Analysis of the toxicological and pharmacokinetic profile of Kaempferol-3-O--D-(6-E-p-coumaryl) glucopyranoside - Tiliroside: in silico, in vitro and ex vivo assay

Abstract Tiliroside is a glycosidic flavonoid present in many plants species including Helicteres velutina K. Schum (Malvaceae sensu lato), commonly known in Brazil as pitó. This molecule has been shown to have many biological activities, however no study has been carried out to investigate the toxicity of this substance. The present work aimed to evaluate the possible cellular toxicity in silico, in vitro and ex-vivo of the kaempferol-3-O--D-(6-E-p-coumaroyl) glucopyranoside (tiliroside), through chemical structure analysis, toxicity assessment and predictive bioactive properties, using human samples for in vitro and ex-vivo tests. The in silico analysis suggests that tiliroside exhibited great absorption index when penetrating biological membranes. In addition, it also displayed considerable potential for cellular protection against free radicals, and anticarcinogenic, antioxidant, antineoplastic, anti-inflammatory, anti-hemorrhagic and antithrombotic activities. The assessment of the hemolytic and genotoxic effects of tiliroside showed low hemolysis rates in red blood cells and absence of cellular toxicity in the oral mucosa cells. The data obtained indicate that this molecule could be a promising therapeutic approach as a possible new drug with biotechnological potential.

Resumo O tilirosídeo é um flavonóide glicosídico presente em muitas espécies de plantas, incluindo Helicteres velutina K. Schum (Malvaceae sensu lato), conhecida no Brasil como pitó. Esta molécula mostrou ter muitas atividades biológicas, porém nenhum estudo foi realizado para investigar a toxicidade dessa substância. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a possível toxicidade celular in silico, in vitro e ex-vivo do kaempferol-3-O--D- (6 -Ep-coumaroil) glucopiranosídeo (tilirosídeo), por meio de análises de estrutura química, toxicidade avaliação e propriedades bioativas preditivas, utilizando amostras humanas para testes in vitro e ex-vivo. A análise in silico sugere que o tilirosídeo exibe bom índice de absorção para penetrar nas membranas biológicas. Além disso, apresentou considerável potencial de proteção celular contra os radicais livres e com atividades anticarcinogênica, antioxidante, antineoplásica, antiinflamatória, anti-hemorrágica e antitrombótica. A avaliação dos efeitos hemolíticos e genotóxicos do tilirosídeo mostrou baixas taxas de hemólise nas hemácias e ausência de toxicidade em células da mucosa oral. Os dados obtidos indicam que esta molécula pode possuir uma abordagem terapêutica promissora como uma possível nova droga com potencial biotecnológico.

Comparative study of bullfrog (Rana catebeiana) skin preservation for use as a biomaterial / Estudo comparativo de meios de conservação de pele de rã-touro (Rana catesbeiana) para utilização como biomaterial

The use of biological membranes in wound dressings has increasingly become a reality. Accordingly, an ideal means of preservation is sought that can provide tissue maintenance for long periods without interfering with its quality or clinical applicability. Therefore, the objective of the present study was to evaluate and histologically and microbiologically compare frog skins subjected to two different preservation methods. Sixteen frog skins were evaluated and, depending on the preservation method, subdivided into two groups with eight skins each, namely, the Freezing Group, in which the skins were frozen at -4º in a 20% glycerin solution; and the Glycerin Group, whose skins were kept in 98% glycerin at room temperature (average of 28 ºC and average humidity of 78%). The skins were analyzed fresh (T0) and at 30 (T1), 60 (T2), 90 (T3), and 120 (T4) days of preservation. Data were analyzed comparatively. There was no bacterial or fungal growth, and the skin structure and collagen arrangement remained intact at all time points in both treatments. In conclusion, both preservation methods are efficient and capable of maintaining the tissue morphological structure and preventing the growth and proliferation of contaminants for up to 120 days.

A utilização de membranas biológicas em curativos tem se tornado cada vez mais uma realidade. Concomitante, busca-se um meio de conservação ideal que possa proporcionar a manutenção do tecido por longos períodos de tempo sem interferir em sua qualidade e aplicabilidade clínica. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi o de avaliar e comparar histologicamente e microbiologicamente peles de rã submetidas a dois diferentes métodos de conservação. Foram avaliadas 16 peles de rã-touro as quais foram, em função do método de conservação, subdivididas em dois grupos com 08 peles cada: O Grupo Congelamento (GC) no qual as peles foram submetidas ao congelamento a -4º, em solução de glicerina a 20%; e o grupo Glicerina (GG), no qual as peles foram conservadas em temperatura ambiente (média de 28ºC e umidade média de 78%) em glicerina a 98%. As peles foram analisadas a fresco (T0) e com 30 (T1), 60 (T2), 90 (T3) e 120 (T4) dias de conservação. Os dados foram analisados de forma comparativa. Em todos os tempos analisados e em ambos os tratamentos, não houve crescimento bacteriano ou fúngico e a estrutura da pele e o arranjo de colágeno mantiveram-se íntegros. Conclui-se que, ambos os métodos de conservação são eficientes e capazes de manter a estrutura morfológica tecidual, e impedem o crescimento e a proliferação de contaminantes por até 120 dias.

Analysis of the toxicological and pharmacokinetic profile of Kaempferol-3-O-ß-D-(6"-E-p-coumaryl) glucopyranoside - Tiliroside: in silico, in vitro and ex vivo assay / Análise do perfil toxicológico e farmacocinético de Kaempferol-3-O-ß-D- (6 "-E-p-cumaril) glucopiranosídeo - Tilirosídeo: ensaio in silico, in vitro e ex vivo

Abstract Tiliroside is a glycosidic flavonoid present in many plants species including Helicteres velutina K. Schum (Malvaceae sensu lato), commonly known in Brazil as "pitó". This molecule has been shown to have many biological activities, however no study has been carried out to investigate the toxicity of this substance. The present work aimed to evaluate the possible cellular toxicity in silico, in vitro and ex-vivo of the kaempferol-3-O-β-D-(6"-E-p-coumaroyl) glucopyranoside (tiliroside), through chemical structure analysis, toxicity assessment and predictive bioactive properties, using human samples for in vitro and ex-vivo tests. The in silico analysis suggests that tiliroside exhibited great absorption index when penetrating biological membranes. In addition, it also displayed considerable potential for cellular protection against free radicals, and anticarcinogenic, antioxidant, antineoplastic, anti-inflammatory, anti-hemorrhagic and antithrombotic activities. The assessment of the hemolytic and genotoxic effects of tiliroside showed low hemolysis rates in red blood cells and absence of cellular toxicity in the oral mucosa cells. The data obtained indicate that this molecule could be a promising therapeutic approach as a possible new drug with biotechnological potential.

Resumo O tilirosídeo é um flavonóide glicosídico presente em muitas espécies de plantas, incluindo Helicteres velutina K. Schum (Malvaceae sensu lato), conhecida no Brasil como "pitó". Esta molécula mostrou ter muitas atividades biológicas, porém nenhum estudo foi realizado para investigar a toxicidade dessa substância. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a possível toxicidade celular in silico, in vitro e ex-vivo do kaempferol-3-O-β-D- (6 "-Ep-coumaroil) glucopiranosídeo (tilirosídeo), por meio de análises de estrutura química, toxicidade avaliação e propriedades bioativas preditivas, utilizando amostras humanas para testes in vitro e ex-vivo. A análise in silico sugere que o tilirosídeo exibe bom índice de absorção para penetrar nas membranas biológicas. Além disso, apresentou considerável potencial de proteção celular contra os radicais livres e com atividades anticarcinogênica, antioxidante, antineoplásica, antiinflamatória, anti-hemorrágica e antitrombótica. A avaliação dos efeitos hemolíticos e genotóxicos do tilirosídeo mostrou baixas taxas de hemólise nas hemácias e ausência de toxicidade em células da mucosa oral. Os dados obtidos indicam que esta molécula pode possuir uma abordagem terapêutica promissora como uma possível nova droga com potencial biotecnológico.

Analysis of the toxicological and pharmacokinetic profile of Kaempferol-3-O-β-D-(6"-E-p-coumaryl) glucopyranoside - Tiliroside: in silico, in vitro and ex vivo assay / Análise do perfil toxicológico e farmacocinético de Kaempferol-3-O-β D-(6"-E-p-cumaril) glucopiranosídeo - Tilirosídeo: ensaio in silico, in vitro e ex vivo

Tiliroside is a glycosidic flavonoid present in many plants species including Helicteres velutina K. Schum (Malvaceae sensu lato), commonly known in Brazil as "pitó". This molecule has been shown to have many biological activities, however no study has been carried out to investigate the toxicity of this substance. The present work aimed to evaluate the possible cellular toxicity in silico, in vitro and ex-vivo of the kaempferol-3-O-β-D-(6”-E-p-coumaroyl) glucopyranoside (tiliroside), through chemical structure analysis, toxicity assessment and predictive bioactive properties, using human samples for in vitro and ex-vivo tests. The in silico analysis suggests that tiliroside exhibited great absorption index when penetrating biological membranes. In addition, it also displayed considerable potential for cellular protection against free radicals, and anticarcinogenic, antioxidant, antineoplastic, anti-inflammatory, anti-hemorrhagic and antithrombotic activities. The assessment of the hemolytic and genotoxic effects of tiliroside showed low hemolysis rates in red blood cells and absence of cellular toxicity in the oral mucosa cells. The data obtained indicate that this molecule could be a promising therapeutic approach as a possible new drug with biotechnological potential.

O tilirosídeo é um flavonóide glicosídico presente em muitas espécies de plantas, incluindo Helicteres velutina K. Schum (Malvaceae sensu lato), conhecida no Brasil como “pitó”. Esta molécula mostrou ter muitas atividades biológicas, porém nenhum estudo foi realizado para investigar a toxicidade dessa substância. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a possível toxicidade celular in silico, in vitro e ex-vivo do kaempferol-3-O-β-D- (6 ”-Ep-coumaroil) glucopiranosídeo (tilirosídeo), por meio de análises de estrutura química, toxicidade avaliação e propriedades bioativas preditivas, utilizando amostras humanas para testes in vitro e ex-vivo. A análise in silico sugere que o tilirosídeo exibe bom índice de absorção para penetrar nas membranas biológicas. Além disso, apresentou considerável potencial de proteção celular contra os radicais livres e com atividades anticarcinogênica, antioxidante, antineoplásica, antiinflamatória, anti-hemorrágica e antitrombótica. A avaliação dos efeitos hemolíticos e genotóxicos do tilirosídeo mostrou baixas taxas de hemólise nas hemácias e ausência de toxicidade em células da mucosa oral. Os dados obtidos indicam que esta molécula pode possuir uma abordagem terapêutica promissora como uma possível nova droga com potencial biotecnológico.

Analysis of the toxicological and pharmacokinetic profile of Kaempferol-3-O-β-D-(6"-E-p-coumaryl) glucopyranoside - Tiliroside: in silico, in vitro and ex vivo assay / Análise do perfil toxicológico e farmacocinético de Kaempferol-3-O-β D-(6"-E-p-cumaril) glucopiranosídeo - Tilirosídeo: ensaio in silico, in vitro e ex vivo

Tiliroside is a glycosidic flavonoid present in many plants species including Helicteres velutina K. Schum (Malvaceae sensu lato), commonly known in Brazil as "pitó". This molecule has been shown to have many biological activities, however no study has been carried out to investigate the toxicity of this substance. The present work aimed to evaluate the possible cellular toxicity in silico, in vitro and ex-vivo of the kaempferol-3-O-β-D-(6”-E-p-coumaroyl) glucopyranoside (tiliroside), through chemical structure analysis, toxicity assessment and predictive bioactive properties, using human samples for in vitro and ex-vivo tests. The in silico analysis suggests that tiliroside exhibited great absorption index when penetrating biological membranes. In addition, it also displayed considerable potential for cellular protection against free radicals, and anticarcinogenic, antioxidant, antineoplastic, anti-inflammatory, anti-hemorrhagic and antithrombotic activities. The assessment of the hemolytic and genotoxic effects of tiliroside showed low hemolysis rates in red blood cells and absence of cellular toxicity in the oral mucosa cells. The data obtained indicate that this molecule could be a promising therapeutic approach as a possible new drug with biotechnological potential.(AU)

O tilirosídeo é um flavonóide glicosídico presente em muitas espécies de plantas, incluindo Helicteres velutina K. Schum (Malvaceae sensu lato), conhecida no Brasil como “pitó”. Esta molécula mostrou ter muitas atividades biológicas, porém nenhum estudo foi realizado para investigar a toxicidade dessa substância. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a possível toxicidade celular in silico, in vitro e ex-vivo do kaempferol-3-O-β-D- (6 ”-Ep-coumaroil) glucopiranosídeo (tilirosídeo), por meio de análises de estrutura química, toxicidade avaliação e propriedades bioativas preditivas, utilizando amostras humanas para testes in vitro e ex-vivo. A análise in silico sugere que o tilirosídeo exibe bom índice de absorção para penetrar nas membranas biológicas. Além disso, apresentou considerável potencial de proteção celular contra os radicais livres e com atividades anticarcinogênica, antioxidante, antineoplásica, antiinflamatória, anti-hemorrágica e antitrombótica. A avaliação dos efeitos hemolíticos e genotóxicos do tilirosídeo mostrou baixas taxas de hemólise nas hemácias e ausência de toxicidade em células da mucosa oral. Os dados obtidos indicam que esta molécula pode possuir uma abordagem terapêutica promissora como uma possível nova droga com potencial biotecnológico.(AU)

Fixation of pfcrt chloroquine resistance alleles in Plasmodium falciparum clinical isolates collected from unrest tribal agencies of Pakistan / Fixação de alelos de resistência à cloroquina pfcrt em isolados clínicos de Plasmodium falciparum coletados de agitações de agências tribais do Paquistão

Abstract Plasmodium falciparum resistance to Chloroquine (CQ) is a significant cause of mortality and morbidity worldwide. There is a paucity of documented data on the prevalence of CQ-resistant mutant haplotypes of Pfcrt and Pfmdr1 genes from malaria-endemic war effected Federally Administered Tribal Areas of Pakistan. The objective of this study was to investigate the prevalence of P. falciparum CQ-resistance in this area. Clinical isolates were collected between May 2017 and May 2018 from North Waziristan and South Waziristan agencies of Federally Administrated Trial Area. Subsequently, Giemsa-stained blood smears were examined to detect Plasmodium falciparum. Extraction of malarial DNA was done from microscopy positive P. falciparum samples, and P. falciparum infections were confirmed by nested PCR (targeting Plasmodium small subunit ribosomal ribonucleic acid (ssrRNA) genes). All PCR confirmed P. falciparum samples were sequenced by pyrosequencing to find out mutation in Pfcrt gene at codon K76T and in pfmdr1 at codons N86Y, Y184F, N1042D, and D1246Y. Out of 121 microscopies positive P. falciparum cases, 109 samples were positive for P. falciparum by nested PCR. Pfcrt K76T mutation was found in 96% of isolates, Pfmdr1 N86Y mutation was observed in 20%, and 11% harboured Y184F mutation. All samples were wild type for Pfmdr1 codon N1042D and D1246Y. In the FATA, Pakistan, the frequency of resistant allele 76T remained high despite the removal of CQ. However, current findings of the study suggest complete fixation of P. falciparum CQ-resistant genotype in the study area.

Resumo A resistência do Plasmodium falciparum à cloroquina (CQ) é uma causa significativa de mortalidade e morbidade em todo o mundo. Há uma escassez de dados documentados sobre a prevalência de haplótipos mutantes CQ-resistentes dos genes Pfcrt e Pfmdr1 da guerra endêmica da malária em áreas tribais administradas pelo governo federal do Paquistão. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de resistência a CQ de P. falciparum nesta área. Isolados clínicos foram coletados entre maio de 2017 e maio de 2018 nas agências do Waziristão do Norte e do Waziristão do Sul da Área de Ensaio Administrada Federalmente. Posteriormente, esfregaços de sangue corados com Giemsa foram examinados para detectar Plasmodium falciparum. A extração do DNA da malária foi feita a partir de amostras de P. falciparum positivas para microscopia, e as infecções por P. falciparum foram confirmadas por nested PCR (visando genes de ácido ribonucleico ribossômico de subunidade pequena de Plasmodium (ssrRNA)). Todas as amostras de P. falciparum confirmadas por PCR foram sequenciadas por pirosequenciamento para descobrir a mutação no gene Pfcrt no códon K76T e em pfmdr1 nos códons N86Y, Y184F, N1042D e D1246Y. De 121 microscopias de casos positivos de P. falciparum, 109 amostras foram positivas para P. falciparum por nested PCR. A mutação Pfcrt K76T foi encontrada em 96% dos isolados, a mutação Pfmdr1 N86Y foi observada em 20% e 11% abrigou a mutação Y184F. Todas as amostras eram do tipo selvagem para o códon N1042D e D1246Y de Pfmdr1. No FATA, Paquistão, a frequência do alelo resistente 76T permaneceu alta apesar da remoção de CQ. No entanto, as descobertas atuais do estudo sugerem a fixação completa do genótipo resistente a CQ de P. falciparum na área de estudo.

Effect of sheep diets with macadamia by-product and protected fat on the quality of fresh and frozen semen / Efeito de dietas de ovinos com coproduto de macadâmia e gordura protegida na qualidade de sêmen fresco e congelado

The ruminant diet is characterized by low lipid concentration, resulting from traditional diets composed by forage species. The use of agro industrial byproducts in animal feed may be interesting, once it reduces production costs and reduces environmental contamination. Among them, macadamia is known for interesting protein and carbohydrate contents; however, it is the amount of lipids that make it different. Fat supplementation can raise concentrations of blood cholesterol, a precursor metabolite of steroid hormones, which constitute biological membranes and possess specific and essential biological activities. The semen characteristics should be taken into account in the selection of the breeding herds, and the semen analysis makes it possible to evaluate the fertility of the sheep and allows obtaining important conclusions based on its results. The objective was to evaluate the seminal quality of Morada Nova sheep breed consuming diets supplemented with macadamia residue and protected fat. The experiment was carried out with 24 rams aged 18 or 30 months, distributed in four treatment groups: control (C), 50 g (MAC50) or 150 g (MAC150) of macadamia industrial byproduct; and 50 g of protected fat (Megalac®), added to the concentrate. Semen was collected at four intervals: before supplementation (day 0), 30, 60 and 75 days after the beginning of supplementation, and it was taken the measurements of volume, appearance, motility, vigour, turbulence, concentration and morphology. At days 60 and 75, semen was frozen for determination of plasma membrane integrity, acrosome integrity and mitochondrial activity after thawing. Analysis of variance was performed and the means were compared by the SNK test. In the analysis of fresh semen, a significant effect (p0.05). The inclusion of 50 or 150 g of macadamia residue or 50 g of Megalac in the...

A dieta dos ruminantes é caracterizada por baixa concentração de lipídeos, resultante de dietas tradicionais compostas por espécies forrageiras. A utilização de coprodutos agroindustriais na alimentação animal pode ser interessante, pois além de reduzir custos na produção, reduz a contaminação ambiental. Dentre eles a macadâmia é conhecida por teores interessantes de proteína e de carboidratos; entretanto é a quantidade de lipídeos que a torna diferenciada. A suplementação de gordura pode elevar as concentrações de colesterol sanguíneo, metabólito precursor dos hormônios esteroides, que constituem membranas biológicas e possuem atividades biológicas específicas e essenciais. As características seminais devem ser levadas em consideração na seleção dos reprodutores, sendo que a análise do sêmen possibilita avaliar a fertilidade do carneiro e permite obter importantes conclusões a partir dos seus resultados. O objetivo foi avaliar a qualidade seminal de carneiros Morada Nova consumindo dietas suplementadas com resíduo de macadâmia e gordura protegida. O experimento foi conduzido com 24 carneiros, com idade entre 18 e 30 meses, distribuídos em quatro grupos de tratamento: controle (C), 50 g (MAC50) ou 150 g (MAC150) de subproduto industrial da macadâmia; e 50 g de gordura protegida (Megalac®), adicionados ao concentrado. O sêmen foi coletado em quatro intervalos: antes da suplementação (dia 0), 30, 60 e 75 dias após o início da suplementação. O sêmen foi coletado para avaliação do volume, aparência, motilidade, vigor, turbilhonamento, concentração e morfologia. Nos dias 60 e 75, o sêmen foi congelado para determinação da integridade da membrana plasmática, integridade do acrossoma e atividade mitocondrial após o descongelamento. A análise de variância foi realizada e as médias comparadas pelo teste SNK. Na análise do sêmen fresco, foi observado efeito significativo (p<0,05) dos tratamentos na motilidade. Para...

Effect of sheep diets with macadamia by-product and protected fat on the quality of fresh and frozen semen / Efeito de dietas de ovinos com coproduto de macadâmia e gordura protegida na qualidade de sêmen fresco e congelado

The ruminant diet is characterized by low lipid concentration, resulting from traditional diets composed by forage species. The use of agro industrial byproducts in animal feed may be interesting, once it reduces production costs and reduces environmental contamination. Among them, macadamia is known for interesting protein and carbohydrate contents; however, it is the amount of lipids that make it different. Fat supplementation can raise concentrations of blood cholesterol, a precursor metabolite of steroid hormones, which constitute biological membranes and possess specific and essential biological activities. The semen characteristics should be taken into account in the selection of the breeding herds, and the semen analysis makes it possible to evaluate the fertility of the sheep and allows obtaining important conclusions based on its results. The objective was to evaluate the seminal quality of Morada Nova sheep breed consuming diets supplemented with macadamia residue and protected fat. The experiment was carried out with 24 rams aged 18 or 30 months, distributed in four treatment groups: control (C), 50 g (MAC50) or 150 g (MAC150) of macadamia industrial byproduct; and 50 g of protected fat (Megalac®), added to the concentrate. Semen was collected at four intervals: before supplementation (day 0), 30, 60 and 75 days after the beginning of supplementation, and it was taken the measurements of volume, appearance, motility, vigour, turbulence, concentration and morphology. At days 60 and 75, semen was frozen for determination of plasma membrane integrity, acrosome integrity and mitochondrial activity after thawing. Analysis of variance was performed and the means were compared by the SNK test. In the analysis of fresh semen, a significant effect (p<0.05) of the treatments on motility was observed. For cryopreserved semen, there was no significate difference (p>0.05). The inclusion of 50 or 150 g of macadamia residue or 50 g of Megalac in the...(AU)

A dieta dos ruminantes é caracterizada por baixa concentração de lipídeos, resultante de dietas tradicionais compostas por espécies forrageiras. A utilização de coprodutos agroindustriais na alimentação animal pode ser interessante, pois além de reduzir custos na produção, reduz a contaminação ambiental. Dentre eles a macadâmia é conhecida por teores interessantes de proteína e de carboidratos; entretanto é a quantidade de lipídeos que a torna diferenciada. A suplementação de gordura pode elevar as concentrações de colesterol sanguíneo, metabólito precursor dos hormônios esteroides, que constituem membranas biológicas e possuem atividades biológicas específicas e essenciais. As características seminais devem ser levadas em consideração na seleção dos reprodutores, sendo que a análise do sêmen possibilita avaliar a fertilidade do carneiro e permite obter importantes conclusões a partir dos seus resultados. O objetivo foi avaliar a qualidade seminal de carneiros Morada Nova consumindo dietas suplementadas com resíduo de macadâmia e gordura protegida. O experimento foi conduzido com 24 carneiros, com idade entre 18 e 30 meses, distribuídos em quatro grupos de tratamento: controle (C), 50 g (MAC50) ou 150 g (MAC150) de subproduto industrial da macadâmia; e 50 g de gordura protegida (Megalac®), adicionados ao concentrado. O sêmen foi coletado em quatro intervalos: antes da suplementação (dia 0), 30, 60 e 75 dias após o início da suplementação. O sêmen foi coletado para avaliação do volume, aparência, motilidade, vigor, turbilhonamento, concentração e morfologia. Nos dias 60 e 75, o sêmen foi congelado para determinação da integridade da membrana plasmática, integridade do acrossoma e atividade mitocondrial após o descongelamento. A análise de variância foi realizada e as médias comparadas pelo teste SNK. Na análise do sêmen fresco, foi observado efeito significativo (p<0,05) dos tratamentos na motilidade. Para...(AU)

The influence of Tween 80 on laccase production by Pleurotus sajor-caju and the efficiency of crude enzyme broth in the removal of bisphenol-A / Influência do Tween 80 na produção de lacases de Pleurotus sajor-caju e eficiência do caldo enzimático bruto na remoção de bisfenol-A

Bisphenol-A is currently considered an environmental pollutant, capable of interfering in the endocrine system of organisms and causing alterations in its development and reproductive system. An alternative method to the chemical treatment of this pollutant has been the use of oxidative enzymes, especially laccases produced by fungi. In order to reduce production costs, agro-industrial waste can be used in the culture medium composition. Nonionic surfactants, which are only slightly toxic to biological membranes, can be applied, as well as Tween 80, to facilitate the excretion of these enzymes into the culture medium. The objectives of this work were: a) characterize the immersion water of banana straw used in the formulation of the culture medium; b) evaluate laccase production by Pleurotus sajor-caju in culture medium with and without addition of Tween 80, through shaken flasks; c) evaluate the efficiency of the crude enzyme broth in degrading bisphenol-A. The shaken flasks were incubated at 30°C for 12 days. The immersion water had a C:N ratio of 13.8, ash percentage of 28.6%, and pH close to neutrality. The addition of Tween 80 on the culture medium (7.5%, m/v) yielded laccase activity and productivity values equal to 3,016.47 U L-1 and 502.7 U L-1 day-1, respectively. These values were 50 and 33.5 times higher than those obtained in the culture medium without addition of Tween 80 for laccase activity and productivity, respectively. The crude enzyme broth degraded 100% of bisphenol-A after 48 hours, regardless of concentration (500, 750 and 1,000 mg L-1).(AU)

O bisfenol-A é considerado um poluente ambiental capaz de interferir no sistema endócrino dos organismos, ocasionando alterações em seu desenvolvimento e sistema de reprodução. Um método alternativo ao tratamento químico desse tipo de poluente tem sido a utilização de enzimas oxidativas, especialmente as lacases, produzidas por fungos. A fim de diminuir custos de produção, resíduos agroindustriais podem compor o meio de cultivo. Assim, surfactantes não iônicos e pouco tóxicos para as membranas biológicas, como o Tween 80, podem ser utilizados para facilitar a excreção dessas enzimas para o meio de cultivo. Os objetivos deste trabalho foram: caracterizar quimicamente o resíduo água de imersão de palha de bananeira, usado na formulação do meio de cultivo; avaliar a produção de lacase por Pleurotus sajor-caju em meio de cultivo líquido (frascos Erlenmeyer) com e sem adição de Tween 80; e avaliar a eficiência do caldo enzimático bruto em degradar bisfenol-A. Os frascos foram incubados a 30°C, por 12 dias. A água de imersão apresentou relação C:N 13,8, percentual de cinzas 28,6% e pH próximo da neutralidade. O cultivo adicionado de Tween 80 (7,5%, m/v) propiciou valores de atividade e produtividade em lacase iguais a 3.016,47 U L-1 e 502,7 U L-1 dia-1, respectivamente. Esses valores são 50 e 33,5 vezes maiores que os obtidos no cultivo sem adição de Tween 80, para atividade e produtividade em lacase, respectivamente. O caldo enzimático bruto degradou 100% do bisfenol-A após 48 horas, independentemente da concentração (500, 750 e 1.000 mg L-1).(AU)

The influence of Tween 80 on laccase production by Pleurotus sajor-caju and the efficiency of crude enzyme broth in the removal of bisphenol-A / Influência do Tween 80 na produção de lacases de Pleurotus sajor-caju e eficiência do caldo enzimático bruto na remoção de bisfenol-A

Bisphenol-A is currently considered an environmental pollutant, capable of interfering in the endocrine system of organisms and causing alterations in its development and reproductive system. An alternative method to the chemical treatment of this pollutant has been the use of oxidative enzymes, especially laccases produced by fungi. In order to reduce production costs, agro-industrial waste can be used in the culture medium composition. Nonionic surfactants, which are only slightly toxic to biological membranes, can be applied, as well as Tween 80, to facilitate the excretion of these enzymes into the culture medium. The objectives of this work were: a) characterize the immersion water of banana straw used in the formulation of the culture medium; b) evaluate laccase production by Pleurotus sajor-caju in culture medium with and without addition of Tween 80, through shaken flasks; c) evaluate the efficiency of the crude enzyme broth in degrading bisphenol-A. The shaken flasks were incubated at 30°C for 12 days. The immersion water had a C:N ratio of 13.8, ash percentage of 28.6%, and pH close to neutrality. The addition of Tween 80 on the culture medium (7.5%, m/v) yielded laccase activity and productivity values equal to 3,016.47 U L-1 and 502.7 U L-1 day-1, respectively. These values were 50 and 33.5 times higher than those obtained in the culture medium without addition of Tween 80 for laccase activity and productivity, respectively. The crude enzyme broth degraded 100% of bisphenol-A after 48 hours, regardless of concentration (500, 750 and 1,000 mg L-1).(AU)

O bisfenol-A é considerado um poluente ambiental capaz de interferir no sistema endócrino dos organismos, ocasionando alterações em seu desenvolvimento e sistema de reprodução. Um método alternativo ao tratamento químico desse tipo de poluente tem sido a utilização de enzimas oxidativas, especialmente as lacases, produzidas por fungos. A fim de diminuir custos de produção, resíduos agroindustriais podem compor o meio de cultivo. Assim, surfactantes não iônicos e pouco tóxicos para as membranas biológicas, como o Tween 80, podem ser utilizados para facilitar a excreção dessas enzimas para o meio de cultivo. Os objetivos deste trabalho foram: caracterizar quimicamente o resíduo água de imersão de palha de bananeira, usado na formulação do meio de cultivo; avaliar a produção de lacase por Pleurotus sajor-caju em meio de cultivo líquido (frascos Erlenmeyer) com e sem adição de Tween 80; e avaliar a eficiência do caldo enzimático bruto em degradar bisfenol-A. Os frascos foram incubados a 30°C, por 12 dias. A água de imersão apresentou relação C:N 13,8, percentual de cinzas 28,6% e pH próximo da neutralidade. O cultivo adicionado de Tween 80 (7,5%, m/v) propiciou valores de atividade e produtividade em lacase iguais a 3.016,47 U L-1 e 502,7 U L-1 dia-1, respectivamente. Esses valores são 50 e 33,5 vezes maiores que os obtidos no cultivo sem adição de Tween 80, para atividade e produtividade em lacase, respectivamente. O caldo enzimático bruto degradou 100% do bisfenol-A após 48 horas, independentemente da concentração (500, 750 e 1.000 mg L-1).(AU)

AVALIAÇÃO TENSIOMÉTRICA E MICROBIOLÓGICA DO PERICÁRDIO BOVINO CONSERVADO EM DIFERENTES MEIOS

As membranas biológicas são tecidos compostos principalmente de colágeno e utilizadas de forma a servir de arcabouço em cirurgias reparadoras. Dentre os tecidos utilizados para essa finalidade, há o pericárdio, que é basicamente composto por tecido colágeno e uma fina camada de células epiteliais, suportando boa carga de tração em ensaios biomecânicos. O principal meio utilizado para conservação dessas membranas nas últimas décadas foi a glicerina 98%. Este trabalho objetivou analisar, primeiramente, se há diferenças na tração de acordo com o sentido da coleta em pericárdios bovinos, avaliar diferentes meios de conservação, por até 4 meses. Foi padronizado a abertura do pericárdio no sentido do maior eixo do coração (da base para o ápice), depois com a utilização de um molde realizado a coleta dos corpos de prova com 1 cm de largura e 4 cm de comprimento em sentido paralelo e perpendicular, ao corte de padronização. Foram utilizados 20 pericárdios provenientes de animais machos ou fêmeas, entre 18 e 32 meses, os pericárdios foram lavados em água corrente realizado a sua limpeza para retirada de gordura e os corpos de prova colocados para ensaio biomecânico de tração. Após a padronização do sentido de coleta perpendicular, foram colocados 14 pericárdios bovinos, utilizando o mesmo sentido de corte padronizado, colocados em caixas contendo os seguintes meios glicerina, propilenoglicol, etilenoglicol, butanol, álcool etílico e solução salina a 150%. Os meios foram avaliados mensalmente para cultura microbiológica e as membranas para ensaios biomecânicos de tração. Foi observado diferença significativa da força máxima de ruptura no sentido de coleta perpendicular ao maior eixo do coração, do que o sentido paralelo. Portanto foi padronizado o sentido de coleta perpendicular para as amostras que foram colocadas nos meios de conservação. Foi observado o aumento de força de ruptura significativamente das membranas conservadas no butanol nos períodos 30, 60 e 120 dias e no etilenoglicol com 30 dias. Já a força de deformação só não foi observada diferença estatística comparando o pericárdio fresco as membranas armazenadas no cloreto de sódio a 150%. Foi observado crescimento microbiológico somente no etilenoglicol e solução salina a 150% no momento 60 dias, nos outros meios não foi observado crescimento microbiológico. Todos os meios se demostraram viáveis para a conservação do pericárdio bovino, sendo que o butanol e o etilenoglicol proporcionaram maior resistência.

Biological membranes are tissues composed mainly of collagen and used in order to serve as a framework in reparative surgeries. Among the tissues used for this purpose, there is the pericardium, which is basically composed of collagen tissue and a thin layer of epithelial cells, supporting a good traction load in biomechanical tests. The main means used for the conservation of these membranes in the last decades was glycerin 98%. This work aimed to analyze, first, if there are differences in traction according to the direction of collection in bovine pericardiums, to evaluate different means of conservation, for up to 4 months. The opening of the pericardium in the direction of the largest axis of the heart (from the base to the apex) was standardized, then with the use of a mold, the specimens were collected 1 cm wide and 4 cm long in a parallel and perpendicular direction, to the standardization cut. Twenty pericardiums from male or female animals were used, between 18 and 32 months, the pericardiums were washed in running water, cleaned to remove fat and the specimens were placed for biomechanical traction testing. After standardizing the direction of perpendicular collection, 14 bovine pericardiums were placed, using the same standardized cutting direction, placed in boxes containing the following media: glycerin, propylene glycol, ethylene glycol, butanol, ethyl alcohol and saline solution 150%. The media were evaluated monthly for microbiological culture and the membranes for biomechanical tensile tests. There was a significant difference in the maximum rupture force in the direction of collection perpendicular to the largest axis of the heart, than in the parallel direction. Therefore, the direction of perpendicular collection was standardized for the samples that were placed in the conservation media. It was observed a significant increase in the breaking strength of the membranes conserved in butanol at periods 30, 60 and 120 days and in ethylene glycol at 30 days. However, the deformation force was not observed only when comparing the fresh pericardium with the membranes stored in sodium chloride 150%. Microbiological growth was observed only in ethylene glycol and saline solution 150% at the time of 60 days, in other media no microbiological growth was observed. All means proved to be viable for the conservation of bovine pericardium, but butanol and ethylene glycol provided greater resistance.

Growth of silver catfish (Rhamdia quelen) exposed to acidic pH at different humic acid levels / Crescimento de jundiás (Rhamdia quelen) expostos ao pH ácido em diferentes níveis de ácido húmico

Humic substances are organic compounds that possess high molecular weight and are formed by the decomposition of plant materials. Humic substances comprise humic acids, fulvic acids and humin. Humic acids (HA) have shown to be able to provide some protection to biological membranes of fish in water with low pH, replacing the protective action of Ca2+. Thus, this studyaimed to observe growth of silver catfish ( Rhamdia quelen ) juveniles exposed to pHs 5.5 and 6.5 and to different levels of HA: 0, 10, 25 and 50mg L-1. Results showed that, irrespective of pH, HA was highly detrimental to silver catfish growth, since the higher the concentration of HA, the lower the weight gain and feed intake, resulting in lower biomass and lower specific growth rate of juveniles. Hence, HA is extremely damaging to the performance of silver catfish juveniles in the tested concentrations.(AU)

Substâncias húmicas são compostos orgânicos que possuem elevado peso molecular e são formadas pela decomposição da matéria orgânica de plantas. As substâncias húmicas compreendem ácidos húmicos, ácidos fúlvicos e humina. Os ácidos húmicos (AH) têm mostrado serem capazes de proporcionar proteção parcial das membranas biológicas de peixes em águas com baixo pH, substituindo a ação protetora do Ca2+. Assim, este estudo teve como objetivo observar o crescimento de juvenis de jundiá ( Rhamdia quelen ) expostos a pH's 5,5 e 6,5 com diferentes níveis de AH: 0, 10, 25 e 50mg L-1. Os resultados demostram que, independentemente do pH, o AH foi altamente prejudicial para o crescimento do jundiá, uma vez que, quanto maior era a concentração de AH, menor era o ganho de peso e a ingestão de alimentos, resultando em menor biomassa e taxa de crescimento específico inferior dos juvenis. Assim, os AH são extremamente prejudiciais para o desempenho de juvenis de jundiá nas concentrações testadas.(AU)

Utilização de pericárdio bovino conservado em glicerina 98% na herniorrafia perineal em cães - relato de 12 casos / Use of bovine pericardium preserved in 98% glycerine in perineal herniorrhaphy in dogs - 12 case studies / Utilización de pericardio bovino conservado en glicerina 98% en la reparación de hernia perineal en perros - relato de 12 casos

A hérnia perineal é uma afecção de alta ocorrência na clínica de pequenos animais. A doença ocorre com maior frequência em cães machos, idosos e não castrados. A etiopatogenia é multifatorial e leva à atrofia da musculatura do diafragma pélvico. Os sinais clínicos dependem muito do conteúdo herniário. O diagnóstico é realizado pelo exame físico e exames complementares. O tratamento clínico é utilizado até o animal ter condição para realização do procedimento cirúrgico que é o de eleição. Várias técnicas cirúrgicas têm sido estudadas para diminuir os índices de recidiva. A utilização de membranas biológicas pode ser usada causando sustentação do diafragma pélvico atrofiado. O pericárdio bovino preservado é muito utilizado para falhas musculares e melhorar a sustentação de tecidos. Vários métodos de preservação de membranas têm sidos utilizados, com grande destaque para glicerina 98%. Foram avaliados 12 cães machos com hérnia perineal, na qual foi utilizado o pericárdio bovino conservado em glicerina 98% associado à técnica tradicional para a herniorrafia e orquiectomia pré-escrotal. Os cães sem raça definida foram os mais acometidos. Em cinco animais foram acometidos ambos os lados do diafragma pélvico. Somente um animal apresentou recidiva. O pericárdio bovino conservado em glicerina 98% possibilitou baixos índices de recidiva nos casos descritos.(AU)

A perineal hernia is a condition of high occurrence in small animal clinics. The disease occurs more frequently in male, elderly and unneutered dogs. The pathogenesis is multifactorial, which leads to atrophy of the muscles of the pelvic diaphragm. Clinical signs depend much of the hernia contents. The diagnosis is made by physical examination and complementary tests. Clinical treatment is used until the animal presents condition for the surgical procedure, which is the election. Several surgical techniques have been studied to reduce the relapse rates. Biological membranes can be used to support the stunted pelvic diaphragm. The preserved bovine pericardium is widely used for muscle failure and to improve tissue support. Various membrane preservation methods have been used, with emphasis to 98% glycerin. A total of 12 male dogs with perineal hernia, in which the bovine pericardium preserved in 98% glycerin associated with the traditional technique of hernia repair and pre scrotal orchiectomy were evaluated. The mongrel dogs were the most affected. In five animals, both side of the pelvic diaphragm were affected. Only one animal had recurrence. The bovine pericardium preserved in 98% glycerin allowed low recurrence rates in the cases described.(AU)

La hernia perineal es una afección de alta ocurrencia en clínica de animales pequeños. La enfermedad se presenta con mayor frecuencia en perros machos, de edad avanzada y no castrados. La patogénesis es multifactorial que conduce a la atrofia de los músculos del diafragma pélvico. Los signos clínicos dependen mucho del contenido de la hernia. El diagnóstico se realiza por exámenes físico y exámenes complementares. El tratamiento clínico es utilizado hasta el animal tener condiciones para realización de procedimiento quirúrgico, que es de elección. Varias técnicas quirúrgicas han sido estudiadas para disminuir las tasas de recurrencia. El uso de membranas biológicas puede ser utilizado, causando apoyo del diafragma pélvico atrofiado. El pericardio bovino conservado es ampliamente utilizado para el fallo muscular y mejorar los tejidos de soporte. Varios métodos de preservación de membranas han sido utilizados, con gran énfasis para glicerina 98%. Se evaluaron 12 perros machos con hernia perineal, en los que se utilizó el pericardio bovino conservado en glicerina 98% asociada con la técnica tradicional para reparación de la hernia perineal y orquiectomía pre escrotal. Los perros sin raza definida fueron los más afectados. En cinco animales fueron afectados ambos los lados del diafragma pélvico. Sólo un animal había recaído. El pericardio bovino conservado en glicerina 98% posibilitó bajas tasas de recurrencia en los casos descritos.(AU)

POTENCIAL FARMACOLÓGICO DE Morinda citrifolia (noni) NA OFTALMOLOGIA VETERINÁRIA

Morinda citrifolia, ou noni, é uma planta encontrada na Ásia, Austrália e nos trópicos. Possui variadas atividades biológicas, como atividade antibacteriana, imunomodulatória, antiinflamatória, cicatrizante, antineoplásica, etc. Na oftalmologia, esta planta demonstrou atividade contra a degeneração macular, retinopatia diabética, catarata e alergias oculares, mas desconhecem-se seus efeitos no olho normal e não existem relatos do seu uso na oftalmologia veterinária. Além disso, há a busca pela redução dos efeitos colaterais provocados pelos medicamentos alopáticos oftálmicos, diminuição dos custos financeiros e combate a resistência dos patógenos aos fármacos existentes. Desta forma, este projeto tem como objetivo avaliar os efeitos dos extratos padronizados de M. citrifolia em olhos saudáveis de coelhos. Foram utilizados dezoito coelhos brancos da raça Nova Zelândia com ausência de afecções oftálmicas e sem afecções concorrentes. Estes animais foram divididos em três grupos de seis coelhos que receberam tratamento, via oral, dos extratos padronizados de M. citrifolia a cada 12 horas durante 7 dias: G1 (300mg de extrato bruto de M. citrifolia), G2 (30mg de fração acetato do extrato de M. citrifolia) e G3 (30mg de fração aquosa do extrato de M. citrifolia). Os animais foram submetidos às avaliações clínicas oftálmicas pré tratamento e a cada 12 horas durante uma semana. Avaliaram-se parâmetros quanto ao blefarospasmo, à congestão, ao edema corneal, à quemose, à ulceração corneal, coloração e aspecto da íris, sinéquias, presença de fibrina ou de membranas na câmara anterior, flare clinico e alterações vítreo-retinianas. Empregou-se critério subjetivo qualiquantitativo, em escala de Nihill, leve, moderado e severo. Parâmetros quantitativos, tais como Pressão Intraocular (PIO), diâmetro pupilar e produção lacrimal, foram avaliados em cada um dos momentos. A cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) do extrato bruto e fração acetato demonstrou presença de flavonóides e ácidos fenólicos em sua composição. O extrato bruto de M. citrifolia e suas frações acetato e aquosa promoveram aumento da pressão intraocular em olhos de coelhos ao longo do tempo. A fração aquosa promoveu midríase e ambas promoveram aumento da produção lacrimal ao longo do tempo. A fração acetato promoveu maior congestão ocular desde o início do tratamento sem aumento no tempo.

Morinda citrifolia, or noni, is a plant found in Asia, Australia and the tropics. It has various biological activities, such as antibacterial, immunomodulatory, anti- inflammatory, healing, antineoplastic activity, etc. In ophthalmology, this plant has demonstrated activity against macular degeneration, diabetic retinopathy, cataract and eye allergies, but its effect in normal eyes is unknown and there are no reports of its use in veterinary ophthalmology. Moreover, the reduction of side effects caused by allopathic ophthalmic drugs is necessary, as is reducing financial costs and fighting the resistance of pathogens to existing drugs. Thus, this project aimed to evaluate the effects of standardized M. citrifolia extracts on healthy eyes of rabbits. Eighteen New Zealand white rabbits with no ophthalmic conditions and no concurrent conditions will be divided into three groups of six rabbits who received oral treatment of the standard M. citrifolia extracts every 12 hours for 7 days: G1 (300mg of M. citrifolia crude extract), G2 (30 mg of M. citrifolia extract acetate fraction) and G3 (30 mg of M. citrifolia extract aqueous fraction). The animals were submitted to clinical ophthalmic evaluations prior to treatment and every 12 hours for a week. Parameters were evaluated for blepharospasm, congestion, corneal edema, chemosis, corneal ulceration, iris color and appearance, synechiae, presence of fibrin or membranes in the anterior chamber, clinical flare and vitreoretinal alterations. Subjective qualitative parameters were evaluated by a mild, moderate and severe Nihill scale. Quantitative parameters, such as Intraocular Pressure (IOP), pupillary diameter and lacrimal production, were evaluated at each moment. High performance liquid chromatography (HPLC) of the crude extract and its acetate fraction showed presence of flavonoids and phenolic acids in its composition. The M. citrifolia crude extract and its acetate and aqueous fractions caused increased IOP in rabbits over time. The aqueous fraction caused mydriasis and both of them caused and increase in tear production over time. The acetate fraction caused ocular congestion since the beginning of treatment without increasing in time.

ESTUDO DA ATIVIDADE ANTITUMORAL DO COMPOSTO MIH 2.4Bl EM LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER DE MAMA

Os compostos mesoiônicos sintéticos, que pertencem ao grupo 1,3-tiazólio-5-tiolato, possuem capacidade de atravessar membranas celulares e interagir com diversas moléculas biológicas com afinidades distintas. Este estudo teve como objetivo a avaliar o potencial antineoplásico de um novo composto mesoiônico MIH2.4Bl do grupo 1,3tiazólio-5-tiolato em linhagens celulares de câncer de mama. Para esse estudo formam cultivadas doze linhagens de mama, duas normais (MCF10A e HMEC) e dez cancerígenas, das quais oito são linhagens de câncer humano (MCF7, 4T1, BT-20, BT-549, MDA-MB-231, MDA-MB-436, T47-D, ZR 75-1) e 2 linhagens de câncer de ratos (MM2MT e MM3MG). Pelo teste de cristal violeta determinamos que o composto MIH 2.4Bl apresentou atividade de inibição do crescimento em nove (4T-1, BT-20, MCF-7, MDA-MB 231, MDA-MB-436, MM2MT, MM3MG, T-47D e ZR-75-1) das dez das linhagens de câncer de mama testadas, porém quatro linhagens (BT-20, MCF-7, MDA-MB-436, T-47D e ZR-75-1) mostraram atividade inibitória significativamente maior do que a linhagem normal HMEC. Os valores de IC 50 foram determinados para todas as doze linhagens celulares nos tempos de 48, 72 e 96 horas. Análise adicional de citotoxicidade mediada por MIH 2.4Bl foi realizada em diferentes concentrações e tempos de tratamento utilizando a linhagem celular MCF-7, observando que essa linhagem teve sua viabilidade diminuida dependentes da dose e do tempo, com efeito citotoxico máximo em 72 e 96 horas. Três linhagens de células de câncer de mama (MCF-7, T-47D e ZR-75-1) mostraram um índice de seletividade mais potente à inibição de crescimento por MIH 2.4Bl quando comparado com a linhagem normal(HMEC) . Sendo a linhagem MCF7 a que apresentou o maoir índice de seletividade em 2 dos 3 tempos testados. Alterações no ciclo celular, também foram observadas na linhagem MCF7 após tratamento com o mesoinico, ocorrendo um aumento do número de células na fase G2/M em 34,2% em comparação com 0,1% nas células sem tratamento, para essa analise utilizamos o teste de iodeto de propídio, por citometria de fluxo. Os tipos de morte induzidas pelo composto MIH2.4Bl na linhagem MCF7, foram analisados por microscopia eletônica e ensaio de TUNEL os quais detectaram alterações na morfologia nuclear, degeneração mitocondrial e danos no DNA da célula, nas concentrações testadas (37.5 e 75 M), sugerindo uma possível morte por 15 apoptose. A morte autofágica também foi induzida, observadas pelo aumento de expressão das proteinas envolvidas no processo autofágico (Beclin 1, ATG-5 e LC3B II/I). Pelo teste de seahorse foi detectado que o tratamento com o composto MIH2.4Bl causou disfinção mitocondrial na linhagem MCF7. Com relação à análise da expressão dos genes observou-se que os genes AMIGO2 e DKK1 tiveram seus níveis de expressão significativamente dimuídos na linhagem MCF7 após tratamento com o composto quando comparados com o controle (linhagem MCF7 tratada com 0.01% DMSO) e os genes ATF3, HBEGF, RGS2, and ACRC tiveram seus níveis de expressão aumentados após o tratamento em relação ao controle (linhagem tratada com 0.01% DMSO) esses resultados foram obtidos da análise de PCR em tempo real. Portanto esses resultados sugerem que o composto MIH2.4Bl é um candidto promissor para o tratamento de câncer de mama e apoia mais invetigação in vitro e in vivo.

Synthetic mesoionic compounds, which belong to the 1,3-thiazolium-5-thiolate group, have the ability to cross cell membranes and interact with different biological molecules with different affinities. This study aimed to evaluate the antineoplastic potential of a new mesoionic compound MIH2.4Bl from the 1,3thiazolium-5-thiolate group in breast cancer cell lines. For this study formed cultured breast lines, two normal (MCF10A and HMEC) and ten breast cancers, of which eight are human cancer lines (MCF7, 4T1, BT-20, BT-549, MDA-MB-231, MDA - MB-436, T47-D, ZR 75-1) and 2 mouse cancer lines (MM2MT and MM3MG). The crystal violet test determines the compound MIH 2.4Bl which shows growth inhibition activity in nine (4T-1, BT-20, MCF-7, MDA-MB 231, MDA-MB-436, MM2MT, MM3MG, T- 47D and ZR-75-1) of the ten breast cancer lines tested, but four lines (BT-20, MCF-7, MDA-MB-436, T-47D and ZR-75-1) larger than HMEC normal strain . IC 50 values were selected for all cell lines at 48, 72 and 96 hours. The additional analysis of cytotoxicity mediated by MIH 2.4Bl was carried out in different tests and times of use of the MCF-7 cell line, noting that the line had its viability decreased depending on the dose and time, with maximum cytotoxic effect in 72 and 96 hours. Three breast cancer cell lines (MCF-7, T-47D and ZR-75-1) show a more potent selectivity index for inhibiting growth by MIH 2.4Bl when compared to a normal strain (HMEC). Being an MCF7 strain, which exhibits the highest selectivity index in 2 of the 3 times tested. Changes in the cell cycle were also observed in the MCF7 line after treatment with mesoinic, with an increase in the number of cells in the G2 / M phase by 34.2% compared to 0.1% in cells without treatment. propidium iodide test, by flow cytometry. The types of death induced by the compound MIH2.4Bl in the MCF7 line, were analyzed by electron microscopy and TUNEL assay, which changes were detected in nuclear morphology, mitochondrial degeneration and damage to the cell's DNA, in the tested tests (37.5 and 75 M), suggesting a possible death from apoptosis. Automatic death was also induced, observed by the increased expression of proteins used in the automatic process (Beclin 1, ATG-5 and LC3B II / I). The seahorse test was detected as a treatment with MIH2.4Bl caused a mitochondrial difference in the MCF7 strain. Regarding the analysis of the expression of genes subject to AMIGO2 and DKK1 genes, expression levels are decreased in the MCF7 17 line after treatment with compound or when compared to control (MCF7 line treated with 0.01% DMSO) and the ATF3, HBEGF genes , RGS2 and ACRC had their expression levels increased after treatment in relation to the control (lineage treated with 0.01% DMSO), these results were submitted to real-time PCR analysis. Therefore, these results separate MIH2.4Bl as a promising promoter for the treatment of breast cancer and further support in vitro and in vivo research.

Genotypic and phenotypic detection of efflux pump in Rhodococcus equi

The req_39680 gene, associated to a putative efflux system, was detected in 60% (54/90) of R. equi isolates by PCR. The phenotypic expression of efflux mechanism was verified in 20% of the isolates using ethidium bromide. For the first time, the expression of efflux mechanism was demonstrated in R. equi.

UTILIZAÇÃO DE VESÍCULAS LIPÍDICAS UNILAMELARES COMO CARREADORAS DE ANTIOXIDANTES EM SISTEMAS DE CULTIVO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS

As vesículas lipídicas unilamelares gigantes (GUVs) são consideradas ótimas ferramentas em sistemas de estudos que mimetizam membranas biológicas, devido à sua composição fosfolipídica e sensibilidade ao estresse oxidativo, além de possuírem capacidade de encapsular macromoléculas. Este foi o primeiro estudo a utilizar vesículas unilamelares gigantes como carreadoras de antioxidante (cisteina) em sistema de produção in vitro de embriões (PIVE). Sua utilização aliada ao sistema de cultivo é interessante, pois acredita-se poder ocorrer liberação do antioxidante de acordo com a demanda do sistema de PIVE. O objetivo desse estudo foi avaliar o comportamento das GUVsco-cultivadasin vitro com embriões bovinos, definir o método de indução ao estresse oxidativo e sua efetividade ao encapsular e carrear antioxidantes sob condições de estresse oxidativo. Foram testados indutores de estresse oxidativo [menadiona (MD) e peróxido de hidrogênio (H2O2)] nas GUVs, sendo o H2O2 em altas concentrações eficaz em induzir o estresse oxidativo através da alteração do diâmetro [Controle (18,96 µm) vs. H2O2 0,1 mM (17,71 µm), H2O2 0,5 mM (17,32 µm) e H2O2 1,0 mM (16,63 µm)]. Houve redução na taxa de desenvolvimento embrionário (P<0,05) dos grupos co-cultivados com GUVs e submetidos ao estresse oxidativo pela MD [Controle (26,70%) GUV (25,18%) vs. GUV+MD 5,0 M (6,95%) e GUV+MD 7,5 M (0,95%)]. As maiores concentrações intracelulares de ROS em embriões bovinos (P<0,05), foi no grupo GUV+MD 5,0 M (16,28) vs. Controle (3,76) e GUV (3,99 ± 0,33). Ao co-cultivarGUVs, com cisteína encapsulada em seu interior, com embriões bovinos e submetê-los ao estresse oxidativo, pôde ser observado que a taxa de desenvolvimento embrionário foi menor (P<0,05) nos grupos (MD: 9,46%; MD + Cist: 1,19%; e GUV(Cist 3mM) + MD: 1,15%) e nos grupos cultivados com maior concentração de cisteina [GUV(Cist 129mM): 0,0% e GUV(Cist 129mM) + MD: 0,0%] em comparação aos demais grupos (controle: 25,58%; Cist: 31,77%; e GUV(Cist 3mM): 30,16. A taxa de desenvolvimento embrionário até o estágio de blastocisto foi menor (P<0,05) nos grupos submetidos ao estresse oxidativo pela menadiona (MD: 9,46%; MD + Cist: 1,19%; e GUV(Cist 3mM) + MD: 1,15%) e nos grupos cultivados com maior concentração de cisteina [GUV(Cist 129mM): 0,0% e GUV(Cist 129mM) + MD: 0,0%] em comparação aos demais grupos (controle: 25,58%; Cist: 31,77%; e GUV(Cist 3mM): 30,16. O grupo GUV(Cist 3mM) exibiu menores (P<0,05) concentrações de ROS (0,09 UAF) comparado ao grupo Cist (0,16 UAF), mas ambos não diferiram do grupo controle (0,10 UAF), sendo as maiores concentrações de ROS observadas no grupo MD (0,34 UAF). Em conclusão as GUVs não promoveram efeito tóxico e nem aumentaram as concentrações intracelulares de ROS nos embriões. As GUVs produzidas com cisteína em seu interior apresentaram-se mais eficientes para prevenir o aumento de ROS.

Giant unilamellar lipid vesicles (GUVs) are considered to be great tools in study systems that mimic biological membranes due to their phospholipid composition and sensitivity to oxidative stress, as well as their ability to encapsulate macromolecules. This was the first study to use giant unilamellar vesicles as antioxidant (cysteine) carriers in an in vitro embryo production system (PIVE). Its use combined with the cultivation system would be interesting because it is believed that antioxidant release could occur according to the demand of the PIVE system. The aim of this study was to evaluate the behavior of GUVs co-cultured in vitro with bovine embryos, to standardize the oxidative stress induction method and its effectiveness to encapsulate and carry antioxidants under oxidative stress conditions. Oxidative stress inducers [meanadione (MD) and hydrogen peroxide (H2O2)] were tested in GUVs, and H2O2 at high concentrations was effective in inducing oxidative stress by changing the diameter [Control (18.96 µm) vs. 0.1 mM H2O2 (17.71 µm), 0.5 mM H2O2 (17.32 µm) and 1.0 mM H2O2 (16.63 µm)]. Embryonic development rate (P <0.05) was reduced in groups co-cultivated with GUVs and submitted to oxidative stress by DM [Control (26.70%) GUV (25.18%) vs. GUV + MD 5.0 M (6.95%) and GUV + MD 7.5 M (0.95%)]. The highest intracellular ROS concentrations in bovine embryos (P <0.05) were in the GUV + MD 5.0 M group (16.28) vs. Control (3.76) and GUV (3.99 ± 0.33). By co-cultivating GUVs with encapsulated cysteine inside, with bovine embryos and subjecting them to oxidative stress, it could be observed that the embryonic development rate was lower (P <0.05) in the groups (MD: 9.46 % MD + Cist: 1.19%, and GUV (3mM Cist) + MD: 1.15%) and in the cultivated groups with the highest cysteine concentration [GUV (Cist 129mM): 0.0% and GUV (Cist 129mM ) + MD: 0.0%] compared to the other groups (control: 25.58%; Cyst: 31.77%; and GUV (Cist 3mM): 30.16. The embryonic development rate to the blastocyst stage was lower (P <0.05) in the groups subjected to oxidative stress by menadione (MD: 9.46%; MD + Cist: 1.19%; and GUV (Cist 3mM) + MD: 1.15%) and in cultivated groups with higher cysteine concentration [GUV (Cist 129mM): 0.0% and GUV (Cist 129mM) + MD: 0.0%] compared to the other groups (control: 25.58%; Cist: 31.77 % and GUV (Cist 3mM): 30.16.The GUV group (Cist 3mM) exhibited lower (P <0.05) ROS concentrations (0.09 UAF) compared to the Cist group (0, 16 UAF), but both did not differ from the control group (0.10 UAF), with the highest ROS concentrations observed in the MD group (0.34 UAF). In conclusion, GUVs did not promote toxic effects, nor did they increase intracellular ROS concentrations in embryos. GUVs produced with cysteine inside were more efficient to prevent the increase of ROS.

Abdominal hernia repair with bovine pericardium seeded with mesenchymal stem cells in Wistar rats / Reparo de hérnia abdominal com pericárdio bovino associado a células-tronco mesenquimais em ratos Wistar

Background: Biological membranes demonstrate superiority over synthetic ones for its biocompatibility and strength in the reduction of abdominal hernias. Recents tissue engineering researches add mesenchymal stem cells to biological membranes with the purpose of obtaining additional cellular proliferation and consequent muscle regeneration, using biological membranes as cellular scaffolds. This article aimed to study the influence of mesenchymal stem cells in muscle regeneration in abdominal hernias, reduced with biological membranes. Materials, Methods & Results: Adult Wistar rats underwent abdominal hernia-inducing. They were divided into two groups as to the form of treatment for the reduction of hernia: stem cells associated with biological membranes or only biological membranes. After the treatment the macro and microscopic reviews were carried out in days seven, 14 and 60 postoperatively. Preparation of bovine pericardium with glycerin 98% presented efficiency in decellularization and conservation, maintaining its strength and avoiding bacterial growth. The mesenchymal stem cells obtained from bone marrow of adult Wistar rats, had capacity of proliferation. The majority of the cells was positive for the expression of surface antigens CD44, CD29 and CD99 and was negative for CD 34. In the differentiation trials, the same cells were able to differentiate into adipocytes

Vários tipos de implantes, naturais ou sintéticos, vêm sendo testados no reparo cirúrgico de hérnias. As membranas biológicas, ou arcabouços dérmicos descelularizados, apresentam reduzida formação de aderência entre o implante e as vísceras, diminuição da formação de fístulas, infecções e recorrências. Também apresentam resistência suficiente para suportar a pressão abdominal, evitando deiscências e eviscerações. [...]

EFFECTS OF PETROLEUM HYDROCARBONS TO TROPICAL AND TEMPERATE FISH SPECIES: A TOXICITY AND MULTIBIOMARKER APPROACH FOR THE ASSESSMENT OF ENVIRONMENTAL CONTAMINATION

Plantas industriais para o refino do petróleo são normalmente instaladas à uma distância considerável do local de extração do produto bruto. Assim, os derramamentos acidentais durante o transporte, como os ocorridos nos oleodutos OSPAR e OLAPA no estado do Paraná, sul do Brasil, em 2000 e 2001, respectivamente, continuam sendo uma importante ameaça ambiental. O vazamento contínuo de tanques de armazenamento e a descarga de resíduos industriais, municipais e domésticos também são considerados fontes de contaminação do ambiente aquático por petróleo e produtos derivados. A toxicidade desses produtos é geralmente atribuída à presença de hidrocarbonetos monoaromáticos (BTEX) e policíclico aromáticos (HPA). O impacto biológico da exposição ao BTEX e HPA já foi relatado. Quando essas mudanças biológicas podem ser mensuradas, elas são denominadas de biomarcadores. Entre os biomarcadores reconhecidos, utilizados para a avaliação da contaminação ambiental em peixes, podemos destacar as enzimas de biotransformação (fase I e II), estresse oxidativo, parâmetros genotóxicos, hematológicos, endócrinos, reprodutivos, fisiológicos, histológicos e morfológicos. Além disso, outras substâncias químicas podem alterar a respostas de biomarcadores, tais como alterações naturais nas características físicas e químicas em ambientes aquáticos tropicais. Apesar dessas evidências, nenhum estudo avaliou a associação entre variações abióticas, especialmente temperatura e pH, e a contaminação de hidrocarbonetos de petróleo. O objetivo desta tese foi estabelecer diferenças na toxicidade entre diferentes produtos derivados de petróleo e identificar possíveis alterações em biomarcadores induzidas por parâmetros fisicoquímicos da água durante a exposição à hidrocarbonetos de petróleo. Nossos resultados com A. altiparanae, uma espécie nativa da Bacia do rio Paraná (bacia que se estende do sul do Brasil ao norte da Argentina e Paraguai), demonstraram que a gasolina é o composto mais tóxico em comparação aos outros produtos testados. Também avaliamos a potencial influência dos parâmetros abióticos da água (temperatura e pH), em associação com a exposição à fração solúvel em água da gasolina (WSFG), sobre biomarcadores de biotransformação (EROD e GST), estresse oxidativo (CAT e proteína carbonilada) e neurotóxicos (AChE) e respostas fisiológicas em A. altiparanae. Nossos resultados demostraram e influenciaram a temperatura e do pH em todos os biomarcadores testados. Em condições "normais" (25 ° C e pH 7), a WSFG promoveu uma alteração das respostas de metabolização energética e hematológicas, devido a uma possível condição hipóxia metabólica. Quando a temperatura e o pH da água foram alterados, um conjunto secundário de mecanismos fisiológicos foi ativado para lidar com distúrbios osmorregulatórios e ácido-base induzidos. No caso da exposição à WSFG, A. altiparanae foi capaz de manter a integridade das membranas celulares, indicando que os mecanismos reguladores mantiveram a homeostase. Usando a espécie Carassius auratus, identificamos as alterações da absorção de ureia e Mg+2 de absorção de O2 (MO2) resultantes da exposição aguda à WSFG. Assim, os resultados obtidos neste trabalho fornecem uma importante base referente à toxicidade de diferentes produtos derivados de petróleo, bem como a possível influência das características abióticas da água na resposta de biomarcadores utilizados na avaliação da poluição por hidrocarbonetos de xii petróleo e os possíveis mecanismos fisiológicos que são prejudicados agudamente.

Refinery plants can be located far away from the extraction sites. Hence, accidental spills during transportation, such as those occurred from the OSPAR and OLAPA pipelines at Paraná state, South Brazil, in 2000 and 2001, respectively, remain as an important environment threat. Non-stop leakage from commercial gas station storage tanks and the discharge of industrial, municipal and domestic waste are, also, considered sources of petroleum and refined products that could reach aquatic environments. The effects of contamination on aquatic ecosystems are normally linked with their chemical characteristics, as toxicity is usually attributed to the presence of monoaromatic (BTEX) and the polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH). The biological impact of BTEX and PAH exposure has been reported over the years. When these biological changes can be analytically measured they are called biomarkers. Among all the well-known biomarkers used for the assessment of environmental contamination in fish, we can highlight the biotransformation enzymes (phase I and II), oxidative stress, genotoxic, haematological, endocrine, reproductive, physiological, histological and morphological parameters. Additionally, other parameters, only than BTEX and PAH, may alter biological responses/biomarkers, such as natural changes in physical and chemical characteristics in tropical aquatic environments. Despite those evidences, no study evaluated the association between abiotic variations, especially temperature and pH, and petroleum hydrocarbon contamination. The main goal of this thesis was to stablish the differences among petroleum and refined products toxicity and to identify possible biomarkers alterations induced by water physicochemical parameters during petroleum hydrocarbons exposure. Our results with Astyanax altiparanae, a tropical native fish species from the Paraná river Basis (massive watershed spread throughout South Brazil, North Argentina and Paraguay), demonstrated that gasoline presented the highest toxicity when compared to petroleum and other refined products. We also assessed the potential influence of water temperature and pH, in association with gasoline water-soluble fraction (WSFG) exposure, to biotransformation (EROD and GST), oxidative stress (CAT and carbonyl protein) and neurotoxic biomarkers (AChE) and physiological responses (osmoregulation, acid-base, haematological and energetic metabolism) in A. altiparanae. Our results showed the influence of temperature and pH in all tested biomarkers. In normal (25 °C and pH 7.0) condition, WSFG promoted an alteration in energetic metabolization, hematopoietic mechanism, due to a possible metabolic hypoxic condition. When water temperature and pH were changed, a secondary set of physiological mechanism were activated to cope with osmoregulatory and acid-base disorders, induced. In in normal or altered temperature or pH conditions, during WSFG exposure, A. altiparanae sustain the integrity of cellular membranes, indicating that the trigged regulatory mechanisms were able to maintain general homeostasis. Using the temperate species Carassius auratus we identify alterations of urea and Mg+2 excretion rate and O2 uptake (MO2) resulting from WSFG acute exposure. Thus, the results obtained in this work provides an important baseline for the toxicity of different refined petroleum products , as well the possible influence of water abiotic characteristics in the response of stablished biomarkers used for the assessment of petroleum hydrocarbon pollution and the possible physiological mechanisms that are acute impaired.

Biomarcadores celulares e moleculares envolvidos na resposta imune-inflamatória modulada por ácidos graxos insaturados / Cellular and molecular biomarkers involved in immune-inflammatory response modulated by unsaturated fatty acids

A resposta imunológica é um processo complexo que envolve a interação e sinalização de diferentes tipos celulares e moleculares, conhecidos como biomarcadores, os quais atuam de modo coordenado para promover a defesa do organismo. Essa resposta inicia-se com a instalação do processo inflamatório, que culmina com eliminação de agentes microbianos e cicatrização do tecido afetado, podendo evoluir para uma resposta mais específica. Muitos mediadores produzidos durante essas reações, sobretudo aqueles de natureza lipídica e peptídica, podem ser originados da imunomodulação promovida por ácidos graxos insaturados fornecidos pela dieta ou sintetizados endogenamente. Ácidos graxos insaturados são constituintes das membranas celulares e reguladores da expressão gênica, atuando nas vias de sinalização, transdução de sinais e proliferação celular e gerando produtos que regulam os mecanismos da imunidade humoral e celular. Esses lipídios apresentam várias propriedades biológicas, incluindo importantes efeitos imunomoduladores sobre a inflamação e a cicatrização. Ácidos graxos insaturados regulam a ativação de diversas células envolvidas nesses processos, tais como macrófagos, neutrófilos, linfócitos, queratinócitos e células dendríticas, bem como a secreção de seus produtos, exercem efeitos sobre enzimas e fatores de transcrição gênica, estimulando ou inibindo a produção de eicosanóides, como as prostaglandinas e leucotrienos, citocinas, moléculas de adesão, fatores de crescimento e outras moléculas específicas envolvidas nas diferentes fases do reparo tecidual, além de modular o estresse oxidativo. Neste contexto, esse artigo tem como objetivo revisar o papel dos principais biomarcadores celulares e moleculares envolvidos na resposta imune-inflamatória modulada por ácidos graxos insaturados.

Immune response is a complex process that involves interaction and signaling of different cell and molecular types, known as biomarkers, which are organized to promote the defense of organism. This response begins with installation of the inflammatory process and culminates with elimination of the microbial agents, damage tissue and repair. The inflammatory response can progress to a more specific process. Many mediators are produced during inflammation, especially lipid and peptide mediators. These substances can be generated from immunomodulation promoted by unsaturated fatty acids provided by dietary or endogenously synthesized. Unsaturated fatty acids are constituents of cell membranes and regulators of gene expression and act on signaling pathways, signal transduction and cell proliferation, generating products that regulate the mechanisms of humoral and cellular immunity. These lipids have multiple biological properties, including important immunomodulatory effects on inflammation and wound healing. Unsaturated fatty acids regulate the activation of various cells involved in these processes, such as macrophages, neutrophils, lymphocytes, keratinocytes and dendritic cells, as well as secretion of their products, exert effects on enzymes and gene transcription factors by stimulating or inhibiting the production of eicosanoids as prostaglandins and leukotrienes, cytokines, adhesion molecules, growth factors and other specific molecules involved in different phases of tissue repair, and modulate oxidative stress. In this context, the aim of this paper is to review the role of main cellular and molecular biomarkers involved in immune-inflammatory response modulated by unsaturated fatty acids.