovino tipos 1 e 5 (BoHV-1; BoHV-5) são genética e antigenicamente muito semelhantes e por isso são indistinguíveis pela maioria dos testes diagnósticos. Como o BoHV-1 tem sido classicamente associado com doença respiratória e genital, os herpesvírus isolados dessas enfermidades têm sido provisoriamente - e às vezes definitivamente - identificados como BoHV-1. Da mesma forma, os casos de infecção neurológica por herpesvírus em bovinos têm sido atribuídos em sua totalidade ao BoHV-5. Este trabalho relata a identificação de 40 amostras de herpesvírus isoladas de diferentes casos clínicos na região Centro-Sul do Brasil, Argentina e Uruguai entre 1987 e 2006, pelo uso de um PCR capaz de diferenciar esses vírus. As amostras identificadas como BoHV-1 (n=16) foram isoladas de doença respiratória (n=3), balanopostite e/ou vulvovaginite (n=3), do sêmen de touros saudáveis (n=5) e de casos doença neurológica (n=5). As amostras virais identificadas como BoHV-5 (n=24) foram em sua maioria isoladas de doença neurológica (n=21), mas também do sêmen de touros saudáveis (n=2) e do baço de um bezerro com doença sistêmica (n=1). Esses resultados demonstram que tanto o BoHV-1 como o BoHV-5 não estão estritamente associados às suas respectivas síndromes clínicas e que podem estar freqüentemente envolvidos em casos clínicos classicamente atribuídos ao outro vírus. Esses achados também reforçam a necessidade de se identificar corretamente os isolados de herpesvírus para um melhor conhecimento da sua patogenia e epidemiologia.(AU)

Bovine herpesviruses types 1 and 5 (BoHV-1; BoHV-5) are genetically and antigenically closely related such they can not be distinguished by routine diagnostic tests. As BoHV-1 has been historically associated with respiratory and genital disease, herpesviruses isolated from these clinical syndromes have been tentatively - and sometimes definitively - diagnosed as BoHV-1. Likewise, cases of herpetic neurological infection in cattle have been generally attributed to BoHV-5. This study reports the identification of 40 herpesvirus isolates from different clinical specimens and syndromes in central-southern Brazil, Argentina and Uruguay (1987-2006) by the use of a PCR able to differentiate between BoHV-1 and BoHV-5. BoHV-1 isolates (n=16) were identified in cases of respiratory disease (n=3), vulvovaginitis and/or balanoposthitis (n=3), in semen of healthy bulls (n=5) and in cases of neurological disease (n=5). Viruses identified as BoHV-5 (n=24) were isolated predominantly from cases of neurological disease (n=21), but also from semen of healthy bulls (n=2) and from a spleen of a calf with systemic disease (n=1). These results show that both BoHV-1 and BoHV-5 are not strictly associated with their respective diseases; yet are frequently involved in clinical conditions otherwise attributed to the other virus. These findings also reinforce the need of correctly identifying the herpesvirus isolates as to better understand their pathogenesis and epidemiology.(AU)

Epidemiologia, sinais clínicos e distribuição das lesões encefálicas em bovinos afetados por meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 / Epidemiology, clinical signs and distribution of the encephalic lesions in cattle affected by meningoencephalitis caused by bovine herpesvirus-5

São descritos sete surtos e um caso isolado de meningoencefalite por herpesvírus bovino-5 (BoHV-5) em bovinos no Rio Grande do Sul entre 2002 e 2004. Foram afetados bovinos de 1-18 meses, de diversas raças e ambos os sexos. A maior freqüência foi observada em bovinos recém-desmamados e submetidos a outros fatores de estresse. Nesses surtos, de uma população total sob risco de 1.359 bovinos, 54 foram afetados, quatro se recuperaram e 50 morreram espontaneamente ou foram submetidos à eutanásia quando moribundos. Os índices gerais de morbidade, mortalidade e letalidade foram, respectivamente, de 3,97 por cento, 3,67 por cento e 92,59 por cento. A evolução clínica variou de 3-10 dias e os sinais eram caracterizados por depressão, corrimento nasal ou ocular, ranger de dentes, andar em círculos, cegueira, febre, nistagmo, tremores, anorexia, disfagia, sialorréia, incoordenação, pressão da cabeça contra objetos, pêlos arrepiados, taquicardia, taquipnéia, dor abdominal, melena, quedas, decúbito, opistótono, convulsões e movimentos de pedalagem. Dezenove bezerros foram necropsiados. Achados de necropsia foram caracterizados por hiperemia das leptomeninges, tumefação das porções rostrais do telencéfalo, com achatamento das circunvoluções dos lobos frontais; nessas áreas havia focos marrom-amarelados e amolecidos (malacia). Nos casos de evolução clínica mais longa era observada acentuada tumefação, amolecimento e extensas áreas de hemorragia nos lobos frontais telencefálicos. Microscopicamente, todos os bovinos afetados apresentaram meningoencefalite não-supurativa e necrosante, que variou quanto à localização e intensidade nos 19 casos examinados e nas seções de encéfalo de um mesmo caso.(AU)

Seven outbreaks and an isolated case of meningoencephalitis caused by bovine herpesvirus-5 (BoHV-5) in cattle in Rio Grande do Sul, Brazil, occurring in 2002-2004, are described. From a total population at risk of 1,359 cattle, 54 1-18-month-old calves from both sexes and several breeds were affected and 50 died spontaneously or were euthanatized while moribund. The highest frequency of cases was in recently weaned calves or calves submitted to other stressing factors. General rates of morbidity, mortality and lethality were respectively 3.97, 3.67 and 92.59%. Clinical courses varied from 3-10 days and included depression, nasal and ocular discharge, grinding of teeth, circling, blindness, fever, nistagmus, trembling, anorexia, dysphagia, drooling, incoordination, head pressing, rough hair coat, tachycardia, tachypnea, abdominal pain, melena, falls, recumbency, opisthotonus, convulsions and paddling. Nineteen calves were necropsied. Necropsy findings were characterized by hyperemia of leptomeninges, swollen rostral portions of the telencephalon, and flattening of frontal lobes gyri; frequently in these frontal areas there were segmental brown-yellow discoloration and softening (malacia) of the cortex. In cases with more protracted clinical courses there were extensive swelling, softening and hemorrhaging of the telencephalic frontal lobes. Microscopically, all affected cattle had a necrotizing non-suppurative meningoencephalitis with variable distribution among the 19 cases and among the various telencephalic regions of the same case. The severity of these changes were more marked, in decreasing order of intensity, in the telencephalic frontal cortex, basal ganglia (nuclei), thalamus, brain stem, parietal telencephalic cortex, occipital telencephalic cortex and cerebellum. Perivascular inflammatory infiltrate consisted predominantly of lymphocytes, plasm cells, and less frequently of neutrophils. Additional microscopic findings included variable...(AU)

MENINGOENCEFALITE NECROSANTE EM BOVINOS CAUSADA POR HERPESVÍRUS BOVINO NO ESTADO DE MATO GROSSO, BRASIL

The epidemiological, clinical, pathological and microbiological aspects of 13 cases of necrotizing meningo-encephalitis associated to bovine herpesvirus are described. The disease is described in 12 cattle herds from March 1999 to August 2000 at 11 counties of the State of Mato Grosso, Brazil. The outbreaks were described in cattle raised on farms in which, mostly Zebu breeds were involved. The average age of the cattle affected was 24 months, ranging from two to 72 months old. Neurological manifestations were the main clinical signs noticed. The animals were separated from the herd. The animals showed profuse salivation, serous nasal and ocular discharge, profound depression, incoordination, walking or running in circles, blindness, diminution of tongue tonus, trembling and opistotonus. Most of the cases had no macroscopic alterations. Some cases had diffuse encephalic congestion, multifocal submeningeal hemorragics, flattened cerebral circumvolutions and focal discoloration of the cortex. The main microscopic lesions in the 12 cases were necrotizing meningo-encephalitis with eosinophilic intranuclear inclusion bodies in astrocytes, and cortical malacia. Virus was isolated from three cases submitted from a total of seven examined. One of the cases with virus isolation at the histophatology examination yielded a diagnosis of polioencephalomalacia.

Achados epidemiológicos, clínicos, patológicos e microbiológicos de 13 casos de meningoencefalite necrosante pelo Herpesvírus Bovino (BHV), afetando 12 rebanhos bovinos ocorridos no período de março de 1999 a agosto de 2000 em 11 municípios do Estado de Mato Grosso são descritos. Onze surtos ocorreram em sistemas de criação extensiva, afetando com maior freqüência animais da raça nelore, e idade média de 24 meses com uma variação de dois a 72 meses. Os principais sinais clínicos descritos foram as alterações neurológicas, sendo relatados salivação profusa, descarga nasal e ocular serosa, depressão profunda, incoordenação, andar a esmo ou em círculo, cegueira, diminuição do tonus lingual, decúbito lateral com movimentos de pedalagem, opistótono e morte. Ausência de alterações foi o relato mais comum durante a necropsia. Em alguns casos, observou-se congestão encefálica difusa, hemorragias submeningeanas multifocais, achatamento de circunvoluções cerebrais e áreas focais de malacias. Os principais achados microscópicos foram meningoencefalite com corpúsculos de inclusão eosinofílicos, intranucleares em astrócitos. As áreas de malacia afetavam principalmente o córtex cerebral. Foi realizado isolamento e caracterização viral em três de um total de sete amostras encaminhadas Em um dos casos, dos que houve isolamento viral, o diagnóstico histopatológico foi de polioencefalomalacia não se observando meningoencefalite e corpúsculos de inclusão.

Meningoencefalite necrosante em bovinos causada por herpesvírus bovino no estado de mato grosso, brasil

The epidemiological, clinical, pathological and microbiological aspects of 13 cases of necrotizing meningo-encephalitis associated to bovine herpesvirus are described. The disease is described in 12 cattle herds from March 1999 to August 2000 at 11 counties of the State of Mato Grosso, Brazil. The outbreaks were described in cattle raised on farms in which, mostly Zebu breeds were involved. The average age of the cattle affected was 24 months, ranging from two to 72 months old. Neurological manifestations were the main clinical signs noticed. The animals were separated from the herd. The animals showed profuse salivation, serous nasal and ocular discharge, profound depression, incoordination, walking or running in circles, blindness, diminution of tongue tonus, trembling and opistotonus. Most of the cases had no macroscopic alterations. Some cases had diffuse encephalic congestion, multifocal submeningeal hemorragics, flattened cerebral circumvolutions and focal discoloration of the cortex. The main microscopic lesions in the 12 cases were necrotizing meningo-encephalitis with eosinophilic intranuclear inclusion bodies in astrocytes, and cortical malacia. Virus was isolated from three cases submitted from a total of seven examined. One of the cases with virus isolation at the histophatology examination yielded a diagnosis of polioencephalomalacia.

Achados epidemiológicos, clínicos, patológicos e microbiológicos de 13 casos de meningoencefalite necrosante pelo Herpesvírus Bovino (BHV), afetando 12 rebanhos bovinos ocorridos no período de março de 1999 a agosto de 2000 em 11 municípios do Estado de Mato Grosso são descritos. Onze surtos ocorreram em sistemas de criação extensiva, afetando com maior freqüência animais da raça nelore, e idade média de 24 meses com uma variação de dois a 72 meses. Os principais sinais clínicos descritos foram as alterações neurológicas, sendo relatados salivação profusa, descarga nasal e ocular serosa, depressão profunda, incoordenação, andar a esmo ou em círculo, cegueira, diminuição do tonus lingual, decúbito lateral com movimentos de pedalagem, opistótono e morte. Ausência de alterações foi o relato mais comum durante a necropsia. Em alguns casos, observou-se congestão encefálica difusa, hemorragias submeningeanas multifocais, achatamento de circunvoluções cerebrais e áreas focais de malacias. Os principais achados microscópicos foram meningoencefalite com corpúsculos de inclusão eosinofílicos, intranucleares em astrócitos. As áreas de malacia afetavam principalmente o córtex cerebral. Foi realizado isolamento e caracterização viral em três de um total de sete amostras encaminhadas Em um dos casos, dos que houve isolamento viral, o diagnóstico histopatológico foi de polioencefalomalacia não se observando meningoencefalite e corpúsculos de inclusão.