Comparative evaluation of plant extract effects on peritoneal, medullary and J774 cells G8 macrophages / Avaliação comparativa do efeito de extratos de plantas em macrófagos peritoneais, medulares e da linhagem J774. G8

The use of medicinal plants as raw material for extracts production and pure substances isolation and subsequence development of new drugs represents a constantly growing area. However, some stages are indispensable before pharmacologically evaluating natural products such as medicines. Toxicity tests in mammalian cells are essential to initiate new drugs development or verify the substance's biocompatibility. Thus, we verified the toxicity of crude extracts and fractions with different polarities obtained from the leaves and stems of eight plant species. The toxic effect was evaluated on macrophages obtained from the bone marrow and peritoneal cavity of a Swiss webster mouse and J774 macrophages. G8 cell lineage. These macrophages were cultured in a 96-well plate, and the compounds were added at a concentration of 100 µg/mL for 24 hours. After this time, the supernatant was removed. The toxicity was evaluated for lactate dehydrogenase (LDH) release assay and the resazurin assay, which uses an indicator dye to measure oxidation-reduction reactions. The results showed a difference in the percentage of toxicity when comparing the same extract in different types of macrophages. This outcome indicates that these cells from different origins may exhibit different responses when exposed to the same natural compounds.

A utilização de plantas medicinais como matéria-prima para a produção de extratos e isolamento de substâncias puras para o desenvolvimento de novos fármacos representa uma área em constante crescimento. No entanto, existem processos a serem realizados antes de avaliar farmacologicamente produtos naturais como medicamentos. Os testes de toxicidade em células de mamíferos são fundamentais para iniciar o desenvolvimento de novas drogas ou verificar a biocompatibilidade de substâncias. Assim, verificamos a toxicidade de extratos brutos e frações com diferentes polaridades obtidos de folhas e caule de oito espécies de planta. Para comparar o efeito tóxico, os testes foram realizados em macrófagos obtidos da medula óssea e cavidade do peritônio de camundongo Swiss webster, bem como no macrófago da linhagem celular J774.G8. Esses macrófagos foram cultivados em placa de 96 poços e os compostos adicionados na concentração de 100 µg/mL por 24 horas. Após esse período o sobrenadante foi removido. A toxicidade foi avaliada pelos ensaios de detecção da enzima lactato-desidrogenase (LDH) e pelo ensaio de resazurina, que usa um corante indicador para medir as reações de oxidação-redução. Os resultados mostraram uma diferença na porcentagem de toxicidade quando comparamos o mesmo extrato em diferentes tipos de macrófagos. Este resultado indica que essas células de várias origens podem exibir respostas distintas quando expostas aos mesmos compostos naturais.

Effect of Bacillus Subtilis on Immune Function of Hd11 Chicken Macrophages

Poultry is frequently contaminated by Salmonella, a pathogen leading to human health concern worldwide. This study aimed to evaluate the effect of Bacillus subtilis (BS)strain 048 (BS048) on the activation, phagocytosis, sterilization, cytokine secretion, and nitrogen oxide synthesis of HD11 chicken macrophages subjected to Salmonella enteritidis challenge, using lipopolysaccharide treatment as a negative control. The results showed: (1) BS048 had no significant effect on extracellular lactate dehydrogenase activity (p>0.05), while lipopolysaccharide treatment significantly increased extracellular lactate dehydrogenase activity (p >0.05), while lipopolysaccharide treatment significantly increased extracellular lactate dehydrogenase activity (p 0.05);(2)BS048 significantly upregulated the expression levels of pro-inflammatory cytokines (interleukin (IL)- 1â and IL-6), anti-inflammatory cytokines(IL-10 and transforming growth factor-â1), and anti-viral cytokine, interferon-â (p<0.01); ; (3) BS048 significantly upregulated the mRNA expression level of the inducible nitric oxide synthase and its activity as well as extracellular nitrogen oxide level (p <0.01). In conclusion, BS048 could improve antiinflammatory and immune functions of HD11 chicken macrophages, without cytotoxic effects on these cells.(AU)

Deeper exploration of inflammatory cell populations in milk to monitor udder health in dairy cows

The present study explored the predictive values of milk leukocyte differentials (MLD) as a basis for improving the diagnosis of intramammary infections (IMIs) and subclinical mastitis. Quarter milk samples were collected for bacteriological analysis, quarter somatic cell count (qSCC), and MLD. The MLD were assessed using the cytospin technique, direct microscopic smears, and flow cytometry. The predictive values of each single leukocyte population and useful potential indices that could better reflect immune complexity were also calculated. Changes in the percentage of any leukocyte alone failed to substantially improve the predictive value of qSCC in diagnosing IMIs. Although certain parameters increased the area under the receiver operating characteristic curve (ROC curve) as a result of increased specificity values, a slight reduction in sensitivity was observed. The so-called CD8 complex was a unique parameter which improved both the sensitivity (78.79 %) and the specificity (80.77 %) in IMI diagnosis, resulting in the highest area under the ROC curve (0.87). To diagnose subclinical mastitis, the percentage of macrophages and the sum of the percentage PMNLs and T CD8+ cells divided by the percentage of macrophages showed the highest predictive values (sensitivity = 79.63, specificity = 73.68, and area under the ROC curve = 0.83) in the differentiation of the inflammatory condition status of cows. In conclusion, this study provides further insights into using T CD8+ lymphocytes in diagnosing bovine IMIs, combined with PMNLs and macrophages. The antidromic trend of macrophages vs. PMNLs and T CD8+ lymphocytes due to the increasing qSCCs was crucial to differentiating quarters under both inflammatory and non-inflammatory conditions.

Outbreak of leishmaniasis caused by Leishmania enriettii in guinea pigs (Cavia porcellus) / Surto de leishmaniose causada por Leishmania enriettii em cobaias (Cavia porcellus)

We describe an outbreak of leishmaniasis in seven guinea pigs (Cavia porcellus) in which nodular ulcerated skin lesions of varying sizes were observed in the nasal cavity, upper lip, pinnae, vulva, and periarticular region of the limbs. Cytologic exam of collected samples of the lesions in the auricle of one of the animals revealed macrophages containing parasitophorous vacuoles of approximately 4.0μm in diameter in their cytoplasm with morphology suggestive of Leishmania sp. Although skin lesions spontaneously regressed in two of the Guinea pigs, only one survived. All six animals that died were necropsied. Grossly, all animals showed bloody nodular cutaneous lesions with crusts. One of the guinea pigs had distended dark red and firm lungs. Histopathology of the skin lesions revealed histiocytic interstitial acanthotic dermatitis associated with a myriad of Leishmania organisms within macrophages cytoplasm. In the lung, the lesions were characteristic of broncho-interstitial pneumonia with focal infiltrates of neutrophils, epithelioid macrophages, and multinucleated giant cells containing 2µm basophilic amastigotes with morphology compatible with Leishmania spp. A focal granulomatous lesion ,associated with the causal agent in the lung is a novel description of leishmaniasis in guinea pigs caused by L. enriettii. The polymerase chain reaction (PCR) technique with mini-exon primer performed in samples of lesions from two affected guinea pigs was positive and equal to the reference strain, identifying Leishmania enriettii. The cytological, macroscopic, and histological lesions associated with the PCR technique allowed the diagnosis of leishmaniasis and the identification of the specie L. enriettii.

Descrevemos um surto de leishmaniose em sete cobaias (Cavia porcellus), com lesões cutâneas nodulares ulceradas de tamanhos variados observadas na cavidade nasal, lábio superior, pavilhões auriculares, vulva e região periarticular dos membros. No exame citológico foram encontrados macrófagos contendo vacúolos parasitóforos no citoplasma de aproximadamente 4.0μm em diâmetro com morfologia sugestiva de Leishmania sp. Apesar de regressão espontânea das lesões cutâneas terem ocorrido em duas das sete cobaias, apenas um sobreviveu. Seis dos sete animais afetados morreram e foram necropsiados. Macroscopicamente, todos os animais apresentaram lesões cutâneas nodulares, crostosas e sanguinolentas. Uma das cobaias tinha pulmões vermelho-escuros, distendidos e firmes. A histopatologia das lesões cutâneas revelou dermatite acantótica intersticial histiocítica associada a miríades de organismos de Leishmania no citoplasma de macrófagos. Nos pulmões as lesões eram características de pneumonia bronco-intersticial com infiltrado focal de neutrófilos, eosinófilos, macrófagos epitelioides e células gigantes multinucleadas contendo amastigotas basofílicos de 2µm com morfologia compatível com Leishmania spp. Lesões granulomatosas focais associadas ao agente no pulmão são um achado inédito na leishmaniose causada por L. enriettii em cobaias. A técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) com primer mini-exon realizada em amostras de lesões de duas cobaias afetadas foi positiva, identificando Leishmania enriettii. Os aspectos macroscópicos, citológicos, e histológicos associados à técnica da (PCR), permitiram o diagnóstico da leishmaniose e a identificação da espécie L. enriettii.

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharide-challenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis

Abstract Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 g/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 g/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 g/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Resumo Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 g/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 g/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 g/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Granulomatous rhinitis by Neoconidiobolus lamprauges in a mule / Rinite granulomatosa por Neoconidiobolus lamprauges em uma mula

ABSTRACT: Conidiobolomycosis has a wide distribution, predominantly in humid tropical regions, affecting several species with significant mortality rates. The genus Conidiobolus is now divided into four genera: Capillidium, Conidiobolus, Microconidiobolus, and Neoconidiobolus. There are no confirmed reports of infection by these fungi in Equidae in Brazil. We present a rhinofacial rhinitis caused by Neoconidiobolus lamprauges in a mule from Rio de Janeiro, Brazil. The mule presented bilateral semi-occlusion of the nostrils, difficulty breathing, and weight loss. The histological examination of the nostril biopsied mass revealed multifocal necrotizing areas with nonstained images of fungal hyphae in the Splendore-Hoeppli reaction and surrounded by macrophages, eosinophils, neutrophils, and multinucleated giant cells. The Grocott methenamine silver staining revealed thin-walled, rarely septated, irregular branching hyphae, with a varying diameter of 12 μm (± 3.63 μm), and terminal ballooning dilations. The determining etiology of this rhinitis was based on the hyphae staining by immunohistochemistry and by amplifying the DNA fragment of N. lamprauges by polymerase chain reaction. Conidiobolomycosis should be included in the differential diagnosis of the causes of rhinitis in equids, mainly in tropical regions.

RESUMO: A conidiobolomicose apresenta ampla distribuição geográfica, com predominância em regiões tropicais úmidas, afeta várias espécies e apresenta taxa de mortalidade significativa. O gênero Conidiobolus está agora dividido em quatro gêneros: Capillidium, Conidiobolus, Microconidiobolus e Neoconidiobolus. Não há relatos confirmados de infecção por esses fungos em equídeos no Brasil. Relata-se o caso de uma mula com rinite rinofacial causada por Neoconidiobolus lamprauges no Rio de Janeiro, Brasil. A mula apresentava uma massa que semiocluía as narinas bilateralmente, dificuldade respiratória e emagrecimento. O exame histológico de biópsia da massa da narina revelou áreas de necrose multifocais com imagens negativas de hifas fúngicas em meio à reação de Splendore-Hoeppli, circundadas por macrófagos, eosinófilos, neutrófilos e células gigantes multinucleadas. O exame histoquímico metenamina prata de Grocott revelou hifas de parede fina, raramente septadas, com ramificação irregular, grau variável de paralelismo, e diâmetro médio de 12 μm (± 3,63) e dilatações balonosas terminais. O diagnóstico etiológico foi realizado pela associação da imuno-histoquímica e da amplificação do fragmento de DNA de N. lamprauges pela reação em cadeia da polimerase. A conidiobolomicose deve ser incluída no diagnóstico diferencial das causas de rinite em equídeos, principalmente em regiões tropicais.

An outbreak of fatal Pullorum disease (Salmonella Pullorum) in Guinea fowl keets (Numida meleagris) / Surto fatal de pulorose (Salmonella Pullorum) em pintinhos de galinhas-d'Angola (Numida meleagris)

Pullorum disease is described worldwide and is caused by Salmonella enterica subspecies enterica serovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum). S. Pullorum infection is important in commercial poultry, provoking a systemic disease with high mortality rates. Its occurrence requires notification, and when it is diagnosed in commercial breeding flocks, its eradication is demanded. The aim of this study was to report a severe outbreak of Pullorum disease in young Guinea fowl (Numida meleagris), resulting in 100% mortality of keets (n=290) within the first two weeks of age. All examined keets had enlarged liver, kidneys and spleen (5/5), and the affected tissues were submitted to histological and bacteriological examination. On histopathology, random paratyphoid nodules characterized by areas of necrosis with fibrin and a moderate infiltrate of macrophages and heterophils were observed in the liver. In kidneys, discrete areas of necrosis associated with moderate multifocal infiltrates of lymphocytes, and plasma cells were observed. In the spleen, a moderate infiltrate of macrophages was noticed. Isolation of colonies suggestive of S. Pullorum from liver and spleen was performed in selective agars and, after biochemical tests, confirmed by specific duplex-PCR. The antimicrobial susceptibility test of the isolated strain revealed resistance to only sulfamethoxazole + trimethoprim among the tested antimicrobials. The S. Pullorum isolate recovered in the present study was highly pathogenic to N. meleagris and may represent a risk to other avian species, including industrial poultry.

A pulorose é descrita mundialmente e é causada por Salmonella enterica subespécie enterica sorovar Gallinarum biovar Pullorum (S. Pullorum). A infecção por S. Pullorum é importante em aves comerciais, provocando doença sistêmica com altas taxas de mortalidade. Sua ocorrência requer notificação e quando diagnosticada em aves de criação comercial resulta na erradicação do plantel. O objetivo deste estudo foi relatar um surto grave de pulorose em filhotes de galinhas-d'Angola (Numida meleagris), resultando em 100% de mortalidade das aves (n=290) nas primeiras duas semanas de idade. Os pintinhos recebidos tinham hepato, espleno e nefromegalia (5/5). Os tecidos dos cinco indivíduos recebidos foram submetidos a exame histológico e bacteriológico. Na histopatologia, foram observados nódulos paratifoides aleatórios caracterizados por áreas de necrose com fibrina e infiltrado moderado de macrófagos e heterófilos no fígado. Nos rins, foram observadas áreas discretas de necrose associadas a infiltrados multifocais moderados de linfócitos e plasmócitos. No baço, foi observado infiltrado moderado de macrófagos. O isolamento de colônias sugestivas de S. Pullorum de fígados e baços foi realizado em ágares seletivos e, após testes bioquímicos, confirmado por duplex-PCR específico. A susceptibilidade antimicrobiana da cepa isolada revelou resistência apenas ao sulfametoxazol + trimetoprim entre os antimicrobianos testados. O isolado de S. Pullorum recuperado no presente estudo foi altamente patogênico para N. meleagris e pode representar um risco para outras espécies de aves, incluindo aves industriais.

Study of resveratrol against bone loss by using in-silico and in-vitro methods

Abstract By applying the in-silico method, resveratrol was docked on those proteins which are responsible for bone loss. The Molecular docking data between the resveratrol and Receptor activator of nuclear factor-kappa- ligand [RANKL] receptors proved that resveratrol binds tightly to the receptors, showed the highest binding affinities of 6.9, 7.6, 7.1, 6.9, 6.7, and 7.1 kcal/mol. According to in-vitro data, Resveratrol reduced the osteoclasts after treating Marrow-Derived Macrophages [BMM] with Macrophage colony-stimulating factor [MCSF] 20ng / ml and RANKL 50ng / ml, with different concentrations of resveratrol (2.5, 10 g / ml) For 7 days, the cells were treated with MCSF (20 ng / ml) and RANKL (40 ng / ml) together with concentrated trimethyl ether and resveratrol (2.5, 10 g / ml) within 12 hours. Which, not affect cell survival. After fixing osteoclast cells with formaldehyde fixative on glass coverslip followed by incubation with 0.1% Triton X-100 in PBS for 5 min and after that stain with rhodamine phalloidin staining for actin and Hoechst for nuclei. Fluorescence microscopy was performed to see the distribution of filaments actin [F.actin]. Finally, resveratrol reduced the actin ring formation. Resveratrol is the best bioactive compound for drug preparation against bone loss.

Resumo Com a aplicação do método in-silico, o resveratrol foi ancorado nas proteínas responsáveis pela perda óssea. Os dados de docking molecular entre o resveratrol e o ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa- [Receptor Activator of Nuclear Factor kappa-B Ligant (RANKL)] provaram que o resveratrol se liga fortemente aos receptores, mostraram as afinidades de ligação mais altas de 6,9, 7,6, 7,1, 6,9, - 6,7 e -7,1 kcal / mol. De acordo com dados in-vitro, o resveratrol reduziu os osteoclastos após o tratamento de macrófagos derivados da medula óssea [Bone Marrow-derived Macrophage (BMM)] com fator estimulador de colônias de macrófagos [Macrophage Colony-Stimulating Factor (MCSF)] 20ng / ml e RANKL 50ng / ml, com diferentes concentrações de resveratrol (2,5, 10 g / ml). Durante sete dias, as células foram tratadas com MCSF (20 ng / ml) e RANKL (40 ng / ml) juntamente com éter trimetílico concentrado e resveratrol (2,5, 10 g / ml) em 12 horas, processo que não afeta a sobrevivência celular. Após a fixação de células de osteoclastos com fixador de formaldeído em lamela de vidro seguido de incubação com 0,1% Triton X-100 em PBS por 5 min, foi realizado posteriormente o procedimento para corar com rodamina faloidina a actina e Hoechst os núcleos. A microscopia de fluorescência foi realizada para ver a distribuição dos filamentos de actina [F.actina]. Finalmente, o resveratrol reduziu a formação do anel de actina. O resveratrol é o melhor composto bioativo para o preparo de medicamentos contra a perda óssea.

Granulomatous rhinitis by Neoconidiobolus lamprauges in a mule / Rinite granulomatosa por Neoconidiobolus lamprauges em uma mula

Conidiobolomycosis has a wide distribution, predominantly in humid tropical regions, affecting several species with significant mortality rates. The genus Conidiobolus is now divided into four genera: Capillidium, Conidiobolus, Microconidiobolus, and Neoconidiobolus. There are no confirmed reports of infection by these fungi in Equidae in Brazil. We present a rhinofacial rhinitis caused by Neoconidiobolus lamprauges in a mule from Rio de Janeiro, Brazil. The mule presented bilateral semi-occlusion of the nostrils, difficulty breathing, and weight loss. The histological examination of the nostril biopsied mass revealed multifocal necrotizing areas with nonstained images of fungal hyphae in the Splendore-Hoeppli reaction and surrounded by macrophages, eosinophils, neutrophils, and multinucleated giant cells. The Grocott methenamine silver staining revealed thin-walled, rarely septated, irregular branching hyphae, with a varying diameter of 12 µm (± 3.63 µm), and terminal ballooning dilations. The determining etiology of this rhinitis was based on the hyphae staining by immunohistochemistry and by amplifying the DNA fragment of N. lamprauges by polymerase chain reaction. Conidiobolomycosis should be included in the differential diagnosis of the causes of rhinitis in equids, mainly in tropical regions.

A conidiobolomicose apresenta ampla distribuição geográfica, com predominância em regiões tropicais úmidas, afeta várias espécies e apresenta taxa de mortalidade significativa. O gênero Conidiobolus está agora dividido em quatro gêneros: Capillidium, Conidiobolus, Microconidiobolus e Neoconidiobolus. Não há relatos confirmados de infecção por esses fungos em equídeos no Brasil. Relata-se o caso de uma mula com rinite rinofacial causada por Neoconidiobolus lamprauges no Rio de Janeiro, Brasil. A mula apresentava uma massa que semiocluía as narinas bilateralmente, dificuldade respiratória e emagrecimento. O exame histológico de biópsia da massa da narina revelou áreas de necrose multifocais com imagens negativas de hifas fúngicas em meio à reação de Splendore-Hoeppli, circundadas por macrófagos, eosinófilos, neutrófilos e células gigantes multinucleadas. O exame histoquímico metenamina prata de Grocott revelou hifas de parede fina, raramente septadas, com ramificação irregular, grau variável de paralelismo, e diâmetro médio de 12 µm (± 3,63) e dilatações balonosas terminais. O diagnóstico etiológico foi realizado pela associação da imuno-histoquímica e da amplificação do fragmento de DNA de N. lamprauges pela reação em cadeia da polimerase. A conidiobolomicose deve ser incluída no diagnóstico diferencial das causas de rinite em equídeos, principalmente em regiões tropicais.

Morphological and histometric features of the caudal kidney in piranha Pygocentrus nattereri (Characiformes: Serrasalmidae)

Pygocentrus nattereri is a widely distributed species in the Neotropical region and a potential bio-indicator. Kidneys have functions in fish physiology, allowing them to live in different environments. We aimed to compare the histological characteristics of caudal kidneys between males and females, associating them with the renosomatic index (RSI). For this purpose, 15 males and 14 females were used for biometric and histological analyses. Structural volumetric density (SVD), renal corpuscle histometric measures, and hemosiderin and lipofuscin deposit frequency in macrophages melanogenic (MMs) were assessed. No biometric differences were observed between the sexes, but body weight and standard length were correlated with RSI. The SVD showed difference in hematopoietic tissue between female and males, whereas the density of the other structures was not different. The RSI was positively associated with hematopoietic tissue and proximal tubule density in contrast to distal tubules, blood vessels, collecting ducts and MMs. Females exhibited a higher renal corpuscle area, glomerulus area, distal tubule diameter, collecting tubule area, and collecting tubule lumen area. These differences may be due to metabolic differences between males and females. Sex effect in P. nattereri may define punctual differences in future studies on the metabolism and immunity of this species.

Pygocentrus nattereri é uma espécie amplamente distribuída na região Neotropical e pode ser considerada como um potencial bioindicador ambiental. Os rins têm funções cruciais na fisiologia dos peixes, permitindo-lhes viver em diferentes ambientes. Nosso objetivo foi comparar as características histológicas dos rins excretores entre machos e fêmeas, associando-as ao índice renossomático (IRS). Para tanto, 15 machos e 14 fêmeas foram utilizados para análises biométricas e histológicas. Amostras do tecido renal foram processadas para densidade estrutural volumétrica, medidas histométricas do corpúsculo renal e frequência dos depósitos de hemossiderina e lipofuscina nos macrófagos melonogênicos (MMs). Não foram observadas diferenças biométricas entre os sexos, mas a massa corporal e o comprimento padrão foram correlacionados com IRS. Apenas a densidade estrutural volumétrica do tecido hematopoiético foi diferente entre machos e fêmeas. Não houve diferença nas demais estruturas. O IRS associou-se positivamente com o tecido hematopoiético e densidade dos túbulos proximais e negativamente com os túbulos distais, vasos sanguíneos, ductos coletores e MMs. As fêmeas apresentaram maior área do corpúsculo renal, área do glomérulo, diâmetro do túbulo distal, área do túbulo coletor e área do lúmen do túbulo coletor. Essas diferenças podem ser devida às diferenças metabólicas entre machos e fêmeas. Particularidade do efeito de sexo em P. nattereri pode definir diferenças pontuais em futuros estudos sobre o metabolismo e imunidade nesta espécie.

First molecular detection of Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in a domestic cat (Felis catus) from an urban area in eastern Amazon

Background: Domestic cats have been implicated as accidental hosts of Leishmania sp. However, in recent years, the recurrent description of new cases in endemic and nonendemic areas draw attention to the potential epidemiological role of cats as reservoir hosts. Although dogs are considered urban reservoirs, cats could act as a secondary natural reservoirs in these areas. Thus, feline leishmaniasis has become an emerging disease in several countries worldwide. Case presentation: This study aimed to describe the first case of feline leishmaniasis in a stray animal that presented lesions compatible with the disease in Belém, Pará, Brazil, an important urban area in eastern Amazon. Serological tests for Leishmania infantum (ELISA and IFA) were nonreactive, whereas histopathological examination indicated infectious dermatitis caused by Leishmania spp. or Toxoplasma gondii. Cytopathological study of lesion aspirate confirmed the presence of Leishmania sp. amastigotes within macrophages. Finally, molecular analyses revealed that the feline infection was caused by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi. Conclusion: To the best of the authors' knowledge, this study reports the first case of natural infection by Leishmania (Leishmania) infantum chagasi in a feline from eastern Amazon. These findings suggest domestic cats as potential secondary reservoir hosts of Leishmania spp. in Belém, which reinforces the importance of further epidemiological investigation of feline leishmaniasis, especially in urban areas with human cases.(AU)

Effects of supplementation with vitamins C and E on the acute inflammatory response in Piaractus mesopotamicus / Efeitos da suplementação com vitaminas C e E na resposta inflamatória aguda em Piaractus mesopotamicus

Vitamins C and E are potent antioxidants that reduces the harmful effects of stress in several species including fish. In this study, it was evaluated the effect of vitamins C, E and their combination in the acute aerocystitis induced by inactivated Aeromonas hydrophila in pacu. 288 fish were distributed into 4 groups supplemented for 90 days: G1-control; G2- supplemented with 500 mg of Vitamin C; G3-supplemented with 500 mg of Vitamin E; G4-supplemented with 500 mg of Vitamin C + 500 mg of Vitamin E. The fish were divided in three groups, the first was not inoculated; second were inoculated in the swim bladder with 3 x 109 CFU of inactivated A. hydrophila and the last one with saline. The inflammatory exudate was collected from the swim bladder for assessment of cellular component and cytochemistry. The results showed higher accumulation of leukocytes in fish inoculated with bacteria. Cytochemistry was effective identifying thrombocytes, lymphocytes, macrophages and, granulocytes present in the exudate. It was also observed fish that received supplementation with vitamins presented higher accumulation of total cells in the exudate with a predominance of lymphocytes and thrombocytes. These results suggested that supplementation with vitamins improved the immunological responses.

As vitaminas C e E são potentes antioxidantes que reduzem os efeitos nocivos do estresse em várias espécies, incluindo peixes. Neste estudo, avaliou-se o efeito das vitaminas C, E e sua combinação na aerocistite aguda induzida por Aeromonas hydrophila inativada em pacu. 288 peixes foram distribuídos em 4 grupos suplementados por 90 dias: G1-controle; G2- suplementado com 500 mg de Vitamina C; G3-suplementado com 500 mg de Vitamina E; G4-suplementado com 500 mg de Vitamina C + 500 mg de Vitamina E. Os peixes foram divididos em três grupos, o primeiro não foi inoculado; o segundo foi inoculado na bexiga natatória com 3 x 109 UFC de A. hydrophila inativada e a última com soro fisiológico. O exsudato inflamatório foi coletado da bexiga natatória para avaliação do componente celular e citoquímica. Os resultados mostraram maior acúmulo de leucócitos nos peixes inoculados com a bactéria. A citoquímica foi eficaz na identificação de trombócitos, linfócitos, macrófagos e granulócitos presentes no exsudato. Também foi observado que os peixes que receberam suplementação com vitaminas apresentaram maior acúmulo de células totais no exsudato com predominância de linfócitos e trombócitos. Esses resultados sugeriram que a suplementação com vitaminas melhorou as respostas imunológicas.

Study of resveratrol against bone loss by using in-silico and in-vitro methods / Estudo do resveratrol contra a perda óssea usando métodos in silico e in vitro

By applying the in-silico method, resveratrol was docked on those proteins which are responsible for bone loss. The Molecular docking data between the resveratrol and Receptor activator of nuclear factor-kappa-Β ligand [RANKL] receptors proved that resveratrol binds tightly to the receptors, showed the highest binding affinities of −6.9, −7.6, −7.1, −6.9, −6.7, and −7.1 kcal/mol. According to in-vitro data, Resveratrol reduced the osteoclasts after treating Marrow-Derived Macrophages [BMM] with Macrophage colony-stimulating factor [MCSF] 20ng / ml and RANKL 50ng / ml, with different concentrations of resveratrol (2.5, 10 μg / ml) For 7 days, the cells were treated with MCSF (20 ng / ml) and RANKL (40 ng / ml) together with concentrated trimethyl ether and resveratrol (2.5, 10 μg / ml) within 12 hours. Which, not affect cell survival. After fixing osteoclast cells with formaldehyde fixative on glass coverslip followed by incubation with 0.1% Triton X-100 in PBS for 5 min and after that stain with rhodamine phalloidin staining for actin and Hoechst for nuclei. Fluorescence microscopy was performed to see the distribution of filaments actin [F.actin]. Finally, resveratrol reduced the actin ring formation. Resveratrol is the best bioactive compound for drug preparation against bone loss.

Com a aplicação do método in-silico, o resveratrol foi ancorado nas proteínas responsáveis pela perda óssea. Os dados de docking molecular entre o resveratrol e o ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa-Β [Receptor Activator of Nuclear Factor kappa-B Ligant (RANKL)] provaram que o resveratrol se liga fortemente aos receptores, mostraram as afinidades de ligação mais altas de −6,9, −7,6, −7,1, −6,9, - 6,7 e -7,1 kcal / mol. De acordo com dados in-vitro, o resveratrol reduziu os osteoclastos após o tratamento de macrófagos derivados da medula óssea [Bone Marrow derived Macrophage (BMM)] com fator estimulador de colônias de macrófagos [Macrophage Colony-Stimulating Factor (MCSF)] 20ng / ml e RANKL 50ng / ml, com diferentes concentrações de resveratrol (2,5, 10 μg / ml). Durante sete dias, as células foram tratadas com MCSF (20 ng / ml) e RANKL (40 ng / ml) juntamente com éter trimetílico concentrado e resveratrol (2,5, 10 μg / ml) em 12 horas, processo que não afeta a sobrevivência celular. Após a fixação de células de osteoclastos com fixador de formaldeído em lamela de vidro seguido de incubação com 0,1% Triton X-100 em PBS por 5 min, foi realizado posteriormente o procedimento para corar com rodamina faloidina a actina e Hoechst os núcleos. A microscopia de fluorescência foi realizada para ver a distribuição dos filamentos de actina [F.actina]. Finalmente, o resveratrol reduziu a formação do anel de actina. O resveratrol é o melhor composto bioativo para o preparo de medicamentos contra a perda óssea.

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharide-challenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Abstract Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Resumo Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Study of resveratrol against bone loss by using in-silico and in-vitro methods / Estudo do resveratrol contra a perda óssea usando métodos in silico e in vitro

Abstract By applying the in-silico method, resveratrol was docked on those proteins which are responsible for bone loss. The Molecular docking data between the resveratrol and Receptor activator of nuclear factor-kappa-Β ligand [RANKL] receptors proved that resveratrol binds tightly to the receptors, showed the highest binding affinities of −6.9, −7.6, −7.1, −6.9, −6.7, and −7.1 kcal/mol. According to in-vitro data, Resveratrol reduced the osteoclasts after treating Marrow-Derived Macrophages [BMM] with Macrophage colony-stimulating factor [MCSF] 20ng / ml and RANKL 50ng / ml, with different concentrations of resveratrol (2.5, 10 μg / ml) For 7 days, the cells were treated with MCSF (20 ng / ml) and RANKL (40 ng / ml) together with concentrated trimethyl ether and resveratrol (2.5, 10 μg / ml) within 12 hours. Which, not affect cell survival. After fixing osteoclast cells with formaldehyde fixative on glass coverslip followed by incubation with 0.1% Triton X-100 in PBS for 5 min and after that stain with rhodamine phalloidin staining for actin and Hoechst for nuclei. Fluorescence microscopy was performed to see the distribution of filaments actin [F.actin]. Finally, resveratrol reduced the actin ring formation. Resveratrol is the best bioactive compound for drug preparation against bone loss.

Resumo Com a aplicação do método in-silico, o resveratrol foi ancorado nas proteínas responsáveis ​​pela perda óssea. Os dados de docking molecular entre o resveratrol e o ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa-Β [Receptor Activator of Nuclear Factor kappa-B Ligant (RANKL)] provaram que o resveratrol se liga fortemente aos receptores, mostraram as afinidades de ligação mais altas de −6,9, −7,6, −7,1, −6,9, - 6,7 e -7,1 kcal / mol. De acordo com dados in-vitro, o resveratrol reduziu os osteoclastos após o tratamento de macrófagos derivados da medula óssea [Bone Marrow-derived Macrophage (BMM)] com fator estimulador de colônias de macrófagos [Macrophage Colony-Stimulating Factor (MCSF)] 20ng / ml e RANKL 50ng / ml, com diferentes concentrações de resveratrol (2,5, 10 μg / ml). Durante sete dias, as células foram tratadas com MCSF (20 ng / ml) e RANKL (40 ng / ml) juntamente com éter trimetílico concentrado e resveratrol (2,5, 10 μg / ml) em 12 horas, processo que não afeta a sobrevivência celular. Após a fixação de células de osteoclastos com fixador de formaldeído em lamela de vidro seguido de incubação com 0,1% Triton X-100 em PBS por 5 min, foi realizado posteriormente o procedimento para corar com rodamina faloidina a actina e Hoechst os núcleos. A microscopia de fluorescência foi realizada para ver a distribuição dos filamentos de actina [F.actina]. Finalmente, o resveratrol reduziu a formação do anel de actina. O resveratrol é o melhor composto bioativo para o preparo de medicamentos contra a perda óssea.

Monitoring periodontal lesions and their effects during pregnancy: microbiological aspects of the oral cavity and amniotic fluid in pregnant ewes / Monitoramento de lesões periodontais e seus efeitos na gestação: aspectos microbiológicos da cavidade bucal e líquido amniótico de ovelhas gestantes

Periodontitis affects the teeth supporting tissues, leading to tooth loss and damage to animal health. Evidence in humans suggests that oral microorganisms spread systemically, increasing the risk of pregnancy disorders such as miscarriage, prematurity, and low birth weight. This study aimed to verify whether periodontopathogenic microorganisms reach the transplacental unit, culminating in problems in pregnant ewes. After analyzing the oral cavity, 10 clinically healthy pregnant ewes (OGCH group) and 10 pregnant ewes with periodontitis (OGP group) were selected. The subgingival biofilm was collected for the polymerase chain reaction (PCR) test and amniotic fluid for both the PCR and interleukin (IL) analysis. Peripheral blood was collected for complete blood count, and analyses of IL-6, IL1-ß, and tumor necrosis factor-α were performed. Placental fragments were collected to assess the inflammatory changes using optical microscopy. After giving birth, both the ewes and their lambs were weighed. On clinical examination, a positive correlation between bleeding and suppuration (correlation index - CI=0.54), suppuration and marginal gingivitis (CI=0.34), and marginal gingivitis and edema (CI=0.54) was observed. The weights of the ewes (p=0.013) and their respective lambs (p=0.04) in the OGP group were lower than those of their OGCH group counterparts. The hematological analysis revealed that the OGP group ewes showed a slight increase in the mean corpuscular volume (p=0.2447), segmented cells (p=0.3375), and eosinophils (p=0.3823) when compared with the OGCH group ewes, without a statistical difference. Regarding the microorganisms detected in the oral cavity, there was a significant difference between the occurrence of periodontal pockets and the presence of Fusobacterium necrophorum (p=0.0328), Porphyromonas asaccharolytica (p=0.0392), and the Mollicutes class (p=0.0352). Staphylococcus genus (p=0.9107) and Archaea domain (p=0.7245) were detected in the amniotic samples of both groups, without a significant difference, whereas P. asaccharolytica (p=0.2685) was only detected in one sample in the OGCH group. The expression of cytokine IL-6 in the OGP group differed significantly between the prepartum and postpartum periods (p=0.0039); moreover, it differed significantly in the postpartum period between the OGCH and OGP groups (p=0.0198). Histological examination showed a higher percentage of placental changes in the OGP group (70%) than in the OGCH group, such as the presence of macrophages, neutrophils, plasma cells, and multifocal areas of calcification. These results do not corroborate the hypothesis of dissemination of oral microorganisms to the placental unit, suggesting that it constitutes placental isolation in sheep.

A periodontite afeta os tecidos de suporte dos dentes levando à perda dentária e danos à saúde do animal. Evidências em humanos sugerem que os microrganismos orais se espalham sistemicamente, aumentando o risco de distúrbios da gravidez, como aborto espontâneo, prematuridade e baixo peso ao nascer. Este estudo teve como objetivo verificar se microrganismos periodontopatogênicos atingem a unidade transplacentária, culminando em problemas em ovelhas gestantes. Após análise da cavidade oral, foram selecionadas 10 ovelhas gestantes clinicamente saudáveis (grupo OGCH) e 10 ovelhas gestantes com periodontite (grupo OGP). O biofilme subgengival foi coletado para o teste de reação em cadeia da polimerase (PCR) e o líquido amniótico para teste de PCR e análise de interleucina (IL). Sangue periférico foi coletado para hemograma completo e análises de IL-6, IL1-ß e fator de necrose tumoral-α foram realizadas. Fragmentos de placenta foram coletados para avaliação das alterações inflamatórias por meio de microscopia óptica. Após o parto, as ovelhas e seus cordeiros foram pesados. Ao exame clínico, observou-se correlação positiva entre sangramento e supuração (índice de correlação - IC=0,54), supuração e gengivite marginal (IC=0,34) e gengivite marginal e edema (IC=0,54). Os pesos das ovelhas (p=0,013) e de seus respectivos cordeiros (p=0,04) do grupo OGP foram inferiores aos do grupo OGCH. A análise hematológica revelou que as ovelhas do grupo OGP apresentaram discreto aumento no volume corpuscular médio (p=0,2447), células segmentadas (p=0,3375) e eosinófilos (p=0,3823) quando comparadas com as ovelhas do grupo OGCH, sem diferença estatística diferença. Em relação aos microrganismos detectados na cavidade oral, houve diferença significativa entre a ocorrência de bolsas periodontais e a presença de Fusobacterium necrophorum (p=0,0328), Porphyromonas asaccharolytica (p=0,0392) e da classe Mollicutes (p=0,0352). O gênero Staphylococcus (p=0,9107) e o domínio Archaea (p=0,7245) foram detectados nas amostras amnióticas de ambos os grupos, sem diferença significativa, enquanto P. asaccharolytica (p=0,2685) foi detectado apenas em uma amostra do grupo OGCH. A expressão da citocina IL-6 no grupo OGP diferiu significativamente entre os períodos pré e pós-parto (p=0,0039); além disso, diferiu significativamente no período pós-parto entre os grupos OGCH e OGP (p=0,0198). O exame histológico mostrou maior porcentagem de alterações placentárias no grupo OGP (70%) do que no grupo OGCH, como a presença de macrófagos, neutrófilos, plasmócitos e áreas multifocais de calcificação. Esses resultados não corroboram a hipótese de disseminação de microrganismos orais para a unidade placentária, sugerindo que se trata de um isolamento placentário em ovinos.

Carcinoma de células escamosas em gato - tratamento com quimioterapia metronômica / Squamous cell carcinoma in a cat - treatment with metronomic chemotherapy

Background: Squamous cell carcinoma (SCC) is a malignant neoplasm associated with prolonged exposure to ultraviolet light and lack of skin pigment in white-coated animals. The disease diagnosis is based on the animal's history, clinical signs and histopathology of the samples collected. The therapeutic alternatives are diverse. Among them, one of the most used is the metronomic chemotherapy which is based on the use of cytostatics drugs, applied in low and frequent doses for a longer period of time. One of the mechanisms of action of this type of therapy is the decrease in angiogenesis. Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are simultaneously used to maximize the angiogenic effect. The objective of this study is to report the results of a treatment accomplised with metronomic chemotherapy (cyclophosphamide with meloxicam) in a domestic feline which presented a squamous cell tumor. Case: A 7-year-old female cat, mixed breed, not neutered, weighing 3.5 kg, was assisted at the Veterinary Specialties Teaching Clinic (CEEV) of the Technical University of Machala (UTMACH), presenting bilateral ulcerative lesion in the nasal plane for 5 months. Chronic exposure to sunlight is referred to in the patient's anamnesis. Aspiration cytology performed in the patient revealed an inflammatory process with a predominance of neutrophils and macrophages, and showed absence of neoplastic cells. A treatment based on antibiotics and corticosteroids was adopted. As there were no favorable results, an excisional biopsy procedure was chosen to collect the affected tissues. The result of the histopathological analysis was a level 2 squamous cell carcinoma (SCC). The initial treatment consisted of surgical removal of the tumor and later the use of metronomic chemotherapy based on Cyclophosphamide, Meloxicam, DHA (docosahexaenoic acid) and Sucralfate for 5 months was adopted. At the beginning of the second phase of treatment, the patient developed a macula that progressively diminished. Currently, the patient does not have any recurrence of the diagnosed neoplasm. Discussion: The diagnosis of squamous cell carcinoma was based on clinical and histopathological findings. The macroscopic lesions were crusted ulcers that do not heal in the nasal plane and auricular pavilion, as reported in the literature. SCC is characterized by the infiltration of squamous cells in the dermal layer of the skin, forming epithelial islands with keratin pearls. The histopathological findings of this case present the same characteristics. The climatic conditions of Ecuador, high temperatures with greater incidence of sunlight, hypopigmented areas of the animal's body and chronic exposure to solar radiation are risk factors present in this case that foster the development of this malignant neoplasm. There are multiple treatments to be introduced in this sort of pathology. In this case, surgical removal of the tumor was adopted, followed by metronomic chemotherapy based on cyclophosphamide at 10 mg/m2 and meloxicam at a 0.05 mg/kg per day for a period of time of five months, obtaining favorable results and absence of recurrence. Despite metronomic chemotherapy being easy to administer, with fewer side effects, which includes a better acceptance of care takers who are reluctant to administer conventional chemotherapy, further studies are still necessary in what concerns certain variables such as age, carcinoma level, appropriate dosages and drugs according to each neoplasm.

Study of resveratrol against bone loss by using in-silico and in-vitro methods / Estudo do resveratrol contra a perda óssea usando métodos in silico e in vitro

By applying the in-silico method, resveratrol was docked on those proteins which are responsible for bone loss. The Molecular docking data between the resveratrol and Receptor activator of nuclear factor-kappa-Β ligand [RANKL] receptors proved that resveratrol binds tightly to the receptors, showed the highest binding affinities of −6.9, −7.6, −7.1, −6.9, −6.7, and −7.1 kcal/mol. According to in-vitro data, Resveratrol reduced the osteoclasts after treating Marrow-Derived Macrophages [BMM] with Macrophage colony-stimulating factor [MCSF] 20ng / ml and RANKL 50ng / ml, with different concentrations of resveratrol (2.5, 10 μg / ml) For 7 days, the cells were treated with MCSF (20 ng / ml) and RANKL (40 ng / ml) together with concentrated trimethyl ether and resveratrol (2.5, 10 μg / ml) within 12 hours. Which, not affect cell survival. After fixing osteoclast cells with formaldehyde fixative on glass coverslip followed by incubation with 0.1% Triton X-100 in PBS for 5 min and after that stain with rhodamine phalloidin staining for actin and Hoechst for nuclei. Fluorescence microscopy was performed to see the distribution of filaments actin [F.actin]. Finally, resveratrol reduced the actin ring formation. Resveratrol is the best bioactive compound for drug preparation against bone loss.(AU)

Com a aplicação do método in-silico, o resveratrol foi ancorado nas proteínas responsáveis pela perda óssea. Os dados de docking molecular entre o resveratrol e o ligante do receptor ativador do fator nuclear kappa-Β [Receptor Activator of Nuclear Factor kappa-B Ligant (RANKL)] provaram que o resveratrol se liga fortemente aos receptores, mostraram as afinidades de ligação mais altas de −6,9, −7,6, −7,1, −6,9, - 6,7 e -7,1 kcal / mol. De acordo com dados in-vitro, o resveratrol reduziu os osteoclastos após o tratamento de macrófagos derivados da medula óssea [Bone Marrow derived Macrophage (BMM)] com fator estimulador de colônias de macrófagos [Macrophage Colony-Stimulating Factor (MCSF)] 20ng / ml e RANKL 50ng / ml, com diferentes concentrações de resveratrol (2,5, 10 μg / ml). Durante sete dias, as células foram tratadas com MCSF (20 ng / ml) e RANKL (40 ng / ml) juntamente com éter trimetílico concentrado e resveratrol (2,5, 10 μg / ml) em 12 horas, processo que não afeta a sobrevivência celular. Após a fixação de células de osteoclastos com fixador de formaldeído em lamela de vidro seguido de incubação com 0,1% Triton X-100 em PBS por 5 min, foi realizado posteriormente o procedimento para corar com rodamina faloidina a actina e Hoechst os núcleos. A microscopia de fluorescência foi realizada para ver a distribuição dos filamentos de actina [F.actina]. Finalmente, o resveratrol reduziu a formação do anel de actina. O resveratrol é o melhor composto bioativo para o preparo de medicamentos contra a perda óssea.(AU)

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharidechallenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.

Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).

Down-regulation of complement genes in lipopolysaccharidechallenged zebrafish (Danio rerio) larvae exposed to Indonesian propolis / Regulação negativa dos genes do complemento em larvas de peixe-zebra (Danio rerio) desafiadas com lipopolissacarídeo expostas à própolis indonésia

Although propolis has been reported for having anti-inflammatory activities, its effects on complement system has not been much studied. This research was conducted to find out the effects of Indonesian propolis on the expression levels of C3, C1r/s, Bf, MBL, and C6 in zebrafish larvae which were induced by lipopolysaccharide (LPS). Counting of macrophages migrating to yolk sac and liver histology were carried out. Larvae were divided into four groups: CON (cultured in E3 medium only), LPS (cultured in a medium containing 0.5 μg/L LPS), LPSIBU (cultured in a medium containing LPS, and then treated with 100 μg/L ibuprofen for 24 hours), and LPSPRO (cultured in a medium containing LPS, and then immersed in 14,000 μg/L propolis for 24 hours) groups. The results showed that complement gene expression in larvae from the LPSIBU and LPSPRO groups were generally lower than in larvae from the LPS group. The number of macrophage migrations to the yolk in the LPSPRO group was also lower than in the LPS group. Histological structure of liver in all groups were considered normal. This study shows that Indonesian propolis has the potential to be used as an alternative to the substitution of NSAIDs.(AU)

Embora a própolis tenha sido relatada por ter atividade anti-inflamatória, seus efeitos no sistema complemento, uma parte do sistema imunológico inato, não foram muito estudados. Esta pesquisa foi conduzida para descobrir os efeitos da própolis da Indonésia nos níveis de expressão de C3, C1r/s, Bf, MBL e C6 em larvas de peixe-zebra induzidas por lipopolissacarídeo (LPS). Foram realizadas contagens de macrófagos que migram para o saco vitelino e histologia do fígado. As larvas foram divididas em quatro grupos: CON (cultivadas apenas em meio E3), LPS (cultivadas em meio contendo 0,5 μg/L de LPS), LPSIBU (cultivadas em meio contendo LPS e, em seguida, tratadas com 100 μg/L de ibuprofeno por 24 horas) e LPSPRO (cultivado em meio contendo LPS, e então imerso em própolis 14,000 μg/L por 24 horas). Os resultados mostraram que a expressão do gene do complemento em larvas dos grupos LPSIBU e LPSPRO foi geralmente menor que em larvas do grupo LPS. O número de migrações de macrófagos para a gema no grupo LPSPRO também foi menor que no grupo LPS. A estrutura histológica do fígado em todos os grupos foi considerada normal. Este estudo mostra que a própolis indonésia tem potencial para ser utilizada como alternativa na substituição dos AINEs (anti-inflamatórios não esteroides).(AU)