Influencing factors for preparation of platelet-rich plasma in horses / Fatores que influenciam o preparo do plasma rico em plaquetas na espécie equina

There is no consensus in the literature as to the best platelet-rich plasma (PRP) acquisition method or the ideal platelet concentration to stimulate tissue repair. Besides that, most studies do not provide a clear and replicable description of the methods used, which makes standardization and result comparison difficult. Thus, this study aimed to accurately describe the method and evaluate factors influencing PRP preparation in equines. In this regard, two protocols were used, P1 and P2, based on two centrifugation methods, which differed in blood volume, speed and time, and platelet pipetting and resuspension. In conclusion, factors such as centrifugation strength and time are essential to obtain PRP with adequate platelet count. However, other factors such as tube type and plasma pipetting and resuspension methods directly interfere with the replicability of the technique, and hence influencing PRP applicability.(AU)

Não há consenso na literatura quanto ao melhor método de obtenção do plasma rico em plaquetas (PRP) ou à concentração plaquetária ideal com o objetivo de estimular o reparo tecidual. Além disso, grande parte dos trabalhos não faz descrição clara e reprodutível dos métodos utilizados, o que dificulta a padronização e a comparação dos resultados. Dessa forma, este trabalho teve por objetivo descrever detalhadamente a metodologia e avaliar fatores que influenciam o preparo do PRP em equinos. Para isso, foram utilizados dois protocolos, P1 e P2, baseados em duas centrifugações, que diferiram quanto ao volume de sangue colhido, velocidade e tempo das centrifugações e método de pipetagem e ressuspensão das plaquetas. Conclui-se que fatores como força e tempo de centrifugação são essenciais à obtenção de um PRP com concentração plaquetária adequada. Contudo, fatores adicionais como tipo de tubo e métodos de pipetagem e ressuspensão do plasma interferem diretamente na repetibilidade da técnica, influenciando a aplicabilidade prática do PRP.(AU)

Uso da água de coco em pó no processo de congelação do sêmen suíno: III. Avaliação do diluente ACP-103® na ressuspensão / The coconut water powdered use in the swine semen freezing process: III. Evaluation of the ACP-103® extender in resuspension

O sêmen de oito reprodutores suínos foi coletado através da técnica da mão enluvada, sendo utilizado 10,2 x109 sptz do ejaculado total para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), percentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS) e na água de coco em pó (ACP) com antibiótico, em partes iguais (1:1). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se o teste de Mann Whitney, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. A água de coco proporcionou um meio de conservação que manteve um maior número de espermatozoides com acrossoma intacto, podendo ser recomendado para uso rotineiro em laboratórios de reprodução. De uma maneira geral as modificações propostas pelo protocolo de trabalho não apresentaram os efeitos esperados, tendo o ACP apresentado melhores resultados em relação ao uso do BTS.(AU)

The semen of eight male swine was collected by the glove-hand technique. A total of 10.2 x109 sptz was collected and distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by means of concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoa (x109 sptz), spermatic strength (0 to 5), motility (%) and morphology (%) and membrane integrity of the spermatozoa (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) or in coconut water (ACP), in dilution of 1:1. Randomized block design was used and the Mann-Whitney test was performed in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03). A 5% significance level was adopted. The coconut water extender provided the maintenance of a larger number of spermatozoids with intact acrosome and could be recommended for routine use in reproduction laboratories. However, the modifications proposed in the present study did not present as good results as use of the ACP did in comparison with the BTS solution.(AU)

Uso da água de coco em pó no processo de congelação do sêmen suíno: III. Avaliação do diluente ACP-103® na ressuspensão / The coconut water powdered use in the swine semen freezing process: III. Evaluation of the ACP-103® extender in resuspension

O sêmen de oito reprodutores suínos foi coletado através da técnica da mão enluvada, sendo utilizado 10,2 x109 sptz do ejaculado total para cada tratamento. A qualidade do sêmen foi avaliada pela concentração (x106 sptz/mL), volume (mL), total de espermatozoides (x109 sptz), vigor espermático (0 a 5), percentagem de células móveis (%), morfologia espermática (%) e integridade de membrana (%). O sêmen foi diluído no Beltsville Thawing Solution (BTS) e na água de coco em pó (ACP) com antibiótico, em partes iguais (1:1). O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, utilizando-se o teste de Mann Whitney, com análise das diferenças entre médias feita por variância multifatorial com o General Linear Models do programa Statistical Analysis System (SAS 6.03), a um intervalo de confiança de p<0,05. A água de coco proporcionou um meio de conservação que manteve um maior número de espermatozoides com acrossoma intacto, podendo ser recomendado para uso rotineiro em laboratórios de reprodução. De uma maneira geral as modificações propostas pelo protocolo de trabalho não apresentaram os efeitos esperados, tendo o ACP apresentado melhores resultados em relação ao uso do BTS.

The semen of eight male swine was collected by the glove-hand technique. A total of 10.2 x109 sptz was collected and distributed among the treatments. The semen quality was evaluated by means of concentration (x106 sptz/mL), volume (mL), total of spermatozoa (x109 sptz), spermatic strength (0 to 5), motility (%) and morphology (%) and membrane integrity of the spermatozoa (%). The semen was diluted in Beltsville Thawing Solution (BTS) or in coconut water (ACP), in dilution of 1:1. Randomized block design was used and the Mann-Whitney test was performed in the Lineal General Models of Statistical Analysis System Program (SAS 6.03). A 5% significance level was adopted. The coconut water extender provided the maintenance of a larger number of spermatozoids with intact acrosome and could be recommended for routine use in reproduction laboratories. However, the modifications proposed in the present study did not present as good results as use of the ACP did in comparison with the BTS solution.

Method to obtain platelet-rich plasma from rabbits (Oryctolagus cuniculus ) / Método de obtenção de plasma rico em plaquetas de coelhos (Oryctolagus cuniculus)

Platelet-rich plasma (PRP) is a product easy and inxpesnsive, and stands out to for its growth factors in tissue repair. To obtain PRP, centrifugation of whole blood is made with specific time and gravitational forces. Thus, the present work aimed to study a method of double centrifugation to obtain PRP in order to evaluate the effective increase of platelet concentration in the final product, the preparation of PRP gel, and to optimize preparation time of the final sample. Fifteen female White New Zealand rabbits underwent blood sampling for the preparation of PRP. Samples were separated in two sterile tubes containing sodium citrate. Tubes were submitted to the double centrifugation protocol, with lid closed and 1600 revolutions per minute (rpm) for 10 minutes, resulting in the separation of red blood cells, plasma with platelets and leucocytes. After were opened and plasma was pipetted and transferred into another sterile tube. Plasma was centrifuged again at 2000rpm for 10 minutes; as a result it was split into two parts: on the top, consisting of platelet-poor plasma (PPP) and at the bottom of the platelet button. Part of the PPP was discarded so that only 1ml remained in the tube along with the platelet button. This material was gently agitated to promote platelets resuspension and activated when added 0.3ml of calcium gluconate, resulting in PRP gel. Double centrifugation protocol was able to make platelet concentration 3 times higher in relation to the initial blood sample. The volume of calcium gluconate used for platelet activation was 0.3ml, and was sufficient to coagulate the sample. Coagulation time ranged from 8 to 20 minutes, with an average of 17.6 minutes. Therefore, time of blood centrifugation until to obtain PRP gel took only 40 minutes [...](AU)

O plasma rico em plaquetas (PRP) é um produto de fácil obtenção a baixo custo, destacando-se pelos seus fatores de crescimento na reparação tecidual. Para obtenção do PRP, a centrifugação do sangue total é realizada com tempos e forças gravitacionais específicas. Assim, o presente trabalho teve por objetivo estudar o método da dupla centrifugação para obtenção do PRP, a fim de avaliar a eficácia de aumento da concentração de plaquetas no produto final, a preparação de gel de PRP e otimizar o tempo de preparação da amostra final. Quinze coelhos Nova Zelândia Branco, fêmeas, foram submetidos à coleta de sangue para a preparação de PRP. As amostras foram separadas em dois tubos estéreis contendo citrato de sódio. Os tubos foram submetidos ao protoloco de dupla centrifugação, com a tampa fechada a 1600 revoluções por minuto (rpm) durante 10 minutos, resultando na separação dos glóbulos vermelhos, plaquetas e plasma contendo os leucócitos. Na sequência, foram destapados para pipetar o plasma e transferí-lo para outro tubo de estéril. O plasma foi novamente centrifugado a 2000pm durante 10 minutos, resultando em duas partes: a parte superior, que consistia em plasma pobre em plaquetas (PPP) e a parte inferior do botão de plaquetas. Parte PPP foi descartado de modo que apenas 1ml de PPP permaneceu no frasco juntamente com o botão de plaquetas. Este material foi agitado suavemente para promover a ressuspensão das plaquetas, o que resultou na produção de PRP. O protocolo de centrifugação dupla foi capaz de promover a concentração de plaquetas 3 vezes maior em relação à amostra de sangue inicial. O volume de gluconato de cálcio utilizado para a ativação das plaquetas foi de 0,3ml, e foi suficiente para coagular a amostra, e o tempo de coagulação variou de 8 a 20 minutos, com uma média de 17,6 minutos. O tempo da centrifugação do sangue até a obtenção do PRP gel levou apenas 40 minutos [...](AU)

Concentrations of PM2.5-10 and PM2.5 and metallic elements around the Schmidt Stream area, in the Sinos River Basin, southern Brazil

This research aimed to evaluate the air quality, by determining the concentrations of PM2.5-10, PM2.5 and the metallic elements Al, Ba, Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb, Zn and Hg in the leaf part of ryegrass (Lolium multiflorum) in an area close to Schmidt Stream, at the lower section of Sinos River Basin (SRB), in a research campaign of six months, from October 2013 to March 2014. The particles collected in the PM sampling were analyzed by Scanning Electron Microscopy (SEM) combined with Energy Dispersive X-ray Spectrometry (EDS), in order to study their morphology and chemical composition. The mean concentration of PM2.5-10 was 9.1 µg m3, with a range of 2.2 µg m3 to 15.4 µg m3 and the mean concentration of PM2.5was 4.7 µg m3, with a range of 1.9 µg m3 to 8.2 µg m3. Concentrations of metallic elements, especially Pb, Cr and Zn, were classified as Class 4 (very high pollution levels), according to the classification proposed by Klumpp et al. (2004). Chemical and morphological analysis of PM revealed the presence of particles of biological origin, soot (Cr, Fe, Ni, Zn, Cd, Hg and Pb), salts (KCl) and soil resuspension (Al and Si). The integrated study methodology, employing environmental variables, such as PM and ryegrass, can be of help in the preparation of wide-ranging environmental diagnoses, in addition providing information needed to develop precautionary measures designed to minimize the effects of atmospheric pollution that takes into consideration the environments supportive capacity and environmental quality.

Resumo O objetivo desta pesquisa foi avaliar a qualidade do ar, por meio da determinação das concentrações do MP2,5-10, MP2,5 e dos elementos metálicos Al, Ba, Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb, Zn e Hg na folha do azevém (Lolium multiflorum) em uma área próxima ao Arroio Schmidt, no trecho inferior da Bacia do Rio dos Sinos (BRS), em uma campanha de seis meses de pesquisa, de outubro de 2013 a março de 2014. As partículas coletadas na amostragem do MP foram analisadas por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), combinada com Espectrometria de Energia Dispersiva de Raios X (EDS), a fim de estudar sua morfologia e composição química. As concentrações médias de MP2,5-10 e MP2,5 foram de 9,1 µg m3 e 4,7 µg m3, respectivamente. As concentrações médias dos elementos metálicos Pb, Cr e Zn na parte foliar do azevém foram de 13,58 mg kg1, 5,26 mg kg1 e 88,80 mg kg1, respectivamente, caracterizando a área como Classe 4 (nível muito elevado de poluição), conforme classificação proposta por Klumpp et al. (2004). A caracterização química e morfológica das partículas coletadas revelou a presença de fuligem (Cr, Fe, Ni, Zn, Cd, Hg e Pb), materiais biológicos, cristais salinos (KCl) e partículas ressuspensas de poeira do solo (Al e Si). Estudos integrados empregando variáveis ambientais como o MP e o biomonitoramento com azevém podem auxiliar na elaboração de diagnósticos ambientais robustos, além de fornecer informações para o desenvolvimento de medidas de precaução que considerem a capacidade de suporte do meio ambiente e que visem à minimização dos efeitos prejudiciais da poluição atmosférica.

The use of skimmed dried milk as an alternative diluent for the cooling step during the boar sêmen freezing procedure / Leite em pó desnatado como diluente alternativo na etapa de resfriamento durante protocolo de congelação do sêmen suíno

One of the critical points in the cryopreservation process is the use of a proper diluent while lowering the temperature following the resuspension and thawing processes. Here, we tested an alternative diluent for the process of freezing boar semen. We used skimmed dried milk (SDM) during the cooling and post-thawed resuspension steps. To do so, we collected semen from 15 Dalland boars using the glovedhand technique, and incubated each ejaculate sample at 30 C. We then removed two semen aliquots from a pre-dilution. We diluted one of the aliquots in Beltsville thawing solution (BTS - control), and the remaining sample was diluted in SDM. Both aliquots were subsequently held at 30º C for 45 min (1st period of stabilization). At the end of this period, we analysed vigor and motility to determine sperm metabolic activity. We then held the diluted semen at 25 C for 30 min (2nd period of stabilization) and at 17 C for 2 h (3rd period stabilization). We centrifuged the semen at 800 × g and 1600 × g at 5º C for 15 min, discarded the supernatant, and resuspended the sperm pellet in 2 mL of the cooling diluent at 5 C for 1h. We again diluted the samples in 2 mL of the freezing diluent, poured them into straws, and cooled and plunged them into liquid N2. The sêmen samples were thawed in a 39º C water bath, and were resuspended in their respective diluents at the same temperature. We determined the following sperm features: vigor, motility, vitality, acrosomal integrity and membrane functionality. During the first phase of temperature cooling (30º C), semen diluted in SDM exhibited a higher vigor (3.4 ± 0.6) and motility (78.6 ± 13.0) than those diluted BTS (vigor: 3.1 ± 0.7; motility: 69.4±14.3).(AU)

Esse estudo objetivou testar um diluente alternativo, a base de leite em pó desnatado, durante as etapas de resfriamento e ressuspensão pós descongelação durante a congelação do sêmen suíno. Para isso o sêmen de 15 varrões da raça Dalland, foi coletado através da técnica da mão enluvada. Visando o início da curva de congelação, cada ejaculado foi incubado a 30 C. Em seguida, foram retiradas duas alíquotas de sêmen para uma pré-diluição. Uma das alíquotas foi diluída no diluente Beltsville Thawing Solution (BTS - Controle) e a outra em leite em pó desnatado (LPD), onde permaneceram a essa temperatura por 45 minutos. O sêmen pré-diluído passou por três tempos de estabilização. Ao final do primeiro tempo (30 C - 45 minutos) foi realizada análise de vigor e motilidade a fim de acompanhar a atividade metabólica espermática. Em seguida o sêmen diluído passou pelas temperaturas: 25C 30 minutos e 17 C - 2 horas. Ao final, o sêmen foi centrifugado (à 5 C - 800g - 1600 rpm - 15 minutos), sendo desprezado o sobrenadante, enquanto que o pellet de espermatozoides foi ressuspenso em 2 mL do diluente de resfriamento e mantido a 5 C por 1 hora. Ao final, foi realizada a 2ª diluição com 2 mL do diluente de congelação, seguida do envaze das amostras, rampa de congelação e submergidas em N2 líquido. O sêmen foi descongelado em banho-maria (39 C), ressuspendido em seus respectivos diluentesà mesma temperatura e só então analisado quanto às características de vigor, motilidade, vitalidade,integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante a primeira fase de abaixamento de temperatura (30 °C), observou-se que o sêmen diluído em LPD em comparação ao BTS, apresentou valores superiores de vigor (3,4±0,6 e 3,1±0,7, respectivamente) e motilidade (78,6±13,0 e 69,4±14,3 respectivamente).(AU)

The use of skimmed dried milk as an alternative diluent for the cooling step during the boar sêmen freezing procedure / Leite em pó desnatado como diluente alternativo na etapa de resfriamento durante protocolo de congelação do sêmen suíno

One of the critical points in the cryopreservation process is the use of a proper diluent while lowering the temperature following the resuspension and thawing processes. Here, we tested an alternative diluent for the process of freezing boar semen. We used skimmed dried milk (SDM) during the cooling and post-thawed resuspension steps. To do so, we collected semen from 15 Dalland boars using the glovedhand technique, and incubated each ejaculate sample at 30 C. We then removed two semen aliquots from a pre-dilution. We diluted one of the aliquots in Beltsville thawing solution (BTS - control), and the remaining sample was diluted in SDM. Both aliquots were subsequently held at 30º C for 45 min (1st period of stabilization). At the end of this period, we analysed vigor and motility to determine sperm metabolic activity. We then held the diluted semen at 25 C for 30 min (2nd period of stabilization) and at 17 C for 2 h (3rd period stabilization). We centrifuged the semen at 800 × g and 1600 × g at 5º C for 15 min, discarded the supernatant, and resuspended the sperm pellet in 2 mL of the cooling diluent at 5 C for 1h. We again diluted the samples in 2 mL of the freezing diluent, poured them into straws, and cooled and plunged them into liquid N2. The sêmen samples were thawed in a 39º C water bath, and were resuspended in their respective diluents at the same temperature. We determined the following sperm features: vigor, motility, vitality, acrosomal integrity and membrane functionality. During the first phase of temperature cooling (30º C), semen diluted in SDM exhibited a higher vigor (3.4 ± 0.6) and motility (78.6 ± 13.0) than those diluted BTS (vigor: 3.1 ± 0.7; motility: 69.4±14.3).

Esse estudo objetivou testar um diluente alternativo, a base de leite em pó desnatado, durante as etapas de resfriamento e ressuspensão pós descongelação durante a congelação do sêmen suíno. Para isso o sêmen de 15 varrões da raça Dalland, foi coletado através da técnica da mão enluvada. Visando o início da curva de congelação, cada ejaculado foi incubado a 30 C. Em seguida, foram retiradas duas alíquotas de sêmen para uma pré-diluição. Uma das alíquotas foi diluída no diluente Beltsville Thawing Solution (BTS - Controle) e a outra em leite em pó desnatado (LPD), onde permaneceram a essa temperatura por 45 minutos. O sêmen pré-diluído passou por três tempos de estabilização. Ao final do primeiro tempo (30 C - 45 minutos) foi realizada análise de vigor e motilidade a fim de acompanhar a atividade metabólica espermática. Em seguida o sêmen diluído passou pelas temperaturas: 25C 30 minutos e 17 C - 2 horas. Ao final, o sêmen foi centrifugado (à 5 C - 800g - 1600 rpm - 15 minutos), sendo desprezado o sobrenadante, enquanto que o pellet de espermatozoides foi ressuspenso em 2 mL do diluente de resfriamento e mantido a 5 C por 1 hora. Ao final, foi realizada a 2ª diluição com 2 mL do diluente de congelação, seguida do envaze das amostras, rampa de congelação e submergidas em N2 líquido. O sêmen foi descongelado em banho-maria (39 C), ressuspendido em seus respectivos diluentesà mesma temperatura e só então analisado quanto às características de vigor, motilidade, vitalidade,integridade acrossomal e funcionalidade da membrana. Durante a primeira fase de abaixamento de temperatura (30 °C), observou-se que o sêmen diluído em LPD em comparação ao BTS, apresentou valores superiores de vigor (3,4±0,6 e 3,1±0,7, respectivamente) e motilidade (78,6±13,0 e 69,4±14,3 respectivamente).

Parâmetros morfométricos dos reservatórios Santa Cruz e Umari, semiárido do Rio Grande do Norte, Brasil / Morphometric parameters of Santa Cruz and Umari reservoirs, Rio Grande do Norte semiarid, Brazil

This study aimed to describe the morphology of Santa Cruz and Umari reservoirs, semiarid region of Rio Grande do Norte. The survey was conducted in December 2012, with aid of an echo sounder coupled with DGPS. The navigation went in lines perpendicular to the coast of the reservoirs. The bathymetry in Santa Cruz was based on a total of 35,971 pairs of points and in Umari, 26,575. The Santa Cruz reservoir had 15,984 m in length, 13 m average depth and maximum depth of 38 m. Umari presented for these same parameters 14,227 m, 8 m and 28 m, respectively. The total water volume recorded for Santa Cruz was 295,858,761 m³ and for Umari 114,866,034 m³. Although with lower volume, Umari showed greater perimeter 110,887 m. The hipsometric curves show that in Umari there is an increased volume of water at low depths, facilitating the entry of light and providing greater support to the biological productivity, compared with Santa Cruz. The highest values of Fetch and the smallest depth were found in Umari, which possibly leads to increased sediment resuspension in this reservoir, which can cause higher loads of nutrients. A higher proportion of coastline in Umari favor the colonization of the margins by plant communities. The reservoirs in particular Umari, showed low relative depths, a possible factor that increases thermalinstability and hence greater mixing of the water masses, facilitated by the wind.(AU)

Objetivou-se caracterizar a morfometria dos reservatórios Santa Cruz e Umari, semiárido do Rio Grande do Norte. O levantamento foi realizado em dezembro de 2012, com auxílio de ecobatímetro acoplado a DGPS. A navegação seguiu linhas perpendiculares à margem dos reservatórios em curvas equidistantes de 400 m. A batimetria em Santa Cruz adquiriu um total de 35.971 pares de pontos e em Umari, 26.575. O reservatório Santa Cruz apresentou 15.984 m de comprimento máximo, 13 m de profundidade média e 38 m de profundidade máxima. Já Umari apresentou, para esses mesmos parâmetros, 14.227 m, 8 m e 28 m, respectivamente. O volume total de armazenamento em Santa Cruz foi de 295.858.761 m³ e em Umari foi igual a 114.866.034 m³. Embora com menor volume, Umari apresentou maior perímetro, igual a 110.887 m. As curvas hipsométricas revelaram que em Umari existe um maior volume de água em profundidades baixas, facilitando a entrada de luz e oferecendo maior suporte à produtividade biológica, quando comparado com Santa Cruz. Os maiores valores de Fetch e os menores de profundidade foram encontrados em Umari, o que acarreta possivelmente em uma maior ressuspensão do sedimento neste reservatório, podendo ocasionar maiores cargas de nutrientes. Uma maior proporção de litoral em Umari favorece ainda a colonização das margens por comunidades vegetais. Osreservatórios, em especial Umari, apresentaram profundidade relativa baixa, fator que favorece uma possível instabilidade térmica e, consequentemente, uma maior mistura das massas de águas, facilitada pela ação dos ventos.(AU)

Parâmetros morfométricos dos reservatórios Santa Cruz e Umari, semiárido do Rio Grande do Norte, Brasil / Morphometric parameters of Santa Cruz and Umari reservoirs, Rio Grande do Norte semiarid, Brazil

This study aimed to describe the morphology of Santa Cruz and Umari reservoirs, semiarid region of Rio Grande do Norte. The survey was conducted in December 2012, with aid of an echo sounder coupled with DGPS. The navigation went in lines perpendicular to the coast of the reservoirs. The bathymetry in Santa Cruz was based on a total of 35,971 pairs of points and in Umari, 26,575. The Santa Cruz reservoir had 15,984 m in length, 13 m average depth and maximum depth of 38 m. Umari presented for these same parameters 14,227 m, 8 m and 28 m, respectively. The total water volume recorded for Santa Cruz was 295,858,761 m³ and for Umari 114,866,034 m³. Although with lower volume, Umari showed greater perimeter 110,887 m. The hipsometric curves show that in Umari there is an increased volume of water at low depths, facilitating the entry of light and providing greater support to the biological productivity, compared with Santa Cruz. The highest values of Fetch and the smallest depth were found in Umari, which possibly leads to increased sediment resuspension in this reservoir, which can cause higher loads of nutrients. A higher proportion of coastline in Umari favor the colonization of the margins by plant communities. The reservoirs in particular Umari, showed low relative depths, a possible factor that increases thermalinstability and hence greater mixing of the water masses, facilitated by the wind.

Objetivou-se caracterizar a morfometria dos reservatórios Santa Cruz e Umari, semiárido do Rio Grande do Norte. O levantamento foi realizado em dezembro de 2012, com auxílio de ecobatímetro acoplado a DGPS. A navegação seguiu linhas perpendiculares à margem dos reservatórios em curvas equidistantes de 400 m. A batimetria em Santa Cruz adquiriu um total de 35.971 pares de pontos e em Umari, 26.575. O reservatório Santa Cruz apresentou 15.984 m de comprimento máximo, 13 m de profundidade média e 38 m de profundidade máxima. Já Umari apresentou, para esses mesmos parâmetros, 14.227 m, 8 m e 28 m, respectivamente. O volume total de armazenamento em Santa Cruz foi de 295.858.761 m³ e em Umari foi igual a 114.866.034 m³. Embora com menor volume, Umari apresentou maior perímetro, igual a 110.887 m. As curvas hipsométricas revelaram que em Umari existe um maior volume de água em profundidades baixas, facilitando a entrada de luz e oferecendo maior suporte à produtividade biológica, quando comparado com Santa Cruz. Os maiores valores de Fetch e os menores de profundidade foram encontrados em Umari, o que acarreta possivelmente em uma maior ressuspensão do sedimento neste reservatório, podendo ocasionar maiores cargas de nutrientes. Uma maior proporção de litoral em Umari favorece ainda a colonização das margens por comunidades vegetais. Osreservatórios, em especial Umari, apresentaram profundidade relativa baixa, fator que favorece uma possível instabilidade térmica e, consequentemente, uma maior mistura das massas de águas, facilitada pela ação dos ventos.

Concentrations of PM2.5-10 and PM2.5 and metallic elements around the Schmidt Stream area, in the Sinos River Basin, southern Brazil / Concentrações de MP2,5-10 e MP2,5 e elementos metálicos junto à área do Arroio Schmidt, na bacia do Rio dos Sinos, sul do Brasil

This research aimed to evaluate the air quality, by determining the concentrations of PM2.5-10, PM2.5 and the metallic elements Al, Ba, Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb, Zn and Hg in the leaf part of ryegrass (Lolium multiflorum) in an area close to Schmidt Stream, at the lower section of Sinos River Basin (SRB), in a research campaign of six months, from October 2013 to March 2014. The particles collected in the PM sampling were analyzed by Scanning Electron Microscopy (SEM) combined with Energy Dispersive X-ray Spectrometry (EDS), in order to study their morphology and chemical composition. The mean concentration of PM2.5-10 was 9.1 µg m–3, with a range of 2.2 µg m–3 to 15.4 µg m–3 and the mean concentration of PM2.5was 4.7 µg m–3, with a range of 1.9 µg m–3 to 8.2 µg m–3. Concentrations of metallic elements, especially Pb, Cr and Zn, were classified as Class 4 (very high pollution levels), according to the classification proposed by Klumpp et al. (2004). Chemical and morphological analysis of PM revealed the presence of particles of biological origin, soot (Cr, Fe, Ni, Zn, Cd, Hg and Pb), salts (KCl) and soil resuspension (Al and Si). The integrated study methodology, employing environmental variables, such as PM and ryegrass, can be of help in the preparation of wide-ranging environmental diagnoses, in addition providing information needed to develop precautionary measures designed to minimize the effects of atmospheric pollution that takes into consideration the environments supportive capacity and environmental quality.(AU)

O objetivo desta pesquisa foi avaliar a qualidade do ar, por meio da determinação das concentrações do MP2,5-10, MP2,5 e dos elementos metálicos Al, Ba, Cd, Cr, Cu, Fe, Mn, Ni, Pb, Zn e Hg na folha do azevém (Lolium multiflorum) em uma área próxima ao Arroio Schmidt, no trecho inferior da Bacia do Rio dos Sinos (BRS), em uma campanha de seis meses de pesquisa, de outubro de 2013 a março de 2014. As partículas coletadas na amostragem do MP foram analisadas por Microscopia Eletrônica de Varredura (MEV), combinada com Espectrometria de Energia Dispersiva de Raios X (EDS), a fim de estudar sua morfologia e composição química. As concentrações médias de MP2,5-10 e MP2,5 foram de 9,1 µg m–3 e 4,7 µg m–3, respectivamente. As concentrações médias dos elementos metálicos Pb, Cr e Zn na parte foliar do azevém foram de 13,58 mg kg–1, 5,26 mg kg–1 e 88,80 mg kg–1, respectivamente, caracterizando a área como Classe 4 (nível muito elevado de poluição), conforme classificação proposta por Klumpp et al. (2004). A caracterização química e morfológica das partículas coletadas revelou a presença de fuligem (Cr, Fe, Ni, Zn, Cd, Hg e Pb), materiais biológicos, cristais salinos (KCl) e partículas ressuspensas de poeira do solo (Al e Si). Estudos integrados empregando variáveis ambientais como o MP e o biomonitoramento com azevém podem auxiliar na elaboração de diagnósticos ambientais robustos, além de fornecer informações para o desenvolvimento de medidas de precaução que considerem a capacidade de suporte do meio ambiente e que visem à minimização dos efeitos prejudiciais da poluição atmosférica.(AU)

EFEITOS DA TROCA DIÁRIA DE DILUENTE SOBRE A VIABILIDADE DA CÉLULA ESPERMÁTICA OVINA REFRIGERADA A 5C

O objetivo desse trabalho foi avaliar os efeitos da troca diária do diluente no sêmen refrigerado ovino, avaliando sua ação na viabilidade dos espermatozoides. Para o estudo, formou-se um pool de sêmen com três ejaculados, de três carneiros da raça Dorper, após a avaliação subjetivas dos parâmetros espermáticos. O pool de sêmen foi diluído no meio Glicina-Gema-Leite (GGL), na proporção 1:4, para posterior fracionamento nos grupos controle (controle GGL), grupo TGG (teste GGL) e grupo TDD (pós-ressuspensão). Após a diluição, submeteu-se as amostras ao processo de refrigeração a 5°C, em Botutainer®. No intervalo de 24 horas, realizou-se a avaliação de uma alíquota de cada amostra por 5 dias, agrupando-as em 6 momentos (0h), (24h), (48h), (72h), (96h) e (120h). O processo de resssuspensão do pellet de espermatozoides em diluente fresco foi repetido diariamente até o grupo TG atingisse o mínimo de 30% de MP, mediante análises subjetivas no microscópio óptico. O grupo controle apresentou menor motilidade e vigor espermático, e seus SPZ obtiveram maior percentual de defeitos morfológicos que os SPZ dos grupos TG e TDD. Também, apresentou maior concentração da enzima AST, que foi correlacionada com o aumento do percentual de lesão de acrossomo nos SPZ, e do menor consumo de frutose durante o processo. A adição do diluente novo cada 24 horas apresentou efeito positivo sobre os SPZ, uma vez que o grupo TG preservou os parâmetros espermáticos por 120 horas. No quinto dia de avaliação, sua MP foi equivalente a 32%, vigor 3,20, 67,30% de SPZ com membrana íntegra e concentração de 184,3 x 106 de SPZ viáveis por mL antes da centrifugação. No grupo TDD, os valores apresentados foram de 37% de MP, vigor 4,40, 66% de SPZ com membrana íntegra e concentração de 175,8 x 106 de SPZ viáveis por mL, e um consumo de frutose 19,00 mg/ml. Este foi maior durante o tempo de avaliação do estudo demostrando um maior aproveitamento desse substrato pelos espermatozoides. Isso demonstrou que a troca diária de diluente foi eficiente para preservar a viabilidade espermática por um maior período de tempo.

The objective of this study was to evaluate the effects of daily diluent exchange on refrigerated sheep semen, evaluating its action on sperm viability for the study, a semen pool with three ejaculates of three Dorper rams was formed after the subjective evaluation of sperm parameters. The semen pool was diluted in Glycine-Milk-Yolk (GGL) medium, in a 1: 4 ratios, for subsequent fractionation in the control (GGL control), TGG (GGL test) and TDD (post-resuspension) groups. After dilution, the samples were subjected to refrigeration at 5°C in Botutainer®. Within 24 hours, an aliquot of each sample was evaluated for 5 days, grouping them into 6 moments (0h), (24h), (48h), (72h), (96h) and (120h). The process of resuspension of the sperm pellet in fresh diluent was repeated daily until the TG group reached a minimum of 30% of MP, by subjective analysis under the optical microscope. The control group had lower sperm motility and vigor, and their SPZ obtained a higher percentage of morphological defects than the SPZ of TG and TDD groups. Also, it presented higher concentration of AST enzyme, which was correlated with the increase in the percentage of acrosome lesion in the SPZ, and the lower consumption of fructose during the process. The addition of new diluent every 24 hours had a positive effect on SPZ, since TG group preserved sperm parameters for 120 hours. On the fifth day of evaluation, its MP was equivalent to 32%, vigor 3.20, 67.30% SPZ with intact membrane and concentration of 184.3 x 106 viable SPZ per mL before centrifugation. In the TDD group, the values presented were 37% MP, vigor 4.40, 66% intact membrane SPZ and 175.8 x 106 viable SPZ concentration per mL, and a fructose consumption 19.00 mg / ml. This was higher during the study evaluation time showing greater use of this substrate by sperm. This demonstrated that daily diluent exchange was efficient to preserve sperm viability for a longer period.

AVALIAÇÃO MICROBIOLÓGICA E TOXICOLÓGICA DE MICOTOXINAS E ANTIBIÓTICOS EM SUPLEMENTOS ALIMENTARES PARA RECÉM NASCIDOS

Nos dias atuais, o uso de suplementos alimentares se faz cada vez mais presente devido a mudanças nos hábitos alimentares. Sendo assim, se tornou cada vez mais necessário a inclusão de suplementos alimentares na dieta de crianças, em especial os recém-nascidos. Considerando a fragilidade da população alvo, é importante realizar estudos para a avaliação dos possíveis perigos microbiológicos e toxicológicos aos quais os consumidores estão expostos bem como a relevância de tais perigos. Foram realizadas as análises de aeróbio mesófilos totais, coliformes totais, enterobactérias, bactérias ácido lácticas, estafilococos coagualase positiva, Bacillus cereus, Salmonella spp., conforme descrito no manual da APHA. Enterococcus spp. segundo manual Merck e Cronobacter sakazakii segundo a metodologia descrita pelo padrão ISSO/TS 22964. A determinação de fungos filamentosos e fungos xerofílico foi realizada utilizando os meios DRBC e DG18, respectivamente, seguindo a metodologia proposta por Pitt, Hocking e Abarca. A determinação de aflatoxina M1 foi realizada através de fluorimetria após extração associada com métodos imunoenzimáticos. Após a avaliação das 36 amostras, não foram detectadas, bactérias ácido lácticas, B. cereus, C. sakazakii, coliformes, enterobacteriaceas, Enterococcus spp. e Salmonella spp. em nenhuma das amostras. As análises revelaram valores médios (UFC/mL): aeróbios mesófilos de 3,54 x 10³; estafilococos coagulase positivo 3,89 x 101; fungos filamentosos e xerofílicos 8,14 x 10² e 2,34 x 10³, respectivamente. Os dados obtidos neste estudo comprovam a seguridade desses alimentos e sua conformidade frente a legislação vigente, corroborando as recomendações de consumo imediato após ressuspensão dessas fórmulas, assim como as recomendações de estocagem do produto a fim de evitar a proliferação de micro-organismos patogênicos. A quantificação de aflatoxina M1 em todas as amostras analisadas se mantiveram abaixo do limite de detecção da técnica (0,013 mg/kg), estando abaixo do preconizado pela legislação e, por tanto, não oferecendo risco ao consumidor. Os valores de contagem obtidos nesse estudo são um reflexo de falhas durante o processamento do produto, escolha da matéria prima e manipulação durante a sua reconstituição. Porém, as amostras analisadas apresentaram valores de contagem dentro do preconizado pela legislação estando assim em conformidade e seguras para o consumo.

The use of dietary supplements is becoming more and more present due to changes in food habits. Thus, it has become increasingly necessary to include dietary supplements in the diet of children, especially newborns. Considering the fragility of the target population, it is important to carry out studies to assess the possible microbiological and toxicological hazards to which consumers are exposed relevance. The total mesophyll aerobic, total coliform, enterobacteria, lactic acid bacteria, coagualase positive staphylococci, Bacillus cereus, Salmonella spp., as described in the APHA manual were performed microbiological analysis. Enterococcus spp. were evaluated by method described at Merck manual and Cronobacter sakazakii according to the methodology described by standard ISSO / TS 22964. The determination of filamentous fungi and xerophilic fungi was performed using the DRBC and DG18 media, respectively, following the methodology proposed by Pitt, Hocking and Abarca. The determination of aflatoxin M1 was performed by fluorimetry after extraction associated with enzyme-linked immunosorbent cleanup columns. After the evaluation of the 36 samples, no lactic acid bacteria, B. cereus, C. sakazakii, coliforms, Enterobacteriaceae, Enterococcus spp. and Salmonella spp. in anyone of the samples. The analyzes revealed mean values (CFU / mL): aerobic mesophiles of 3.54 x 10³; coagulase positive staphylococci 3.89 x 101; filamentous and xerophilic fungi 8.14 x 10² and 2.34 x 10³, respectively. The data obtained in this study confirm the safety of these supplements foods and their compliance with the current legislation, corroborating the recommendations of immediate consumption after resuspension of these formulas, as well as the recommendations of stocking the product in order to avoid the proliferation of pathogenic microorganisms. The quantification of aflatoxin M1 in all the analyzed samples remained below the limit of detection of the technique (0.013 mg / kg), being below the recommended by the legislation and, therefore, offering no risk to the consumer. The count values obtained in this study are a reflection of failures during product processing, choice of raw material and handling during its reconstitution. However, the analyzed samples presented counting values within the recommended by the legislation being thus in conformity and safe for the consumption.

Flood pulse and spatial dynamics of mercury in sediments in Puruzinho lake, Brazilian Amazon / O pulso de inundação e a dinâmica espacial do mercúrio em sedimentos no lago Puruzinho, Amazônia Brasileira

The study was conducted in Puruzinho lake (Humaitل, AM) considering seasonal periods of rainy and dry in way to elucidate the flood pulse importance in the deposition, remobilization and distributions of mercury and organic matter in bottom sediments in the Madeira River Basin (Brazilian Amazon). Bottom sediments and soils samples were analyzed for total mercury and organic matter. Mercury concentrations obtained in bottom sediment were 32.20-146.40 ng g-1 and organic matter values were 3.5 - 18.0%. The main region for accumulation of mercury and organic matter was in the central and deepest lake area In the rainy season there was a greater distribution of Hg and organic matter, mainly controlled by means of income of the Madeira river water during flooding, while the predominant process in the dry season was the remobilization of total Hg due to the resuspension of bottom sediments.(AU)

Este estudo foi realizado no lago Puruzinho (Humaitá, AM) considerando os períodos de cheia e seca para investigar a importância do pulso de inundação na deposição, remobilização e distribuição das concentrações de mercúrio e matéria orgânica nos sedimentos de fundo no lago da bacia do rio Madeira, na Amazônia brasileira. As amostras de sedimentos e solos foram analisadas para mercúrio total e matéria orgânica. As concentrações mercúrio no sedimento de fundo variaram entre 32,20 e 146,40 ng g-1 e as porcentagens de matéria orgânica variaram de 3,5 a 18,0%. A principal região de acumulação de mercúrio e de matéria orgânica foi na área central e mais profunda do lago. Na estação chuvosa ocorreu maior distribuição de Hg e de matéria orgânica controlada principalmente pelo pulso de inundação do rio Madeira, enquanto que no período de seca predominam os processos de remobilização de mercúrio devido a resssuspensão do sedimento de fundo.(AU)

Flood pulse and spatial dynamics of mercury in sediments in Puruzinho lake, Brazilian Amazon / O pulso de inundação e a dinâmica espacial do mercúrio em sedimentos no lago Puruzinho, Amazônia Brasileira

The study was conducted in Puruzinho lake (Humaitل, AM) considering seasonal periods of rainy and dry in way to elucidate the flood pulse importance in the deposition, remobilization and distributions of mercury and organic matter in bottom sediments in the Madeira River Basin (Brazilian Amazon). Bottom sediments and soils samples were analyzed for total mercury and organic matter. Mercury concentrations obtained in bottom sediment were 32.20-146.40 ng g-1 and organic matter values were 3.5 - 18.0%. The main region for accumulation of mercury and organic matter was in the central and deepest lake area In the rainy season there was a greater distribution of Hg and organic matter, mainly controlled by means of income of the Madeira river water during flooding, while the predominant process in the dry season was the remobilization of total Hg due to the resuspension of bottom sediments.

Este estudo foi realizado no lago Puruzinho (Humaitá, AM) considerando os períodos de cheia e seca para investigar a importância do pulso de inundação na deposição, remobilização e distribuição das concentrações de mercúrio e matéria orgânica nos sedimentos de fundo no lago da bacia do rio Madeira, na Amazônia brasileira. As amostras de sedimentos e solos foram analisadas para mercúrio total e matéria orgânica. As concentrações mercúrio no sedimento de fundo variaram entre 32,20 e 146,40 ng g-1 e as porcentagens de matéria orgânica variaram de 3,5 a 18,0%. A principal região de acumulação de mercúrio e de matéria orgânica foi na área central e mais profunda do lago. Na estação chuvosa ocorreu maior distribuição de Hg e de matéria orgânica controlada principalmente pelo pulso de inundação do rio Madeira, enquanto que no período de seca predominam os processos de remobilização de mercúrio devido a resssuspensão do sedimento de fundo.

Structure of the testate amoebae community in different habitats in a neotropical floodplain / Estrutura da comunidade de amebas testáceas em diferentes hábitats em uma planície de inundação neotropical

This study evaluated the differences in composition, abundance and morphology of testate amoebae among different habitats of the same aquatic environment (plankton, aquatic macrophyte and sediment) in the Upper Paraná River floodplain. Triplicate samplings were undertaken monthly at each habitat from April 2007 to March 2008. The structure of the community of testate amoebae was different among the habitats. The species typical for each habitat, according to Indval, were classified by their shell morphology. Arcella species together with Difflugia gramen and Difflugia pseudogramem were more abundant for plankton. Trinema and Phryganella stood out by their abundance and frequency in aquatic macrophytes. Centropyxis was an indicator of sediment. The results indicated a higher frequency of hemispherical and spherical shells in plankton and spherical and elongated shells in aquatic macrophytes. In the sediment, there was a high frequency of elongated species. Our results support the hypothesis that the community of testate amoebae has different structures among the habitats, refuting the idea that the organization of this community in plankton is guided by random events like the resuspension of organisms from the sediment and their displacement from marginal vegetation.(AU)

Este estudo avaliou as diferenças na composição, abundância e morfologia das amebas testáceas entre diferentes hábitats de um mesmo ambiente aquático (plâncton, macrófitas aquáticas e sedimento) da planície de inundação do alto rio Paraná. As amostras foram coletadas mensalmente no período de abril de 2007 a março de 2008. A estrutura da comunidade de amebas testáceas foi diferente entre os hábitats. As espécies típicas para cada hábitat, de acordo com o Indval, foram classificadas pela morfologia da teca. Espécies de Arcella, Difflugia gramen e Difflugia pseudogramem foram mais abundantes para o plâncton. Trinema e Phryganella destacaram-se pela alta abundância e frequência nas macrófitas aquáticas. Centropyxis foi considerado indicador do sedimento. Os resultados indicaram uma alta frequência de tecas esféricas e hemisféricas no plâncton e de tecas alongadas nas macrófitas aquáticas. No sedimento foi registrada uma maior frequência de espécies alongadas. Nossos resultados suportam a hipótese que a comunidade de amebas testáceas possui estrutura diferente entre os hábitats, refutando a ideia que a comunidade presente no plâncton é guiada por processos estocásticos como a ressuspensão dos organismos do sedimento e simples carreamento da vegetação marginal.(AU)

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE NEMATICIDA DE NANOPARTÍCULAS DE FUNGOS NEMATÓFAGOS NO CONTROLE IN VITRO DE LARVAS INFECTANTES DE NEMATÓIDES

A biossíntese de nanopartículas a partir de fungos nematófagos vem sendo estudada mundialmente e é uma área promissora da nanobiotecnologia. Neste estudo, realizamos a biossíntese de nanopartículas de prata (AgNPs) utilizando o fungo nematófago Duddingtonia flagrans. Foi estudado o melhor método para liofilização e ressuspensão das nanopartículas, sendo a melhor forma para liofilizá-las na rotação 12.000 rpm por 20 minutos e o melhor meio para ressuspensão foi em água ultrapura. O ensaio do MTT revelou que o IC50 da AgNP biossintetizada foi de 43,4 g/mL. Foram obtidas imagens por MET das AgNPs mostrando sua forma esférica,tamanho e monodispersão. O método de Bradford e técnicas espectroscópicas (UV-Vis, FTIR, DRX) foram utilizadas para indicar quais moléculas estão envolvidas na formação das nanopartículas, como a quitinase, explicando a ação penetrante das AgNPs biossintetizadas nos nematoides. Foi realizado o teste de atividade nematicida das AgNPs comparando-as com outras substâncias. As AgNPs obtiveram eficácia em sua ação nematicida, sendo as únicas capazes de penetrar a cutícula das larvas causando alterações tegumentares levando o parasita à morte. Dessa forma, as nanopartículas biossintetizadas são promissoras para aplicações terapêuticas de verminoses em animais e humanos.

Nanoparticle biosynthesis from nematophagous fungi has been studied worldwide and is a promising area for nanobiotechnology. In this study, we performed silver nanoparticle biosynthesis (AgNP's) using the nematophagous fungus Duddingtonia flagrans. The best method for lyophilization and resuspension of the nanoparticles was the best way to freeze dry them at 12,000 rpm for 20 minutes and the best medium for resuspension was in ultrapure water. The MTT assay revealed that the biosynthesized AgNP IC50 was 43.4 g/mL. MET images of the AgNPs were obtained showing their spherical shape, size and monodispersion. The Bradford method and spectroscopic techniques (UV-Vis, FTIR, DRX) were used to indicate which molecules are involved in the formation of nanoparticles, such as chitinase, explaining the penetrating action of biosynthesized AgNPs in the nematodes. The nematicidal activity test of the AgNPs was performed comparing them with other substances. The AgNPs obtained efficacy in their nematicidal action, being the only ones able to penetrate the cuticle of the larvae causing tegumentary changes leading the parasite to death. Thus, biosynthesized nanoparticles are promising for therapeutic applications of verminoses in animals and humans.

Efeito da renovação dos diluidores Kenney e BotuSêmen® sobre a longevidade espermática durante o resfriamento: estudos in vitro / Effect of Kenney and BotuSemen® exchange on sperm longevity while cooling: in vitro studies / Efecto de la renovación de los diluyentes Kenney y BotuSemen® sobre la longevidad espermática durante el enfriamiento: estudios in vitro

Objetivou-se aumentar a longevidade dos espermatozoides resfriados a 5°C com uso da técnica de renovação de diluidor. Foram coletados quatro ejaculados de diferentes garanhões da raça Mangalarga Marchador que foram diluídos uma parte em Kenney e outra em BotuSêmen®. O sêmen diluído foi submetido ao resfriamento utilizando a caixa Botuflex® e depois transferido para geladeira com temperatura entre 4 e 6°C. Os parâmetros de motilidade, vigor, integridade funcional, morfologia espermática, pH, osmolaridade e glicose foram avaliados diariamente. A renovação do meio foi realizada pela substituição dos diluidores a cada 48 horas. O diluidor Kenney preservou a motilidade e vigor espermático até o 1º dia de resfriamento (P>0,05), enquanto o BotuSêmen® preservou a motilidade até o 2º dia de resfriamento e o vigor até o 3º dia de resfriamento (P>0,05), depois houve redução desses parâmetros (P0,05). O percentual de espermatozoides morfologicamente normais,o pH e a osmolaridade não variaram nas amostras diluídas em Kennney até o 5º dia de resfriamento (P>0,05), mas houve variação naquelas diluídas em BotuSêmen® (P0,05).

This experiment aimed to increase the longevity of sperm cooled to 5° C with medium exchanges. Four ejaculates from different Mangalarga Marchador stallions were collected and diluted in Kenney or BotuSemen® extender. The diluted semen was cooled using the Botuflex® box and was maintained in a temperature between 4 and 6°C in a domestic refrigerator. The motility and vigour parameters, functional integrity of sperm membrane, sperm morphology, pH, osmolarity and glucose were assessed daily. The exchange of the medium was performed by replacing the extender every 48 hours. Kenney preserved sperm motility and vigour similar until the first cooling day (P>0.05) while BotuSemen® preserved motility until the 2nd cooling day and vigour until the 3rd cooling day (P>0.05), afterthat motility and vigour decreased (P0.05). The percentage of normal morphology sperm, pH and osmolarity did not change in samples diluted in Kennney cooled until the 5th day (P>0.05) but there was differences in samples diluted in BotuSemen® (P0.05).

El objetivo de este trabajo es aumentar la longevidad de los espermatozoides enfriados a 5°C con el uso de la técnica de renovación de diluyente. Se recogieron cuatro eyaculaciones de diferentes sementales de la raza Mangalarga Marchador que fueron diluidos una parte en Kenney y otra en BotuSemen®. El semen diluido se sometió al enfriamiento utilizando el kit Botuflex® y luego se transfirió a la heladera con una temperatura entre 4 y 6°C. Los parámetros de motilidad, vigor, integridad funcional, morfología espermática, pH, osmolaridad y glucosa fueron evaluados diariamente. La renovación del medio fue realizada por sustitución de los diluyentes cada 48 horas. El diluyente Kenney preservó la motilidad y vigor espermático hasta el primer día de enfriamiento (P>0,05), mientras que el BotuSémen® preservó la motilidad hasta el 2º día Enfriamiento y el vigor hasta el 3º día de enfriamiento (P>0,05), de esta forma hubo reducción de estos parámetros (P0,05). El porcentaje de espermatozoides morfológicamente normales, el pH y la osmolalidad no variaron en las muestras diluidas en Kennney hasta el 5º día de enfriamiento (P>0,05), pero hubo variación en aquellas diluidas en BotuSemen® (P0,05).

Equine seminal plasma on preserving the viability of frozen-thawed ram sperm

Re-suspension of frozen-thawed ram sperm with ovine and bovine whole seminal plasma (SP) is beneficial for its post-thawing viability. However, neither the influence of SP incubation duration nor the re-suspension with equine SP has been tested. In the first experiment, frozen-thawed ram sperm were incubated with SP from bovine (BSP), equine (ESP) or ovine (OSP) or without SP (-SP) for short (5 min) or long (6 h) periods. Viability parameters such as sperm progressive motility, percentage of live cells and membrane functionality were assessed every 2 h for 6 h. All SP treatments showed higher spermatozoa viability than the -SP treatment in most evaluations. Incubation time did not affect sperm viability for BSP treatment, however, ESP and OSP induced a transitory benefic effect in the short incubation period and detrimental effect in the longer period. In the second experiment, frozen-thawed sperm, with or without short incubation with SP, were selected by swim-up, and their DNA fragmentation rate was assessed using comet assay immediately after swim-up completion and after 5 h of incubation. BSP, ESP and OSP protein profiles were determined by SDS-PAGE. Only ESP was associated with sperm DNA stabilization capacity and SP from rams and bulls showed protein profiles different from that of stallions. These experiments indicate that equine or ovine, but not bovine whole SP supplementation to post-thawing incubation medium of frozen-thawed ram sperm affects its viability in a time dependent manner. The beneficial effect of ESP on stabilizing DNA integrity, even after sperm washing with swim-up method and incubation for 5 h, can be determined by SPP or by antioxidant components from SP.

Equine seminal plasma on preserving the viability of frozen-thawed ram sperm

Re-suspension of frozen-thawed ram sperm with ovine and bovine whole seminal plasma (SP) is beneficial for its post-thawing viability. However, neither the influence of SP incubation duration nor the re-suspension with equine SP has been tested. In the first experiment, frozen-thawed ram sperm were incubated with SP from bovine (BSP), equine (ESP) or ovine (OSP) or without SP (-SP) for short (5 min) or long (6 h) periods. Viability parameters such as sperm progressive motility, percentage of live cells and membrane functionality were assessed every 2 h for 6 h. All SP treatments showed higher spermatozoa viability than the -SP treatment in most evaluations. Incubation time did not affect sperm viability for BSP treatment, however, ESP and OSP induced a transitory benefic effect in the short incubation period and detrimental effect in the longer period. In the second experiment, frozen-thawed sperm, with or without short incubation with SP, were selected by swim-up, and their DNA fragmentation rate was assessed using comet assay immediately after swim-up completion and after 5 h of incubation. BSP, ESP and OSP protein profiles were determined by SDS-PAGE. Only ESP was associated with sperm DNA stabilization capacity and SP from rams and bulls showed protein profiles different from that of stallions. These experiments indicate that equine or ovine, but not bovine whole SP supplementation to post-thawing incubation medium of frozen-thawed ram sperm affects its viability in a time dependent manner. The beneficial effect of ESP on stabilizing DNA integrity, even after sperm washing with swim-up method and incubation for 5 h, can be determined by SPP or by antioxidant components from SP.(AU)

USO DA SÍLICA COLOIDAL EQUINA NO PROCESSO DE CONGELAÇÃO DO SÊMEN CANINO

O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do uso da centrifugação em camada única de sílica coloidal de glicidoxipropiltrimetoxissilano- formulação equina-Androcoll-E® (Minitube, Germany), na congelação do sêmen canino. Para isso, 5 cães, de raças distintas, com características seminais satisfatórias (CBRA, 2013) foram utilizados. Sete ejaculados/animal foram coletados e subdivididos, formando: Grupo A- amostras centrifugadas a 300g, por 10 minutos, utilizando Androcoll-E® e grupo E- amostras centrifugadas a 700g, por 10 minutos, utilizando o meio CaniPlus Enhance® (Minitube; Germany). Em ambos os grupos foram realizadas as etapas de descarte do sobrenadante, ressuspensão do pellet em CaniPlus Enhance® (1mL de meio/100 x 106espermatozoides), envase (25 x 106 espermatozoides móveis/palheta), refrigeração (2 a 6ºC por 2 horas), congelação (20 minutos a 5cm sobre vapor de N2 e armazenamento a -196ºC em botijão de N2) e descongelação (a 37ºC por 60 segundos). Após 7 dias, as amostras foram ressubmetidas à centrifugação, formando 4 subgrupos (16 palhetas/animal/subgrupo): AA (centrifugação com Androcoll-E® na etapa de pré e pós descongelação), AE (centrifugação com Androcoll-E® na etapa pré congelação e com CaniPlus Enhance® na pós descongelação), EA (centrifugação com CaniPlus Enhance® na pré congelação e com Androcoll-E® na pós descongelação) e EE (centrifugação com CaniPlus Enhance® nas etapas pré e pós descongelação). A análise microscópica do sêmen (concentração, vigor, integridade de membrana, morfologia espermática, motilidade subjetiva e computadorizada) foi realizada. Teste de variância, Tukey e Kruskall Wallis foram usados, considerando p<0,05. Houve diferença estatística em relação à motilidade computadorizada e morfologia espermática. A velocidade média da trajetória e curvilínea foram superiores no grupo EE, o batimento flagelar cruzado e a retilinearidade no grupo EA e a linearidade no grupo AA. Em relação à morfologia espermática, o grupo EA foi o que apresentou maior porcentagem de células morfologicamente íntegras (95%) enquanto no grupo AE, os defeitos menores (23%) e maiores foram superiores aos aceitáveis (12%). O uso da centrifugação com sílica coloidal equina pós descongelação (grupo EA) seleciona espermatozoides morfologicamente íntegros, que apresentam parâmetros que indicam melhor capacidade de migração e penetração no muco cervical.

The objective of this study was to evaluate the influence of the use of single-layer colloidal silica of glycidoxypropyltrimethoxysilane-equine formulation-Androcoll-E® (Minitube, Germany) on the freezing of canine semen. For this, 5 dogs, of different breeds, with satisfactory semen characteristics (CBRA, 2013) were used. Seven ejaculates / animal were collected and subdivided, forming: Group A - samples centrifuged at 300g for 10 minutes using Androcoll-E® and group E samples centrifuged at 700g for 10 minutes using CaniPlus Enhance® medium (Minitube; Germany). In both groups, the steps of discarding the supernatant, resuspension of the pellet in CaniPlus Enhance® (1mL of medium / 100 x 106 spermatozoa), packaging (25 x 106 spermatozoa / pallet), refrigeration (2 to 6ºC for 2 hours) , freezing (20 minutes at 5cm over N2 vapor and storage at -196C in N2 canister) and thawing (at 37 ° C for 60 seconds). After 7 days, the samples were resubmitted to centrifugation, forming 4 subgroups (16 straws / animal / subgroup): AA (Androcoll-E® centrifugation in the pre- and post-thawing stage), AE (Androcoll-E® centrifugation at pre-freezing stage and CaniPlus Enhance® in post-thawing), EA (CaniPlus Enhance® centrifugation in pre-freezing and with Androcoll-E® after thawing) and EE (CaniPlus Enhance® centrifugation in pre and post-thaw stages). Microscopic analysis of semen (concentration, vigor, membrane integrity, sperm morphology, subjective and computerized motility) was performed. Test of variance, Tukey and Kruskall Wallis were used, considering p <0.05. There was a statistical difference in relation to computerized motility and sperm morphology. The mean trajectory velocity and curvilinear velocity were higher in the EE group, the cross flagellar beating and the rectilinearity in the EA group and the linearity in the AA group. In relation to sperm morphology, the EA group presented the highest percentage of morphologically intact cells (95%), whereas in the AE group, minor defects (23%) and higher were greater than acceptable (12%). The use of equine colloidal silica after thawing (EA group) selects morphologically intact spermatozoa, which present parameters that indicate a better migration capacity and penetration into the cervical mucus