Serological frequency of Leptospira spp. in buffaloes (Bubalus bubalis) in Paraná state, Brazil / Frequência sorológica de Leptospira spp. em búfalos (Bubalus bubalis) no estado do Paraná, Brasil

Leptospirosis is a zoonosis that can infect buffaloes and other mammalians, and it's caused by Gram-negative bacteria of the genus Leptospira spp. The infection occurs through contact with urine or a contaminated environment with the mucous membranes of the animals, and the disease has two phases: leptospiremia and leptospiruria. The objective of this study was to determine the frequency of leptospirosis in buffaloes in the state of Paraná, Brazil, as well as the main serovars present in this area. A total of 276 blood samples were collected from buffaloes from 18 properties located in different cities and mesoregions of Paraná state. A microscopic agglutination test (MAT) was performed to detect the presence of anti-Leptospira spp. antibodies and to identify its serovars. The prevalence was 77.17% (213/276) of buffaloes seropositive for at least one serovar. The most frequent serovar was Icterohaemorrhagiae, followed by the Pomona serovar and serovar Hardjo. This study seems to be the first to determine the frequency of buffaloes with leptospirosis in the state of Paraná. Prevention and control measures are important to control the disease in herds.

Leptospirose é uma zoonose que infecta búfalos e outros mamíferos e é causada por bactérias Gram-negativas do gênero Leptospira spp. A infecção ocorre por meio do contato com a urina ou ambiente contaminado com as membranas mucosas dos animais e a doença possui duas fases: leptospiremia e leptospirúria. O objetivo deste trabalho foi determinar a frequência da leptospirose em bubalinos provenientes do estado do Paraná, assim como determinar os principais sorovares presentes no estado. Um total de 276 amostras de sangue foram coletados de búfalos provenientes de 18 propriedades localizadas em 14 municípios de diferentes mesorregiões do estado do Paraná. O teste de soroaglutinação microscópica (SAM) foi realizado para detecção da presença de anticorpos anti-Leptospira spp. e identificação dos respectivos sorovares. A prevalência de búfalos soropositivos para ao menos um sorovar foi de 77,17% (213/276). O sorovar mais frequente identificado nestes búfalos foi o Icterohaemorrhagiae, seguido pelos sorovares Pomona e Hardjo. Este é o primeiro estudo a determinar a frequência de búfalos com leptospirose no estado do Paraná. Medidas de controle e prevenção são importantes para o controle do agente nos rebanhos.

IINVESTIGAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI LEPTOSPIRA SPP. E LEPTOSPIRÚRIA EM GATOS ATENDIDOS EM HOSPITAL DE ENSINO NO SUL DO BRASIL

A leptospirose é uma zoonose bacteriana que afeta seres humanos, animais de companhia, de produção e silvestres em todo mundo. A transmissão da doença ocorre a partir do contato direto ou indireto com urina, água ou tecidos infectados pela bactéria do gênero Leptospira. Os sinais clínicos podem variar conforme a sorovariedade e o hospedeiro envolvido, além da localização geográfica. Entretanto, alguns animais podem ser assintomáticos, ou seja, não manifestam a doença clínica e eliminam as espiroquetas através da urina. Atualmente, sabe-se que os gatos podem se infectar e atuarem como reservatórios para a doença. O presente estudo teve como objetivo investigar anticorpos anti Leptospira spp. e leptospirúria em gatos atendidos em hospital de ensino no sul do Brasil. Foram incluídos 76 gatos, no período de outubro de 2020 a janeiro de 2021, dos quais, 33 apresentavam sinais clínicos associados à leptospirose na espécie, incluindo vômito, febre, emagrecimento, poliúria e polidpsia; e 43 animais assintomáticos. Uma anamnese específica sobre fatores de risco foi realizada, além de avaliação física e exames complementares, que constaram de hemograma, bioquímica sérica, hemogasometria, urinálise e ultrassonografia abdominal. Para diagnóstico etiológico, foi realizado o teste de soroaglutinação microscópica (SAM) no soro, e PCR em tempo real na urina. A ocorrência de anticorpos anti- Leptospira spp. foi de 9,2%, sendo encontradas titulações de 1:200 para as sorovariedades: butembo, icterohaemorrhagiae, pomona e tarassovi. A detecção do gene pomona nas amostras de urina ocorreu em um paciente, demostrando uma frequência de 1,3%. Em suma, os fatores de risco, dados clínicos e de exames laboratoriais, não apresentaram associação significativa com os resultados do diagnóstico sorológico e molecular. Foi possível, ainda, identificar o sorovar castellonis, o qual ainda não havia sido descrito na literatura em gatos.

Leptospirosis is a bacterial zoonosis that affects humans, pets, farm animals, and wild animals worldwide. The transmission of the disease occurs from direct or indirect contact with urine, water, or tissues infected by the bacteria of the Leptospira genus. Clinical signs may vary depending on the serovar and the host involved, besides to the geographic location. However, some animals can be asymptomatic, which means that they do not manifest the clinical disease and eliminate spirochetes through urine. Currently, it is known that felines can become infected and act as reservoirs for the disease. The present study aims to investigate antibodies anti- Leptospira spp. and leptospiruria in cats treated at the teaching hospital in southern Brazil. Were included 76 cats from October 2020 to January 2021, 33 of them had clinical signs associated with leptospirosis infection in the species; including vomiting, fever, weight loss, polyuria, polydpsia; in addition to 43 asymptomatic animals. A specific anamnesis based on risk factors was realized, as well as physical evaluation and complementary exams, which included blood count, serum biochemistry, blood gas analysis, urinalysis, and abdominal ultrasound. For etiological diagnosis, the microscopic serum agglutination test (SAM) was performed in the serum and real-time PCR in the urine. The occurrence of antibodies anti - Leptospira spp. in serum samples it was 9.2%, with titles of 1: 200 being found for serovarieties: butembo, icterohaemorrhagiae, pomona and tarassovi. The detection of Leptospira spp. in urine through real-time PCR obtained a positive sample for the pomona gene, showing a prevalence of 1.3%. To summarize, the risk factors, clinical data and laboratory tests did not show a significant association with the results of the serological and molecular diagnosis. It was also possible to identify serovar castellonis, which had not been previously described in cats.

Estudio serológico de la infección por Leptospira spp. en gatos / Serological study of Leptospira Spp. infection in cats / Estudo soroepidemiológico da infecção por Leptospira spp. em gatos

La leptospira se destaca dentro de las zoonosis de mayor importancia debido a su amplia distribución geográfica y por tener su ocurrencia favorecida principalmente en localidades con climas tropicales y subtropicales, con altos índices pluviométricos y altas temperaturas. En felinos la leptospirosis es de ocurrencia rara, no se presenta especificidad por reacción con diferentes serotipos de Leptospiraspp. Son considerados más resistentes a la infección. Aunque ya fue comprobada experimentalmente la ocurrencia de leptospiruria en gatos inoculados con la bacteria sin manifestación de síntomas. El objetivo del presente estudio fue la búsqueda de anticuerpos frente a diferentes serovares de leptospiras por la prueba de seroaglutinación microscópica en sueros de 155 felinos domésticos. Ninguna de las muestras analizadas revelo seropositividad para los 13 serovares analizados.(AU)

Leptospirosis is pointed out between the most important zoonosis due to its wide geographic distribution and for having its ocurrence favored in tropical and subtropical climates, with present high temperatures and rain indexes. In cats, leptospirosis is unsual, not present specificity because they react to different types of Leptospira spp. They are considered more resistents to the infection. However, was proved the occurence of Leptospira spp. in the urine of cats experimentally inoculated with the bactéria with no clinical signs. The aim of this study was the research of antibodies face to different leptospira sorovars by the Agglutination Test in blood serum of 155 domestic cats. None of the evalueted samples showed serum positivety to the 13 tested sorovars.(AU)

A leptospirose destaca-se dentre as zoonoses de maior importância devido à sua ampla distribuição geográfica e por ter sua ocorrência favorecida principalmente em locais com climas tropicais e subtropicais, com altas temperaturas e índices pluviométricos.  Em felinos, a leptospirose é de ocorrência rara, não apresentando especificidade por reagirem com diferentes sorotipos de Leptospira spp.. São considerados mais resistentes à infecção. Porém, já foi comprovada experimentalmente a ocorrência de leptospirúria em gatos inoculados com a bactéria sem que manifestação de sintomas. O objetivo do presente estudo foi a pesquisa de anticorpos frente a diferentes sorovares de leptospiras pela prova de Soroaglutinação Microscópica em soros de felinos atendidos em dois Hospitais Veterinários da UNESP (Botucatu e Araçatuba). Nenhuma das amostras avaliadas revelou soropositividade para os 13 sorovares avaliados.(AU)

DESENVOLVIMENTO DE ESTRATÉGIAS DE CULTURA PARA ISOLAMENTO DE LEPTOSPIRAS FASTIDIOSAS E USO DE BIOINFORMÁTICA PARA DESCOBERTA DE NOVOS ALVOS VACINAIS E DROGÁVEIS PARA CONTROLE DA LEPTOSPIROSE ANIMAL

A leptospirose, causada por espiroquetas do gênero Leptospira, é uma zoonose globalmente disseminada, negligenciada e emergente. O isolamento de leptospiras é o primeiro passo para sua caracterização molecular e genotipagem, no entanto, para os sorovares mais fastidiosos, a cultura e isolamento são controversos e laboriosos. Com relação ao controle e tratamento da leptospirose, muitos estudos são realizados, mas ainda não existe uma vacina eficaz contra todas as espécies patogênicas ou variedade de antimicrobianos com atuação sobre o quadro de leptospirúria. Assim o presente estudo visou primeiramente desenvolver estratégias de cultura e isolamento para as leptospiras fastidiosas e utilizar métodos rápidos de diagnóstico molecular para caracterização e tipificação dos sorovares. Posteriormente, a partir do isolamento de novas estirpes, o sequenciamento genômico foi realizado com a finalidade de obtenção de dados de genômica comparativa com outras estirpes disponíveis no GenBank para uma busca in silico de alvos drogáveis e vacinais. No primeiro estudo, três formulações de meios de cultura líquidos básicos foram produzidas para isolar e manter leptospiras. Em cada formulação (A, B e C) foram adicionados diferentes suplementos para ajudar no crescimento de leptospiras fastidiosas: piruvato de sódio, enzima superóxido dismutase e soro fetal bovino. Durante o período aproximado de 55 dias, adotou-se estratégias de troca entre as três formulações de acordo com a observação em microscopia de campo escuro e ao final desse período houve sucesso no isolamento de três estirpes do sorovar Hardjo (dois genotipos, Hardjobovis e Hardjoprajitno) com adaptação total ao meio de cultura. Posteriormente, estas culturas foram avaliadas com uso da microscopia eletrônica e notou-se diferenças na morfologia e viabilidade de acordo com a composição do meio. No segundo estudo, os genomas desses dois genotipos foram sequenciados, montados e depositados no GenBank. A partir desses dados e também de outros genomas de outras espécies de Leptospira foi possível realizar uma abordagem de com base na vacinologia reversa, genômica comparativa e de docking molecular com o uso de ferramentas de bioinformática. Para os alvos vacinais, os resultados com base nas características da probabilidade de adesão, TMHMM e densidade de epítopos, sugerem que cinco alvos são bons candidatos e podem ser testados rapidamente em novas formulações de vacinas e posteriormente testados in vivo. Para a etapa de docking molecular, oito proteínas preditas como citoplasmáticas e identificadas como essenciais para a sobrevivência de leptospiras foram consideradas bons alvos para novos medicamentos. Destacando a proteína de divisão celular FtsZ, que foi o alvo identificado com as melhores características de ligação e, por meio de uma triagem virtual, o ZINC04259719 foi identificado como a melhor molécula para ligar a essa proteína, a fim de inibir sua função eliminando o patógeno. A vacinologia reversa e o docking molecular são poderosas ferramentas de bioinformáticas que possibilitam uma busca rápida e sem procedimentos laboriosos, por alvos proteicos específicos que possam ser candidatos a uma nova vacina ou medicamento no controle da leptospirose.

Leptospirosis, caused by spirochetes of the genus Leptospira, is a globally widespread, neglected and emerging zoonosis. The leptospires isolation is the first step towards its molecular characterization and genotyping, however, for the most fastidious serovars, the culture and isolation are controversial and laborious. Regarding the control and treatment of leptospirosis, many studies have been carried out, but there is not yet an efficient vaccine against all pathogenic species or more variety of antimicrobials acting on leptospiruria. Thus, the present study aimed primarily to develop culture and isolation strategies for fastidious leptospires and using rapid molecular diagnostic methods for characterization and typing of serovars. Subsequently, from the isolation of new strains, genomic sequencing was carried out in order to obtain comparative genomic data with other strains available at GenBank for an in silico search for drug and vaccine targets. In the first study, three formulations of basic liquid culture media were produced to isolate and maintain leptospires. In each formulation (A, B and C) different supplements were added to help the growth of fastidious leptospires: sodium pyruvate, superoxide dismutase enzyme and fetal bovine serum. During the approximate period of 55 days, exchange strategies were adopted between the three formulations according to the observation in dark field microscopy and at the end of this period, there was success in the isolation of three strains of serovar Hardjo (two genotypes, Hardjobovis and Hardjoprajitno) with total adaptation to the culture medium. Subsequently, these culture was evaluated through electron microscopy and differences in morphology and viability were noted according to the composition of the medium. In the second study, the genomes of these two genotypes were sequenced, assembled and deposited on GenBank. From these data and also from other genomes of Leptospira species, it was possible to carry out an approach based on reverse vaccinology, genomic comparative and molecular docking with the use of bioinformatics tools. For vaccine targets, results based on characteristics of probability of adherence, TMHMM and epitope density, suggest that five targets are good candidates and can be tested quickly in new vaccine formulations and subsequently tested in vivo. For the molecular docking step, eight proteins predicted as cytoplasmic and considered essential for the survival of leptospires were considered good targets for new drugs. Highlighting the cell division protein FtsZ, which was the target identified with the best binding characteristics and through a virtual screening the ZINC04259719 was identified as the best molecule for linked to this protein in order to inhibit its function and consequently eliminating the microorganism. Reverse vaccinology and molecular docking are powerful bioinformatics tools that enable a quick discovery, without laborious procedures, for specific protein targets that may be candidates for a new vaccine or therapeutic target to leptospirosis control.

Leptospira spp. em gatos: revisão / Leptospira spp. in cats: review / Leptospira spp. en gatos: revisión

A leptospirose é uma doença ainda pouco elucidada em gatos. São raros os dados sobre a doença clínica; no entanto, os gatos podem produzir resposta com anticorpos específicos. Estudos sorológicos demonstraram prevalência de 4,1 a 33,3%, com descrição de diversos sorovares. Estudos mais recentes demonstraram ainda uma possível relação da infecção com lesões renais agudas ou crônicas. Considerando que a doença renal é de ocorrência comum nos gatos, a leptospirose poderia ser uma causa subdiagnosticada na espécie. Os gatos podem apresentar leptospirúria e poderiam ser considerados reservatórios da bactéria. Entretanto, o risco exato de contaminação de outros mamíferos com urina de gatos ainda é desconhecido. Pesquisas futuras relacionadas à infecção e ao tratamento da espécie serão de grande valia para o entendimento da sua epidemiologia.

The leptospirosis is a disease not yet clearly understood in cats. Cats can produce response with specific antibodies, but data on the clinical disease is lacking. Serological studies show a prevalence of 4.1% to 33.3% of leptospirosis in cats, and several serovars have been described. Recently studies suggest a possible relationship between infection and chronic and acute kidney lesion. Considering that kidney disease is a common occurrence in cats, it's possible that leptospirosis could be an underdiagnosed cause of renal disease in this species. Cats can present leptospiruria, and could be reservoirs for leptospira. The exact risk of another mammals' contamination by the cats' urine is yet unknown. Future studies focused on disease and treatment of leptospirosis in cats could greatly improve our understanding of the epidemiology of leptospirosis in cats.

La leptospirosis es una enfermedad aún poco dilucidada en gatos. Son raros los datos sobre la enfermedad clínica; sin embargo, los gatos pueden producir respuesta con formación de anticuerpos específicos. Estudios serológicos con diversos serotipos demostraron una prevalencia del 4,1 ai 33,3%. En estudios más recientes se ha demostrado una posible relación entre la infección y lesiones renales agudas o crónicas. Considerando que la enfermedad renal es de presentación común en los gatos, la leptospirosis podría ser una enfermedad subdiagnosticada en esta especie. Los gatos pueden presentar leptospiruria y se podría considerarlos como portadores de la bacteria. Sin embargo, el riesgo exacto de contaminación de otros mamíferos con orina de gatos es aún desconocido. Las investigaciones futuras relacionadas con la infección y el tratamiento en felinos serán de gran valor para la comprensión de su epidemiología.

Leptospira spp. em gatos: revisão / Leptospira spp. in cats: review / Leptospira spp. en gatos: revisión

A leptospirose é uma doença ainda pouco elucidada em gatos. São raros os dados sobre a doença clínica; no entanto, os gatos podem produzir resposta com anticorpos específicos. Estudos sorológicos demonstraram prevalência de 4,1 a 33,3%, com descrição de diversos sorovares. Estudos mais recentes demonstraram ainda uma possível relação da infecção com lesões renais agudas ou crônicas. Considerando que a doença renal é de ocorrência comum nos gatos, a leptospirose poderia ser uma causa subdiagnosticada na espécie. Os gatos podem apresentar leptospirúria e poderiam ser considerados reservatórios da bactéria. Entretanto, o risco exato de contaminação de outros mamíferos com urina de gatos ainda é desconhecido. Pesquisas futuras relacionadas à infecção e ao tratamento da espécie serão de grande valia para o entendimento da sua epidemiologia.(AU)

The leptospirosis is a disease not yet clearly understood in cats. Cats can produce response with specific antibodies, but data on the clinical disease is lacking. Serological studies show a prevalence of 4.1% to 33.3% of leptospirosis in cats, and several serovars have been described. Recently studies suggest a possible relationship between infection and chronic and acute kidney lesion. Considering that kidney disease is a common occurrence in cats, it's possible that leptospirosis could be an underdiagnosed cause of renal disease in this species. Cats can present leptospiruria, and could be reservoirs for leptospira. The exact risk of another mammals' contamination by the cats' urine is yet unknown. Future studies focused on disease and treatment of leptospirosis in cats could greatly improve our understanding of the epidemiology of leptospirosis in cats.(AU)

La leptospirosis es una enfermedad aún poco dilucidada en gatos. Son raros los datos sobre la enfermedad clínica; sin embargo, los gatos pueden producir respuesta con formación de anticuerpos específicos. Estudios serológicos con diversos serotipos demostraron una prevalencia del 4,1 ai 33,3%. En estudios más recientes se ha demostrado una posible relación entre la infección y lesiones renales agudas o crónicas. Considerando que la enfermedad renal es de presentación común en los gatos, la leptospirosis podría ser una enfermedad subdiagnosticada en esta especie. Los gatos pueden presentar leptospiruria y se podría considerarlos como portadores de la bacteria. Sin embargo, el riesgo exacto de contaminación de otros mamíferos con orina de gatos es aún desconocido. Las investigaciones futuras relacionadas con la infección y el tratamiento en felinos serán de gran valor para la comprensión de su epidemiología.(AU)

Leptospira spp. em Gatos

A presente dissertação está dividida em três capítulos. O primeiro é composto de uma revisão bibliográfica que apresenta ao leitor a problemática do gato como portador de leptospiras e sua possível influência na manutenção ambiental do agente. É discutida também a possibilidade de a mesma ser causadora de lesões renais na espécie. O segundo capítulo apresenta 3 métodos para a preservação de Leptospira spp. em urina de gato para uma eficiente extração de DNA e amplificação por PCR. E por fim, o terceiro capítulo apresenta estudo realizado com gatos expostos a fatores associados à infecção por leptospiras,provenientes da região metropolitana de Curitiba/PR. Foi objetivo desse estudo detectar leptospirúria por reação em cadeia da polimerase (PCR) e anticorpos contra L. interrogans com o uso de soroaglutinação microscópica (SAM). Como conclusão do estudo temos que os mesmos estão suscetíveis a infecção por Leptospira spp. e podem apresentar leptospirúria.

This study was divided into three distinct chapters. The first one is a bibliographic review that presents the cat as a leptospires carrier to the reader and its influence on the environmental maintenance of the agent. The possibility of renal lesions in the specie caused by leptospiral infection is also been discussed. The second chapter introduces three methods to preserve Leptospira spp. in cat urine for efficient DNA extraction and PCR amplification. Finally, the third chapter presents a study with cats exposed to infection associated factors in the metropolitan region of Curitiba/PR. The main goal in this study was to detect leptospiruria by polymerase chain reaction (PCR) and antibodies against L. interrogans by using microscopic agglutination test (MAT). As a result, we can conclude that cats are susceptible to be contaminated by Leptospira spp. and may show leptospiruria.

Exposure to Leptospira spp. in sick dogs, shelter dogs and dogs from an endemic area: points to consider

Background: Leptospirosis is a zoonosis caused by pathogenic spirochetes of the genus Leptospira. Rodents play an important role as maintenance hosts, but dogs can be significant reservoirs for human infection in tropical areas as well as the source of disease outbreaks. Manifestations of disease in dogs vary from asymptomatic carriers to severe clinical signs and death. This study compared leptospiral exposure in dogs suspected to have leptospirosis and presented at a Veterinary Teaching Hospital (VTH), dogs from a Control Center of Zoonoses (CCZ) and dogs from a neighborhood with a high prevalence of human leptospirosis. Also, clinical signs, laboratory abnormalities and environmental risk factors associated with the infection were investigated at a population level and in a case-by-case approach. Materials, Methods & Results: Between May 2007 and February 2009, 253 dogs from Porto Alegre, Brazil, were enrolled in the study. Three populations were evaluated including dogs from and endemic area to human leptospirosis, dogs from a CCZ and dogs presented to a VTH. All dogs' owners from the endemic area and from the VTH answered a questionnaire including dog's information such as breed, age, vaccination status, environment, contact with other domestic animals, presence of rodents in the household, clinical signs, medications and if owners had leptospirosis diagnosed in the previous two years. The investigation of the exposure to pathogenic leptospires was based on serology using the Microscopic Agglutination Test (MAT), and polymerase chain reaction (PCR) using two sets of primers to detect pathogenic leptospiras in blood (leptospiremia) and urine (leptospiruria). Positive results were found in the three populations. The most prevalent serovars were Canicola, Icterohaemorrhagiae and Copenhageni, independent of the dog health condition. Leptospiruria occurred in 20.0%, 8.4% and 30.3% of CCZ, endemic area and VTH dogs, respectively. There was no association between seropositivity and leptospiremia or leptospiruria. The presence of rats in the environment was associated with leptospiruria (P = 0.02). Complete blood count (CBC), serum biochemistry (alanine aminotrasferase and creatinine) and urinalysis were also performed. Although increased serum creatinine (P = 0.009), jaundice (P = 0.004) and glucosuria (P = 0.04) were associated with leptospiruria in the VTH dogs, the absence of clinical signs or clinicopathologic alterations did not exclude the infection, as observed in several dogs from CCZ and from the endemic area. Discussion: As expected, the VTH showed the relatively highest percentage of positive samples (serology, leptospiruria and leptospiremia), since these were clinical cases. However, no statistical differences were found in the percentage of leptospiremia between VTH and the dogs from endemic area, neither in the percentage of leptospiruria or serology between VTH and dogs from CCZ. The most common serovars identified by MAT were consistent with the findings of other studies involving dogs in Southern Brazil. If creatinine is elevated, particularly if jaundice is present, the likelihood of leptospiral infection must be considered; however, normal findings for these parameters do not rule out this diagnosis. Most of the dogs vaccinated the year before showed leptospiremia and/or leptospiruria, suggesting infection with a serovar not included in the vaccine, vaccine inefficacy or a wrong dog vaccination schedule. Subclinical infection is a problem when considering animals with leptospiruria that will likely remain untreated. The control of the environmental dissemination of pathogenic Leptospira spp. in urban settings should include the identification of asymptomatic dogs.

Investigação sobre a Soroprevalência, Leptospiremia e Leptospiruria em cães contactantes de pessoas acometidas de Leptospirose

A presente dissertação apresenta uma pesquisa sobre a eliminação urinária de leptospiras por cães que tiveram contato com pessoas que foram acometidas por leptospirose. Sabe-se que cães podem atuar como reservatório para esta importante zoonose disseminada pelo mundo, porém considera-se que seu papel como portadores assintomáticos seja subestimado. Desta forma, o objetivo deste estudo foi investigar uma possível relação entre a presença de seres humanos com leptospirose e de cães portadores assintomáticos que possam servir como fonte de infecção. Amostras de sangue e urina foram coletadas de cães contactantes de pessoas com leptospirose para realização de exames de PCR e sorologia. Nenhum resultado foi positivo nos exames realizados, o que leva a crer que os cães testados não serviram, naquele momento, como fonte de infecção de leptospirose para seus proprietários.

This thesis presents a study about urinary shedding of leptospires by dogs who had contact with people affected by leptospirosis. Dogs may play like a reservoir to this important zoonosis widespread throughout the world, but is considered that their asymptomatic carrier role be underestimated. Therefore, the aim of this study was to investigate a possible relation between humans with leptospirosis and asymptomatic carrier dogs who can be an infection source. Blood and urine samples were collected from contactant dogs of people with leptospirosis to performing PCR and serology. None positive result was found, what suggests that the dogs, in that moment, didnt serve like source of infection of leptospirosis to their owners.

Study of urinary shedding and identification of chronic carriers of pathogenic leptospires in dogs kept in public or private animal shelters of Metropolitan São Paulo area

A leptospirose é uma doença zoonótica de importância global causada por espécies patogênicas do gênero Leptospira. Cães são hospedeiros de manutenção de leptospiras patogênicas e podem atuar como potenciais fontes de infecção da doença. A identificação de tais indivíduos e a caracterização de leptospiras envolvidas na infecção crônica podem ajudar a compreender o papel dos cães na epidemiologia da doença em ambientes rurais e urbanos. O presente trabalho descreve a identificação de cães errantes e mantidos em abrigos coletivos com eliminação assintomática de leptospiras patogênicas, além de descrever também a caracterização das diferentes estirpes obtidas de cães cronicamente infectados. Amostras de sangue e urina foram coletadas de 3 populações distintas: (I) 92 cães mantidos em um abrigo coletivo localizado dentro da Universidade de São Paulo; (II) sete cães errantes capturados dentro do campus da Universidade de São Paulo; e (III) 24 cães mantidos em um abrigo coletivo localizado na cidade de Mogi das Cruzes. Os cães identificados por técnicas moleculares (PCR) como leptospirúricos foram prospectivamente avaliados para confirmar a persistência da eliminação bacteriana e para obter isolamento da cepa infectante e sua subsequente caracterização. A amplificação de fragmentos dos genes 16S rRNA e lipl32 permitiu a identificação de 10 cães leptospirúricos na população I. Dois dos 10 cães haviam sido recentemente admitidos no local, e outro cão foi adotado logo após apresentar grandes quantidades de leptospiras na urina. A avaliação prospectiva dos animais leptospirúricos permitiu a caracterização da infecção crônica e assintomática em dois cães, o que possibilitou o isolamento de leptospiras de ambos os animais. As cepas foram tipificadas pelas técnicas de MLST e sorogrupagem, caracterizando duas cepas distintas, sendo elas L. interrogans sorogrupo Canicola e L. santarosai sorogrupo Sejroe. Dois cães leptospirúricos foram identificados na população II pela amplificação por PCR dos genes 16S rRNA e secY; um deles apresentou eliminação persistente de L. interrogans, no entanto não foi possível o isolamento do patógeno. O outro cão leptospirúrico não pôde ser reavaliado, entretanto a análise filogenética permitiu identificar infecção causada por L. santarosai. Apenas um cão da população III apresentou eliminação de leptospiras na urina, que foi confirmada pela amplificação de fragmento dos genes 16S e secY; o cão não pôde ser reavaliado, no entanto a análise filogenética dos fragmentos amplificados confirmou infecção causada por L. santarosai. Os resultados indicam o primeiro registro de infecção causada por L. santarosai em cães. A ocorrência da infecção assintomática causada por essa espécie nas três populações avaliadas indica um possível papel dos cães na cadeia de transmissão desse patógeno em centros urbanos, além de demonstrar que cães podem se tornar portadores de diferentes espécies de leptospiras. Os resultados sugerem uma possível distinção genotípica de cepas de L. santarosai mantidas por cães quando comparadas com estirpes desta espécie isoladas de outros hospedeiros. O presente estudo também foi capaz de demonstrar que cães leptospirúricos podem ser inadvertidamente admitidos ou adotados em abrigos coletivos, aumentando potencialmente os riscos de transmissão ocupacional e zoonótica da doença.

Leptospirosis is a zoonotic disease of global importance caused by pathogenic Leptospira species. Dogs are reservoir hosts for pathogenic Leptospira and can act as potential transmission sources of the disease. Identification of such individuals and characterization of leptospires involved in chronic infections may promote better understanding of the role of dogs in the epidemiology of particular leptospiral strains and the overall contribution of dogs to environmental contamination in urban and rural scenarios. The present work describes the identification of dogs presenting asymptomatic urinary shedding of different pathogenic Leptospira species among stray and sheltered dog populations, as well as the characterization of leptospiral strains isolated from chronic carriers. Blood and urine samples were taken from three different populations: (I) 92 dogs kept in a public shelter at the University of São Paulo campus; (II) seven stray dogs living inside the University of São Paulo campus; and (III) 24 dogs kept in a public shelter from the city of Mogi das Cruzes. Dogs identified as urinary shedders by PCR-based DNA detection were prospectively evaluated in order to confirm persistent renal carriage and to recover viable leptospires for proper characterization. Leptospiruric dogs were identified in all populations studied. Quantitative PCR targeting the lipl32 gene and the 16S rRNA detected urinary shedding in 10 dogs from population I: two of these dogs were recently admitted at the facility and one dog was adopted immediately after presenting large quantities of leptospires in urine. Prospective evaluation of nine leptospiruric dogs enabled the identification of two chronic carriers, allowing the recovery of leptospires from both dogs. The strains were further characterized by MLST analysis and serogrouping, thus confirming infection caused by L. interrogans serogroup Canicola and L. santarosai serogroup Sejroe. Two leptospiruric dogs were detected in population II by 16S and secY PCR amplification; one dog presented persistent urinary shedding of L. interrogans, but no isolates could be recovered. The other leptospiruric dog presented asymptomatic infection caused by L. santarosai and could not be reevaluated. Only one dog from population III presented leptospirúria detected by PCR; the dog could not be reevaluated, however sequence analysis revealed infection caused by L. santarosai. The results indicate the first report of L. santarosai infection in dogs. Asymptomatic infection caused by this leptospiral species was observed in all populations studied, thus indicating a possible role of dogs in the chain of transmission of this particular pathogen. The results also suggest a possible genetic distinction between lineages of Brazilian L. santarosai maintained by dogs and other animal hosts. Isolation and persistent chronic carriage of L. santarosai found shows that dogs could persistently harbor leptospires other than L. interrogans. This study also points out that dogs can be inadvertently admitted and adopted in dog shelters, potentially increasing the risks of occupational and zoonotic transmission by bringing infected animals closer to shelter workers, adopters and their households

Serum and Urinary C-Reactive Protein Concentrations in Dogs with Leptospirosis

Background: Leptospirosis is a bacterial disease caused by pathogenic strains of Leptospira, which may affect human beings and a wide range of both domestic and wild animals. The disease in dogs is still a challenge for clinicians, since definitive diagnosis may be reached only few days after overt clinical signs. Besides that, dogs with leptospiruria have zoonotic risk, making development of rapid screening tests crucial for early diagnosis of disease. C-reactive protein is a positive acute phase protein, and in the dog a strong and fast response is expected after any tissue injury. The aim of this study was to evaluate serum and urinary C-reactive protein as potential early indicators of leptospirosis in dogs, and its association with clinical serum biochemistry, complete blood count (CBC) and clinical outcome. Materials, Methods & Results: A total of 62 dogs with risk factors and/or clinical signs of leptospirosis were prospectively obtained and included in this study. Definitive diagnosis was based on serology, using the microscopic agglutination test (MAT) against 13 serovars, and on a specific polymerase chain reaction (PCR) in blood or urine, using the primers sets G1/G2 and B64I/B64II, which amplify DNA of pathogenic leptospires. Clinical serum biochemistry included creatinine, urea, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, creatine kinase and albumin.(...)

Serum and Urinary C-Reactive Protein Concentrations in Dogs with Leptospirosis

Background: Leptospirosis is a bacterial disease caused by pathogenic strains of Leptospira, which may affect human beings and a wide range of both domestic and wild animals. The disease in dogs is still a challenge for clinicians, since definitive diagnosis may be reached only few days after overt clinical signs. Besides that, dogs with leptospiruria have zoonotic risk, making development of rapid screening tests crucial for early diagnosis of disease. C-reactive protein is a positive acute phase protein, and in the dog a strong and fast response is expected after any tissue injury. The aim of this study was to evaluate serum and urinary C-reactive protein as potential early indicators of leptospirosis in dogs, and its association with clinical serum biochemistry, complete blood count (CBC) and clinical outcome. Materials, Methods & Results: A total of 62 dogs with risk factors and/or clinical signs of leptospirosis were prospectively obtained and included in this study. Definitive diagnosis was based on serology, using the microscopic agglutination test (MAT) against 13 serovars, and on a specific polymerase chain reaction (PCR) in blood or urine, using the primers sets G1/G2 and B64I/B64II, which amplify DNA of pathogenic leptospires. Clinical serum biochemistry included creatinine, urea, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, creatine kinase and albumin.(...)(AU)

Leptospirose suína

ABSTRACT Swine leptospirosis is an important cause of economic loss in reproductive herds, and it occurs all over the world. Swine l eptospirosis can be presented in basically the two types acute and chronic. Fever, focal mastitis and leptospiruria are observed in the acute infection of adult animals. In the chronic type, infertility, abortions, stillborn and weak piglets are common. The serovars Canicola, Pomona and Icterohaemorrhagiae are the most important in the epidemiology of this disease. Although there are many available diagnostic techniques and others which are being developed, the microscopic agglutination test is the most commonly used, especially in swine and it is considered a serogroup specific test with a complex interpretation. Swine leptospirosis control is based on the immunization of susceptible swine in conjunction with actions related to infection sources, in order to reduce the quantity of leptospiras spread to the environment and to identify and eliminate factors which amplify the pathogenic agents survival. Swine anti-leptospira polyvalent vaccines are composed of whole inactivated bacteria. The most frequently used serovars are: Canicola, Icterohaemorrhagiae, Copenhageni, Pomona, Grippotyphosa and Bratislava. Proteins from external membrane and from the surface of pathogenic leptospiras are effective antigens for anti-leptospira vaccine production and have become particularly interesting for the development of new anti-leptospira vaccines.

RESUMO A leptospirose suína é uma importante causa de prejuízos em rebanhos de reprodução, e ocorre em de todas as partes do mundo. A leptospirose suína pode se apresentar basicamente nas formas aguda e crônica. Na forma aguda, pode ocorrer febre, mastite focal e leptospirúria em animais adultos. Na forma crônica é comum a infertilidade, com a ocorrência de abortamentos, natimortos e nascimento de leitões fracos. Os sorovares Canicola, Pomona e Icterohaemorrhagiae são os mais importantes na epidemiologia da doença. Apesar das várias técnicas disponíveis e as que estão sendo desenvolvidas para o diagnóstico da leptospirose, a soroaglutinação microscópica ainda é a mais praticada, principalmente em suínos, sendo um teste considerado sorogrupo específico e a sua interpretação é complexa. O controle da leptospirose suína é baseado na imunização de suscetíveis, nas ações sobre as fontes de infecção, visando a diminuição da quantidade de leptospiras lançadas no ambiente e na identificação e eliminação dos fatores que ampliam a sobrevivência do agente. As vacinas anti-leptospirose suína são constituídas de bactérias íntegras inativadas polivalentes. Os sorovares comumente presentes são: Canicola, Icterohaemorrhagiae, Copenhageni, Pomona, Grippotyphosa e Bratislava. As proteínas, especialmente as de membrana externa e de superfície das leptospiras patogênicas, são antígenos efetivos para a produção de vacinas anti-leptospirose e têm se tornado um dos maiores pontos de interesse para o desenvolvimento de vacinas anti-leptospirose.

Uso de estreptomicina na eliminação da leptospirúria em touros (bos taurus indicus) naturalmente infectados pelo sorovar hardjo / Use of streptomycin in the end of leptospiruria in serologically reactive bulls (bos taurus indicus)

RESUMO O objetivo desse trabalho foi verificar a ação de marcas diferentes de estreptomicinas polivalentes para o tratamento da leptospirose bovina em dose única (25 mg de estreptomicina por kg de peso corpóreo). O trabalho foi realizado com 14 touros adultos sorologicamente reagentes para Leptospira interrogans sorovar Hardjo, com título mínimo de 800 e com cultivo positivo. Os animais foram separados em 2 grupos de acordo com a marca da estreptomicina utilizada no tratamento, grupo 1: estreptomicina A e grupo 2: estreptomicina B. Os bovinos controles não receberam nenhum tratamento. Foram obtidas amostras de sangue e urina dos animais tratados e controles nos dias -1, 0, 1, 2, 3, 5, 10, 15 e 25; considerando-se o dia do tratamento como dia 0. Na urina dos bovinos tratados e controle foi realizada a reação em cadeia da polimerase (PCR) e isolamento com inoculação em hamsters. Observou-se que a estreptomicina da marca A, em dose única de 25 mg/kg de peso corpóreo, conseguiu eliminar a leptospirúria no grupo de touros após 24h do tratamento. Já no grupo de touros tratados com a estreptomicina da marca B, foi constatado a leptospirúria entre 48h e 72h, após o tratamento. Em ambos os grupos tratados, a resposta sorológica apresentou uma variação da queda dos níveis dos títulos de anticorpos aglutinantes, sendo que embora a estreptomicina A tenha aparentemente apresentado um melhor desempenho quando comparada com as médias geométricas dos títulos do grupo tratado com a estreptomicina B as médias não diferiram entre si pelo Teste de Tukey (P > 0,05). Nos bovinos tratados a leptospirúria foi intermitente e a média geométrica dos títulos foi menor que a média geométrica dos títulos dos bovinos controles. A diferença do efeito da ação das diferentes marcas de estreptomicina está possivelmente na qualidade da matéria prima produzida pelos laboratórios.

ABSTRACT The objective of this work was evaluated different marks of streptomycin for the treatment of bovine leptospirosis, in an only one dose of 25 mg for kg of corporeal weight. Thirty serologically reactive bulls for Leptospira interrogans serovar Hardjo were utilized. The bulls had a minimum antibody titer of 800 and were positive in the isolation from urine samples. The animals had been separated in 2 groups according with the streptomycin mark used in the treatment, group 1: streptomycin A and group 2: streptomycin B. The bovine controls had received any application from streptomycin. Samples of blood and urine of treated and controls bulls were collected in days -1, 0, 1, 2, 3, 5, 10, 15 and 25; considering the day of the treatment as day 0. A research for the detection of leptospira genetic material was realized in the urine of all bulls by PCR. It was observed that the streptomycin A ended leptospiruria in 24h after of the treatment. In the group of bulls treated with the streptomycin B, the end of leptospiruria was evidenced in 48h and 72h, after the treatment. In both treated groups, the serological reply presented a variation in the fall of antibodies titers, and streptomycin A was better in comparative performance with geométric means of the antibodies titers of the group that received streptomycin B, although by the Tukey Test the difference was no significant (P > 0.05). In the bovine controls the leptospiruria was intermittent and the average of the antibody titers of the treated bovines was lower than the average of the bovine controls, during all the experiments. The difference in the effect of different brands of streptomycin is possibly due to the quality of the substances produced in the laboratories.

Infecção por leptospira em touros (Bos Taurus Indius) : comparação da eficiência de dois produtos à base de estreptomicina na eliminação da leptospirúria causado pelo Sorovar Hardjo

O objetivo desse trabalho foi verificar a ação de marcas diferentes de estreptomicinas polivalentes para o tratamento da leptospirose bovina em dose única (25 mg de estreptomicina por kg de peso corpóreo). O trabalho foi realizado com 14 touros adultos sorologicamente reagentes para Leptospira interrogans sorovar Hardjo, com título mínimo de 800 e com cultivo positivo. Os animais foram separados em 2 grupos de acordo com a marca da estreptomicina utilizada no tratamento, grupo 1: estreptomicina A e grupo 2: estreptomicina B. Os bovinos controles não receberam nenhum tratamento. Foram obtidas amostras de sangue e urina dos animais tratados e controles nos dias -1, 0, 1, 2, 3, 5, 10, 15 e 25; considerando-se o dia do tratamento como dia 0. Na urina dos bovinos tratados e controle foi realizada a reação em cadeia da polimerase (PCR) e isolamento com inoculação em hamsters. Observou-se que a estreptomicina da marca A, em dose única de 25 mg/kg de peso corpóreo, conseguiu eliminar a leptospirúria no grupo de touros após 24h do tratamento. Já no grupo de touros tratados com a estreptomicina da marca B, foi constatado a leptospirúria entre 48h e 72h, após o tratamento. Em ambos os grupos tratados, a resposta sorológica apresentou uma variação da queda dos níveis dos títulos de anticorpos aglutinantes, sendo que embora a estreptomicina A tenha aparentemente apresentado um melhor eficiência quando comparada com as médias geométricas dos títulos do grupo tratado com a estreptomicina B as médias não diferiram entre si pelo Teste de Tukey (P > 0,05). Nos bovinos tratados a leptospirúria foi intermitente e a média geométrica dos títulos foi menor que a média geométrica dos títulos dos bovinos controles. A diferença do efeito da ação das diferentes marcas de estreptomicina está possivelmente na qualidade da matéria prima produzida pelos laboratórios

The objective of the present work was to evaluated two different commercial streptomycin brands used for the treatment of bovine leptospirosis, administrated in a single dose (25mg/body weight). Thirty serologically reactive bulls for Leptospira interrogans serovar Hardjo were utilized. The bulls presented a 800 minimum antibody titer and positive results at urine samples isolation test. The animals were separated into 2 groups according to the streptomycin brand. Treatments consisted of: group 1: streptomycin A and group 2: streptomycin B. The control animals received no application of any streptomycin product. Blood and urine samples of treated and controls bulls were collected at -1, 0, 1, 2, 3, 5, 10, 15 and 25 days considering the treatment day as D0. Detection of leptospira genetic material was carried out in all bulls urine samples using the PCR assay. It was observed that the streptomycin A eliminated leptospiruria 24h after treatment. The elimination of leptospiruria was evidente 48 and 72hs in bulls treated with the streptomycin B. In both treated groups, the serological response varied considering antibodies titers decreasing. Streptomycin A group 1 showed a better performance accordingly to geometric means in comparison to antibodies titers of the streptomycin B group 2, although there were no significant difference found by the Tukey Test (P > 0.05). In the bovine control group the leptospiruria was intermittent and the treated bovines antibody titers average was lower than the average of the bovine controls, during all the experimental period. The action effect difference of the diferent streptomycin brands used is possibly due to the quality of the raw material used to produced the products manufactured by the pharmaceutical laboratories

Estudo soroepidemiológico da infecção por leptospira spp. em gatos

A leptospirose destaca-se dentre as zoonoses de maior importância devido à sua ampla distribuição geográfica e por ter sua ocorrência favorecida principalmente em locais com climas tropicais e subtropicais, com altas temperaturas e índices pluviométricos.  Em felinos, a leptospirose é de ocorrência rara, não apresentando especificidade por reagirem com diferentes sorotipos de Leptospira spp.. São considerados mais resistentes à infecção. Porém, já foi comprovada experimentalmente a ocorrência de leptospirúria em gatos inoculados com a bactéria sem que manifestação de sintomas. O objetivo do presente estudo foi a pesquisa de anticorpos frente a diferentes sorovares de leptospiras pela prova de Soroaglutinação Microscópica em soros de felinos atendidos em dois Hospitais Veterinários da UNESP (Botucatu e Araçatuba). Nenhuma das amostras avaliadas revelou soropositividade para os 13 sorovares avaliados.

Serum and Urinary C-Reactive Protein Concentrations in Dogs with Leptospirosis

Background:  : : Leptospirosis is a bacterial disease caused by pathogenic strains of Leptospira, which may affect human beings and a wide range of both domestic and wild animals. The disease in dogs is still a challenge for clinicians, since definitive diagnosis may be reached only few days after overt clinical signs. Besides that, dogs with leptospiruria have zoonotic risk, making development of rapid screening tests crucial for early diagnosis of disease. C-reactive protein is a positive acute phase protein, a nd in the dog a strong and fast response is expected after any tissue injury. The aim of this study was to evaluate serum and urinary C-reactive protein as potential early indicators of leptospirosis in dogs, and its association with clinical serum biochemistry, complete blood count (CBC) and clinical outcome. Materials, Methods & Results: A total of 62 dogs with risk factors and/or clinical signs of leptospirosis were prospectively obtained and included in this study. Definitive diagnosis was based on serology, using the microscopic agglutination test (MAT) against 13 serovars, and on a specific polymerase chain reaction (PCR) in blood or urine, using the primers sets G1/G2 and B64I/B64II, which amplify DNA of pathogenic leptospires. Clinical serum biochemistry included creatinine, urea, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, creatine kinase and albumin.

Serum and Urinary C-Reactive Protein Concentrations in Dogs with Leptospirosis

Background:  : : Leptospirosis is a bacterial disease caused by pathogenic strains of Leptospira, which may affect human beings and a wide range of both domestic and wild animals. The disease in dogs is still a challenge for clinicians, since definitive diagnosis may be reached only few days after overt clinical signs. Besides that, dogs with leptospiruria have zoonotic risk, making development of rapid screening tests crucial for early diagnosis of disease. C-reactive protein is a positive acute phase protein, a nd in the dog a strong and fast response is expected after any tissue injury. The aim of this study was to evaluate serum and urinary C-reactive protein as potential early indicators of leptospirosis in dogs, and its association with clinical serum biochemistry, complete blood count (CBC) and clinical outcome. Materials, Methods & Results: A total of 62 dogs with risk factors and/or clinical signs of leptospirosis were prospectively obtained and included in this study. Definitive diagnosis was based on serology, using the microscopic agglutination test (MAT) against 13 serovars, and on a specific polymerase chain reaction (PCR) in blood or urine, using the primers sets G1/G2 and B64I/B64II, which amplify DNA of pathogenic leptospires. Clinical serum biochemistry included creatinine, urea, alanine aminotransferase, alkaline phosphatase, creatine kinase and albumin.