INDUÇÃO DE DUPLA OVULAÇÃO EM ÉGUAS MANGALARGA MARCHADOR

Uma das estratégias para aumentar a eficiência dos programas de transferência de embriões em equinos é a indução de múltiplas ovulações. Neste contexto o objetivo do presente estudo foi avaliar a eficiência em de agonistas do GnRH para indução de duplas ovulações, bem como na taxa de ovulação e recuperação embrionária nos grupos estudados. Foram avaliados 41 ciclos estrais de éguas Mangalarga Marchador. Todos os animais foram induzidos ao estro no 8o dia do ciclo estral (D8) com 5 mg de dinoprost trometamina e quando foram observados ao menos dois folículos de tamanho entre 17 e 19 mm, os ciclos foram divididos em três grupos de tratamento: Grupo I (n=13 ciclos) - 100 µg de acetato de deslorelina, a cada 12 horas; Grupo II (n=14 ciclos) - 125 µg de acetato de histrelina, a cada 12 horas e Grupo III (n= 14 ciclos) considerado grupo controle, no qual foi administrado 1,0 ml de solução salina a cada 12 horas. A duração do tratamento com análogos de GnRH não excedeu sete dias, sendo interrompido quando a maioria dos folículos atingissem diâmetro 35 mm e edema uterino ou quando os mesmos cessassem o crescimento. A indução da ovulação foi realizada utilizando 1000 UI de hCG intravenoso quando o folículo atingisse um diâmetro médio entre eles de 35 mm e edema uterino. A partir da indução da ovulação, 24 horas após as éguas foram inseminadas com sêmen a fresco de um garanhão de fertilidade comprovada. A colheita de embriões foi realizada no oitavo dia após a detecção da ovulação. O número médio de ovulações por ciclo de 1,15 (GI), 0,86 (GII) e 1,14 (GIII). Quanto o número de embriões recuperados por ovulação, os grupos I, II e III apresentaram, 0,46, 0,36 e 0,71. Já o número de embriões recuperados por ciclo foi de 0,67 (GI), 0,50 (GII) e 0,71 (GIII). Não foi observada diferença estatística entre os grupos de tratamento (P > 0,05). Conclui-se que os protocolos propostos não foram capazes de aumentar as taxas de duplas ovulações nos grupos avaliados assim como a taxa de recuperação embrionária

One of the strategies to increase the efficiency of embryo transfer programs in horses is the induction of multiple ovulations. In this context, the objective of the present study was to evaluate the efficiency of GnRH agonists for inducing double ovulations, as well as the rate of ovulation and embryonic recovery in the studied groups. 41 estal cycles of Mangalarga Marchador mares were evaluated. All animals were induced to estrus on the 8th day of the estrous cycle (D8) with 5 mg of dinoprost tromethamine and when at least two follicles between 17 and 19 mm in size were observed, the cycles were divided into three treatment groups: Group I (n = 13 cycles) - 100 µg of deslorelin acetate, every 12 hours; Group II (n = 14 cycles) - 125 µg of histrelin acetate, every 12 hours and Group III (n = 14 cycles) considered a control group, in which 1.0 ml of saline solution was administered every 12 hours. The duration of treatment with GnRH analogs did not exceed seven days, being interrupted when most follicles reached a diameter 35 mm and uterine edema or when they stopped growing. Ovulation induction was performed using 1000 IU intravenous hCG when the follicle reached an average diameter between them of 35 mm and uterine edema. After ovulation induction, 24 hours after the mares were inseminated with fresh semen from a proven fertility stallion. Embryo collection was performed on the eighth day after ovulation was detected. The average number of ovulations per cycle is 1.15 (GI), 0.86 (GII) and 1.14 (GIII). Regarding the number of embryos recovered by ovulation, groups I, II and III showed 0.46, 0.36 and 0.71. The number of embryos recovered per cycle was 0.67 (GI), 0.50 (GII) and 0.71 (GIII). There was no statistical difference between the treatment groups (P> 0.05). It is concluded that the proposed protocols were not able to increase the rates of double ovulations in the evaluated groups as well as the rate of embryo recovery

Gestação gemelar em equinos: com ênfase na raça Crioula

Gestações gemelares em equinos frequentemente resultam em aborto ou natimortos, sendo responsáveis por prejuízos na criação. Poucos estudos descrevem a características reprodutivas e gestacionais em éguas Crioulas. O objetivo da presente dissertação é realizar uma revisão bibliográfica a respeito dos principais aspectos da gestação gemelar e apresentar resultados sobre a incidência em éguas Crioulas. Foram realizados dois artigos de revisão bibliográfica, sendo o primeiro a respeito dos fatores que influenciam a ocorrência e o segundo sobre métodos de diagnóstico e manipulação dessas gestações. Já o terceiro artigo traz um estudo retrospectivo composto por 814 éguas gestantes, demonstrando a incidência de gestações gemelares e ovulações múltiplas em éguas Crioulas, relacionando a ocorrência com status reprodutivo, idade da égua, uso de indutores de ovulação e mês da estação reprodutiva. A incidência de gestação gemelar foi de 3,44%, sendo mais frequente em éguas solteiras e primíparas. Mesmo com índices reduzidos quando comparadas a outras raças, é importante conhecer os fatores de risco, métodos de diagnóstico e intervenção da gestação gemelar para abordar aspectos reprodutivos em éguas Crioulas.

Twin pregnancies in horses often result in abortion or stillbirths and are responsible for huge losses in the equine industry. Few studies describe reproductive and gestational characteristics in Criollo mares. The aim of this dissertation is to review the main aspects of twin pregnancy in mares and to present scientific results about the incidence of twin pregnancies in Criollo mares. Two articles of bibliographic review were made, the first about the factors that influence the occurrence and the second about diagnostic methods and manipulation of these gestations. The third article presents retrospective study with 814 pregnant mares, demonstrating the incidence of twin pregnancies and multiple ovulations in Criollo mares, correlating the occurrence with reproductive status, age of the mare, use of ovulation inducers and month of breeding season. The incidence of twin pregnancy was 3.44%, being more frequent in single and primiparous mares. Even with low rates when compared to other breeds, it is important to know the risk factors, diagnostic methods and intervention of twin pregnancy to address reproductive aspects in Criollo mares.

GnRH como indutor de multiplas ovulações em égua: relato de caso

As éguas são animais classicados como poliéstricos estacionais monovulatórios, pois possuem estação reprodutiva na primavera e no verão. Três são os fatores básicos, que explicam o caráter estacional dos ciclos estrais nesta espécie: nutrição, temperatura e fotoperíodo. A superovulação é uma técnica articial em que se empregam hormônios da reprodução com o objetivo de promover a co-dominâcia em um grupo de folículos. O número de folículos que se desenvolvem em resposta a hormônios exógenos é limitado em éguas, comparado a outras espécies como bovinos e ovinos.

Gestação gemelar em éguas (parte 1): Desenvolvimento e Fatores de Risco / Twin pregnancies in mares, part I: Development and risk factors / Embarazos gemelares en yeguas, parte l: desarrollo y factores de riesgo

Gestações gemelares em equinos são responsáveis por abortos no terço final de gestação ou nascimento de potros debilitados. O objetivo desta revisão é discutir os fatores de risco para o de gêmeos, sendo mais frequentes em éguas Puro Sangue Inglês, de Polo Argentino e Brasileiro e de Hipismo quando comparadas a Árabes e Pôneis. Éguas solteiras terão maior incidência do múltiplas ovulações e gestações gemelares e éguas mais velhas possuem maiores taxas de múltiplas ovulações, mas não de gêmeos. O uso de indutores de ovulação pode elevar as taxas de ovulações duplas e à medida que a estação reprodutiva progride, aumenta a incidência de gestações gemelares. O conhecimento desses fatores de risco é importante para a realização do diagnóstico e intervenção adequada para evitar prejuízos causados por essas gestações.

Twin pregnancies in horses are responsible for abortion in the late gestation or birth of debilitated foals. The aim of this review is to discuss the risk factors for the development of twin pregnancies. The multiple ovulations are responsible for the occurrence of twins, being more frequent in Thoroughbred, Polo Argentino and Brazilian Sport Horse when compared to Arabs and Ponies. Single mares will have a higher incidence of multiple ovulations and twin pregnancies and older mares have higher rates of multiple ovulations but not twins. The use of ovulation inducers may increase double ovulation rates and as the reproductive season progresses, the incidence of twin pregnancies increases. Knowledge of these risk factors is important for proper diagnosis and intervention to avoid loses caused by this pregnancies.

Los embarazos gemelares en yeguas son pueden causar abortos en la gestación tardía o el nacimiento de potros debilitados. El objetivo de esta revisión es analizar los factores de riesgo para el desarrollo de embarazos gemelares. Las ovulaciones múltiples son responsables por la ocurrencia de gemelos, siendo más frecuentes en yeguas Pura Sangre Inglés, de Polo Argentino y Brasileiro de Hipismo en comparación con las Árabes y Ponis. Las yeguas solteras tendrán una mayor incidencia de ovulaciones múltiples y embarazos gemeiares, y las yeguas mayores tienen tasas más altas de ovulaciones múltiples pero no gemelos. El uso de inductores de la ovulación puede aumentar las tasas de ovulación doble y a medida que avanza la temporada reproductiva aumenta la incidencia de embarazos gemelares. El conocimiento de estos factores de riesgo es importante para un diagnóstico e intervención adecuados para eviar daños causados por estos embarazos.

Gestação gemelar em éguas (parte 1): Desenvolvimento e Fatores de Risco / Twin pregnancies in mares, part I: Development and risk factors / Embarazos gemelares en yeguas, parte l: desarrollo y factores de riesgo

Gestações gemelares em equinos são responsáveis por abortos no terço final de gestação ou nascimento de potros debilitados. O objetivo desta revisão é discutir os fatores de risco para o de gêmeos, sendo mais frequentes em éguas Puro Sangue Inglês, de Polo Argentino e Brasileiro e de Hipismo quando comparadas a Árabes e Pôneis. Éguas solteiras terão maior incidência do múltiplas ovulações e gestações gemelares e éguas mais velhas possuem maiores taxas de múltiplas ovulações, mas não de gêmeos. O uso de indutores de ovulação pode elevar as taxas de ovulações duplas e à medida que a estação reprodutiva progride, aumenta a incidência de gestações gemelares. O conhecimento desses fatores de risco é importante para a realização do diagnóstico e intervenção adequada para evitar prejuízos causados por essas gestações.(AU)

Twin pregnancies in horses are responsible for abortion in the late gestation or birth of debilitated foals. The aim of this review is to discuss the risk factors for the development of twin pregnancies. The multiple ovulations are responsible for the occurrence of twins, being more frequent in Thoroughbred, Polo Argentino and Brazilian Sport Horse when compared to Arabs and Ponies. Single mares will have a higher incidence of multiple ovulations and twin pregnancies and older mares have higher rates of multiple ovulations but not twins. The use of ovulation inducers may increase double ovulation rates and as the reproductive season progresses, the incidence of twin pregnancies increases. Knowledge of these risk factors is important for proper diagnosis and intervention to avoid loses caused by this pregnancies.(AU)

Los embarazos gemelares en yeguas son pueden causar abortos en la gestación tardía o el nacimiento de potros debilitados. El objetivo de esta revisión es analizar los factores de riesgo para el desarrollo de embarazos gemelares. Las ovulaciones múltiples son responsables por la ocurrencia de gemelos, siendo más frecuentes en yeguas Pura Sangre Inglés, de Polo Argentino y Brasileiro de Hipismo en comparación con las Árabes y Ponis. Las yeguas solteras tendrán una mayor incidencia de ovulaciones múltiples y embarazos gemeiares, y las yeguas mayores tienen tasas más altas de ovulaciones múltiples pero no gemelos. El uso de inductores de la ovulación puede aumentar las tasas de ovulación doble y a medida que avanza la temporada reproductiva aumenta la incidencia de embarazos gemelares. El conocimiento de estos factores de riesgo es importante para un diagnóstico e intervención adecuados para eviar daños causados por estos embarazos.(AU)

Situação atual da superovulação em ovinos / Current status of superovulation in ewes

Esta revisão apresenta uma visão geral e crítica da base técnica dos procedimentos de superovulação,expondo as limitações e os últimos avanços dessa tecnologia na produção de embriões ovinos. Entre osresponsáveis pelas limitações dos protocolos comumente empregados, destacam-se a variabilidade no grau depurificação das gonadotrofinas derivadas da hipófise, a falta de controle da dinâmica folicular, as falhas noprocesso de fertilização e o elevado índice de regressão prematura do corpo lúteo. Algumas abordagens foramempregadas visando ao controle desses limitantes e obteve-se aceitável resposta superovulatória, como: autilização de gonadotrofinas recombinantes; a superestimulação no dia, ou em até 24 h, da emergência de umaonda folicular; a administração de GnRH e seus agonistas, como indutores de ovulação, principalmente quandofor realizada inseminação artificial com sêmen congelado; e a aplicação de hCG, GnRH ou inibidores daprostaglandina F2α após a ocorrência das ovulações múltiplas. Essas abordagens resultaram em melhoriasrelevantes nos programas de MOTE em ovinos.(AU)

The present paper reviews an overview and critique of the technical basis of the procedures forsuperovulation, exposing the limitations and recent advances in this technology in production of sheep embryos.Among those responsible for the limitations of commonly used protocols, those that stand out are the variability inthe degree of purification of pituitary gonadotropins, the lack of control of follicular dynamics, failures in thefertilization process and the high rate of premature regression of the corpus luteum. Some approaches have beenemployed for the control of these impediments, enhancing superovulatory response, such as the use of recombinantgonadotropins; superstimulation on the day or within 24 h of emergence of a follicular wave; and the administrationof GnRH agonists to induce ovulation, especially when artificial insemination is carried out with frozen semen; andthe administration of hCG, GnRH or prostaglandin F2α inhibitors after the occurrence of multiple ovulations.These approaches have resulted in significant improvements to MOET programs in sheep.(AU)

Situação atual da superovulação em ovinos / Current status of superovulation in ewes

Esta revisão apresenta uma visão geral e crítica da base técnica dos procedimentos de superovulação,expondo as limitações e os últimos avanços dessa tecnologia na produção de embriões ovinos. Entre osresponsáveis pelas limitações dos protocolos comumente empregados, destacam-se a variabilidade no grau depurificação das gonadotrofinas derivadas da hipófise, a falta de controle da dinâmica folicular, as falhas noprocesso de fertilização e o elevado índice de regressão prematura do corpo lúteo. Algumas abordagens foramempregadas visando ao controle desses limitantes e obteve-se aceitável resposta superovulatória, como: autilização de gonadotrofinas recombinantes; a superestimulação no dia, ou em até 24 h, da emergência de umaonda folicular; a administração de GnRH e seus agonistas, como indutores de ovulação, principalmente quandofor realizada inseminação artificial com sêmen congelado; e a aplicação de hCG, GnRH ou inibidores daprostaglandina F2α após a ocorrência das ovulações múltiplas. Essas abordagens resultaram em melhoriasrelevantes nos programas de MOTE em ovinos.

The present paper reviews an overview and critique of the technical basis of the procedures forsuperovulation, exposing the limitations and recent advances in this technology in production of sheep embryos.Among those responsible for the limitations of commonly used protocols, those that stand out are the variability inthe degree of purification of pituitary gonadotropins, the lack of control of follicular dynamics, failures in thefertilization process and the high rate of premature regression of the corpus luteum. Some approaches have beenemployed for the control of these impediments, enhancing superovulatory response, such as the use of recombinantgonadotropins; superstimulation on the day or within 24 h of emergence of a follicular wave; and the administrationof GnRH agonists to induce ovulation, especially when artificial insemination is carried out with frozen semen; andthe administration of hCG, GnRH or prostaglandin F2α inhibitors after the occurrence of multiple ovulations.These approaches have resulted in significant improvements to MOET programs in sheep.

Double ovulation induction using low dose of Deslorelin in mares / Indução de ovulações duplas utilizando baixa dose de deslorelina em éguas

The wok was aimed to induce multiple ovulations in mares using low doses of deslorelin acetate (GnRH) to enhance the reproductive efficiency. A total of 15 mares of the quarter horse breed were used as embryo donors in a cross over 15 x 2 experimental design (fifteen animals x two treatments), where animals were monitored for two consecutive cycles. On the control group (CG), the estrous of donors occurred on its natural form and follicular development was monitored by ultrasonography. Ovulation was induced with 2500 IU hCG intravenously, when the follicle reached 35 mm in diameter, moment when artificial insemination was performed. On day 8 (D8) after ovulation, donors were submitted to embryo collection. On Treated Group 2 (TG), donors received, by intramuscular shot, 7.5 mg dinoprost thrometamine and after 48 hours of its administration follicular development was monitored twice a day byultrasound, until the larger follicle reached 23 to 25 mm and the second follicle reached at least 18 mm. Moreover, a super-ovulation protocol was performed with 100 g deslorelin in 12 diâmehour intervals until larger follicle reached 33 to 35 mm. The ovulation was induced with 1000 g deslorelin acetate, by an intramuscular shot, concomitant with 1000 IU hCG intravenously. Artificial insemination was performed immediately after ovulation and embryo collection was on D8. The percentage of mares with multiple ovulations on CG was 13.33% (2/15) and TG of 86.66% (13/15), with diference between groups (P 0.05). The percentage of embryo recovery per flushing was 60% CG and 80% on TG (P<0.05).[...]

Objetivou-se induzir ovulações múltiplas em éguas utilizando baixas doses de acetato de deslorelina (GnRH) visando aumentar a eficiência reprodutiva nessa espécie. Foram utilizadas 15 éguas doadoras de embriões da raça Quarto de Milha, em sistema cross over 15 x 2 (quinze animais x dois tratamentos), no qual cada uma foi monitorada por dois ciclos consecutivos. No Grupo Controle (GC), o estro das doadoras ocorreu de forma natural e o desenvolvimento folicular foi monitorado por ultrassonografia. A ovulação foi induzida com 2500 UI de hCG por via intravenosa, quando o foliculo alcançou diâmetro de 35 mm, momento em que se procedeu a inseminação artificial. No oitavo dia (D8) após ovulação, as doadoras foram submetidas aos procedimentos de colheita embrionária. No Grupo Tratado (GT), as doadoras receberam, por via intramuscular, 7,5 mg de dinoprost-trometamina e após 48 horas de sua administração foi realizado o monitoramento folicular duas vezes ao dia com auxilio de ultrassom, até que o maior folículo atingisse o diâmetro de 23 a 25 mm e o segundo do que 18 mm. Posteriormenteiniciou-se o protocolo de superovulação com a administração de 100 g de GnRH em intervalo de 12 horas até que o maior folículo atingisse o diâmetro entre 33 de 35 mm. A ovulação foi induzida com 1000 µg de GnRH, por via intramuscular, associado a 1000 UI de hCG aplicado por via intravenosa. Imediatamente após a ovulação efetuou-se a inseminação artificial e a colheita de embriões realizada no D8. O percentual de éguas com ovulações múltiplas no GC foi de 13,33% (2/15) e no GT de 86,66% (13/15), havendo diferença (P 0,05). [...]

Uso da deslorrelina para controle da população folicular durante tratamento superovulatório em ovinos (Ovis aries)

O presente estudo teve por objetivo a utilização do hormônio agonista de GnRH, Deslorelina, para controle da população folicular, com intuito de homogeneizar a onda folicular ao início do tratamento de múltiplas ovulações e transferência de embriões (MOET), reduzindo os efeitos deletérios do folículo dominante no tratamento superovulatório com hormônio folículo estimulante, foltropina de pituitária suína. Foram utilizadas 24 ovelhas deslanadas mestiças da raça santa inês, com idades entre 2 e 4 anos, divididas em dois grupos, Controle (Contr), e Deslorelina (Des). Os experimentos foram conduzidos na propriedade rural denominada Sítio Panorama, no município de Porangaba-SP, situado na latitude -23.15050993 e longitude -48.09904348, estando a uma altitude de 583m. As ovelhas foram monitoradas ultrassonograficamente por um período de sete dias quanto ao dinâmica de crescimento folicular e presença de corpo lúteo. Após determinação da ciclicidade ovariana todas as ovelhas receberam dispositivo intravaginal com 60mg de medroxiprogesterona no dia 0, que foi substituído por um novo dispositivo no dia 7 e que foi mantido até o dia 14, as fêmeas receberam única dose de 125 µg de clopostenol no dia 7. O tratamento superovulatório foi realizado com aplicação de Hormônio Folículo Estimulante Suíno- pFSH, na dose total de 200mg (10 mL), divididas em oito aplicações decrescentes com intervalo de 12h iniciando no decimo segundo dia (40 e 40; 30 e 30; 20 e 20; 10 e 10 mg, respectivamente). No dia 14 foi aplicada 300 UI de eCG. No grupo deslorrelina além do tratamento descrito acima, foram administradas três doses de 100µg deslorrelina, iniciando no dia 3 após inserção do dispositivo vaginal, repetindo a cada 72 horas. Após 36 horas da retirada do implante de progesterona foi realizada a cobertura natural das fêmeas, utilizando machos com fertilidade comprovada por participação em estação de cobertura obtendo 82% de prenhez, além de atestados aptos à reprodução através de exame andrológico prévio. A coleta de embriões realizou-se no sexto dia após as coberturas, e imediatamente antes à coleta de embriões, foi realizada a laparoscopia para avaliação dos ovários e contagem da quantidade de corpos lúteos formados. Após a coleta os embriões foram quantificados e avaliados quanto à qualidade e estádio de desenvolvimento. Imediatamente antes da primeira aplicação de FSH, antes das coberturas, e antes da coleta de embriões foi realizada ultrassonografia por via transretal para avaliação dos ovários, a fim de determinar a população folicular ovariana e a presença de corpos lúteos.

The present study main objective was to use the GnRH agonist hormone deslorelin to control ovarian follicular population, achieving this way a more homogenous follicular wave at the beginning of multiple ovulations and embryo transfer (MOET) program, reducing deleterious effects from dominant follicles over the superovulatory protocol with porcine Follicle Stimulating Hormone (pFSH). Twenty four Santa Inês breed sheep were used, aging from 2 to 4 years, and divided into two groups: control (Contr), and Deslorelin (DES). The experiment was conducted in a private property, located in Brazil, São Paulo, City of Porangaba, latitude -23.15050993 and longitude -48.09904348. All sheep were monitored ultrassonographicaly for seven days, until the presence of a corpus luteum was detected. All sheep received intravaginal sponges containing 60mg of medroxiprogesteron on day 0, and new sponges on day 7 maintained until day 14, among side a single cloprostenol 125 µg dose. Superovulatory treatment was achieved using porcine Follicular Stimulating Hormone -FSH, with the total dose of 200mg (10ml), spread in eight decreasing administrations with 12 hours interval between them, starting on the twelve day. On day 14, 300 UI of equine chorionic gonadotrophin eCG was administrated. On the treated group, in addition to the treatment described above, 3 doses of 100µg of GnRH agonist Deslorelin were administrated with 72 hours intervals, starting at day 4 after sponge insertion (day 3, day 6 and day 9). 36 hours after sponge removal, all sheep were naturally bred with rams of known fertility. Embryo recovery was realized 6 days after sheeps breeding. Immediately before the first FSH administration, before breeding, and before embryo recovery, ovarian ultrasonography was realized to determine population and presence of corpus luteum.

Double ovulation induction using low dose of Deslorelin in mares / Indução de ovulações duplas utilizando baixa dose de deslorelina em éguas

The wok was aimed to induce multiple ovulations in mares using low doses of deslorelin acetate (GnRH) to enhance the reproductive efficiency. A total of 15 mares of the quarter horse breed were used as embryo donors in a cross over 15 x 2 experimental design (fifteen animals x two treatments), where animals were monitored for two consecutive cycles. On the control group (CG), the estrous of donors occurred on its natural form and follicular development was monitored by ultrasonography. Ovulation was induced with 2500 IU hCG intravenously, when the follicle reached 35 mm in diameter, moment when artificial insemination was performed. On day 8 (D8) after ovulation, donors were submitted to embryo collection. On Treated Group 2 (TG), donors received, by intramuscular shot, 7.5 mg dinoprost thrometamine and after 48 hours of its administration follicular development was monitored twice a day byultrasound, until the larger follicle reached 23 to 25 mm and the second follicle reached at least 18 mm. Moreover, a super-ovulation protocol was performed with 100 g deslorelin in 12 diâmehour intervals until larger follicle reached 33 to 35 mm. The ovulation was induced with 1000 g deslorelin acetate, by an intramuscular shot, concomitant with 1000 IU hCG intravenously. Artificial insemination was performed immediately after ovulation and embryo collection was on D8. The percentage of mares with multiple ovulations on CG was 13.33% (2/15) and TG of 86.66% (13/15), with diference between groups (P < 0.05). The mean number of embryos per donor was 1.066±0.497 on TG and 0.6±0.48 on CG (P < 0.05). The percentage of embryos per ovulation was 52.94% on CG and 57.14% on TG, with diference between groups (P < 0.05). The percentage of embryos per flushing was 60.00% on CG and 80.00% on TG, with diference between groups (P > 0.05). The percentage of embryo recovery per flushing was 60% CG and 80% on TG (P<0.05).[...](AU)

Objetivou-se induzir ovulações múltiplas em éguas utilizando baixas doses de acetato de deslorelina (GnRH) visando aumentar a eficiência reprodutiva nessa espécie. Foram utilizadas 15 éguas doadoras de embriões da raça Quarto de Milha, em sistema cross over 15 x 2 (quinze animais x dois tratamentos), no qual cada uma foi monitorada por dois ciclos consecutivos. No Grupo Controle (GC), o estro das doadoras ocorreu de forma natural e o desenvolvimento folicular foi monitorado por ultrassonografia. A ovulação foi induzida com 2500 UI de hCG por via intravenosa, quando o foliculo alcançou diâmetro de 35 mm, momento em que se procedeu a inseminação artificial. No oitavo dia (D8) após ovulação, as doadoras foram submetidas aos procedimentos de colheita embrionária. No Grupo Tratado (GT), as doadoras receberam, por via intramuscular, 7,5 mg de dinoprost-trometamina e após 48 horas de sua administração foi realizado o monitoramento folicular duas vezes ao dia com auxilio de ultrassom, até que o maior folículo atingisse o diâmetro de 23 a 25 mm e o segundo do que 18 mm. Posteriormenteiniciou-se o protocolo de superovulação com a administração de 100 g de GnRH em intervalo de 12 horas até que o maior folículo atingisse o diâmetro entre 33 de 35 mm. A ovulação foi induzida com 1000 µg de GnRH, por via intramuscular, associado a 1000 UI de hCG aplicado por via intravenosa. Imediatamente após a ovulação efetuou-se a inseminação artificial e a colheita de embriões realizada no D8. O percentual de éguas com ovulações múltiplas no GC foi de 13,33% (2/15) e no GT de 86,66% (13/15), havendo diferença (P<0,05). O número médio de embrião por doadora foi de 1,066±0,497 no GT e de 0,6±0,48 no GC, registrando-se diferença (P < 0,05). A porcentagem de embrião por ovulação foi de 52,94% no GC e 57,14% no GT, existindo diferença (P < 0,05). A porcentagem de embrião por lavado foi de 60,00% no GC e de 80,00% no GT, havendo diferença (P > 0,05). [...](AU)

Biotecnologias reprodutivas aplicadas à produção de embriões in vitro de onça-parda (Puma concolor) e onças-pintadas (Panthera onca)

Resumo: Toda a relevancia que onca-pintada e a onça-parda, como predadores topo de cadeia, têm para a fauna brasileira e incompatível com a carência de trabalhos relacionados à biotecnologia reprodutiva em fêmeas destas espécies. Visando suprir parte desta carência, este trabalho teve como objetivo descrever o comportamento copulatório da onça-pintada; padronizar a técnica de aspiração folicular por laparoscopia em onças-pardas e pintadas; avaliar a qualidade e quantidade de oócitos de onças-pardas e pintadas maturados in vivo e in vitro; avaliar a viabilidade de oócitos desvitrificados; produzir de embriões in vitro de onças-pardas e pintadas a partir de oócitos maturados in vivo e in vitro; e avaliar a ovulação espontânea em onças-pintadas mantidas em cativeiro. Informações básicas sobre o comportamento reprodutivo das onças-pintadas são de extrema importância para o manejo, desenvolvimento de projetos de reprodução assistida e conservação. O comportamento copulatório da onça-pintada foi descrito de forma qualitativa, a partir dos primeiros sinais de proceptividade feminina e até a finalização da cópula. Descobrimos que quase metade dos eventos de copulação de Panthera onca pode ocorrer sem penetração peniana e, nesses casos, acredita-se que a ejaculação não ocorra. Várias cópulas ocorreram durante o estro feminino. Consistente com os pensamentos relatados por outros, acreditamos que esse comportamento pode ser necessário para promover múltiplas ovulações e para garantir um número suficiente de penetrações penianas bem-sucedidas com a ejaculação, garantindo assim que um número adequado de espermatozoides fertilizantes normais seja depositado na vagina. A LOPU é um procedimento seguro para obtenção de oócitos de boa qualidade visando a multiplicação de felinos selvagens como parte de estratégias de conservação, especificamente onças-pardas e onças-pintadas, que são consideradas vulneráveis no Brasil. Protocolos utilizando eCG para superestimulação ovariana são eficientes em onças-pardas e onças-pintadas, assim como a indução da ovulação nestas espécies com a utilização do hCG. A vitrificação e desvitrificação dos oócitos se mostraram eficientes, obtendo 86,4% estruturas desvitrificados com êxito em relação à avaliação morfológica. É possível a fertilização in vitro de oócitos de onças-pintadas maturados in vivo, porém novos trabalhos são necessários para a maturação in vitro dos oócitos desta espécie e de onças-pardas. A onça-pintada apresenta ovulação induzida por estímulo sensorial e não uma ovulação espontânea. Pelas dificuldades de trabalho com estes animais, não temos nenhum trabalho que defina a situação (ovulação induzida por estímulo sensorial vs. ovulação espontânea) em forma contundente. A ovulação induzida por estímulo sensorial resulta em um reflexo neurológico que resulta na liberação de GnRH pelo estímulo do hipotálamo médio-basal e subsequentes liberações de LH pela hipófise anterior, induzindo a ovulação.

Abstract: All the relevance that jaguar and puma as top-chain predators have for Brazilian fauna is incompatible with the lack of publications related to reproductive biotechnology in females of these species. In order to supply part of this lack, this work had as objective to describe the copulatory behavior of the jaguar; to standardize the follicular aspiration technique by laparoscopy in jaguars and pumas; to evaluate the quality and quantity of oocytes of jaguars and pumas matured in vivo and in vitro; to evaluate the viability of devitrified oocytes of pumas; produce in vitro embryos of jaguars and pumas from in vivo and in vitro matured oocytes; and to evaluate spontaneous ovulation in jaguars kept in captivity. Basic information on the reproductive behavior of jaguars is of extreme importance for the management, development of assisted reproduction and conservation projects. The copulatory behavior of the jaguar was described in a qualitative way, from the first signs of female proceptiveness and until the end of the copula. We found that almost half of Panthera onca coupling events can occur without penile penetration, and in these cases, it is believed that ejaculation does not occur. Several copulas occurred during female estrus. Consistent with the thoughts reported by others, we believe that such behavior may be necessary to promote multiple ovulations and to ensure a sufficient number of successful penile penetrations with ejaculation, thus ensuring that an adequate number of normal fertilizing sperm is deposited in the vagina. LOPU is a safe procedure for obtaining good quality oocytes for the multiplication of wild felines as part of conservation strategies, specifically jaguars and pumas, which are considered vulnerable in Brazil. Protocols using eCG for ovarian overstimulation are efficient in both species, as well as the induction of ovulation in these species with the use of hCG. The vitrification and devitrification of the oocytes proved to be efficient, obtaining 86.4% successful devitrification structures in relation to the morphological evaluation. It is possible do the in vitro fertilization of oocytes of jaguars matured in vivo, but new work is required for the in vitro maturation of oocytes of this species and of pumas. The jaguar exhibits ovulation induced by sensory stimuli and not spontaneous ovulation. Due to the difficulties of working with these animals, there is no publication that defines the situation (ovulation induced by sensorial stimulus vs. spontaneous ovulation) in a forceful way. Sensory stimulation-induced ovulation results in a neurological reflex that results in the release of GnRH by the stimulation of the mid-basal hypothalamus and subsequent releases of LH by the anterior pituitary, inducing ovulation.

Superovulação em éguas / Superovulation in mares / Superovulación en yeguas

Os modelos atuais de criação equina exigem o desenvolvimento e a implementação de biotecnologias relacionadas a reprodução, de modo a garantir o avanço do melhoramento genético. A inseminação artificial e a transferência de embriões (TE) são técnicas amplamente utilizadas em equinos, entretanto, às baixas taxas de recuperação embrionária comprometem o sucesso nos programas de TE. Desta forma, tratamentos hormonais que induzem múltiplas ovulações são vantajosos quando associados a programas de TE, visto que resultam em maior número de embriões recuperados. Nesse sentido, muitos protocolos vêm sendo avaliados, buscando desenvolver um tratamento capaz de aumentar consistentemente as taxas de ovulação e recuperação embrionária em éguas. Dentre os protocolos hormonais merecem destaque o extrato de pituitária equina e o hormônio folículo estimulante equino, os quais são efetivos em induzir superovulação, porém, com resultados muito variáveis. O acetato de deslorelina resulta em dupla ovulação com taxa de recuperação embrionária semelhante à observada em éguas com ovulação única. Mais recentemente, a utilização de gonadotrofinas recombinantes demonstrou resultados promissores, apresentando maior potencial para uniformização dos resultados. No entanto, a resposta ovariana de éguas frente aos tratamentos de SOV está sujeita a influência de múltiplos fatores, resultando, de maneira geral, em resultados variáveis e, muitas vezes, aquém do esperado. Sendo assim, futuras investigações são necessárias para o reconhecimento dos fenômenos associados a resposta ovulatória e recuperação embrionária quando protocolos de SOV são utilizados na espécie equina.

Current equine breeding models require the development and implementation of reproductive biotechnologies to ensure the advancement of genetic improvement. Techniques like artificial insemination and embryo transfer (ET) are widely used in horses. However, low rates of embryo recovery compromise the success in ET programs. Therefore, hormonal treatments that induce multiple ovulations are advantageous when associated with ET programs, resulting in a greater number of embryos recovered. In this context, many protocols have been evaluated, aiming to develop an effective treatment capable of consistently increase ovulation rates and embryo recovery in mares. Among the hormonal protocols, the equine pituitary extract and the equine folliele stimulating hormone, which are effective in inducing superovulation, should be highlighted, but with a very variable results. Deslorelin acetate results in double ovulation with embryo recovery rate similar to that observed in single ovulation mares. Recently, the use of recombinant gonadotrophins has shown promising results, presenting a greater potential in relation to consistence of the results. However, the ovarian response of mares to SOV treatments is influenced by multiple factors, resulting in variable outcomes, and sometimes less than expected. According to this, future investigations are necessary for recognition of the phenomenon associated to ovulatory response and embryonic recovery when SOV protocols are used in the equine species.

Los modelos actuales de creación equina requieren el desarrollo y la aplicación de la biotecnología en materia de reproducción, a fin de garantizar el avance de la mejora genética. La inseminación artificial y transferencia de embriones (TE) son técnicas ampliamente usadas en caballos, sin embargo, las tasas de recuperación de embriones bajas comprometen su éxito en los programas de TE. Siendo así, los tratamientos hormonales que inducen la ovulación múltiple son ventajosos cuando se combina con programas de TE, ya que dan lugar a mayor número de embriones recuperados. En este sentido, se han evaluado muchos protocolos, tratando de desarrollar un tratamiento capaz de aumentar constantemente las tasas de ovulación y la recuperación de embriones en yeguas. Entre los protocolos hormonales cabe destacar el uso de extracto de hipófisis equina y de la hormona estimulante del folículo, que son eficaces para inducir la superovulación, pero con resultados muy variables. Acetato de Deslorelina de resultados en doble ovulación con la tasa de recuperación de embrión similar a la observada con elsólo una ovulación en yeguas. Recientemente, el uso de gonadotropinas recombinantes ha logrado resultados prometedores que muestran un mayor potencial para la normalización de los resultados. Sin embargo, la respuesta ovárica de yeguas sometidas a un tratamiento SOV está sujeta a la influencia de múltiples factores, lo que resulta, en general, en los resultados variables y a menudo menos de lo esperado. Por lo tanto, se necesitan más investigaciones para el reconocimiento de los fenómenos asociados con la respuesta ovulatoria y la recuperación de embriones cuando los protocolos SOV se utilizan en la especie equina.

Superovulação em éguas / Superovulation in mares / Superovulación en yeguas

Os modelos atuais de criação equina exigem o desenvolvimento e a implementação de biotecnologias relacionadas a reprodução, de modo a garantir o avanço do melhoramento genético. A inseminação artificial e a transferência de embriões (TE) são técnicas amplamente utilizadas em equinos, entretanto, às baixas taxas de recuperação embrionária comprometem o sucesso nos programas de TE. Desta forma, tratamentos hormonais que induzem múltiplas ovulações são vantajosos quando associados a programas de TE, visto que resultam em maior número de embriões recuperados. Nesse sentido, muitos protocolos vêm sendo avaliados, buscando desenvolver um tratamento capaz de aumentar consistentemente as taxas de ovulação e recuperação embrionária em éguas. Dentre os protocolos hormonais merecem destaque o extrato de pituitária equina e o hormônio folículo estimulante equino, os quais são efetivos em induzir superovulação, porém, com resultados muito variáveis. O acetato de deslorelina resulta em dupla ovulação com taxa de recuperação embrionária semelhante à observada em éguas com ovulação única. Mais recentemente, a utilização de gonadotrofinas recombinantes demonstrou resultados promissores, apresentando maior potencial para uniformização dos resultados. No entanto, a resposta ovariana de éguas frente aos tratamentos de SOV está sujeita a influência de múltiplos fatores, resultando, de maneira geral, em resultados variáveis e, muitas vezes, aquém do esperado. Sendo assim, futuras investigações são necessárias para o reconhecimento dos fenômenos associados a resposta ovulatória e recuperação embrionária quando protocolos de SOV são utilizados na espécie equina.(AU)

Current equine breeding models require the development and implementation of reproductive biotechnologies to ensure the advancement of genetic improvement. Techniques like artificial insemination and embryo transfer (ET) are widely used in horses. However, low rates of embryo recovery compromise the success in ET programs. Therefore, hormonal treatments that induce multiple ovulations are advantageous when associated with ET programs, resulting in a greater number of embryos recovered. In this context, many protocols have been evaluated, aiming to develop an effective treatment capable of consistently increase ovulation rates and embryo recovery in mares. Among the hormonal protocols, the equine pituitary extract and the equine folliele stimulating hormone, which are effective in inducing superovulation, should be highlighted, but with a very variable results. Deslorelin acetate results in double ovulation with embryo recovery rate similar to that observed in single ovulation mares. Recently, the use of recombinant gonadotrophins has shown promising results, presenting a greater potential in relation to consistence of the results. However, the ovarian response of mares to SOV treatments is influenced by multiple factors, resulting in variable outcomes, and sometimes less than expected. According to this, future investigations are necessary for recognition of the phenomenon associated to ovulatory response and embryonic recovery when SOV protocols are used in the equine species.(AU)

Los modelos actuales de creación equina requieren el desarrollo y la aplicación de la biotecnología en materia de reproducción, a fin de garantizar el avance de la mejora genética. La inseminación artificial y transferencia de embriones (TE) son técnicas ampliamente usadas en caballos, sin embargo, las tasas de recuperación de embriones bajas comprometen su éxito en los programas de TE. Siendo así, los tratamientos hormonales que inducen la ovulación múltiple son ventajosos cuando se combina con programas de TE, ya que dan lugar a mayor número de embriones recuperados. En este sentido, se han evaluado muchos protocolos, tratando de desarrollar un tratamiento capaz de aumentar constantemente las tasas de ovulación y la recuperación de embriones en yeguas. Entre los protocolos hormonales cabe destacar el uso de extracto de hipófisis equina y de la hormona estimulante del folículo, que son eficaces para inducir la superovulación, pero con resultados muy variables. Acetato de Deslorelina de resultados en doble ovulación con la tasa de recuperación de embrión similar a la observada con elsólo una ovulación en yeguas. Recientemente, el uso de gonadotropinas recombinantes ha logrado resultados prometedores que muestran un mayor potencial para la normalización de los resultados. Sin embargo, la respuesta ovárica de yeguas sometidas a un tratamiento SOV está sujeta a la influencia de múltiples factores, lo que resulta, en general, en los resultados variables y a menudo menos de lo esperado. Por lo tanto, se necesitan más investigaciones para el reconocimiento de los fenómenos asociados con la respuesta ovulatoria y la recuperación de embriones cuando los protocolos SOV se utilizan en la especie equina.(AU)

CINÉTICA DE MATURAÇÃO NUCLEAR E FECUNDAÇÃO IN VITRO DE OÓCITOS BOVINOS IMATUROS INJETADOS EM FOLÍCULO PRÉ OVULATÓRIO

produção de embriões bovinos pode ser realizada por biotécnicas in vivo e in vitro. Na produção in vivo utiliza-se a superestimulação ovariana para promover múltiplas ovulações. Com esse intuito, protocolos de superestimulação ovariana foram desenvolvidos. Porém, as vacas doadoras de embriõess são submetidas a vários manejos e ao estresse hormonal durante os procedimentos de superovulação e colheita de embriões. Além disso, algumas vacas não respondem aos protocolos de superovulação. Tais dificuldades na produção in vivo de embriões não são observadas na produção in vitro que consiste em realizar in vitro a maturação e fecundação dos oócitos e cultivo inicial do desenvolvimento embrionário. No entanto, embriões produzidos in vivo possuem qualidade superior aos produzidos in vitro, o que acarreta maior criotolerância e melhores resultados de prenhez. Sendo assim, uma alternativa para melhorar a qualidade embrionária e evitar as dificuldades da produção in vivo é a utilização da técnica de injeção intrafolicular de oócitos (IIFO). Porém, a produção de embriões por essa técnica ainda é baixa e variável entre as vacas. Dessa maneira, o objetivo do estudo foi verificar se o processo de maturação in vivo de vários oócitos em folículo pre ovulatório está relacionado com a baixa produção de embriões pela técnica de IIFO. Para isso, dois experimentos foram realizados para avaliar a cinética de maturação (Experimento 1) e a fecundação in vitro (Experimento 2) de oócitos maturados em folículo pré ovulatório após IIFO. Verificou-se que a maturação de oócitos em folículo pré ovulatório por 20 horas não altera a cinética de maturação e aumenta a capacidade de fecundação in vitro em relação aos oócitos que foram maturados in vitro. Portanto, a maturação de vários oócitos no folículo pré ovulatório não é o fator determinante para a baixa produção de embriões pela técnica de IIFO.

The production of bovine embryos can be performed by in vivo and in vitro biotechniques. In in vivo embryo production, ovarian superstimulation is used to promote multiple ovulations. For this purpose, ovarian superstimulation protocols were developed. However, embryo donor cows are subjected to several manipulations and hormonal stress during superovulation and embryo collection procedures. In addition, some cows do not respond to superovulation protocols. Such difficulties in the in vivo embryo production are not observed in the in vitro technique, that consists in performing, via in vitro, the maturation and fecundation of the oocytes and initial culture of the embryonic development. However, embryos produced in vivo have superior quality when compared to those produced in vitro, which leads to greater cryotolerance and better pregnancy results. Thus, an alternative to improve embryo quality and to avoid the difficulties of in vivo production is the use of intrafollicular oocyte injection technique (IFOI). However, the production of embryos by this technique is still low and variable among cows. Thus, the objective of the study was to verify if the process of in vivo maturation of several oocytes in pre ovulatory follicle is related to a low production of embryos by the IFOI technique. For this purpose, two experiments were performed to evaluate maturation kinetics (Experiment 1) and in vitro fecundation (Experiment 2) of oocytes matured in pre ovulatory follicle after IFOI. It was found that the maturation of oocytes in the pre ovulatory follicle for 20 hours does not alter maturation kinetics and increases in vitro fertilization capacity in relation to oocytes that were matured in vitro. Therefore, the maturation of several oocytes in the preovulatory follicle is not the determining factor for low embryo production by the IFOI technique.

AVALIAÇÃO ULTRASSONOGRÁFICA DOPPLER DA VASCULARIZAÇÃO OVARIANA DE ÉGUAS SUBMETIDAS À DUPLA OVULAÇÃO

Este estudo foi dividido em três experimentos, teve com objetivo induzir ovulações múltiplas em éguas utilizando baixas doses de GnRH (deslorelina); avaliar a viabilidade folicular após tratamento superovulatório através do acompanhamento ultrassonográfico doppler dos folículos subordinados e dominante; detectar alterações vasculares que precedem o momento da divergência. Correlacionar a produção de P4 com a vascularização do CL por ultrassonografia Doppler e suas dimensões; determinar o melhor dia para inovulação de embriões através da taxa de P4, tônus uterino, perfusão vascular e dimensões do CL, avaliar a interferencia da vascularização na taxa de prenhez. No experimento 1, Foram utilizadas seis éguas doadoras de embrião da raça Mangalarga Machador. O G1 iniciou com a aplicação do luteolitico e monitoramento diário com o Modo-B, acrescentando o uso do Modo-Doppler, a partir de folículos com 25 mm até a ovulação. A indução de ovulação e a inseminação artificial foram realizadas no mesmo momento, quando o folículo atingia de 33 a 35 mm de diâmetro e edema uterino grau 2 a 3. O G2 diferenciou-se do G1 pelo tratamento superovulatório, apartir de foliculo >23mm e o >18mm, até o momento da indução de ovulação. O percentual de éguas com ovulações múltiplas no G1 0% (0/6) e no G2 83,3% (5/6) (P<0,05). Taxa de crescimento folicular G1 2,79±0,34, G2 FD 3,37±0,55, G2 F-cD 2,64 ± 0,82 (P>0,05). A vascularização da parede folícular, G1 FD 31,93 ±10,11, G2 FD 31,33 ±8,82 e do G2 F-cD 32,54 ± 9,23 (P>0,05) e do G1 Fsub, 12,92 ± 0 (P<0,05). O Experimento 2 foram utilizadas apenas éguas inovuladas, 15 éguas, divididas em Prenhas (G1) e Vazias (G2), a inovulação ocorreu entre o 4º e 6º dia pós ovulação e o diagnóstico de prenhez quando o embrião estava com 16 dias. O índice de Prenhez encontrado foi de 53,33%, a concentração de P4 foi de G1 10,64 ± 1,13 e G2 7,19 ±3,49, (P>0,05). A PV CL objetiva G1 1216,97± 74,45 e G2 661,81 ±117,11, (P<0,05). Na PV CL subjetiva 51,00±2,07 e 48,45 ± 2,15, (P>0,05), Área do CL G1 7,66±0,36 e G2 7,41 ± 0, 91, (P>0,05), diâmetro do CL G1 31,53±1,84 e G2 30,68 ±1,82, (P>0,05). PV subjetiva endométrio, G1 1,87±0,39 e G2 2,14 ±0,43, (P<0,05), PV objetiva endométrio, G1 357,56 ±103,93 e G2 181,37±54,60; tônus uterino 2,75±0,36 e G2 2,57 ±0,40, (P>0,05). Correlação entre P4 e a PV CL objetiva r=0,63 (P<0,05) e com PV CL Subjetiva r=0,69, (P<0,05), entre o PV do CL objetiva e subjetiva r =0,66 (P<0,05). Entre as dimensões do CL e o nível plasmático de P4 obteve-se, Diâmetro CL r= -0,28 (P>0,05) e Área do CL r= -0,20 (P>0,05). Entre a área e o diâmetro do CL r=0,98 (P<0,05), dimensões do CL com a PV CL Objetiva r=0,03 (P>0,05). Entre o tônus uterino e o nível plasmático de P4 r=0,25 (P>0,05), com o PV CL Objetivo r=0,29 (P>0,05) e com o diâmetro do CL r=-0,29 (P>0,05). No experimento 1, Conclui-se que a administração de GnRH em baixa dose é eficiente em induzir dupla ovulação e consequente aumento na taxa de embriões recuperados, que interferiu positivamente no crescimento do folículo dominante e co-dominante e na taxa de vascularização do folículo co-dominante. Em relação as alterações vasculares que precedem o momento da divergência, constatou-se que há diminuição da vascularização no folículo subordinado, 24h antes da divergência e aumento na vascularização do folículo dominante. No experimento 2 Conclui-se que a PV CL é indicativo de prenhez por refletir a concentração plasmática de P4, sendo a PV CL a melhor análise para seleção de receptoras tendo em vista que a concentração plasmática de P4 tem correlação significativa com a PV CL objetiva e subjetiva e não apresenta correlação significativa com as dimensões do CL e com o Tônus uterino. A avaliação subjetiva é eficaz, sendo um método mais prático e em tempo real para determinar a funcionalidade do CL.

This study divided into three experiments was carried out to induce multiple ovulation in mares using low doses of GnRH (deslorelin); evaluate the follicular viability after superovulation by doppler ultrasound monitoring of subordinate and dominant follicles; detect vascular abnormalities that precede the time of divergence. Correlate the production of P4 with the vascularization of the CL by Doppler ultrasonography and its dimensions; determine the best day to embryo transfer embryos through P4 rate, uterine tone, vascular perfusion and dimensions of CL, to evaluate the interference of vascularization in pregnancy rate. In experiment 1, it was used six donor mares embryo Mangalarga Machador race. The luteolitic G1 and daily monitoring with the B-mode, adding the use of the Doppler mode, from follicles 25 mm up to ovulation. The induction of ovulation and insemination are performed at the same time when the follicle reached 33- to 35 mm in diameter and uterine edema grade 2 to 3. The differentiated G2 to G1 by superovulation, starting follicle> 23 mm and the> 18mm, up to the time of ovulation induction. The percentage of mares with multiple ovulations in G1 0% (0/6) G2 and 83.3% (5/6) (P <0.05). follicular growth rate G1 2.79 ± 0.34, 3.37 ± 0.55 FD G2, G2 F-cd 2.64 ± 0.82 (P> 0.05). The vascularization of the follicle wall, G1 FD 31.93 ± 10.11, 31.33 ± 8.82 FD G2 and G2 F-cd 32.54 ± 9.23 (P> 0.05) and G1 fsub, 0 ± 12.92 (P <0.05. In experiment 2, they have been used only inovulated mares, 15 mares, dividindas in pregnant (G1) and Empty (G2), embryo transfer took place between the 4th and 6th day after ovulation and pregnancy diagnosis when the embryo was 16 days. The pregnancy rate was found to be 53.33%, the concentration of P4 is G1 and G2 10.64 ± 1.13 7.19 ± 3.49 (P> 0.05). PV CL lens G1 and G2 1216.97 ± 74.45 661.81 ± 117.11 (P <0.05). In PV CL subjective 51.00 ± 2.07 and 48.457 ± 2.15 (P> 0.05), CL area G1 7.66 ± 0.36 and 7.41 ± 0.91 G2 (P> 0.05), diameter CL G1 31.53 ± 1.84 and 30.68 ± 1.82 G2 (P> 0.05). Correlation between P4 and PV objective CL r=0,63 (P<0,05) and PV CL Subjective r=0,69, (P<0,05), between the CL PV objective and subjective r =0,66 (P<0,05). Among the dimensions of the plasma level CL and P4 are obtained, CL diameter r= -0,28 (P>0,05) and area CL r= -0,20 (P>0,05). Among the area and the diameter CL r=0,98 (P<0,05), with the dimensions CL CL Lens PV r=0,03 (P>0,05) with the uterine tone and P4 serum levels r=0,25 (P>0,05) and Purpose with the PV CL r=0,29 (P>0,05) and the diameter CL r=-0,29 (P>0,05). In experiment 1, it concluded that the GnRH administration in low dose is effective in inducing double ovulation and conseguente increase in the rate of recovered embryos, which had a positive influence on the growth of the dominant follicle and co-dominant and vascularization rate of co follicle - dominant. Regarding the vascular changes that precede the time of divergence, it was found that there is a decrease in the vascularization cross follicle, 24 h before the divergence and increase in vascularization of the dominant follicle. Referring to the experiment 2 appears that the largest PV CL rate in pregnant recipients on the day of embryo transfer and strong positive correlation between plasma concentration of P4 and vascular perfusion luteal, associated with the absence of dimensional changes of the SC and the uterine tone has moderate correlation with P4 and pregnancy, indicating that the Doppler technology is a more effective method for evaluation of luteal function and the strong correlation between the PV CL objective and PV CL subjective validates this method, It is more practical and easy.

FISIOLOGIA REPRODUTIVA EM CABRAS DA RAÇA SAANEN EM CLIMA TROPICAL: DINÂMICA LUTEAL, ESTACIONALIDADE REPRODUTIVA E POTENCIAL DA RESPOSTA SUPEROVULATÓRIA

A partir da espécie caprina da raça Saanen manejada sobre condições tropicais, os objetivos deste estudo foram: (1) a caracterização da dinâmica luteal em fêmeas gestantes e não gestantes a partir da ultrassonografia Doppler colorido e dosagens hormonais; (2) a caracterização da estacionalidade reprodutiva em distintas ordens de parto associado à influência de fatores externos locais; (3) o teste de um protocolo de triagem hormonal para a seleção de melhores doadoras caprina de embriões. No primeiro estudo, diariamente, foram conduzidas avaliações ultrassonográficas para medição da biometria luteal e perfusão luteal junto a coletas de sangue para mensuração de progesterona em 23 fêmeas pré-sincronizadas e inseminadas. No segundo estudo, 40 fêmeas (nulíparas, primíparas e pluríparas) tiveram o sangue colhido quinzenalmente, para a mensuração de P4 e identificação de sua ciclicidade. Em associação foram coletados, em tempos pré-determinados, índices ambientais, bioquímicos, ponderais e de produção de leite. No terceiro estudo, 20 fêmeas receberam um tratamento superovulatório de triagem com eCG e 14 dias depois, um segundo tratamento com múltiplas doses de FSH. Em paralelo, foram feitas avaliações ultrassonográficas da população folicular e contagem de corpos lúteos em tempos distintos. Verificou-se, no primeiro estudo, que a avaliação da perfusão luteal foi mais fidedigna em prever a funcionalidade luteal do que a mensuração biométrica e pontos de corte foram fornecidos para se obter um CL funcional com P4 > 1,0 ng/mL. No segundo estudo, constatou-se que cabras nulíparas apresentaram a estação reprodutiva no período do inverno e cabras primíparas e pluríparas no outono e inverno. A ausência do macho, durante a estação reprodutiva, foi marcada pelo aumento das ovulações sem apresentação de estro. Neste estudo, concluiu-se que o anestro estacional ocorre na primavera e as interações sociais foram capazes de restabelecer a ciclicidade em diversas fêmeas. Igualmente, índices ambientais e ponderais/metabólicos possuíram baixa e moderada influência, respectivamente, sobre o estado cíclico. No terceiro estudo, o protocolo de triagem com eCG foi eficaz na identificação de cabras Saanen com maior responsividade ao protocolo com FSH. Ademais, a aplicabilidade da avaliação ultrassonográfica do estado folicular antes de tratamentos superovulatórios a fim de identificar doadoras de alta resposta ovulatória em programas de MOET em caprinos foi confirmada.

Based on the Saanen goat species managed under tropical conditions, the thesis aimed to understand: (1) the luteal dynamics in pregnant and nonpregnant goats by the US Doppler technology and hormonal assay; (2) to caractherize the reproductive seasonality in different parity orders in association of the influence of local external factors; (3) to test a hormonal screening protocol to select the best embryo donors. In the first study, ultrasonographic evaluations were performed daily to measure the luteal biometry and luteal blood flow, as well blood samples were collected for P4 measurement in 23 pre-synchronized and inseminated does. In the second study, 40 females (nulliparous, primiparous and pluriparous) had the blood collected to other week for P4 measurement and identification of the cyclic status. In association, environmental, biochemical, weight and milk production indexes were collected at predetermined times. In the third study, 20 does received a superovulatory treatment of eCG and 14 days later, a second treatment with multiple doses of FSH. In parallel, ultrasound assessments of the follicular and luteal dynamics were performed at different times. In the first study, it was found that the luteal blood flow assessment was more reliable in predicting luteal functionality than biometric measurements also it provided cutoff points to indicate CL functionality (P4 > 1.0 ng/mL). In the second study, it was found that nulliparous goats had the reproductive season in the winter period and primiparous and pluriparous goats in autumn and winter. The buck absence, during the reproductive season, is marked by the increase of silent estrus. Seasonal anestrous occurs in the spring and social interactions were able to restore cyclicity in several females. Likewise, environmental and weight/metabolic indexes had low and moderate influence, respectively, on the cyclic status. In the third study, the eCG protocol was effective to identify Saanen goats to best response to the FSH protocol. Furthermore, the applicability of the ultrasound assessment of the follicular status before superovulatory treatments was highlighted in order to identify donors of high ovulatory response in MOET programs for goats.

Caracterização anatomofuncional do sistema genital de fêmeas bubalinas (Bubalus bubalis) e suas implicações na múltipla ovulação e transferência de embriões / Anatomical and functional characterization of the genital system of female buffaloes (Bubalus bubalis) and its implications on multiple ovulation and embryo transfer

Realizaram-se estudos para aferir as prováveis causas da baixa taxa de recuperação de estruturas embrionárias em búfalas superovuladas. No primeiro estudo (Experimento 1), foram utilizados sistemas genitais de búfalas e de bovinas tratadas para a indução de ovulações únicas ou múltiplas, os quais foram submetidos à morfometria, seguidos de lavagem dos ovidutos para a recuperação dos oócitos. Posteriormente, os ovidutos foram encaminhados à histologia. No Experimento 2, foram utilizados ovidutos de búfalas e de bovinas, tratadas para a indução de ovulação única. O lúmen do oviduto foi exposto e, após isso, os ovidutos foram incubados em meio de cultura com ou sem E2, com posterior colocação de microesferas na sua superfície para a aferição do movimento ciliar. No Experimento 3, foram utilizados ovidutos de búfalas e de bovinas tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram incubados em meio de cultura com ou sem E2, com a inserção de oócitos bubalinos ou bovinos em seu lúmen, sendo posteriormente lavados para a recuperação e contagem dos oócitos. No Experimento 4, búfalas e bovinas foram tratadas para a indução de ovulações únicas ou múltiplas. Após a ovulação, os animais foram submetidos à laparotomia para a inserção de oócitos bubalinos ou bovinos no oviduto.(AU)

Studies were performed to assess the probable causes of the low embryonic structures recovery rate in superovulated buffaloes. In the first study (Experiment 1) were used buffaloes and bovines genital systems treated to induce single or multiple ovulations, which were submitted to morphometry followed by oviducts flushing for the oocytes recovery. Subsequently, the oviducts were sent to histology. In Experiment 2, were used buffaloes and bovines oviducts treated for single ovulation. The oviduct lumen was exposed and, thereafter, incubated in culture medium with or without E2, with subsequent placement of microspheres on its surface for the ciliary movement measure. In Experiment 3, were used buffaloes and bovines oviducts treated for a single ovulation. The oviducts were incubated in culture medium with or without E2, with the inclusion of bovine or buffalo oocytes in the lumen, and subsequently flushed for the oocytes recovery and counting. In Experiment 4, buffaloes and bovines were treated to induce single or multiple ovulations. After ovulation, the animals underwent laparotomy for the insertion of bovine or buffalo oocytes in the oviduct. Later (five and six days after buffalo and bovine oocytes insertion, respectively), the genital systems were flushed in vivo for the embryonic structures recovery.(AU)

Caracterização anatomofuncional do sistema genital de fêmeas bubalinas (Bubalus bubalis) e suas implicações na múltipla ovulação e transferência de embriões / Anatomical and functional characterization of the genital system of female buffaloes (Bubalus bubalis) and its implications on multiple ovulation and embryo transfer

Realizaram-se estudos para aferir as prováveis causas da baixa taxa de recuperação de estruturas embrionárias em búfalas superovuladas. No primeiro estudo (Experimento 1), foram utilizados sistemas genitais de búfalas e de bovinas tratadas para a indução de ovulações únicas ou múltiplas, os quais foram submetidos à morfometria, seguidos de lavagem dos ovidutos para a recuperação dos oócitos. Posteriormente, os ovidutos foram encaminhados à histologia. No Experimento 2, foram utilizados ovidutos de búfalas e de bovinas, tratadas para a indução de ovulação única. O lúmen do oviduto foi exposto e, após isso, os ovidutos foram incubados em meio de cultura com ou sem E2, com posterior colocação de microesferas na sua superfície para a aferição do movimento ciliar. No Experimento 3, foram utilizados ovidutos de búfalas e de bovinas tratadas para a indução de ovulação única. Os ovidutos foram incubados em meio de cultura com ou sem E2, com a inserção de oócitos bubalinos ou bovinos em seu lúmen, sendo posteriormente lavados para a recuperação e contagem dos oócitos. No Experimento 4, búfalas e bovinas foram tratadas para a indução de ovulações únicas ou múltiplas. Após a ovulação, os animais foram submetidos à laparotomia para a inserção de oócitos bubalinos ou bovinos no oviduto.

Studies were performed to assess the probable causes of the low embryonic structures recovery rate in superovulated buffaloes. In the first study (Experiment 1) were used buffaloes and bovines genital systems treated to induce single or multiple ovulations, which were submitted to morphometry followed by oviducts flushing for the oocytes recovery. Subsequently, the oviducts were sent to histology. In Experiment 2, were used buffaloes and bovines oviducts treated for single ovulation. The oviduct lumen was exposed and, thereafter, incubated in culture medium with or without E2, with subsequent placement of microspheres on its surface for the ciliary movement measure. In Experiment 3, were used buffaloes and bovines oviducts treated for a single ovulation. The oviducts were incubated in culture medium with or without E2, with the inclusion of bovine or buffalo oocytes in the lumen, and subsequently flushed for the oocytes recovery and counting. In Experiment 4, buffaloes and bovines were treated to induce single or multiple ovulations. After ovulation, the animals underwent laparotomy for the insertion of bovine or buffalo oocytes in the oviduct. Later (five and six days after buffalo and bovine oocytes insertion, respectively), the genital systems were flushed in vivo for the embryonic structures recovery.

EFICIÊNCIA DO PROTOCOLO SUPERESTIMULATÓRIO P-36 COM A UTILIZAÇÃO DE DUAS ADMINISTRAÇÕES DE FSH, EM ANIMAIS DA RAÇA ANGUS (Bos taurus)

MARTINS BONOTTO, Ramiro. Eficiência do protocolo superestimulatório P-36 com a utilização de duas administrações de FSH, em animais da raça angus (Bos taurus). 2015. 71f. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal Área: Produção Animal) Universidade do Estado de Santa Catarina. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal, Lages, 2015. A transferência de embriões é uma biotecnologia amplamente utilizada em vacas Bos taurus. Este princípio envolve a realização de um protocolo de superestimulação para indução de ovulações múltiplas. O protocolo P-36 é um dos mais utilizados com este propósito, pois permite a inseminação artificial em tempo fixo (IATF) facilitando o manejo de doadoras e receptoras de embriões. A superestimulação é feita com oito doses decrescentes de pFSH a cada 12h, porém estudos mostram que a administração de pFSH com uma absorção lenta diminui o número de aplicações, mantendo a mesma produção de embriões. Assim o objetivo deste trabalho foi comparar a superovulação de vacas utilizando o protocolo P36 com redução no número de manejos. Foram utilizadas 24 vacas doadoras da raça Angus, distribuídas aleatoriamente em 2 grupos: Controle e MAP-5 (ácido hialurônico), em um delineamento cross over. Em dia aleatório do ciclo estral (D0), as doadoras receberam um dispositivo intravaginal contendo 1,0 g de progesterona (DIV) e benzoato de estradiol (2 mg, via IM). No grupo controle, os animais foram superestimulados com pFSH (via IM, dose total = 200 mg) duas vezes ao dia em doses decrescentes do D4 ao D7, enquanto que no grupo MAP-5 foram realizadas somente duas administrações no D4 (75% da dose) e D6 (25% da dose). As coletas de embriões foram realizadas no D15 do protocolo. A análise estatística foi realizada com o pacote estatístico SAS utilizando o procedimento Mixed com nível de significância a 5%, sendo consideradas as variáveis: número de folículos no dia da indução de ovulação, número de corpos lúteos no momento da coleta, número de estruturas totais coletadas, número de estruturas fertilizadas e número de embriões viáveis. O grupo controle demonstrou-se significativamente melhor que o grupo MAP-5 quanto ao número de folículos (10,08±0,61 vs. 8,25±0,61), corpos lúteos (7,25±0,59 vs. 3,25±0,59) o que resultou em uma taxa de ovulação de 71,90% para o grupo controle e 39,39% para o grupo MAP-5. Quanto ao número de estruturas totais (8,29±0,98 vs. 3,08±0,98), estruturas fertilizadas (6,50±0,90 vs. 2,50±0,90) e embriões viáveis (4,21±0,72 vs. 2,00±0,72) o grupo controle também demonstrou diferença significativa quando comparado ao MAP-5. O que demonstra que a redução dos manejos com a dose de 200 mg de FSH proposta como grupo MAP-5 não foi eficaz para doadoras da raça Angus.

MARTINS BONOTTO, Ramiro. Efficiency protocol superstimulatory P-36 with the use of two FSH administration in Angus cows (Bos taurus) . 2015. 71f. Thesis (MS in Animal Science - Area: Animal Production) University of the State of Santa Catarina. Graduate Program in Animal Science, Lages, 2015. Embryo transfer is a biotechnology widely used in Bos taurus cows. This principle involves making an over stimulation protocol for inducing multiple ovulations. The P-36 protocol is one of the most used for this purpose as it allows artificial insemination in fixed time (TAI) facilitating the management of donor and recipient embryo. The overstimulation is made with eight pFSH decreasing doses every 12 hours, but studies show that the administration pFSH with a slow absorption decreases the number of applications, maintaining output similar embryos. So the aim of this study was to compare the superovulation of cows using the P36 protocol with reduction in the number of handlings. They were used 24 donor cows of Angus, randomly assigned to two groups: Control and MAP-5 (hyaluronic acid), in a crossover design. At random stage of the estrous cycle (D0), donors received an intravaginal device containing 1.0 g progesterone (DIV) and estradiol benzoate (2 mg, IM). In the control group, the animals were over stimulated with pFSH (IM, total dose = 200 mg) twice daily in decreasing doses of D4 to D7, while the MAP-5 group were carried out only two administrations in the D4 (75% of dose) and D6 (25% of dose). The embryo collections were made in the protocol D15. Statistical analysis was performed with SAS statistical package using the Mixed procedure with 5% significance level, and the variables considered: number of follicles on the day of ovulation induction, the number of corpora lutea at collection time, total number of collected structures, structures and number of fertilized number of viable embryos. The control group showed significantly better than the MAP-5 group and the number of follicles (10.08 ± 0.61 vs. 8.25 ± 0.61), corpora lutea (7.25 ± 0.59 vs. 3.25 ± 0.59) which resulted in a 71.90% ovulation rate for the control group and 39.39% for the MAP-5 group. As for the total number of structures (8.29 ± 0.98 vs. 3.08 ± 0.98), fertilized structures (6.50 ± 0.90 vs. 2.50 ± 0.90) and viable embryos (4 21 ± 0.72 vs. 2.00 ± 0.72) the control group also showed a significant difference when compared to MAP-5. This shows that the reduction of handlings with 200 mg of FSH proposed with MAP-5 group was not effective donor Angus breed.

A administração de hCG incrementa a incidência de ovulações duplas e múltiplas em éguas da raça Campolina apresentando folículos codominantes? / Does hCG administration increase the incidence of double and multiple ovulations in Campolina mares with co-dominant follicles?

A gonadotrofina coriônica humana (hCG) é rotineiramente empregada na indução de ovulação em éguas. A incidência de duplas ovulações é variável, sendo comum em determinadas raças brasileiras, como Brasileiro de Hipismo e Campolina. O objetivo deste trabalho foi avaliar se a administração de hCG em éguas da raça Campolina incrementa a incidência de ovulações duplas e múltiplas. Através de palpação retal e ultrassonografia, foram avaliados dois ciclos estrais de 104 éguas, divididas em dois grupos. À detecção de um ou mais folículos ³35 mm e edema endometrial grau 2, 2.500 IU de hCG (IV) eram administrados às éguas do grupo I. O grupo II serviu como controle. Os resultados obtidos foram analisados pelo Qui-quadrado. A incidência de ovulações duplas nos grupos I e II foi de, respectivamente, 32,7% (34/104) versus 30,8% (32/ 104). Ambos os grupos obtiveram incidência semelhante de ovulações triplas (1,9% - 2/104). Apenas uma ovulação quádrupla (1,0% - 1/104) foi detectada, no grupo controle. A incidência de duplas e múltiplas ovulações foi similar entre os grupos (p > 0,05). Pelo fato das éguas da raça Campolina apresentarem, fisiologicamente, considerável incidência de ovulações duplas e múltiplas, é possível que a administração de hCG não tenha influenciado estes padrões ovulatórios.(AU)

The human chorionic gonadotrophin (hCG) has been routinely used in the equine species to induce ovulations for more than four decades. The incidence of multiple ovulations in horses is variable, being double ovulations a common occurrence in some Brazilian breeds, such as Brasileiro de Hipismo and Campolina. The aim of this work was to evaluate the role of hCG administration to increase, in Campolina mares, the incidence of double and multiple ovulations, which are desirable in embryo transfer programs. One hundred and four (104) mares had their estrous cycles recorded through rectal palpation and ultrasonographic evaluation during the breeding season of 2003 - 2004, in a total of two hundred and eight (208) cycles (two cycles per mare). Animals were allocated in two groups, with fifty two (52) horses each. In Group I mares, once one or more = 35 mm follicles and grade 2 uterine edema were present, 2.500 IU of hCG were intravenously administered. The untreated mares in Group II served as control. The Chi-Square test was used to analyze obtained results. The incidence of double ovulations in groups I and II was, respectively, of 32.7% (34/104) versus 30.8% (32/104). The incidence of triple ovulations was low in both groups, of 1.9% (2/104). Only once in the control group (1.0% - 1/104) was a quadruple ovulation detected. There was no difference in the incidence of double and multiple ovulations between both groups (p > 0.05). Possibly, hCG administration did not influence ovulation patterns in this work due to the fact that Campolina breed mares physiologically show a considerable incidence of double and multiple ovulations.(AU)