Neoctangium travassosi (Digenea: Microscaphidiidae) in sea turtles from South America / Neoctangium travassosi (Digenea: Microscaphidiidae) em tartarugas marinhas da América do Sul

Sea turtles are endangered animals that present cosmopolitan distribution. Anthropic actions have been considered important causes for the reduction of sea turtle population, but natural aspects such as parasitism may also contribute to their decline. This study aimed to report the occurrence of parasites in stranded dead sea turtles found in an area known as Potiguar Basin, northeastern Brazil, from 2010 to 2019. They were identified and classified according to the carapace length. At post-mortem analyses all organs were examined, parasites collected and morphologically identified. Ecological parasitic indexes as prevalence (P), mean intensity (MI) and mean abundance (MA) were calculated. A total of 80 Chelonia mydas and 5 Eretmochelys imbricata were assessed. Neoctangium travassosi was detected in both species presenting P = 20%, MI = 4.19 and MA = 0.84 for C. mydas and P = 60%, MI = 1.67 and MA = 1.0 for E. imbricata. This is the first report of N. travassosi parasitizing E. imbricata in South America. Finally, the retrieval of these parasites is a warning regarding the need for further studies to assess the impact of this parasitism on the health and conservation of sea turtles.

As tartarugas marinhas são animais ameaçados de extinção que apresentam distribuição cosmopolita. Ações antrópicas têm sido consideradas causas importantes para a redução da população de tartarugas marinhas, mas aspectos naturais, como o parasitismo, também, podem contribuir para o seu declínio. Este estudo objetivou relatar a ocorrência de parasitos em tartarugas marinhas, encalhadas mortas, encontradas em uma área conhecida como Bacia Potiguar, nordeste do Brasil, de 2010 a 2019. Essas foram identificadas e classificadas de acordo com o comprimento da carapaça. Nas análises post mortem, todos os órgãos foram examinados, e os parasitos coletados e identificados morfologicamente. Foram calculados índices parasitários ecológicos, como prevalência (P), intensidade média (IM) e abundância média (AM). Um total de 80 Chelonia mydas e cinco Eretmochelys imbricata foi estudado. Neoctangium travassosi foi detectado em ambas as espécies, apresentando P = 20%, MI = 4,19 e MA = 0,84 para C. mydas e P = 60%, IM = 1,67 e AM = 1,0 para E. imbricata. Este é o primeiro relato de N. travassossi parasitando E. imbricata na América do Sul. Conclui-se que a recuperação desses parasitos soa como um alerta para a necessidade de mais estudos para avaliar o impacto desse parasitismo na saúde e na conservação das tartarugas marinhas.

Caracterização da fauna helmintológica de tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) e tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) atropelados nas rodovias BR-050 e BR-455 (Minas Gerais, Brasil) / [Helmintological characterization of giant anteater (Myrmecophaga tridactyla) and lesser anteater (Tamandua tetradactyla) roadkilled on BR-050 and BR-455 highways (Minas Gerais, Brazil)]

O tamanduá-bandeira (Myrmecophaga tridactyla) e o tamanduá-mirim (Tamandua tetradactyla) são mamíferos xenartros amplamente distribuídos no território nacional. Apesar disso, suas populações estão em constante ameaça, principalmente o primeiro, categorizado como vulnerável de acordo com classificação da União Internacional para Conservação da Natureza. Diante disso e da escassez de estudos com endoparasitas nesses animais, objetivou-se descrever a helmintofauna dessas duas espécies de tamanduá, utilizando espécimes atropelados nas rodovias BR-050 e BR-455, região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais, Brasil. Os animais foram submetidos à necropsia, tendo seus órgãos e conteúdo intestinal e estomacal examinados para recuperação de helmintos. Os parasitos coletados foram identificados com base em suas características morfológicas e morfométricas. As espécies/os gêneros caracterizados para M. tridactyla e T. tetradactyla, suas respectivas prevalências, bem como órgãos de origem, foram: Gaphidiops dissimilis (33,33% e 0%) no estômago; Gigantorhynchus echinodiscus (25% e 66,66%) no intestino delgado; Physaloptera magnipapilla (50% e 66,6%) no estômago; e Mathevotaenia spp. (25% e 66,66%) no intestino delgado. Physaloptera magnipapilla foi a espécie com os maiores índices de infecção, e novo registro de localização foi registrado para o nematódeo Graphidiops dissimilis. Detectou-se uma provável sobreposição da área de vida dos tamanduás estudados, bem como uma helmintofauna característica da região.(AU)

Myrmecophaga tridactyla, giant anteater and Tamandua tetradactyla, collared anteater are nationally widespread mammals. Despite that, their populations are in danger, especially the first one, categorized as vulnerable according to the International Union for Conservation of Nature. This study reports the occurrence of helminths in these two anteater species using road killed specimens from BR-050 and BR-455 highways, Triângulo Mineiro region, Minas Gerais state, Brazil. The species were necropsied, and their gastrointestinal organs and contents were opened and examined for parasite recovery. The identification was based on morphological and morphometric features. The species/ genera found for M. tridactyla and T. tetradactyla, their prevalence, as well the organs, were: Gaphidiops dissimilis (33.33% and 0%) in stomach; Gigantorhynchus echinodiscus (25% and 66.66%) in small intestine; Physaloptera magnipapilla (50% and 66.6%) in stomach and Mathevotaenia spp. (25% and 66.66%) in small intestine. Physaloptera magnipapilla was the most common species and a new location was reported for Graphidiops dissimilis. There is a probable overlap in the home range of these animals and a local helminth diversity was described on the study site.(AU)

O manejo pré-abate avaliado por indicadores de estresse e qualidade da carne / The management pre-slaughter evaluated for stress indicators and meat quality / Gestión pre-matadero evaluada por el estrés de la carne y los indicadores de calidad

Ao que se refere aos aspectos relacionados ao bem-estar dos animais durante os manejos que antecedem o abate ainda é preciso desenvolver, aprofundar e ampliar a legislação para que os animais tenham o cuidado e atenção necessários, além de atender às exigências do mercado consumidor. O período pré-abate engloba desde a retirada dos animais da fazenda até o abate. O manejo durante este período, acarretam consequências diretas ou indiretas no equilíbrio do organismo, gerando estresse, alterando os rendimentos das carcaças, bem como as características físico-químicas e sensoriais da carne, o que afeta seu processo de industrialização da carne. Os animais mantidos no curral de abates e deparam com ambiente desconhecido, mistura de lotes, maior tempo de contato com humanos, privação de alimento e redução do espaço para movimentação. As horas que deveriam ser utilizadas para recuperação do estresse do transporte e necessárias para redução do conteúdo gastrointestinal, passam a ter efeito inverso, elevando o nível do estresse podendo torná-lo crônico com efeitos irreversíveis. A relação entre o potencial glicolítico e o pH está comprovada, bem como, a relação entre o pH final da carne bovina e a qualidade da carne, demonstrando a importância do metabolismo post-mortem na qualidade da carne. As reações bioquímicas do processo de conversão do músculo em carne, quando ocorrem de maneira natural e com os substratos necessários, propiciam a maturação adequada permitindo a maciez final apropriada e apreciada pelo consumidor. O consumo de glicogênio muscular, que é um dos efeitos do estresse, resulta em valores de pH elevado e a ocorrência de carne Dry, Frim and Dark(DFD), resultando na rejeição do produto pelo consumidor principalmente devido a coloração mais escura da carne. A cor da carne é o principal atributo que governa a intenção de compra pelo consumidor. Caso a cor não seja considerada aceitável, o produto...

Regarding aspects related to animal welfare during pre-slaughter management, it is still necessary to develop, deepen and expand the legislation so that the animals have the necessary care and attention, in addition to meeting the demands of the consumer market. The pre-slaughter period ranges from the removal of animals from the farm to slaughter. The management during this period, have direct or indirect consequences on the body's balance, generating stress, changing carcass yields, as well as the physical-chemical and sensory characteristics of meat, which affects its process of industrialization of meat. The animals kept in the slaughter pen face an unknown environment, batch mixing, longer contact time with humans, food deprivation and reduced movement space. The hours that should be used for transport stress recovery and needed to reduce gastrointestinal content now have the opposite effect, increasing the stress level and making it chronic with irreversible effects. The relationship between glycolytic potential and pH is proven, as well as the relationship between the final pH of beef and meat quality, demonstrating the importance of post-mortem metabolism in meat quality. Biochemical reactions of the process of converting muscle to meat, when they occur naturally and with the necessary substrates, provide adequate maturation allowing the appropriate final tenderness and appreciated by the consumer. Consumption of muscle glycogen, which is one of the effects of stress, results in high pH values and the occurrence of Dry, Frim and Dark (DFD) meat, resulting in consumer rejection of the product mainly due to the darker coloration of the meat...

Con respecto a los aspectos relacionados con el bienestar animal durante el manejo previo al sacrificio, aún es necesario desarrollar, profundizar y expandir la legislación para que los animales tengan el cuidado y la atención necesarios, además de satisfacer las demandas del mercado de consumo. El período previo al sacrificio abarca desde la extracción de animales de la granja hasta el sacrificio. El manejo durante este período, tiene consecuencias directas o indirectas en el equilibrio del organismo, generando estrés, alterando los rendimientos de la canal, así como las características fisicoquímicas y sensoriales de la carne, lo que afecta su proceso de industrialización de la carne. Los animales mantenidos en el corral de sacrificio enfrentan un ambiente desconocido, mezcla de lotes, mayor tiempo de contacto con humanos, privación de alimentos y espacio reducido para el movimiento. Las horas que deberían usarse para recuperar el estrés del transporte y ser necesarias para reducir el contenido gastrointestinal ahora tienen el efecto contrario, aumentando el nivel de estrés y haciéndolo crónico con efectos irreversibles. La relación entre el potencial glucolítico y el pH está probada, así como la relación entre el pH final de la carne y la calidad de la carne, lo que demuestra la importancia del metabolismo post mortem en la calidad de la carne. Las reacciones bioquímicas del proceso de convertir el músculo en carne, cuando ocurren naturalmente y con los sustratos necesarios, proporcionan una maduración adecuada que permite la ternura final apropiada y apreciada por el consumidor. El consumo de glucógeno muscular, que es uno de los efectos del estrés, da como resultado valores altos de pH y la aparición de carne seca, frima y oscura (DFD), lo que resulta en el rechazo del producto por parte del consumidor

O manejo pré-abate avaliado por indicadores de estresse e qualidade da carne / The management pre-slaughter evaluated for stress indicators and meat quality / Gestión pre-matadero evaluada por el estrés de la carne y los indicadores de calidad

Ao que se refere aos aspectos relacionados ao bem-estar dos animais durante os manejos que antecedem o abate ainda é preciso desenvolver, aprofundar e ampliar a legislação para que os animais tenham o cuidado e atenção necessários, além de atender às exigências do mercado consumidor. O período pré-abate engloba desde a retirada dos animais da fazenda até o abate. O manejo durante este período, acarretam consequências diretas ou indiretas no equilíbrio do organismo, gerando estresse, alterando os rendimentos das carcaças, bem como as características físico-químicas e sensoriais da carne, o que afeta seu processo de industrialização da carne. Os animais mantidos no curral de abates e deparam com ambiente desconhecido, mistura de lotes, maior tempo de contato com humanos, privação de alimento e redução do espaço para movimentação. As horas que deveriam ser utilizadas para recuperação do estresse do transporte e necessárias para redução do conteúdo gastrointestinal, passam a ter efeito inverso, elevando o nível do estresse podendo torná-lo crônico com efeitos irreversíveis. A relação entre o potencial glicolítico e o pH está comprovada, bem como, a relação entre o pH final da carne bovina e a qualidade da carne, demonstrando a importância do metabolismo post-mortem na qualidade da carne. As reações bioquímicas do processo de conversão do músculo em carne, quando ocorrem de maneira natural e com os substratos necessários, propiciam a maturação adequada permitindo a maciez final apropriada e apreciada pelo consumidor. O consumo de glicogênio muscular, que é um dos efeitos do estresse, resulta em valores de pH elevado e a ocorrência de carne Dry, Frim and Dark(DFD), resultando na rejeição do produto pelo consumidor principalmente devido a coloração mais escura da carne. A cor da carne é o principal atributo que governa a intenção de compra pelo consumidor. Caso a cor não seja considerada aceitável, o produto...(AU)

Regarding aspects related to animal welfare during pre-slaughter management, it is still necessary to develop, deepen and expand the legislation so that the animals have the necessary care and attention, in addition to meeting the demands of the consumer market. The pre-slaughter period ranges from the removal of animals from the farm to slaughter. The management during this period, have direct or indirect consequences on the body's balance, generating stress, changing carcass yields, as well as the physical-chemical and sensory characteristics of meat, which affects its process of industrialization of meat. The animals kept in the slaughter pen face an unknown environment, batch mixing, longer contact time with humans, food deprivation and reduced movement space. The hours that should be used for transport stress recovery and needed to reduce gastrointestinal content now have the opposite effect, increasing the stress level and making it chronic with irreversible effects. The relationship between glycolytic potential and pH is proven, as well as the relationship between the final pH of beef and meat quality, demonstrating the importance of post-mortem metabolism in meat quality. Biochemical reactions of the process of converting muscle to meat, when they occur naturally and with the necessary substrates, provide adequate maturation allowing the appropriate final tenderness and appreciated by the consumer. Consumption of muscle glycogen, which is one of the effects of stress, results in high pH values and the occurrence of Dry, Frim and Dark (DFD) meat, resulting in consumer rejection of the product mainly due to the darker coloration of the meat...(AU)

Con respecto a los aspectos relacionados con el bienestar animal durante el manejo previo al sacrificio, aún es necesario desarrollar, profundizar y expandir la legislación para que los animales tengan el cuidado y la atención necesarios, además de satisfacer las demandas del mercado de consumo. El período previo al sacrificio abarca desde la extracción de animales de la granja hasta el sacrificio. El manejo durante este período, tiene consecuencias directas o indirectas en el equilibrio del organismo, generando estrés, alterando los rendimientos de la canal, así como las características fisicoquímicas y sensoriales de la carne, lo que afecta su proceso de industrialización de la carne. Los animales mantenidos en el corral de sacrificio enfrentan un ambiente desconocido, mezcla de lotes, mayor tiempo de contacto con humanos, privación de alimentos y espacio reducido para el movimiento. Las horas que deberían usarse para recuperar el estrés del transporte y ser necesarias para reducir el contenido gastrointestinal ahora tienen el efecto contrario, aumentando el nivel de estrés y haciéndolo crónico con efectos irreversibles. La relación entre el potencial glucolítico y el pH está probada, así como la relación entre el pH final de la carne y la calidad de la carne, lo que demuestra la importancia del metabolismo post mortem en la calidad de la carne. Las reacciones bioquímicas del proceso de convertir el músculo en carne, cuando ocurren naturalmente y con los sustratos necesarios, proporcionan una maduración adecuada que permite la ternura final apropiada y apreciada por el consumidor. El consumo de glucógeno muscular, que es uno de los efectos del estrés, da como resultado valores altos de pH y la aparición de carne seca, frima y oscura (DFD), lo que resulta en el rechazo del producto por parte del consumidor…(AU)

Ovine epididymal spermatozoa preservation in liquid state with or without seminal plasma epididimários ovinos / Preservação em estado líquido, com ou sem plasma seminal,de espermatozóides epididimários ovinos

Preservation and use of spermatozoa that have been recovered after death can extend the use of genetically superior animals. The objective of this study was to evaluate the maximum period for which ovine spermatozoa could be successfully stored in refrigerated dilution medium post-mortem, with or without added seminal plasma. Three samples of spermatozoa collected in an artificial vagina from 10 rams, or from the tails of four epididymes from the same rams at the time of death (G0) and six (G6), twelve (G12), twenty-four (G24) and forty-eight (G48) hours after death were used. After recovery, the spermatozoa were refrigerated at 5°C in either control medium (CM) or control medium plus 20%homologous seminal plasma (SP) and evaluated for 72 hours from the start of refrigeration. The G48 samples had a lower(P 0.05) total motility (TM) and plasma membrane integrity in the hyposmotic test (HOST) than the other groups evaluated at all analyzed times. The TM decreased (P 0.05) after 24 hours of cooling in semen collected in AV, at G0 and G24 and after 48 hours of refrigeration in G6 and G12. The TM and HOST integrity and sperm morphology did not differ between samples refrigerated in CM or SP. In conclusion, it is possible to collect epididymal spermatozoa up to 24 hours after death. Sperm viability can be prolonged fora further 48 hours by refrigeration. However, total motility decreases from 24 hours after refrigeration and the supplementation of 20% seminal plasma to the extender has no effect on spermatozoa longevity.(AU)

A recuperação e preservação dos espermatozoides após a morte possibilita maior aproveitamento de animais geneticamente superiores. O objetivo deste trabalho foi avaliar o período máximo após a morte do carneiro para que os espermatozoides possam ser refrigerados em meio diluidor com ou sem plasma seminal. Foram utilizadas três amostras de espermatozoides colhidos em vagina artificial (AV) de 10 carneiros ou da cauda de quatro epidídimos provenientes dos mesmos carneiros no momento da morte (G0) e seis (G6), doze (G12), vinte e quatro (G24) e quarenta e oito (G48) horas após a morte. Após a recuperação os espermatozoides (em AV ou cauda do epidídimo) foram refrigerados à 5°C em dois tratamentos: meio controle (CM) ou meio controle acrescido de 20% de plasma seminal homólogo (SP) e avaliados até 72 horas após o início da refrigeração. As amostras do G48 apresentaram motilidade total (TM) e integridade de membrana plasmática no teste hiposmótico (HOST) menor (P 0,05) que os outros grupos avaliados em todos os momentos estudados. TM diminuiu (P 0,05) após 24 horas de refrigeração no sêmen colhido em AV, no G0 e G24 e a partir de 48 horas de refrigeração no G6 e G12. A TM, integridade de membrana no HOST e morfologia espermática não diferiram entre as amostras refrigeradas em CM ou SP. Contudo, é possível refrigerar espermatozoides epididimários até 24 horas post mortem, a refrigeração prolonga a viabilidade espermática até 48 horas após o início da refrigeração. A adição de 20% de plasma seminal ao meio diluidor não tem efeito sobre a longevidade espermática.(AU)

Ovine epididymal spermatozoa preservation in liquid state with or without seminal plasma epididimários ovinos

ABSTRACT: Preservation and use of spermatozoa that have been recovered after death can extend the use of genetically superior animals. The objective of this study was to evaluate the maximum period for which ovine spermatozoa could be successfully stored in refrigerated dilution medium post-mortem, with or without added seminal plasma. Three samples of spermatozoa collected in an artificial vagina from 10 rams, or from the tails of four epididymes from the same rams at the time of death (G0) and six (G6), twelve (G12), twenty-four (G24) and forty-eight (G48) hours after death were used. After recovery, the spermatozoa were refrigerated at 5°C in either control medium (CM) or control medium plus 20%homologous seminal plasma (SP) and evaluated for 72 hours from the start of refrigeration. The G48 samples had a lower(P 0.05) total motility (TM) and plasma membrane integrity in the hyposmotic test (HOST) than the other groups evaluated at all analyzed times. The TM decreased (P 0.05) after 24 hours of cooling in semen collected in AV, at G0 and G24 and after 48 hours of refrigeration in G6 and G12. The TM and HOST integrity and sperm morphology did not differ between samples refrigerated in CM or SP. In conclusion, it is possible to collect epididymal spermatozoa up to 24 hours after death. Sperm viability can be prolonged fora further 48 hours by refrigeration. However, total motility decreases from 24 hours after refrigeration and the supplementation of 20% seminal plasma to the extender has no effect on spermatozoa longevity.

RESUMO: A recuperação e preservação dos espermatozoides após a morte possibilita maior aproveitamento de animais geneticamente superiores. O objetivo deste trabalho foi avaliar o período máximo após a morte do carneiro para que os espermatozoides possam ser refrigerados em meio diluidor com ou sem plasma seminal. Foram utilizadas três amostras de espermatozoides colhidos em vagina artificial (AV) de 10 carneiros ou da cauda de quatro epidídimos provenientes dos mesmos carneiros no momento da morte (G0) e seis (G6), doze (G12), vinte e quatro (G24) e quarenta e oito (G48) horas após a morte. Após a recuperação os espermatozoides (em AV ou cauda do epidídimo) foram refrigerados à 5°C em dois tratamentos: meio controle (CM) ou meio controle acrescido de 20% de plasma seminal homólogo (SP) e avaliados até 72 horas após o início da refrigeração. As amostras do G48 apresentaram motilidade total (TM) e integridade de membrana plasmática no teste hiposmótico (HOST) menor (P 0,05) que os outros grupos avaliados em todos os momentos estudados. TM diminuiu (P 0,05) após 24 horas de refrigeração no sêmen colhido em AV, no G0 e G24 e a partir de 48 horas de refrigeração no G6 e G12. A TM, integridade de membrana no HOST e morfologia espermática não diferiram entre as amostras refrigeradas em CM ou SP. Contudo, é possível refrigerar espermatozoides epididimários até 24 horas post mortem, a refrigeração prolonga a viabilidade espermática até 48 horas após o início da refrigeração. A adição de 20% de plasma seminal ao meio diluidor não tem efeito sobre a longevidade espermática.

Estado atual da conservação a 4°C de tecidos somáticos derivados da pele em mamíferos / Current status of conservation at 4°C of somatic tissues derived from the skin in mammals

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste em uma atraente ferramenta para a conservação e multiplicação de espécies. A eficiência desta biotécnica depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Em alguns mamíferos encontrados em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4°C de tecidos somáticos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Contudo, o emprego desta técnica depende de alguns fatores, como os períodos e as condições de armazenamento a 4°C das amostras, os quais podem influenciar na recuperação das células após cultivo in vitro dos tecidos. Em mamíferos domésticos, estudos têm mostrado variações quanto ao período de estocagem e a presença de meio nutritivo. Já em mamíferos silvestres, apenas são relatados o uso da refrigeração como ferramenta de transporte em curto prazo. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar as diferentes condições de armazenamento a 4°C de tecidos somáticos, evidenciando a importância dessa técnica para a conservação da biodiversidade.(AU)

Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for conservation and multiplication of species. The efficiency of this biotechnique depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. In some mammals found in regions difficult to access or distant from specialized laboratories, the storage at 4°C of somatic tissues of the skin would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Nevertheless, the use of this technique depends on some factors, such as periods and storage conditions at 4°C of the samples, which may influence the recovery of the cells after tissue culture in vitro. In domestic mammals, studies have shown variations regarding the period of storage and the presence of nutrient medium. Already, in wild mammals, only is related the use of refrigeration as transportation tool in the short term. Thus, the aim of this review is to present the different conditions of storage at 4°C of somatic tissues, evidencing the importance of this technique for the conservation of biodiversity.(AU)

Estado atual da conservação a 4°C de tecidos somáticos derivados da pele em mamíferos / Current status of conservation at 4°C of somatic tissues derived from the skin in mammals

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste em uma atraente ferramenta para a conservação e multiplicação de espécies. A eficiência desta biotécnica depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Em alguns mamíferos encontrados em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 4°C de tecidos somáticos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Contudo, o emprego desta técnica depende de alguns fatores, como os períodos e as condições de armazenamento a 4°C das amostras, os quais podem influenciar na recuperação das células após cultivo in vitro dos tecidos. Em mamíferos domésticos, estudos têm mostrado variações quanto ao período de estocagem e a presença de meio nutritivo. Já em mamíferos silvestres, apenas são relatados o uso da refrigeração como ferramenta de transporte em curto prazo. Assim, o objetivo desta revisão é apresentar as diferentes condições de armazenamento a 4°C de tecidos somáticos, evidenciando a importância dessa técnica para a conservação da biodiversidade.

Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for conservation and multiplication of species. The efficiency of this biotechnique depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. In some mammals found in regions difficult to access or distant from specialized laboratories, the storage at 4°C of somatic tissues of the skin would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Nevertheless, the use of this technique depends on some factors, such as periods and storage conditions at 4°C of the samples, which may influence the recovery of the cells after tissue culture in vitro. In domestic mammals, studies have shown variations regarding the period of storage and the presence of nutrient medium. Already, in wild mammals, only is related the use of refrigeration as transportation tool in the short term. Thus, the aim of this review is to present the different conditions of storage at 4°C of somatic tissues, evidencing the importance of this technique for the conservation of biodiversity.

Viability of ovine spermatozoa collected from epididymides stored at 18°-25°C for 48 hours post mortem / Viabilidade dos espermatozoides ovinos coletados de epidídimos armazenados a 18°-25°C até 48 horas após a morte

The objectives of this study were to verify the time during which viable ovine spermatozoa could be recovered from the cauda epididymis kept at ambient temperature (18-25°C). Sperm collected in an artificial vagina (AV) were used as control. Spermatozoa samples were collected with an AV and from epididymis at 0 (G0), 6 (G6), 12 (G12), 24 (G24), and 48 (G48) hours post mortem. Total motility (TM), progressive motility (PM), hypo-osmotic membrane integrity test (HOST) and morphological changes were assessed. TM decreased (P<0.05) from 24 hours post mortem (70.0±1.9%) compared to AV (86.4±1.0%). PM decreased (P<0.05) from 12 hours after death (31.3±4.0%) compared to AV group (73.2±1.4%). The percentage of viable cells in HOST decreased (P<0.05) in the G48 (60.0±8.9%). Spermatozoa recovery was lower (P<0.05) 48 hours after death (2064.2±230.7 x 106 spermatozoa) compared to G0(2623.6±288.4 x 106 spermatozoa). In conclusion, under the conditions of this study, it would be possible to use epididymal spermatozoa recovered up to 24 hours after death for artificial insemination or in vitro fertilization; however, fertility trials are necessary to prove this hypothesis.(AU)

Os objetivos deste estudo foram avaliar o período pelo qual era possível recuperar espermatozoides ovinos viáveis da cauda de epidídimos mantidos em temperatura ambiente (18-25°C). O sêmen coletado em vagina artificial (AV) foi utilizado como controle. Os espermatozoides foram coletados dos epidídimos à zero hora (G0), às seis (G6), 12 (G12), 24 (G24) e 48 (G48) horas post mortem. A motilidade total (TM), a motilidade progressiva (PM), a integridade de membrana plasmática em solução hiposmótica (HOST) e a morfologia espermática foram avaliadas. A TM diminuiu (P<0,05) a partir de 24 horas após a morte (70,0±1,9%) comparado ao sêmen coletado em AV (86,4±1,0%). A PM diminuiu (P<0,05) a partir de 12 horas após a morte (31,3±4,0%) comparado ao grupo AV (73,2±1,4%). A porcentagem de espermatozoides viáveis no HOST diminuiu (P<0,05) no G48 (60,0±8,9%). A recuperação espermática foi menor (P<0,05) 48 horas após a morte (2064,2±498,1 x 106 espermatozoides) comparado ao G0 (2298,4±288,4 x 106 espermatozoides). Em conclusão, nas condições deste estudo, é possível utilizar espermatozoides epididimários recuperados até 24 horas após a morte para inseminação artificial ou fertilização in vitro, porém testes de fertilidade são necessários para comprovar essa hipótese.(AU)

Viability of ovine spermatozoa collected from epididymides stored at 18°-25°C for 48 hours post mortem / Viabilidade dos espermatozoides ovinos coletados de epidídimos armazenados a 18°-25°C até 48 horas após a morte

The objectives of this study were to verify the time during which viable ovine spermatozoa could be recovered from the cauda epididymis kept at ambient temperature (18-25°C). Sperm collected in an artificial vagina (AV) were used as control. Spermatozoa samples were collected with an AV and from epididymis at 0 (G0), 6 (G6), 12 (G12), 24 (G24), and 48 (G48) hours post mortem. Total motility (TM), progressive motility (PM), hypo-osmotic membrane integrity test (HOST) and morphological changes were assessed. TM decreased (P<0.05) from 24 hours post mortem (70.0±1.9%) compared to AV (86.4±1.0%). PM decreased (P<0.05) from 12 hours after death (31.3±4.0%) compared to AV group (73.2±1.4%). The percentage of viable cells in HOST decreased (P<0.05) in the G48 (60.0±8.9%). Spermatozoa recovery was lower (P<0.05) 48 hours after death (2064.2±230.7 x 106 spermatozoa) compared to G0(2623.6±288.4 x 106 spermatozoa). In conclusion, under the conditions of this study, it would be possible to use epididymal spermatozoa recovered up to 24 hours after death for artificial insemination or in vitro fertilization; however, fertility trials are necessary to prove this hypothesis.(AU)

Os objetivos deste estudo foram avaliar o período pelo qual era possível recuperar espermatozoides ovinos viáveis da cauda de epidídimos mantidos em temperatura ambiente (18-25°C). O sêmen coletado em vagina artificial (AV) foi utilizado como controle. Os espermatozoides foram coletados dos epidídimos à zero hora (G0), às seis (G6), 12 (G12), 24 (G24) e 48 (G48) horas post mortem. A motilidade total (TM), a motilidade progressiva (PM), a integridade de membrana plasmática em solução hiposmótica (HOST) e a morfologia espermática foram avaliadas. A TM diminuiu (P<0,05) a partir de 24 horas após a morte (70,0±1,9%) comparado ao sêmen coletado em AV (86,4±1,0%). A PM diminuiu (P<0,05) a partir de 12 horas após a morte (31,3±4,0%) comparado ao grupo AV (73,2±1,4%). A porcentagem de espermatozoides viáveis no HOST diminuiu (P<0,05) no G48 (60,0±8,9%). A recuperação espermática foi menor (P<0,05) 48 horas após a morte (2064,2±498,1 x 106 espermatozoides) comparado ao G0 (2298,4±288,4 x 106 espermatozoides). Em conclusão, nas condições deste estudo, é possível utilizar espermatozoides epididimários recuperados até 24 horas após a morte para inseminação artificial ou fertilização in vitro, porém testes de fertilidade são necessários para comprovar essa hipótese.(AU)

Needle muscle biopsy: technique validation and histological and histochemical methods for evaluating canine skeletal muscles / Biópsia muscular por agulha: validação da técnica e dos métodos histológicos e histoquímicos na avaliação do músculo esquelético de cães

This study evaluated the needle muscle biopsy technique using a 6G Bergstrõm percutaneous needle combined with histological and histochemical methods to analyze the skeletal muscle of dogs. There are few studies about canine skeletal muscles and a lack of reports in the literature about tissue collection and analysis for canine species. Evaluation of 32 German Shepherd samples collected from the gluteus medius, at a depth of 3 cm, was performed. The choice of gluteus medius and the 3-cm depth provided good quantity fragments with sufficient sizes (35 mm), which permitted optimal visualization of muscle fibers. Myosin ATPase, at pH 9.4, 4.6, and 4.3, and SDH reactions revealed that all muscle samples analyzed had fibers in the classic mosaic arrangement, enabling counting and typification. The mean percentages of fibers were 29.95% for type I and 70.05% for type II. On the basis of these results, we concluded that the percutaneous needle biopsy technique for canine skeletal muscles is a safe and easy procedure that obtains fragments of proper sizes, thereby enabling the study of muscle fibers. Standardization of the muscle of choice and the depth of muscle sample collection significantly contributed to this success. This is an important method to evaluate muscle fiber types of dogs and diagnose important diseases affecting the skeletal muscles.(AU)

O objetivo deste trabalho foi avaliar a técnica de biopsia muscular por agulha de biópsia percutânea tipo Bergstrõm nº seis, e os métodos histológicos e histoquímicos utilizados na análise do músculo esquelético de cães, uma vez que estudos sobre a musculatura esquelética em cães são poucos o que acarreta um número pequeno de relatos na literatura sobre métodos de coleta e análise desse tecido nessa determinada espécie. Foram avaliadas amostras de 32 animais da raça Pastor Alemão coletadas do músculo glúteo médio a uma profundidade de três centímetros. A escolha da profundidade de três centímetros e do músculo Glúteo Médio em cães da raça Pastor Alemão denotou fragmentos colhidos com suficiente viabilidade, bons padrões de tamanho (entre três e cinco milímetros) e boa quantidade e qualidade, permitindo ótima visualização das fibras musculares dos animais da amostra. Nas reações enzimo-histoquímicas da miosina ATPase no pH 9.4, 4.6 e 4.3 e SDH todos os músculos examinados apresentavam a distribuição das fibras musculares com o clássico padrão de mosaico, possibilitando a contagem e a diferenciação dos diferentes tipos. O valor médio de fibras tipo I foi de 29,95% e o valor médio de fibras tipo II, 70,05%. Com base nesses resultados, pode-se concluir que a técnica de biopsia com agulha percutânea utilizada em músculo esquelético de caninos, demonstrou ser um procedimento seguro e de fácil recuperação, obtendo fragmentos de tamanho adequado e, portanto, viabilizando o estudo. A padronização do músculo e da profundidade de coleta da amostra muscular teve contribuição importante. Sendo um importante meio para avaliar os tipos de fibras musculares em cães e no diagnóstico de importantes enfermidades que acometem a musculatura esquelética.(AU)

Obtenção de oócitos post mortem em Leopardus tigrinus Schreber, 1775: relato de caso / Obtention of post mortem oocytes in Leopardus tigrinus Schreber, 1775: case report

Entre as várias técnicas utilizadas para a preservação e manejo de espécies selvagens, as biotécnicas aplicadas à reprodução são apresentadas como alternativas promissoras na conservação do germoplasma de espécies ameaçadas, além de fornecer dados cada vez mais detalhados sobre a fisiologia reprodutiva dessas espécies. O presente relato pretende demonstrar a aplicabilidade da técnica de fatiamento ovariano (slicing) na recuperação de oócitos post mortem em um exemplar de gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) vítima de atropelamento, observando a quantidade de oócitos e seus respectivos graus morfológicos para uma possível maturação celular. Um total de 88 oócitos foram coletados e estes foram classificados em três graus de acordo com sua conformação. A técnica de corte de ovário foi viável para a recuperação de oócitos na espécie e apresentou um número considerável de coleta com ovários em ótimo estado de conservação, no entanto, sugere-se a realização de estudos adicionais para obter dados complementares.(AU)

Among the various techniques used for the preservation and management of wild species, biotechniques applied to reproduction are presented as promising alternatives in the conservation of the germplasm of endangered species, as well as providing increasingly detailed data on the reproductive physiology of these species. The present report intends to demonstrate the applicability of the slicing technique in the recovery of postmortem oocytes in a small leopard (Leopardus tigrinus), a victim of trampling, observing the amount of oocytes and their respective morphological degrees for possible cell maturation. A total of 88 oocytes were collected and classified into three grades according to their conformation. The ovarian cutting technique was feasible for the recovery of oocytes in the species and presented a considerable number of ovarian collection in excellent condition, however, it is suggested to carry out additional studies to obtain complementary data.(AU)

Obtenção de oócitos post mortem em Leopardus tigrinus Schreber, 1775: relato de caso / Obtention of post mortem oocytes in Leopardus tigrinus Schreber, 1775: case report

Entre as várias técnicas utilizadas para a preservação e manejo de espécies selvagens, as biotécnicas aplicadas à reprodução são apresentadas como alternativas promissoras na conservação do germoplasma de espécies ameaçadas, além de fornecer dados cada vez mais detalhados sobre a fisiologia reprodutiva dessas espécies. O presente relato pretende demonstrar a aplicabilidade da técnica de fatiamento ovariano (slicing) na recuperação de oócitos post mortem em um exemplar de gato-do-mato-pequeno (Leopardus tigrinus) vítima de atropelamento, observando a quantidade de oócitos e seus respectivos graus morfológicos para uma possível maturação celular. Um total de 88 oócitos foram coletados e estes foram classificados em três graus de acordo com sua conformação. A técnica de corte de ovário foi viável para a recuperação de oócitos na espécie e apresentou um número considerável de coleta com ovários em ótimo estado de conservação, no entanto, sugere-se a realização de estudos adicionais para obter dados complementares.

Among the various techniques used for the preservation and management of wild species, biotechniques applied to reproduction are presented as promising alternatives in the conservation of the germplasm of endangered species, as well as providing increasingly detailed data on the reproductive physiology of these species. The present report intends to demonstrate the applicability of the slicing technique in the recovery of postmortem oocytes in a small leopard (Leopardus tigrinus), a victim of trampling, observing the amount of oocytes and their respective morphological degrees for possible cell maturation. A total of 88 oocytes were collected and classified into three grades according to their conformation. The ovarian cutting technique was feasible for the recovery of oocytes in the species and presented a considerable number of ovarian collection in excellent condition, however, it is suggested to carry out additional studies to obtain complementary data.

Espermatozoides epididimários: refrigeração e criopreservação / Epididymal spermatozoa: refrigeration and criopreservation

A recuperação de espermatozoides epididimários após a morte possibilita a utilização do material genético de reprodutores de interesse zootécnico que morrem inesperadamente e de espécimes selvagens ou ameaçadas de extinção. O período máximo após a morte pelo qual os espermatozoides permanecem viáveis varia conforme a temperatura de armazenamento dos epidídimos. A refrigeração e a congelação são os métodos utilizados para preservação espermática, contudo os espermatozoides epididimários apresentam peculiaridades em seus processos de preservação. A refrigeração de espermatozoides epididimários pode ser realizada in situ ou in vitro, sendo que estas duas formas de refrigeração apresentam vantagens e desvantagens inerentes às técnicas. Os espermatozoides epididimários apresentam maior resistência à variações de temperatura e osmolaridade que tornam os processos de preservação diferentes dos aplicados ao sêmen colhido em vagina artificial ou eletroejaculação. Esta revisão visa foi compilar trabalhos referentes à recuperação e preservação espermática epididimária.(AU)

The recovery of epididymal spermatozoa after death is used to avail genetic material of breeding herders of zootechnical interest who die unexpectedly and of wild or endangered species. The maximum post mortem period by which sperm remain viable varies with the storage temperature of the epididymis. Refrigeration and cryopreservation are methods for sperm preservation, however, epididymal spermatozoa present peculiarities in their preservation processes. The cooling of epididymal spermatozoa can be performed in situ or in vitro, these two forms of refrigeration have advantages and disadvantages inherent in the techniques. The epididymal spermatozoa have greater resistance to variations in temperature and osmolarity that make conservation processes different from those applied to semen collected in an artificial vagina or electroejaculation. This review aims to compile works referring to epididymal sperm retrieval and preservation.(AU)

Espermatozoides epididimários: refrigeração e criopreservação / Epididymal spermatozoa: refrigeration and criopreservation

A recuperação de espermatozoides epididimários após a morte possibilita a utilização do material genético de reprodutores de interesse zootécnico que morrem inesperadamente e de espécimes selvagens ou ameaçadas de extinção. O período máximo após a morte pelo qual os espermatozoides permanecem viáveis varia conforme a temperatura de armazenamento dos epidídimos. A refrigeração e a congelação são os métodos utilizados para preservação espermática, contudo os espermatozoides epididimários apresentam peculiaridades em seus processos de preservação. A refrigeração de espermatozoides epididimários pode ser realizada in situ ou in vitro, sendo que estas duas formas de refrigeração apresentam vantagens e desvantagens inerentes às técnicas. Os espermatozoides epididimários apresentam maior resistência à variações de temperatura e osmolaridade que tornam os processos de preservação diferentes dos aplicados ao sêmen colhido em vagina artificial ou eletroejaculação. Esta revisão visa foi compilar trabalhos referentes à recuperação e preservação espermática epididimária.

The recovery of epididymal spermatozoa after death is used to avail genetic material of breeding herders of zootechnical interest who die unexpectedly and of wild or endangered species. The maximum post mortem period by which sperm remain viable varies with the storage temperature of the epididymis. Refrigeration and cryopreservation are methods for sperm preservation, however, epididymal spermatozoa present peculiarities in their preservation processes. The cooling of epididymal spermatozoa can be performed in situ or in vitro, these two forms of refrigeration have advantages and disadvantages inherent in the techniques. The epididymal spermatozoa have greater resistance to variations in temperature and osmolarity that make conservation processes different from those applied to semen collected in an artificial vagina or electroejaculation. This review aims to compile works referring to epididymal sperm retrieval and preservation.

Influência do método de recuperação oocitária sobre os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos / Influence of the recovery method on the quanti-qualitative parameters of bovine oocytes

Os objetivos foram avaliar os parâmetros quanti-qualitativos de oócitos bovinos após recuperação usando diferentes métodos de colheita e tipos de êmbolo da seringa de aspiração. Assim, dois experimentos foram realizados usando ovários de fêmeas post-mortem. No primeiro experimento, duas técnicas de colheita oocitária foram empregadas: aspiração de folículos (2–8 mm) com agulha 21G e seringa de 5 mL e, fatiamento da superfície ovariana (slicing). No segundo experimento, folículos (2–8 mm) foram aspirados usando seringa com distintos êmbolos (borracha vs. plástico). Os complexos cumulus-oócito (CCOs) foram classificados por critérios morfológicos em viáveis e não viáveis. Em seguida, CCOs foram corados com o azul de cresil brilhante (ACB) (60 min; 26 μM) e classificados como ACB+ (viáveis) e ACB- (não viáveis). Um total de cinco repetições por experimento foi realizado e os dados analisados pelo teste exato de Fisher (P0,05) foi observada entre os tipos de êmbolos quanto aos parâmetros quantitativos. Quanto à qualidade oocitária avaliada por critérios morfológicos, um percentual maior de oócitos viáveis foi recuperado usando êmbolo de borracha (75,4% vs. 58,2%; P<0,05). Em conclusão, oócitos de melhor qualidade podem ser obtidos a partir da aspiração folicular, especialmente usando seringa com êmbolo de borracha.

The aims were to evaluate qualitative-quantitative parameters of bovine oocytes after recovery using different collectionmethods and piston type from the aspiration syringe. Thus, two experiments were performed using ovaries from postmortemfemales. In the first experiment, two techniques of oocyte recovery were used: aspiration of follicles (2–8 mm)with 21G needle and 5 mL syringe, and slicing of the ovarian surface. In the second experiment, follicles (2–8 mm)were aspirated using syringes with different pistons (rubber vs. plastic). The cumulus-oocyte complexes (COCs) wereclassified by morphological criteria as viable and non-viable. Then, COCs were stained with brilliant cresyl blue (BCB)(60 min, 26 µM) and categorized as BCB+(viable) and BCB-(non-viable). A total of five repetitions per experimentwas performed and the data analyzed by Fisher's exact test (P0.05) was observed the piston type as the quantitativeparameters. As the oocyte quality evaluated by morphological criteria, a higher percentage of viable oocytes wererecovered using rubber piston (75.4% vs. 58.2%; P<0.05). In conclusion, better quality oocytes can be obtained fromfollicular aspiration, especially by using a rubber piston syringe

Serological monitoring of antibodies for an early diagnosis ofaspergillosis in captive penguins / Monitoramento sorológico com detecção de anticorpos para diagnóstico precoce da aspergilose em pinguins em cativeiro

This study aimed to evaluate the efficacy of detection of anti-Aspergillus fumigatus antibodies in captive penguins by double radial agar gel immunodiffusion (AGID) for the aspergillosis diagnosis. We included 134 Magellanic penguins (Spheniscus magellanicus) in rehabilitation at the Center for Recovery of Marine Animals (CRAM / FURG). All of them were monitored by AGID weekly until its final destination (death or release), totalizing 660 serum samples studied. All animals were clinically accompanied and post-mortem examinations was performed in penguins that died during the studied period. A total of 28% (37/134) of the penguins died, 89.2% (33/37) due to aspergillosis, 11% (4/37) by other causes and 97 were released. From the 33 animals with proven aspergillosis, 21 presented anti- A. fumigatus antibodies by AGID, being the average interval between death and positive AGID 16.4 days. Twelve animals with negative serology died of aspergillosis. The sensitivity and specificity rates were 63.6% and 95% respectively, and the positive and negative predictive values were 80.7% and 88.9% respectively. These data demonstrate that the serological monitoring for detection of antibodies by AGID can be an important tool for the diagnosis of aspergillosis in penguins.(AU)

Este estudo teve como objetivo avaliar a eficácia da detecção de anticorpos anti- Aspergillus fumigatus em pinguins em cativeiro por imunodifusão radial dupla em gel de ágar (IDGA) para diagnóstico da aspergilose. Foram incluídos 134 pingüins de Magalhães (Spheniscus magellanicus) em reabilitação no Centro de Recuperação de Animais Marinhos (CRAM/FURG), que foram monitoradas por IDGA, semanalmente, até o seu destino final (morte ou de liberação), totalizando 660 amostras de soro estudadas. Todos os animais foram acompanhados clinicamente e exames post mortem foram realizados em pingüins que vieram a óbito durante o período de estudo. Um total de 28% (37/134) dos pinguins foram a óbito, 89,2% (33/37) de aspergilose, 11% (4/37) de outras causas, e 97 foram liberados. A partir dos 33 animais com aspergilose comprovada, 21 apresentaram anticorpos anti- A. fumigatus por IDGA, sendo o intervalo médio entre a morte e IDGA positivas 16,4 dias. Doze animais com sorologia negativa vieram a óbito por aspergilose. As taxas de sensibilidade e especificidade foram de 63,6% e 95%, respectivamente, e os valores preditivos positivos e negativos foram de 80,7% e 88,9 %, respectivamente. Estes dados demonstram que o monitoramento sorológico para detecção de anticorpos por IDGA pode ser uma ferramenta importante no diagnóstico de aspergilose em pinguins.(AU)

CONDUTO DE ORIENTAÇÃO NERVOSA FUNCIONALIZADO COM CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS MULTIPOTENTES PROMOVE A REGENERAÇÃO DO NERVO ISQUIÁTICO EM RATOS

As lesões traumáticas do sistema nervoso periférico (SNP) são altamente debilitantes, levando a déficits sensório-motores a longo prazo. A regeneração nervosa depende de um microambiente permissivo para o crescimento axonal, associado a presença de moléculas solúveis bioativas. Neste sentido, o uso das células estromais mesenquimais multipotentes derivadas do tecido adiposo (AdMSC) em combinação com condutos de orientação nervosa (NGC) poderiam acarretar estratégias promissoras para a regeneração nervosa. Ratos Wistar foram submetidos a lesão crítica do nervo isquiático (12 mm de gap) e divididos em grupos experimentais: Sham (abordagem do nervo isquiático sem alterações), GA (técnica de autoenxerto), GPCL (tubulação com NGC vazio), GPCL+MSCc (tubulação com NGC + 106 AdMSC de cão embebidas em biopolímero de fibrina) e GPCL+MSCr (tubulação com NGC + 106 AdMSC de rato embebidas em biopolímero de fibrina). Os NGC de policaprolactona (PCL) foram fabricados por impressão 3D. As AdMSC de cão foram caracterizadas in vitro e foi avaliado o potencial neuroregenerativo após a estimulação com INF-y (BDNF, GDNF, HGF e IL-10). Foram avaliados o índice de funcionalidade do nervo isquiático e tibial durante 12 semanas in vivo. A análise da marcha e a eletroneuromiografia foram avaliadas nas semanas 8 e 12. Foi realizada a morfometria post-mortem nas semanas 8 e 12 após o reparo nervoso. Trinta dias após a lesão nos grupos GPCL+MSCc e Sham, foram analisadas a expressão de fatores neurotróficos (BDNF, GDNF e o receptor p75NTR) e a reatividade das células de Schwann (S-100 e neurofilamento) pela imunofluorescencia, e a expressão gênica na medula espinhal (BDNF, GDNF, HGF, IL-6 e IL-10). A estimulação com INF-y aumentou a expressão gênica de BDNF, GDNF, HGF e IL-10 nas AdMSC de cão. Os grupos GPCL+MSCc e GPCL+MSCr apresentaram recuperação motora e eletrofisiológica quando comparados ao grupo GPCL em 8 e 12 semanas. Porém, os valores não foram superiores ao autoenxerto. Os achados foram relacionados a presença de fibras mielinizadas, maior expressão de BDNF, GDNF e P75NTR no nervo isquiático e a up-regulation de BDNF, GDNF e HGF na medula espinhal. Foi observada tendência a maior reatividade das células de Schwann e ramificação axonal no nervo isquiático. A combinação de NGC impressos em 3D e funcionalizados com AdMSC de cão e de rato mostraram efeitos neuroprotetores. A associação de AdMSC e biopolímero de fibrina suportaram o microambiente trófico e estimularam o estado pró-regenerativo na lesão crítica do nervo isquiático em ratos.

Peripheral nervous injuries (PNS) are highly debilitating, leading to long-term motor and sensory deficits. Nerve regeneration depends of the permissive microenvironment for axonal growth associated to bioactive molecules. In this sense, the use of multipotent mesenchymal stromal cells adipose tissue derived (AdMSC) in combination with nerve guidance conduits (NGC) could be promising strategies for nerve regeneration. Wistar rats were submitted to critical sciatic nerve injury (12 mm gap) and divided into experimental groups: Sham, GA (autograft), GPCL (empty NGC), GPCL + MSCc (NGC + 106 plus canine AdMSC embedded in fibrin biopolymer), GPCL + MSCr (NGC + 106 plus rat AdMSC embedded in fibrin biopolymer). Polycaprolactone (PCL) NGC was manufactured by 3D printing. In vitro, regenerative potential was evaluated after INF- stimulation (BDNF, GDNF, HGF and IL-10). In vivo, were measure the sciatic ant tibial functional index for 12 weeks. Gait analysis and electroneuromyography were performed at 8 and 12 weeks. Post-mortem, morphometric analysis was made at 8 and 12 weeks after nerve repair. Thirty days after lesion in the GPLC+MSCc and Sham, were evaluated the expression of neurotrophins (BDNF, GDNF and p75NTR receptor), Schwann cells reactivity by immunofluorescence (S-100 and neurofilament) and gene expression in the spinal cord (BDNF, GDNF, HGF, IL-6 and IL-10). The stimulation with INF- increased gene expression on canine AdMSC in vitro for BDNF, GDNF, HGF and IL-10. The groups GPCL+MSCc and GPCL+MSCr showed functional motor and electrophysiological motor recovery when compared with the GPCL group at 8 and 12 weeks. However, the values were not superior to GA group. These findings were related to presence of myelinated fibers, increased of neurotrophins expression BDNF, GDNF and p75NTR on sciatic nerve and up-regulation of the BDNF, GDNF and HGF in the spinal cord. A trend towards greater reactivity of Schwann cells and axonal branching in the sciatic nerve were observed. The combination of NGC 3D-printing and functionalized with canine and rat AdMSC showed neuroprotective effects. The association of canine or rat AdMSC and fibrin biopolymer support trophic microenvironment and stimulate a pro-regenerative state in severe sciatic nerve injury in rats.

CONSERVAÇÃO DE TECIDO SOMÁTICO DE CATETOS (Pecari tajacu LINNAEUS, 1758) SUBMETIDO A DIFERENTES CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO

A clonagem por transferência nuclear de células somáticas consiste numa atraente ferramenta para a conservação da biodiversidade e sua eficiência depende da obtenção e seleção de células doadoras de núcleo derivadas da pele de indivíduos de interesse. Especificamente para catetos, mamíferos silvestres encontrados algumas vezes em regiões de difícil acesso ou distantes de laboratórios especializados, o armazenamento a 46°C de tecidos da pele seria uma alternativa para a conservação do material genético desses animais. Portanto, o objetivo foi avaliar diferentes períodos de armazenamento e a presença de meio nutritivo sobre a recuperação de células somáticas derivadas da pele de catetos. Para tanto, 476 explantes auriculares (9,0 mm3) recuperados de onze animais adultos, oriundos do Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA), foram distribuídos em sete grupos: amostras não refrigeradas (controle) e refrigeradas na ausência ou presença de Meio de Eagle Modificado por Dulbecco suplementado com 2,2 g/L de bicarbonato de sódio, 10% de soro fetal bovino e 2% de solução de antibiótico-antimicótico por 10, 30 e 50 dias de estocagem. Para as análises histológicas, amostras foram fixadas em paraformaldeído a 4%, processadas e coradas com hematoxilina-eosina para avaliação da espessura da epiderme e derme, número de fibroblastos e halos. Além disso, fragmentos foram avaliados quanto à quantificação de regiões argirofílicas organizadoras nucleolares (AgNORs) e atividade metabólica por brometo de 3-[4,5-dimetil-tiazol-2-il]-2,5-difeniltetrazólio (MTT). Para as análises de cultivo in vitro, explantes foram cultivados e avaliados quanto à morfologia celular, qualidade do cultivo, viabilidade celular por azul de tripan, atividade proliferativa pela determinação da curva de crescimento e tempo de duplicação da população celular e atividade metabólica pelo ensaio de MTT. Comparações entre os fragmentos refrigerados e não refrigerados foram analisadas usando o software GraphPad Prisma. Quanto à espessura tecidual, apenas os fragmentos armazenados por 50 dias na ausência de meio nutritivo, apresentaram uma redução e aumento, respectivamente, da espessura da epiderme (55,8 ± 3,2 m vs. 64,8 ± 2,1 m) e derme (172,7 ± 2,5 m vs. 147,6 ± 2,5 m) quando comparado ao controle (P < 0,05). Além disso, o período de estocagem, independente da presença de meio, promoveu uma redução do número de fibroblastos e aumento no número de halos. Ainda, o número de AgNORs indicando atividade proliferativa, e atividade metabólica dos explantes, diminuíram com o período de armazenamento. Após o cultivo in vitro dos explantes, apenas os fragmentos armazenados sem meio por 50 dias não foram capazes de obter células somáticas. Além disso, células oriundas de explantes na presença de meio por 10 dias mostraram características similares às células de explantes não refrigerados, especialmente quanto à duração do cultivo, tempo de duplicação da população celular, dia de todos os explantes aderidos e tempo total de subconfluência. Desta forma, células viáveis de catetos podem ser recuperadas de fragmentos teciduais armazenados por até 50 dias na presença de meio nutritivo; contudo, tecidos somáticos refrigerados até 10 dias na presença de meio resultaram em células mais viáveis.

Cloning by somatic cell nuclear transfer is an attractive tool for biodiversity conservation and its efficiency depends on the obtaining and selection of nucleus donor cells derived from the skin of individuals of interest. Specifically for collared peccaries, wild mammals found sometimes in regions difficult to access or far from specialized laboratories, the storage at 46°C of skin tissues would be an alternative for the conservation of the genetic material of these animals. Therefore, the aim was to evaluate different periods of storage and the presence of nutrient medium on the recovery of somatic cells derived from skin of collared peccaries. Thus, 476 ear explants (9.0 mm3) recovered from eleven adult animals from the Centro de Multiplicação de Animais Silvestres (CEMAS/UFERSA) were distributed in seven groups: samples not refrigerated (control) and refrigerated in absence or presence of Dulbeccos Modified Eagles Medium supplemented with 2.2 g/L sodium bicarbonate, 10% fetal bovine serum and 2% antibioticantimycotic for 10, 30 and 50 days of storage. For the histological analyzes, samples were fixed in 4% paraformaldehyde, processed and stained with hematoxylin-eosin for evaluation of epidermal and dermal thickness, number of fibroblasts and halos. Moreover, fragments were evaluated for the quantification of argyrophilic nucleolar organizer region (AgNORs) and metabolic activity by 3-[4,5-dimethylthiazol- 2-yl] -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). For in vitro culture analyzes, explants were cultured and evaluated for cell morphology, culture quality, cell viability by trypan blue, proliferative activity by determination of the growth curve and doubling time of the cell population and metabolic activity by MTT assay. Comparisons between the refrigerated and not refrigerated fragments were analyzed using the GraphPad Prisma software. As for the tissue thickness, only the fragments stored for 50 days in the absence of nutrient medium showed a reduction and increase, respectively, in the thickness of the epidermis (55.8 ± 3.2 m vs. 64.8 ± 2.1 m) and dermis (172.7 ± 2.5 m vs. 147.6 ± 2.5 m) when compared to control (P < 0.05). Moreover, the storage period, regardless of the presence of medium, promoted a reduction in the number of fibroblasts and increase in the number of halos. Also, the number of AgNORs indicating proliferative activity, and metabolic activity of the explants, decreased with the storage period. After the in vitro culture of the explants, only the fragments stored without medium for 50 days were not able to obtain somatic cells. Likewise, cells from explants in the presence of medium for 10 days showed similar characteristics to the cells of not refrigerated explants, especially regarding the duration of culture, doubling time of the cell population, day of all attached explants and subconfluence total time. Thus, viable cells derived from collared peccaries can be recovered from tissue fragments stored for up to 50 days in the presence of nutrient medium; nevertheless, refrigerated somatic tissues up to 10 days in the presence of medium resulted in more viable cells.

Aspectos da infecção por Schistosoma mansoni (Sambon, 1907) em ovinos da raça Santa Inês

A esquistossomose mansoni é causada pelo trematoda Schistosoma mansoni, sendo impactante na saúde pública de vários países, principalmente subdesenvolvidos ou em desenvolvimento. Muito se pesquisa sobre a infecção em seres humanos, porém, são escassos os estudos sobre a susceptibilidade dos animais domésticos à infecção, como os ovinos, sendo que no Brasil, há aumento gradual da criação desses animais, como a raça Santa Inês, devido a sua produtividade e rusticidade, sendo a raça deslanada muito criada no nordeste brasileiro. O objetivo desse estudo foi avaliar aspectos da susceptibilidade em ovinos da raça Santa Inês à infecção por S. mansoni, assim como fatores clínicos, hematológicos, parasitológicos e patológicos no período de 0 a 255 dias. Os ovinos do presente estudo foram segmentados em dois grupos com 5 animais livres da infecção (Controle) e 5 infectados por via cutânea com 2.000 cercárias de S. mansoni (Infectado). A avaliação clínica foi realizada para acompanhar variáveis como peso e escore corporal, além do sistema cardiovascular, respiratório, digestório e análise de coloração de mucosa da conjuntiva ocular. Foram coletadas amostras sanguíneas para realização do perfil hematológico e cinética de anticorpos IgG. Para analisar os parâmetros parasitológicos, no diagnóstico foram realizados exames de fezes pelo método de sedimentação espontânea e pelo método de quatro tamises modificada, assim como métodos de eclosão de miracídios, curetagem de mucosa retal e detecção de antígeno pelo teste rápido de urina. Os ovinos foram sacrificados em dois intervalos: aos 135 dpi e aos 255 dpi, sendo os órgãos avaliados. Além disso, foi preconizada a perfusão das vísceras para recuperação de parasitos nos vasos mesentéricos e espaço porta e a recuperação de ovos nos tecidos. Como resultado, na avaliação clínica, houve perda de peso no grupo Infectado de 15 aos 75 dpi com ganho compensatório, mas não o suficiente para igualar ao Controle, além de fezes amorfas. À análise hematológica, foram constatados índices menores nas variáveis de células vermelhas e aumento na contagem total de leucócitos e diferencial de neutrófilos na fase aguda, assim como aumento na contagem diferencial de eosinófilos do sangue periférico de 75 aos 195 dpi. A cinética de IgG mostrou-se alta a reatividade no grupo Infectado, o que evidencia uma resposta imune humoral mais intensa na fase aguda pós postural ao comparar-se as duas titulações, concomitante com os achados clínicos e hematológicos, podendo ser utilizada como ferramenta para imunodiagnóstico da esquistossomose mansoni em ovinos. Quanto aos parâmetros parasitológicos, no diagnóstico foram obtidos os seguintes resultados: (i) não foram observados ovos ou miracídios nas amostras dos ovinos da raça Santa Inês infectados, entretanto, (ii) a técnica de Girão e Ueno (1982) foi validada para o diagnóstico da infecção por S. mansoni em hospedeiros ruminantes, (iii) a curetagem de mucosa retal foi capaz de detectar a infecção nos ovinos e (iv) o teste rápido de urina acusou detecção de antígenos, mas com traço leve, devendo ser aprimorada. Nos aspectos post mortem, na patologia dos ovinos da raça Santa Inês infectados foram observadas no fígado e pulmão: (i) pouca frequência de granulomas típicos formados em torno de ovos de S. mansoni e (ii) frequente lesões focais, esparsas, nodulares, formadas por granulomas extensos, contendo material amorfo envolto de exsudato de células inflamatórias e graus variáveis de neoformação conjuntivo vascular. Na recuperação de parasitos nos vasos mesentéricos e espaço porta, houve heterogeneidade entre os ovinos com variações de 0,45 a 5,45%. Além disso, os espécimes de S. mansoni mostraram-se menores em tamanho se comparados aos obtidos na infecção humana e em bovinos. Dessa forma, conclui-se que ovinos da raça Santa Inês não apresentam importância epidemiológica na transmissão de S. mansoni, uma vez que não eliminam ovos nas fezes. Entretanto, esses animais são susceptíveis a infecção, visto que há desenvolvimento parasitário e oviposição das fêmeas, além de sintomas clínicos, variações hematológicas, imunológicas e lesões em órgãos como fígado e pulmão consequente ao parasitismo, levando a perdas na produtividade devido à infecção. Palavras chave: Schistosoma mansoni, Ovinos, Susceptibilidade.

he schistosomiasis is caused by trematode Schistosoma mansoni and is impactful on public health in many countries, particularly underdeveloped or under development countries. There are many researches regarding the infection in humans, however, there are only a few studies about the susceptibility of cattle to infection, such as in sheep. In Brazil, there is a gradual increase in the creation of these animals, such as Santa Ines breeds, due to its productivity and rusticity; without wool breeds is very established at the Brazilian northeast. The goal of this study is to evaluate aspects of susceptibility in Santa Inês sheep breeds to infection with S. mansoni, as well as clinical, haematological, parasitological and pathological in the period 0-255 days. The sheeps of this study were segmented into two groups of 05 animals free from infection (Control) and 05 dermally infected with 2,000 of S. mansoni cercariae (Infected). Clinical evaluation were performed to monitor variables such as weight and body condition score, in addition to the cardiovascular, respiratory, digestive system and mucosal staining analysis of the ocular conjunctive. Blood samples were collected to perform the hematological profile and kinetic profile of IgG antibodies. To analyze the parasitological parameters, diagnosis were performed through examinations by spontaneous sedimentation method and the four modified sieves method, as well as miracidia hatching methods, rectal mucosal curettage and antigen detection by rapid urine test. The sheeps were sacrificed at two intervals: the 135 dpi and 255 dpi. Body organs were examined. Moreover, it was preconized the perfusion of the viscera for parasite recovery vessels in the mesenteric and portal space and eggs in the tissues were recovered. As a result, on the clinical evaluation, there was loss of weight in the infected group of 15 to 75 dpi with compensatory growth, but not enough to match the control, as well as amorphous faeces. On the hematological analysis, lower levels in the red blood cells and variable increase in the total white blood count were found as well as differential of neutrophils in acute phase and an increase in the differential count of peripheral eosinophils cells of 75 to 195 dpi. The IgG kinetics showed high reactivity in the infected group, which shows a stronger humoral immune response in post postural acute when comparing the two titrations, concomitant with clinical and hematological findings. This can be used as a tool to immunodiagnostics of schistosomiasis in sheep. Regarding the parasitological parameters, the following results were obtained on diagnosis: (i) eggs or miracidia were observed in infected samples of breed sheep Santa Inês, however, (ii) Girão and Ueno (1982) technique have been validated for diagnosis of S. mansoni infection in ruminants hosts, (iii) rectal mucosas curettage were able to detect infection in sheep and (iv) the rapid test urine detected antigens, but slight traces that should be improved. In post mortem aspects, the pathology of the Santa Inês sheep infected was observed in the liver and the lung: (i) low frequency of typical granulomas formed around S. mansoni eggs and (ii) frequently focal, scattered, and nodular lesions, formed by extensive granulomas containing amorphous material wrapped in exudate inflammatory cells besides varying degrees of vascular connective neoformation. In recovered parasites at the mesenteric and portal vessels space, there was heterogeneity among the sheep with variations from 0.45 to 5.45%. Furthermore, the specimens of S. mansoni were smaller compared to those obtained in human and cattle infections. Thus, it is conclusive that breed sheep Santa Inês have no epidemiological importance in the transmission of S. mansoni since it does not eliminate eggs in faeces. However, these animals are susceptible to infection because there is parasitic development and female oviposition as well as clinical symptoms, hematologic and immunologic changes besides organ lesions at the liver and lungs consequent to the parasitism leading to losses in productivity due to infection.